如何用普通生物显微镜拍清楚非小细胞肺癌细胞的细胞膜呢
[font='times new roman'][color=#000007]MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000007] [/color][/font][color=#000007]在人小细胞肺癌细胞系中的表达及[/color][color=#000007] [/color][font='times new roman'][color=#000007]MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000007] [/color][/font][color=#000007]低表达[/color][color=#000000]细胞模型的构建[/color]MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中高表达提取人正常肺上皮细胞 BEAS-2B，SCLC-A 型 H69、H209、DMS153 细胞，SCLC-N 型 H446、H82、H2066 细胞，SCLC-P 型 H526、H211 细胞，SCLC-Y 型 H841、DMS114、SW1271 细胞的 RNA，利用 q-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 检测 MSI1 在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况，结果如图 2-1 显示，MSI1 在小细胞肺癌细胞系中的表达远远高于正常肺上皮细胞，综合分析，选取了 H69、H82、H526 及 SW1271 细胞用于后续实验。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326443512_4838_5389809_3.png[/img]图 小细胞肺癌细胞系中 MSI1 mRNA 的表达（***P0.001）MSI1 低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系 H69、H82、H526、SW1271 细胞，使用慢病毒感染技术敲低 MSI1 的表达，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选， 然后在荧光显微镜下观察如图 ， 可见 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2细胞均产生绿色荧光，表明人小细胞肺癌细胞慢病毒感染成功。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326451025_2121_5389809_3.png[/img]图 慢病毒感染后 4X 荧光显微镜下图片（H69、H82、H526、SW1271 明场及荧光照片） 敲低 MSI1 后转录和蛋白水平验证分别提取对数生长期的 H69-NC 、H69-shMSI1-1 、H69-shMSI1-2 、H82-NC 、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 RNA 和蛋白，利用 q-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 技术分别检测各细胞 MSI1 mRNA 相对表达量，结果如图 所示，与对照组相比，H69-shMSI1-1、 H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 组 MSI1 mRNA 表达量明显降低（P0.01）， 抑制率约为 75%。利用 Western blot 技术检测各细胞内 MSI1 蛋白的表达情况。结果如图 2-3 所示，与对照组相比，MSI1 蛋白表达在 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞中明显降低。表明 MSI1 低表达细胞模型构建成功。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326454704_2148_5389809_3.png[/img]图 敲低 MSI1 在转录水平和蛋白水平的验证（***P0.001）
MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达细胞模型的构建实验方法与步骤 细胞的复苏 1.复苏前的准备：打开水浴锅，设置温度37℃；紫外线将超净台消毒30 min；配置完全培养基。 2.将要复苏的H69、H446细胞从液氮取出，用一次性PE手套包裹冻存管，迅速放入水浴锅中震荡，使其快速融化。 3.在15 mL离心管中加入5 mL完全培养基及融化的细胞悬液，900 r/min离心8分钟，弃去上清，得到细胞沉淀。 4.在25 cm2的培养瓶中加入5 mL完全培养基，并用1 mL培养基将沉淀的细胞重悬并加入准备好的培养瓶中，放入CO2恒温培养箱中继续培养。 细胞的传代 1.选取在悬浮培养瓶中生长至90%的H69细胞，用移液枪将细胞悬液移入15 mL离心管中，选取在贴壁培养瓶中生长至90%的H446细胞，用PBS溶液将细胞吹至漂浮，并移入15 mL离心管中，两种细胞均900 r/min离心8分钟，弃掉上清。 2.分别在3个25 cm2培养瓶中加入5 mL完全培养基，在细胞沉淀中加入3 mL培养基并充分吹打混匀，将3 mL细胞悬液平均放入3个培养瓶中并混匀，放入培养箱中继续培养。 MSI1低表达细胞模型的构建1.从-80℃冰箱取出慢病毒载体冰上融化，将慢病毒用空白培养基稀释为滴度2×108，充分混匀，准备好病毒感染增强液。2.将25 cm2悬浮培养瓶中H69细胞移入15 mL离心管中并用移液枪充分吹打混匀，取其中500 μL放入细胞计数仪中计数，取出1.2×106个细胞置入新的离心管中，加入空白培养基至6 mL。3.在12孔板中以MOI=10的病毒滴度进行感染，培养16 h。4.16 h后将细胞悬液离心，换成不加双抗的完全培养基继续培养，72 h后观察荧光。5.待细胞生长至状态良好，加入1 μg/mL嘌呤霉素筛选至90%以上细胞均产生荧光。荧光实时定量PCR（Q-PCR）检测MSI1在mRNA水平的表达 总RNA的提取分别将细胞离心，PBS缓冲液清洗2次，900 r/min离心8 min，得到细胞沉淀。分别加入1 mL Trizol，用移液枪吸打至细胞完全破裂，加入200 μL氯仿，震荡30 s，室温静置10 min，以有效分离无机相和有机相，随后4℃，12,000 g/min离心15 min。将上清移至高压过的1.5 mL离心管中，加入与上清等体积的异丙醇，轻柔颠倒震荡数次，室温静置10 min，随后4℃，12,000 g/min离心10 min。弃去上清，加入75%无水乙醇，4℃，12,000 g/min离心5 min。弃去上清，沉淀置于冰上自然干燥，但不可完全干燥。用30 μL DEPC水溶解总RNA。用NanoDrop One超微量分光光度计进行定量和纯度检测，用1%琼脂糖凝胶电泳进行完整性检测。 cDNA的合成逆转录体系试剂名称使用量模板RNAMonScriptTM 5*RT111 All-in-One MixMonScriptTM dsDNaseNuclease-Free Water1 μg4 μL1 μLup to 20 μL将混合液轻柔吹打混匀，瞬时离心，37℃ 2 min，55℃ 15 min，85℃ 5 min，得到cDNA。 Q-PCR检测MSI1 mRNA的表达GAPDH引物序列：Forward primer:Reverse primer:5’-GGTCGGAGTCAACGGATTTG-3’5’-ATGAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3’MSI1引物序列：Forward primer:Reverse primer:5’-GAACCATCCCGTCCTGTATCA-3’5’-GAAACCATGAAGCCCCAACC-3’Q- PCR反应体系：Q-PCR反应体系试剂名称使用量cDNAForward primerReverse primerMonAmpTM Chemhs qPCR MixLow ROXNuclease-Free Water50 ng0.2 μL0.2 μL5 μL0.1μLup to 10 μLQ-PCR反应程序： Q-PCR反应程序反应步骤反应温度反应时间循环次数预变性95℃10 min1变性95℃10 s40退火55-65℃10 s延伸72℃30 s溶解曲线溶解曲线按仪器默认溶解曲线 结果采用t检验，用Graphpad prism5计算MSI1在mRNA水平的表达量。 Western blot检测MSI1在蛋白水平的表达总蛋白的提取将对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞移入15 mL离心管中，900 r/min离心8 min，并用PBS溶液洗涤2次，以去除培养基中血清影响。分别加入含PMSF的蛋白裂解液100 μL，与细胞充分混匀。4℃裂解1小时后，4℃，12000 g/min离心15 min，将上清移至新的离心管中，得到细胞总蛋白。 BCA法测定蛋白浓度 将Solution A和Solution B以50:1的体积比配置BCA工作液，充分混匀。将2 mg/mL蛋白标准品等比稀释，最小浓度为125 μg/mL，并分别与配置好的200 μL BCA工作液混匀，铺入96孔板中。37℃孵育30 min，测定波长562 nm处OD（光密度值）值，并绘制蛋白标准曲线。取适量H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白，20：1稀释后，与200 μL BCA工作液混合均匀。37℃孵育30 min，用酶标仪测定波长562 nm处OD值，根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。Western blot检测MSI1蛋白的表达 分别收集对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白，加入相应体积4×SDS Loading Buffer，沸水浴煮5 min，分别取40 μg细胞总蛋白，在提前配制的10% SDS-PAGE分离胶电泳。电泳结束后，将蛋白转至PVDF膜上。用含5%脱脂牛奶的封闭液 37℃封闭1.5 h。弃去封闭液，用TBST缓冲液洗3次，每次10 min，加入MSI1兔单克隆抗体（1:1000），并以GAPDH为内参，加入GAPDH鼠单克隆抗体（1:5000）；4℃孵育过夜，次日用TBST缓冲液洗膜3次，每次10 min。在敷有MSI1抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗兔IgG（1:5000），在敷有GAPDH抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗鼠IgG（1:5000），37℃敷育1 h，TBST 缓冲液洗膜3次，每次10 min。用增敏化学发光底物试剂检测，暗室曝光显影。在GAPDH表达量相同的情况下比较MSI1的表达情况。多次重复，应用ImageJ计算出各个蛋白条带的灰度对比，结果采用t检验，并应用Graphpad prism5作出柱状图。 MSI1在人小细胞肺癌细胞系中高表达 提取人正常肺上皮细胞BEAS-2B、小细胞肺癌细胞H446、H69的RNA，利用Q-PCR检测MSI1在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况，结果如图2-1显示，MSI1在小细胞肺癌细胞系H446、H69中的表达远远高于正常肺上皮细胞。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428158_6718_5389809_3.png1 MSI1 mRNA在小细胞肺癌细胞系中的表达（**代表与正常肺上皮细胞相比，小细胞肺癌细胞MSI1表达量增高具有统计学意义，P0.01）。 MSI1低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系H69细胞，使用慢病毒感染技术敲低MSI1的表达，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选，然后在荧光显微镜下观察如图2-2，可见H69-NC、H69-shMSI1细胞均产生绿色荧光，表明人小细胞肺癌H69细胞慢病毒感染成功。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428036_9359_5389809_3.png MSI1低表达细胞模型的构建。应用shMSI1慢病毒载体感染H69细胞，利用嘌呤霉素筛选，并在荧光显微镜下观察。 荧光实时定量PCR（Q-PCR）检测MSI1的mRNA表达水平提取对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞的RNA，并测量RNA浓度及完整性，用1%琼脂糖凝胶电泳检测完整性可见，RNA有三条带，从上到下依次为28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA，且28S rRNA的亮度是18S rRNA的两倍。用NanoDrop One超微量分光光度计测定人总RNA的A260/A280的值为2.00左右，A260/A230的值为2.30左右，说明提取的RNA质量和完整性很好，可以用于后续试验。利用Q-PCR技术检测各细胞内MSI1 mRNA相对表达量，结果如图2-3所示，与对照组相比，H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量明显降低（P0.01），抑制率约为75%。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434330_8277_5389809_3.png MSI1在RNA水平的表达（***代表与对照组相比，H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量下降具有统计学意义，P0.001）。 Western blot检测MSI1蛋白表达水平将BSA标准品（2 mg/mL）进行等比稀释，最低浓度为125 ug/mL，并应用BCA蛋白质浓度测定试剂盒测定在波长562 nm下的OD值，以OD值为纵坐标，对应蛋白质浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准蛋白曲线如图2-4所示。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201435248_4142_5389809_3.png图2-4 标准蛋白曲线分别提取H69-NC、H69-shMSI1细胞的总蛋白质，利用Western blot技术检测各细胞内MSI1蛋白的表达情况。结果如图2-5所示，与对照组相比，MSI1蛋白表达在H69-shMSI1细胞中明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功。ahttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201437240_855_5389809_3.pngbhttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434999_3303_5389809_3.png图2-5 MSI1蛋白水平表达：（a）MSI1蛋白表达条带；（b）MSI1蛋白的相对表达量。（*表示与对照组相比，H69-shMSI1组MSI1蛋白表达下降具有统计学意义，P0.05）。首先验证MSI1在小细胞肺癌细胞系中的表达情况，利用Q-PCR技术检测在RNA水平，MSI1在肺正常上皮细胞及小细胞肺癌细胞系中的表达，结果显示，MSI1在小细胞肺癌细胞中的表达明显高于正常肺上皮细胞。随后以人经典型小细胞肺癌细胞系H69细胞为研究对象，构建MSI1低表达细胞模型，应用shMSI1慢病毒载体感染H69亲本细胞，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，利用Q-PCR及Western blot验证MSI1在RNA及蛋白水平的表达，结果显示，H69-shMSI1组MSI1的mRNA及蛋白的表达明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功，可以用于后续实验。
[align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小细胞肺癌简介[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]癌症是目前全世界的社会公共卫生问题，是美国第二大死因。其中肺癌的发生率和死亡率均居第一位，并呈逐年上升的趋势[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][1][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。肺癌包括小细胞肺癌与非小细胞肺癌，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小细胞肺癌是一种[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]高度恶性的神经内分泌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]肿瘤，约占肺癌的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]15%[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][2][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在病理、分子生物学和临床[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]治疗等方面[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]与其他[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]类型[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]肺癌有很大的不同[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。小细胞肺癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的发生与烟草暴露密切相关，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]几乎所有的小细胞肺癌患者都是目前或以前的重度吸烟者[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][3][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小细胞肺癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的特点是肿瘤生长迅速，早期扩散转移，血管丰富，基因组高度不稳定性，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TP53[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RB1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的普遍失活，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]确诊后存活两年以上的患者患第二原发肿瘤的风险明显增加[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][4][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。小细胞肺癌被诊断时常常就已经发生广泛转移，最初对细胞毒性治疗敏感，但总是随着对进一步治疗的耐药性而迅速复发，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]年生存率[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]7%[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][5][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，每年大约[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]25[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]万人因此丧命。在过去三十年间，小细胞肺癌治疗没有明显进展，迫切需要新的治疗方法及药物。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]肿瘤的发生是一个多因素、多步骤、环境与基因共同作用的结果，是多细胞机体内基因突变或基因表达异常导致大量蛋白和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RNA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达失调所引起的。小细胞肺癌因为生长速度快，易发生转移、复发及耐药，并且近三十年间没有明显的治疗进展，被称为“顽固性癌症”。小细胞肺癌的诊断缺乏特异性的指标，被发现时往往已发生广泛转移；目前，针对小细胞肺癌的主要治疗手段仍是以铂类为主的化疗；小细胞肺癌早期对化疗敏感，随后很快发生复发及耐药；且手术患者数量较少，病理标本收集困难，这些均使小细胞肺癌治疗进展缓慢。随着近些年靶向药物及免疫治疗的发展，联合用药及寻找新的靶点成为治疗小细胞肺癌的新的方向。有研究显示，相对于非小细胞肺癌，小细胞肺癌中肿瘤干细胞的数量较多，肿瘤干细胞标志物表达量明显较高，针对于肿瘤干细胞标志物的研究对小细胞肺癌的诊断及治疗具有重要意义。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在非小细胞肺癌中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]促进细胞增殖及糖代谢，并调节肿瘤耐药[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][18][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]可[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验及软琼脂克隆形成实验验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对于人小细胞肺癌细胞生长增殖的作用。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验可检测活细胞的数量，可验证细胞的生长及增殖情况，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。软琼脂克隆形成实验是验证悬浮细胞单细胞克隆能力的常用手段，通过观察克隆形成数量及大小来判断[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]单细胞克隆形成的能力[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，已有报道证明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞的生长增殖起到明显促进作用。[/color][/size][/font]
[align=center][size=18px]敲低[/size][size=18px] MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响[/size][/align][size=16px]检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞生长增殖的影响[/size][size=16px]收集[/size][size=16px] H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组[/size][size=16px]细胞细胞[/size][size=16px]离心，并用完全培养基调整细胞浓度，H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、[/size][size=16px] [/size][size=16px]H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 以每孔 1×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞平铺于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2，以每孔 1.3×[/size][size=16px]104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞平铺于 96 孔板中，37℃ 恒温培养箱中培养。铺板后，分别于 24 h、48 h、72 h、96 h、120h 在每孔加入 10 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px] CCK-8 溶液，37℃ 恒温培养箱中孵育 4h。并用酶标仪测定波长 450 nm 处 OD 值，利用 [/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 计算增殖情况。[/size][size=16px]检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响[/size][size=16px]收集[/size][size=16px] H69 、H82 、H526 、SW1271 的对照组和实验组细胞， 其中 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、[/size][size=16px]H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 细胞系以 1×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞/孔的细胞密度接种于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 以 1.3×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞/孔的细[/size][size=16px]胞[/size][size=16px]密度接种于[/size][size=16px] 96 孔板中。待细胞融合率约 80%，加入不同浓度顺[/size][size=16px]铂[/size][size=16px]。每组均设置对照组及空白组（仅有同体积培养基）。H69、H82、H526 的对照组和实验组[/size][size=16px]加药浓度梯度为 0、1、2、4、8、16、32、64 nmol/mL，SW1271 对照组和实验组细胞加药浓度梯度为 0、2、4、8、16、32、64、128、256 nmol/mL，（加药浓度梯度根据细胞类型、前期预实验结果及细胞对药物的敏感程度而定）。每种浓度设 6 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]复孔，每孔总体积为 100 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px]，培养 24、48、72、96、120 h 后[/size][size=16px]分别检测细胞活力。每孔加入[/size][size=16px] 10 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px] 的 CCK-8[/size][size=16px]（避光），培养箱中孵育[/size][size=16px] 4 h 后取出，使用酶标仪测定波长为 450 nm 的吸光度（OD 值）。利用公式：抑制率=（加药组－空白组）/（对照组－空白组）计算增殖抑制率。实验重复 3 次，取平均值。以药物浓度为横坐标，细胞增殖抑制率为纵坐标，利用[/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 绘图。[/size] [size=16px]敲低[/size][size=16px] MSI1 对人小细胞肺癌细胞增殖能力的影响[/size][size=16px]CCK-8 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲[/size][size=16px]瓒[/size][size=16px]，生成的甲[/size][size=16px]瓒[/size][size=16px]物的数量与活细胞的数量呈正比，因此可以直接进行细胞增殖和毒性分析。[/size][size=16px]CCK-8 法 测 生 长 曲 线 实 验 结 果 如 图[/size] [size=16px]3-1 显 示 ， 实 验 组 H69-shMSI1-1 、[/size][size=16px]H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、[/size][size=16px]SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 OD [/size][size=16px]值明显[/size][size=16px]低于对照组。[/size][size=16px]表明敲低[/size][size=16px] MSI1[/size][size=16px]抑制了[/size][size=16px] SCLC 细胞的生长增殖。[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302321138249_2126_5887180_3.png[/img][size=16px] [/size][size=16px]图[/size][size=16px] [/size] [size=16px]MSI1 低表达对 H69、H82、H526、SW1271 对照组和实验组细胞增殖的抑制情况。应用 [/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 作图所示（*P0.05,**P0.01,***P0.001,表示与对照组相比，[/size][size=16px]敲低组[/size][size=16px] OD 值减小[/size][size=16px]具有统计学意义）。[/size] [size=16px]测敲低[/size][size=16px] MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响[/size][size=16px]药敏实验结果如图[/size][size=16px] 3-2 所示，与对照组相比，实验组 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、[/size][size=16px]SW1271-shMSI1-2 经不同浓度[/size][size=16px]顺铂处理[/size][size=16px] 24、48、72、96、120 h 后细胞的药物敏感性无明显变化。[/size][size=16px] [/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302321124223_9282_5887180_3.png[/img]
疟疾可通过激活天然免疫和特异性免疫反应，并抑制肿瘤血管生成，进而抑制肿瘤生长和转移；疟疾能让荷瘤的机体长期保存肿瘤特异性免疫记忆。广州科学家在肺癌的治疗研究上跨出可喜一步。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011092712042663.jpg广州科学家的研究表明，疟原虫感染（即疟疾）可抑制小鼠肺癌生长和转移。记者日前从中科院广州生物医药与健康研究院获悉，该院研究员陈小平领衔的团队与广州医学院呼吸疾病研究所所长钟南山院士合作开展的肺癌免疫治疗实验研究取得了系列进展，研究团队正在利用疟原虫作为载体研制治疗性肺癌疫苗。相关论文已于近日在线发表在美国《公共科学图书馆-综合》（PLoS ONE）。该论文以上述两个合作单位共建的呼吸疾病国家重点实验室为作者单位发表。灵感来源：疟疾发生越严重地区，肺癌发病率和死亡率越低陈小平说，他和他的团队最早关注到的是疟疾发病率跟肺癌发病率和死亡率成反比的关系。他说，通过对世界卫生组织数据库20多年来的数据进行分析，他们发现，疟疾发生越严重的地区，肺癌发病率和死亡率越低，反之亦然。即使在同一国家，“这种消长趋势也很明显。”于是，他们决定在小鼠身上做实验，以证明疟疾发生对肺癌是否有抑制作用。他们将小鼠分成两组，一组小鼠只打入肺癌细胞，另外一组同时打入疟原虫和肺癌细胞，然后进行观察。可喜发现：疟疾感染明显抑制小鼠肺癌的生长和转移经过5年的反复多批实验和观察，研究人员发现：没有经过疟原虫感染的小鼠肿瘤生长迅速，很快发生转移和死亡；经过疟原虫感染的小鼠肿瘤生长缓慢，很少发生转移，寿命显著延长，其中约有10%的小鼠肿瘤全部消退。研究人员进一步发现，当小鼠肿瘤生长到一定程度时，用手术摘除肿瘤病灶，然后将手术后的小鼠分为两组，一组接种疟原虫，另一组不接种疟原虫，结果显示，接种疟原虫小鼠的寿命显著比没有接种疟原虫的小鼠的寿命长。这提示，已经发生转移的肿瘤细胞也受到疟原虫感染的抑制。显然，疟原虫感染（疟疾）能够显著抑制小鼠肺癌的生长和转移，显著延长荷瘤小鼠的生存时间；同时，研究人员还发现，疟原虫感染能明显抑制肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤血管的生成。陈小平解释：“肿瘤血管的生成受到抑制，使肿瘤的供血不足，就可以抑制肿瘤的增大。”研究结果：疟疾可增强机体对肺癌免疫力陈小平介绍，研究人员进一步进行了免疫学机理研究。他们发现，疟原虫感染激活了小鼠机体的天然免疫系统，诱导产生了大量的IFN-γ和TNF-α等细胞因子，而IFN-γ和TNF-α对肿瘤就有很明显的抑制作用。同时，疟原虫感染还使小鼠机体内一种叫自然杀伤（NK）细胞的免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性明显增强。“机体内拥有的IFN-γ和TNF-α细胞因子和NK细胞属于一种天然免疫。”陈小平说，“感染疟疾会增强小鼠对肺癌的天然免疫力。”“疟疾还可以诱导产生一种针对肿瘤的获得性免疫反应。”陈小平解释，疟疾可以激活一种树突状细胞，增强其吞噬抗原的能力，并把抗原提交给一种可以抑制肿瘤细胞的T细胞。陈小平说，疟疾可诱导机体产生肿瘤局部及全身系统性的肿瘤特异性免疫反应，能使大约10%荷瘤小鼠的肿瘤完全消退，并能长期保存有效的肿瘤特异性免疫记忆。总之，疟疾可通过激活天然免疫和特异性免疫反应，并抑制肿瘤血管生成，进而抑制肿瘤生长和转移。前景：有望研发新型有效的治疗性肺癌疫苗“当然，我们现在的研究还只是在实验室阶段，还不能马上应用到临床肺癌病人的治疗。”陈小平说，不过，肿瘤的实验研究不像艾滋病研究那样需要猴模型等大动物模型，只要在小鼠模型实验成功，就可能申请临床试验。“也就是说，根据我们现有的研究结果，有可能考虑申请临床试验了。”陈小平说，这项研究有着积极的应用前景。“良性疟疾可能用于肺癌的免疫治疗，也可能作为携带肿瘤抗原的新载体用于开发新型有效的治疗性肺癌疫苗。”他说，研究还发现，疟原虫感染与肺癌DNA疫苗联合应用有明显的协同作用。“目前，我们已经在研发治疗性肺癌疫苗。”他说，“主要是把肿瘤抗原的基因克隆到疟原虫的基因组里，同时利用基因敲除法，敲除疟原虫的毒性基因，希望能够制成安全有效的治疗性肺癌疫苗。”关于疫苗制成的时间表，他说，尚不能确定。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011092712033212.jpgdoi:10.1371/journal.pone.0024407PMC:PMID:Antitumor Effect of Malaria Parasite Infection in a Murine Lewis Lung Cancer Model through Induction of Innate and Adaptive ImmunityLili Chen, Zhengxiang He, Li Qin, Qinyan Li, Xibao Shi, Siting Zhao, Ling Chen, Nanshan Zhong, Xiaoping ChenBackground：Lung cancer is the most common malignancy in humans and its high fatality means that no effective treatment is available. Developing new therapeutic strategies for lung cancer is urgently needed. Malaria has been reported to stimulate host immune responses, which are believed to be efficacious for combating some clinical cancers. This study is aimed to provide evidence that malaria parasite infection is therapeutic for lung cancer.Methodology/Principal Findings：Antitumor effect of malaria infection was examined in both subcutaneously and intravenously implanted murine Lewis lung cancer (LLC) model. The results showed that malaria infection inhibited LLC growth and metastasis and prolonged the survival of tumor-bearing mice. Histological analysis of tumors from mice infected with malaria revealed that angiogenesis was inhibited, which correlated with increased terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated (TUNEL) st
肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是发病率高、治疗困难、死亡率高的恶性肿瘤，全球每年有1000000人死于肝癌。我国肝癌的死亡率在所有恶性肿瘤中居第二位，年死于肝癌的人数占全世界肝癌年死亡总数的53%。虽然肝癌的诊断和治疗有了长足的进步，但生存率在总体水平上变化不是很明显。迄今已建立的一系列人肝癌细胞系（cell line）和人肝癌细胞系的动物模型，为肝癌的发病机理和治疗研究奠定了良好的基础。咱们坛子里是否有做这方面工作的战友，分享一下相关文献。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=122088]人肝癌细胞系研究进展[/url]
[font='times new roman'][size=21px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=21px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响及相关机制研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=20px][color=#000000]实验方法[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞的生长增殖的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测小细胞肺癌细胞系生长增殖情况[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分别将对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞离心，并用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]完全培养基调整细胞浓度，以每孔[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个细胞平铺于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃恒温培养箱中培养。铺板后，分别于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]24 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]48 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]72 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在每孔加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]溶液，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5%CO[/color][/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养箱中孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。并用酶标仪测定波长[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]450 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，结果应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]t[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检验，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]计算增殖情况。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]用琼脂糖及[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ddH[/color][/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]O[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分别配置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.3%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.7%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的软琼脂凝胶，高压灭菌后维持[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]40[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃不会凝固，按[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1:1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]比例将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.7%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的软琼脂与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1640[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养基混合，将混合液置入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]6[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中冷却凝固半小时，作为底层琼脂置于培养箱中备用。分别将对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞计数，按[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1:1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]比例将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.3%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂凝胶与细胞悬液混合铺入上层，每孔细胞数为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1000[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个，注意不要产生气泡。每[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]天滴加少量培养基，防止干燥。待上层凝固后放入恒温培养箱中培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]周后拍照计数克隆形成数及单个细胞团细胞数目，比较两种细胞克隆形成能力的差异，结果应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]t[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检验，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]作图计算两种细胞克隆形成能力的差异。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]影响小细胞肺癌细胞的相关机制研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检测相关蛋白的表达[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]提取适量[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]：[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]稀释后，与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]200[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L BCA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]工作液混合均匀。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]30 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，用酶标仪测定波长[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]562 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。在蛋白原液中加入相应体积[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SDS Loading Buffer[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，沸水浴煮[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，分别取[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]g[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10% SDS-PAGE[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分离胶电泳。电泳结束后，将蛋白转至[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PVDF[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]膜上。用含[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]脱脂奶粉的封闭液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃封闭[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.5 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。弃去封闭液，用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，加入相应抗体，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃孵育过夜，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗膜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。加入相应二抗（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1:5000[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]），[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃敷育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗膜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。用增敏化学发光底物试剂检测，暗室曝光显影。重复多次实验，应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ImageJ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]计算出各个蛋白条带的灰度对比，并应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]作出柱状图。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000] MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞生长增殖能力的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞增殖能力的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]试剂可用于检测细胞生长增殖能力，过程简便精确。其基本原理为：试剂中含有的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]WST-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2-(2-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]甲氧基[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-4-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]硝基苯基[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])-3-(4-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]硝基苯基[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])-5-(2,4-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]二磺酸苯[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])-2H-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]四唑单钠盐），在电子载体的作用下被细胞中的脱氢酶还原为黄色甲瓒产物。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]酶标仪测定[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]450 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]可间接反映活细胞数量。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞增殖能力，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值明显低于对照组，并且增长变化不明显。表明，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达抑制小细胞肺癌细胞的生长增殖。[/color][/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203024978_3594_5389809_3.png[/img][/align][font='times new roman'][color=#000000] H69-NC[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]细胞生长曲线。应用[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]作图所示（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05,**[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.01,***[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.001,[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]OD[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]值减小具有统计学意义）。[/color][/font][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂克隆形成实验检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞单细胞克隆能力的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂克隆形成实验能够检测悬浮细胞单个细胞克隆形成的能力，培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]周后肉眼可见克隆形成，拍照并分别计数两种细胞克隆形成数量及单个克隆细胞团的细胞数目。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]所示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]形成的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]克隆数目[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]明显[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]减少[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]P[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]＜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.01[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，克隆细胞团体积明显较小，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]并且通过计数单个克隆的细胞数发现，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组单个克隆的细胞数明显低于对照组（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]P[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]＜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.01[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）。该实验同样表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达对小细胞肺癌细胞的增殖具有抑制作用。[/color][/size][/font][font='times new roman'][color=#000000] [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] [/color][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203030673_3184_5389809_3.png[/img][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203032295_6922_5389809_3.png[/img][/align][/td][/tr][/table][font='times new roman'][color=#000000]琼脂克隆形成实验。（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）软琼脂克隆形成实验镜下观察；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）克隆形成率；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]c[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）单个克隆形成的细胞数（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]***[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组克隆形成率及单个克隆的细胞数减小具有统计学意义，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.001[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）。[/color][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]影响人小细胞肺癌细胞的相关机制研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后肿瘤干细胞标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]为目前已知研究较为广泛的的肿瘤干细胞标志物，为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在人小细胞肺癌细胞系中与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的相关性，分别提取对数生长期[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在蛋白质水平的表达量。结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]所示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达量明显降低。表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的敲低降低了小细胞肺癌细胞的干性，并且[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]具有相关性。[/color][/size][/font][table][tr][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203030163_8814_5389809_3.png[/img][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203031179_6656_5389809_3.png[/img][/td][/tr][/table][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白的表达[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]:[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白条带；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相对表达量[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白表达下降具有统计学意义，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）。[/color][/font][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]是否对小细胞肺癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程产生影响，分别提取对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]N-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vimentin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达量，结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]N-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vimentin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量明显下降，而[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量增加，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后，小细胞肺癌细胞的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程受到明显抑制。[/color][/size][/font][table][tr][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203035586_9939_5389809_3.png[/img][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203034079_6990_5389809_3.png[/img][/td][/tr][/table][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白表达：（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白表达条带；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相对表达量（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白表达下降具有统计学意义，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）。[/color][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞凋亡过程的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞凋亡是多基因调控的细胞程序性的死亡，为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在人小细胞肺癌细胞中对细胞凋亡的影响，提取对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白后，通过[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]验证细胞凋亡相关蛋白的表达，结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组凋亡相关蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved caspase9[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] c[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]aspase[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量明显上调，抗凋亡蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Bcl-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达下降，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达促进了小细胞肺癌细胞系凋亡过程。[/color][/size][/font][align=center][/align][align=center][/align][font='times new roman'][color=#000000]图[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]3-5 [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]凋亡相关蛋白[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表达：（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）凋亡相关蛋白表达条带；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）凋亡相关蛋白相对表达量（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05,**[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.01,[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组凋亡相关蛋白表达下降具有统计学意义）。[/color][/font][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]主要研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响及相关机制，首先利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验及软琼脂克隆形成实验验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后小细胞肺癌细胞的生长增殖能力。结果显示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组细胞生长速度明显减慢，单个细胞克隆能力明显降低，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后抑制了小细胞肺癌细胞系的生长增殖。通过[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测肿瘤干细胞标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达。结果显示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后肿瘤干细胞标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的敲低降低了小细胞肺癌细胞的干性，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达量可能与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]具有相关性，但具体机制尚不清楚，需进一步研究。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程是肿瘤转移[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程的关键步骤，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]敲低后间充质标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]N-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vimentin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降，而上皮标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量增加，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]敲低抑制了[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程。通过验证凋亡相关蛋白发现，凋亡相关蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved caspase9[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] c[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]aspase[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量明显上调，抗凋亡蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Bcl-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达下降，表明敲低[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后促进了凋亡的产生。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Wnt/[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]β[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-Catenin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]通路在细胞生长发育过程中具有重要作用，在多种肿瘤中表达失调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]β[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-Catenin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]是[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Wnt[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]信号通路关键下游靶点，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达使[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]β[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-Catenin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在人小细胞肺癌细胞中也通过激活[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Wnt[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]通路发挥作用。[/color][/size][/font]
新华社华盛顿11月20日电 （记者林小春）美国研究人员20日在美国《科学转化医学》杂志上报告说，他们开发出的一种微芯片可简单、快速地检测人体体液中是否存在癌细胞，这一成果将有助于早期的癌症诊断。 癌变细胞的变形能力要比正常细胞大得多。研究人员利用癌变细胞的这一特征开发出一种有多个小孔的微芯片，从胸水提取的细胞进入这些小孔后会撞上芯片的“墙壁”弹回而发生变形，变形程度会被高速成像设备记录下来，以每秒100个细胞的速度分析,从而判断是否存在癌细胞。 领导研究的美国加利福尼亚大学洛杉矶分校教授饶建宇对新华社记者说，他们利用微芯片检测了100多个样本，结果100％地找出了癌变样本。而现有的癌症检查方法通常只能检测出80％到90％。下一步，他们将开展更大规模的临床试验。 饶建宇说，目前的癌症检查往往是间接地判断癌变细胞的一些行为特征，如浸润性和转移能力、对药物的敏感性等，一般要先对细胞进行固定处理再染色，或提取DNA及蛋白成分等进行分析，程序多而复杂，但所得结果往往是片面和间接的。 而微芯片技术则是直接判断癌变细胞的物理及行为特征，无需对细胞处理或染色，因此简单而快速，也更加精确。饶建宇说：“这就好像判断一个人的角斗能力，光看高矮胖瘦或家庭背景等也许有一些帮助但不够，而直接的比赛是最管用的。” 他说：“人们谈癌色变往往是由于癌细胞具有浸润和转移的共性，同时又有千变万化的个性，因此以直接的方法来判断癌细胞的物理及行为特征尤为重要，这使得我们对癌细胞的认识更直接、全面和准确，对癌症的诊断由此上了一个新平台。”
http://photocdn.sohu.com/20120710/Img347740451.jpg 加州大学洛杉矶分校的工程师们开发了一种全新的光学显微镜，显微镜上配备了世界上最快速的相机，可用于探测“流氓”癌细胞。 【搜狐科学消息】据国外媒体报道，美国加州大学洛杉矶分校（UCLA）的工程师们近日研制出了一款世界上最快速的相机，可用于探测难以捉摸的“流氓”癌细胞。这一科研成果的研究报告发表在了最新一期的《美国国家科学院院刊》上。 从大量各类正常细胞中识别和分离出一些罕见细胞对于某些疾病的早期发现、监测和治疗来说正在变得越来越重要。这些罕见细胞中，在体内自由移动的癌细胞就是一个很好的例子。通常情况下，在10亿个健康细胞中也只有一小撮癌细胞，然而它们会抢先转移，癌细胞扩散导致癌症患者的死亡率高达约90%。这样的“流氓”细胞除了癌细胞以外，还包括用于再生医学的干细胞及其它类型的细胞。不幸的是，检测这样的细胞是很困难的。要取得良好的统计准确性需要一台自动化、高通量的仪器，可以在相当短的时间内对数以百万计的细胞进行检测。配备了数码相机的显微镜是目前分析细胞的唯一设备，但是该设备对于这项研究来说速度显得太慢了。 现在，美国加州大学洛杉矶分校（UCLA）的工程师们开发了一种全新的光学显微镜，可以让这项艰巨的任务变得轻松许多。加州大学洛杉矶分校电气工程学院的工程师巴赫拉姆•贾拉利(Bahram Jalali)说：“为了抓拍到这些难以捉摸的细胞，相机必须具备在非常高的帧速率下持续捕获并对数百万张图像进行数字化处理的能力。传统的CCD和CMOS摄像头达不到这样的速度和灵敏度，因为从像素阵列读取数据需要时间，它们在速度极快的情况下对光变得不那么敏感。” 目前的流式细胞仪具有较高的通量，但是因为它依靠单点的光散射而不是拍照，在检测非常罕见的细胞类型时还不够灵敏，比如对于那些目前处于早期阶段或癌细胞转移前的癌症患者不适用。为了克服这些限制，巴赫拉姆•贾拉利和UCLA的的生物工程学副教授迪诺•迪•卡罗（ Dino Di Carlo）领导的一个包括生物技术、光学、高速电子和微流体的跨学科研究团队开发出了高通量流式光学显微镜，这款显微镜非常灵敏，具备实时探测含量为百万分之一的罕见细胞的能力。 贾拉利的团队以他们在2009年创建的光子时间飞梭相机技术为基础，研制出了世界上最快的连续运行的相机。贾拉利、迪•卡罗和他们的同事在报告中描述了他们如何将这台相机与先进的微流体和实时图像处理技术进行整合，以对血液样本中的细胞进行分类。新的血液筛查技术每秒可筛查10万个细胞，比传统的基于成像的血液分析仪高出约100倍的通量。迪•卡罗说：“这项科研成果需要与一些尖端技术进行整合，通过生物工程部门、电气工程部门和加州纳米技术研究院的合作，并采用了UCLA细胞诊断学部门开发的重要的技术基础设施。”贾拉利和迪•卡罗均是加州大学洛杉矶分校的加州纳米技术研究院的成员。 他们的研究演示了如何实时辨别血液中罕见的乳腺癌癌细胞。初步结果表明，这种新技术有可能迅速地在大量血液中检测到极稀少的循环癌细胞，并将提高癌症早期检测、监测药物和放射治疗的效率。加州大学洛杉矶分校的电气工程和生物工程的项目经理本田惠介(Keisuke Goda)说：“这项技术可以大大减少错误，并将降低医疗诊断成本。” 研究人员通过将实验室生长的癌细胞与模拟现实生活中的病人的不同比例的血液进行混合得到了检测结果。加州纳米技术研究院的一名成员格达（Goda）说：“为了进一步验证该技术的临床应用效果，我们目前正在与临床医生合作进行临床试验。这项技术也将可能用于进行尿液分析、水质监测和相关的应用。”（尚力）
[align=left][font='黑体'][size=18px]肺癌[/size][/font][font='黑体'][size=18px]概述及早期诊断[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]由国际癌症研究机构发布的全球癌症统计数据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GLOBO-CAN2020[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]说明，我国肺癌发病率和死亡率分别占全球的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]37%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]40%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，肺癌防治已成为癌症防控的一大挑战。依据病理学类型不同，肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌。提升小细胞肺癌与非小细胞肺癌早期诊断的准确性有利于提高肺癌患者的预后生存率。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]肺癌是一种肺组织内细胞发生癌变的疾病。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肺癌的病因比较复杂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，如长期吸烟、大气污染等。肺癌的临床表现有咳嗽、胸痛、咳血、发热和气急等。咳嗽常表现为阵发性刺激咳嗽，咳血则是持续性或反复性产生少量血痰。肿块会阻塞、压迫大支气管，造成患者胸闷气急。对于晚期肺癌患者，容易发生脑转移或肝转移和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]骨转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，根据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2020[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]年美国最新统计数据显示，早期肺癌的总生存率不超过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]31%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，肺癌转移后的生存率更是不到[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3%[/size][/font][font='宋体'][size=16px]。[/size][/font] [font='黑体'][size=17px]非小细胞肺癌和小细胞肺癌[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]非小细胞肺癌，又称“非小细胞癌”，是肺癌的一种。非小细胞肺癌包括鳞状细胞癌、大细胞癌和腺癌。吸烟者或有吸烟史人群易患肺癌。非小细胞肺癌约占所有肺癌的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]80-85%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。非小细胞肺癌细胞的生长分裂速度比小细胞肺癌细胞慢，在患者体内扩散和转移较晚。非小细胞肺癌的生存率取决于分期和类型，早期肺癌的五年生存率超过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。目前临床主要采用化疗手段治疗。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]小细胞肺癌是一种侵袭性很强的神经内分泌瘤，进展迅速，吸烟者或有吸烟史人群易患癌。小细胞肺癌约占肺癌病例的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]15-20%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。大多数小细胞肺癌在发现时已发生局部转移。小细胞肺癌的生存率相对较低，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]年生存率约为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font] [font='黑体'][size=17px]肺癌的诊断方法[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]目前，小细胞肺癌与非小细胞肺癌的诊断主要依赖于影像及病理切片结果。高危人群如肺部结节患者可以通过低剂量螺旋[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]筛查发现早期肺癌患者，结合穿刺或手术局部切除进行冰冻切片确诊。病理诊断还包括对免疫组化的评估，有助于确定肺癌的类型、分期和治疗方案。以非小细胞肺癌为例，病理组织大切片技术能够分析组织异质性，以确定癌症的组织类型和分化程度。除影像学与病理组织切片方法以外，诊断时还可以检查血液中的癌症标志物，如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CEA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CA125[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CYFRA21-1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等。另外，诊断有时使用基因检测来检测肺癌相关基因突变，以辅助诊断和指导治疗。[/size][/font] [align=left][font='黑体'][size=18px]肺癌早期诊断[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]已知小细胞肺癌与非小细胞肺癌患者的临床治疗手段大有不同，因此开发出用于小细胞肺癌与非小细胞肺癌的准确的早期诊断方法迫在眉睫。目前，常用的方法一是[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]检查，但[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]准确率高，且有辐射暴露风险；二是常规血液癌症标志物筛查，如癌胚抗原、细胞角蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]19[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]片段等，但假阳性率高、特异性有限；三是组织活检，组织活检的准确度较前两种方法高，但取材困难、患者依从性差[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][13][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可作为无创检测手段，与上述方法相比具有突出优势。研究证明，肺癌患者的某些[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]浓度高于健康人组[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][14][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]，这说明外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可应用于肺癌的诊断。另外，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可用于肺癌的分型诊断，如肺腺癌的特异性诊断标志物是[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir-30e-3p, mir-30a-3p, mir-181-5p[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir-361-5p[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][15][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]，而肺鳞癌的特异性诊断标志物是[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir-15b-5p, mir-10b-5p[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir320b[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][16][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。然而，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]诊断方法真正实现大规模临床使用前还需要克服提取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]难度较大、没有统一的标准等困难。[/size][/font] [align=left][font='黑体'][size=18px]外[/size][/font][font='黑体'][size=18px]泌体用于[/size][/font][font='黑体'][size=18px]癌症治疗[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]除用于分型诊断外，由于外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体对癌症细胞的增殖、转移等也有影响，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可开发[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]成靶向[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]药，用于癌症的治疗。有[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]研究称外泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导肺癌细胞上皮间充质转化，实验人员发现来自[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]A549[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H460[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体显著[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]促进了肺癌症细胞上皮间充质转化，并促进皮下异种移植瘤的生长[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][17][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]；另有研究报道，癌症相关成纤维细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CAFs[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以将外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]到肺癌细胞中，通过上调[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PD-L1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]抑制外周血单核细胞的杀伤作用，并通过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]OIP5-AS1/miR-142-5p/PD-L1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]轴促进[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肺癌进展[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][18][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。不仅如此，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CAFs[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]衍生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体也会被肺癌细胞内化、吸收，其外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体携带的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MiR-210[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]通过靶向[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UPF1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]激活[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PTEN/PI3K/AKT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]通路诱导癌症细胞上皮间充质转化，进而促进肺癌的迁移和侵袭[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][19][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font]
http://www.stdaily.com/stdaily/pic/attachement/jpg/site2/20120113/00241d8fef0e1079d1f91e.jpg美国陆军开发出超级抗癌药物腾讯科技讯（亮亮/编译） 据国外媒体报道，来自美国陆军部队的专家近日在位于德克萨斯州的圣安东尼奥市军事医疗中心成功研制出一种名为“E-75”的超级抗癌药物，对多种肿瘤的治疗都具有很好的效果。据了解，研究人员研制这种化学药物最开始的初衷是为了降低乳腺癌的再发率，但在研究的过程中，研究人员却意外的发现这种药物同时还具有其他的功效。因为，那些吞服了这种药物的人们与服用普通控制药物的人们相比，前者患上结肠癌、前列腺癌、肺癌的概率有了明显的降低。研究人员在实验中选择了一些经基因测试或医疗审定后，被断定为有患上乳腺癌危险的女性，并将其分为两组，一组吞服控制性药物，另一组吞服了“E-75”药物。研究结果显示，吞服“E-75”药物的研究对象的乳腺癌再发率仅有10%，而吞服控制药物的一组竟高达20%。这就意味着超级抗癌药物“E-75”具有着正面积极的保护作用。研究人员之所以会选择这样的研究方法，是因为避免出现类似人们在感染流感后再注射流感疫苗的现象。研究人员解释说，抗癌药物“E-75”的“工作方式”相对来说较为简单，它能够成功的在人们体内建立一个特有的免疫系统，这种系统能够搜寻、识别以及确认呈现在多种类型癌细胞表面的蛋白质，从而对应的进行免疫。但是并不是所有肿瘤都是由分泌这种蛋白质分子的细胞组成的，这也是为何抗癌药物“E-75”不能治疗目前所有癌症类型的主要原因。而且，抗癌药物“E-75”在人体内所建立的特有免疫系统不能击败所有癌症细胞的主要原因之一，还因为有一些癌细胞具有“欺骗”免疫系统的功能，以至于当免疫系统进行识别时，会把这些癌细胞误认为是人体的一部分。但是一旦免疫系统“揭穿”这些癌细胞的“伪装面具”，它们就会毫不留情的对这些癌细胞进行消灭，不留任何一个“活口”。但是即便这样，研究人员仍然坚信，只要在该药物的基础上继续进行研究，未来一定会出现治疗癌症的新型药物和治疗方法，它们定会拥有帮助全世界数百万人改善生活质量的巨大潜力。研究人员表示，它们在过去几十年的主要研究任务就是激活该独特的免疫系统，这也是与癌症“战斗”的主要方法之一。该军队的陆军上校补充解释道，现在出现的关键问题是大多数癌症疫苗在被发现时，癌症患者往往已经处于癌症末期或晚期，因此通过直观的方式去检查是没有意义的。(中国科技网)
石榴汁的成分能抑制癌细胞迁移 在美国细胞生物学会于费城召开的第50届年会上公布了这项研究根据今天在美国细胞生物学会(American Society for Cell Biology)于费城举行的第50届年会上公布的一项研究，加州大学里弗赛德分校(UCR)的科研人员发现石榴汁中的一些成分似乎能够抑制癌细胞的运动并且削弱它们被一种化学信号吸引的能力，这种信号已经被证明能够促进前列腺癌向骨的转移。加州大学里弗赛德分校(UCR) Manuela Martins-Green博士实验室的科研人员打算在一个前列腺癌体内模型中进行进一步的测试，从而确定这两种成分的剂量依赖性效应和副作用。石榴汁对前列腺癌恶化的作用即便存在，也是有争议的。在2006年的一项针对每天饮用一杯8盎司石榴汁的前列腺癌患者的研究中，加州大学洛杉矶分校（UCLA）的科研人员检测到了前列腺特异性抗原（PSA）水平的下降，这提示癌症恶化可能减缓。加州大学洛杉矶分校（UCLA）的科研人员并没有设法描述该研究中石榴汁效应背后可能的生物机制。
广州中山大学研究发现天然病毒M1可杀灭癌细胞中新网广州10月13日电(许青青 蔡珊珊) 记者13日从广州中山大学获悉，该校中山医学院颜光美教授课题组研究发现天然病毒M1能选择性地感染并杀伤包括肝癌、结直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤在内的多种体外培养的癌细胞，而对正常细胞无毒副作用。全球癌症发病率呈现快速增长态势，现有的治疗手段远远未能满足临床需求。颜光美教授课题组发现，M1病毒是一种从中国海南岛分离得到的天然病毒，能选择性地感染并杀伤包括肝癌、结直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤在内的多种体外培养的癌细胞，而对正常细胞无毒副作用。整体动物实验表明，经尾静脉注射的M1病毒能显著富集在肿瘤组织并抑制肿瘤生长，正常器官则不受影响。除细胞水平及动物实验之外，课题组还使用临床标本离体活组织培养模型进一步证实了上述新型溶瘤病毒的有效性和特异性。据悉，该研究成果对阐明新型天然溶瘤病毒M1选择性杀伤肿瘤细胞的机制和研发新型靶向抗肿瘤药物都具有重要意义。相关资料：癌细胞增殖方式癌细胞是一种变异的细胞，是产生癌症的病源，癌细胞与正常细胞不同，有无限生长、转化和转移三大特点，也因此难以消灭。癌细胞由“叛变”的正常细胞衍生而来，经过很多年才长成肿瘤。“叛变”细胞脱离正轨，自行设定增殖速度，累积到10亿个以上我们才会察觉。癌细胞的增殖速度用倍增时间计算，1个变2个，2个变4个，以此类推。1912年8月13日，法国医生发现癌细胞。
加拿大研究人员11月9日报告说，吸烟者罹患的肺癌与非吸烟者罹患的肺癌有着不同的基因突变，看起来不是同一种癌症。研究人员指出，这一发现有着重要意义，因为这意味着应该针对不同肺癌的不同基因变异进行相应的研究、治疗和诊断，而不是对所有患者采用同一套方法。据《温哥华太阳报》报道，加拿大不列颠哥伦比亚省癌症中心的研究人员利用基因分析技术，比较了两组肺癌患者的组织样本，一组是30名从未吸烟的患者，另一组是53名当时吸烟或曾经吸烟的患者。分析发现，从未吸烟者肺部肿瘤里的DNA突变数量是吸烟者或曾经吸烟者的近两倍，两类患者的肺癌可能有着不同的分子机制。研究人员8日在美国费城举行的美国癌症研究协会的一个会议上提交了相关报告。研究人员说，香烟中的致癌物引发基因突变，导致癌细胞生长，而新研究显示，导致非吸烟者罹患肺癌的可能是其他致癌物，并非来自香烟。由于人们常常以为从未吸烟者不会得肺癌，因此非吸烟的肺癌患者被确诊时通常已经到了无法治愈的晚期，如何早期发现非吸烟者的肺癌是一个重要课题。据报道，加拿大正在开展如何有效进行肺癌早期诊断的研究。过去30年里，加拿大采用现行的管理方法，仅使肺癌死亡率下降了3%。研究人员希望找到一套有效的肺癌筛查方法，能让肺癌死亡率下降20%。
美国北卡罗莱纳大学教堂山分校文理学院的首席化学教授约瑟夫—德西蒙博士领导的研究小组发现，人体中的一种正常的良性蛋白质，如果和纳米粒子相结合，就能瞄准并杀死癌细胞，而无须负载那些携带化疗药物的粒子。此前，研究人员曾认为，纳米粒子只有携带了有毒的化学载体才能达到这样的效果。转铁蛋白是人体血液中数量第四多的蛋白质，近20年来一直被作为肿瘤靶向载体用以递送治癌药物。纳米粒子通常也是无毒的，需要通过负载标准化疗药物来治疗癌症。然而，结合转铁蛋白的“打印”纳米粒子，不仅能识别它们，还能诱导癌细胞死亡。而不与任何纳米粒子结合的自由转铁蛋白，能从拉莫斯癌细胞中获得养料生长，即使在很高浓度下也不会杀死任何拉莫斯癌细胞。然而令人吃惊的是，转铁蛋白附着在纳米粒子表面后，其能有效地筛选标靶，攻击并杀死B细胞淋巴瘤。在许多迅速生长的癌细胞表面，蛋白质受体被过度表达，于是和转铁蛋白配体结合的治疗就能找到并瞄准它们，而结合转铁蛋白的纳米粒子被认为是安全且无毒的。德西蒙实验室发明了一种“打印”技术，能人为造出尺寸精确且形状符合预期的纳米颗粒。他们采用这种技术制作出一种可与人类转铁蛋白相结合的生物相容性纳米粒子，其能安全且精确地识别广谱癌症，除了B细胞淋巴瘤外，还能有效地指向非小型细胞，如肺、卵巢、肝脏和前列腺的癌细胞。研究人员目前正在进一步研究，携带转铁蛋白的纳米粒子如何及为何对于拉莫斯癌细胞是有毒的，而对其他细胞却无毒。化学治疗和放射治疗曾被认为是癌症的最有效疗法，但这些疗法通常会损害健康组织和器官。这一发现将可能发展出一种全新的策略来治疗某种类型的淋巴瘤，而副作用更小。不过，德西蒙承认，该研究也会引起一些人对不可预期后果的担忧，即一个设计好的针对某类癌症的靶向化疗载体是否会偏离目标。
噪音可抑制癌细胞的生长速度！是真的吗？
http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201112/2011121209251602.jpg肺腺癌是常见于非吸烟者的一种非小细胞肺癌形式，间皮瘤是能被石棉触发的一种罕见癌症。纽约大学癌症研究所研究人员正在从事于一种血液测试，这种血液测试的目的是测定与这些癌症形式相关的抗体，早期诊断疾病，甚至点出高风险的人。肺腺癌和间皮瘤癌细胞在它们的表面有聚糖生物标志物，病人甚至是早期的也有这些聚糖的抗体，研究人员已创造了用286个不同聚糖点提前制备的印刷聚糖芯片。作为高能量平台的一部分，这能被用于筛查血清样本来鉴定生物标志物。课题组正在比较来自患恶性间皮瘤病人的与接触石棉但无疾病症状的高疾病风险人的血清。虽然这个测试是在非常早的阶段，但它能帮助医生提醒有发生这些癌症风险的人。这可能尤其对可能没有被正式地筛查的非吸烟者有用，对那些可能对治疗反应不好需要更侵略性治疗方法牟疾病晚期病人也一样有用。这将允许为病人特定治疗和更好结果的治疗（与在医疗系统上更低负担一样），也能帮助鉴定药物发展的新路线。
转铁蛋白与纳米粒子结合就可瞄准并杀死拉莫斯癌细胞，而无需负载其他化疗药物，此项发现将有望发展出癌症靶向治疗的新策略。 相关研究成果发表在本周的《美国化学协会杂志》上。 美国北卡罗莱纳大学教堂山分校文理学院的首席化学教授约瑟夫德西蒙博士领导的研究小组发现，人体中的一种正常的良性蛋白质，如果和纳米粒子相结合，就能瞄准并杀死癌细胞，而无须负载那些携带化疗药物的粒子。此前，研究人员曾认为，纳米粒子只有携带了有毒的化学载体才能达到这样的效果。 转铁蛋白是人体血液中数量第四多的蛋白质，近20年来一直被作为肿瘤靶向载体用以递送治癌药物。纳米粒子通常也是无毒的，需要通过负载标准化疗药物来治疗癌症。然而，结合转铁蛋白的“打印”纳米粒子，不仅能识别它们，还能诱导癌细胞死亡。而不与任何纳米粒子结合的自由转铁蛋白，能从拉莫斯癌细胞中获得养料生长，即使在很高浓度下也不会杀死任何拉莫斯癌细胞。 然而令人吃惊的是，转铁蛋白附着在纳米粒子表面后，其能有效地筛选标靶，攻击并杀死B细胞淋巴瘤。在许多迅速生长的癌细胞表面，蛋白质受体被过度表达，于是和转铁蛋白配体结合的治疗就能找到并瞄准它们，而结合转铁蛋白的纳米粒子被认为是安全且无毒的。 德西蒙实验室发明了一种“打印”技术，能人为造出尺寸精确且形状符合预期的纳米颗粒。他们采用这种技术制作出一种可与人类转铁蛋白相结合的生物相容性纳米粒子，其能安全且精确地识别广谱癌症，除了B细胞淋巴瘤外，还能有效地指向非小型细胞，如肺、卵巢、肝脏和前列腺的癌细胞。 研究人员目前正在进一步研究，携带转铁蛋白的纳米粒子如何及为何对于拉莫斯癌细胞是有毒的，而对其他细胞却无毒。 化学治疗和放射治疗曾被认为是癌症的最有效疗法，但这些疗法通常会损害健康组织和器官。这一发现将可能发展出一种全新的策略来治疗某种类型的淋巴瘤，而副作用更小。 不过，德西蒙承认，该研究也会引起一些人对不可预期后果的担忧，即一个设计好的针对某类癌症的靶向化疗载体是否会偏离目标。（科技日报）
【西班牙《国家报》1 0月26日报道】巴塞罗那瓦尔德希伯伦大学附属医院的一个研究小组日前宣布，确认了癌细胞的一种基因物质能够使恶性肿瘤不老化并失控地增殖。 玛蒂尔德·列奥纳特医生领导的这项研究成果刊登在《医学研究评论》杂志上。研究报告指出，小核糖核酸(m icroARNs)对细胞不死发挥了突出的作用。 核糖核酸在蛋白质的生成过程中起到重要作用，但此前对小核糖核酸的功用实际上并不了解。最新研究表明，小核糖核酸与另一种遗传物质之间相互作用，阻断或激活细胞的增殖过程。瓦尔德希伯伦大学的研究小组已经确认了28种能使癌细胞继续增殖的小核糖核酸。研究人员认为，对这些小核糖核酸采取行动会为阻止甚至消除癌细胞的这种特性打开大门，是在抗击癌症方面的一大显著进步。癌细胞会不停地分裂和增殖，而健康细胞能够进行40-60次分裂，然后就停止分裂，最终死亡。 癌细胞的有害之处正是其不老化的能力，这种能力使其成为一种不死组织，因为它在不会自我消灭的同时还毫无控制地成倍增加。新研究成果确认了造成这种不死特性的小核糖核酸，便于今后研究出一种能够阻断这种能力，让癌细胞像健康细胞一样老化和自我毁灭的机制。 （来源： 新华国际）
医学研究证明，长期处于高电磁辐射的环境中，会使血液、淋巴液和细胞原生质发生改变。电磁辐射过度还会影响人体的循环系统、免疫、生殖和代谢功能，严重的还会诱发癌症，并加速人体的癌细胞增长。专家提醒消费者——由于电脑产品具有生产组装过程相对简单，市场需求较大的特点，吸引了很多企业加入电脑的生产行业。目前国家信息技术设备电磁兼容性标准要求在生活环境中使用的电脑产品辐射干扰指标要达到《信息技术设备的无线电骚扰限值和测量方法》中B级限值的要求。非生活环境中使用的电脑产品辐射干扰指标要达到A级限值的要求。抽查结果表明，一些企业在批量生产时产品一致性没有很好的控制，致使被抽样品电磁兼容辐射干扰指标达不到B级限值的要求。辐射干扰是台式电脑工作时向空间发射的一种电磁波干扰。医学研究证明，长期处于高电磁辐射的环境中，会使血液、淋巴液和细胞原生质发生改变。此外，电磁辐射过度会影响人体的循环系统、免疫、生殖和代谢功能，严重的还会诱发癌症，并加速人体的癌细胞增长。这种电磁辐射污染已经成为室内环境污染的新威胁。庭用户要尽量避免把家电摆放得过于集中，以免使自己暴露在超限量辐射的危险之中。特别是一些易产生电磁波的家电，如电脑、电视、冰箱、收音机等，最好不要集中摆放在卧室里。要避免长时间使用家用电器、手机等，还要尽量避免同时启用多种家电。与家电保持安全距离很有必要，距离越远，受电磁波侵害就越小。另外，必须长期处于高电磁辐射环境中工作的人需要多食用胡萝卜、豆芽、西红柿、油菜、海带、卷心菜、瘦肉、动物肝脏等富含维生素A、C和蛋白质的食物，以此加强机体抵抗电磁辐射的能力。
记者5月26日从南开大学获悉，该校物理科学学院田建国、刘智波研究组利用全内反射下石墨烯对介质折射率异常敏感的光学现象，实现了超灵敏单细胞实时流动传感。这一成果可以使癌细胞在形成之初即被精确“光测”出来，将为癌症预防提供一条新途径。 石墨烯是一种呈蜂巢状排列的单层碳原子结构，是目前已知的最薄、最坚硬的纳米材料。在全内反射这种特殊的结构下，对于介质折射率异常灵敏是石墨烯材料的重要特性之一。田建国、刘智波领导的研究组发现，折射率的灵敏度与石墨烯的层数有极大关系，并且层数有一个最优值。他们通过与南开大学化学学院陈永胜课题组合作，不断控制石墨烯的层数，最终制出厚度为8个纳米的石墨烯材料，其折射率的灵敏度和分辨率达到目前国际上最高水平。 在此基础上，课题组结合微流体技术和病变细胞的折射率差异，将这一超高的折射率灵敏度成功应用于单细胞传感。记者在实验室看到，实验人员将制备出的8纳米厚石墨烯均匀铺于一块三棱镜的一面，紧贴石墨烯上方建有一条细胞通道。实验时，一束光从棱镜一面射入，穿透石墨烯照射在细胞通道上，反射光从棱镜另一面射出。实验人员通过光电转化，即可得到一份波形图。如果细胞通道中存在癌细胞，则波形图上将会呈现出明显的波峰。即使数千个正常细胞中有一个发生了病变，这种“光测”方法都可以将其准确识别出来。 该课题组论文已在国际纳米科学技术领域权威刊物《Nano Letters》上发表，美国著名的纳米技术与纳米科学网进行了同步报道。
近日来自哈佛大学、麻省理工学院以及瑞士苏黎世联邦高等工业学院的研究人员在新研究中成功地将生物“计算机”诊断网络导入到人类细胞中，这种生物网络通过对5种肿瘤特异性分子进行逻辑组合分析识别出了特异的癌细胞，并触发了这些癌细胞的毁灭过程。这一研究成果在线发表在9月2日的《科学》（Science）杂志上。文章的通讯作者是哈佛大学系统生物学中心的生物工程学家Yaakov Benenson及麻省理工大学的Ron Weiss教授。Benenson长期致力于开发在活体细胞内运作的生物计算机。生物计算机是一种完全由DNA、RNA及蛋白质构成的分子自动机（molecular automata），它们的“输入”是细胞质中的RNA、蛋白质以及其他化学物质，“输出”的则是很容易辨别的分子信号。由于生物计算机能够探测和监控基因突变等细胞内一切活动的特征信息，因此它们可以确定癌细胞等病变细胞。此外，它们还能够自动激发微小剂量的治疗行为。利用这些“分子医生”将有望引发人类医学的重大变革——明确地对人体病变细胞或组织进行治疗，而健康的细胞完全不会受到干扰。不过，要最终实现这一目标，还有很长的路要走。科学家近期进行的一些相关研究，大都是尝试以不同方式开发具有多种用途的生物计算机。在这篇文章中，研究人员成功构建了一个多基因合成“电路”，此电路负责鉴别肿瘤细胞与正常细胞，进而靶向性摧毁识别的肿瘤细胞。其具体工作原理是：对细胞内5种肿瘤特异性分子及出现频率进行抽样及综合分析。是由当5种因子同时在细胞内出现时，该电路才做出正识别响应。这使得肿瘤检测的精确性大大增高。研究人员希望这一成果能为开发出特异的抗癌治疗奠定基础。随后科学家们用这一多基因合成网络对实验室中培养的两种人类细胞Hela细胞（一种子宫颈癌细胞）和正常细胞进行了检测。当遗传生物计算机被导入到这两种不同的细胞类型中时，只有Hela细胞被摧毁，而正常细胞则安然无恙。获得这一结果并非易事，研究人员为之投入了大量的基础工作。Benenson及同时首先针对正常健康细胞和Hela细胞中的miRNA分子进行了高通量筛查，最终确定了能将Hela细胞从健康细胞中鉴别出的5种特定的miRNA组合。“这些miRNA分子被导入到细胞中进行检测。新型的生物计算机利用诸如‘是’与‘非’的逻辑运算对这五种miRNA分子进行组合。只有当对所有分子的整体运算结果为逻辑‘真’时才会生成需要的结果——即促使细胞死亡，”Benenson说。目前研究人员已确定这一生物计算机网络在活细胞中能够非常稳定地工作，准确组合所有细胞内因子并生成正确答案，这代表着研究者们在该领域又向前迈进了重要的一步。 http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011090911135106.jpgdoi:10.1126/science.1205527 PMC:PMID:Multi-Input RNAi-Based Logic Circuit for Identification of Specific Cancer CellsZhen Xie, Liliana Wroblewska, Laura Prochazka, Ron Weiss, Yaakov BenensonEngineered biological systems that integrate multi-input sensing, sophisticated information processing, and precisely regulated actuation in living cells could be useful in a variety of applications. For example, anticancer therapies could be engineered to detect and respond to complex cellular conditions in individual cells with high specificity. Here, we show a scalable transcriptional/posttranscriptional synthetic regulatory circuit—a cell-type “classifier”—that senses expression levels of a customizable set of endogenous microRNAs and triggers a cellular response only if the expression levels match a predetermined profile of interest. We demonstrate that a HeLa cancer cell classifier selectively identifies HeLa cells and triggers apoptosis without affecting non-HeLa cell types. This approach also provides a general platform for programmed responses to other complex cell states.
[font=Arial,Helvetica,sans-serif]据日本共同社网站6月12日报道，日本群马大学副校长竹内利行（内分泌代谢专业）等人近日成功研发出了通过有机EL材料使体内的癌细胞发出红色可视光的新技术。极为细小的癌细胞若仅靠肉眼经常容易被忽视。据称，该技术在内视镜检查的配合下，有助于发现胃和肠等器官表面上细小的癌细胞。 据竹内等人介绍，有机EL材料“铱络化物”在特殊光线的照射下，在与空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]同的氧气浓度约20%的环境下不会发光，而在浓度低于10%时则会发光。癌细胞因扩散速度快而经常处于低氧状态，因此在“铱络化物”的作用下可以发光。 竹内等人将“铱络化物”注射到带有癌细胞的白鼠的静脉中，成功令发生癌变的部位发光。据称，实验中即使仅2毫米的癌细胞也可以识别，只要距离表面深度1厘米以内均可以发现。 该技术应用于人体时，通过从内视镜的前端喷射“铱络化物”，被消化道吸收后即可凭借发光与否识别癌细胞。与目前癌细胞检查所使用的正电子发射断层成像装置（PET）和磁共振成像装置（MRI）相比，此项技术的费用相对较低。[/font]
水果树莓可明显抑制肝癌细胞系增殖，使肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达减弱，并使抑癌基因野生p53的表达增强。由哈医大附属第四医院刘明博士完成的一项国家自然基金课题，首次成功锁定树莓预防肝癌生长的两个特异性蛋白质作用靶点，为果蔬预防原发性肝癌提供了重要的理论依据。这一成果近日获得2008年度黑龙江省医药卫生科技进步一等奖。 2000年，刘明博士赴美国康奈尔大学研修深造期间，尝试将树莓中的鞣化酸与肝癌细胞混合培养，发现前者能显著抑制后者的生长。近年来，他从医学、营养学等角度开展了“树莓预防及抑制肝癌机制的研究”。 研究结果表明，随着树莓中植物化学物质浓度的增加，总抗氧化自由基清除能力也随之增强。0.25毫克/毫升至10毫克/毫升的树莓提取物对肝癌细胞系HepG-2的抑制率呈逐渐增加趋势，最高抑制率可达90%%左右。 在利用化学毒物黄曲霉毒素和二乙基亚硝胺建立的稳定大鼠原发肝癌模型上，随着树莓提取物浓度的增高，实验组大鼠肝脏上的瘤径变小，肿瘤的数量减少，成瘤率减低，结节程度减轻；肝癌细胞VEGF、增殖细胞核抗原表达的程度亦明显降低。同时，实验组大鼠血清在两种特异蛋白(M2597、M4513)质峰上与树莓干预组及正常大鼠血清差异明显，说明蛋白质峰M2597、M4513极有可能为树莓预防肝癌的蛋白质作用靶点。 专家评价，今后，利用树莓中提取的植物化学成分，进行合理搭配及组成预防剂，十分有助于防范肝癌的发生，并能抑制肝癌的发展，提高患者生存率。
[font='times new roman'][size=14px]MSI1 调节小细胞肺癌增殖凋亡[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]简介[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，也是全球癌症死亡的主要原因[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。小细胞肺癌[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]small cell lung cancer, SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]发生率占肺癌的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]10%-15%[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]5 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]年生存率仅为[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]7%[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]具[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]有生长迅速、容易耐药、早期转移等特点，恶性程度在所有肺癌类型中最高，总体预后[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]差，未经治疗的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]患者生存期仅[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]2-4[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]个[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]月[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。大多数[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]患者在诊断时已处于广泛期，其预后极差，因此[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]对于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]SCLC [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]转移侵袭相关的分子机制的研究，有助于识别[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]SCLC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]新的生物标记物和治疗靶点。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]是一种高度恶性的肺神经内分泌肿瘤。有学者通过对[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表观遗传学和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]基因表达的研究发现，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]ASCL1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]NEUROD1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]揭示了[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的异质性[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][5][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，而最新研究基[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]于[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]中四个关键转录因子[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]ASCL1[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]NEUROD1[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]POU2F3[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]YAP1[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的差异表达，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]将其定义为[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC-A[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC-N[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC-P [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC-Y [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]四种亚型[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。尽管在早期发现和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]治疗方面取得了进展，但[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的死亡率仍在上升。因此，了解肿瘤发生发展的分子机制对于更好的诊断和预后是必需的。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Musashi1(MSI1) [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]是一种保守的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]RNA [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px], [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]最初在果蝇中被发现，位于染色体[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]12q24 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]上，编码一个[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]362-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]氨基酸多肽；[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]与真核转录起始因子[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]4G[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]eIF4G[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]竞争[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]多聚[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]A [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]PABP[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，以[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合其靶[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]mRNA [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]′[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]非翻译区[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]UTR[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]中的特定序列，从而抑制靶基因的翻译[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。作为一种[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]RNA [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合蛋白，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]已被证明参与许多与癌症有关的信号通路，其表达与肿瘤的发生发展密切相关[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][9-11][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Akt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路在肿瘤[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的发生发展中发挥重要作用，参与调节肿瘤细胞增殖、周期、凋亡以及肿瘤细胞与细胞外基质之间的相互作用[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]；研究发现[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]通过调节[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Akt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路的活性来[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]调节非[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]小细胞肺癌的恶性和化疗耐药性[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][14][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]也可以通过激活[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路促进宫颈癌细胞的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、侵袭和转移[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。另有研究发现[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表达增强会导致肿瘤的扩散和复发，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]高表达[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]被认为是生存率低和预后差的指标。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Moreira[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]等人发现[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]在[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]组织中普遍表达，因此本研究对[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]在[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]中的生物学功能和分子机制研[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]究进行了初步探索，旨在为[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]诊治提供新思路，为[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的治疗以及改善患者预后提供有力的临床前研究依据。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]上皮间充质转化（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]epithelial-mesenchymal transition[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）是肿瘤转移侵袭的主要[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]机制之一，具有促进肿瘤细胞恶性增殖、减少细胞凋亡和衰老、促进免疫抑制等作用[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][19][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]E-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]粘连蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]E-cadherin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表达下调或缺失、细胞极性的缺失都是[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的重要标志[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][20][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]N-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]钙粘蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]N-cadherin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、波形蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Vimentin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]属于间质细胞表型标记物，在[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]过程中，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]E-cadherin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的下调会伴随着[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]N-cadherin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]及[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Vimentin [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表达的上调，从而导致肿[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]瘤细胞骨架重排，促进肿瘤的转移[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][21[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]22][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。大量研究表明，在乳腺癌、结直肠癌、肺癌等[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]多种恶性肿瘤中，具有[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表型的肿瘤细胞可表现出高度的侵袭和转移能力，导致患者的预后极差[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。大量研究证明，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]过程受到多种通路的调控，进而促进[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]发生发展以及化疗的耐药性。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路调节生物体发育、体内平衡、愈合再生和维持干细胞等各种生物过程[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]通路传导缺失会导致发育缺陷、骨骼疾病，甚至参与调控乳腺癌、结直肠等恶性肿瘤的发生发展[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。尽管其主要通路成分已被确定，但[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号在肿瘤中的功能十分复杂，目前也只是部分了解。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号激活的转录反应是由细胞核内[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]β-catenin [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合因子的复杂网络所[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]导的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。大肠腺瘤性息肉病[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]adenomatous polyposis coli [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]APC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]基因的缺失是大肠癌中[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号传导的主要驱动因素，另外[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]R-spondin/Lgr5/RNF43 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]模块的突变也被认为是依赖[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]通路的肿瘤生长的驱动因素[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][35[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]36][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。另有研究发现，在[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]自体非小细胞肺癌模型中，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]配体抑制剂和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]aPD1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]联合治疗能减弱双重免疫检查点阻断反应[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]W[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]n[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]t[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]/β-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]cate[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]n[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]i[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]n[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路也是结肠癌的一个公认的驱动因素[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，因此对[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路的研究，可以为肿瘤的诊断治疗提供了新的方法和思路。[/size][/font]
西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡在我国，西达本胺已获批作为PTCL临床用药。西达本胺属于苯酰胺类化合物，是我国自主研发的首个亚型选择性口服HDACI，国家食品药品监督管理局已批准其用于临床试验，其选择性抑制I类HDAC1、2、3亚型和II类HDAC10亚型，可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡，阻滞周期、引发DNA损伤，还可以增强抗肿瘤免疫反应。与其他抗肿瘤药物相比，西达本胺疗效好、选择性高、不良反应少。西达本胺可激活死亡受体途径和线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡，其中最为主要的是线粒体凋亡途径，该途径受Bcl-2家族介导的细胞色素C释放通路调控。抗凋亡蛋白Bcl-2表达受到抑制，促凋亡蛋白Bax表达上调，使线粒体膜电位降低，细胞色素C释放到细胞质中，Caspase途径被激活，细胞发生凋亡。例如：西达本胺增强B淋巴瘤细胞组蛋白H3、H4 乙酰化水平，使线粒体膜电位降低随后激活Caspase 3，促进细胞凋亡；在肾癌中，它可以下调Bcl-2表达，上调Bax表达，随着药物浓度增加引起786-O 细胞凋亡。西达本胺可以调控ROS水平。HDACI可以上调ROS水平，导致DNA双链损伤。研究证明，西达本胺作用于白血病细胞后，诱导细胞内ROS产生，细胞凋亡增加[17]。此外，在胰腺癌细胞系中，西达本胺明显增强细胞内ROS的产生，上调γH2AX（DNA双链断裂的标志物）表达水平，诱发细胞DNA损伤。西达本胺通过调控细胞周期蛋白（Cyclin）、细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinases，CDKs）以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（Cyclin-dependent kinases inhibition，CDKI）的表达阻滞细胞周期。例如，西达本胺使MM细胞系P21、P27的表达量增高，CDK4、CDK6、Cyclin D2表达量下降，阻滞MM细胞系于G1期[19]。在NK/T细胞淋巴瘤中，西达本胺上调P21表达，下调Cyclin E表达，诱导细胞发生G0/G1期阻滞，从而抑制细胞的增殖。
有研究说足够浓度的维生素C可以杀死一类顽固癌细胞，对治疗胰腺癌、结肠癌和卵巢癌有疗效。所以多吃富含维生素C的蔬菜对健康很有帮助。
中科院深圳先进技术研究院医工所医学成像研究中心张丽娟副研究员近期在非实性肺癌肿瘤负荷的定量研究方面取得进展，相关成果发表在Radiology杂志上。 倍增时间在判断肿瘤的性质及预后方面具有重要临床意义。不同于实性肿瘤，非实性肺癌在体积增加之前常存在一段不确定的“内生长”期，即肿瘤组织向肺泡内空间填充，组织学上表现为癌细胞沿肺泡表面的增殖，而肿瘤的径线并无改变。这种生长方式使得经典倍增时间计算方法不再适用，长期以来该疾病的临床诊疗也因此颇受困扰。 医学影像技术的发展使得使用计算机辅助断层成像在体估算肿瘤负荷成为可能。该研究联合应用医学病理及影像的方法，全面分析了非实型肺癌的内生长模式，并对其肿瘤负荷作了定量分析，首次发现肿瘤的影像密度值每增加100单位，肿瘤负荷约增加10%。 该研究为有非实性肺肿瘤的生长提供了有效的评估方法，对肺癌的诊疗有重要临床应用价值。同时，也为丰富肺癌的WHO分期提供了新的思路。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201207/W020120711526142827307.jpg
我们体内所有的正常细胞都配备一种自动的自我摧毁机制：在经过大约60次分裂之后，它们都死亡。这种内在时钟引起癌症研究人员的极大兴趣，这是因为大多数类型的癌症在这种天生的定时机制上存在缺陷。癌细胞的分裂发生差错而不受控制，因而它们能够继续无限分裂下去而导致肿瘤快速生长。在一项新研究中，瑞士研究人员发现一种蛋白复合物参与这种不受控制的过程。2012年7月4日，相关研究成果发表在《自然》杂志上。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201207/2012070615373433.jpg
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