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氨基酚分析标准品

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  • 【原创】分享对乙酰氨基酚紫外标准曲线测定经验

    【原创】分享对乙酰氨基酚紫外标准曲线测定经验

    最近在做对乙酰氨基酚片溶出度实验,首先测定对乙酰氨基酚的标准曲线,给出的方法如下,仪器为TU1901,对乙酰氨基酚为对照品。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/05/200805302132_91355_1630080_3.jpg[/img]以上方法是一本教材上的方法,我们严格按照上述方法,溶剂也采用0.04%NaOH,定量测定结果如下,结果很不理想,重配标液后再测,结果同样不理想,后对每一标液做光谱扫描,标1至标4最大吸收波长均在257nm左右,标5和标6最大吸收波长则移动到243nm。 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/05/200805302137_91356_1630080_3.jpg[/img]经过反复查找资料和分析,推断标5和标6母液取样量大,破坏了溶剂的PH值,致使最大吸收波长发生迁移,遂将溶剂改为0.4%NaOH,重新配制标准溶液进行测定,如果如下图,相关系数很好。 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/05/200805302150_91359_1630080_3.jpg[/img][color=#DC143C][size=4]总结两点:一、溶液酸碱度对对乙酰氨基酚定量测定有较大影响,实验时应消除PH影响。二、教材及文献的实验方法应动手验证,否则也会有差错。[/size][/color]

  • 【求助】氨基酸标准品经异硫氰酸苯酯衍生,出现很多杂峰?

    这几天用岛津的碳18分析氨基酸,用的异硫氰酸苯酯为衍生剂。 用水代替氨基酸标准品,会出现很多杂峰,所以想应该是衍生过程引进的。衍生的方法是 标准品+三乙胺乙腈溶液+异硫氰酸苯酯乙腈溶液 反应一个小时候用正己烷萃取各位大虾有更好的衍生方法么?本实验室没有氮吹仪,没法吹干哦

  • 【求助】4-氨基安替比林法作酚的标准曲线时遇到的问题

    用4-氨基安替比林法作间甲酚的标准曲线时遇到的问题:1.配成国标中的酚浓度比色后用直接法测,在200~340nm之间有很大吸收,而在505~510nm有很平缓很小的吸收峰;2.加大酚浓度,为10mg/L时比色后生成橙红色,并且有许多红色沉淀。请各位帮忙分析一下,上述现象正常吗?请各位指点应该如何做。万分感激。

  • 【原创】食品中氨基酸分析方法(HPLC法)简述

    我以前搞过段时间食品中氨基酸分析,以下是一点自己的笔记。供参考。由于涉及到了一些公司的内容。所以,我不敢透露更具体的。理解。主要样品:含脂肪的肉汤,肉块等。氨基酸分析测试室使用安捷伦1100系列HPLC仪器,通过柱前衍生法分析氨基酸。我司提供食品,保健品,饲料等游离和水解氨基酸含量测试。仪器配置和原理:四元泵梯度切换——自动进样器——柱——紫外检测器——记录仪自动进样器是通过吸取OPA(邻苯二醛)和FMOC-Cl加入样品和标准品中,使样品和标准品中的氨基酸接上荧光基团,在分析柱中分离,后用荧光检测器检测。荧光法检测精度高,检测限低。样品前处理原理和操做步骤:游离氨基酸前处理原理:通过使用三氯乙酸溶液作为蛋白质变性剂,沉淀蛋白质,而不破坏溶液中氨基酸。与公司前处理比较:公司使用热水浴提取固体或液体样品。该方法不能有效地去处样品中(汤,肉等)蛋白质,致使样品中蛋白质悬浮于样品中,污染色谱柱,仪器。由于样品处理简单,对于复杂样品可能提取效率稍差。大致操作步骤:称样——10%三氯乙酸定容——放置——滤过——离心方法优点:能有效去处蛋白质,而不破坏样品中氨基酸。水解氨基酸原理:分析蛋白质或多肽氨基酸组成,需将各肽键裂解为游离氨基酸。一般使用强酸或强碱。本次学习是使用6mol/L盐酸消解,提取。操作步骤:称样于消解管——加盐酸——抽真空——封口——烘箱消解——定容——蒸干——加水溶解——离心——上样分析

  • 【求助】食品罐头内壁环氧酚醛涂料卫生标准的分析方法中苯酚标准溶液的制备问题?

    在做食品接触材料试验时,按照GB/T 5009.69—2003食品罐头内壁环氧酚醛涂料卫生标准的分析方法测定酚含量时配制酚标准溶液方法如下:准确称取新蒸182℃~184℃馏程的苯酚约1 g,溶于水中移入1 000 mL容量瓶,加水稀释至刻度。请问1.新蒸182℃~184℃馏程的苯酚1g,这个馏程是指在苯酚在182℃~184℃蒸馏下得到的苯酚吗?在蒸馏过程中应注意一些什么问题?用什么样的蒸馏装置较合适?2.市场上有这种苯酚的标准溶液卖吗?就是苯酚标准溶液基体是水,不是其它物质3.可以把苯酚的标准溶液的基体换成别的物质吗?对实验结果会不会与有影响?

  • 请问检测食品中氨基酸需要多少种标准品?

    最近要用高效液相PITC柱后衍生检测食品中氨基酸含量,我看很多文献都有氨基酸标准品,但是有的用了18种,也有用17种,15种的,就像问一下各位大佬,这个是有什么标准关于检测那一类食品一定要检测哪几种氨基酸嘛

  • 【求助】AQC,准备利用AQC做氨基酸分析?

    6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC)为衍生试剂,准备利用AQC做氨基酸分析?有做过的吗?是不是仅Waters有?其他公司有类似替代品吗?补充一下:大概300个样品。紫外检测

  • 【求助】氨基酸分析中碰见不常见的氨基酸

    最近忙氨基酸分析,用柱前衍生。发现样品有一个峰很高,尤其是水解之后更高。它不是17中氨基酸标准品中的一个,不知道是什么。。。。。。。。这样的话我怎么得知它是什么氨基酸呢?我算总量的时候可不可以用峰面积估算出这个峰代表的氨基酸的含量? 可不可以用质谱做?但是样品比较复杂。。。。。。。。。。。。。要怎么办呢?大侠们出手试试

  • 【资料】食品安全现场快速检测分析方法标准汇总

    食品安全现场快速检测分析方法 编号索引 标准溯源GB/T 中华人民共和国国家标准分析方法CDC/SB 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所 现场快速检测分析方法CDC/SB 101 农药有机磷类(国内允许使用的30 多种)和氨基甲酸酯类(国内允许使用的10 多种)的快速检测:采用国家标准快速检测方法GB/T5009.199-2003。适用于蔬菜、水果以及其它食品中农药残毒的快速检测,也适用于食物中毒物质中农药的快速筛选定性。现场使用,20 分钟出结果。CDC/SB 102 鼠药毒鼠强的快速检测:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。主要用于预防性监测和中毒物的筛选、定性鉴别。检出限5ug/ml。现场使用,20 分钟出结果。CDC/SB 103 鼠药敌鼠钠盐的快速检测:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。主要用于预防性监测和中毒物的筛选、定性鉴别。检出限45ug/ml。现场使用,10 分钟出结果。CDC/SB 104 鼠药安妥的快速检测:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。主要用于预防性监测和中毒物的筛选、定性鉴别。检出限20ug/ml。现场使用,10 分钟出结果CDC/SB 105 鼠药氟乙酰胺的快速检测:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。主要用于预防性监测和中毒物的筛选、定性鉴别。检出限50ug/ml。现场使用,15 分钟出结果。CDC/SB 106 亚硝酸盐的快速检测:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。本方法是在国家标准GB/T5009.33-2003 盐酸萘乙二胺检测方法基础上改进的现场快速检测方法--速测管法。定性兼半定量检测。可用作卫生指标检测、投毒监测和食物中毒物质的快速筛选、定性定量。最低检出量为0.025mg/L。现场使用,15 分钟出结果。

  • 超高速全自动氨基酸分析仪的应用

    超高速全自动氨基酸分析仪的应用

    [align=center][font='宋体'][size=16px][color=#000000]超高速全自动氨基酸分析仪的应用[/color][/size][/font][/align][font='宋体'][size=16px]中广测配备了日立超高速全自动氨基酸分析仪(LA8080),该仪器采用离子交换色谱分离和茚三酮柱后衍生技术,是分析检测氨基酸的专用设备,具有操作简便、灵敏度高、分离度好、稳定性强、检出限低、数据可靠性高等优点,短时间内可实现18~23种氨基酸的分离,分离度最少可达到1.62以上,各种氨基酸达到完全基线分离,定性强、定量准,同时配备含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)30min标准分析程序和6min高速分析程序,极大的提高了分析的速率,标配了Open LAB CDS 2控制软件,全面符合CFDA和FDA的要求。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146272196_9721_2862401_3.jpeg[/img][/align][font='宋体'][size=16px]一、仪器信息[/size][/font][font='宋体'][size=16px]1.仪器名称:超高速全自动氨基酸分析仪[/size][/font][font='宋体'][size=16px]2.英文名称:Ultra-high speed automatic amino acid analyzer[/size][/font][font='宋体'][size=16px]3.生产制造商:HITACHI/日立[/size][/font][font='宋体'][size=16px]4.型号:LA8080[/size][/font][font='宋体'][size=16px]二、主要技术参数[/size][/font][font='宋体'][size=16px]1.基线噪声≤0.02mV;[/size][/font][font='宋体'][size=16px]2.分离度≥1.62;[/size][/font][font='宋体'][size=16px]3.仪器线性≥0.999;[/size][/font][font='宋体'][size=16px]4.检出限:各氨基酸最少检测浓度可达到0.002nmol。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]三、应用领域[/size][/font][font='宋体'][size=16px]氨基酸分析仪的应用领域可以归结为以下几类:在农业农产品的开发研究中,用于培养农作物优良的品种、饲料研发以及各类饲料氨基酸含量的分析、研制新型农药等。在食品轻工产品研究中,氨基酸分析仪可用于各种食品、保健品、口服液、牛奶及其奶制品、肉及肉制品等产品的研制开发、成分的分析, 在生物制药方面,用于药物开发以及各种药物氨基酸含量的测定,在石油化工、生物医学检测方面,氨基酸分析仪的应用也十分广泛。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]四、服务范围[/size][/font][font='宋体'][size=16px]各类食品、保健品、农产品、饲料、医药样品中,各种氨基酸含量的测定,包括GB/T 5009.124-2016方法规定的各种水解氨基酸,GB/T 18246-2019 规定的水解氨基酸、游离氨基酸,各种含硫氨基酸以及色氨酸的测定。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]五、应用案例[/size][/font][font='宋体'][size=16px]氨基酸作为生物体蛋白质组成的单体,在各种生物体中均有存在,氨基酸按照对生物体的需求来说,分为必需氨基酸和非必需氨基酸,非必须氨基酸不一定非要从食物直接摄取,生物体可自行合成;但必需氨基酸(指人体或其它脊椎动物)不能合成或合成速度远不能满足机体需要,必需氨基酸一定要从食物中获得,否则就不能维持机体的氮平衡并影响健康,对于成人而言,必需氨基酸有九种,即:赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、组氨酸;故准确定量食物中各种氨基酸的含量,特别必需氨基酸尤为重要,生物体可根据对各种氨基酸,特别必需氨基酸的每日需求,选择合适的食物,补充各种营养,达到营养摄入的均衡,保持身体机能的健康,故在各类食品、保健品、宠物食品、饲料中,氨基酸各组分的分析尤为的重要。[/size][/font][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146274484_2813_2862401_3.png[/img][/align][align=left][font='等线'][size=13px] 图1. 17种氨基酸标准图谱[/size][/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146277743_8653_2862401_3.png[/img][font='等线'][size=13px]图2. 肉制品17种氨基酸图谱 [/size][/font][/align]

  • 【求助】氨基酸标准品

    大家好,我一直用安捷伦1120LC做17种氨基酸的含量测定,但是在检测过程发现因检测氨基酸的量很低,买的安捷伦的标准有时会偏低,使测定结果波动很大,想请问各位,买哪里的氨基酸标准比较稳定准确?再者,在检测氨基酸怎样才能提高准确度?

  • 用安捷伦氨基酸分析包遇到的问题——基线鼓包和三组氨基酸达不到基线分离

    用安捷伦氨基酸分析包遇到的问题——基线鼓包和三组氨基酸达不到基线分离

    [color=#444444]用安捷伦氨基酸分析包遇到的问题——基线鼓包和三组氨基酸达不到基线分离,请各位大神帮忙看看是什么原因导致的[/color][color=#444444]样品:多肽酸水解后通过0.45um膜,取其续滤液[/color][color=#444444]色谱柱: Agilent ZORBAX Eclipse AAA 4.6*150mm 5um[/color][color=#444444]流动相:A相:40mM NaH2PO4 (pH=7.8) [/color][color=#444444] B相:甲醇:乙腈:H20=45:45:10[/color][color=#444444]NaH2PO4 是国药分析级,甲醇、乙腈是色谱纯,H2O是密理博纯水仪制水[/color][color=#444444]检测波长:338nm、262nm[/color][color=#444444]流速:2.0ml/min[/color][color=#444444]柱温: 40℃[/color][color=#444444]梯度 时间min A B[/color][color=#444444] 0 100 0[/color][color=#444444] 1.9 100 0[/color][color=#444444] 18.1 43 57[/color][color=#444444] 18.6 0 100[/color][color=#444444] 22.3 0 100[/color][color=#444444] 23.2 100 0[/color][color=#444444] 26 100 0[/color][color=#444444]问题一、色谱柱使用了一段时间后在7-9min出现鼓包,影响了氨基酸的定量[/color][color=#444444]问题二、重现不了安捷伦的图谱,Gly/Thr、Val/Met、Phe/Ile达不到基线分离。[/color][color=#444444]以下图谱 依次为:基线鼓包的标准品图谱、正常[color=#444444]标准品图谱、基线鼓包的空白、三组氨基酸没有基线分离、[color=#444444]安捷伦分析包标准品图谱[/color][/color][/color][color=#444444][img=基线鼓包的标准品图谱,690,92]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349098857_8471_2847808_3.png!w690x92.jpg[/img][img=正常的标准品图谱,690,95]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349138951_9551_2847808_3.png!w690x95.jpg[/img][img=基线鼓包空白,690,88]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349170968_4339_2847808_3.png!w690x88.jpg[/img][img=三组氨基酸没达到基线分离,690,95]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349213418_3759_2847808_3.png!w690x95.jpg[/img][img=安捷伦分析包标准品图谱,690,245]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349245791_912_2847808_3.png!w690x245.jpg[/img][img=安捷伦分析包标准品图谱,690,245]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349245791_912_2847808_3.png!w690x245.jpg[/img][/color]

  • 《粮油检验 粮食及其制品中有机磷类和氨基甲酸酯类农药残留的快速检验》标准 编制说明

    《粮油检验 粮食及其制品中有机磷类和氨基甲酸酯类农药残留的快速检验》标准编制说明有机磷类和氨基甲酸酯类农药是目前最常用的农药之一,广泛用于粮食作物的生产和储藏。过量残留在粮食作物上的农药可经消化道、呼吸道及完整的皮肤和粘膜进入人体,对人体造成不同程度的损害,影响人们的健康。近年来,粮食作物中因为农药残留超标的报道时有发生。究其原因主要在于:一是不按规定的用药量、次数、方法或安全间隔期施药,或施用禁用的剧毒、高毒农药;二是我国现有粮食农药残留检测标准方法需要使用大型分析仪器,缺乏现场、快速的标准检测方法使得基层的粮食农药残留检测能力不足导致的监管真空。因此,建立适合于我国国情的粮食中农药残留快速检测标准方法,对于指导、规范农户合理施药,提升基层监管部门的农药残留监测能力,加强粮食质量安全水平,有着重要的现实意义。农药残留量检测是微量或痕量分析,必须采用高灵敏度的检测技术才能实现。自20世纪50年代,各国科学家就开始研究农药残留的检测方法,常用的农残检测方法包括色谱法和快速检测方法。色谱法包括[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联用、高效液相色谱、液相色谱-质谱联用等,其中[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]技术的引进极大地推动了农药残留分析的发展,有效的提高了农药残留分析检测的水平;高效液相色谱法作为目前发展最快、应用最广泛的分析技术,对于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法不能分析的高沸点、热稳定性差和极性农药及其代谢物,可以进行有效的分离检测;质谱以及色谱-质谱联用技术的应用,使农药残留分析从一种或几种农药发展到可同时测定几十种上百种不同种类的农药,实现了对农药的高通量,高灵敏度的定性、定量检测。虽然色谱类方法结果准确可靠、灵敏度高,但由于需要大型的色谱、质谱设备,检测成本高,同时对操作人员水平要求高,限制了其在基层实验室的应用。快速检测方法由于具有操作简便,检测时间短,成本低,无需大型仪器等优势,适合于基础现场的快速筛查。目前的快速检测方法主要包括化学速测法、免疫分析法、酶抑制法和生物荧光法等。化学速测法主要根据氧化还原反应,水解产物与检测液作用变色,常用于有机磷农药的快速检测,但是化学速测法灵敏度低,使用有局限性,且易受还原性物质干扰,因此应用较少;免疫分析法最常用的是酶联免疫分析法(ELISA),以抗原与抗体的特异性、结合反应的可逆性为基础的检测技术,灵敏度高、选择性好,但通常只能检测一种农药,无法进行多残留检测;而酶抑制法是在昆虫毒理学基础上发展起来的,基于农药能抑制动植物体内某些特定的生物酶(如乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶、植物水解酶等)活性,通过肉眼或仪器观察显色反应,从而对样品中的农残进行定性检测,酶抑制法可同时检测有机磷和氨基甲酸酯两大类农药残留,因具有快速、操作简便、成本低廉等特点而被广泛应用,但是这种方法灵敏度较低,许多目标物的灵敏度无法满足国家限量要求;生物荧光法在酶抑制法的基础上进行改进,通过使用荧光检测代替传统的分光光度法,有着更高的灵敏度,适用范围更广。鉴于国内外对食品安全的日益重视,有机磷类和氨基甲酸酯类农药残留对人体健康的危害,我国先后制定出台了一系列的有机磷类和氨基甲酸酯类农药残留标准方法,其中标准方法《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》(GB/T 5009.199-2003),可用于蔬菜现场基层快速检测,但是由于粮食基质和蔬菜基质相差较大,无法用于粮食样品的快速检测。同时由于标准的判定方法过于粗犷,假阳性和假阴性较高,此外方法的灵敏度较低,无法满足多数限量浓度农药的检测,因此建立适用于粮食及其制品的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的高灵敏度检测方法标准,满足限量检测筛查的需求,提升我国粮食农残基层现场的检测能力势在必行。

  • 分离18种常见氨基酸标准

    [b] 氨基酸作为一类重要的营养物质,在文献中得到了广泛的研究。对于氨基酸的分析,已有不同的方法报道,但分离效率很大程度上取决于许多因素(流动相和梯度、衍生试剂及其使用、柱等),事实上,许多作者在他们的研究中并没有表现出完美的分离。在本文中,我们使用一个pre-column衍生化方法和SVEA高效液相色谱柱使用C18 5μm 110 Å 4.6 * 250mm列一个完美的高效液相色谱分离氨基酸的标准。该方法有效地避免了使用昂贵的氨基酸特异性分析柱和氨基酸分析仪。[/b]

  • 关于分析一种有机物的标准品和内标物

    目前要检测一类有机物,带有羧基,还有烃基,想用GC/MS去测,但是不知道有没有标准品,请大神分析一下,指点指点。如果GC/MS不适合,用什么质谱仪器最好?如果没有标准品最好能推荐几种内标物。十分感谢。http://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2017/0112/w155h496848_1484232405_311.jpg

  • 氨基酸分析技术的特点与内涵

    氨基酸分析技术的特点与内涵文章来源:国家产品质量安全与法信息中心网 添加时间:2009-7-19 3:13:19 点击:1510摘要:在传统蛋白质分析技术基础上,结合现代分析仪器技术发展优势,针对氨基酸分析技术难点及存在问题,概括比较分析评价当前氨基酸分析技术特点。关键词:蛋白质 氨基酸 分析技术 研究进展1 前言迄今为止,自然界中已发现180多种氨基酸,其中参与蛋白质合成的氨基酸只有20多种,称为基本氨基酸。氨基酸主要有两种存在形式,一种是以游离态存在于生理体液(血浆、尿)、食品(酒、饮料)中;另一种是以结合态存在于肽和蛋白质中。蛋白质在乳中含量为3.0%~3.5%,是乳的主要成分,对乳品的理化特性和营养价值有重要的影响。由于国标法对蛋白的检测是通过检测样品含氮量而得到的,实际上是将样品消化分解,经蒸馏碱吸收后,测定的挥发性“氨基氮”,因而部分不法商贩用添加外源动植物蛋白粉或脲等含氮化合物(虚“氮”)来增加原料乳的氮含量,钻传统检测方法表征“虚氮”的漏洞,以蒙混过关。这些掺入水解动物蛋白或者含氮化合物的乳粉因其氨基酸的组成不合理,根本不能代表动、植物蛋白,不易消化,所以营养价值低下,导致人体吸收利用率降低,严重地影响到婴幼儿的生长发育和智力水平。因此,对氨基酸分析方法的研究与改进逐渐得到各国家、全社会的高度重视。在一般情况下,质量监督检验单位在市场上抽到产品进行检验所得的数据中,蛋白质含量实际上是用总氮含量表示的,所以在加工企业常规检验时、含氮化合物、水解动物蛋白等杂蛋白是测不出来的,因此需要建立快速分析、测定乳制品中蛋白质、氨基酸的检测方法,保障乳制品的质量与安全。,1958年,Spackman等首先提出了用阳离子交换色谱与柱后茚三酮衍生结合的方法分析蛋白质中的氨基酸,实现了氨基酸分析的自动化。其后,人们不断地发展新的氨基酸分析方法,柱前衍生反相高效液相色谱法、高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法、毛细管电泳法、蛋白质芯片技术等相继应用于氨基酸分析。现已是多种氨基酸分析方法并存、互补。本文就目前应用于氨基酸分析的主要方法作一比较分析。,,2 氨基酸分析技术的光谱分析优势及特点利用光谱探针方法定量分析蛋白质的研究在国际上十分活跃,其中,对有机染料(包括显色剂和荧光染料)结合分光光度法和金属离子-有机染料(包括显色剂和荧光染料)结合分光光度法的研究倍受重视。 2.1 有机染料结合分光光度技术因为有机染料结合分光光度法测定蛋白质操作简便,比较灵敏,又不需特别的仪器,方法应用比较广泛。现在研究较多的可作为探针的染料分子中,大部分都含有带正电荷的亲水性基团如羟基、磺酸基、酚羟基及不带电荷的疏水性基团,如苯环。这类方法的基础是在溶液pH小于等电点时,蛋白质的肽键亚胺和N端氨基质子化成阳离子,若有阴离子染料存在时,由于电荷作用,蛋白质便与染料结合沉淀或改变结合染料的光吸收特性,借染料颜色的减褪或变化的程度测定蛋白质的含量。已经应用的染料有酸性橙红、考马斯亮蓝G-250、溴甲酚绿、溴甲酚紫、埃铬青R和溴酚蓝。2.2金属离子-有机染料结合分光光度技术近几年发展了利用金属离子和有机染料特别是荧光染料形成配合物体系结合光光度法来测定蛋白质含量。金属离子与含有-OH或C=O的有机染料相遇时,氧原子中的孤对电子可顺利进人杂化轨道,形成稳定的配合体系,在酸性条件下,该体系遇到结构不对称的蛋白质分子时,互相极化产生静电作用而结合成新的大分子团,改变了原体系的光谱性能,从而能定量测定蛋白质的含量。该方法具有灵敏度高、线性范围广、干扰离子少、操作简单、快速及适用于常规应用等特点。2.3 荧光光度分析技术荧光法是定量测定蛋白质的另一种常用方法通常比分光光度法更灵敏。常用的方法有内源荧光法、荧光探针法、荧光偏振、时间分辨荧光法及激光诱导时间分辨免疫分析法。2.3.1 内源荧光分析技术蛋白质中存在着Tyr、Trp、phe残基,能够吸收270~300 nm的紫外光而发出紫外荧光。当测定体系中加入小分子配体(SM)时,SM与蛋白质发生相互作用,会导致蛋白质荧光的猝灭,利用SM对蛋白质内源荧光的猝灭这一现象可以确定蛋白质与SM的作用类型及其结合部位等。2.3.2 外源荧光分析技术对于蛋白质的研究仅利用其内源荧光是不够的,需要通过外源荧光性质的研究才能获得更多关于蛋白质分子的各种信息,这就使得荧光探针对蛋白质分析有着极其重要的意义,这已成为蛋白质微量检测及溶液的构相分析中不可缺少的手段之一。在外源荧光法中,又可分为有机荧光探针法和稀土荧光探针法。作为一个好的荧光探针应满足以下条件:探针分子与蛋白质分子的某一微区必需有特异性的结合,并且结合比较牢固;探针的荧光必须对环境条件敏感;蛋白质分子与探针结合后不影响其原来的结构和特性。在满足这些条件的基础上可进行蛋白质的测定和与金属离子结合的计量化学等。与光度法类似,蛋白质在和某些具有荧光特性的染料结合后,能引起荧光强度的变化,并且在一定浓度范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的测定。利用这些化合物在不同蛋白质分子中量子产率、峰位及谱带的变化,就可探测蛋白质分子结合区的极性、疏水性的大小,从而推论构象的稳定情况及变化等。2.3.3 荧光偏振分析技术利用荧光体在转动扩散速度上的差异而导致偏振荧光的差别,建立了荧光偏振测定法。利用荧光偏振还可以研究:酶与荧光底物的结合程度;蛋白质聚合与解离;蛋白质从螺旋到无规卷曲的研究。,3 氨基酸分析技术的色谱分析优势及特点3.1 柱后衍生高效阳离子交换色谱分析技术高效阳离子交换色谱(HPCEC)-柱后茚三酮衍生光度检测分离测定氨基酸是一种经典的氨基酸分析方法。此方法是利用氨基酸在酸性条件下形成阳离子而在阳离子交换柱中分离,分离后的氨基酸用茚三酮衍生、紫外可见光检测器检测。该方法以阳离子交换树脂为固定相、酸性缓冲液流动相,在柱后流出液中加入茚三酮使氨基酸生成具有可见光吸收的衍生物进行检测,具有重现性好、仪器稳定、结果可靠、适合于大量常规样品分析等优点。另外,由于衍生化反应发生在氨基酸与其物质分离之后,因而避免了其他物质的干扰,适合复杂样品中氨基酸的分析。其缺点是仪器复杂、体积大、费用高。此外,由于脯氨酸的测定波长在440nm,而其他氨基酸的测定波长为570nm,因脯氨酸不能和其他氨基酸同时测定。氨基酸分析自动仪就是基于阳离子交换色谱分离、柱后茚三酮衍生光度检测技术设计的。商品化的自动氨基酸分析仪是在20世纪60年代初问世,目前的自动氨基酸分析仪已实现了程控自动化和数据处理电脑化,分析时间已缩短至1 h以内。氨基酸自动分析仪实际上属专门用来分析氨基酸的高效液相色谱仪,其优点是高压、快速、灵敏,试剂和样品用量少、重现性好、分析结果稳定。广泛用于食品、医学、农业以及微生物等领域。3.2 柱前衍生反相高效液相色谱分析技术近20年来,柱前衍生反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析氨基酸得到了迅速发展,逐渐取代柱后衍生高效阳离子交换色谱(HPCEC)在许多领域中的应用。RP-HPLC分析方法更加快速灵敏。与专业氨基酸分析的自动分析仪不同,HPLC仪适用性更广、更灵活。RP-HPLC要求将氨基酸在柱前转化为适于反相色谱分离并能被灵敏检测的衍生物,柱前衍生的关键在于衍生试剂的选择。选择衍生试剂的标准是能与各氨基酸定量反应,每种氨基酸只生成一种化合物且产物有一定的稳定性,不产生或易于排除干扰物,操作简单,色谱分离分辨率高、检测灵敏度高,分析时间短,便于实现自动化和使产物能在不同型号的高效液相色谱仪上测定。目前比较常用的柱前衍生试剂有邻苯二甲醛(OPA)、异硫氰酸苯酯(PITC)、氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)及丹酰氯(Dansyl-Cl)。衍生后的氨基酸一般键合在C18柱上,利用液液分配原理进行分离。流动相多以乙酸盐或磷酸盐缓冲液为主,以乙腈、甲醇或四氢氟喃为调节剂。由于氨基酸衍生物仍保留着两性化合物的特点,除改变调节剂之外,还可通过调节缓冲液pH值、离子强度、柱温等使之达到理想的分离。当然,不同衍生物所选用的柱型、流动相以及氨基酸的洗脱时间和顺序不尽相同。柱前衍生反相高效液相色谱法可用于分析蛋白质水解液、生理体液和食品等样品中的氨基酸。当与质谱技术结合时,采用电离喷雾质谱(ESI-MS)或电离喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)联用技术方式,借助计算机的联机检索,可以实现高通量筛选和鉴定蛋白质混合体系。目前,,蛋白质组研究的高效液相色谱-质谱联用的方式有一维色谱-质谱联用技术、多维色谱-质谱联用技术以及亲和色谱-质谱联用技术等。一维色谱-质谱技术仅能分析一些不太复杂的蛋白质体系,而对复杂的多肽混合物常不能满足分离的要求。多维色谱分离的方法在某种程度上满足了对复杂蛋白质混合分离鉴定的要求。,,,3.3 两种氨基酸直接分析技术大多数氨基酸不具备生色团,因此无法利用分光光度法直接检测,故需采用化学衍生技术,使之生成可在紫外或可见光区有吸收的化合物,或者采用荧光法检测。但对于分析工作者来讲,尤其是在新化合物研制的过程中,面对多种未知的降解物,如采

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    [em09509]各位大虾,小弟用HPLC做邻氨基对叔丁基苯酚的分析,发现基本上只有一个峰,杂质基本上不出峰,大哥大姐们谁做过啊?能不能给个分析方法啊?或者有什么好的建议啊? 谢谢啊!!

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