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溶血卵磷脂标准品

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溶血卵磷脂标准品相关的论坛

  • 谁有蛋黄卵磷脂含量的图谱

    各位好:请问谁做过蛋黄卵磷脂含量测定?我需要含量图谱,(磷脂酰乙醇胺,磷脂酰肌醇,溶血磷脂酰乙醇胺,磷脂酰胆碱,鞘磷脂,溶血磷脂酰胆碱)共六种物质。谢谢!

  • 化妆品中卵磷脂的测定方法

    化妆品中卵磷脂的测定方法卵磷脂为黄色到棕色半透明蜡状物。具有吸湿性,在空气中色变深,能溶于醇、醚等,在任何pH下均以两性离子状态存在,所以具有表面活性作用。卵磷脂广泛用作化妆品的乳化剂及颜料的悬浮剂。(一)钼蓝定性法1 适用范围本方法适用于化妆品中卵磷脂的测定。2 原理(1)卵磷脂通过层析柱与无机磷和油类杂质等分离后,将卵磷脂无机化,用钼蓝法测定其中的无机磷。3 试剂3.1 硅胶(SiO2·χH2O):100目,层析用。3.2 二氨基酚溶液:称取1g2,4-二氨基酚(2,4-Diaminophenol Dihydrochloride)盐酸盐及30g亚硫酸氢钠溶于水中,并稀释至100ml,过滤,保存于暗处,可使用一周。3.3 8.3%钼酸铵溶液:称取8.3g钼酸铵溶于14ml水和6ml氨水的混合溶液中,并加水至100ml。3.4 1%氯化胆硷标准溶液:取0.1g氯化胆硷,加水至10ml。3.5 显色剂:取1ml10%氯铂酸(H2PtCl6)加25ml4%KI溶液,混匀,并加水至50ml。4 仪器层析柱:内径20mm、长110mm附有刻度的玻璃管,底部有No.1半熔玻板及活栓,并联接减压瓶及减压泵。5 分析步骤5.1 样品预处理取5g样品于水浴上加热融化,加20ml氯仿+甲苯(4+1),加温溶解。取2g硅胶于层析管中,于硅胶上复盖少量玻璃棉,用10m1石油醚淋洗柱子。待石油醚几乎全部流出时,将上述氯仿-甲苯样品溶液乘热过柱,调节活栓及减压泵,使溶液流出量保持在4~6ml/min。继续以20ml、20ml、10ml分次淋洗柱内残存油分。

  • 蛋黄油卵磷脂

    我用钼篮比色法测试蛋黄油中的卵磷脂,蛋黄油的颜色一直是呈现绿色,跟标准品的颜色不太一样,不是蓝色,我做了两次都是一样,有没有做过的大神,这个现象对吗?好奇怪啊[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/04/202104131523482895_1475_3878797_3.png[/img]

  • 溶血磷脂检测

    有谁做过溶血磷脂酰胆碱的 脂肪酸链是不饱和的 用高效液相色谱-蒸发光检测器进标准品 但是不出峰是什么原因呢 哪位大佬能帮忙解答一下 新手上路各位大佬帮帮帮忙

  • 大豆卵磷脂对巧克力的粘度有什么影响?

    巧克力可以认为是一种油包水型乳液,亲水性的糖分子和可可豆颗粒分散在脂肪连续相里。标准精炼级的大豆卵磷脂可以通过降低熔融的巧克力块的粘度来影响乳化的效果。大豆卵磷脂是按植物的种类来分级,以确定能用好的磷脂混合物来改变粘度,粘度的改变可以通过几种不同的方法进行。用Brookfield粘度计和物理流变仪通过巧克力佳信(Casson)方程式可以测量出添加了0.1-0.7%已筛选分级和改性的大豆卵磷脂的黑巧克力、奶油巧克力以及白巧克力的塑性粘度(Plasticviscosity)和屈服应力值(Yield stress value)。相比标准精炼级的卵磷脂,级别较高的卵磷脂具有较低的塑性粘度,但其屈服值比前者高。而级别较好的磷脂酰乙醇胺则表现出较低的屈服值,这一点很有意思。黑巧克力的结果要比奶油巧克力和白巧克力的明显,而3种巧克力的(添加剂的)配方是一样的。无油的卵磷脂可以用作白巧克力粘度降低助剂,它的味道温和、适中。用于涂覆在冰淇淋上的含有42-60%脂肪的巧克力的流动性和稳定性会受到冰淇淋表面的湿气的负面影响。添加经过精选的卵磷脂,对于隔离过多的湿气、巧克力涂层的稳定性以及冰棒具有光滑的表面和良好的口感有益处。brookfield粘度计性能特点与实验的关系:http://www.instrument.com.cn/netshow/C60497.htm

  • 【求助】关于卵磷脂的提取问题

    今天上生化实验课做卵磷脂的提取与鉴定,后来老师提了个问题让我们作为思考题回去想。就是在卵磷脂的提取实验中加入热的95%乙醇的目的是什么?左想右想除了作为溶剂还有什么用处,想请教下各位高人这个问题的答案。欢迎大家一起讨论[em0808]谢谢大家支持此贴。[em0805]

  • 关于卵磷脂的磷脂酰胆碱的液相方法问题

    请问各位大侠做过大豆卵磷脂中的磷脂酰胆碱吗?我们的批文用的是以下的方法,一定要用下面的方法做 我用的流动性为正己烷:异丙醇:磷酸:水=45:48:0.15:7.5 色谱柱为默克的SI60长柱标准品中检所的,标准的锋出现4个叠在一起的锋,不知道是什么原因? 柱子是新 是否跟流动相的PH值有关,还是我的标准品有问题?请各位大霞指教一下?

  • 【原创大赛】某制剂中溶血磷脂酰胆碱的36月测定

    【原创大赛】某制剂中溶血磷脂酰胆碱的36月测定

    某制剂品种的原料药中含有磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱为其降解产物。磷脂酰胆碱会引起溶血反应,因此要控制制剂中磷脂酰胆碱的限度。药品保质期为两年,根据国家局要求,为了更系统、全面的掌握药物的性质,对储存36个月的样品进行检验。色谱条件:Agilent 1200液相色谱仪;SEXDE 80蒸发光检测器;柱温为40℃;流动相为甲醇-冰醋酸(500:10),用三乙胺调pH值至6.0。色谱柱为TopsilTM(拓谱)Silica 4.6*250mm,5μm(Part Number:Tp5SI425; Serial Number: T11261504 )系统适用性溶液制备:取对照品适量制成含磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱分别约为0.48mg/ml,0.08mg/ml的混合溶液。精密量取20ml注入液相色谱仪,连续进样5次,记录色谱图,规定磷脂酰胆碱峰与溶血磷脂酰胆碱峰的分离度应大于1.5。溶血磷脂酰胆碱峰面积的相对标准偏差不得大于3.0%。对照液制备:取溶血磷脂酰胆碱对照品约20mg,精密称定,置25ml棕色量瓶中,加异丙醇溶解,并稀释至刻度,作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液3ml,置50ml量瓶中,加异丙醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。供试液制备:精密量取样品3ml,置50ml容量瓶中,加异丙醇溶解并定容至刻度,摇匀。即为供试液溶液。测定法:取供试品溶液和对照品溶液各20ml注入液相色谱仪,记录色谱图。标准规定,供试品中溶血磷脂酰胆碱的峰面积不得大于对照品溶液中溶血磷脂酰胆碱的峰面积。系统适用性溶液色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309301844_468834_1609327_3.jpg对照色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309301844_468835_1609327_3.jpg样品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309301844_468836_1609327_3.jpg结果:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309301845_468837_1609327_3.jpg结论:36月后,溶血磷脂酰胆碱的含量已超标。

  • 【求助】求助:液相检测鸡蛋中的卵磷脂问题

    【求助】求助:液相检测鸡蛋中的卵磷脂问题

    各位朋友您好!我用液相来检测鸡蛋中的卵磷脂(磷脂酰胆碱PC和磷脂酰乙醇胺PE),但是标准品的峰分离不好!流动相:正己烷:异丙醇:水=1:4:1或正己烷:异丙醇=1:1检测器:紫外检测器。柱子:安捷伦zorbax rx-sil,4.6×250,0.5。谁有做这个东西的经验啊?传授一下吧!感激不尽!下图是磷脂酰胆碱标准品的峰,看文献得知16分钟左右会出峰。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/08/200908201603_166984_1821962_3.jpg[/img].下图是磷脂酰乙醇胺标准品的峰,应在6分钟左右出峰。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/08/200908201605_166985_1821962_3.jpg[/img]下图是混标的。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/08/200908201606_166986_1821962_3.jpg[/img]

  • 磷脂标准物质,其中N-acyl-PE、PA、PE、PC、PI、LPC的含量已精确测定。

    哪位老师做过《植物油脂-卵磷脂中磷脂含量的测定》,请介绍一下国内什么地方可以买到大豆磷脂标准物质,其中N-acyl-PE、PA、PE、PC、PI、LPC都有准确的含量的?(N-酰基-磷脂酰乙醇胺(N-acyl-PE)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC))谢谢?

  • 【求助】蛋黄卵磷脂系统适应性怎么做?

    蛋黄卵磷脂的系统适应性怎么做呀?药典中没说漂移管温度和气流还有现在温度升到100度,气流2.5 但是第三个峰和第六个峰有拖尾和柱前峰,(柱子没有问题是新柱子,蒸发光有没有问题)请问现在该怎么调整?

  • 【原创大赛】色谱法同时分析磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱和游离脂肪酸

    【原创大赛】色谱法同时分析磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱和游离脂肪酸

    色谱法同时分析磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱和游离脂肪酸 磷脂容易被氧化和水解从而降解(如下图),这就限制了有磷脂的药物制剂(脂质体、乳剂)的稳定性及保质期.http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281025_525018_2204138_3.jpg 溶血磷脂和脂肪酸的产生量是判断药物制剂适宜性的关键参数,如随着脂质水解程度变化脂质体分子组成由层状变为胶束就会伴随着药物释放速度的改变。有报道称大量LPC的形成会导致油滴变大导致磷脂与肠胃液稳定相的聚合和破裂,从而导致毒副作用。 美国FDA要求制药企业对于脂质体药物建立适当的储存条件,并在进行稳定性研究时对脂质体药物进行脂质成分分析。这就要求合适的方法对不同化合物的准确定性及定量分析。由于分子中缺乏足够的发色团,以至于紫外和荧光检测不适于对于脂质体的直接分析。蒸发光散射检测器(ELSD)并不需要衍生化,可作为磷脂检测的快速灵敏的手段。蒸发光散射通过测定溶剂蒸发后被检测物散发光的强度进行分析。该方法允许梯度洗脱并对流速不敏感,且相对于LC-MS更方便和便宜。 材料和方法:L-α磷脂酰胆碱、L-α溶血磷脂酰胆碱、亚油酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、甲醇(色谱纯)、氯仿(色谱纯)、氢氧化铵(分析纯)、去离子水。旋转蒸发仪、超声仪、沃特斯2695配低温政法光检测器、Allsphere硅胶色谱柱(150mm×4.6×5um)、Millennium32色谱工作软件。 磷脂酰胆碱脂质体悬浮液通过蒸发-水化法制备,称取0.224g PC溶解于50ml氯仿中,转移至250ml圆底烧瓶中,使用氮气流蒸发氯仿而形成薄的脂质膜,最后通过旋转蒸发仪除去痕量的氯仿,脂质膜用50ml的0.9%NaCl溶液于40℃进行水合,将脂质体浓缩至4.48mg/ml,得到的多层囊泡悬浮液经超声30分钟以获得单层脂质体,脂质体用0.1 N NaOH 调节PH在9-10之间。121℃高压灭菌15分钟。室温保存备用。 标准和样品溶液的制备: 以氯仿:甲醇(50:50%,体积/体积)为溶剂分别制备PC,LPC和亚油酸含量为5mg / mL的储备液,冷冻避光保存备用。 标准曲线系列浓度配制范围PC为82–816 μg/mL,LPC为30–250 μg/mL,亚油酸为55-290μg/mL。 混合标准为同浓度的PC、LPC亚油酸酸,油酸,硬脂酸,和棕榈酸。 FFA的样品是由相等浓度的油酸,亚油酸、硬脂酸和棕榈酸制备。 样品溶液是通过将0.5毫升脂质体加入氯仿:水(50:50%,体积/体积)的溶剂体系。 液相分析:梯度洗脱情况如下http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281026_525019_2204138_3.jpgA 氯仿B 氯仿:甲醇(70:30%,体积/体积)C 氯仿:甲醇:水:氢氧化铵(45:45:9.5:0.5%,体积/体积/体积/体积)流速:1.0ml/min 柱温 28度进样量20ul.ELSD条件包括:漂移管温度的40℃,增益6,雾化气体压力3.2bar. 结果与讨论: 标准的色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281027_525020_2204138_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281027_525021_2204138_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281027_525022_2204138_3.jpg 由标准色谱图得知混合游离脂肪酸的出峰时间在6.7min,PC出峰时间为12.2min,LPC出峰时间为14.7min. 脂质体HPLC-ELSD色谱图:[a

  • 【原创大赛】大豆磷脂中残留溶剂(乙醇)含量的测定

    【原创大赛】大豆磷脂中残留溶剂(乙醇)含量的测定

    大豆磷脂是一种混合磷脂,它是由磷脂酰胆碱(卵磷脂,简称PC,高等级为PPC)、磷脂酰乙醇胺(脑磷脂,简称PE)、磷脂酰肌醇(肌醇磷脂,简称PI)、磷脂酰丝胺酸(丝胺酸磷脂,简称PS)等成分组成,其中最典型的是前三种。磷脂是人体细胞(细胞膜、核膜、质体膜)的基本成分,并对神经、生殖、激素等功有重要关系,具有很高营养价值和医用价值。现代人生活节奏紧张,磷脂营养大量流失,因此补充完整磷脂(PC、PE、PI…)对现代人而言是绝对必要。鉴于大豆磷脂类保健品是一种功能性的健康食品,虽然不是立即见效,但有著全面、长远、稳定的效果,同时又没有药物的副作用,医学家们也开始重视卵磷脂在预防疾病发生方面的积极作用。背景介绍:对于我们的项目来讲,很多原料的检验是要用到GC的。GC到位后,很多以前自己无法解决的检验项目,现在都是自己做了。六月初到货了一批大豆磷脂,就需要检验其中乙醇的溶剂残留。大豆磷脂为中国药典2010年版已经收载的药用辅料,在正文第二部分的1183-1184页上。我们的检验,就是按照这个药典标准进行的。实验步骤:对照品溶液的制备:先向25ml的容量瓶中加入适量的水,然后用微量注射器精密量取15.8μL乙醇对照品(密度按0.79g/ml计,15.8μL的乙醇的质量为12.48mg),然后用水稀释并定容至刻度。精密量取5ml置顶空瓶中,密封。供试液制备:取供试品约0.5g,精密称定,置顶空瓶中,精密加入水5ml使其分散,密封。色谱条件:月旭WEl-PEG20M气相色谱柱,30m*0.32mm*0.25μm(Cat. NO:01918-32001;Ser. NO:GC201311

  • CNS_04.010_磷脂

    食品中磷脂的检测和分析马心茹一、磷脂的结构和功能磷脂(phospholipids)是一类含有磷酸基团的脂质,其广泛存在于植物油、大豆、蛋黄、乳制品、肉类和鱼类中。磷脂也是一类被熟知的极性脂类(polarlipids),根据其主体碳链结构的不同,可主要分为甘油磷脂(glycerophospholipids)和鞘磷脂(sphingolipids)两大类。甘油磷脂主要包含了磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)和磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS),鞘磷脂则主要为神经鞘磷脂(sphingomyelin,SM)。除了以上常见的五种磷脂外,学者们还发现了一些微量磷脂成分,如磷脂酸(phosphatidicacid,PA)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol,PG)、溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(lysophosphatidylethanolamine,LPE)、缩醛磷脂(plasmalogens)、葡糖神经酰胺(glucoceramide,GluCer)和乳糖神经酰胺(lactoseceramide,LacCer),其中GluCer和LacCer都属于鞘磷脂,LPC和LPE分别为PC和PE的代谢产物。磷脂在乳中的存在形式为乳脂肪球滴(milkfatglobule),是乳脂肪球膜(milkfatglobulemembrane,MFGM)的主要组成物质,由于其两亲性(amphiphilic)特征,磷脂在乳中起到了维持乳脂物理稳定性的作用,也通常被用作乳化剂添加到食品中。磷脂种类繁多,因拥有多种同分异构体和异形物,使得其检测方法异常复杂。磷脂是细胞和某些活性酶的重要组成成分,能调节机体膜功能,促进和改善胃肠功能,保护和增强肝脏功能,调整血脂、防止动脉粥样硬化,消除大脑疲劳、改善记忆力等。磷脂具有良好的乳化、润湿、分散等作用,在食品、医药、化妆品等行业具有广泛的应用,磷脂作为食品添加剂,能够提高加工过程中食品的稳定性 精制磷脂添加在化妆品中,可以改善皮肤状态、润滑受损毛发 牲畜或水产饲料中加入磷脂,可以改善它们的生长状况 磷脂也是注射液乳剂中常用的材料,可以制备药物复合物,提高药物的利用度。二、磷脂的提取磷脂的提取方法包括有机溶剂提取法、超临界CO2萃取法、柱层析法、酶解法、复合盐沉淀法等方法。(1)有机溶剂萃取法有机溶剂萃取法是根据各磷脂组分和杂质在有机溶剂中的溶解度不同,来实现磷脂与杂质的分离,常用的有机溶剂有乙醇、丙酮、甲醇、氯仿等,提取时常常是几种溶剂联合使用以提高磷脂的提取率和纯度。有机溶剂提取法常与超声波萃取、超高压萃取、微波萃取等方法联用以提高萃取效率(2)超临界萃取法超临界萃取(supercriticalfluidextraction,SCF)技术是利用超临界状态下的CO2具有气体和液体的双重特性,通过改变温度和压力来调整流体的性质,从而对样品中的目标物质进行萃取的方法。为了获得更好的提取效果,使用超临界CO2提取磷脂时通常会加入夹带剂,最常用的夹带剂是乙醇,也有研究者使用丙烷等作为夹带剂。超临界CO2具有高扩散性、可重复利用、无污染以及选择性好等特点,但该方法所用设备价格昂贵,且样品处理量少,不适合商业化生产。(3)柱层析法柱层析法是根据样品混合物中各组分在吸附剂和洗脱剂中分配系数的不同,通过多次反复洗脱将磷脂与其它组分分离。柱层析法常用硅胶、氧化铝、硅藻土等作为吸附剂,氯仿、甲醇、乙醚、丙酮等作为洗脱剂。柱层析法分离效果好,操作简单,是目前高纯度磷脂制备的重要方法,但是处理量有限,而且要使用一些具有毒性的有机溶剂,从而限制了该方法在工业上的推广应用。(4)无机盐复合沉淀法无机盐复合沉淀法主要用来萃取卵磷脂,利用某些无机盐与卵磷脂结合可形成络合物沉淀,使卵磷脂与其他物质分离开,从而除去蛋白质和脂肪等杂质,再利用适当的溶剂把无机盐从磷脂复合物中萃取出来,从而获得较高纯度的磷脂。该方法提取率较高,但是最后需要将金属沉淀剂从磷脂中分离出来,操作较复杂。三、磷脂的定性和定量分析(1)钼蓝法钼蓝比色法分析原理是将植物油中的磷脂经灼烧成为五氧化二磷,被热盐酸变成磷酸,遇钼酸钠生成磷钼酸钠用硫酸联氨还原成钼蓝。然后按照国标方法绘制磷标准曲线用分光光度计在波长650nm对标准溶液进行吸光度的测定,并以此绘制标准曲线,计算样品中磷含量。具体操作:取六支比色管,编成0、1、2、4、6、8六个号码。按号码顺序分别注人标准溶液0mL、1mL、2mL、4mL、6mL、8mL,再按顺序分别加水10mL、9mL、8mL、6mL、4mL、2mL。接着向六支比色管中分别加人硫酸联氨溶液(6.9)8mL,钼酸钠溶液2mL。加塞,振摇3次~4次,去塞,将比色管放人沸水浴中加热10min,取出,冷却至室温。用水稀释至刻度,充分摇匀,静置10min。移取该溶液至干燥、洁净的比色皿中,用分光光度计在650nm处,用试剂空白调整零点,分别测定吸光度。以吸光度为纵坐标,含磷量(0.01mg、0.02mg、0。04mg、0.06mg、0.08mg)为横坐标绘制标准曲线。根据试样的磷脂含量,用坩埚称取制各好的试样,成品油试样称量10g,原油及脱胶油称量3.0g~3.2g(精确至0.001g)。加氧化锌0.5g,先在电炉上缓慢加热至样品变稠,逐渐加热至全部炭化,将坩埚送至550℃~600℃的马弗炉中灼烧至完全灰化(白色),时间约2h。取出坩埚冷却至室温,用10mL盐酸溶液溶解灰分并加热至微沸,5min后停止加热,待溶解液温度降至室温,将溶解液过滤注人100mL容量瓶中,每次用大约5mL热水冲洗坩埚和滤纸共3次~4次,待滤液冷却到室温后。用氢氧化钾溶液中和至出现混浊,缓慢滴加盐酸溶液使氧化锌沉淀全部溶解,再加2滴。最后用水稀释定容至刻度,摇匀。制备被测液时同时制备一份样品空白。用移液管吸取被测液10mL,注人50mL比色管中。加入硫酸联氨溶液8mL,钼酸钠溶液2mL。加塞,振摇3次~4次,去塞,将比色管放人沸水浴中加热10min,取出,冷却至室温。用水稀释至刻度,充分摇匀,静置10min。移取该溶液至干燥、洁净的比色皿中,用分光光度计在650nm下,用试样空白调整零点,测定其吸光度。(2)重量法植物油中的磷脂吸水膨胀,密度增大,使其由絮状悬浮物转变为沉淀物。将试样水化后,用丙酮反复洗涤过滤,由于磷脂不溶于丙酮,油溶于丙酮,从而可使得磷脂与油分离。称量磷脂的质量,计算其含量。该方法所得到的沉淀过滤物不完全是磷脂,还有其他不溶于丙酮的类脂物质。(3)薄层色谱法(thinlayerchromatography,TLC)TLC是根据展开剂中磷脂各组分与薄层板上吸附剂之间作用力不同、比移值(Rf)不同而达到分离磷脂组分目的的一种检测手段,TLC通常用于磷脂的定性和半定量测定,是最早应用于磷脂检测的方法之一。TLC的优点是操作简单、快速、直观、专业要求低、前期设备资金投入少,但其自动化程度低,多数情况下适用于实验室规模的检测,难以应用到工业界大规模样品的批检中。Morrison等、Christie等和Weihrauch等在上世纪60-80年 开始研究TLC及2D-TLC对乳及乳制品中磷脂含量的检测方法,检测基质包括母乳、牛乳、水牛乳、羊乳、山羊乳、骆驼乳、驴乳和奶酪等,报道列出了5大类磷脂分量(PE、PI、PS、PC、SM)在各动物基乳中的组分,其含量和其他检测手段得出的结果基本属于同一范围。Sanchez-Juanes等在2009年报道使用一种更先进的高效薄层色谱(high-performancethinlayerchromatography,HPTLC)技术对生牛乳进行磷脂组分分析。近年来,随着仪器的革新和技术的发展,TLC在国内外磷脂类化合物的检测中已较少使用,取而代之的是更少受人为因素影响的色谱、质谱和核磁共振等精密仪器(4)液相色谱-蒸发光散射法(high-performanceliquidchromatography-evaporativelightscatteringdetector,HPLC-ELSD)HPLC用于磷脂检测的技术在近些年得到飞速进步,并获得了广泛的认可和应用。HPLC法的突出优点在于其能使非挥发性的、热敏感的磷脂在常温得到分离,且其封闭系统能最大限度地减少磷脂在分析过程中被氧化的程度,确保实现磷脂快速、灵敏、准确、可重复的定量分析。HPLC可配置多种检测器,包括紫外检测器(ultraviolet,UV)、蒸发光散射器(ELSD)、电荷气溶胶探测器(chargedaerosoldetector,CAD)和质谱仪(massspectrometer,MS)等,其中,ELSD和MS应用最为广泛。ELSD的检测原理是把挥发性高的流动相喷入带热气流的检测器中,待其蒸发后,不挥发的磷脂形成微小液滴,这些液滴散射的光进入光电倍增器后产生电流,依据不同质量的磷脂引起电流大小的差异来达到检测的目的。ELSD是一种相对新型的检测器,它与UV、CAD和MS相比拥有诸多优点,如适用范围宽、检测时不存在基线漂移、对溶剂流速不敏感、能消除流动相梯度洗脱对结果带来的不良影响等,其在乳制品等复杂基质领域有很强的应用,正在逐渐成为磷脂分析检测的主流方法[5,34]。国际卵磷脂和磷脂协会(ILPS)于2003年推荐HPLC-ELSD法用于测量卵磷脂中的磷脂组分[51],美国分析化学家学会(AOAC)也在2007年将HPLC-ELSD法收录为分析卵磷脂的标准检测方法。(5)核磁共振磷谱(31phosphorus-nuclearmagneticresonance,31P-NMR)31P-NMR用于磷脂检测是二十世纪七十至九十年代发展成熟的技术,其在分析生理组织(大脑、肝脏、细胞膜等)和食品(植物油、肉类等)中磷脂含量的领域展现出了很强的应用。31P-NMR拥有很高的灵敏度,能检出样品中低浓度含量的磷脂,近年来,该方法也被开发应用于乳制品等复杂基质。31P-NMR的优势在于不需要对样品进行大量的化学处理,且定量分析时不需要标准品,只需在总脂肪中加入内标。然而,31P-NMR仪器普及度不高,仪器运营费用昂贵,对实验员操作的熟练程度也要求较高,所以在资金、人员、设备上投入相对较大。31P-NMR的基本原理是检测磷脂分子中的每个磷原子,基于各组分在不同的化学环境中会呈现出不同的31P化学位移,利用其31P核磁共振效应来确定不同组分。Andreotti等使用31P-NMR对牛乳和水牛乳中的磷脂进行了定量分析,结论表示两种乳中磷脂种类的分布大体一致。Carcia等采集了不同种类哺乳动物(牛、骆驼、马)乳中磷脂的指纹图谱,并与人乳比对。结果显示,人乳和骆驼乳中富含对婴幼儿发育起到重要作用的神经鞘磷脂(分别为7.83mg/100mL和11.8mg/100mL)和缩醛磷脂(分别为2.7mg/100mL和2.4mg/100mL);磷脂总量在四类乳中的排序为骆驼乳(0.503mmol/L)母乳(0.324mmol/L)牛乳(0.265mmol/L)马乳(0.101mmol/L)。Murgia等鉴别和定量分析了羊乳乳脂和牛乳乳脂中的磷脂组分,文中引进了单相二甲基甲酰胺/三乙基胺/盐酸胍作为溶剂体系,相比于传统的氯仿/甲醇/EDTA-水溶剂体系,新法能显著提高谱图峰的分辨率并降低化合物信号位移。MacKenzie等[51]对奶油和磷脂原料(PC700,BPC60)中的PC、PE、PS、PI、SM含量进行了检测,并与2D-TLC法做出对比,两种方法得出的磷脂组分基本属于同一范围。其中,奶油中磷脂总量分别为0.14%w/w(TLC法)和0.16%w/w(31P-NMR法);PC700分别为53.2%w/w(TLC法)和60.6%w/w(31P-NMR法);BPC60分别为72.9%w/w(2D-TLC法)和75.8%w/w(31P-NMR法)。MacKenzie的结果显示2D-TLC法灵敏性更高,能检出31P-NMR无法检出的低含量组分,但31P-NMR更适合高效率地规模化运作,因其自动化程度更高且耗时更短。(6)液相色谱-质谱检测器(high-performanceliquidchromatography-massspectrometer,HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])MS最大的优势在于其拥有更好的精密度、灵敏性、特异性和更强的定性能力,它不仅可以检测磷脂总量和分量,更可以精确到各分子种类进行定性和结构分析。目前,MS被认为是测定磷脂分量及分子种类最精确的手段,其结合三重四极杆或飞行时间质谱仪将成为此领域新的发展方向。然而,MS的购买、运行和维修费用非常昂贵,且存在同位素峰间干扰和结果再现性不稳定等问题,故而其全面推广受到限制。即便如此,磷脂检测技术结合MS仍具有广阔的前景,近些年涌现出大量针对乳制品应用的报道。与液相、核磁共振方法不同的是,质谱仪通常串联离子源(ESI、EI、ICP等)、质量分析器(四极杆、四极杆离子阱、飞行时间等)和检测器(电子倍增器、感应电荷检测器等)共同使用,多种仪器组件的叠加增加了其检测方法的复杂性。通常,质谱类检测器使用的色谱柱多为反向柱(如C8、C18柱)或亲水作用色谱柱(hydrophilicinteractionliquidchromatography/HILIC柱),使用的流动相体系通常为氯仿:甲醇:缓冲液/水或乙腈:甲醇:缓冲液/水。此处值得一提的是HILIC柱的应用,HILIC柱是一类既非正向柱也非反向柱的特殊色谱柱,其采用了类似正向柱的固定相,但具备反向柱的部分特征。HILIC柱是一类高效的极性物质保留柱,通过亲水性作用力(hydrophilicinteraction)实现对极性物质的分离和洗脱,它能有效地改善反向色谱柱极性物质保留性差的缺点,并能有效提高电喷雾离子源的灵敏度,近些年受到了越来越广泛的关注。除此之外,质谱类检测器因能精确定量到磷脂分子种类,其在数据分析时结合主成分分析(PCA)能对磷脂进行指纹图谱的绘制,这一技术近年来发展快速。四、结语磷脂在食品、医药等行业中有广泛应用,优化和改进磷脂的提取和检测方法具有重要意义。目前在磷脂的提取和检测方面还存在许多挑战,在提取方面,多采用有机溶剂提取法,但存在溶剂残留等问题,超临界萃取法具有环保节能的优势,该方法主要用于实验室,在工业方面的应用有待增加 在检测方面,主要是HPLC-UV、HPLC-ELSD方法,由于磷脂的种类较多,脂肪酸组成差异较大,对于来源不同的磷脂,UV检测器不能准确定量,ELSD检测器是质量通用型检测器,可以比较准确地对磷脂进行定量分析,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]和NMR法对人员和设备要求比较高,目前还无法实现广泛应用。随着磷脂提取和检测技术的成熟,关于磷脂结构的分析会越来越多,可以更加全面的了解磷脂,使其更好地应用于生产和生活中。就磷脂提取而言,如何有效地去除杂质、提高萃取效率、确保检测结果的稳定性和重复性仍是目前存在的技术难点。SPE固相萃取小柱的应用,能有效且定向地对检测基质进行除杂,因其填料的多样性和创新性,SPE小柱在未来的应用或将逐步增加,但检测人员仍需考虑过柱带来的回收率上的损失。就定量方法而言,其未来发展趋势应根据需求进行划分:如针对企业进行相关产品检测,液相色谱-蒸发光散射器足以满足批检和抽检的需求;但从科研角度考虑,质谱类仪器无疑拥有更大的优势,这一点从近5年磷脂检测技术的发文趋势上可以看出。质谱类仪器因其精密性和高通量,现有技术已能对磷脂上百种分子种类进行定量分析,未来还能对更多未知的种类进行筛查及鉴别。除此之外,配合主成分分析手段,科研人员能对磷脂进行指纹图谱的绘制,这项技术在食品的真实性和溯源性鉴定上拥有巨大潜力。从表1汇总的数据来看,各文献报道的磷脂含量差异性较大,实验数据间难以互相做比,检测人员在参考数据时需对照所使用的检测方法和仪器条件。一点重要的启示是,新方法在开发时需经过缜密的方法学验证,需从精密度、检出限、定量限、回收率和线性关系等几个维度对方法进行综合评估,以得到最接近真值、有对比意义且重复性好的结果。参考文献[1]胡雪,段国霞,刘丽君,李翠枝,吕志勇,唐烁.乳及乳制品中磷脂的含量、功能、分离及检测技术研究进展[J/OL].食品科学:1-24[2021-07-06].[2]罗鑫,孙万成,罗毅皓.食品中鞘磷脂的检测及功能研究进展[J].食品研究与开发,2020,41(15):211-218.[3]刘黔霞,吴雪君,杨坤,张红,刘美霞,王凤霞.植物油中磷脂含量的测定[J].云南化工,2020,47(04):134-135.[4]文艺晓,彭吉星,郭莹莹,王婧媛,左红和,王联珠.HPLC-ELSD检测南极磷虾油中磷脂含量[J].南方农业学报,2019,50(10):2293-2299.[5]文艺晓,王联珠,彭吉星,郭莹莹,朱文嘉,王婧媛.食品中磷脂提取及分析方法的研究进展[J].食品安全质量检测学报,2019,10(07):1877-1883.[6]韩智,龚蕾,王会霞,江丰,朱晓玲,黄宗骞,曹琦.定量核磁共振磷谱在食品分析检测中的研究进展[J].食品与机械,2021,37(03):207-212.[7]工标网(www.csres.com)

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    前 言本标准代替GB/T4789.11-2003《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。本标准与GB/T4789.11-2003相比主要变化如下:—— 删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤;—— 增菌培养基以改良胰蛋白胨大豆肉汤代替了葡萄糖肉浸液肉汤和匹克氏肉汤;—— 分离培养基以哥伦比亚CNA血琼脂和哥伦比亚血琼脂代替了血琼脂平板;—— 完善了操作步骤;—— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆;—— 增加了规范性附录A。本标准的附录A为规范性附录。本标准所代替的历次版本发布情况为:—— GB4789.11-1984、GB/T4789.11-1994、GB/T4789.11-2003。食品安全国家标准食品微生物学检验 溶血性链球菌检验范围本标准规定了食品中溶血性链球菌(Streptococcushemolyticus)的检验方法。本标准适用于食品中β型溶血性链球菌的检验。2 术语与定义β型溶血:在菌落周围形成完全透明的溶血环,红细胞完全溶解。3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:3.1 恒温培养箱: 36 ℃±1℃。3.2 冰箱:2 ℃~5℃。3.3 厌氧培养装置。3.4 天平:感量0.1 g。3.5 均质器。3.6 显微镜:10×~100×。3.7 无菌吸管:1 mL(具0.01mL刻度)、10 mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。3.8 无菌锥形瓶:容量100mL、200 mL、2000 mL。3.9 无菌培养皿:直径90mm。3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11 水浴装置: 36 ℃±1 ℃。3.12 离心机:离心速度≥20000×g。

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  • 卫生部关于征求《食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》等12项食品安全国家标准意见的函

    卫生部办公厅关于征求《食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》等12项食品安全国家标准意见的函 中华人民共和国卫生部 www.moh.gov.cn 2011-07-05 14:17:29 各有关单位:根据《食品安全法》及其实施条例的规定,我部组织制定了《食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》等12项食品安全国家标准(征求意见稿)。现征求你部门意见并向社会公开征求意见,请于2011年9月10日前以传真或电子邮件形式反馈我部。传  真:010-67711813电子信箱:foodsafetystandards@gmail.com附件:12项微生物标准征求意见稿.rar 二○一一年六月三十日

  • SiO2-DMOA色谱柱分离磷脂

    SiO2-DMOA色谱柱分离磷脂

    [align=left][font='times new roman'][size=16px]SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]-DMOA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱分离磷脂[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]标准品[/size][/font][/align]不同类别的磷脂结构上的差异主要表现为头部基团极性的差异,在分离时主要采用正相色谱模式。基于SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱具有反相/亲水混合模式保留特性,首先采用不同类别的磷脂标准品考察SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对混磷脂样品的分离选择性。如图示,以具有相同烷基侧链的磷脂DPPG、DPPE和DPPC为样品,能够在10 min内实现共洗脱,其出峰顺序依次为DPPG、DPPE和DPPC。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302316003138_968_5887186_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][size=13px] [/size][size=13px]混磷脂标准品在[/size][size=13px]SiO[/size][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][size=13px]-DMOA[/size][size=13px]色谱柱上的色谱分离图[/size][/align]进一步将SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱应用于不同PC种类的分离。如图所示,以甲醇/乙腈(40/60,v/v)为流动相,DMPC、DPPC和DSPC在17 min内实现基线分离,且峰形良好,并没有明显拖尾现象。DMPC、DPPC和DSPC的差异主要表现为两条酰基侧链含碳数目的不同,它们尾部含碳数目分别为13、15和17。因此3种PC在SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱上的洗脱顺序依次为DMPC、DPPC和PSPC。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302316021382_7179_5887186_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][size=13px] [/size][size=13px]混[/size][size=13px]PC[/size][size=13px]在[/size][size=13px]SiO[/size][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][size=13px]-DMOA[/size][size=13px]色谱柱中的分离谱图[/size][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px] SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]-DMOA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱分离大豆卵磷脂和肺腺癌细胞膜磷脂提取物[/size][/font][/align]基于SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对磷脂大类和磷脂类别的良好分离性能,以大豆卵磷脂提取物为实际样品,进一步探究SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对复杂磷脂样品的分离性能。以A/甲醇(50:50,v/v)为流动相的色谱分离图,大豆卵磷脂的分离是采用正相色谱条件下进行,从图中可以观察到在12 min内,可以观察到10个色谱峰,显示了良好的分离性能。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302316006230_4359_5887186_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][size=13px] [/size][size=13px]大豆卵磷脂在[/size][size=13px]SiO[/size][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][size=13px]-DMOA[/size][size=13px]色谱柱上的色谱分离图[/size][/align]此外,以肺腺癌细胞膜磷脂提取物为样品,对其分离的色谱条件与大豆卵磷脂一致,考察了SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对肺腺癌细胞膜磷脂提取物的分离性能。如图所示,肺腺癌细胞膜磷脂提取物在12 min内大致可观察到11个色谱峰。上述结果证实SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对复杂磷脂样品也同样具有良好的分离选择性。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302316024767_1277_5887186_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][size=13px] [/size][size=13px]肺腺癌细胞磷脂提取物在[/size][size=13px]SiO[/size][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][size=13px]-DMOA[/size][size=13px]色谱柱上的色谱分离图[/size][/align]

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