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胞磷胆碱钠标准品

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胞磷胆碱钠标准品相关的论坛

  • 【原创】请师兄,师姐帮助修改几个单词,谢谢!!(急用)胞磷胆碱钠

    胞磷胆碱钠2005版鉴别的翻译:原文(1)取本品约10mg,加无水乙醇1ml使溶解,加碘化钾试液2ml与稀硫酸4ml,摇匀,加淀粉指示液数滴,溶液即显蓝紫色。(2)取本品的氯仿溶液(1→10)3~4滴,待氯仿挥发后,加2%香草醛硫酸溶液1滴,即显红色,放置,渐变棕色。(3)取本品,精密称定,加氯仿制成每1ml中含20mg的溶液,依法测定旋光度(附录Ⅵ E),应显右旋光性。翻译如下:1.Transfer the sample about 10mg , dissolve in anhydrous alcohol 1ml, then add potassium iodide solution 2ml and dilute sulfuric acid 4ml ,and mix , add the starch indicator several drops, the color of solution is Blue purple2. Transfer the sample of chloroform solution 3 to 4 drops, after chloroform to be volatile, add 2% Vaniilin sulfate Solution 1 drop. The color of solution is red, place the solution, the color gradual change palm. 3. Transfer the sample, accurately weighted. Add chloroform to make the solution about 20mg per ml, according to CP 2005, determinate the rotation. It should show right optical rotation.

  • 求购 胆碱酒石酸氢盐标准品

    询问下各位,《GB 5413.20—2013婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》中提到的胆碱酒石酸氢盐标准品在哪里能买到。问了好多地方,包括sigma的得到的答复都是试剂级别的,不是标准品。

  • 砷胆碱标准物质的配置

    砷胆碱标准物质证书中,给出砷胆碱摩尔浓度为0.374umol/g,质量浓度:以砷计为28.0ug/g,以砷胆碱计为91.6ug/g,要配置成砷工作液0.05ug/g,用天平称取还是用吸管吸取,怎样配置

  • 磷脂酰胆碱,磷脂酰肌醇,标准品不出峰

    磷脂酰胆碱,磷脂酰肌醇,标准品不出峰

    按照GB5009.272-2016,测磷脂酰胆碱和磷脂肌醇。waters的紫外检测;默克硅胶柱;(标准上用的硅胶柱Si60,不知道有没有影响)流动相是:正己烷+异丙醇+乙酸水溶液(8+8+1);检测波长205;流速:1ml/min;柱温:30°C;进样量:10ul。标准上是30分钟内出的峰,但是我跑了60分钟还是没出峰,不知道怎么回事,有大神懂的吗,指点一下,谢谢??[img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709251137_01_2953034_3.png[/img][img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709251137_02_2953034_3.png[/img][img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709251137_03_2953034_3.png[/img]

  • 有谁做过磷脂酰胆碱的啊

    有谁做过磷脂酰胆碱的啊?请问色谱条件是什么?用的是硅胶柱还是C18柱?我用硅胶柱做的时候标准品怎么会出现两个峰啊?

  • 胆碱检测知多少?安谱实验助力婴幼儿奶粉中的胆碱测定(GB5413.20-2013)

    胆碱检测知多少?安谱实验助力婴幼儿奶粉中的胆碱测定(GB5413.20-2013)

    根据食品安全国家标准规定,胆碱为婴幼儿奶粉的必需成分,然而市面上很多婴幼儿奶粉经常被发现胆碱含量不符合国家标准![align=center][img=,317,296]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071313225596_2182_960_3.png!w317x296.jpg[/img][/align][align=center]等等.....[/align][align=center]胆碱是什么东西?[/align][align=center][/align] [b]胆碱[/b]是一种有机碱,是卵磷脂的组成成分,也存在于神经鞘磷脂之中。胆碱被称为“记忆因子”,是合成乙酰胆碱的重要原料,能帮助中枢神经传递资讯,是大脑思维、记忆等智力活动的必需物质。因为婴幼儿处于发育期,合成胆碱的能力有限,因此国家规定胆碱为婴幼儿奶粉中的必需成分。[align=center][img=,400,164]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071314026095_9084_960_3.jpg!w900x370.jpg[/img][/align][align=center][b][img=,406,376]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071314354769_1725_960_3.png!w406x376.jpg[/img][/b][/align][align=center][b]胆碱检测知多少?[/b][/align][align=center][b][/b][/align]安谱实验参照食品安全国家标准GB5413.20-2013“婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定”开展应用实验,为您提供全套试剂、酶、标品及耗材等相关产品。[b]1.方法原理[img=,560,110]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071315051175_5759_960_3.png!w560x110.jpg[/img]2.样品前处理[/b][align=center][b][img=,433,697]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071315229915_5731_960_3.jpg!w433x697.jpg[/img][/b][/align][b]3.标曲的建立[/b][align=center][b][img=,433,480]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071315447965_8437_960_3.jpg!w433x480.jpg[/img][/b][/align][align=center][img=,556,257]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071316407065_6610_960_3.png!w556x257.jpg[/img][/align][align=center][b]标准曲线[/b][/align][align=center][b][img=,433,350]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071316112752_4406_960_3.jpg!w433x350.jpg[/img][/b][/align][align=center][img=,376,376]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071316579004_6437_960_3.png!w376x376.jpg[/img][/align][align=center][b]别走,下面还有![/b][/align][b]4.市售品牌婴幼儿奶粉中胆碱的含量检测[/b]取A、B、C三品牌婴幼儿奶粉样品前处理滤液,按照标曲建立步骤检测吸光度,并带入标准曲线计算胆碱含量。(注意:A为试样净吸光值,Atot为总吸光值,Aex为滤液吸光值,Abl为试剂吸光值)[align=center][img=,900,710]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071317224645_3917_960_3.png!w900x710.jpg[/img][/align][align=center][img=,529,296]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071318228735_1113_960_3.png!w529x296.jpg[/img][/align][align=center][b]产品信息[/b][/align][align=center][b][img=,688,771]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903071317467768_9259_960_3.png!w688x771.jpg[/img][/b][/align]

  • 乳品中胆碱的测定

    在国标5413.20-2013中,检测乳品中胆碱有两个方法,请问给位大侠一般选用第一法还是第二法???有没有用第二法做过的,其中用到的弗罗里硅土用的什么厂家呀???效果如何?结果稳定吗???

  • 一例现行操作与工艺规程不符的案例

    2016年9月29日,国家药监部门公布了《对天津金耀集团湖北天药药业股份有限公司跟踪检查通报》,收回GMP证书的其中一个原因是:未按实际生产批量进行胞磷胆碱钠注射液工艺验证,实际生产操作与工艺规程存在不一致。  (一)胞磷胆碱钠注射液工艺规程显示该品种有30万ml、50万ml、80万ml、100万ml、130万ml、140万ml、150万ml、160万ml等8个批量,企业只进行了130万ml、137万ml批量各一批的工艺验证(验证编号:V-T-04-C18)。实际生产的110万ml和158万ml批量未进行工艺验证,且该两个批量不在工艺规程中。  (二)抽查批量158万ml批号为41503031的批生产记录,搅拌方式与工艺规程不一致。药监局公开链接:http://www.sda.gov.cn/WS01/CL1760/164918.html工艺放大了,没有制定相应的工艺规程。

  • 【原创大赛】某制剂中溶血磷脂酰胆碱的36月测定

    【原创大赛】某制剂中溶血磷脂酰胆碱的36月测定

    某制剂品种的原料药中含有磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱为其降解产物。磷脂酰胆碱会引起溶血反应,因此要控制制剂中磷脂酰胆碱的限度。药品保质期为两年,根据国家局要求,为了更系统、全面的掌握药物的性质,对储存36个月的样品进行检验。色谱条件:Agilent 1200液相色谱仪;SEXDE 80蒸发光检测器;柱温为40℃;流动相为甲醇-冰醋酸(500:10),用三乙胺调pH值至6.0。色谱柱为TopsilTM(拓谱)Silica 4.6*250mm,5μm(Part Number:Tp5SI425; Serial Number: T11261504 )系统适用性溶液制备:取对照品适量制成含磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱分别约为0.48mg/ml,0.08mg/ml的混合溶液。精密量取20ml注入液相色谱仪,连续进样5次,记录色谱图,规定磷脂酰胆碱峰与溶血磷脂酰胆碱峰的分离度应大于1.5。溶血磷脂酰胆碱峰面积的相对标准偏差不得大于3.0%。对照液制备:取溶血磷脂酰胆碱对照品约20mg,精密称定,置25ml棕色量瓶中,加异丙醇溶解,并稀释至刻度,作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液3ml,置50ml量瓶中,加异丙醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。供试液制备:精密量取样品3ml,置50ml容量瓶中,加异丙醇溶解并定容至刻度,摇匀。即为供试液溶液。测定法:取供试品溶液和对照品溶液各20ml注入液相色谱仪,记录色谱图。标准规定,供试品中溶血磷脂酰胆碱的峰面积不得大于对照品溶液中溶血磷脂酰胆碱的峰面积。系统适用性溶液色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309301844_468834_1609327_3.jpg对照色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309301844_468835_1609327_3.jpg样品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309301844_468836_1609327_3.jpg结果:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309301845_468837_1609327_3.jpg结论:36月后,溶血磷脂酰胆碱的含量已超标。

  • 饲料中胆碱的测定 GB/T 17481-2008

    亲们,有谁用GB/T 17481-2008测过饲料中的胆碱,如果按照标准的方法,标准曲线吸光度会很低。而且,用坩埚溶解样品不是很好操作,有谁做过吗?

  • 关于卵磷脂的磷脂酰胆碱的液相方法问题

    请问各位大侠做过大豆卵磷脂中的磷脂酰胆碱吗?我们的批文用的是以下的方法,一定要用下面的方法做 我用的流动性为正己烷:异丙醇:磷酸:水=45:48:0.15:7.5 色谱柱为默克的SI60长柱标准品中检所的,标准的锋出现4个叠在一起的锋,不知道是什么原因? 柱子是新 是否跟流动相的PH值有关,还是我的标准品有问题?请各位大霞指教一下?

  • 【原创大赛】色谱法同时分析磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱和游离脂肪酸

    【原创大赛】色谱法同时分析磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱和游离脂肪酸

    色谱法同时分析磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱和游离脂肪酸 磷脂容易被氧化和水解从而降解(如下图),这就限制了有磷脂的药物制剂(脂质体、乳剂)的稳定性及保质期.http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281025_525018_2204138_3.jpg 溶血磷脂和脂肪酸的产生量是判断药物制剂适宜性的关键参数,如随着脂质水解程度变化脂质体分子组成由层状变为胶束就会伴随着药物释放速度的改变。有报道称大量LPC的形成会导致油滴变大导致磷脂与肠胃液稳定相的聚合和破裂,从而导致毒副作用。 美国FDA要求制药企业对于脂质体药物建立适当的储存条件,并在进行稳定性研究时对脂质体药物进行脂质成分分析。这就要求合适的方法对不同化合物的准确定性及定量分析。由于分子中缺乏足够的发色团,以至于紫外和荧光检测不适于对于脂质体的直接分析。蒸发光散射检测器(ELSD)并不需要衍生化,可作为磷脂检测的快速灵敏的手段。蒸发光散射通过测定溶剂蒸发后被检测物散发光的强度进行分析。该方法允许梯度洗脱并对流速不敏感,且相对于LC-MS更方便和便宜。 材料和方法:L-α磷脂酰胆碱、L-α溶血磷脂酰胆碱、亚油酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、甲醇(色谱纯)、氯仿(色谱纯)、氢氧化铵(分析纯)、去离子水。旋转蒸发仪、超声仪、沃特斯2695配低温政法光检测器、Allsphere硅胶色谱柱(150mm×4.6×5um)、Millennium32色谱工作软件。 磷脂酰胆碱脂质体悬浮液通过蒸发-水化法制备,称取0.224g PC溶解于50ml氯仿中,转移至250ml圆底烧瓶中,使用氮气流蒸发氯仿而形成薄的脂质膜,最后通过旋转蒸发仪除去痕量的氯仿,脂质膜用50ml的0.9%NaCl溶液于40℃进行水合,将脂质体浓缩至4.48mg/ml,得到的多层囊泡悬浮液经超声30分钟以获得单层脂质体,脂质体用0.1 N NaOH 调节PH在9-10之间。121℃高压灭菌15分钟。室温保存备用。 标准和样品溶液的制备: 以氯仿:甲醇(50:50%,体积/体积)为溶剂分别制备PC,LPC和亚油酸含量为5mg / mL的储备液,冷冻避光保存备用。 标准曲线系列浓度配制范围PC为82–816 μg/mL,LPC为30–250 μg/mL,亚油酸为55-290μg/mL。 混合标准为同浓度的PC、LPC亚油酸酸,油酸,硬脂酸,和棕榈酸。 FFA的样品是由相等浓度的油酸,亚油酸、硬脂酸和棕榈酸制备。 样品溶液是通过将0.5毫升脂质体加入氯仿:水(50:50%,体积/体积)的溶剂体系。 液相分析:梯度洗脱情况如下http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281026_525019_2204138_3.jpgA 氯仿B 氯仿:甲醇(70:30%,体积/体积)C 氯仿:甲醇:水:氢氧化铵(45:45:9.5:0.5%,体积/体积/体积/体积)流速:1.0ml/min 柱温 28度进样量20ul.ELSD条件包括:漂移管温度的40℃,增益6,雾化气体压力3.2bar. 结果与讨论: 标准的色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281027_525020_2204138_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281027_525021_2204138_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281027_525022_2204138_3.jpg 由标准色谱图得知混合游离脂肪酸的出峰时间在6.7min,PC出峰时间为12.2min,LPC出峰时间为14.7min. 脂质体HPLC-ELSD色谱图:[a

  • 【求助】请问有做胆碱和乙酰胆碱传感器的吗?

    请问有做胆碱和乙酰胆碱传感器的吗?有知道胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶的化学结构的吗?最好有分子结构,给出个图片来比较直观一些。还有就是这些蛋白的性质,它们的圆二色谱数据什么的。谢谢!

  • 磷脂酰胆碱的测定采用什么标准,怎么配置标准品?

    我们是做保健品的,成品基质比较复杂,不太好做。我看有个国标是GB/T21493-2008,用的是正己烷+异丙醇+1%冰醋酸溶液=8:8:1混合溶剂。还有别的标准上说是用正己烷+异丙醇=3:1的。不知道大家有没有做过的,可以交流一下。

  • 【求助】液相做磷脂酰胆碱的问题

    今天做磷脂酰胆碱,流动相是正己烷:异丙醇:1%冰醋酸=8:8:1,没见有峰出来,后面用高浓度的进样,保留时间在十几分钟,请问大家是怎么回事,要怎么解决,标准要用硅胶柱,同事建议用耐酸柱或者是加入扫尾剂,不知道有没有硅胶的耐酸柱,请大家指教.

  • 【寻找隐藏的宝藏:迪马产品——2019年第10周(已完结)】GB5009.272-2016 食品安全国家标准 食品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定

    【寻找隐藏的宝藏:迪马产品——2019年第10周(已完结)】GB5009.272-2016 食品安全国家标准 食品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定

    [color=#ff0000][b]标准名称:GB 5009.272-2016 食品安全国家标准 食品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定[/b][/color]1.[b]样品前处理产品[img=,668,880]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903040951414483_7588_708_3.png!w668x880.jpg[/img]答案:63306或63306A ProElut NH2 1000 mg / 6 mL 30/pk 氨基小柱[b][b][b][b][b]2.色谱分析产品[/b][/b][/b][/b][b][b][b][b][img=,672,361]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903040952183018_4058_708_3.png!w672x361.jpg[/img][/b][/b][/b][/b][/b][/b]答案:99509 Platisil 5μm Silica, 250 x 4.6 mm[align=center][b][color=#ff0000]第10周获奖的版友:WUYUWUQIU 、dahua1981、活到九十 学到一百每人获得5个钻石币;[/color][/b][/align][align=center][b][color=#ff0000][img=,900,535]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903111017199037_8837_708_3.jpg!w900x535.jpg[/img][/color][/b][/align][b][b][b][b][b][b] ------------------------------------------------------------------------------[/b][/b][/b][/b][/b][color=#ff0000]【活动奖励】[/color][/b][align=left][color=#ff0000]1、从回答正确者中抽取奖励钻石币。[/color][/align][align=left][color=#ff0000]2、每周随机抽取3个或5个回答正确的版友ID号(最后一个ID号,截止至每周五下午15:00)[/color][/align][align=left][color=#ff0000] 每人奖励5钻石币(抽奖人数≤10,抽取3个版友;抽奖人数>10,抽取5个版友)。[/color][/align][align=left][color=#ff0000][/color][/align]

  • 欧盟就氯化胆碱作为动物饲料添加剂的安全性与效能发布科学意见

    据欧洲食品安全局(EFSA)消息,2011年9月14日该局就氯化胆碱作为动物饲料的安全性与效能发布了科学意见。该局表示,氯化胆碱适用于所有的动物物种,不需要对其制定最大限量。该种添加剂(液态或固态)可直接添加至饲料中,也可通过预混料加入饲料中。若氯化胆碱添加至水中以供动物饮用,那么其形态为液体制剂。更多详情参见:http://www.efsa.europa.eu/en/efsajournal/pub/2353.htm

  • 胆碱

    又没有老师做乳粉胆碱的

  • Talin®索马甜被批准列入中国食品添加剂使用标准

    Talin?索马甜提取自非洲竹竽(Thaumatococcus Daniellii),现已正式被批准列入中国食品国家标准,继Talin?索马甜成功进入欧洲、日本和韩国等多个市场后,我们将Talin?索马甜进而带入了庞大的中国市场。Talin?为Naturex索马甜产品之品牌凭借30余载之经验,Naturex可谓索马甜的全球引领者。Talin?为一种多功能食品添加剂,于食品饮料具有口感改良作用,同时可掩盖不良口感,此外亦可增强风味从而改善糖和盐的口感。索马甜采自于西非雨林地带,其果实称为西非竹竽(Thaumatococcus Daniellii),此果通过水提取可确保索马甜的百分百天然特质。纯度标准及分析方法的建立Naturex于2010年启动Talin?索马甜在中国的食品添加剂法规项目的申请工作,此次得到中国卫生部官方批准并公布,着实是对我们团队做出努力的最佳回报。中国法规中的纯度标准以及严格的分析检测方法皆基于Naturex所开发和使用的独有的测试方法。使用范围及市场机遇此次荣获批准,为我们中国食品饮料行业带来了绝佳的机遇。Talin?索马甜目前可使用范围为绝大多数饮料类,加工坚果与籽类,焙烤食品以及餐桌甜味剂等。Naturex预见在“低热量”饮料类中索马甜将大显神通,因其可使口感更圆润,甜味更丰满;对于餐桌甜味剂,由于Talin?索马甜为一天然甜蛋白,加之其热量极低,可谓是更健康的选择。

  • 氮氮单键的拉曼频移

    请教:氮氮单键的拉曼频移在哪个位置?十分感谢http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif

  • 欧盟就氯化胆碱作为动物饲料添加剂的安全性与效能发布科学意见

    据欧盟食品安全局(EFSA)消息,9月14日该局就氯化胆碱作为动物饲料的安全性与效能发布了科学意见。 该局表示,氯化胆碱适用于所有的动物物种,不需要对其制定最大限量。该种添加剂(液态或固态)可直接添加至饲料中,也可通过预混料加入饲料中。若氯化胆碱添加至水中以供动物饮用,那么其形态为液体制剂。 更多请见:

  • 中检院官方发布CHO细胞宿主DNA残留检测标准试剂盒(附中检院说明书)

    2015年3月底,第一个中国科学院和中国食品药品检定研究院联合开发的试剂盒出现在中国食品药品检定研究院网站的国家药品标准物质目录中:CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(PCR-荧光探针法)。在2016年7月举办的生物制品研讨会上,中检院吕萍主任对这个试剂盒做了精彩的说明。这个由中检院与中科院联合研发,由生物制药企业参与标定的试剂盒与现行美国药典(USP)建议的检测方法同步,但与2010版药典附录中外源性 DNA 残留量测定法有所不同,将是国内生物制品的研发和生产的上下游企业检测宿主细胞DNA残留的第一选择,其后又联合开发了宿主细胞DNA残留样本前处理试剂盒,E.coli宿主细胞DNA残留检测试剂盒,Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒,毕赤酵母DNA残留检测试剂盒,大大的方便的广大厂商的选择。产品优势:1:中检所参与开发并认可其质量2:灵敏度高,稳定性好3:高效回收微量dna,回收率70-130%4:操作快捷,整个过程只要4小时5:满足自动化操作要求,可以高通量检测 ,6:参考品溯源至中检所DNA国家标准品7:价格便宜,基本价格都在ABI公司价格的一半以下,大大节约了企业成本订货信息货号 品名 包装SK030203D100 宿主细胞DNA残留样本前处理试剂盒 100TSK030201c100 CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒 100TSK030202e100 E.coli宿主细胞DNA残留检测试剂盒 100TSK030204v100 Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒 100TSK030205p100 毕赤酵母DNA残留检测试剂盒 100T生物制品中宿主细胞残留DNA具有潜在致瘤和传染风险,所以各国药品监管部门对DNA杂质的限量要求非常严格。美国药典在General Chapter 介绍了三种常用技术,但将在2015年颁布的新版(USP38-NF33)中增加全新章节(General Chapter )来进一步规范残留DNA检测的方法和标准物质。与1000号以上的章节不同的是,USP编号1000以内的章节详细规定了检测技术、系统适应性标准和标准物质。新版USP中将唯一推荐qPCR法作为生物制品中宿主残留DNA的标准方法。qPCR法的技术优势在于序列特异性高、灵敏度高、重现性好,可以为生物制药工业在工艺研究和成品质量控制方面提供可靠的检测手段。我国参照WHO、FDA和欧盟的标准,很早以前开始就对生物制品中残余DNA含量进行限制。从卫生部颁布的《人用重组DNA制品质量控制要点》到近年的《中国生物制品规程》都对DNA含量做了严格要求,部分标准高于国际标准。2010年版中国药典附录收录了DAN探针杂交法和荧光染料法,这两种方法都存在技术缺陷,很难达到杂质限量检测的灵敏度,已经被欧美药典摒弃。目前,仍有很多国内企业沿用这两种方法检测残留DNA,致使生产工艺和产品质量很难达到国际一流水平。根据残余DNA检测技术的发展趋势,小编预计我国2015版药典或增补版本中将出现qPCR方法。企业在生产与研发中采用中检院标准物质目录中提供的成套试剂盒,可以大幅度减少费时、耗力、成本高昂的方法学考察,只需开展少量方法适应性实验,就可以在生产工艺和质控体系的优化方面发挥实际作用,同时满足美国FDA相关标准的要求。同时,联合研发单位中科院湖州营养中心提供免费技术咨询和培训,帮助企业解决试剂盒应用中的各种技术问题。生物制品可用于治疗和预防疾病,关系到患者和健康人的用药安全,产品质量必须得到保障。我国药品监管部门对生物制品中残留DNA的限量标准制订的非常严格,但药典修订存在一定滞后性,附录中的检测技术与先进国家尚存在差距,企业在研发和生产中应具有一定前瞻性,否则会使改进工艺、提高质量、保障安全的努力大打折扣。为什么要检测残余DNA?生物制剂是制药行业中发展最快的领域,2014年全球十大畅销药中7个是生物制剂。这些销售在临床上疗效确切,但研发成本高,生产和质量控制要求非常严格。绝大部分生物制剂是不经过胃肠道直接进入体内,所以除了生物活性外,监管部门对药品中杂质的限量要求非常严格。其中,宿主细胞残留DNA因为具有特别的潜在安全风险,一直是国内外药品监管机构关注的重点。美国药典会从2011年开始就组织专门小组讨论修订生物制品中残留DNA检测方法,并在2014年Prescription/Non-Prescription Stakeholder Forum Meeting#5上宣布将在2015年药典修订版中增加新的章节(General Chapter )来规范检测方法和标准物质。为什么美国药典会的专家组花几年时间讨论一个微量成分(100pg/剂量)的检测方法?还要专门增加章节来规范化?回答这些问题,先要了解它的来源和潜在危害性。生物制品中的重组蛋白药、抗体药、疫苗等产品是用连续传代的动物细胞株表达生产,虽然经过严格的纯化工艺,但产品中仍有可能残余宿主细胞的DNA片段。这些残余DNA可能带来传染性或致瘤性风险,比如残留DNA可能携带HIV病毒或Ras癌基因。分布在哺乳动物细胞基因组的LINE-1序列可能发挥逆转录转座子作用插入到染色体中,这种插入可能影响关键基因功能的发挥,比如激活癌基因或抑制抑癌基因。此外,由于微生物来源的基因组DNA富含CpG和非甲基化序列,增加了重组蛋白药物在体内的免疫源性风险。目前的研究结果显示,残留DNA的致瘤性相比传染性风险要低,但考虑到致瘤性实验是动物实验,传染性实验是在细胞水平做的,或许对两方面的风险都不能掉以轻心。众所周知,外源蛋白可能引起严重免疫反应,但关于残留DNA诱导的免疫反应的研究还不多。在一些临床前和临床研究中报道了高剂量的核酸样品,比如DNA疫苗或佐剂中的CpG寡聚核苷酸,可以诱导免疫反应,还诱导产生DNA抗体。生物制品中宿主残余DNA既是是生产中带来的杂质,还存在一定安全隐患。因此,WHO和各国药物注册监管机构一般只允许生物制剂中存在100pg/剂量以下的残留DNA。根据杂质来源和工艺,特殊情况下最高允许10ng/剂量。各种残余核酸检测技术的优劣正如前面讲过,2015年版的美国药典将新增章节对残余DNA检测进行规范化,那究竟和现有方法有什么不同?为什么最后只确定了一种方法?我们来看看现行美国药典对于残余DNA检测的总体要求。"因为残留DNA涉及到潜在来源(传染性病毒DNA)、管理规程等关键问题,药品监管部门建议必须建立产品的DNA残留检测方法。不论是否成品的常规检测包含DNA残留含量检测,还是工艺开发中已经证实了DNA清除率,残留DNA技术指标和定量分析监测规程都必须确立。分析方法包括杂交法、基于DNA结合蛋白的免疫色谱法(阀值法)、定量PCR(Q-PCR)或其他DNA扩增方法。理想的定量检测方法的灵敏度应该能够检测到约10pg/剂量的残留DNA。杂交法、阀值法和定量PCR方法因为灵敏度可以达到检测要求,所以属于经典方法。"下面我们引用美国药典(USP)的内容分别介绍一下这三种方法。杂交法(Hybridization-based):在这种方法中,根据宿主DNA序列设计DNA探针用于测定产品中配对DNA的数量。双链DNA被变性成单链后固定在尼龙膜或硝化纤维膜上,DNA探针被放射或荧光随机掺入标记以后,与膜上固定的样品宿主DNA杂交结合,并在胶片或成像仪对应位置中显现斑点。对于荧光标记的探针,斑点的光密度结果可以在仪器中定量分析。斑点光密度对应结合在目标DNA上的探针数,进而推测出残留DNA的数量。通过目测方法可以半定量地检测样品中残留DNA,仪器读片可以对应斑点光密度绘制标准曲线,对应检测结果更加准确。DNA结合蛋白免疫阈值法(DNA-BINDING PROTEIN-BASED):这种方法使用DNA结合蛋白和DNA抗体,分四步检测。第一步,通过加热把DNA变性成单链DNA,变性后DNA与偶联了亲和素的DNA结合蛋白以及偶联了尿素酶的DNA单克隆抗体混合反应,液相中的单链DNA、DNA结合蛋白、DNA抗体共同形成序列非特异的复合物。第二步,样品混合液通过生物素标记的膜,亲和素-生物素结合把DNA复合物固定在膜上,洗去非特异吸附。第三步,膜放入检测仪器中与尿素溶液反应,反应产物氨改变溶液pH值并被仪器记录变化。这种pH值的变化直接与样品中的DNA数目相关。第四步,仪器软件自动分析原始数据确定样品中残留DNA数量。定量PCR法(QUANTITATION PCR-BASED):qPCR方法以其快速、高通量的特点已经被应用于生物制药的一些领域(拷贝数检测与病毒检测)。这项技术能够确定各种样品中目标DNA序列的准确数量。DNA探针的设计非常关键,这种DNA探针包含一端染料分子和另一端淬灭分子。当特殊设计的DNA引物引导DNA聚合酶沿着模板序列复制合成另一条对应序列时,DNA聚合酶切断结合在目标DNA上的探针染料端,释放到反应液里的染料信号被仪器测量。经过数十个循环的DNA扩增,荧光信号与起始DNA模板成对应关系,对应标准曲线可以准确计算出样品中残留DNA的数量。美国药典附录进一步对三种方法进行了应用评价。杂交法可以序列特异性地检测目标DNA,但32P标记的探针因为存在半衰期短、放射等问题,实际应用并不广泛。

  • 【求助】求DPPC(二棕榈酰磷脂酰胆碱)的分析方法,非常紧急,在线等.......

    各位高手,我最近在做液相检测兔胎中DPPC(二棕榈酰磷脂酰胆碱)含量的检测,具体方法见文献,但是我发现这个方法行不通,试用了两个厂家的硅胶色谱柱,可是都得不出像样一点的峰型,进样浓度达到1mg/ml,进样20ul,可是除了有极高的溶剂峰以外没有见到样品峰,溶剂峰3min左右就出峰了,我的条件是:硅胶柱(250*4.6mm,5um),日立紫外检测器,温度32~37度,进样20ul,流速1.0~1.5ml/min,流动相:乙腈:甲醇:85%磷酸=100:6:0.8;检测波长205nm,标准品溶剂为氯仿:甲醇=2:1(v/v),可是我一直得不到自己要的结果,我想问一下各位高手是用什么方法做磷脂的,希望得到大家的帮助,因为比较急,我在线等,如果有国外的文献,也希望给我传一份,我的QQ是308482760,邮箱是lizn136@126.com,不胜感激.........

  • 关于胆碱酯酶的提取材料,哪个更好?

    我试过好多从小麦中提取胆碱酯酶的方法,但是提取的酶,在用碘化硫代乙酰胆碱(BuTCI)做底物的时候,对农药的敏感性不高;而用靛酚乙酸酯做底物的时候,对农药的敏感性还可以,不知道为什么?如果我要坚持用碘化硫代乙酰胆碱(BuTCI)做底物,从哪些材料里提取会更好?欢迎有相关经验的同仁进行交流探讨!

  • 【资料】易发生中毒事故的危险化学品 之 有机磷农药

    有机磷农药 接触机会有机磷农药生产与使用人员。侵入途径可经皮肤、呼吸道、消化道吸收。 毒理学简介各品种的毒性可不同,多数属剧毒和高毒类,少数为低毒类。某些品种混合使用时有增毒作用,如马拉硫磷与敌百虫、敌百虫与谷硫磷等混合剂。某些品种可经转化而增毒, 如1605氧化后毒性增加, 敌百虫在碱性溶液中转化为敌敌畏而毒性更大。有机磷农药 (有机磷酸酯类农药) 在体内与胆碱酯酶形成磷酰化胆碱酯酶, 胆碱酯酶活性受抑制, 使酶不能起分解乙酰胆碱的作用, 致组织中乙酰胆碱过量蓄积, 使胆碱能神经过度兴奋, 引起毒蕈碱样、烟碱样和中枢神经系统症状。磷酰化胆碱酶酯酶一般约经48小时即"老化",不易复能。某些酯烃基及芳烃基磷酸酯类化合物尚有迟发性神经毒作用,是由于有机磷农药抑制体内神经病靶酯酶(神经毒性酯酶),并使之"老化", 而引起迟发性神经病。此毒作用与胆碱酯酶活性无关。 临床表现急性中毒 潜伏期:按农药品种及浓度,吸收途径及机体状况而异。一般经皮肤吸收多在2~6小时发病,呼吸道吸入或口服后多在10分钟至2小时发病。发病症状: 各种途径吸收致中毒的表现基本相似,但首发症状可有所不同。如经皮肤吸收为主时常先出现多汗、流涎、烦躁不安等;经口中毒时常先出现恶心、呕吐、腹痛等症状;呼吸道吸入引起中毒时可出现视物模糊及呼吸困难等症状。 根据毒作用部位而引起的症状:1. 毒蕈碱样症状: 食欲减退、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、流涎、多汗、视物模糊、瞳孔缩小、呼吸道分泌物增加、支气管痉挛、呼吸困难、肺水肿。2. 烟碱样症状: 肌束颤动、肌力减退、肌痉挛、呼吸肌麻痹。 3. 中枢神经系统症状: 头痛、头晕、倦怠、乏力、失眠或嗜睡、烦躁、意识模糊、语言不清、谵妄、抽搐、昏迷,呼吸中枢抑制致呼吸停止。4. 植物神经系统症状: 血压升高、心率加快, 病情进展时出现心率减慢、心律失常。中毒分级a. 轻度中毒: 有头晕、头痛、恶心、呕吐、多汗、胸闷、视物模糊、无力等症状,瞳孔可能缩小。全血胆碱酯酶活性一般为50%~70% 。b. 中度中毒: 上述症状加重,尚有肌束颤动、瞳孔缩小、轻度呼吸困难、流涎、 腹痛、 腹泻、 步态蹒跚、 意识清或模糊。全血胆碱酯酶活性一般在30%~50% 。d. 重度中毒: 除上述症状外,尚有肺水肿、昏迷、呼吸麻痹或脑水肿。全血胆碱酯酶活性一般在30%以下。迟发性猝死: 在乐果、敌百虫等严重中毒恢复期,可发生突然死亡。 常发生于中毒后3~15日。多见于口服中毒者。中间型综合征: 倍硫磷、乐果、久效磷、敌敌畏、甲胺磷等中毒后2~4天,出现以肢体近端肌肉、屈颈肌、脑神经运动支支配的肌肉和呼吸肌无力为主的临床表现,包括抬头、肩外展、屈髋和睁眼困难,眼球活动受限,复视,面部表情肌运动受限,声音嘶哑,吞咽和咀嚼困难,可因呼吸肌麻痹而死亡。迟发性周围神经病: 甲胺磷、丙胺磷、丙氟磷、 对硫磷、 马拉硫磷、伊皮恩、乐果、敌敌畏、敌百虫、丙胺氟磷等中毒病情恢复后 4~45 天出现四肢感觉-运动型多发性神经病。与胆碱酯酶活性无关。农药溅入眼内可引起瞳孔缩小,不一定有全身中毒。 处理过量接触者立即脱离现场,至空气新鲜处。 皮肤污染时立即用大量清水或肥皂水冲洗。眼污染时用清水冲洗。口服者洗胃后留置胃管, 以便农药反流时可再次清洗, 如口服乐果后宜留置胃管2~3天,定时清洗。无法用胃管洗胃时可作胃造瘘置管洗胃。有轻度毒蕈碱样、烟碱样或中枢神经系统症状, 全血胆碱酯酶活性正常者;无明显症状,全血胆碱酯酶活性70%以下者 或接触量大者,均应观察24~72小时,及时处理。 特效解毒剂a. 阿托品: 能清除或减轻毒蕈碱样和中枢神经系统症状,改善呼吸中枢抑制。用药原则: 早期、适量、反复给药, 快速达到"阿托品化" (瞳孔扩大、颜面潮红、皮肤无汗、口干、心率加速)。 用法: 轻度中毒,每次1~2mg, 皮下或肌注,每4~6小时1次, 达"阿托品化" 后改为口服0.3~0.6mg,每日2~3次。中度中毒,首次2~5mg, 静注。重度中毒首次10~20mg, 静注,如毒蕈碱样症状未好转或未达"阿托品化", 则5~10分钟后重复半量或全量 也可用静滴维持药量, 随时调整剂量, 达"阿托品化", 直至毒蕈碱样症状明显好转, 改用维持量。如症状、体征基本消退,可减量观察12小时, 如病情无反复, 可停药。轻度中毒可单独应用阿托品, 中度及重度中毒时合并应用阿托品及胆碱酯酶复能剂。合并用药有协同作用,剂量应适当减少。少量农药溅入眼内引起瞳孔缩小, 无全身中毒症状者, 不必用阿托品作全身治疗,应用0.5%~1%阿托品滴眼即可。注意事项: [1]防止全身用药过量引起阿托品中毒(瞳孔扩大、 心动过速、 尿储留、体温升高、谵妄、抽搐、 昏迷、 呼吸麻痹等)。 如发生阿托品中毒时应立即停药,症状严重者可应用毛果芸香碱或新斯的明等药拮抗阿托品的作用。 (2)较长时间大剂量应用阿托品可引起阿托品依赖现象,表现为阿托品减量或停用时出现面色苍白、头晕、 出汗、 腹痛、 呕吐等类似有机磷中毒"反跳"现象。一旦发生此现象,应逐渐减量至停药。 阿托品1ml含0.5mg的剂型为低渗溶液,大剂量使用时可能引起血管内溶血,需加以注意。654(山茛菪碱)和703(樟柳碱)的药理作用与阿托品相似,对有机磷中毒有一定疗效。b. 胆碱酯酶复能剂: 常用肟类复能剂为解磷定和氯磷定复能剂对不同品种中毒的疗效不尽相同, 如对1605、1059、苏化203、3911等中毒疗效显蓍 对敌百虫、敌敌畏中毒疗效稍差;对乐果、4049中毒疗效不明显;对二嗪农、谷硫磷等中毒有不良作用, 但对其他有机磷酸酯杂质可能有一定疗效。对复能剂疗效不理想的农药中毒,治疗以阿托品为主。但目前对复能剂治疗各品种的疗效不同的观点有异议。复能剂应及早应用,中毒后48小时磷酰化胆碱酯酶即"老化",不易重新活化。用法:轻度中毒可不用复能剂, 或轻中度中毒,用氯磷定0.25~0.5g, 肌注,或解磷定0.5g静注,必要时 2小时后重复一次。重度中毒给氯磷定0.75~1g或解磷定1~1.5g溶于10%葡萄糖液缓慢静注, 半小时后如病情无明显好转 ,可重复一次, 后改为静滴, 速度一般每小时不超过0.5g。烟碱样症状好转后逐步停药。一般应用1~2日。用药过多过快可引起呼吸抑制,应立即停药,施行人工呼吸或气管插管加压给氧。一般短时间即可恢复自发呼吸。c. 含抗胆碱剂和复能剂的复方注射液解磷注射液: 起作用快, 作用时间较长。因有多种配方, 其用法不同。由苯那辛(抗胆碱药)和氯磷定等组成的复合剂肌注,轻度中毒1/2~1支 中度中毒1~ 2支,加用氯磷定0.5g;重度中毒2~3支,加用氯磷定0.75~1.0g。用药后1小时可重复半量。中毒症状基本消退,全血胆碱酯酶活性60%以上,停药观察。HI-6复方: 含HI-6(酰胺磷定, 为胆碱酯酶复能剂)、阿托品、胃复康、安定等,每支2ml。轻度中毒1/2~1支,中度中毒2~3支,重度中毒3~5支,均肌注。口服中毒者适当加量,必要时补充阿托品。对症、支持治疗。预防"反跳"现象及迟发性猝死: 口服者及早彻底洗胃;适量应用阿托品, 勿过早停药;恢复期避免过早活动;症状消退后继续观察2~3日, 防止出现病情反复。严重中毒恢复期作心电图监护,及时治疗心律失常,以防发生扭转性室性心动过速导致死亡。 吗啡类药物忌用。 标准中国职业病诊断国家标准:职业性急性有机磷农药中毒诊断标准及处理原则GB7794-87

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