小鼠淋巴瘤细胞

【序号】：1【作者】： 郭逸君周琛张凡【题名】：CAR-T细胞治疗B细胞淋巴瘤存在的问题及应对策略【期刊】：药物生物技术. 【年、卷、期、起止页码】：2022,29(01)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKibYlV5Vjs7iJTKGjg9uTdeTsOI_ra5_XXGP-2cCnxHFvyQzX46SmBpJzxoU8YSnqdPFG62NrF4M&uniplatform=NZKPT

[font='times new roman'][size=21px]ODC1[/size][/font][font='times new roman'][size=21px]在[/size][/font][font='times new roman'][size=21px]弥漫大[/size][/font][font='times new roman'][size=21px]B[/size][/font][font='times new roman'][size=21px]细胞淋巴瘤[/size][/font][font='times new roman'][size=21px]治疗中的意义[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]进入二十一世纪以来，淋巴瘤的发病率逐年上升，现已跻身十大最常见的肿瘤之列。据[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2020[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]年全球癌症报告统计，淋巴瘤新发病例约[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]63[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]万，约占所有新发癌症病例的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3.2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]％，死亡病例约[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]28[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]万，约占癌症总死亡人数的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]％。其中弥漫大[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]B[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞淋巴瘤（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）约占所有非霍奇金淋巴瘤的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]30%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，是最常见的病理亚型。因其起病具有一定的隐匿性且缺乏快速有效的早期筛查手段，故大多数病例确诊时已为晚期，多伴有远处转移，大约[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]60%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的患者可通过[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]R-CHOP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]利妥昔单[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]抗、环磷酰胺、阿霉素、长春新[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]碱和泼尼[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]松）免疫化疗治愈，而复发难治性[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]仍是淋巴瘤治疗领域的一大棘手问题。临床上，患者通常表现为无痛性进行性淋巴结肿大[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]伴结外[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]侵犯表现，一旦确诊，即需积极治疗。传统的化疗和放疗均因作用位点的选择性低而易产生严重的毒副反应，不仅给患者带来生理和心理上的极大痛苦，也往往是治疗失败的主要原因之一。在过去的二十年里，人们对其在流行病学、预后因素和生物学异质性等方面的研究有了跨越式的进展，随着对[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]疾病本质理解的逐步深入，以分子事件为基础的更为细化的分类标准蓬勃发展，免疫治疗和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]靶向[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]治疗药物也层出不穷。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2016[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]年，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]WHO[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在淋巴造血系统肿瘤的分类中提出了“双打击淋巴瘤”的概念，为临床工作中的危险分层、预后判断和治疗方案的选择提供了更坚实的依据。尽管在分子机制方面的研究取得了长足的进步，但仍有大约[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]40%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的临床治疗效果仍然不尽如人意，因此，为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]探寻更多的治疗靶点并研制高效低毒的靶[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]向药物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]已成为科学研究中亟待解决的关键问题。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]基因包括[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]定位于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2p25.1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，普遍存在于生物体内，是主要的功能基因。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]基因编码的蛋白产物是多胺生物合成的关键酶，通过[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]介[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]导鸟氨酸生成腐胺促进多胺的合成。腐胺、精[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]脒[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和精胺总称为多胺，至今已被发现[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]340[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]余年，是生物体生命活动的重要物质，生物学作用极为广泛，并与肿瘤的发生发展密切相关。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过度表达可引起细胞内腐胺水平升高从而抑制甲基汞诱导的线粒体功能障碍相关细胞凋亡。另有相关报道，由甲基汞引起的线粒体功能障碍和活性氧（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ROS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）生成也可被[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和腐胺的表达升高所抑制。这些结果表明，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的过度表达可能通过增加细胞内腐胺水平途径抑制线粒体[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]介[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]导的细胞凋亡。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Bachmann[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]等的研究发现，生物体细胞内存在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MYC-ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]轴，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]调节[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RNA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的转录和翻译、核糖体功能、蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]酶体降解、生物钟和免疫等功能是由[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MYC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]基因调控的。大量的研究结果表明，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在大肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等癌细胞中的表达量均显著高于相应的癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]旁正常[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组织。本实验室前期利用公共数据库分析了[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]33[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]种肿瘤类型、各种癌细胞系和正常组织中的表达，结果：[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在包括[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在内的许多肿瘤类型和细胞系中呈[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]高表达[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]状态，说明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的恶性发生发展中发挥着重要作用，因此本研究对[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]中的生物学功能和分子机制进行了初步探索，旨在为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]诊治提供新思路，为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的治疗以及改善患者预后提供有力的临床前研究依据。[/color][/size][/font]

第四种淋巴细胞—NKT细胞 通常认为，构成机体免疫系统的淋巴细胞有三种细胞系组成，一是由胸腺产生的T细胞，二是由骨髓分化而来的产生抗体的B细胞，三是自然杀伤（NK）细胞。而新近发现存在第四种淋巴细胞—NKT细胞。1. NKT细胞的发现1986年，克隆成功了NKT细胞的特征性抗原受体基因。将其命名为Va14基因，与其他T细胞抗原受体的（TCR）基因不同，有其独特的结构特征。1987年美国国立卫生研究所的Fawlkes与瑞士的Budd分别领导的两个研究小组报告指出，胸腺细胞中的T细胞通常不能表达受体，仅有部分未成熟T细胞选择表达V-β8.2受体。随后的研究证明这种细胞不是T细胞，考虑是NK细胞的受体，这种细胞集团的数量极少，生理意义不明。1994年，这两个研究小组的研究人员发现，他们报道的细胞为同一细胞，从此NKT细胞的研究引起人们的广泛关注。T细胞识别的抗原是蛋白质，而NKT细胞是别的抗原是α-Gal-Cer即所谓的糖脂质，这是该免疫系统与通常的免疫系统重要的不同点。NKT细胞的分化与T细胞不同的是在胸腺形成前的胎生初期6.5日在胸腺外组织分化。NKT细胞与T细胞比较，机能处于不发达状态。T细胞分化为功能不同的Th1和Th2细胞群，Th1细胞产生INFγ及IL-2，引起迟发行过敏症等细胞性炎症。Th2细胞能产生IL-4和IL-10，参与变态反应及抗体产生等体液免疫反应。而NKT细胞不但能分泌Th1和Th2细胞因子，同时还具有与CD8+伤害性T细胞（cytotox-ic Tlymphocyte,CTL）相同的杀伤靶细胞作用。毫无疑问，NKT细胞在免疫调节系统中占有重要位置。NKT细胞与疾病可能有诸多关系，可能与自身免疫性疾病的发病机制、变态反应的调节、抗肿瘤作用、及抑制寄生虫感染等有关。2. NKT细胞的多样性分化NKT细胞具有T细胞和NK细胞细胞两重性质，既能表达Va14/Ja281特定的T细胞受体又能由CD1介导识别脂质抗原。NKT细胞的分化是否依赖胸腺尚有争议。根据其表达TCR等多种表面抗原的不同，提示NKT细胞存在两个以上细胞群。从CD4/8的表达看，可将其分为（1）CD4-NKT细胞，（2）CD8-NKT细胞，（3）CD4和CD8均不能表达的DN-NKT细胞。第一类的全部和第二类的半数是Va14/Ja281-T细胞。3.人类NKT细胞人末梢血中的DN-NKT细胞V区域，可高度表达Va24/JaQ（这与鼠的Va14/Ja281高度相似）及Vβ11(与鼠Vβ18高度相似)。这种TCR的组合表达可见于DN-NKT细胞和CD4+细胞。而未见于CD8+细胞。小鼠的CD1相当于人的CD1d的Va24/JaQ。此外，人末梢血中1～2%的T细胞能表达抑制性受体，即抑制型NK细胞受体（KIR），而Va24/JaQ+细胞则不能表达。它的NK相关分子是CD16、CD56或CD57，Va24/JaQ+细胞异不能表达这些分子。在小鼠中还可以看到Va24/Ja281+T细胞以外的NKT细胞。人类Va24/JaQ+细胞与KIR+T细胞能形成不同的亚群。且具有不同的功能。4. NKT细胞分化的胸腺依赖性这是目前存在争议的问题，可以肯定地说NKT细胞分化过程中胸腺是有作用的。NKT细胞多见于胸腺及脾脏以外的肝脏和骨髓种，胸腺缺损的小鼠与正常小鼠比较，NKT的分化并不少。将出生三日小鼠的胸腺摘除，虽然NKT细胞的分化显著受到抑制，但此时CD8+NKT细胞的分化未受到影响。由此认为CD8+NKT细胞在胸腺外分化的可能。5. NKT细胞产生细胞因子的意义 NKT细胞是指能够表达NKT细胞标志NKT1.1的T细胞,其机能具有T细胞和NKT细胞双重特征。NKT细胞在TCR和NKR介导下，产生大量的IL-4及INFγ,对肿瘤细胞有细胞伤害作用。 NKT细胞能表达T细胞的TCR与NK细胞的NKR-P1两种受体，特别是NKT细胞多数表达Va14TCR，识别CD1抗原，而NKR-P1识别各种糖链。 NKT细胞，特别是CD4-NKT细胞，对TCR刺激可产生大量IL-4及IFNγ,同时具有ThO型细胞因子产生能力。NKT细胞不但产生IL-4的主要细胞，而且强力产生IFNγ。IFNγ参与自身Th1诱导，具有极强的Th1诱导能力，从而是IL-2产生亢进。它同时还具有Th2细胞分化抑制功能。IL-12能诱导NKT细胞产生IFNγ。IL-12对TCR的刺激是IFNγ的产生显著亢进。综上所述，NKT细胞不但是IL-4和IFNγ的强力产生细胞，同时参与Th1/Th2分化的抑制，而这些作用都不是单纯的。 虽然NKT细胞能大量产生细胞因子，但仅在机体内保持这种功能。当初一度认为，NKT细胞只是IL-4的产生细胞，而不是Th2分化的必需细胞。并不认为在CD1缺损的小鼠中NKT细胞的分化和对TCR刺激使IL-4产生减少，且对Th2分化必需的IL-4及IgE的产生没有多大影响。但给小鼠投于α-GalCer可使NKT细胞活化，IL-4的产生诱导Th2的应答。有报告指出，同样投于α-GalCer，可使NKT细胞产生IFNγ而致IgE产生低下。由此可见，NKT细胞能产生IL-4与IFNγ两种功能相反的细胞因子。这种微妙的协调作用可能是NKT机能表达的重要特征。NKT细胞的活化通常伴有T细胞、B细胞及NK细胞的活化，这对NKT细胞活化后的免疫应答有较大影响。

十三.流式细胞术在血液学中的应用 淋巴瘤免疫分型 目前淋巴瘤的分类方法已从LSG的形态学分类逐渐转变为REAL分类法, REAL分类法是以肿瘤发生源为基础的分类方法,在原来的形态学基础上加上免疫学分型后再加以分类,这种分类方法不仅能够推断肿瘤的发生源,对治疗也有指导意义。因此淋巴瘤的免疫分型越来越重要。如同白血病免疫分型一样，淋巴瘤的免疫分型也是利用单克隆抗体检测淋巴瘤细胞的细胞膜和细胞浆抗原,分析其表现型,以了解被测淋巴瘤细胞所属细胞系列及其分化程度。流式细胞仪能对多数的淋巴瘤细胞的细胞膜和细胞浆抗原迅速客观地做出检测，在淋巴瘤的免疫分型中起着不可替代的作用。临床淋巴瘤的免疫分型的检测标本一般是淋巴结、脾脏、胸水、腹水等。在临床淋巴瘤的免疫分型工作中常可遇到以下四种情况：①B细胞系淋巴瘤②T/NK细胞系淋巴瘤③淋巴细胞系以外的造血细胞肿瘤④造血细胞以外的肿瘤。REAL分类淋巴瘤的免疫表型见表12.8。*：弱表达或阴性。BLBL :前B原始淋巴细胞淋巴瘤/白血病; BSLL: B-小淋巴细胞淋巴瘤; LPL:淋巴浆细胞样淋巴瘤; MCL: 斗篷细胞淋巴瘤; FCL:滤泡中心淋巴瘤; MZL: 边缘带B细胞淋巴瘤; SMZL :脾MZL ;HCL:毛细胞白血病; PC:浆细胞瘤;DLBL: B-弥漫性大细胞淋巴瘤; BL: Burkitts淋巴瘤; HBLB:高度B细胞淋巴瘤, Burkitts样; TLB L: 前T原始淋巴细胞淋巴瘤/白血病; TPLL: T幼淋细胞白血病; LGLT:大颗粒淋巴细胞白血病, T细胞型[col

[size=15px][color=#595959]近年来，[b]淋巴脉管系统[/b]和淋巴运输在胃肠道疾病中的作用受到越来越多的研究关注，淋巴[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]畸形[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]和淋巴结重塑已被认为是许多胃肠道疾病的标志。此外，胃肠道淋巴引流受损和[b]淋巴淤滞[/b]会阻碍大分子、死细胞和病原体离开肠道的清除，从而加剧感染并延迟[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]免疫[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]反应。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]近年来，肠道和肠系膜淋巴管在肠道疾病，特别是炎症性肠病(IBD)中的作用已被广泛研究。然而，对[b]胃淋巴管(GLVs)[/b]的研究一直落后于胃肠学本身的发展。虽然最早对[b]胃淋巴泵(GLP)[/b]的可视化研究可以追溯到Nagata和Guth在1984年的报告，但在随后的40年里，关于GLP在胃疾病中的作用以及针对GLP的药物的报道很少。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959]半夏泻心汤(BXD)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]出自《伤寒论》，在现代医学实践中被广泛应用于治疗各种肠胃疾病，对[b]应激性胃溃疡(SIGU)[/b]等多种胃肠道疾病有明确的治疗效果，但对胃淋巴泵(GLP)的影响尚不清楚。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]阐明GLP在SIGU和BXD治疗中的作用，探讨GLP调控的分子机制。 [/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]对SIGU大鼠模型进行体内GLP显像，评价淋巴动力学参数。采集胃窦组织及血清进行宏观、组织病理学及溃疡参数分析。收集胃淋巴管(GLV)组织进行RNA-Seq检测。从RNA-Seq结果中筛选差异表达基因(DEGs)并用于转录组学分析。采用qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]和WB检测关键DEGs及其衍生蛋白。 [/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]SIGU大鼠GLP明显受到抑制。[b]BXD能恢复GLP，改善胃淋巴淤积，减轻溃疡损害[/b]。GLV转录组分析显示，上调的DEGs集中在[b]平滑肌收缩信号通路[/b]，下调的DEGs集中在能量代谢通路，尤其是脂肪酸降解通路，说明BXD可以促进淋巴平滑肌收缩，调节能量代谢，减少脂肪酸降解。这些机制最有可能的目标是驱动GLP的[b]淋巴平滑肌细胞(LSMCs)[/b]。qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]和WB对关键基因和蛋白水平的评估进一步验证了这一推测。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [color=#3573b9]结论[/color][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][font=&][/font][font=&][/font][/color][/size][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]BXD通过激[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][b]活平滑肌收缩信号通路，恢复能量供应，调节能量代谢程序，减少脂肪酸降解，有效回收GLP，减轻胃内炎症细胞因子和代谢废物的积累[/b]，是其治疗SIGU的重要作用机制。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]

[b]小鼠胚胎初始淋巴管形成的多步机制[/b]Rene′ Ha¨ gerling1,7, Cathrin Pollmann1,7,Martin Andreas1, Christian Schmidt1,Harri Nurmi2, Ralf H Adams3, Kari Alitalo2,Volker Andresen4, Stefan Schulte-Merker5,6and Friedemann Kiefer1,* [i][b]The EMBO Journal[/b][/i] (2013), 1-16在哺乳动物发育过程中，主静脉血管中的一个内部细胞亚群开始表达淋巴管特异基因，进而发育出初级的淋巴结构，被共同命名为淋巴囊。淋巴内皮细胞的出芽，扩展，膨胀被认为是淋巴内皮细胞从主静脉中产生的基础，但是淋巴管形成的确切机制仍然不为人所了解。使用选择性光片照明显微镜Ultramicroscope来观察进行整体免疫染色的小鼠胚胎，我们观察到细胞分辨率的完整的发育中的血管系统。本文中，我们报道了可以被检测到的最早的淋巴内皮细胞松散的连接在主静脉和浅表的脉管丛。下一步的淋巴内皮细胞聚集导致了两个清晰的，未被预先确认的淋巴结构，背部外周纵向淋巴管和腹侧初级胸导管，它们在后期阶段形成了一个与主静脉的直接连接。我们发现血管内皮生长因子C和基质组分CCBE1对于淋巴内皮细胞出芽和迁移是必不可少的。总之，我们提供了一个明显更加细节化的视角和早期淋巴管发育的新颖模型。[img=,591,756]http://qd-china.com/bio%20application/Lavision%20Ultramicroscope/The%20EMBO%20Journal/The%20EMBO%20Journal1.jpg[/img]图1. 初始淋巴祖细胞从主静脉中产生。（A-D）受精后9.5/9.75(A,C)和10.5（B，D）天小鼠胚胎血管系统的整体染色。PECAM-1优先染动脉、静脉血管中的内源粘蛋白。Prox1识别的淋巴内皮细胞。（A）中框出了胸颈静脉区，淋巴内皮细胞。DA，背主动脉；ISA，节间动脉；PAAs，咽弓动脉。标尺100um。E 图示箭头穿越一对主静脉之一。静脉内皮细胞，蓝色；发育中的心脏，暗绿；浅表静脉丛的位置被标示出来。CCV，一般主静脉；SV，静脉窦；H，心脏；ISV，节间血管。（F）成对CCV和导流入心脏的SV的三维重构。移开一半对称主静脉后的ISVs和生肌刀（M）。蓝色箭头指示静脉血的流动。（G）胸颈静脉区的横切面。DA，ISA和动脉丛标记红色；CV，ISV和sVP标记蓝色。NT，神经管；DRG,背根神经节；iLECs，初始淋巴内皮细胞。（H-K）整体免疫染色胚胎的图片左侧标注的蛋白分布的光学切片的3维重建。E，受精后几天的发育阶段（H，I，K横切面；J矢状切面）。白色箭头，新出现的iLECs；点线，CV的背根。标尺100um。（L-O）在E10.0和E10.25期间出现的最早iLECs的图解。Prox1+细胞，绿色，黄色为细胞核。以绿色表面表明在CCV移开分支中的Prox1表达区。[img=,591,330]http://qd-china.com/bio%20application/Lavision%20Ultramicroscope/The%20EMBO%20Journal/The%20EMBO%20Journal2.jpg[/img]图2. 淋巴内皮细胞从CV的出芽伴随着细胞和核的形状改变，以及一个蛋白标记开关的表达。（A,B）整体免疫染色胚胎的CCV中左侧标注蛋白的矢状视图。受精后的发育阶段（E）；iLECs初始淋巴内皮细胞；头盖处，左；尾部，右。标尺100um。CV的上出口，从鳞状到纺锤状的LEC形状改变（箭头指示CV根中的Prox1+ ECs）。白色箭头，iLECs间极薄的连接；红色箭头，照亮的静脉血管中频繁的发现红细胞（但iLECs中从没有）。（B）也可以看到相应的图解1O。（C）在E10.5阶段，出现的iLECs中的VEGFR-3及其联合受体Nrp2水平被上调，而CV和iLECs中的Lyve-1水平保持不变。***P0.001，NS，不显著。（D,E）随着iLECs的出现核的形状从圆形转变为椭圆形。通过核表面重构描述了CCV内部和外部的Prox1+细胞核以及对球率和椭球率做散点图（E）。标尺100um。（F-H）矢状（F）和横切面（G，H）视图中整体免疫染色小鼠胚胎的CCV内部和外部的Prox1+细胞核表面重构。（F，G）通过热成像赋以伪色标记的Prox1表达强度图，例如，最高强度的表达标记为红色，低强度表达标记为蓝色。（H）通过图像的叠加进行细胞的解剖学定位软件包：Imaris Vantage，标尺100um。[img=,591,785]http://qd-china.com//bio%20application/Lavision%20Ultramicroscope/The%20EMBO%20Journal/The%20EMBO%20Journal3.jpg[/img]图3. iLECs在节间血管主要分支的水平上浓缩来形成照亮的外周纵向淋巴管（PLLV）。（A-D）每张图所展示蛋白的整体免疫染色胚胎光学切片的矢状图重构。E，受精后的发育天数；头盖的，左；尾端的，右。（A）在iLECs出现的早期阶段，iLECs以扇形模式分布，从CCV向头部和尾部扩展。虚线，iLECs检测的边界。（A-D）iLECs在节间血管第一侧枝的水平上立即浓缩形成PLLV。长的阴影线指示了CCV和SV的位置；短的阴影线，iLECs浓缩和PLLV形成的区域。（E-H）图解iLECs的位置，在E10.5和E10.7阶段出现在CV的背部。CCV之外的Prox1+iLECs以淡绿色标记，CV内的Prox1+细胞和心肌以深绿色标记。在CCV移开的分支中的Prox1表达域（P1ED）以淡绿色表面显示。浅表静脉丛作为iLECs的一个可能的备选来源，其位置标注为蓝色（G，H）。sVP内的Prox1+内皮细胞被标注为红色。sVP，浅表静脉丛；标尺100um。 [img=,591,846]http://qd-china.com/bio%20application/Lavision%20Ultramicroscope/The%20EMBO%20Journal/The%20EMBO%20Journal4.jpg[/img]图4. CV和PLLV之间的LECs聚集并形成不断增长的更大的被照亮结构并最终形成原始的胸导管。来自整体免疫染色的小鼠胚胎光学切片的图中标注蛋白的（A-C）矢状图和（D）截面图。（A)箭头指示了位于CV和PLLV之间的LECs快速和不断进行的聚集，这导致了更大照明结构pTD的形成（B-D）。（C，D）浅表淋巴管sLECs开始从PLLV背侧和pTD旁边伸展。PLLV和pTD在pTD头盖端连接到一起。（F-H）图示了导致pTD成形的细胞聚集和浓缩事件。（I）在E11.5阶段，sLECs中的VEGFR-3和它的联合受体Nrp2水平上调，而Lyve-1水平与CV和iLECs相比强烈下调。***P0.001。发育阶段（E）；头盖，左，尾端，右。ACV，前主静脉；CCV，一般主静脉；PCV，后主静脉；ISV，节间静脉；PLLV，外周纵向淋巴管；pTD，原始胸导管；sLECs，浅表淋巴结。标尺100um。[img=,591,734]http://qd-china.com/bio%20application/Lavision%20Ultramicroscope/The%20EMBO%20Journal/The%20EMBO%20Journal5.jpg[/img]图5. 通过最高水平表达的Prox1表征的pTD和CV间新形成的成对的接触点。（A-C）整体免疫染色胚胎的矢状图。新形成中的pTD快速巩固进一个巨大的照明结构，头颅部以U形连接到PLLV（左侧A，B）。CV和pTD间的两个连接表达最高水平的Prox1（箭头）。（B-E）一个总是位于pTD和CV连接间的作为锁骨下动脉的短暂存在的侧枝被星号标记出来。（C）红色箭头：pTD内堆积的红细胞。箭头标注pTD连接端对面的Prox1+细胞。（D，E）通过pTD和CV连接区域的单个平面（光学切片）。（F-H）图示pTD和CV间接触点的发育，接触点处高表达的Prox1+细胞标记为暗绿色和红色的细胞核。标尺100um。[img=,591,963]http://qd-china.com/bio%20application/Lavision%20Ultramicroscope/The%20EMBO%20Journal/The%20EMBO%20Journal6.jpg[/img]图6. 不同的淋巴内皮细胞群表达不同的标记蛋白组。（A-G）所示发育阶段的免疫染色胚胎的横向冷冻切片。可见的抗原被以每幅图上所标记的相应颜色标记。典型例证标记表达的面板在（I）中汇总。（A）在E10.0阶段的LECs细胞中没有粘蛋白的表达，在E11.0阶段首先被检测到并在E12.0的LECs中变得丰富。注意CV中的Prox1+细胞在所有阶段都是阴性。在E11.5阶段，Nrp2在CV和pTD内中等强度的表达，而CV外的iLECs强烈的表现为阳性。（C）内皮粘蛋白在iLECs中只有短暂的留存。（D）在CV和pTD的Prox1+ ECs中Lyve-1强烈表达，而在展示的sLECs中仅有残留的表达（箭头）。（E）在所有血管结构中，整合蛋白α6有中等程度的表达。（F）在E11.5阶段，神经生长因子Netrin-4在BECs中强烈表达，在CV中很弱的表达，在pTD内中等程度的表达，但在iLECs中（箭头）没有被检测到。（G，H）Unc5B在iLECs（G，箭头）和sLECs（H，箭头）中强烈表达，而在pTD中表达微弱。 (H)来自整体免疫染色的小鼠胚胎的Prox1 (绿) 和Unc5B (蓝)光学切片的矢状重构. (I)在妊娠中期，不同LEC群中标注蛋白的表达。数据来自免疫染色的冷冻切片或整体免疫染色。表示的结构和细胞群： CV, 主静脉 iLECs, 初始LECs (第一轮从CV中出现的纺锤状LE,松散连接的细胞) sLECS, 浅表LECs (从PLLV (背侧)中伸出的LECs) pTD, 初始胸导管. CV*, 对CV背侧Prox1+细胞的表达限制。标尺100um。 [img=,591,781]http://qd-china.com/bio%20application/Lavision%20Ultramicroscope/The%20EMBO%20Journal/The%20EMBO%20Journal7.jpg[/img]图7. CCBE1缺陷导致的Prox1+细胞从CV分离的失败，并导致初始淋巴结构的快速损失。 (A, B, F, G) 对标注蛋白进行整体免疫染色的野生型(A) 和Ccbe1_/_ (B, F, G)胚胎的3D重构。(A, B)E10.5阶段的矢状图. (B) 在CCBE1-缺陷胚胎中，在CV和初始PLLV中检测到丰富的Prox1+细胞，紧邻浅表静脉丛。与野生型胚胎(A)相比,CCV和PLLV间没有纺锤状的iLECs。 (B, F) Prox1+细胞描绘出CCV和SV的边界, 当非典型的，大的，照明的分支从CV（箭头）中出现。(G) 含大量VEGFR-3+的异形分支从CV（箭头）和ISVs（箭头）中伸展。(C-E)图示野生型(C)和CCBE1-缺陷型(D, E)胚胎中的Prox1+ cells。含大量VEGFR-3+的静脉内皮标注为深蓝色。sVP, 浅表静脉丛。标尺100um。[img=,295,591]http://qd-china.com/bio%20application/Lavision%20Ultramicroscope/The%20EMBO%20Journal/The%20EMBO%20Journal8.jpg[/img]Figure 8VEGF-C（血管内皮因子C）缺陷的小鼠胚胎中的Prox1+内皮细胞因为不能离开它们起源处的血管从而标记了LECs的静脉来源。E10.75阶段野生型(A, B)和Vegfc_/_型(C-F)胚胎的矢状图3D重构，对标注蛋白做了整体免疫染色。在VEGF-C缺陷胚胎中，Prox1+内皮细胞不能离开静脉血管导致没有出现发育中的淋巴结构。(E, F) 除了CV（箭）中的Prox1+ 细胞, 在腹侧sVP（箭头）处更大的静脉血管中捕获了第二群Prox1t淋巴初始组织 。(G, H) 图示了野生型 (G) 和VEGF-C缺陷型(H)胚胎中的Prox1+细胞。NE, 神经元的Prox1+表达条纹。sVP, 浅表静脉丛。标尺100 um。[img]http://qd-china.com/bio%20application/Lavision%20Ultramicroscope/The%20EMBO%20Journal/The%20EMBO%20Journal9.jpg[/img]Figure 9. 在iLECs外出和淋巴管形成过程中，CCBE1和VEGF-C协同的相互作用。对E10.5阶段所标注蛋白整体免疫染色的野生型(A-C), Vegfct/_ (D-F), Ccbe1t/_ (G-I) 和 Vegfct/_/Ccbe1t/_ (J-L) 胚胎矢状图的3维重构。CCV和ISVs的根部用虚线标注，Prox1+细胞用箭头标注。与野生型同窝小崽相比，Vegfct/_胚胎(A-C)表现出iLECs从CCV中迁出的下降(D, E)。与之相反，Ccbe1t/_胚胎中，受损的ISVs形成被检测到。而且，不典型的，照亮的分支出现在Prox1+和高水平VEGFR-3表达的主静脉根部(G-I). (J-L) 在复合的杂合胚胎中，这种表型非常夸张地表明了VEGF-C 和CCBE1在淋巴管形成过程中的协同作用。标尺100um。

美国食品药品监督管理局（FDA）近日批准了Gazyva（obinutuzumab）与苯丁酸氮芥联用治疗初治型慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者。CLL是一种缓慢加重的渐进性血液与骨髓系统疾病。根据美国国家癌症研究所估计，今年将有15680名美国人被确诊患有该疾病，4580人因CLL死亡。Gazyva有助于免疫系统的某些细胞攻击癌细胞，并且需要与另一种CLL治疗药物——苯丁酸氮芥合用。在对重症CLL患者的治疗过程中，Gazyva在安全性和有效性方面表现出显著改善，此外，FDA还授予此药优先审查和孤儿药地位。FDA药物评价研究中心血液/肿瘤部门主管，Richard Pazdur博士说：“FDA对Gazyva的批准意味着对CLL患者疗法的重要补充，同时也反映了突破性疗法认定的优势，此项认定使我们与企业共同合作，加快重要新药物的开发、评估和上市。”此次批准是基于一项涉及356名受试者的随机、开放性、多中心临床研究，评估了Gazyva-苯丁酸氮芥联用组和苯丁酸氮芥单用组的药效。结果表明，联用组患者的无进展生存期得到显著提高（23个月vs11.1个月）。联用组患者的最常见不良反应包括输液反应、白细胞减少（中性粒细胞减少症）、血小板水平降低（血小板减少症）、红细胞数目降低（贫血）、肌肉和骨骼疼痛、发热等。Gazyva的说明书中含有黑框警告，提示Gazyva与乙肝病毒的再活化及一种罕见病有关，该罕见病（进行性多灶性白质脑病）能损伤大脑白质中覆盖和保护神经的物质，这是此类药物（包括其它单克隆抗体）共有的已知风险。Gazyva由罗氏子公司基因泰克上市销售。转自：http://www.hfoom.com/industry/20131106/376.html

美国北卡罗莱纳大学教堂山分校文理学院的首席化学教授约瑟夫—德西蒙博士领导的研究小组发现，人体中的一种正常的良性蛋白质，如果和纳米粒子相结合，就能瞄准并杀死癌细胞，而无须负载那些携带化疗药物的粒子。此前，研究人员曾认为，纳米粒子只有携带了有毒的化学载体才能达到这样的效果。转铁蛋白是人体血液中数量第四多的蛋白质，近20年来一直被作为肿瘤靶向载体用以递送治癌药物。纳米粒子通常也是无毒的，需要通过负载标准化疗药物来治疗癌症。然而，结合转铁蛋白的“打印”纳米粒子，不仅能识别它们，还能诱导癌细胞死亡。而不与任何纳米粒子结合的自由转铁蛋白，能从拉莫斯癌细胞中获得养料生长，即使在很高浓度下也不会杀死任何拉莫斯癌细胞。然而令人吃惊的是，转铁蛋白附着在纳米粒子表面后，其能有效地筛选标靶，攻击并杀死B细胞淋巴瘤。在许多迅速生长的癌细胞表面，蛋白质受体被过度表达，于是和转铁蛋白配体结合的治疗就能找到并瞄准它们，而结合转铁蛋白的纳米粒子被认为是安全且无毒的。德西蒙实验室发明了一种“打印”技术，能人为造出尺寸精确且形状符合预期的纳米颗粒。他们采用这种技术制作出一种可与人类转铁蛋白相结合的生物相容性纳米粒子，其能安全且精确地识别广谱癌症，除了B细胞淋巴瘤外，还能有效地指向非小型细胞，如肺、卵巢、肝脏和前列腺的癌细胞。研究人员目前正在进一步研究，携带转铁蛋白的纳米粒子如何及为何对于拉莫斯癌细胞是有毒的，而对其他细胞却无毒。化学治疗和放射治疗曾被认为是癌症的最有效疗法，但这些疗法通常会损害健康组织和器官。这一发现将可能发展出一种全新的策略来治疗某种类型的淋巴瘤，而副作用更小。不过，德西蒙承认，该研究也会引起一些人对不可预期后果的担忧，即一个设计好的针对某类癌症的靶向化疗载体是否会偏离目标。

[size=14px] [/size] [size=14px]造血干细胞（HSC）是维持血液和免疫系统健康的重要基础。在机体衰老过程中，HSC功能随之退化，表现出重建造血能力下降以及谱系分化异常，是衰老的十二大特征之一。寻找能有效改善HSC衰老的药物，对于延缓衰老助力健康老龄化具有极其重要的意义。何首乌是传统补益精血、延缓衰老的著名中药，王伽伯团队前期研究表明其所含主要成分反式二苯乙烯苷（TSG）安全性良好，不会引起肝损伤，且根据文献可知TSG可通过清除自由基、调节脂质代谢紊乱及保护神经等方式发挥良好的抗衰老作用，但其在改善HSC衰老及增强衰老机体造血免疫功能方面的活性及机制尚未有报道。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]著名抗衰老中药何首乌的主要成分反式二苯乙烯苷（TSG）具有最显著的改善造血干/祖细胞衰老的作用。机制上，TSG通过直接结合并激活能量感受器AMPK增强衰老造血干/祖细胞再生功能，并通过AMPK介导的Tet2表观遗传调控促进HSC向淋系细胞分化，部分改善HSC的髓系分化偏移。这项研究开辟了一条通过激活AMPK来减缓 HSC 衰老的途径，并肯定TSG是一种非常有前途的候选者，可以作为天然AMPK激活剂，用于开发抗衰老药物。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]Highlights[/size] [size=14px]1）首先测试了9种选定的药物对全身辐射（TBI）小鼠造血系统过早衰老的影响；[/size] [size=14px]2）何首乌主要活性成分TSG被成功鉴定为衰老HSC的有效再生剂；[/size] [size=14px]3）TSG治疗增加2种衰老小鼠中共同淋巴祖细胞CLP及其B淋巴细胞的数量；[/size] [size=14px]4）TSG 治疗增强衰老小鼠的HSC/CLP增殖潜力，且无明显副作用；[/size] [size=14px]5）TSG可通过AMPK-Tet2轴恢复再生能力的丧失和淋巴细胞生成的下降。[/size] [size=14px]研究结果[/size] [size=14px]1、筛选能够使衰老的HSC恢复活力的化合物[/size] [size=14px]作者首先基于文献及临床试验调研，确定9种源自抗衰老中药的天然产物，这9种天然产物是经过精心挑选的来自9个不同中药配方的化合物，已知对人类造血具有高度有益的作用。随后利用辐射诱导（TBI）的早衰小鼠模型筛选，结果发现何首乌TSG不仅展现出最显著的改善HSC衰老作用，并诱导骨髓淋系祖细胞（CLP）以及下游的各发育阶段B细胞和不同类型T细胞数目显著增加，恢复到接近正常对照组的水平。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]2、TSG 恢复自然衰老的 HSC活力且无任何明显副作用[/size] [size=14px]进一步作者评估TSG是否也可以使自然衰老小鼠中老化的HSC恢复活力。结果证实TSG能够显著提高骨髓中CLP和B细胞、胸腺T细胞各发育阶段绝对数目及外周血中淋系细胞比例，将老龄小鼠恢复到接近年轻小鼠的水平，TSG 治疗并没有以任何显著的方式改变体重、外周血细胞、血液化学和肝脏的组织学特征。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]3、TSG可以增强衰老HSC的再生潜力[/size] [size=14px]老化的HSC 会显著降低再生潜力，作者随后检查了TSG是否可以增强衰老小鼠中HSC的增殖能力，通过HSC和CLP移植实验结果的两组实验数据表明，显示用TSG治疗衰老小鼠可显著增强造血干/祖细胞造血的增殖能力。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]4、TSG诱导显著的转录变化并促进静止特征[/size] [size=14px]作者接着研究了TSG治疗对衰老HSC影响的潜在机制，发现TSG 治疗对CLP增殖和凋亡以及ROS无显著影响，进一步对年轻小鼠、衰老小鼠和TSG治疗的小鼠的HSC进行转录组分析，发现与未治疗的衰老小鼠相比，经TSG治疗的衰老小鼠的HSC转录组表现出与“年轻”HSC类似的转录组特征，转录组分析的结果还表明，TSG处理导致氧化磷酸化（OXPHOS）基因的表达显著减少，但静止相关基因的表达水平增加，这些结果表明TSG 治疗可以通过将衰老的转录组逆转到与年轻 HSC 相似的状态来促进衰老 HSC 的年轻化。此外，TSG可以抑制衰老 HSC的代谢，促进AMPK通路的激活以及向静止状态的转变。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]5、TSG使衰老 HSC恢复活力的作用依赖于AMPK通路[/size][size=14px]为了进一步验证TSG中AMPK对HSC衰老的再生作用，作者利用特异性AMPK抑制剂（Com C）和AMPK 激活剂（AICAR）来抑制或激活AMPK，探讨TSG对小鼠HSC衰老的影响，发现Com C显著阻断了 TSG 对骨髓中CLP和下游B细胞数量以及衰老小鼠外周血中 B 细胞比例的保护作用，AICAR治疗可以增加骨髓中CLP的数量和/或B细胞和前B细胞的总数，并通过增加 B细胞百分比来纠正外周血的不平衡。这些结果表明TSG主要通过激活AMPK来有效增强HSC功能和淋巴分化。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]6、TSG可以在体外与 AMPK 发生直接互作[/size] [size=14px]为了进一步研究TSG通过激活AMPK导致HSC衰老的分子机制，作者采用分子对接发现TSG 可以与 AMPKα1β1γ1 和 AMPKα2β1γ1 蛋白的激酶结构域结合，通过SPR实验发现TSG能够以比AMPKα2β1γ1更高的亲和力与AMPKα1β1γ1结合。ADPGlo? 激酶测定发现TSG可激活AMPKα1β1γ1和AMPKα2β1γ1活性。结果表明TSG可以通过与AMPK直接互作来促进AMPK激活。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]7、TSG可以通过AMPK-Tet2轴逆转衰老 HSC的甲基化谱[/size] [size=14px]表观遗传改变与HSC的表型和功能变化密切相关，Tet2被认为是重要的表观遗传调节因子，在HSC的稳态和分化中发挥着重要作用，而AMPK激活对于维持Tet2稳定性至关重要。因此，作者分析了TSG对AMPK激活和Tet2表达的影响，亚硫酸氢盐测序评估全基因组 DNA 甲基化状态发现衰老小鼠的 LT 整体 DNA 甲基化水平显著增加，TSG治疗衰老小鼠的DNA甲基化水平显著下降，降至与年轻小鼠非常相似的水平。此外，这种效果随着Com C的共同处理而减弱。TSG治疗并没有导致Tet2突变小鼠中CLP和B细胞绝对数量的显著增加，TSG治疗导致8周龄小鼠骨髓LSK的淋巴细胞生成潜力显著增加，并且这种效应被Tet2抑制剂Bobcat339减弱。这些结果表明Tet2作为AMPK激活的下游效应子，促进HSC的淋巴细胞生成潜力，而TSG可以通过影响该AMPK-Tet2轴来促进淋巴细胞生成。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]该研究筛选了一组源自几种著名中药配方的假定天然抗衰老化合物，并鉴定出TSG作为老化HSC的强效再生剂。TSG是中药何首乌中多酚的天然衍生物，具有多种功效，包括抗氧化、抗炎、抗高脂血症和神经保护以及抗衰老。作者发现TSG治疗不仅大大提高了CLP及其下游B淋巴细胞的绝对数量，而且还通过衰老供体嵌合的快速扩张增强了HSC/CLP的再增殖能力。此外，TSG可以恢复衰老HSC的静止状态，促进表观遗传重编程，通过激活AMPK及其底物Tet2，改变 DNA 甲基化谱，从而控制HSC的命运决定。这项研究开辟了一条通过激活AMPK来减缓 HSC 衰老的途径，并确定TSG是一种非常有前途的候选者，可以作为天然AMPK激活剂用于开发抗衰老药物。[/size]

转铁蛋白与纳米粒子结合就可瞄准并杀死拉莫斯癌细胞，而无需负载其他化疗药物，此项发现将有望发展出癌症靶向治疗的新策略。　　 相关研究成果发表在本周的《美国化学协会杂志》上。　　美国北卡罗莱纳大学教堂山分校文理学院的首席化学教授约瑟夫德西蒙博士领导的研究小组发现，人体中的一种正常的良性蛋白质，如果和纳米粒子相结合，就能瞄准并杀死癌细胞，而无须负载那些携带化疗药物的粒子。此前，研究人员曾认为，纳米粒子只有携带了有毒的化学载体才能达到这样的效果。 　　转铁蛋白是人体血液中数量第四多的蛋白质，近20年来一直被作为肿瘤靶向载体用以递送治癌药物。纳米粒子通常也是无毒的，需要通过负载标准化疗药物来治疗癌症。然而，结合转铁蛋白的“打印”纳米粒子，不仅能识别它们，还能诱导癌细胞死亡。而不与任何纳米粒子结合的自由转铁蛋白，能从拉莫斯癌细胞中获得养料生长，即使在很高浓度下也不会杀死任何拉莫斯癌细胞。 　　然而令人吃惊的是，转铁蛋白附着在纳米粒子表面后，其能有效地筛选标靶，攻击并杀死B细胞淋巴瘤。在许多迅速生长的癌细胞表面，蛋白质受体被过度表达，于是和转铁蛋白配体结合的治疗就能找到并瞄准它们，而结合转铁蛋白的纳米粒子被认为是安全且无毒的。 　　德西蒙实验室发明了一种“打印”技术，能人为造出尺寸精确且形状符合预期的纳米颗粒。他们采用这种技术制作出一种可与人类转铁蛋白相结合的生物相容性纳米粒子，其能安全且精确地识别广谱癌症，除了B细胞淋巴瘤外，还能有效地指向非小型细胞，如肺、卵巢、肝脏和前列腺的癌细胞。 　　研究人员目前正在进一步研究，携带转铁蛋白的纳米粒子如何及为何对于拉莫斯癌细胞是有毒的，而对其他细胞却无毒。 　　化学治疗和放射治疗曾被认为是癌症的最有效疗法，但这些疗法通常会损害健康组织和器官。这一发现将可能发展出一种全新的策略来治疗某种类型的淋巴瘤，而副作用更小。 　　不过，德西蒙承认，该研究也会引起一些人对不可预期后果的担忧，即一个设计好的针对某类癌症的靶向化疗载体是否会偏离目标。（科技日报）

各位大侠帮帮忙啊~~【序号】：1【作者】：费新红、许小平、陈莉、高磊、吕书晴、陈少谊、许晓巍【题名】：小鼠多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性观察【期刊】：白血病·淋巴瘤【年、卷、期、起止页码】：2004, 13(2)【全文链接】：

名 称：骨髓细胞的提取目的：分离并培养骨髓间充质干细胞原理：先分离出单核细胞然后再通过培养分离出骨髓间充质干细胞内容：步骤一：小鼠骨髓细胞的获取1． 断颈处死小鼠（7-12周，雌雄均可），投入盛有250ml左右的0.1%新洁尔灭或75%酒精中浸泡3-5分钟，拎出后将小鼠仰面翻铺于超净台上一个消毒托盘上。2． 用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。将它们放入另外一个消毒托盘中，并换一套新的剪子和镊子。手术器械事先均必须消毒。3． 小心剥离肌肉，分别剪下Femurs and Tibias, 剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。4． 拿两支5ml无菌注射器，每支吸取5ml IMDM(10%FBS, 50/50u/ml Pen/Strep)，换装一个4号针头（又称皮针）或1ml注射器的针头，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔，对准一个无菌15ml离心管，将细胞冲出。每根骨用2.5ml IMDM培养液左右即可基本冲下骨髓腔内的细胞。5． 300C下离心，1200转/10分钟，去上清，但留1ml，以便用于在振荡器上悬浮细胞。6． 加进氯化铵溶液（NH4Cl: 8.99g/L, KHCO3: 1g/L, Na4-EDTA: 0.037g/L ，过滤灭菌, 40C储存）裂解红细胞，按1: 9比例，即1ml 细胞悬液，加进9ml氯化铵溶液，混匀，冰上10分钟。 7． 300C离心，1200转/10分钟，去上清。步骤二：淋巴细胞分离液分离小鼠骨髓细胞1． 按步骤二方法采集小鼠骨髓细胞，并破红细胞2． 细胞用4ml培养液悬浮，缓慢留置于8ml淋巴细胞分离液液面上，2000rpm for 20min.3． 小心吸取云雾状底层的基质细胞约1.5ml的体积，置于1个盛有1ml无菌细胞培养用PBS的15ml离心管中，颠倒混匀，1200rpm for 10min, 去上清4． 如果是注射用细胞，则用5ml PBS洗涤细胞2次；5． 离心沉淀下来的细胞用50-200ul PBS，计数细胞，并计算所需细胞体积数铺板培养

西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡在我国，西达本胺已获批作为PTCL临床用药。西达本胺属于苯酰胺类化合物，是我国自主研发的首个亚型选择性口服HDACI，国家食品药品监督管理局已批准其用于临床试验，其选择性抑制I类HDAC1、2、3亚型和II类HDAC10亚型，可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡，阻滞周期、引发DNA损伤，还可以增强抗肿瘤免疫反应。与其他抗肿瘤药物相比，西达本胺疗效好、选择性高、不良反应少。西达本胺可激活死亡受体途径和线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡，其中最为主要的是线粒体凋亡途径，该途径受Bcl-2家族介导的细胞色素C释放通路调控。抗凋亡蛋白Bcl-2表达受到抑制，促凋亡蛋白Bax表达上调，使线粒体膜电位降低，细胞色素C释放到细胞质中，Caspase途径被激活，细胞发生凋亡。例如：西达本胺增强B淋巴瘤细胞组蛋白H3、H4 乙酰化水平，使线粒体膜电位降低随后激活Caspase 3，促进细胞凋亡；在肾癌中，它可以下调Bcl-2表达，上调Bax表达，随着药物浓度增加引起786-O 细胞凋亡。西达本胺可以调控ROS水平。HDACI可以上调ROS水平，导致DNA双链损伤。研究证明，西达本胺作用于白血病细胞后，诱导细胞内ROS产生，细胞凋亡增加[17]。此外，在胰腺癌细胞系中，西达本胺明显增强细胞内ROS的产生，上调γH2AX（DNA双链断裂的标志物）表达水平，诱发细胞DNA损伤。西达本胺通过调控细胞周期蛋白（Cyclin）、细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinases，CDKs）以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（Cyclin-dependent kinases inhibition，CDKI）的表达阻滞细胞周期。例如，西达本胺使MM细胞系P21、P27的表达量增高，CDK4、CDK6、Cyclin D2表达量下降，阻滞MM细胞系于G1期[19]。在NK/T细胞淋巴瘤中，西达本胺上调P21表达，下调Cyclin E表达，诱导细胞发生G0/G1期阻滞，从而抑制细胞的增殖。

大神们，帮忙推荐台主要针对小鼠骨髓细胞数检测的仪器，再一个就是能对小鼠血细胞的种类分类，计数。要求不高。。但是这种针对性的仪器还这难找。。

目的：通过观察盐酸林可霉素对小鼠肠道菌群，肠道组织病理学改变，血中淋巴细胞数的影响规律，以期为科学研究正确使用盐酸林可霉素造成菌群失调动物模型提供参考资料。方法：盐酸林可霉素连续灌胃3d停止给药，于停药后第1天，第4天，第7天，和第10天检测肠球菌数，双歧杆菌数，血中淋巴细胞数和肠道病理改变，评价盐酸林可霉素对小鼠肠道菌群的影响规律。结果：灌胃3d停止用药后第1天和第4天双歧杆菌减少，肠球菌增加，与正常组比较差异有统计学意义(P0．05)，肠道黏膜皱褶变浅，上皮内杯状细胞减少。停药后第1天出现血中淋巴细胞数减少。结论：盐酸林可霉素短期大量给药，可造成小鼠菌群失调，肠道组织损伤，免疫功能受损，该损伤持续约1周。盐酸林可霉素是科学研究中用于造成菌群失调动物模型的常用抗生素，其抑制细菌生长，尤其抑制益生菌的作用非常明显，但各家用该药的方法、剂量有较大差别，由于动物的耐受性较强，菌群失调能持续的时间不清，本实验尝试在肠道菌群变化、肠组织损伤等方面来研究林可霉素造成菌群失调的规律。以期为该药在科学研究中的使用提供数据依据，现报告如下。

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原文是Purton, L.E., and Scadden, D.T. (2007). Limiting Factors in Murine Hematopoietic Stem Cell Assays. Cell Stem Cell 1, 263-270.发表在2007年cell stem cell 杂志上，最近由于要进行相应的课题研究，拿来精读了一番，做了一个笔记，发上来和大家分享，由于初涉小鼠造血干细胞这个领域，肯定有很多地方理解不全和错误，请大家指正。下面是我的精读笔记：小鼠造血干细胞研究方法综述一．关于HSC 免疫表型1. Thy1.1lo,Lin-Sca-1+Cells:其缺点是Thy1.1只表达于C57BL/Ka-Thy1.1小鼠，不表达于常用的C57BL/6小鼠；2. Lin- c-Kit+ Sca-1+ Cells（LSK）：异质性，含有祖细胞，HSC含量不超过10%；结合CD34和Flt3可以分为long-term repopulating HSCs (LKS+ CD34- Flt3-) ，short-term repopulating HSCs (LKS+ CD34+ Flt3-) ，以及multipotent progenitors(LKS+ CD34+ Flt3+)；3.荧光染料标记HSC: Rhodamine 123, Hoescht 33342, 以及Side Population，Rhodamine 123为线粒体染料，Hoescht 33342为DNA染料，HSC能够更多地将这两种染料泵出细胞外，所以染色较浅；4. SLAM Family Members：SLAM antigens (CD150+ CD244-CD48- cells)，其优点是不像Thy1.1和Sca-1其表达受到品系和发育阶段等的影响，在更多的种系的小鼠中适用二．克隆形成实验：主要反映的是祖细胞的造血能力，不反映HSC，检测T系和B系需要另外特定的培养条件；三．Cobblestone Area-Forming Cells/Long-Term Culture-Initiating Cells，鹅卵石样区域形成细胞实验/长期培养-启动细胞实验：体外检测更早期造血干/祖细胞的方法，但由于feeder layers和培养条件不同，实验结果在不同实验室间稳定性较差，对于其是否真正能检测造血干细胞也比较有争议，不过在一些情况下，比如归巢（homing）或植入（engraftment）有缺陷导致体内造血重建实验无法进行时，这两个方法是较好的替代方法；四．Colony-forming unit-spleen (CFU-S)脾集落单位形成实验：属于短期（1-3周）体内重建实验，检测的干祖细胞比体外CFC早，但比HSC晚；五．long-term repopulating assays，长期重建实验，包括：1. competitive repopulation assay：竞争重建实验：属于定性或者半定量研究HSC重建能力的方法，不能区别是HSC的数量还是质量造成的结果差异，得到的结果为RU即重建单位；2. limiting dilution assay：统计的指标是造血重建失败的小鼠数目，采用泊松分布来计算HSC的频率，得到的结果为CRU即竞争重建单位；Stem Cell公司的免费软件L-Calc,可用于分析实验结果。limiting dilution assay有两种方法：1CRU assay，采用最小数的HSC作为竞争细胞，可以在单细胞水平检测HSC；2也称为CRU assay，采用标准的，足量的HSC作为竞争细胞，不能在单细胞水平检测HSC；3serial transplant assay，多代移植，最为严格的检测造血干细胞的方法；六：Limiting Dilution Assays需要考虑的几个重要因素：1.竞争细胞：1compromised bone marrow，即连续两代重建成功的骨髓细胞，比较耗时2W41/W41受体小鼠：c-kit基因发生突变，具有更加敏感的宿主微环境，能够检测更少的植入的HSC，不需要另外的HSC作为支持细胞（竞争细胞）；3全骨髓细胞（whole bone marrow cells）：经验表明2 X105 competing bone marrow cells比较适合2.受测细胞（Test Cells, Unknown HSC Potential）：有人用LKS+ CD34- cells，但作者认为全骨髓细胞最好，原因是这种方法是在功能上评价HSC，避免了HSC在基因修饰的小鼠中免疫表型发生变化导致的结果的不可靠，在作者实验室通常采用的受测全骨髓细胞数为8 X 103到2 X106；3.重建失败的标准：现在一般认为受测细胞的重建比例小于1%为重建失败；在重建比例中，红细胞是不计算在内的，因为其不表达CD45,但一般认为只要其他系重建成功，红系应该也会重建成功；4.分析重建的时间点：看长期造血重建，最少要16周，最佳是六个月；5.其他考虑因素：归巢，HSC各系分化阻滞或减弱，祖细胞增殖动力学特性的改变，造血微环境对HSC的影响等等七．区分供体，受体的遗传学标志：最常用的是CD45.1,CD45.2系统，还有可以通过性别（Y染色体）来区分。

我想用透射电镜观察不同类型的淋巴细胞，想问一下固定前的操作有哪些注意的？大概需要多少细胞？（我用流式分离的）离心时要多大的离心力？不知道有没有有经验的老师能给点帮助。谢谢

[em0808]我要做的是小鼠的卵细胞的电镜，但是我所能获得的卵细胞的数量有限的，不知道有什么技巧可以保证细胞能包埋进去，听说有人做了好几次就没有作出来呀 急哦 谢谢大家了

十二. 流式细胞术在血液学中的应用 白血病免疫分型其临床意义 目前公认的系列特异性指标是:T淋巴细胞系--胞浆CD3（cCD3）,B淋巴细胞系-- cCD22或cCD79，髓系---MPO 或cCD13,一般可先用他们区分细胞系列后再进一步分析某一系列亚型和分化阶段。1. ALL的免疫学分型1986年前分为普通型ALL（cALL）、未分化细胞ALL （Null-ALL）、T细胞ALL（ T-ALL） 、前B细胞ALL （PreB-ALL）、B细胞ALL （B-ALL）五型;1986-1994年分为两大类九型(非T-ALL六型,T-ALL三型),九十年代后期有人按临床实用性一般分为B祖细胞ALL、前B细胞ALL、B细胞ALL、T细胞ALL四型。表12.1-表12.4列出ALL的五型、九型（ B[color=blac

一、细胞因子的概念细胞因子(cytokine)是由机体多种细胞分泌的小分子蛋白质，通过结合细胞表面的相应受体发挥以调节免疫应答为主的生物学作用。细胞因子具有 非常广泛的生物学活性，包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和细胞杀伤效应，促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达，促进炎症过程，影响细胞代谢 等。二、细胞因子的命名细胞因子按其来源可分为：由单个核吞噬细胞产生的细胞因子称为单核因子(monokine)；由淋巴细胞产生的细胞因子称为淋巴因子 (lymphokine)等。按其作用可分为干扰素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、生长因子和趋化因子等。部分由不同细胞分泌的细胞因子，其基因及编码蛋 白与结构清楚者，在免疫调节、造血和炎症中发挥重要作用，又称为白细胞介素(interleukin，IL)。也可以依据结构或者其受体结构分类，我们的 趋化因子目前没有受体产品。三、细胞因子的特征1、低分子量；一般为＜60kD的多肽或糖蛋白。多以单体形式存在，少数为二聚体，三聚体。2、天然细胞因子由抗原、丝裂原或其他刺激物活化的细胞所分泌，通过旁分泌(paracrine)、自分泌(autocrine)或内分泌(endocrine)方式在局部发挥短暂作用。3、一种细胞因子可由多种细胞产生，同一种细胞可产生多种细胞因子。4、需通过与靶细胞表面相应受体结合后发挥其生物学效应。5、具有高效性、多效性、叠性、拮抗性、协同性和网络性。四、细胞因子的分类1、白细胞介素(interleukin，IL-s)最初是指由白细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子。2、干扰素（interferon,IFN)最早发现的细胞因子，有干扰病毒感染和复制的能力。分α、β和g三种类型。3、肿瘤坏死因子超家族(tumor necrosis factor，TNF)1975年发现的一种能使肿瘤发生出血坏死的物质。4、集落刺激因子(colony-stimulating factor，CSF)指能够刺激多能造血干细胞和不同造血祖细胞增殖分化，在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。包括G-CSF（粒细胞）、M-CSF（巨噬细胞）、 GM-CSF（粒细胞、巨噬细胞）、Multi-CSF（多重）（IL-3）、红细胞生成素(EPO)、干细胞生长因子(SCF)、血小板生成素 (TPO)等。5、趋化因子(chemokine)主要功能是招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入特定的淋巴器官和组织以及感染发生的部位。根据趋化因子近N端半胱氨酸(Cys)的位置、排列方式和数量，可分为CC、CXC、C、CX3C四个亚家族。6生长因子(growth factor，GF)生长因子(GF)是具有刺激细胞生长作用的细胞因子。五、细胞因子的生物学活性1.介导自然免疫、参与抗肿瘤和抗感染2.调节T、B细胞活化、生长和分化，介导细胞免疫和体液免疫3.刺激造血生成、刺激骨髓祖细胞生长和分化为各种成熟血细胞4.在炎症、感染和内毒素血症中的作用5.在超敏反应和自身免疫病中的作用6.细胞因子通过激活其相应受体（CKR），导致细胞的增殖与分化或分泌某种蛋白质。六、四种蛋白表达体系比较表达细胞优点缺点原核E. coli繁殖快、成本低、产量高遗传背景及基因表达调控机制清楚易于大规模培养，成本低廉蛋白常为包涵体，纯化困难无糖基化（分泌蛋白，细胞膜上蛋白不可用），生物活性不定无翻译后修饰，内毒素含量高酵母Pichia使用简单，表达量高，His-tag便于纯化，一定的翻译后加工可进行糖基化修饰，操作简单，适合大规模生产可诱导表达，也可分泌表达，产物便于纯化有时会出现蛋白切割问题糖基化不能满足要求昆虫High-5产量高 ，翻译后加工与哺乳动物相似对于部分有毒性或较难表达蛋白有优势无内毒素污染蛋白活性不如哺乳动物适合表达激酶等定位于细胞内的真核蛋白哺乳CHO HEK293完善的翻译后加工，活性接近天然蛋白周期长、技术要求高表达产量低

来自美国弗吉尼亚理工大学和德州大学西南医学中心的研究人员发现，微小的RNA链(microRNA, miRNA)影响我们的细胞如何燃烧脂肪和糖。这一发现为生物学家们开始寻找治疗肥胖症和相关的健康问题打下基础。根据这周发表在PNAS期刊上的一项研究，当两种miRNA从小鼠的遗传物质中缺失时，依赖高脂肪饮食的小鼠抵抗肥胖。这项发现提示着靶向这两种特异性的miRNA的治疗方法可能有助于抑制肥胖流行症。一度被认为是垃圾DNA，研究人员如今知道miRNA在基因如何影响人类健康和行为方面发挥着重要作用。它们已知与心脏病、糖尿病、丙型肝炎、淋巴瘤和乳腺癌相关联。尽管之前已知miRNA与肥胖者相关联，但是这些新的发现是第一次确定miRNA和细胞代谢之间存在关联。德州大学西南医学中心研究人员对小鼠进行基因改造而不能产生miR-378和它的表亲miR-378*，从而导致相对苗条的动物也能够快速地将细胞食物转化为能量。

牛奶体细胞数的英文为somatic cell count,SCC。牛奶体细胞数是指每毫升牛奶中的细胞总数，多数是白细胞，通常由巨噬细胞、淋巴细胞、多形核嗜中性白细胞和少量乳腺组织上皮细胞等组成，约占牛体细胞数的95%，其余是乳腺组织死去脱落的上皮细胞。体细胞数反映了牛奶质量及奶牛的健康状况,在正常情况下,牛奶中体细胞数一般在20万～30万个/mL。

文章出处：Natural killer cell education and tolerance. Cell. 2010. 142:847-856综述背景与主要内容：NK细胞作为继T细胞、B细胞之后的第三大类淋巴细胞，对它的研究已经超过了30年，对其的认识也在一步一步的加深。NK细胞最主要的功能是杀伤病毒感染细胞和转化了的肿瘤细胞，从而起到免疫防御和免疫自稳的作用。从一开始，大家就提出了关于NK细胞如何识别“自我”与“非我”的问题，也就是为什么NK细胞不会杀伤正常的细胞，而专杀病毒感染细胞和肿瘤细胞呢？随着NK细胞众多活化性受体和抑制性受体的发现似乎解释了这一问题，尤其是识别自身MHC I类分子的抑制性受体的发现，认为机体有核细胞都表达MHC I类分子，NK细胞接受自身MHC I类分子的抑制性信号所以不会杀伤自身正常细胞，而病毒感染细胞和肿瘤细胞MHC I类分子下调，NK细胞抑制性信号下降，活化性信号占主导，NK细胞活化从而杀伤这些细胞。但是，随着研究的深入，发现事实并不是如此简单，有些NK细胞并不表达识别MHC I类分子的抑制性受体，或者表达的抑制性受体不识别自身的MHC I类分子。但是这些NK细胞却并不杀伤正常细胞，也不杀伤MHC I类分子缺陷的细胞。另外，无核的红细胞并不表达MHC I类分子，NK细胞也并不杀伤正常的红细胞。虽然自身免疫性疾病有很多，但是没有证据表明NK细胞是导致自身免疫性疾病的主要细胞，自身免疫性疾病一般都是由T细胞或B细胞自身耐受被打破导致的，说明NK细胞自身耐受机制比T细胞和B细胞要完善。逐着研究的深入，对NK细胞耐受的机制的研究也取得了重要突破，本文全面介绍了NK细胞耐受机制研究的重要进展。NK细胞耐受机制（本人总结）：1、经典方式：NK细胞表达识别自身MHC I类分子的抑制性受体，机体正常细胞通过表达MHC I类分子抑制NK细胞对机体正常细胞的杀伤。2、NK细胞表达的识别自身配体的活化性受体长期接触机体正常细胞表达的自身配体能够诱导NK细胞耐受。证据1：NKG2D是NK细胞重要的活化性受体，其配体是Rae-1家族，该配体在机体出生前高表达，出生后不表达。所以，NK细胞可以直接杀伤表达Rae-1配体的细胞。但是转基因持续表达该配体的小鼠的NK细胞则表现为对这些配体的耐受，无法杀伤表达该配体的细胞。证据2：Ly49D识别H-2Dd，来源于H-2Dd缺陷小鼠的Ly49D阳性NK可以杀伤表达H-2Dd的细胞。证据3：Ly49H识别MCMV编码的m157，野生型Ly49H阳性NK细胞可以杀伤表达m157的细胞；但是转基因表达m157小鼠来源的Ly49H阳性NK细胞则无法杀伤表达m157的细胞。而且，将野生型Ly49H阳性NK细胞过继转移到转基因表达m157小鼠内，该NK细胞也将耐受，无法杀伤表达m157的细胞。3、正常机体内存在不表达识别自身MHC I类分子的抑制性受体的NK细胞，这些NK细胞在正常机体内表现为耐受状态。在感染或者炎症条件下，这些NK细胞将打破耐受状态，具有较强的杀伤功能，但是，此时这些NK细胞也不会杀伤自身正常的细胞，因为这些NK细胞表达识别其它自身抗原分子的抑制性受体，如识别CD48的CD244抑制性受体，识别LLT1的CD161抑制性受体等。

据美国物理学家组织网报道，北卡罗莱纳大学科学家的一项最新发现显示，细胞感染人类疱疹病毒（EBV）后，会产生小泡或被称为外体的液囊，从而改变细胞中所含的蛋白质和RNA（核糖核酸）。这种变质的外体一旦进入健康细胞，就能转变细胞的良性生长方式，使之变成不可控的致癌生长。这一发现刊登于美国《国家科学院院刊》网络版。EBV可能是世界上最成功的病毒，它无法被免疫系统彻底清除，几乎每个人终生都被它感染。它们不断进入唾液，在这里进行有效地传播。感染这种病毒很少致病，然而在几种主要的癌症中都发现了它的踪迹，包括淋巴瘤和鼻咽癌，它的蛋白质劫持了细胞生长调控机制，引发不可控的细胞生长，从而导致癌变。研究认为一种名为潜伏膜蛋白质1的蛋白质是EBV的致癌基因。通过外体，它们被传递给未受感染的细胞。研究人员还指出，EBV也彻底改变了外体的内含物，在细胞之间传递能激活癌症的蛋白质，这是值得注意的地方。这些发现表明，通过这种方式，病毒感染细胞能广泛影响并潜在控制全身其他细胞，引发它们的不可测生长。免疫系统不断地监视着外来病毒蛋白质，然而经外体携带的这些蛋白质可以不向免疫系统“报告”感染，并刺激癌细胞生长，由此容许了一种不可测的生长。该研究还显示，细胞能产生血管，这一被称为血管新生的过程很容易接受变质外体并引发潜在生长。北卡罗莱纳大学莱恩伯格综合癌症研究中心微生物与免疫学教授南希·瑞玻-特拉玻说：“外体就像特洛伊木马，EBV通过木马甚至能控制那些还没有感染的细胞。但重要的是，外体的产生可能为我们提供了一种新的治疗标靶，封锁它们就能控制癌症蔓延。”论文第一作者、瑞玻-特拉玻实验室博士后戴维·麦克表示，下一步研究是测定哪些蛋白质被选中进入外体，病毒如何控制了这些蛋白质，以及怎样才能遏制这一过程。

常用突变品系：1.AKR/J-nustr：(1)遗传背景：①起源：从1925年到1936年，Furth 从宾夕法尼亚州的Norristown一位商人处获得“淋巴瘤病”原种，继而选择培育成为白血病高发品系，然后又引到了洛克菲勒研究所(Rockerdller Institute)，随机交配繁殖数代。Phoades夫人兄妹交配繁殖至9代。C.Lync媒慌浞敝持凉代。C.Lynch培育至21代。1948年引到JAX。1988 年引到IMLAS。②毛色和毛色基因：白化，a,B,c,D。③组织相容性基因：H-2k，H-3(no a or b)。(2)品系特征：①免疫：带有Thy-la(Thy-ll)基因(胸腺细胞抗原l)。与AKR/Cum 亚系之间互相排斥自发性淋巴瘤红细胞比容为47.6％。②肿瘤：淋巴性白血病发病率为68-91％。③生理：收缩血压为80mmHg。对利什曼原虫有抗性。1975年，发现该品系在nu基因位点上发生突变，定名为nustr(Streaker)。这个突变基因与早期发现的nu基因具有相同的遗传效应(参见BABL/C-nu/Jcl)。nustr纯合子无毛且胸瘤缺乏。但杂合子与AKR/J品系表型同。2.BALB/c-nu/Jcl：(1)遗传背景：①起源：参见BALB/cAnN。1983年从Jcl引到IMLAS。②毛色和毛色基因：见BALB/cAnN。③组织相容性基因：见BALB/cAnN。(2)品系特征：①免疫：为BALB/c带nu基因的同源近交系(Congenic strain)。裸基因是八号常染色体上的隐性突变基因。1962年发现于英国Glasgow的Ruchill医院。当纯合时，长型无毛且缺胸腺，细胞免疫反应受抑或缺乏。由于细胞免疫缺陷，这种动物能接受同种或异种组织移植。②肿瘤：乳腺癌发病率低，肺癌发生率为21％，网状细胞瘤为8％，血管瘤为6％，淋巴肉瘤为4.5％。③生理：对感染性疾病敏感。在普通动物房内饲养寿命短， 但在隔离器中饲养寿命可到达杂合子正常动物。杂合子虽带裸基因，但表型同正常动物雌性裸鼠母性差，因此繁殖用杂合子之间交配或者雌性杂合子与雌性纯合子交配。④病理：大部分雄鼠在20月龄前出现脾脏淀粉样变性。易患幼鼠腹泻，老龄鼠出现心脏病，多发动脉硬化症。3.BALB/c-nu/ola：(1)遗传背景：①起源：参见BALB/cAnN。1978年从G.D.Searle 引到OLAC。1985年引到IMLAS。②毛色和毛色基因：白化，A,b,c,D。③组织相容性基因：H-1b，H-2d，H-3(no a or b)(2)品系特征：有关nu基因特征参见BALB/c-nu/Jcl。其它特征见BALB/c/ola。4.B6C3F1-a/a-Dh：(1)遗传背景：①起源：为C57BL/6J和C3HeB/F1J的F1代。 C57BL/6J的起源参见C57BL/6J/ola。C3HeB/FeJ的起源参见C3H/He/ola。1948年，Fekete将C3H/HeJ受精卵移植到C57BL/6，1950年，通过Hummel在第３代引到JAX，从而培育成C3HeB/F1J 品系。1987年由JAX引到IMLAS。②毛色和毛色基因：黑色，aa、BB、DD、DD。③组织相容性基因：H-2(k or b)(2)品系特征：①免疫：杂合子将导致先天性缺脾脏和体液免疫缺陷。 对绵羊红细胞(skbc)缺少体液免疫反应。②生理：淋巴结肿大，白细胞增多。血管内碳清除率减少。③病理：带有显性半肢畸形基因(Dominant hemimelia,Dh)。该基因为1号染色体上的显性突变基因，纯合致死。后肢畸形，尿殖系统和消化系统有缺陷。5.615/PBI-Beige：(1)遗传背景：①起源：中国药品生物制品检定所和北京市肿瘤研究所以615、PBI近交系小鼠为受体，昆明突变无毛鼠为供体，以过M6+N3 代的杂交－内交和直接杂交导放交配，成功地育成了仅有胸腺残迹的Ｔ细胞免疫功能缺陷的615/PBI同源系裸鼠，在此基础上，又将615/pbi-裸鼠的nu基因与C57BL/6PBI-Bg小鼠的bg基因， 通过反复的互交和内交，获得了具有Ｔ和ＮＫ联合缺陷的615.B6/PBI-bg裸(简称615/PBI-bg裸鼠)。(2)品系特征：该bg裸鼠与C57BL/6PBI-bg裸鼠相比具有较高生产率，与其相同遗传背景裸鼠相比，外耳和虹膜色素变浅呈苍白色，是生产实践中十分有用的鉴别特征。其ＮＫ活性为9.2±2.4，明显低于615/PBI裸鼠(39.3±3.6)和BALB/C裸鼠(31.7±4.6)P0.05。该bg裸鼠已广泛应用于人类肿瘤转移因素，肿瘤异植性，肿瘤诊断治疗，造血调控以及人单克隆抗体生产等领域的实验研究均取得理想的结果，特别对ＮＫ细胞敏感的人类肿瘤的移植，所获结果更为显著。6.-Cat白内障鼠：品系特征及用途：Cat是显性遗传，10日龄至14周龄时晶状体混浊，还会发生晶状体液化和核的上超咬合。当Cat呈杂合状态时出现白内障。 这种改善在一般情况政委有容易观察到，可作为眼科的动物模型。7.C.B-17/IcrJ-scid：(1)遗传背景：①起源：为BALB/c带有免疫球蛋白重链等位基因(Igh-1b)的同源近交系。用C57BL/ka与BALB/cAnIcr杂交17代以后，近交培育而成，1988年从JAX引到IMLAS。②毛色和毛色基因：AA、bb、cc、DD。(2)品系特征和用途：带有严重联合免疫缺陷基因(Severe combined immunodeficiency,SCID)。该基因为第16号染色体上的隐性突变基因，发现于1983年。 纯合子血清中无免疫球蛋白。淋巴结、胸腺和变小。胸腺由残存的髓质构成，无皮质。脾脏和淋巴结中滤泡缺乏。Ｔ细胞和B细胞数目大大减少，因此缺乏体液免疫和细胞免疫功能。纯合的SCID导致小鼠几乎完全丧失Ｔ和Ｂ淋巴细胞免疫功能，所以SCID小鼠一般需要饲养于具有SPF 屏障系统的环境中，避免致病微生物的感染。SCID几乎完全丧失T和B的环境感染。SCID突变基因属于缺陷的DNA修复基因，影响动物对双链断裂的修复能力。许多人类寄生虫不能感染其它小鼠， 而SCID小鼠不但可被人类丝虫病所感染，而且所出现的病变也与人类相似，因此是研究人类寄生虫病的新动物模型。对人类肿瘤生物学的研究，SCID小鼠肿瘤移植存活率高达36.9％，一般裸鼠为16.8％。对白血病和恶性肿瘤不但转移率高，而且能广泛扩散，与人体肿瘤生物学行为极为相似，其侵润和转移与人类肿瘤自发性转移相似。SCID小鼠是研究淋巴细胞分化作用和调控作用的主要模型，也是研究免疫缺陷与自发性淋巴细胞瘤之间关系的主要类型。

[center]靶向药物治疗肿瘤效果明显 市场潜力巨大[/center]近日，由阿斯利康举办的我国首届CSCO靶向治疗知识竞赛在上海、北京、广州3个赛区正式拉开序幕，据阿斯利康公司透露，此次竞赛的目的在于将肿瘤靶向治疗这一先进的治疗方法更广泛、更正确地应用于肿瘤的临床治疗中，从而通过多学科、多途径的治疗，尽可能地提高疗效，改善患者的生活质量。 据了解，肿瘤的发病率不断上升，其中肺癌是目前全球死亡率最高的肿瘤疾病之一。而近年来，我国肺癌尤其是非小细胞肺癌的发病率呈逐年上升的趋势。与此同时，作为治疗晚期非小细胞肺癌最常用的一种手段，化疗的疗效却已经进入了一个瓶颈阶段。 据中山大学肿瘤医院副院长林桐榆教授介绍，临床经验证明，化疗对非小细胞肺癌治疗的有效率一般在30%～40%左右，如何进一步提高疗效，改善患者的生活质量，延长患者的生存时间备受关注。肿瘤靶向治疗作为21世纪肿瘤治疗的热点，其优势在于，它以癌细胞作为特异性靶点，能够准确地作用于肿瘤，因此不会或者很少伤害正常细胞，产生的不良反应相对较小，已被证实能在多种肿瘤的治疗包括非小细胞肺癌、淋巴瘤、头颈癌、乳腺癌、结直肠癌等多种肿瘤的治疗中起到很大的作用。信息来源:医药经济报

[font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]疗法就是嵌合抗原受体[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞免疫疗法，英文全称[/font][font=Calibri]Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy[/font][font=宋体]。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞也叫[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]淋巴细胞，是人体白细胞的一种，来源于骨髓造血干细胞，在胸腺中成熟，然后移居到人体血液、淋巴和周围组织器官，发挥免疫功能。其作用相当于人体内的“战士”，能够抵御和消灭“敌人”如感染、肿瘤、外来异物等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在实验室，技术人员通过基因工程技术，将[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞激活，并装上定位导航装置[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]（肿瘤嵌合抗原受体），将[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞这个普通“战士”改造成“超级战士”，即[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞，他利用其“定位导航装置”[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，它们能高效地杀灭肿瘤细胞，从而达到治疗恶性肿瘤的目的。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法应用：[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞免疫治疗通过基因改造技术，比常规免疫细胞具有更高的靶向性、杀伤活性和效应[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞的持久性。还可以克服肿瘤局部的免疫抑制微环境，打破宿主免疫耐受状态，在肿瘤的临床治疗中显示出巨大的应用潜力和发展前景。但该技术也存在细胞因子风暴、脱靶效应、插入突变和其他临床应用风险。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗血液系统恶性肿瘤[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法在血液恶性肿瘤中取得了初步成效。以[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞为基础的高效疗法广泛用于血液系统癌症，如急性和慢性白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗[/font][font=Calibri]CD19 CAR-T[/font][font=宋体]细胞可有效治疗[/font][font=Calibri]R/R[/font][font=宋体]（复发性或难治性）[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞恶性肿瘤，如儿童和成人患者的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞非霍奇金淋巴瘤（[/font][font=Calibri]NHL)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ALL[/font][font=宋体]和慢性淋巴细胞白血病。[/font][font=Calibri]CD19[/font][font=宋体]是表达于[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞表面表达免疫球蛋白超家族成员，是[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]靶向治疗的理想靶点之一。[/font][font=Calibri]CAR T[/font][font=宋体]细胞临床试验（多中心[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]期[/font][font=Calibri]ELIANA[/font][font=宋体]临床试验）应用[/font][font=Calibri]CAR T[/font][font=宋体]细胞治疗[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞淋巴瘤，对[/font][font=Calibri]75[/font][font=宋体]例患者接受输注的患者进行随访调查，结果显示，[/font][font=Calibri]75[/font][font=宋体]名患者的总缓解率为[/font][font=Calibri]81%[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]45[/font][font=宋体]例患者（[/font][font=Calibri]60%[/font][font=宋体]）完全缓解，注射后[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]个月的总生存率为[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞成熟抗原（[/font][font=Calibri]BCMA[/font][font=宋体]）是肿瘤坏死因子受体超家族的成员，在恶性浆细胞中高表达。调节[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞增殖和存活。它已成为抗体药物偶联物、双特异性抗体、嵌合抗原受体[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞疗法和其他多发性硬化骨髓瘤免疫治疗的关键靶点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞可以靶向[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞肿瘤上的另一种过表达抗原[/font][font=Calibri]CD22[/font][font=宋体]。据报道，[/font][font=Calibri]CD22 CAR-T[/font][font=宋体]细胞在 [/font][font=Calibri]CD19 CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗后的复发性癌症或在[/font][font=Calibri]ALL[/font][font=宋体]肿瘤细胞中发挥抗肿瘤功能。此外，数项研究证实了[/font][font=Calibri]CD20 CAR-T[/font][font=宋体]细胞在[/font][font=Calibri]R/R[/font][font=宋体]非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和套细胞淋巴瘤中的安全性和疗效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供高质量的血液恶性肿瘤靶点蛋白和[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]试剂盒。这些高质量试剂已经过多种方法验证，并可提供一致和可重复的结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法治疗实体瘤[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]实体瘤与血液肿瘤相比更为复杂，[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞需要解决多种挑战。肿瘤细胞的遗传不稳定性导致它们不能有效表达[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞靶向的抗原；或者缺乏呈递这些抗原的机制。其他挑战包括缺乏选择性和高表达的表面抗原，[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞很难准确注入到肿瘤位点，免疫抑制性微环境和肿瘤抗原异质性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]实体瘤临床试验不断增加，包括靶向癌胚抗原的[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞、间皮素、白细胞介素[/font][font=Calibri]13[/font][font=宋体]受体α（[/font][font=Calibri]IL-13R[/font][font=宋体]α）、人表皮生长因子受体[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]HER2[/font][font=宋体]）、成纤维细胞活化蛋白（[/font][font=Calibri]FAP[/font][font=宋体]）、[/font][font=Calibri]L1[/font][font=宋体]细胞粘附分子（[/font][font=Calibri]L1CAM[/font][font=宋体]）和表皮生长因子受体。[/font][font=Calibri]HER2[/font][font=宋体]是一种酪氨酸激酶受体，在多种癌症和约[/font][font=Calibri]80%[/font][font=宋体]的胶质母细胞瘤中过表达。[/font][font=Calibri]HER2[/font][font=宋体]在发育、细胞增殖和分化中起着至关重要的作用。[/font][font=Calibri]HER2[/font][font=宋体]基因与恶性肿瘤和许多癌症的不良预后相关，包括乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌等。最近有研究证明，第三代[/font][font=Calibri]HER2 CAR-T[/font][font=宋体]细胞可以靶向杀死胶质母细胞瘤细胞。当其与[/font][font=Calibri]PD-1[/font][font=宋体]阻断剂联合使用时，疗效得到显著改善。义翘神州已成功开发一组高质量的实体瘤靶点蛋白， 产品具有高活性和高纯度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州：综合性的[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法开发解决方案：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/car-t-cell-immunotherapy[/font][/font]

食品安全国家标准 小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验