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琼脂糖生物化学

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琼脂糖生物化学相关的论坛

  • 测琼脂糖的分子量

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  • 【求助】琼脂糖凝胶用途

    [em09511]请问各位,琼脂糖凝胶在什么地方运用比较多啊?我们公司自主研发了琼脂糖系列凝胶。有谁需要试用的吗?我可以提供样品。

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  • 【原创大赛】琼脂糖方法交流

    【原创大赛】琼脂糖方法交流

    琼脂糖凝胶电泳是分子实验的基础,方法步骤也再熟悉不过了,把它下来主要是和大家一起分享自己的操作习惯和通过图片展示一下操作环境,并一起讨论实验中遇到的问题。一 简单概述琼脂糖凝胶电泳时用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法,因为琼脂糖凝胶具有网络状的结构,小分子可以顺利通过,而大分子在通过时会受到阻力,从而把大分子和小分子分离来。在电泳时,分子移动速度与分子大小和分子所带电荷有关,分子越大移动速度也慢。蛋白质是高分子物质,因此不适用于凝胶电泳,现今凝胶电泳被广泛应用于类似核酸的小分子的研究中。二 实验操作总结1准备好各种试剂和设备,设备包括电泳槽,电泳仪,微波炉,三角瓶,搅拌器,制胶槽和梳子,电子秤,量筒;试剂包括电泳缓冲液TAE,琼脂糖,核酸染料。2 根据制胶的大小和浓度,称量相应重量琼脂糖,加入对应体积的缓冲液,混匀,用微波炉加热至琼脂糖完全溶解,此时溶液澄清,无游离状物质漂浮于液体中。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559545_3030887_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062228_559542_3030887_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559549_3030887_3.jpg3 加热溶解后冷却,期间加入核酸染料,一点即可。4冷却至不烫手即可导入到制胶槽中。冷却的目的是防止琼脂糖溶液温度过高是制胶槽和梳子变形。倒入制胶槽后,赶走胶上的气泡,插上梳子。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559547_3030887_3.jpg5等待十分钟左右至胶凝固,拔掉梳子。注意的是经常有人拔梳子时吧点样孔破坏,所以拔梳子时手掌先压住电泳槽,然后拿住梳子两边,快速向上用力将梳子拔出,这样能较好的避免点样孔的损失。6胶制好后,点样。点样分为干点和湿点两种,干点是不在缓冲液中点,直接在外界中操作;湿点是将胶放入缓冲液中点样,样品点样前先加入Ladding Buffer,Ladding Buffer目的是帮助样品沉淀,有时干点可不加,但是湿点的时候最好要加。7电泳,将点样后的胶放入电泳槽中,注意电极方向,根据电泳槽大小设置电泳时间和电压。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559548_3030887_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559546_3030887_3.jpg8成像。电泳完后,在琼脂糖凝胶显色系统中拍照保存,进行后续实验。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062229_559544_3030887_3.jpg9 分析。从上面的图片可以看出有些带相对较亮,有些带相对较弱,可能与DNA浓度有关。另外有些带似乎有拖带,可能是引物二聚体。不过总体还说结果还算可以,带型清晰可变。三 写在后面的话总的来说步骤有些多,但是并不是很复杂,也没有很难的技术要点,但是根据成相系统拍摄出来的照片效果显色,一个同样的样品,有时因为制胶的原因,呈现的效果完全不一样,这可能与胶的溶解和加入染料的量、电泳条件等等有关,因此琼脂糖凝胶电泳时需不断总结经验,做出来的胶图才能很漂亮。

  • 琼脂糖凝胶电泳常见问题与解决办法

    一、凝胶制备1. 微波炉溶解琼脂糖时,胶液沸腾冲溢出三角锥瓶微波炉加热时胶液可能发生剧烈沸腾,(1)总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。(2)2%以上胶液设置中火加热。 (3)胶液剧烈沸腾时,停止加热,移开三角锥瓶,请戴上防热手套,小心摇动三角锥瓶,然后再次加热,胶液沸腾直至胶液清澈,保证琼脂糖完全溶解。 2. 琼脂糖电泳图像背景模糊不清:琼脂糖没有完全溶解会造成电泳图像背景模糊不清。完全溶解的琼脂糖胶液清澈,三角锥瓶内壁应没有粘附琼脂糖颗粒。 3.加热后水分蒸发,如需要应加入热的蒸馏水,补足到原来的重量,摇匀。 二、电泳1. DNA条带模糊,拖尾。 (1)DNA降解。避免核酸酶污染。 (2)DNA上样量过多。减少凝胶中DNA上样量。 (3)电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。 (4)电泳条件不合适。电泳时电压不应超过20 V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。 (5)DNA样含盐过高。泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。 (6)有蛋白污染。电泳前抽提去除蛋白。 (7)DNA变性。电泳前勿加热,用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA。[/c

  • 【分享】琼脂糖凝胶电泳技术

    电泳基本原理 迁移率(或泳动度)是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度,可用下列公式计算: U =υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/Vt U为迁移率(cm2•V-1•min-1);υ为颗粒泳动速度(cm•s-1);E 为电场强度( V•cm-1);d为颗粒泳动的距离(cm);l为滤纸有效长度(cm);V为实际电压(V);t为通电时间(s或min)。通过测量d, l, V, t, 即可计算出被分离物质的迁移率。 1迁移率单位= 10-5 cm2•V-1•min-1在确定的条件下,某物质的迁移率为常数,是该物质的化学特征常数。 颗粒带净电荷多,直径小而接近于球形,则在电场中泳动速度快,反之则泳动速度慢。 迁移率还与分子的形状,介质粘度,颗粒所带电荷有关,迁移率与颗表面电荷成正比,与介质粘度及颗粒半径成反比。 影响琼脂糖电泳迁移的主要因素 电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗现象 温度的影响 支持物的影响 按分离原理分类: 1.区带电泳 2.移界电泳 3.等速电泳 4.聚焦电泳 按有无固体支持物分类 1. 纸上电泳 2. 醋酸纤维素膜电泳 3. 薄层电泳 4. 非凝胶性支持物区带电泳(支持物有:淀粉、纤维素粉、玻璃粉、硅胶) 5. 凝胶支持区带电泳(淀粉凝胶、聚丙稀酰胺凝胶、琼脂糖凝胶) 影响琼脂糖电泳迁移的主要因素 DNA的大小 DNA的构象 琼脂糖浓度 缓冲液 不同构像质粒 缓冲液 TAE:乙酸盐缓冲液 TBE:硼酸盐缓冲液 TPE:磷酸盐缓冲液 实验操作 1. 用胶带将洗净、干燥的水平板的边缘封住,形成一个胶模并水平放置。 2. 按水平板的长×宽×0.5cm胶厚,量取0.5×TBE,并按0.7%的浓度称取agarose琼脂糖,在微波炉或电炉上加热至全熔(清澈透明)。 3. 等凝胶温度降至大约50-60以下时,加入1 mg/L溴化乙锭(EB)至终浓度为0.5ug/mL ;摇匀并轻快地倒入水平板中,除掉气泡,插入梳子。 4. 凝固后,将梳子轻轻拔出。 5.去掉胶带,将水平板放入加有0.5×TBE电泳缓冲液的电泳槽中,并且使电泳缓冲液高出凝胶约1mm。 6.在parafilm膜上依次加: ddH2O 6ul,上样Buffer 2ul ,DNA 4ul 分别混匀后点样,记录点样次序。 7. 在水平板两边的点样孔中分别加入6 μ l的λΔΝΑ/EcoRI+HindIII marker。 8. 盖好电泳槽盖子,选择适当的电泳电压(≤5V/cm)及电泳方向(DNA阴极阳极),开始电泳。 9. 当色素接近胶的先端,停止电泳,样品在紫外灯下观察、成像℃

  • 【求助】求助:DEAE琼脂糖凝胶 FF能不能用来分离?

    我想要用葡聚糖凝胶色谱来分离纯化半刀豆球蛋白分子量是104000,它本身会结合葡萄糖,那用葡聚糖凝胶色谱还能不能分来,如果不行的话,琼脂糖凝胶可以不?琼脂糖凝胶我还没有用过,所以不知道DEAE琼脂糖凝胶 FF能不能用来分离,谢谢大家了!

  • 琼脂糖预制胶高压快速电泳试剂盒使用方法

    琼脂糖预制胶高压快速电泳试剂盒使用方法

    [font=宋体][size=10.5000pt]琼脂糖预制胶电泳试剂盒是一种非常适合核酸[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]PCR[font=宋体]实验、酶切反应实验等的一种可以直接进行核酸凝胶电泳实验的试剂盒,电泳实验效率大大提高,可以节约大量时间。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]此款琼脂糖电泳试剂盒跟其它琼脂糖试剂盒有区别,因此使用方法也有一些区别,不需要再四处采购琼脂糖、核酸染料、电泳液和[/font]loading buffer[font=宋体]等试剂;而且琼脂糖预制胶是经过核酸染料预染的,既不用进行繁琐的制胶,也不用电泳液染色或后染色,即开即用;再加上配备的高压快速电泳液,电泳速度远远快与传统的[/font][font=Calibri]TAE[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]TBE[/font][font=宋体]电泳液。[/font][/size][/font][img=,519,396]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007101051212160_1649_3880864_3.jpg!w519x396.jpg[/img][font=宋体][size=10.5000pt]使用方法:[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]1. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]在低温条件下高压快速电泳有时会有结晶析出,请[/font]65[font=宋体]℃水浴加热溶解,用去离子水稀释[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]倍,用作电泳液,倒入电泳槽中。本产品配置的电泳液可重复使用两三次,如果大电泳槽次数更多。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]2. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]取出琼脂糖凝胶,剪刀剪开,标签面即孔突出面朝上,公测端为负极,放入高压快速电泳液中,没过胶面[/font]1mm[font=宋体],如有孔内有气泡,设法除去。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]3. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]在[/font]DNA[font=宋体]样品中加入[/font][font=Calibri]1μl[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]× [/font][font=Calibri]loading buffer[/font][font=宋体]混匀,用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]将混合液缓慢加入凝胶加样孔,同时加入[/font][font=Calibri]Marker[/font][font=宋体]。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]4. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]开启电源,红色为正极,黑色为负极,注意[/font]DNA[font=宋体]样品有负极向正极电泳移动。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]5. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]根据迁移距离及指示剂迁移的位置,判断是否终止电泳。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]6. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]电泳完毕,关电源,将凝胶放在成像仪中观察电泳条带及其位置,并与[/font]Marker[font=宋体]比较被扩增产物的大小。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]以上是德晟琼脂糖预制胶电泳试剂盒的具体使用方法以及在高压快速电泳时需要注意的一些小细节,虽然与其他试剂盒相比也一些差异,但是在核酸[/font]PCR[font=宋体]或者酶切反应等对分辨率要求不高的实验中,是非常适合的,而且省去了大量时间和金钱成本。[/font][/size][/font]

  • 【金秋计划】琼脂糖凝胶电泳技术详细操作步骤和详解

    [size=10px][b]一、琼脂糖凝胶电泳原理[/b] 琼脂糖凝胶电泳是一种重要的分子生物学研究方法,?它利用琼脂糖凝胶的网络结构,?通过电场作用使带电颗粒(?如DNA或RNA)?在凝胶中移动,?根据分子大小和电荷性质的不同实现分离。?这种技术不仅操作简单迅速,?而且具有高分辨率,?因此在基因操作中扮演着关键角色,[font='PingFang SC']其[b]原理主要基于DNA分子的两大特性:电荷效应和分子筛效应。[/b][/font] ?琼脂糖是一种天然的长链状聚合分子,它在沸水中溶解,当温度降至45℃时开始凝固并形成多孔刚性立体网状结构,其孔径的大小取决于琼脂糖的浓度。 [b]分子筛效应[/b]指的是琼脂糖凝胶由琼脂糖分子交联形成的网状结构,其孔径大小与琼脂糖浓度成反比。当DNA分子通过凝胶时,会受到凝胶孔径的阻碍。较小的DNA片段可以通过凝胶孔隙,而较大的DNA片段则会被阻挡,导致迁移速率降低。?? [/size][align=center][size=10px] [/size][/align][size=10px][b]电荷效应[/b]指的是DNA分子在碱性条件下(pH7)会电离,带负电荷。当DNA样品置于电场中时,在外加电场的作用下受到电场力的作用,向正极方向移动。DNA分子的迁移速率与其所带的电荷量成正比,而电荷量又与DNA片段的长度成正比。因此,在相同电场条件下,较长的DNA片段迁移速率较慢,而较短的DNA片段迁移速率较快。不同DNA的分子量大小及构型各不相同,因此它们在电泳中的迁移率也会有所不同,从而可分离出不同的区带。[b]为什么核酸条带显示荧光?[/b]主要便于观察,对核酸进行了染色。溴化乙锭EB是一种扁平状分子,在紫外光照射下能发射荧光。当EB与DNA分子形成EB-DNA复合物后,其发射的荧光强度比游离状态的EB提高10倍以上,且荧光强度与DNA的含量呈正比。 [b]二、?琼脂糖凝胶电泳的详细操作步骤(1%琼脂糖凝胶电泳为例) [font='Times New Roman', 'serif']1.安装制胶模具[/font][font='Times New Roman','serif']:[/font][/b]利用电泳托盘,安装制胶模具,水平放置于试验桌上。 [b][font='Times New Roman', 'serif']2.[/font]制备琼脂糖凝胶:[/b]将琼脂糖粉末溶解于缓冲液中,加热煮沸,冷却后凝固成凝胶。(根据电泳所需要的分辨率准备琼脂糖-电泳缓冲液凝胶溶液)[font='Times New Roman','serif'](1)[/font]称取[font='Times New Roman','serif']1g[/font]琼脂糖,放入盛有[font='Times New Roman','serif']100mL 0.5×TBE[/font]缓冲液的[font='Times New Roman','serif']500mL[/font]三角瓶中,摇匀用天平称量其重量,摇匀。在微波炉中,使琼脂糖完全溶解,放回天平上,加入蒸馏水补齐至初始重量。冷却至不烫手([font='Times New Roman','serif']55℃[/font]左右),加入[font='Times New Roman','serif']100μL[/font][font='Times New Roman','serif']0.5mg/mL EB[/font]溶液(终浓度为[font='Times New Roman','serif']0.5 μg/mL[/font]),或加入[font='Times New Roman','serif']5-10μL[/font][font='Times New Roman','serif']StarGreen DNA Dye(GenStar)[/font],摇匀。 [font='Times New Roman','serif'](2) [/font]将凝胶溶液倒入安装好的制胶模具中,凝胶厚度应在[font='Times New Roman','serif']3-5mm[/font]。 [font='Times New Roman','serif'](3) [/font]选择合适的梳子,梳子的插入深度应使齿的底部和板的表面距离在[font='Times New Roman','serif']0.5[/font]到[font='Times New Roman','serif']1.0mm[/font]。要检查梳子齿下方或之间是否有气泡,在室温下冷却凝固。 [font='Times New Roman','serif'](4) [/font]待凝胶充分凝固后,垂直向上小心拔出梳子,以保证点样孔完好。 [font='Times New Roman','serif'](5)[/font]将凝胶置入电泳槽中,加入[font='Times New Roman','serif']0.5×TBE[/font]缓冲液[font='Times New Roman','serif'],以浸没凝胶约1mm为合适。[/font] [/size] [size=10px][b][font='Times New Roman','serif']3[/font][font='Times New Roman','serif'].[/font]制备DNA样品:[/b]将DNA样品与上样缓冲液混合。[/size] [size=10px]把DNA样品和上样缓冲液混合,利用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]把电泳样品加到没入缓冲液中凝胶槽中,在凝胶的两侧样品槽内加入合适的分子量标准品。[/size] [size=10px]上样量的多少根据样品中DNA片断的多少和大小而定,已知浓度的DNA用于估测样品质粒DNA的浓度。 [b][font='Times New Roman','serif']4.[/font]电泳:[/b]将DNA样品加载到凝胶上的样品孔中,在电场的作用下进行电泳。[/size] [size=10px]盖上电泳槽的盖子,正确连结电泳槽上的导线。电泳电压以正负电极的距离的一到五倍为合适(1到5V/cm)。如果电泳线连接正确,那么在进行电泳时可以看到有气泡从电泳槽内电极导线处产生,同时,在几分钟后,可见溴酚蓝条带从负极向正极移动,从上样槽内移入胶体。[/size] [size=10px][b]5.观察:[/b]当核酸样品移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳。电泳结束后,利用紫外灯观察DNA片段的迁移情况。当DNA样品在凝胶内移动到合适的距离时,关闭电源,去除电泳导线和电泳槽盖子。在室温下,用电泳缓冲液或水配制的EB溶液(0.5 μg/ml)对凝胶进行染色[b][font=-apple-system, helvetica, sans-serif]。[/font] 三、琼脂糖凝胶电泳的主要应用[/b] [/size] [size=10px][b]1.DNA片段的鉴定:[/b]通过比较DNA片段的迁移距离,与标准品进行对照,可以判断DNA片段的大小。[/size] [size=10px][b]2.DNA片段的分离:[/b]利用不同大小DNA片段的迁移速率差异,可以将DNA片段进行分离。[/size] [size=10px][b]3.DNA的纯化:[/b]通过电泳将目的DNA片段与其他杂质分离,得到纯化的DNA片段。(割胶回收)[/size] [size=10px][b]四、操作技巧和注意事项[/b][/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]1.EB毒性[/size][/font][/b] [size=10px]EB是一种很强的诱变剂。在接触含有EB溶液时,应该全程戴手套和口罩。[/size] [size=10px]电泳中使用的溴化乙锭(EB)为中度毒性、强致癌性物质,务必小心,勿沾染于衣物、皮肤、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在专门电泳区域操作,戴一次性手套,并及时更换。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]2. 加热熔化琼脂糖[/size][/font][/b] [size=10px]用微波炉加热熔化琼脂糖时,溶液体积不能超过三角瓶容量的1/3,以免煮沸时溶液溢出。同时,琼脂糖必须完全熔化,否则可能导致电泳图像模糊不清。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]3.凝胶厚度[/size][/font][/b] [size=10px]凝胶的厚度一般为4-6nm,若太厚可能会影响检测的灵敏度。待凝胶充分凝固后才能拔出梳子,以保证点样孔形状完好,防止漏样。[b][font='Times New Roman','serif']4.上样[/font][/b][/size] [size=10px]上样时,须先除去点样孔中的气泡,并且加样操作需小心谨慎,以免漏样或损坏胶孔。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]5.电泳电压[/size][/font][/b] [size=10px]选择适当的电泳运行条件很重要,包括电压和距离。推荐的电压范围是4-6V/cm,电压太低会降低迁移率,电压太高会降低分辨率。[/size]

  • 琼脂糖凝胶电泳——给新手

    做了一小段时间的琼脂糖凝胶电泳, 有一些体会给新手们参考, 不当之处也请专家们指正.1. 加热时, 一定要煮沸, 以保证琼脂糖的完全溶解.2. 待溶液冷却至不烫手, 感觉温暖舒适时加EB. 一定要在通风柜里.3. 倒胶时, 可用干净的纸巾拭去气泡.4. 胶凝固后先倒入些电泳缓冲液以方便取梳子.5. 保证缓冲液淹过胶的边沿, 边沿部分常高出1-2mm.6. 有时需要大的上样孔, 可用胶带把几个相邻的梳齿粘在一起, 这种情况下, 尽量让胶液冷一些再倒胶.7. 如果只是为了看一下结果(不需要照相), 同一块胶可重复用1-3次. 有一次我跑了4遍, 条带很弱, 用加了EB的缓冲液(约10ul EB in 50ml 缓冲液)泡半小时后就如正常了.8. 要保存胶到第二天用, 可以保鲜膜包裹后放入4 度冰箱.9. TAE 电泳缓冲液也可重复使用, 至少10次没有问题.10. 为了防止电泳时两极缓冲液槽内pH和离子强度的改变,可在每次电泳后合并两极槽内 的缓冲液,混匀后再用。

  • 琼脂糖电泳步骤之超级基础篇

    琼脂糖电泳步骤之超级基础篇一、电泳前准备准备内容作用1.刷干净电泳制胶的梳子,板子,槽子,蒸馏水洗净晾干防止不必要的重复污染,减少外来的污染。梳子干净有利于梳孔的形成。2.检查电泳槽,根据情况更换buffer排除电泳槽的电极接触不良,确保buffer的缓冲能力,减少污染。3.根据DNA的分离范围选择合适的胶浓度并记录达到较好的分离效果,防止样过快跑出胶或者是过慢浪费时间。4.计算agarose的用量和制胶 buffer的用量记录,胶最终越薄越好。实验记录备查 二、制胶步骤注意事项1.称量agarose和bufferBuffer不要用成H2O,称量相对准确2.融胶,加热到胶产生大量的气泡时,拿出摇匀,继续加热到完全溶解,拿出摇匀,再加热到沸腾。非常热,小心烫手,另外注意不要加热过度使胶冲出瓶子。因此注意选择起码为胶体积2倍以上的瓶子。保证胶混匀和完全溶解,减少可能因此引起的胶中孔径不均匀影响分离效果。3.倒胶,可用水浴的办法使胶冷却到60度左右,即手可以握住瓶子的温度,沿着制胶板的一侧,缓缓地一次性倒入。梳子最好是预先放好并固定的,注意梳孔的体积能点的下所有的样。用枪头赶掉气泡。制胶的桌面相对水平。倒胶时尽量减少气泡的产生。EB如果在制胶时加入,在60度左右时加入,使终浓度为0.5ug/ml。不宜过低,染色成像不明显;不宜过高,导致背景太深。摇匀要沿着瓶壁摇动,尽量减少气泡产生的可能性。高浓度胶例如2%以上的EB很难摇匀,而且凝的速度也相对快,强烈建议跑完胶之后再用EB染色。4.室温凝胶30分钟过程中不要碰到梳子,尽量保持胶的位置不移动。时间不宜过久,导致胶干燥变形;不宜过短,影响胶内部孔径形成。5.拔梳子,放入电泳槽。缓缓地将梳子垂直从梳孔拔出,尽可能使梳子是同时从各个胶孔拔出的。暂时不用的胶最好放入电泳槽电泳液中浸泡。电泳液要浸没胶1mm。 三、上样电泳[

  • 【分享】生物化学实验讲义1-电泳技术

    生化实验讲义(理论部分)--电泳技术   4.1 电泳技术发展简史1809年俄国物理学家Рейсе首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极,加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊,即带负电荷的粘土颗粒向正极移动,这就是电泳现象。1909年Michaelis首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。他用不同pH的溶液在U形管中测定了转化酶和过氧化氢酶的电泳移动和等电点。1937年瑞典Uppsala大学的Tiselius对电泳仪器作了改进,创造了Tiselius电泳仪,建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法,并首次证明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白组成的,由于Tiselius在电泳技术方面作出的开拓性贡献而获得了1948年的诺贝尔化学奖。1948年Wieland和Fischer重新发展了以滤纸作为支持介质的电泳方法,对氨基酸的分离进行过研究。从本世纪50年代起,特别是1950年Durrum用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后,开创了利用各种固体物质(如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等)作为支持介质的区带电泳方法。1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶作为支持介质,创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳,极大地提高了电泳技术的分辨率,开创了近代电泳的新时代。30多年来,聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍,分辨率最高的分析鉴定技术,是检验生化物质的最高纯度:即“电泳纯”(一维电泳一条带或二维电泳一个点)的标准分析鉴定方法,至今仍被人们称为是对生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段,即“Last Check”。由80年代发展起来的新的毛细管电泳技术,是化学和生化分析鉴定技术的重要新发展,己受到人们的充分重视。4.2 电泳的基本原理电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937年进行的自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜,目前这些介质在实验室已经应用得较少。在很长一段时间里,小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析,但目前则一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。这些介质适合于分离小分子物质,操作简单、方便。但对于复杂的生物大分子则分离效果较差。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展,使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝胶是淀粉凝胶,但目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。电泳装置主要包括两个部分:电源和电泳槽。电源提供直流电,在电泳槽中产生电场,驱动带电分子的迁移。电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。垂直板式电泳是较为常见的一种,常用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质的分离。电泳槽中间是夹在一起的两块玻璃板,玻璃板两边由塑料条隔开,在玻璃平板中间制备电泳凝胶,凝胶的大小通常是12cm 14 cm,厚度为1mm~2 mm,近年来新研制的电泳槽,胶面更小、更薄,以节省试剂和缩短电泳时间。制胶时在凝胶溶液中放一个塑料梳子,在胶聚合后移去,形成上样品的凹槽。水平式电泳,凝胶铺在水平的玻璃或塑料板上,用一薄层湿滤纸连接凝胶和电泳缓冲液,或将凝胶直接浸入缓冲液中。由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行的,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。为了更好的了解带电分子在电泳过程中是如何被分离的,下面简单介绍一下电泳的基本原理。在两个平行电极上加一定的电压(V),就会在电极中间产生电场强度(E),L是电极间距离。在稀溶液中,电场对带电分子的作用力(F),等于所带净电荷与电场强度的乘积。这个作用力使得带电分子向其电荷相反的电极方向移动。在移动过程中,分子会受到介质粘滞力的阻碍。粘滞力(F’)的大小与分子大小、形状、电泳介质孔径大小以及缓冲液粘度等有关,并与带电分子的移动速度成正比,对于球状分子,F’的大小服从Stokes定律,即:

  • CNS_20.001_琼脂

    [align=center][font='times new roman'][size=24px]2021.0[/size][/font][font='times new roman'][size=24px]7[/size][/font][font='times new roman'][size=24px].[/size][/font][font='times new roman'][size=24px]29[/size][/font][/align][align=center][/align][align=center][font='黑体'][size=20px]琼脂[/size][/font][/align][align=center][font='times new roman']陈珺宁[/font][/align][align=center][font='times new roman'](厦门大学化学化工学院)[/font][/align][font='times new roman']摘要:[/font][font='times new roman']琼脂是一种从某些海藻萃取的亲水胶体,在人们日常生产生活的各个领域中有广泛的应用。琼脂可以改善食品的质构,提升食品的品质,并且没有任何毒性,成为一种重要的食品添加剂,在食品工业中可以作为增稠剂、凝固剂、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E6%82%AC%E6%B5%AE%E5%89%82][font='times new roman']悬浮剂[/font][/url][font='times new roman']、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%B3%E5%8C%96%E5%89%82][font='times new roman']乳化剂[/font][/url][font='times new roman']、保鲜剂和稳定剂等,被广泛应用。本文将对琼脂的理化性质、提取工艺与深加工、限量、标准、检测、应用等进行逐一介绍,有助于对该食品添加剂的了解。[/font][font='times new roman']关键词:[/font][font='times new roman']食品添加剂,琼脂,性质,提取,限量,[/font][font='times new roman']标准,检测,应用[/font][font='times new roman'][size=18px]0 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]引言[/size][/font][font='times new roman']琼脂([/font][font='times new roman']agar[/font][font='times new roman']),又称琼胶、洋菜、洋粉或冻粉等,根据中华人民共和国药典记载,琼脂系自石花莱[/font][font='times new roman']Gelidium amansii Lamx[/font][font='times new roman']或其他数种红藻类植物中浸出并经脱水干燥的粘[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url];按照美国药典定义,琼脂是一种从[/font][font='times new roman']Rhodophyceae[/font][font='times new roman']类的某些海藻萃取的亲水胶体。琼脂由琼脂糖和琼脂胶组成,是一种由半乳糖和半乳糖衍生物构成的长链形多糖。其中,半乳糖残基上不含硫酸基、甲氧基、丙酮酸基等基团,可发生凝胶化的长链中性多糖是琼脂糖;半乳糖残基上含有这些基团,不发生凝胶化的长链酸性多糖是琼脂胶[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman'][size=13px][1[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]2][/size][/font][font='times new roman'][size=18px]1 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]理化性质[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溶解性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂在水中的溶解度与温度呈一定的正相关。常温下,高纯度琼脂不溶于水、无机溶剂和有机溶剂,只微溶于乙醇胺和甲酰胺;加热条件下,琼脂可溶于水形成溶液。在[/font][font='times new roman']95~100℃[/font][font='times new roman']并间歇式搅拌条件下,或在[/font][font='times new roman']100~120℃[/font][font='times new roman']高压釜中,易制取[/font][font='times new roman']0~5% [/font][font='times new roman']琼脂溶液和用于铸模的[/font][font='times new roman']8~14% [/font][font='times new roman']琼脂溶液。琼脂也可在沸腾的低浓度乙醇([/font][font='times new roman']30~50%[/font][font='times new roman'])溶液中溶解。其他研究发现,琼脂可以溶解于多种溶剂。常温下,干琼脂可以吸水溶胀,其吸水率达[/font][font='times new roman']20[/font][font='times new roman']倍;加热至[/font][font='times new roman']95℃[/font][font='times new roman']可溶于水,极易分散形成中性溶胶,其中琼脂糖含量比例越大,凝胶强度越高。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]黏度[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂凝固能力强,黏度较低,其中石花莱琼脂具有极强凝固能力、低黏度,工业琼脂因在提取过程中受化学试剂破坏具有较低的黏度。琼脂水溶液(溶胶)的黏度受原料的种类和质量,提取和加工条件,琼脂浓度、温度、加入电解质种类等测量条件影响而不同。当[/font][font='times new roman']pH = 4.5~9[/font][font='times new roman']时[/font][font='times new roman'],黏度相对稳定;当[/font][font='times new roman']pH = 6.0~8.0[/font][font='times new roman']时,黏度受老化或离子强度影响有较小变化。开始凝胶化时,在温度一定的条件下,黏度随凝胶现象持续时间的延长而增大,最终形成凝胶。此外,琼脂溶液在高温、电解质、无机酸或酸性盐类等处理后,黏度明显下降。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]絮凝性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1][/size][/font][font='times new roman']琼脂溶液中加入[/font][font='times new roman']10[/font][font='times new roman']倍体积乙醇、[/font][font='times new roman']2-[/font][font='times new roman']丙醇或丙酮,可以定量从其水溶液中絮凝析出;也可以用饱和硫酸钙、硫酸铵或硫酸镁溶液,使琼脂溶液发生盐析。常温下,絮凝析出的琼脂能溶于水或其他溶剂,电解质浓度越大、絮凝温度越高越难溶解,但除非在体系中加入水,否则琼脂不会[/font][font='times new roman']发生凝胶化形成凝胶。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]凝胶性与滞后性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂具有凝胶性,即使琼脂溶液浓度低至[/font][font='times new roman']0.004%[/font][font='times new roman'],常温下仍能形成凝胶,不需要任何助凝剂。琼脂凝胶有许多物理化学特性:具有热可逆性;其熔化温度受琼脂凝胶浓度和平均分子量影响;凝胶强度受原料种类、化学环境(如浓度、离子强度及[/font][font='times new roman']pH[/font][font='times new roman']等)和提取方法等影响;具有优良的相容性,可与大多数多糖类树胶或蛋白质溶液互溶;放置过程中发生轻微且缓慢的老化。值得注意的是,在多糖类树胶中,只有琼脂的凝胶化温度低于其熔化温度。琼脂溶胶的凝固点在[/font][font='times new roman']32~43℃[/font][font='times new roman']之间,琼脂凝胶的熔点在[/font][font='times new roman']7[/font][font='times new roman']5~90℃[/font][font='times new roman']之间,熔点远高于凝固点被称为[/font][font='times new roman']“[/font][font='times new roman']滞后现象[/font][font='times new roman']”[/font][font='times new roman']。琼脂的许多用途基于其凝胶温度的高滞后性。[/font][font='times new roman']在相同浓度下,琼脂凝胶与其他可凝胶化的物质相比强度最大,其中低浓度凝胶可以保护分散体系、防止扩散作用和改善产品质地,高强度凝胶具有优良的弹性、强度、回复力、可逆性、相对透明性和相对渗透性等特性,均有一定的应用价值和市场前景。此外,琼脂凝胶存在较硬、易脆、粗糙、透明性较差和冷冻后脱水等缺点,但是可以通过与其他材料进行改善,比如与糊精、蔗糖等复合使用可以提高凝胶的强度,与卡拉胶复合使用可以提高弹性和柔软度,与明胶复合使[/font][font='times new roman']用可以提高凝胶的强度、透明度和黏弹性。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.5 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]非酸性降解与稳定性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂具有优良的稳定性,常温下很难降解,但大量黏度、衍射和凝胶强度实验与研究证明,在超声波、强[/font][font='times new roman']γ[/font][font='times new roman']射线辐射,及强烈搅拌和高温长时间处理后,琼脂的分子链发生断裂,导致琼脂分子量降低,部分理化性能恶化。此外,琼脂具有很强的抗酶解能力不会在人或动[/font][font='times new roman']物体内被酶解,绝大部分随排泄物排出体外。[/font][font='times new roman'][size=18px]2 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]提取与深加工[/size][/font][font='times new roman'][size=18px][4][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]琼脂提取工艺[/size][/font][font='times new roman']琼脂生产自石花莱[/font][font='times new roman']Gelidium amansii Lamx[/font][font='times new roman']或其他几种红海藻,在红海藻细胞壁中以碳水化合物(多[/font][font='times new roman']糖)的形式存在。[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']由于琼脂需求量的增加,琼脂提取工艺日益丰富和完善。目前,高温高压法、碱法、酶法辅助提取工艺应用较为广泛。[/font][font='times new roman']2.1.1 [/font][font='times new roman']高温高压法[/font][font='times new roman']高温高压法是琼脂提取的传统方法,主要流程为原料处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']浸泡[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']煮胶[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']过滤[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']冷却[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']脱水[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']干燥[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']粉碎[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']包装。该提取工艺简单,琼脂分子破坏较少,提取率较高,但凝胶强度较低。高温高压法提取琼脂一般适用于硫酸基含量较低的原料,如石花莱。[/font][font='times new roman']2.1.2 [/font][font='times new roman']碱法提取工艺[/font][font='times new roman']碱法工艺常见有低温高碱、中温高碱和高温稀碱3种[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']主要流程为原料处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']碱处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂洗[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']酸处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂洗[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂白[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂洗[/font][font='times new roman']→ [/font][font='times new roman']煮胶[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']过滤[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']冷却[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']脱水[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']干燥[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']粉碎[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']包装。中低温高碱法提取温度较低、生产工艺较易控制,但用碱量大、环境负担大、生产成本较高;高温稀碱法碱浓度较低,环境污染较小,但提取温度较高、生产工艺不易控制,且在高温条件下琼脂易被破坏,导致胶质流失、降低产率。目前,许多优化提取工艺条件的研究正在进行,以更好地利用碱法工艺提取琼脂。[/font][font='times new roman']2.1.3 [/font][font='times new roman']酶法辅助提取工艺[/font][font='times new roman']酶法辅助提取工艺是使用酶处理辅助碱法提取工艺,即利用纤维素酶在碱处理前或处理后作[/font][font='times new roman']用于藻体,加速破坏藻体的细胞壁,从而促进胶质溶出。酶法辅助提取工艺是对碱法提取琼脂的优化,可以提高琼脂的得率、凝胶强度,并且有效减少碱液和清洗水的用量,减轻环境负担。[/font][font='times new roman'][size=16px]2.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]琼脂深加工[/size][/font][font='times new roman']琼脂具有分子量大、溶解性差等缺点,对琼脂进行适当处理,可以扩大其应用范围。琼脂深加工主要集中在利用琼脂提取琼脂糖和通过降解琼脂制备琼胶寡糖。[/font][font='times new roman']2.2.1 [/font][font='times new roman']琼脂糖提取[/font][font='times new roman']琼脂糖是琼脂的重要组成成分,提取方法主要有碘化钠法、乙酰化法、聚乙二醇法、十[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']六烷基氯化吡啶法([/font][font='times new roman']CPC[/font][font='times new roman'])、二甲基亚砜法([/font][font='times new roman']DMSO[/font][font='times new roman'])、[/font][font='times new roman']EDTA – Na[/font][font='times new roman'][size=13px]2[/size][/font][font='times new roman']法、[/font][font='times new roman']DEAE - [/font][font='times new roman']纤维素法、硫酸铵法、磷酸钠法、尿素法等,目的都是将琼脂中的硫琼脂和琼脂糖分离,纯化琼脂糖。[/font][font='times new roman']2.2.2 [/font][font='times new roman']琼胶寡糖制备[/font][font='times new roman']琼胶寡糖一般是指[/font][font='times new roman']DP[/font][font='times new roman']([/font][font='times new roman']degree of polymerization[/font][font='times new roman'])为[/font][font='times new roman']2~10[/font][font='times new roman']的低聚糖[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']包括胶寡糖和新胶寡糖。琼胶寡糖具有重要的生理功能[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']在食品工业、医药工业、日用化工、生物工程等许多方面有广阔应用前景。[/font][font='times new roman'][size=13px][5] [/size][/font][font='times new roman']琼脂寡糖的制备方法主要有化学降解法和酶降解法,缪伏荣[/font][font='times new roman'][size=13px][5] [/size][/font][font='times new roman']和林坤城[/font][font='times new roman'][size=13px][4] [/size][/font][font='times new roman']等人对琼脂降解制备琼胶寡糖作出具体介绍。[/font][font='times new roman'][size=18px]3 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]限量[/size][/font][font='times new roman']根据食品标法查询网的查询结果[/font][font='times new roman'],未查明具体食品中琼脂的最大使用量,结果均为适量使用即可。[/font][font='times new roman'][size=18px]4 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]标准[/size][/font][font='times new roman'][size=18px][6][/size][/font][font='times new roman']根据中华人民共和国卫生部于[/font][font='times new roman']2010[/font][font='times new roman']年[/font][font='times new roman']12[/font][font='times new roman']月[/font][font='times new roman']21[/font][font='times new roman']日发布、于[/font][font='times new roman']2011[/font][font='times new roman']年[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']月[/font][font='times new roman']21[/font][font='times new roman']日实施的《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂(琼胶)[/font][font='times new roman'] GB 1975—2010[/font][font='times new roman']》的标准,对感官要求、理化指标、产品规格等技术要求作出详细规定。[/font][font='times new roman'][size=16px]4.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]感官要求[/size][/font][font='times new roman']根据《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂(琼胶)[/font][font='times new roman'] GB 1975—2010[/font][font='times new roman']》规定,琼脂具有类白色或淡黄色的色泽、呈均匀条状或粉状、无异味。[/font][font='times new roman'][size=16px]4.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]理化指标[/size][/font][font='times new roman']根据《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂(琼胶)[/font][font='times new roman'] GB [/font][font='times new roman']1975—2010[/font][font='times new roman']》规定,琼脂中水分([/font][font='times new roman']w%[/font][font='times new roman'])[/font][font='times new roman']≤22%[/font][font='times new roman'],灰分([/font][font='times new roman']w%[/font][font='times new roman'])[/font][font='times new roman']≤5%[/font][font='times new roman'],水不溶物([/font][font='times new roman']w%[/font][font='times new roman'])[/font][font='times new roman']≤1%[/font][font='times new roman'],重金属(以[/font][font='times new roman']Pb[/font][font='times new roman']计)[/font][font='times new roman']≤20%[/font][font='times new roman'],铅([/font][font='times new roman']Pb[/font][font='times new roman'])[/font][font='times new roman']≤5 mg/kg[/font][font='times new roman'],砷([/font][font='times new roman']As[/font][font='times new roman'])[/font][font='times new roman']≤3 mg/kg[/font][font='times new roman']。其中逐一理化指标的检验方法在[/font][font='times new roman']GB[/font][font='times new roman']中均有明确给出。[/font][font='times new roman'][size=16px]4.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]产品规格[/size][/font][font='times new roman']产品规格按凝胶强度不同划分,分为低强度、中强度、高强度、超高强度,即[/font][font='times new roman']20℃[/font][font='times new roman']下在[/font][font='times new roman']1.5%[/font][font='times new roman']琼脂溶液中,凝胶强度在[/font][font='times new roman']150~400 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为低强度,在[/font][font='times new roman']401~800 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为中强度,在[/font][font='times new roman']801~1200 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为高强度,[/font][font='times new roman']1200 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为超高强度。[/font][font='times new roman'][size=18px]5 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]检测[/size][/font][font='times new roman']《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂(琼胶)[/font][font='times new roman'] GB 1975—2010[/font][font='times new roman']》中规定了琼脂的鉴别试验方法和多种理化指标及凝胶强度的测定方法,本文中简述规定中提到的鉴别试验、淀粉试验、水不溶物以及凝胶强度测定的实验方法[/font][font='times new roman'][size=13px][6] [/size][/font][font='times new roman'],其余理化指标的检测方法在[/font][font='times new roman']GB[/font][font='times new roman']中均有明确给出。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]鉴别试验[/size][/font][font='times new roman']取试样[/font][font='times new roman']1g[/font][font='times new roman'],加水[/font][font='times new roman']65mL[/font][font='times new roman'],煮沸[/font][font='times new roman']10min[/font][font='times new roman'],不断搅拌,用热水补足水分,放冷至[/font][font='times new roman']32℃[/font][font='times new roman']~[/font][font='times new roman']39℃[/font][font='times new roman']即凝结成半透明有弹性的凝胶状物,再加热至[/font][font='times new roman']85℃[/font][font='times new roman']开始熔化;再取适量条状试样的碎片,浸入[/font][font='times new roman']0.01mol/L[/font][font='times new roman']碘溶液中数分钟,染成棕黑色,取出后加水浸泡后[/font][font='times new roman']渐变紫色。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]淀粉试验[/size][/font][font='times new roman']取[/font][font='times new roman']0.5g[/font][font='times new roman']试样,加水[/font][font='times new roman']100mL[/font][font='times new roman'],煮沸溶解后放冷,加[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']滴[/font][font='times new roman']0.05mol/L[/font][font='times new roman']碘溶液,不得显蓝色。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]水不溶物的测定[/size][/font][font='times new roman']称取试样约[/font][font='times new roman'] 1.5g[/font][font='times new roman'](称准至[/font][font='times new roman'] 0.001g[/font][font='times new roman'])于[/font][font='times new roman'] 500mL [/font][font='times new roman']烧杯中,加水至[/font][font='times new roman'] 200mL[/font][font='times new roman'],盖上表面皿,加热煮沸溶解(加热时注意搅动)。趁热用已干燥恒重(前后两次质量之差不大于[/font][font='times new roman'] 0.001g [/font][font='times new roman']为恒重,冷却操作时需严格保持冷却时间的统一)的砂芯坩埚减压过滤,并用热水充分洗涤烧杯和砂芯坩埚,然后将砂芯坩埚于[/font][font='times new roman']105℃±2℃[/font][font='times new roman']电热干燥箱内烘至恒重。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]凝胶强度的测定[/size][/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman'].4.1 [/font][font='times new roman']凝胶强度测定的原理[/font][font='times new roman']将试样制成一定浓度和体积的凝胶,用凝胶强度仪测定凝胶在[/font][font='times new roman']15s[/font][font='times new roman']~[/font][font='times new roman']20s[/font][font='times new roman']内的抗破砝码质量,根据温度换算系数,计算样品凝胶强度。[/font][font='times new roman']5.4.2 [/font][font='times new roman']凝胶强度的测定方法[/font][font='times new roman']制备琼脂凝胶试样,将其放在凝胶强度测定仪的试样座中心位置上,按凝胶强度测定仪说明书进行操作,移动手柄使砝码添加装置杆下端与凝胶表面接触,加大力度使凝胶的表面发生破裂(端点进入凝胶约[/font][font='times new roman']4mm[/font][font='times new roman']以上),记录此时凝胶强度值,同时,测量凝胶的温度。[/font][font='times new roman'][size=18px]6 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]应用[/size][/font][font='times new roman']琼脂因其独特的物理化学性质,在食品、医药、微生物学、实验室应用等许多方面具有广泛的应用。[/font][font='times new roman'][size=16px]6.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]食品[/size][/font][font='times new roman']琼脂具有凝固性和稳定性,在食品工业中可以作为增稠剂、凝固剂、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E6%82%AC%E6%B5%AE%E5%89%82][font='times new roman']悬浮剂[/font][/url][font='times new roman']、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%B3%E5%8C%96%E5%89%82][font='times new roman']乳化剂[/font][/url][font='times new roman']、保鲜剂和稳定剂等,被广泛用于制造各种糖果、果冻、饮料、冷饮、焙烤制品、速食食品和保健食品、禽类和肉类食品、肉制品、酿造行业等等。[/font][font='times new roman']6.1.1 [/font][font='times new roman']糖果[/font][font='times new roman']在糖果生产中,琼脂作为胶凝剂,主要用于制造软糖。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']琼脂凝胶软糖是大众的产品,深受广大消费者的青睐,如无花果等水果琼脂软糖或果汁软糖,价廉物美、销量可观。[/font][font='times new roman'][size=13px][1][/size][/font][font='times new roman']琼脂主要依靠其凝胶特点制作软糖,具有含水量高、透明、柔软、有弹性、货架期长的特点。[/font][font='times new roman'][size=13px][3] [/size][/font][font='times new roman']根据琼脂的凝胶能力[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']软糖中的琼脂用量一般在[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']%[/font][font='times new roman']~2.5[/font][font='times new roman']%,碳水化合物以蔗糖为主,[/font][font='times new roman']淀粉糖浆为辅,其比例约为[/font][font='times new roman']3[/font][font='宋体']∶[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']。用琼脂制造的软糖的透明度、品质及口感均优于其它软糖。琼脂虽然作为传统的凝胶物质在糖果制作中长久应用,但实践表明其口感特性比较单一。近年来也常添加明胶、变性淀粉、果汁[/font][font='times new roman']/[/font][font='times new roman']果泥或瓜果等,有助于糖果配合物料组成的多样性,有利于风味与口感的改进。[/font][font='times new roman'][size=13px][2[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]7][/size][/font][font='times new roman']6.1.2 [/font][font='times new roman']果冻[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']在果冻制造过程中添加琼脂,可为稳定剂和胶凝剂,使颗粒悬浮均匀、不沉淀、不分层。根据琼脂的胶凝能力,一般用量为[/font][font='times new roman'] 0.15[/font][font='times new roman']%[/font][font='times new roman']~0.3[/font][font='times new roman']%。[/font][font='times new roman'][size=13px][2][/size][/font][font='times new roman']6.1.3 [/font][font='times new roman']饮料[/font][font='times new roman']琼脂用在饮料类产品中可作为助悬剂,使饮料中固型物悬浮均匀、不下沉。其悬浮时间及保质期长,是其它助悬剂无法代替的,产品透明度、流动性会更好、口感爽滑无异味。在果粒饮料中表现出优异的悬浮效果,使用浓度为[/font][font='times new roman']0.001[/font][font='times new roman']%[/font][font='times new roman']~0.005[/font][font='times new roman']%即可使果粒悬浮均匀。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']6.1.4 [/font][font='times new roman']冷饮[/font][font='times new roman']琼脂用于冷饮食品,如冰棒、冰淇淋等各种冷冻制品,可减少冰晶,提高抗热融性,使产品更加爽口。在冰淇淋生产中,琼脂可改善冰淇淋的组织状态,提高冰淇淋的黏度和膨胀率,防止冰晶析出,使制品组织细腻轻滑,使用量为[/font][font='times new roman']0.3[/font][font='times new roman']%左右。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']琼脂与刺槐豆胶、[/font][font='times new roman']明胶相配合,在冷饮食品的质地和香味稳定性方面起到极优异的作用,并能防止脱水收缩和表面结皮。作为稳定剂的最佳浓度是:琼脂[/font][font='times new roman']0.12[/font][font='times new roman']%、刺槐豆胶[/font][font='times new roman']0.07[/font][font='times new roman']%、明胶[/font][font='times new roman']0.20[/font][font='times new roman']%。[/font][font='times new roman'][size=13px] [1][/size][/font][font='times new roman']6.1.5 [/font][font='times new roman']焙烤制品[/font][font='times new roman']琼脂可以作为一种略起粘结作用的添加剂,被广泛地用于多种焙烤食品中[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']如焙烤食品生产厂将琼脂用于曲奇饼、奶油夹心派的外壳、含果仁的果冻、馅饼或派的馅、糕饼甜心表层的酥皮、蛋白酥皮筒等。琼脂也可以作为保湿剂,也成功用于面包和糕饼甜心中防干燥。[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂还可以作为填充剂和膨松剂,可代替淀粉制造麦片糊、无淀粉面包和餐后点[/font][font='times new roman']心,制作为低热能食品,同时对面包和饼干也起到了保湿、保险的作用。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']在上述这些类型的产品中,琼脂使用的量约在[/font][font='times new roman']0.1[/font][font='times new roman']%~[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']%的范围内。[/font][font='times new roman'][size=13px][1][/size][/font][font='times new roman']6.1.6 [/font][font='times new roman']速食食品和保健食品[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂素食食品和保健食品中也有重要应用,例如它可以添加用于谷类食品(如麦片)、肉食代用品(如人造肉、素肉等)和素食者食用的甜食与点心中。[/font][font='times new roman']6.1.7 [/font][font='times new roman']禽类和肉类罐头[/font][font='times new roman']在禽类和肉类罐头中,琼脂作为胶冻剂和赋形剂,其用量可以是罐头中清汤的[/font][font='times new roman']0.5[/font][font='times new roman']%~[/font][font='times new roman']2.0[/font][font='times new roman']%,以消除罐头中食品组织发生脆碎。[/font][font='times new roman']6.1.8 [/font][font='times new roman']肉制品[/font][font='times new roman']琼脂作为肉制品的辅料,具[/font][font='times new roman']有提高肉制品的品质、保护其风味等特性。[/font][font='times new roman'][size=13px][3] [/size][/font][font='times new roman']琼脂用于灌制香肠、熏制或腓制肉制品,可明显保护其胶体以防止其风味散失。烹调的火腿可浇盖含有琼脂和抗坏血酸的溶液,包装以后,琼脂处理过的肉制品比未处理的和只用抗坏血酸单独处理的肉制品更能保持原有的风味。[/font][font='times new roman'][size=13px][2][/size][/font][font='times new roman']6.1.9 [/font][font='times new roman']酿造行业[/font][font='times new roman']琼脂在酿造行业,作为啤酒、酱油和食用醋的澄清剂以加速和改善产品澄清。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]医药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂可以广泛地用作轻泻剂,在人体肠中不会被消化,在充分水化的情况下,如同纤维素一样,起到增大排泄物体积和促进肠道蠕动的作用,并且无刺激性和可以达到润肠的效果。在放射科中,琼脂常作为钡餐中硫酸钡的悬浮剂。琼脂常常在缓释胶囊药物栓塞药、外科润滑剂,以及许多乳剂类型的药物中用作为起多种功能的添加剂。在药片中,琼脂用作为赋形剂和崩解剂。[/font][font='times new roman'][size=16px]6.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]微生物学[/size][/font][font='times new roman']琼脂在微生物学中获得了最有价值的应用。在低浓度下,琼脂即可阻止氧进入液体介质中,可以用于在暴露于空气中的营养肉汤进行厌氧菌的培养。在液体介质中使用的琼脂浓度通常在[/font][font='times new roman']0.007[/font][font='times new roman']%~[/font][font='times new roman']0.08[/font][font='times new roman']%。[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']在制作微生物的培养基的过程中,可以通过添加琼脂作为凝固剂来将[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E6%B6%B2%E4%BD%93%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA/8509492][font='times new roman']液体培养基[/font][/url][font='times new roman']转化为固体培养基或[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E5%8D%8A%E5%9B%BA%E4%BD%93%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA/3410252][font='times new roman']半固体培养基[/font][/url][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'][size=16px]6.4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]实验室应用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂可以提高颗粒度测量的精确度,可以对包含有固体颗粒的悬浮液的浓度进行测定,亚甲基蓝、甲苯胺蓝、硫堇和频那氰醇等染料可以通过琼脂的作用而发生可逆的聚合。蛋白质可以通过琼脂凝胶作电泳迁移,用于铁蛋白、卵清蛋白、血红蛋白和胃蛋白酶的解析。琼脂钠和琼脂铵、琼脂糖和琼脂糖钠在球蛋白电泳、免疫扩散诊断技术、凝胶过滤和分子大小排阻色谱等技术中是很有应用价值的。琼脂还能稳定胆固醇溶液。[/font][font='times new roman'][size=18px]7 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]总结与展望[/size][/font][font='times new roman']琼脂由琼脂糖和琼脂胶组成,是一种由半乳糖和半乳糖衍生物构成的长链形多糖,具有特殊的理化性质,并因此在食品、医药、微生物、实验室等均有广泛的应用。据不完全统计,目前没有明确规定琼脂的最大使用量,适量使用即可。食品安全国家标准对琼脂的感官要求、理化指标和产品规格等均作出详细规定,并给出了与琼脂相关的检测方法。琼脂产业的发展[/font][font='times new roman']具有重要的经济效益、社会效益和生态效益,同时还直接或间接地成为构建海洋渔业生态链和海洋渔业产业经济链不可或少的纽带。随着琼脂在食品工业的广泛应用,必将具有广阔的市场前景。[/font][font='times new roman'][size=13px][2][/size][/font][font='times new roman']参考文献:[/font][font='times new roman'][[/font][font='times new roman']1] [/font][font='times new roman']琼脂[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']明胶科学与技术[/font][font='times new roman'],2005(03):123-130.[/font][font='times new roman'][2] [/font][font='times new roman']李琴梅[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']戚勃[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼脂的物化特性及其在食品工业中的应用[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']中国食品添加剂[/font][font='times new roman'],2009(06):170-174.[/font][font='times new roman'][3] [/font][font='times new roman']宋雪健[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']王洪江[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']张东杰[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼脂在食品中的应用研究进展[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']现代农业科技[/font][font='times new roman'],2017(12):267-268+272.[/font][font='times new roman'][4] [/font][font='times new roman']林坤城[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼脂提取及深加工研究进展[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']福建农业科技[/font][font='times new roman'],2018(09):56-60.[/font][font='times new roman'][5] [/font][font='times new roman']缪伏荣[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']李忠荣[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼胶的降解及其产物的开发应用[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']现代农业科技[/font][font='times new roman'],2007(02):125+128.[/font][font='times new roman'][6] GB 1975-2010, [/font][font='times new roman']食品安全国家标准 食品添加剂 琼脂[/font][font='times new roman']([/font][font='times new roman']琼胶[/font][font='times new roman'])[s].[/s][/font][font='times new roman'][7] [/font][font='times new roman']朱肇阳[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']凝胶型糖果[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']第五部分[/font][font='times new roman']——[/font][font='times new roman']琼胶及琼胶软糖[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']食品工业[/font][font='times new roman'],1992(05):2-7.[/font]

  • 【资料】生物化学习题2

    二、 填空题(每小题2分,20分)1、 人体内最主要的含铁蛋白质是-----------------,正常人血液中含量最多的蛋白质是----------------。2、 磷酸戊糖代谢的主要生理意义是产生---------------和-------------------。3、 肽类激素作用的主要第二信使分子是------------------,它是由---------------酶催化而生成的。4、 DNA复制的方向是--------------------,蛋白质生物合成的方向是------------------。5、 各种tRNA分子的3末端均有一个共同的结构,是-------------------,这个臂的作用是----------------------。6、 人工合成的最主要的嘌呤类似物有------------------,嘧啶类似物-----------------,它们在临床上可用作抗癌药。7、 某一酶促反应的底物浓度相当于1/2Km,则此反应的初速度为-----------Vm。8、 写出下列英文缩写在生物化学中的中文含义,dNTP------------------------------,CAMP--------------。9、 在蛋白质生物合成过程中,携带转运氨基酸的核酸是 -----------------------,决定氨基酸排列顺序的是---------------------------------。10、脂肪酸β氧化的产物是-----------------------,细胞内进行此代谢反应的主要部位是---------------。四、名词解释(每题3分,15分) 1、限制性内切核酸酶 2、遗传信息传递中心法则 3、变构酶 4、蛋白质的亚基 5、密码子五、问答题(每题10分,20分)1、 简要解释糖尿病患者下述表现的生化机理。(1) 高血糖和糖尿(2) 酮症(3) 糖耐量曲线异常2、 简要说明缺乏叶酸和VitB12产生巨红细胞贫血的生化原因。

  • 生物化学实验中常用有毒物质的危害与防护

    1. DNA电泳与溴化乙锭“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验必开的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。1也。。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭(Ethidium bromide,EB)对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在学生实验中要特别注意其安全使用,严禁随便丢弃。在实验中使用及实验结束后处理应注意以下事项。1.1 使用中注意事项实验室涉及到EB的操作应统一固定在实验室的某一角落,称量固体时要带面罩和手套,使用含有EB的溶液务必带上手套。同时要告诉学生不要在胶太热的时候加EB,以防止因蒸发被吸入。接触到EB的玻璃器皿应集中放置并专门使用,污染到EB的枪头、抹布、手套及EB染色跑完的胶,回收至棕色的玻璃瓶中,定期进行焚烧处理旧o。桌面或物体表面污染到EB时,可用活性碳进行处理。1.2 废EB溶液处理(1)EB浓溶液(浓度大于0.5 mg/mI)的净化处理先将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5 mg/mI,加人1倍体积的5%次高锰酸钾,小心混匀后再加1倍体积的2.5 moL/L盐酸。小心混匀,于室温放置数小时;加入l倍体积的2.5 mol/L氢氧化钠,小心混匀后可丢弃该溶液,统一处理。(2)EB稀溶液(浓度小于0.5 mg/mI)的净化处理按1 mg/mL的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1 h;用whatman l号滤纸过滤溶液,丢弃滤液并将活性碳与滤纸密封后丢弃,统一处理。1.3 EB替代试剂现在已有替代EB的核酸染料,如sYBR Green核酸染料"1,它耐高温,可以在化胶时加入;Gold—ViewTM核酸染料使用方法与EB完全相同,在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。这些新型核酸染料虽然比EB毒性低,但价格高,灵敏度目前比不上EB,有条件的实验室可以考虑替代EB使用。2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳与有毒、有害物质聚丙烯酰胺凝胶电泳在生物化学实验中是常用的实验手段,涉及到蛋白质分离纯化及鉴定、蛋白质分子量及等电点测定的实验都会使用到该电泳方法,如“聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质”、“SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子量”、“聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点”等常开设的基础实验。在聚丙烯酰胺凝胶制备过程中用到以下有毒、有害物质:2.1 丙烯酰胺丙烯酰胺具有很强的神经毒性,同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化。实验还显示丙烯酰胺是一种可能致癌物。丙烯酰胺可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体,且累积毒性,不容易排毒。因此,称量固体丙烯酰胺粉末和处理它们的溶液时必须戴手套和口罩。当丙烯酰胺聚合为聚丙烯酰胺凝胶时则为无毒的,但操作时仍要小心,凝胶内可能有少量未聚合的丙烯酰胺。2.2 甲叉双丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺是丙烯酰胺形成凝胶的交联剂,因有取代基丙烯酰胺,因此具有一定的毒性,能轻微刺激眼睛、皮肤和粘膜。称量固体粉末和处理它们的溶液时需戴手套和口罩,应避免与人体长时间直接接触,误碰触时应用清水洗净。2.3 TEMEDTEMED是形成凝胶反应所用的加速剂,也具有强神经毒性,应防止误吸,操作时快速,存放时密封。2.4 过硫酸铵过硫酸铵是丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺进行化学聚合的引发剂,对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸人可致命。操作时需戴合适的手套、安全眼镜和面罩,始终在通风橱里操作,操作完后彻底洗手。2.5 十二烷基硫酸钠(SDS)SDS是·种阴离子表面活性剂,与蛋白形成复合物,用于测定蛋白质分子量。SDS有毒,是一种刺激物,能对眼睛造成严重损伤,可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。称量及配溶液时不要吸人其粉末,需戴合适的手套、面罩和护目镜。2.6 巯基乙醇它在测定蛋白质分子量时用于处理样品,吸入、摄人或经皮肤吸收后会中毒。其中毒表现有紫绀、呕吐、震颤、头痛、惊厥、昏迷,甚至死亡;对眼、皮肤有强烈刺激性;对环境有危害;对水体可造成污染。应在通风橱里操作,佩戴面罩,戴乳胶手套。3. RNA提取与有毒、有害溶剂“动物肝脏RNA的制备和纯度测定”是生物化学实验课中必开的基础实验,RNA的提取过程需要用到溶剂去除蛋白质,这些溶剂对人体具有一定的毒性。3.1 氯仿它对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用,是一种致癌剂,可损害肝和肾。它也易挥发,应避免吸入挥发的气体;操作时需戴合适的手套和安全眼镜并始终在化学通风橱里进行。3.2 异戊醇它被吸人、口服或经皮肤吸收有麻醉作用。其蒸气或雾对眼睛、皮肤、粘膜和呼吸道有刺激作用,可引起神经系统功能紊乱,长时间接触有麻醉作用。操作时应戴合适的手套和安全眼镜并始终在化学通风橱里进行。3.3 含水酚液它含有苯酚,对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用,可抑制中枢神经或损害肝、肾功能。吸人高浓度苯酚蒸气可致头痛、头晕、乏力、视物模糊、肺水肿等疾病。其慢性中毒可引起头痛、头晕、咳嗽、恶心、呕吐。称量苯酚时应佩戴防尘口罩,操作溶液时戴合 适的手套和安全眼镜,并始终在化学通风橱里进行。它一旦接触皮肤,立即用大量流动清水冲洗,至少15 min。实验结束后产生的含酚废液可加入次氯酸钠或漂白粉煮一下,使酚分解为二氧化碳和水,再进行排放。有机溶剂及实验废液等实验完成后应倒人盛放废液的容器中,然后统一回收,集中处理。4. 其它有毒、有害物质“氨基酸的分离与鉴定”也是生物化学中必开的基础实验,茚三酮是氨基酸的显色剂,一般是配成溶液在喷雾器中喷雾使用。茚三酮经消化道摄入和吸人都有害,对眼、呼吸系统和皮肤有刺激作用;皮肤反复接触能引起皮肤过敏。使用中应避免吸入雾滴或蒸气;避免与眼接触;使用橡胶或塑料手套、面罩以及护目镜。

  • 好书分享:生物化学仪器分析与实验技术

    书名:生物化学仪器分析与实验技术作者:周先碗, 胡晓倩编 出版社:化学工业出版社现代生物技术与医药科技出版中心 出版时间:2003内容提要: 本书共分7章,主要包括光谱、层析、电泳、免疫等常规分析技术,还包括蛋白质测序等一些超微分析技术以及生物化学技术中最常用到的离心和膜分离技术,体现了当今应用仪器进行生物化学分析最新成果。本书全面、系统地介绍了生物化学的仪器和实验技术两方面的内容,仪器部分主要介绍仪器的基本原理、构造、性能及用途;实验技术部分主要介绍实验的基本原理、方法、影响因素和结果分析等,并在每一节都列举了相应的实例。 本书为生物化学实用技术图书,可作为学习生物化学技术的在校本科生、研究生、进修教师的教材和参考书,也会对从事生物化学研究和实验的工作人员有所帮助。目录 第1章 光谱分析技术 1.1 基本理论 1.2 紫外-可见吸收光谱分析 1.3 分子发射光谱——荧光光度分析法 1.4 原子吸收光谱分析法 第2章 层析技术 2.1 基本理论 2.2 液相层析 2.3 吸附层析 2.4 离子交换层析 2.5 亲和层析技术 2.6 排阻层析 2.7 金属螯合层析 2.8 聚焦层析 2.9 疏水层析 2.10 灌注层析 第3章 蛋白质电泳技术 3.1 基本理论 3.2 净电荷聚丙烯酰胺凝胶电池 3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电池 3.4 等电聚焦电泳 3.5 双向电泳 3.6 蛋白质印迹 第4章 微量分析技术 4.1 高效液相色谱 4.2 高效毛细管电泳 4.3 蛋白质N末端氨基酸序列测定 4.4 蛋白质结晶技术第5章 免疫学技术 5.1 免疫学的基本概念 5.2 抗血清的制备 5.3 抗体的纯化 5.4 抗体的检测 5.5 酶联免疫吸附测定 第6章 离心技术 6.1 基本理论 6.2 离心机 6.3 离心技术 第7章 膜分离技术 7.1 过程技术 7.2 膜分离技术 7.4 超滤技术http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=8675491ybgr6jeljwliu1yo

  • 【资料】-沈同《生物化学》

    这是沈同老师的《生物化学》,从食品伙伴网下载的。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=16030]沈同《生物化学》[/url][em11]

  • 【分享】生物化学资料

    忘了是从哪儿得到的这个资料了,觉得还不错,发给大家,看看对大家有用不?![img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=98325]生物化学-上[/url][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=98327]生物化学-下[/url]

  • 生物化学课件求助!

    哪位朋友有生化课件?或者是分子生物学的课件、高级动物生物化学的课件啊?救急啊!先谢谢。可以发我邮箱:wjr9332@sohu.com

  • 【资料】环境光生物化学与生态效应

    [center]环境光生物化学与生态效应[/center][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=189604]环境光生物化学与生态效应.pdf[/url]

  • 【分享】生物化学家——曹天钦院士

    生物化学家——曹天钦院士曹天钦,中国生物化学家。生于1920年12月 5日,河北省束鹿县人。1944年毕业于燕京大学化学系,1946年赴英国剑桥大学留学,相继获学士及博士学位,并被选为英国剑桥大学冈维尔凯厄斯学院的荣誉院士。1952年回国。历任中国科学院上海生物化学研究所副研究员、研究员、室主任、副所长、中科院上海分院院长,中国科学院生物学部主任等职。他长期从事肌肉结构蛋白的研究,是肌球蛋白轻链的发现者。他还应用多种物理化学技术研究了原肌球蛋白和副肌球蛋白的性质以及各种肌肉蛋白在肌原纤维上的定位问题,并在原索动物文昌鱼中发现了副肌球蛋白。1973年他对中国马王堆一号汉墓古尸的保存状态和条件的研究,对生化考古学有一定贡献。他是中国最早在分子水平开展植物病毒的研究者之一。他对植物病毒和植物类菌质体(mycoplasma-like organism,MLO)、诊断和防治中国植物病毒病和黄化病等方面,均进行过较深入的研究。在蛋白质方面,他曾研究过胶原蛋白、神经系统蛋白、胰岛素、蛋白酶抑制剂等。1958年与几位青年科研人员一起,首先建议开展人工合成胰岛素的研究,并参加了领导工作。他在上述各研究领域中共发表论文101篇。他与李国豪等合编了《中国科技史探索》(1982)并主编了《中国科学评论生物卷》(1986)。他的“肌肉蛋白的研究”于1956年获生理生化研究所个人一等奖,中国科学院科学奖金;其“肌肉与肌肉蛋白的结构与功能的研究”于1978年获全国科学大会重大科技成果奖。他是上海市人大常委会副主任,中国科学技术协会副主席,中国生化学会第一、二、三届副理事长,并兼任第一、二届秘书长。国际科联理事会理事及执行局委员。1981年被选为中国科学院学部委员。1983年被选为瑞典皇家工程学院外籍院士。

  • 【转帖】W王应睐——中国生物化学的奠基人之一

    【转帖】W王应睐——中国生物化学的奠基人之一

    [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/05/200705101702_51340_1634962_3.jpg[/img]王应睐,生物化学家。半个世纪以来,在营养、维生素、血红蛋白、酶以及物质代谢等方面取得了一系列重要成果。在担任中国科学院生物化学研究所所长和中国生物化学学会理事长期间,对研究所的建设和学会的发展发挥了重要作用。在完成世界上首次人工合成结晶牛胰岛素和人工合成酵母丙氨酸转移核糖核酸的重大研究成果中,担任首席领导工作。为发展中国生化事业作出了杰出的贡献。 王应睐,1907年11月13日诞生在福建省金门县一个华侨家庭。他2岁丧父,6岁丧母,童年是相当辛酸的,但这却在一定程度上促使他养成坚强、发奋的秉性。在兄嫂的扶养下,他先在私塾读书,以后进入鼓浪屿著名的英华书院上学。由于他的聪颖与努力,6年半就读完了9年的课程,于1925年提前毕业。接着先后进入福建协和大学和南京金陵大学攻读化学,1929年以优异的成绩毕业,并获得学校颁发的“金钥匙”奖。   大学毕业后王应睐在金陵大学任助教。可是生活并不是一帆风顺的,1931年他得了肺结核,休养了2年。在治病的期间,王应睐从不忘读书。1933年,他进了北平燕京大学化学研究生院,从事氯仿、甲苯对蛋白酶的作用以及豆浆与牛奶消化率的比较等研究。1934年他再一次病倒,被迫休养。1936年病刚痊愈,就接受金陵大学的聘请担任讲师。这期间他还深入农村分析农民的膳食构成。1937年抗日战争爆发后他回到鼓浪屿。以后他考取庚款留英,于1938年到英国剑桥大学攻读博士研究生。在L.J.海里斯博士(Harris)指导下从事维生素研究。这是30年代生物化学领域中最前沿的一个方向。为了更好地了解维生素在新陈代谢中的作用以及维生素本身的新陈代谢,就需要有一个方便、准确、微量与专一的测定方法。王应睐选择了这方面作为自己的研究目标。他所建立的维生素B1的硫色素荧光测定法,能够简便准确地测定食品以及尿等生物样品中的维生素B1含量,对于缺少精密仪器的实验室起了重要的作用。这个方法在问世时也曾遇到一些权威的怀疑,认为过于简单,担心它不可靠。英国医学委员会维生素小组很注意王应睐创造的方法,决定组织一次对比测试,分别由牛津大学彼德斯教授实验室与王应睐分别应用各自的方法来进行维生B1含量的测定。对比的结果明显地表明了王应睐方法的优越性。在这个阶段,王应睐还建立了其它B族维生素的测定法以及维生素C的电位滴定法。后一个方法可以准确地测定在有颜色的组织抽提液中维生素C的含量。由于王应睐的成绩卓然,他在研究生毕业时,获得了免试的待遇,并于1941年得到生化博士学位。   1941年王应睐受聘于剑桥大学Dunn营养实验室,继续从事维生素研究。他和Moore在国际上首先发现合成的纯维生素A过量时有毒性,在英国生物化学杂志上发表了题为“维生素A过多症”一文,引起各国学者的重视。   为了扩大自己的生化研究能力与视野,1943年王应睐到剑桥大学Molteno研究所,在国际著名生化学家D.凯林教授(Keilin)领导下工作,对血红蛋白的研究取得了突出的成果。王应睐提供完整的实验证据,证明豆科植物根瘤中含有血红蛋白。这一发现有助于从生物化学的角度来解释生物进化学说,并且促进了对豆血红蛋白在根瘤固氮中的作用的深入研究。王应睐还提纯与结晶了寄生在马胃的马蝇蛆的血红蛋白,并且研究了它的性质,阐明了在不同生活条件下血红蛋白的性质与功能的关系。这项工作也具有重要的理论价值。王应睐的上述成就得到凯林教授的高度评价,并一直为国外同行所引述。   1945年第二次世界大战胜利结束。王应睐十分兴奋,他谢绝了凯林教授的再三挽留,决定立即回国。凯林教授十分赞赏王应睐的爱国精神。当时交通尚未完全正常,王应睐乘船取道印度回国,被南京中央大学医学院聘请为生化教授。   在国民政府统治下的中国,官吏贪污腐化,民不聊生,科学研究不被重视,就是在中央大学也缺乏实验条件。王应睐一面授课,一面研究维生素与代谢,但是困难重重,他的聪明才智得不到应有的发挥。1948年他离开中央大学到上海的中央研究院医学研究所筹备处担任研究员。1950年中国科学院生理生化研究所成立,王应睐担任该所的研究员兼副所长,1955年被聘为中国科学院学部委员。1958年王应睐光荣地加入了中国共产党,同年被任命为中国科学院生物化学研究所所长。1984年春天,王应睐担任上海生物化学研究所名誉所长。他十分尊重并全力支持新任所长的工作。他是中国《生物化学与生物物理学报》的名誉主编,经常帮助审阅英文版稿件。他还担任了中国科学院上海生物工程基地专家委员会主任,为基地筹建提供了许多宝贵的意见。   1961—1966年,王应睐担任上海生化学会理事会主席;1979—1987年任中国生化学会理事长,1987年后任名誉理理长。他还曾担任过第三、五、六届全国人大代表。   1987年,在王应睐的积极倡导下,召开了由中国生物化学学会组织的国际生化会议(IMB)。王应睐作为会议的主席,在确定大会报告人,邀请国外学者参加等工作中起了主导作用。IMB取得完全的成功为中国生物化学界赢得了荣誉,这是与王应睐的辛勤努力分不开的,作为国际上知名的科学家,他1981年当选为比利时皇家科学文学与美术院外籍院士,1986年12月获匈牙利科学院名誉院士称号,1988年12月又当选为捷克斯洛伐克科学院外籍院士。   1985年春节前夕,中国科学院上海分院隆重举行“老科学家从事科学工作50年”表彰庆贺活动,向中国科学院上海各研究所20位驰名科坛,功绩卓越的老科学家致以热烈祝贺和崇高敬意。人们以“中国生化先驱”赞誉王应睐。会上王应睐即席发言,他引用“往者不可谏,来者犹可追”的格言自勉,表达了他耄耄之年,壮心不已,为发展中国生化事业矢志不渝的一片赤诚。

  • 中国生物化学与分子生物学会第十一届会员代表大会

    中国生物化学与分子生物学会第十一届会员代表大会

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409091610_513261_271_3.png8月21-23日,中国生物化学与分子生物学会第十一次会员代表大会暨2014年全国学术会议在厦门国际会议中心拉开帷幕。此次会议由中国生物化学与分子生物学会主办,厦门市生物化学与分子生物学学会、厦门大学生命科学学院、细胞应激生物学国家重点实验室、中科院上海生科院生化与细胞研究所、厦门市科学技术协会共同承办。中国生物化学与分子生物学会会员代表大会是我国生化领域最重要的会议之一,本届大会参会代表2000余人。与会专家以“动态生物化学”为主题,围绕蛋白质的动态复合物和结构功能、能量代谢的动态平衡、蛋白质翻译后的动态修饰与功能效应、功能蛋白质的亚细胞动态分布、核酸的动态修饰与基因表达调控、动态糖修饰与功能、靶分子药物筛选与作用机制、生物化学教育等8个热点话题展开讨论。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409091609_513259_271_3.jpg上图为大会现场RAININ参加了此次大会,会议现场进行了样机展示与演示,带来了全新款的Pipet-Lite XLS+及E4 XLS+产品。Pipet-Lite XLS+具有最出色的性能,其舒适手柄、轻质弹簧与“磁辅™”技术可确保轻松顺畅的操作,并可极大地减小出现重复性肌肉劳损的危险性。E4 XLS+ 可根据工作要求,轻松进行简单或复杂配置。其彩色大屏幕、操纵杆控制和图形界面可轻松便捷地实现功能切换和移液器操作。不仅每个 E4 XLS 功能都高度可定制,而且可以存储多种程序以供日后使用。移液器设置、协议和服务警报可以通过密码进行保护,以符合 GLP/ GMP 认证的规定。而且,GLP 数据,如服务记录、循环和状态数据等,可完全防篡改。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409091610_513262_271_3.jpg上图为RAININ展位,支持人员:广办销售主管耿显华、销售黄丽RAININ在现场还进行了抽奖活动,即在关注MT-LAB官方微信并留下完整反馈信息的用户中随机抽取30名幸运粉丝,赠送RAININ限量版小马公仔,可爱呆萌的RAININ小马引来关注无数,活动现场反响热烈!http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409091611_513263_271_3.jpg上图为正在体验RAININ产品的参会者

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