普可那利标准品

[align=center][b]GB 5009.28-2016食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定[/b][/align][align=center][b] ——标准品与乳品实际样品的分析[/b][/align][align=center][/align][align=left]本实验按照《GB5009.28-2016 食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》方法，分别对安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的标准品混合溶液及加标乳品样品进行了分析。首先，使用CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] MG S5 4.6 mm i.d. × 150mm色谱柱，对标准品混合溶液进行分析，如图1，安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准品均得到了良好的分析结果。[/align][align=left][/align][align=center][img=,611,268]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221532276656_9890_2222981_3.png!w611x268.jpg[/img][/align][align=center]图1 标准品混合溶液分析色谱图[/align][img=,400,200]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221532280132_6863_2222981_3.png!w400x200.jpg[/img][align=left][/align][align=left]其次，对乳品加标样品进行分析，如图2，糖精钠（Rt 12 min）与其后杂质峰之间未能取得基线分离，分离度仅为1.02。[/align][align=left][/align][align=center][img=,668,335]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221533054905_2223_2222981_3.png!w668x335.jpg[/img][/align][align=center]图2 加标乳品样品分析色谱图[/align][align=left][img=,406,203]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221533317202_2333_2222981_3.png!w406x203.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left]为改善糖精钠与杂质间的分离，在国标方法基础上，将流动相由[b]乙酸铵 / 甲醇 = 95 / 5[/b]调整为[b][b]乙酸铵 / 甲醇[/b][color=red]（[/color][color=red]2 mmol/L [/color][color=red]甲酸）[/color]= 92 / 8[/b]，再次对混合标准溶液和加标样品进行分析，结果如图3所示。[/align][align=left][/align][align=center][img=,690,545]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221534141056_4073_2222981_3.png!w690x545.jpg[/img][/align][align=center]图3 混标与加标乳品样品分析色谱图[/align][align=left][img=,464,171]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221535548985_7176_2222981_3.png!w464x171.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left]如图3，在酸性条件下，出峰顺序发生了变化，安赛蜜保留时间略有缩短，糖精钠保留时间明显缩短，由12 min缩短至8 min，苯甲酸和山梨酸保留时间分别延长至2 min和6 min；在分离度方面，糖精钠与苯甲酸之间分离度为2.79，苯甲酸与峰后杂质间分离度为2.04，所有色谱峰之间都达到了基线分离。[/align][align=left][/align][align=left]为使客户有更多选择，实验室又在国标原方法条件下继续筛选色谱柱，最终使用SUPERIOREX ODS S5 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱时，仅微调有机相比例即可实现加标乳品样品的良好分析结果。如图4，杂质峰与糖精钠之间分离度达到2.48，达到基线分离要求。[/align][align=left][/align][align=center][img=,580,332]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221537130173_1058_2222981_3.png!w580x332.jpg[/img][/align][align=center]图4 加标乳品样品分析色谱图[/align][align=left]*注：峰上标所示数字由下至上依次为分离度与不对称因子。[/align][align=left][img=,326,177]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221537540634_9437_2222981_3.png!w326x177.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left]综上所述，按照国标《GB 5009.28-2016 食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》方法进行分析，使用CAPCELL PAK C[sub]18 [/sub]MG色谱柱对标准品混合溶液能得到良好分析结果，但在对加标乳品样品进行分析时，糖精钠与样品中的杂质未能实现基线分离，通过在流动相中添加甲酸可实现安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸及杂质的基线分离；另一方面，使用SUPERIOREX ODS色谱柱，在原条件基础上微调即可实现乳品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及杂质间的良好分离。[/align]

[align=center][b] 食品安全国家标准 食品中钾 钠的测定方法学验证[/b][/align][align=center] [b]GB 5009.91-2017(第一法)[/b][/align][align=center][b]王帅[/b][/align]一、方法概述[b]1 范围[/b] 本标准规定了GB 5009.911-2017食品中钾 钠含量测定的第一法（火焰[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]法）；本标准适用于食品中钾 钠含量的测定。[b]2 规范性文件[/b] 本方法依据GB 5009.91-2017食品中钾 钠含量测定的第一法（火焰[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]法）。[b]3 原理[/b] 试样经消解处理后,注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱仪[/color][/url]中,火焰原子化后钾、钠分别吸收766.5nm、589.0nm 共振线,在一定浓度范围内,其吸收值与钾、钠含量成正比,与标准系列比较定量二、仪器与试剂 1.仪器注:所有玻璃器皿及聚四氟乙烯消解内罐均需硝酸溶液(1+5)浸泡过夜,用自来水反复冲洗,最后用水冲洗干净。1.1 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱仪[/color][/url]:配火焰原子化器,钾 钠空心阴极灯。1.2 分析天平:感量为1mg和0.1mg。1.3 可调式电热炉。1.4 微波消解系统:配聚四氟乙烯消解内罐。以上仪器符合国标要求[b]2. 试剂[/b]2.1 硝酸（HNO[sub]3[/sub])：优级纯 [color=#0000ff]（来源：江苏晶瑞 批号： 20180303 )[/color]2.2 氯化铯( CsCl )以上试剂符合国标要求[b]3. 标准溶液配制[/b]3.1 钾、钠标准储备液：钾[color=#0000ff]标准品（1000mg/L）：来源：国家有色金属及电子材料分析测试中心 批号：181001-2；钠标准品（1000mg/L）：来源：国家有色金属及电子材料分析测试中心 批号：166003-2[/color]3.4.2 钾、钠标准工作液(100mg/L):准确吸取10.0mL钾或钠标准储备溶液于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,贮存于聚乙烯瓶中,4℃保存。3.4.3 钾、钠标准系列工作液:准确吸取0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL钾钠标准工作液于100mL容量瓶中,加氯化铯溶液4mL,用水定容至刻度,混匀。此标准系列工作液中钾钠质量浓度分别为0mg/L、0.500mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L、5.00mg/L三、样品的采集与保存1.1在采样和制备过程中应注意不使试样污染1.2样品去除杂物后粉碎均匀，装入洁净聚乙烯瓶中，密封保存备用。四、样品处理1、标准曲线的绘制1.1 仪器条件：空气-乙炔火焰,波长钾766.49nm,钠589.00nm 狭缝0.4nm,灯电流2.0mA1.2 标准曲线绘制：仪器预热稳定后，分别将钾、钠标准系列工作液注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱仪[/color][/url]中,测定吸光度值,以标准工作液的浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线以钾，钠浓度（C）为横坐标，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]强度（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：见下图：钾[align=center][img=,476,336]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807281457193852_1085_2904018_3.png!w476x336.jpg[/img] [/align]钠[align=center][img=,469,330]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807281457501592_4273_2904018_3.png!w469x330.jpg[/img][/align]2.样品的处理 微波消解称取固体试样 0.2g~0. 8g (精确至 0. 001g )或准确移取液体试样 0. 500mL~3. 00mL 于微波消解罐中,加入 5mL 硝酸,按照微波消解的操作步骤消解试样,消解条件可参考（90℃2min-120℃5min-140℃2min-190℃20min） 。冷却后取出消解罐,在可调式电热炉于 140℃~160℃ 赶酸至 0.5mL~1mL 。消解罐放冷后,将消化液转移至 25mL 容量瓶中,用少量水洗涤消解罐 2~3 次,合并洗涤液于容量瓶中并用水定容至刻度,混匀备用。同时做试剂空白试验五、结果处理试样钾、钠含量按下式进行计算。[align=center][img=,169,41]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807281458340702_4687_2904018_3.png!w169x41.jpg[/img][/align]式中：X—样品的被测元素含量，mg/100g或mg/100mL；[i]ρ[/i]—测定液中元素的质量浓度，mg/L；[i]ρ[/i][sub]0 [/sub]—空白消化液中元素的质量浓度，mg/L；[i]f-[/i]稀释倍数V—试样消化液定容体积，mL；m—被测试样质量或移取体积，g或mL；1000、100—换算系数计算结果保留三位有效数字。六、[color=#0000ff]方法检出限[/color]重复测定7次空白值1、 空白值测定结果：钾[table][tr][td][align=center]编 号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][td][align=center]7[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]测定结果[/align][/td][td]0.004[/td][td][align=center]0.003[/align][/td][td][align=center]0.003[/align][/td][td][align=center]0.003[/align][/td][td][align=center]0.003[/align][/td][td][align=center]0.004[/align][/td][td][align=center]0.004[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]标准偏差[/align][/td][td=7,1] 0.000377964[/td][/tr][tr][td][align=center]检出限mg/100g [/align][/td][td=7,1] 0.12[/td][/tr][/table]本方法钾的检出限为 0.12mg/100g，小于国标中给出的最低检出浓度0.2mg/100g，符合要求。钠[table][tr][td][align=center]编 号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][td][align=center]7[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]测定结果[/align][/td][td]0.003 [/td][td]0.003 [/td][td][align=center]0.003 [/align][/td][td][align=center]0.003 [/align][/td][td][align=center]0.003 [/align][/td][td]0.004 [/td][td][align=center]0.003 [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]标准偏差[/align][/td][td=7,1] 0.000377964[/td][/tr][tr][td][align=center]检出限mg/100g [/align][/td][td=7,1] 0.1[/td][/tr][/table]本方法钠的检出限为 0.1mg/100g，小于国标中给出的最低检出浓度0.8mg/100g，符合要求。七、[color=#0000ff]方法精密度[/color]对六组样品进行测定，测定结果如下：钾[table][tr][td][align=center]测定编号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center] [/align][align=center]样品含量mg/kg[/align][/td][td]205.131[/td][td][align=center]209.302 [/align][align=center] [/align][align=center] [/align][/td][td][align=center] [/align][align=center]204.805 [/align][align=center] [/align][align=center] [/align][/td][td][align=center] [/align][align=center]205.988 [/align][align=center] [/align][align=center] [/align][/td][td][align=center] [/align][align=center]209.718 [/align][align=center] [/align][/td][td][align=center] [/align][align=center]205.460 [/align][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]平均值mg/kg[/align][/td][td=6,1][align=center]207[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]标准偏差%[/align][/td][td=6,1][align=center]2.2[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]相对标准偏差%[/align][/td][td=6,1][align=center]1.1%[/align][/td][/tr][/table]本方法钾的精密度为1.1% ，符合GB/T 27404-2008中给出的小于5.3%精密度要求。钠[table][tr][td][align=center]测定编号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center] [/align][align=center]样品含量mg/kg[/align][/td][td]193.737 [/td][td][align=center] [/align][align=center]189.700 [/align][/td][td][align=center] [/align][align=center]193.429 [/align][align=center] [/align][align=center] [/align][/td][td][align=center] [/align][align=center]192.434 [/align][align=center] [/align][/td][td][align=center] [/align][align=center]200.593 [/align][align=center] [/align][/td][td][align=center] [/align][align=center]191.940 [/align][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]平均值mg/kg[/align][/td][td=6,1][align=center]194[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]标准偏差%[/align][/td][td=6,1][align=center]3.69[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]相对标准偏差%[/align][/td][td=6,1][align=center]1.9%[/align][/td][/tr][/table]本方法钠的精密度为1.9% ，符合GB/T 27404-2008中给出的小于5.3%精密度要求。[color=#0000ff]八、[/color][color=#0000ff]准确度验证[/color]另给三个样品中分别加入钾标准品[color=#0000ff]35ug、50ug、140ug[/color]，测定，加标回收率见下表[table][tr][td][align=center]测定编号[/align][/td][td][align=center] 1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][/tr][tr][td]加标测量值mg/kg[/td][td] 298.957 [/td][td] 404.518 [/td][td] 587.327 [/td][/tr][tr][td][align=center]加标回收率%[/align][/td][td][align=center]98.8[/align][/td][td][align=center]100[/align][/td][td][align=center]97.6[/align][/td][/tr][/table]由上表可以看[color=#0000ff]出钾的加标回收率在95%-105%之间,符合[/color]GB/T 27404-2008[color=#0000ff]要求。[/color]分别加入钠标准品[color=#0000ff]26ug、45ug、125ug[/color]，测定，加标回收率见下表[table][tr][td][align=center]测定编号[/align][/td][td][align=center] 1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][/tr][tr][td]加标测量值mg/kg[/td][td] 264.944 [/td][td] 375.596 [/td][td] 543.458 [/td][/tr][tr][td][align=center]加标回收率%[/align][/td][td][align=center]103[/align][/td][td][align=center]102[/align][/td][td][align=center]100[/align][/td][/tr][/table]由上表可以看[color=#0000ff]出钠的加标回收率在95%-105%之间,符合[/color]GB/T 27404-2008[color=#0000ff]要求。[/color][color=#0000ff] [/color]九、[color=#0000ff]总结[/color]通过对《食品安全国家标准 食品中钾 钠的测定》 GB 5009.91-2017(第一法)[color=#0000ff]的检出限[/color]、精密度和准确度的评价，本方法数据准确，结果可信，可用于食品中钾 钠的测定。

在分析技术的园地里发现许多朋友提到有关标准品的各种问题。其实我想主要的就是很少有人把这个题目讲解的透彻一点，让大家都能够一次彻底了解。自己在美国工作了30余年，也一直在分析的领域上，所以决定花时间把它写下来与大家共享。也算是抛砖引玉，能够给大家一个思考的机会，同时大家也互相交流，相得益彰。闲话少说，言归正传。分析的方法分成两种，一种就是绝对的方法，是不需要标准品，当然使用这种方法必须使用相当纯度的化合物。分析的方法譬如元素分析，DSC，NMR， 滴定，电化学等等，这些方法都可以用来决定化合物的纯度。如何取得相当纯度的化合物，一般我们就用色谱，首先肯定色谱的纯度（其实是均匀度homogeneity)，当然在注射相当量的前提下（要能察觉到0.1％的杂质），只能看见一个主峰，也就是说均匀度接近100％（根据峰面积计算）。此时我们拿这个接近100％均匀度的化合物来定性，我们必须确认其专有性（specificity,属性）的存在，然后再定量得出此化合物的纯度。这里说的纯度是指化学组成分而言(composition)。因为这些方法没有办法测出金属盐类，或非金属盐类。因此我们要有另外的方法来决定离子的存在与其含量。当然还有其它成分如水分，有机溶剂等等。当我们把所有的成分定出来之后，总和就是我们这个化合物的组成成分。有了这些数据，自然我们可以求得物质平衡。所以，任何标准品的订定都必须经过这个程序。另外一种分析的方法就是相对的方法。顾名思义，就是需要标准品来对比。除了上述的绝对的方法外，其它的方法都是相对的。看看我们做色谱，就是一个最好的例子。我们需要标准品来定性及定量我们所要分析的样品。我以前曾经开发过新药（New Molecular Entity)，标准品就需要自己来定了。经过色谱的分离，纯化干燥后，进行了如上段所叙述的定性，定量工作，我们取得了化学纯度。这个标准品，我们把它叫做原始标准品(primaryreference standard)。如果说化学纯度是95％，也就是说每次我秤了1毫克，里面含有此化合物0.95毫克。因为这种原始标准品，制备很繁杂而且获得的量也不大（在一定时间内），所以没有必要每次都使用这种原始标准品来进行色谱或其它相对分析方法分析样品。因此我们可以拿我们的化学原料药（一般就是工艺开发后的产品）来订为二级标准品（secondaryreference standard)。有人把它说成工作标准品，其实是有商酌余地的。工作标准品也可以是原始标准品，我们不需费力，可以采购而来。我们所要的做的工作，就是把这个二级标准品做色谱分析，然后用原始标准品来做工作标准品，完成定性，定量。如此，我们可以根据峰面积，及原始标准品的相应比(responsefactor = peak area / concentration)求出二级标准品的含量。以后我们做色谱的时候，就可以把这个订好的二级标准品拿来做我们的工作标准品来分析我们的样品。前面提到原始标准品的由来。可以自己定，当然也可以购买。在美国就是美国药典(USP)，它不是一个官方机构。但是只要有官方承认的标准品，自然就去买，不管贵贱。如果太贵，那就买一次，然后用来做原始标准品，定出我们自己的二级标准品。一般美国药典的标准品都有规定干燥的程序。在执行干燥完成后，如果没有表明纯度，那就是100％。当下一个批次原始标准品发行的时候，前一批次自动失效。也就是有效期完全看新的批次何时出现。这样也避免了稳定性的考察。当然我们可以拿这个原始标准，来考察我们二级标准品的稳定性。国内的情形我不太清楚，我相信只要官方机构认可的标准品，都可以直接使用的。一般最常用的化学原料药的美国药典标准品，200毫克在200美元左右。如果我们使用微量天平，每次用量1.000毫克，那就可以每次使用原始标准品来做色谱，就避免再去设定二级标准品的麻烦了。另外我想大家都知道，当我们定量的时候，同一个标准品，我们必须秤两次，配置两个不同浓度的工作液。这样可以确认两个工作液是否配置正确。关于到底应该进样几针。我一向的做法就是第一个进样六针，做为系统适应度(system suitability)的检查，其它的任何样品，一律三针。有的人说两针就可以了。我要提醒的是两点决定一条线，得出的统计结论那是数学公式计算出来的。三点才能决定一个面，也就是高斯的分配图(GaussianDistribution)。所以至少在统计学上三点比两点得出的结果要好。又有人说了，如果我一个样品，要走60分钟，那不是完蛋了。首先，是否有必要要走60分钟。我认为最理想的方法是在30－45分钟（当然看功力了），这是指对杂质的分析，必须走梯度。我曾经用5厘米的柱子，梯度，30分钟分出17个化合物，包刮两个主要成分，两个抗氧剂，其它的就是杂质，分解物。如果走等梯度，一般是不超过10分钟为原则。这样就没有问题了。如果真的要走60分钟，那就必须选择好的仪器。并不是所有HPLC的仪器都可以无忧的走完全部样品。当然，柱子也十分重要。扯远了，以后有时间再分开来讨论。