罗汉果酸乙对照品

1、材料与仪器罗汉果皂苷V对照品(来源：中国检验检疫局；批号：111754-200601；纯度：100%)；乙腈（色谱纯，上海安普实验科技股份有限公司）；一级水；磷酸（分析纯，广州化学试剂厂）、清咽含片(汤臣倍健股份有限公司)。超声波清洗器(EQ-500，昆山市超声仪器有限公司)；waters超高效液相色谱仪(沃特世科技（上海）有限公司)； 电子天平(感量0.1mg, [color=#333333]梅特勒[/color][color=#333333]-[/color][color=#333333]托利多[/color]科学仪器有限公司)；色谱柱(C18，XSELECT HSS T3 2.5μm 2.1×100mm，沃特世科技（上海）有限公司)。2、色谱条件色谱柱(C18，XSELECT HSS T3 2.5μm 2.1×100mm)；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：5μL；检测波长：203nm，流动相：乙腈: 0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，如下表：[table=411][tr][td] [align=center]时间（min）[/align] [/td][td] [align=center]乙腈（%）[/align] [/td][td] [align=center]0.1%磷酸水（%）[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][td] [align=center]82[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][td] [align=center]82[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]27[/align] [/td][td] [align=center]73[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7.5[/align] [/td][td] [align=center]27[/align] [/td][td] [align=center]73[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7.6[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][td] [align=center]82[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][td] [align=center]82[/align] [/td][/tr][/table]3、标准品溶液的配制精密称取罗汉果皂苷V对照品20.00 mg，置于25 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得罗汉果皂苷V对照品溶液，为储备液。分别精密吸取罗汉果皂苷V标准贮备液稀释成5个罗汉果皂苷V标准梯度使用液，浓度分别为0.033mg/mL、0.0504mg/mL、0.083mg/mL、0.166mg/mL、0.333mg/mL。4、供试品溶液的配制精密称取样品0.29g，置于25 mL棕色容量瓶中，加甲醇适量，于45℃超声30min，并不时振摇样品，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得。5、标准曲线的绘制将标准系列溶液浓度为0.033mg/mL、0.0504mg/mL、0.083mg/mL、0.166mg/mL、0.333mg/mL的罗汉果皂苷V标准液进行UPLC分析，记录色谱图，以标准品的浓度为横坐标，标准品的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。6、检出限实验将浓度为0.77 μg/mL的对照溶液进样测定，通过工作软件的计算得S/N=3。按实际样品的处理过程计算。7、精密度实验精密称取样品6份，按2.4供试品制备方法处理样品，检测样品含量，计算其RSD（%）。8、回收率实验精密称取约0.29g样品9份，置于25mL容量中，分成3组，每组3份，于每一组中分别精密加入罗汉果皂苷V标准使用液(浓度为0.8324 mg/mL) 1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL，加入适量的甲醇，45℃超声30min使溶解并定容至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，即可。9、 结果与讨论9.1 标准曲线确证结果测定罗汉果皂苷V的标准曲线见图1，其标准方程为Y= 2877896.2267X+2312.4018（r=1.0000），线性范围为0.033-0.333mg/mL。[img=,690,282]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111541347430_3462_3237657_3.png!w690x282.jpg[/img]9.2 检出限和定量限分析方法的检出限和定量限由信噪比（[i]S/N[/i]）计算。检出限定义为S/N=3时对应的待分析浓度，定量限定义为[i]S/N[/i]=10时对应的待分析浓度。9.2.1 检出限 将浓度为0.77 μg/mL的对照溶液进样，通过工作软件的计算得S/N=3。按实际样品的处理过程计算，方法的检出限为：0.77μg/mL×25mL/0.29g= 66.4μg/g。9.2.2 定量限 取信噪比=10:1定为检测浓度，DL=2.57 μg/mL，按照实际样品的处理过程计算，方法的定量限为： 2.57μg/mL×25mL/0.29g = 221.6μg/g。9.3 精密度实验结果罗汉果皂苷V的精密度结果见下表，6个样品的含量范围为0.4325~0.4471g/100g，平均含量0.44g/100g，相对标准偏差(RSD)为1.5%，表明该方法有良好的精密度。[table=565][tr][td=1,2] [align=center]序号[/align] [/td][td=1,2] [align=center]称样量（g）[/align] [/td][td] [align=center]浓度[/align] [/td][td=1,2] [align=center]含量(g/100g)[/align] [/td][td=1,2] [align=center]平均含量(g/100g)[/align] [/td][td=1,2] [align=center]RSD（%）[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]（mg/mL）[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]0.29263[/align] [/td][td] [align=center]0.05203[/align] [/td][td] [align=center]0.4445[/align] [/td][td=1,6] [align=center]0.44[/align] [/td][td=1,6] [align=center]1.5[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]0.29711[/align] [/td][td] [align=center]0.0516[/align] [/td][td] [align=center]0.4341[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]0.29574[/align] [/td][td] [align=center]0.05156[/align] [/td][td] [align=center]0.4358[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]0.29017[/align] [/td][td] [align=center]0.05021[/align] [/td][td] [align=center]0.4325[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]0.28762[/align] [/td][td] [align=center]0.05107[/align] [/td][td] [align=center]0.4439[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]0.28839[/align] [/td][td] [align=center]0.05158[/align] [/td][td] [align=center]0.4471[/align] [/td][/tr][/table]9.4 回收率实验结果罗汉果皂苷V在3个不同添加水平下浓度的回收率结果见下表，3个浓度下样品中的罗汉果皂苷V的提取回收率范围是94.98%~100.83%，平均回收率为：97.6%，相对标准偏差（RSD）为1.8%。[table=452][tr][td=1,2] [align=center]序号[/align] [/td][td] [align=center]理论加[/align] [/td][td] [align=center]实测加标[/align] [/td][td] [align=center]回收率[/align] [/td][td] [align=center]平均[/align] [/td][td] [align=center]RSD[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]标量(mg)[/align] [/td][td] [align=center]量(mg)[/align] [/td][td] [align=center](%)[/align] [/td][td] [align=center]回收率（%）[/align] [/td][td] [align=center](%)[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1.33184[/align] [/td][td] [align=center]1.30079[/align] [/td][td] [align=center]97.668[/align] [/td][td=1,9] [align=center]97.58[/align] [/td][td=1,9] [align=center]1.8[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1.33184[/align] [/td][td] [align=center]1.30239[/align] [/td][td] [align=center]97.788[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1.33184[/align] [/td][td] [align=center]1.34284[/align] [/td][td] [align=center]100.826[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]1.6648[/align] [/td][td] [align=center]1.59282[/align] [/td][td] [align=center]95.676[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]1.6648[/align] [/td][td] [align=center]1.58125[/align] [/td][td] [align=center]94.981[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]1.6648[/align] [/td][td] [align=center]1.60273[/align] [/td][td] [align=center]96.271[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7[/align] [/td][td] [align=center]1.99776[/align] [/td][td] [align=center]1.95674[/align] [/td][td] [align=center]97.947[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]1.99776[/align] [/td][td] [align=center]1.96715[/align] [/td][td] [align=center]98.467[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]9[/align] [/td][td] [align=center]1.99776[/align] [/td][td] [align=center]1.97061[/align] [/td][td] [align=center]98.641[/align] [/td][/tr][/table]9.5 测定条件讨论 经紫外扫描，罗汉果皂苷V在203nm处有最大的吸收，分析结果显示色谱图基线平稳，且各色谱峰峰形、分离度较好，所以选择了203nm作为检测波长。由于制剂配方成分的复杂，采用等度并不能很好的得到分离，因此试验所用的流动相是经过筛选得来，罗汉果皂苷V测定所用流动相是在普通液相色谱条件的基础上进行梯度洗脱优化，经多次试验达到了良好的分离效果，且基线比较平稳，同时配合超高效色谱柱，检测时间短，适合本品的含量测定。

周一的时候使用AFS做的罗汉果糖粉中的砷，可是原子荧光版块都木有人关注了。难道是年底了，大家都无心工作了。很久没来食品版块了，因为最近很少做食品样。感觉这个实验还是发在这个版块比较贴切些。欢迎大家交流讨论。不要太冷清~~刚好有新型号仪器，所以调试完毕后，这两天一直在用这台仪器在实验室做测试。估计大家都没见过，SK-乐析原子荧光光谱仪，给个合影靓照。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412031523_525744_2661131_3.jpg下面是罗汉果糖粉中镉元素测定的步骤一、所需设备，试剂及试剂相应的配制方法1：所需设备SK-乐析氢化物发生原子荧光光谱仪，镉空心阴极灯，电热板2：所需试剂硝酸（优级纯），高氯酸（优级纯），盐酸（优级纯），抗坏血酸（优级纯），硫脲（分析纯），氢氧化钾（优级纯），硼氢化钾（优级纯），乙醇（分析纯），Cd1、Cd2（信号增强剂），镉标准溶液，去离子水。3：试剂配制方法酸空白介质：2%盐酸-0.01Cd2。1000mL酸空白配制方法：取去离子水980mL，加入20mL盐酸，0.1g Cd2，搅拌至完全溶解。还原剂的配制：0.5%氢氧化钾-3% Cd1。二、样品制备 准确称取0.2000g样品放入100mL烧杯中，加入15mL混酸（硝酸：高氯酸=8:2），盖上表面皿，放在电热板上加热消解。待红颜冒尽之后可以取下表面皿，待烧杯内白烟冒尽溶液蒸至尽干之后，取下，稍微冷却。向烧杯中准确加入25mL酸空白，待测。同时做样品空白，平行操作。三、标准曲线的配制 吸取1ug/mL镉标准储备溶液0.00mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.30mL[size=12.0pt

周一刚出差回来就有任务，这可是件好事情。又有的东西可写了。刚好有新型号产品推出，检测完毕后，实验室的友琴姐为用户检测罗汉果糖粉中的砷元素，分享给大家。欢迎交流讨论。厂家实验室的好处就是，总可以拿新款仪器试试手，比用户更早使用。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412021413_525538_2661131_3.jpg需要调教的就是这款仪器了，SK-乐析。今天用它检测的是罗汉果糖粉中的砷，具体操作详见下文。一、所需设备，试剂及试剂相应的配制方法1：所需设备北京金索坤SK-乐析原子荧光光谱仪，砷空心阴极灯，电热板2：所需试剂硝酸（优级纯），高氯酸（优级纯），盐酸（优级纯），抗坏血酸（优级纯），硫脲（分析纯），氢氧化钾（优级纯），硼氢化钾（优级纯），砷标准溶液，去离子水。3：试剂配制方法酸空白介质：5%盐酸-1%抗坏血酸-1%硫脲。1000mL酸空白配制方法：取去离子水950mL，加入50mL盐酸，10g抗坏血酸，10g硫脲，搅拌至完全溶解。还原剂的配制：0.5%的氢氧化钾-2%的硼氢化钾。取500mL的去离子水，加入2.5g氢氧化钾，10g硼氢化钾后搅拌均匀。二、样品制备准确称取0.2000g样品放入100mL烧杯中，加入15mL混酸（硝酸：高氯酸=8:2），盖上表面皿，放在电热板上加热消解。待红颜冒尽之后可以取下表面皿，待烧杯内白烟冒尽溶液蒸至尽干之后，取下，稍微冷却。向烧杯中准确加入25mL酸空白，待测。同时做样品空白，平行操作。三、标准曲线的配制吸取1ug/mL砷标准储备溶液0.00mL、0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、1.00mL于六个100mL容量瓶中，用酸空白介质定容到刻度，摇匀。此标准系列的浓度分别为0.00ng/mL、1.00ng/mL、3.00ng/mL、5.00ng/mL、7.00ng/mL、10.00ng/mL。四、测试1：测试参数负高压：-260v灯电流：80mA采样延时：8S辅气：600载气:8002：测试步骤打开氩气，打开仪器主机与软件，预热30分钟后测试并建立标准曲线，然后测试稀释后的样品空白以及样品，结果计算（也可以在软件中设置样品信息由软件自动计算得出结果）五、打印报告六、附件（包括标准曲线、测试结果）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412021415_525539_2661131_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412021415_525540_2661131_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412021415_525541_2661131_3.jpg欢迎给位多交流，多探讨。AFS版块太冷清了！

各位老师，这是检测器出现问题了吗？http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405240928_500313_2856959_3.jpg下面是实验条件：【含量测定】照高效液相色谱法（附录Ⅵ D)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(23：77)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按罗汉果皂苷V峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取罗汉果皂苷V对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，回收溶剂至干，加水10ml溶解，通过大孔吸附树脂柱AB-8(内径为1cm，柱高为10cm)，以水100ml洗脱，弃去水液，再用20％乙醇100ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加流动相溶解，转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含罗汉果皂苷V(C60H102O29)不得少于0.50％。

RT, 按药典上的方法测枇杷叶中的两种果酸含量（药典只要求两种果酸含量总合大于0.7%），一直不能把齐墩果酸和熊果酸完全分离，即使对照品也是这样情况；在进行峰面积处理时候，两个这样叠加的峰面积是不是全部加和了？还是有部分被遗漏了？这样做出来的含量达到了药典标准，只是不太清楚这样的结果到底能不能要？PS：今天试验了甲醇90水10冰醋酸0.03三乙胺0.06，还是这样的结果...太无奈了，分离不开下图是对照品峰形：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/05/201305142346_440065_2459406_3.jpg

个人在工作的小心得，请各位老师多多指点HPLC法测定山楂中熊果酸含量 摘要：目的：建立山楂中熊果酸含量测定HPLC方法。方法：采用高效液相色谱法检测熊果酸含量，以甲醇-水（20：80）为流动相，检测波长为210nm，流速为10ul。结果：标准曲线的绘制及线性范围得熊果酸线性回归方程为y=22.3880x+1.2043，相关系数r为0.9998，表明熊果酸在1～60μg/ml范围内呈现良好线性关系。精密度RSD为1.09%，重复性RSD为1.83%，表明该方法重现性良好。72小时内稳定性试验熊果酸峰面积RSD为1.10%，表明该样品溶液的稳定性良好。结论：熊果酸可作为山楂质量控制指标之一，本方法简便、准确、灵敏度高、重现性好，可作为山楂中熊果酸的含量测定方法，可有效控制山楂的内在质量。关键词：山楂；熊果酸；质量标准；HPLC 山楂又名山里红、红果。蔷薇科（Rosaceae)植物山楂CrataeguspinnatifidaBge.的果实。具有开胃消食、化滞消积、活血散瘀、化痰行气的功效。常用于肉积停乳，胃脘胀满，泻痢腹痛，瘀血经闭，痛经，产后淤血腹痛，心腹刺痛，胸痹心痛，疝气疼痛，高血脂症等。山楂中含多种化学成分，如金丝桃甙、槲皮素、山楂酸、柠檬酸、熊果酸、齐墩果酸等。在《中国药典》2015年版一部山楂项下仅有对山楂性状、显微薄层定性鉴别和有机酸枸橼酸含量滴定方法。为建立山楂HPLC方法，本文选择山楂中熊果酸为目标成分，采用高效液相色谱法，为山楂中药材质量控制提供科学依据，达到有效控制山楂中药材质量的目的。熊果酸为山楂中的主要活性成分，具有抗高血脂、降血糖、镇静、抗炎、抗菌等多种药理作用，熊果酸还具有明显的抗氧化功能。2015年版药典山楂项下未对其熊果酸建立含量测定。1、仪器及试药1.1仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪（四元梯度系统），紫外检测器，色谱柱为ZorbaxSB-C18（4.6×250mm，5μm），Agilent Cary60紫外可见分光光度计，KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），98-1-B型电子调温电热套（天津市泰斯特仪器有限公司），IKA KS4000i恒温摇床。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609090957_608958_2984502_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609090957_608959_2984502_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609090957_608960_2984502_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609090957_608961_2984502_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609090957_608963_2984502_3.jpg1.2试药 熊果酸对照品：(中国食品药品检定研究院，批号:110742-201212，供含量测定用)；山楂药材（经检验为药典品种的市售样品）2、方法与结果2.1山楂中熊果酸测定 本文采用高效液相色谱法测定山楂中熊果酸的含量，为山楂药材质量控制提供科学依据。2.1.1检测波长测定 取熊果酸对照品，加甲醇溶解并制备成一定浓度的溶液，以甲醇为空白溶剂，经Agilent Cary60紫外可见分光光度计测定其最大吸收波长，结合现有文献资料报道，最后确定检测波长为210nm。2.1.2流动相优化 在文献资料中，有用乙腈-水-磷酸、甲醇-磷酸盐缓冲液、乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵等系统作为流动相，但经实验考察后发现，这些系统存在或可能分析时间过长，或样品分离效果欠佳等因素。经实验摸索后发现，以甲醇-水系统可以很好的避免影响因素。2.1.3色谱条件 以甲醇-水（80：20）为流动相，检测波长为210nm，柱温40℃，进样量为10μl。经测定，分离度均大于2.0%，理论塔板数均在6000以上。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609090840_608927_1669358_3.jpg2.1.4熊果酸对照品储备溶液的制备 精密称取熊果酸对照品0.01272g，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，即得对照品储备液（浓度约1.0mg/ml）。2.1.5供试品溶液的制备 取本品粉末（过2号筛）0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡1h，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.1.6标准曲线的绘制及线性范围 精密量取上述对照品储备液，置量瓶中，分别制备1、2、5、10、20、60μg/ml的标准溶液，用2.1.3项下的色谱条件绘制标准曲线，得熊果酸线性回归方程为y=22.3880x+1.2043，相关系数r为0.9998，表明熊果酸在1～60μg/ml的浓度范围内呈现良好的线性关系。2.1.7供试品溶液制备方法的优化 2.1.7.1取本品粉末（过2号筛，下同）0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡1h，水浴锅加热回流30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.1.7.2取本品粉末0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡24h，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.1.7.3取本品粉末0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡1h，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 经测定，方法3的提取效率明显优于方法1、2，在结合实际工作中的可操作性和提取率，最后确定方法3作为最终的提取方法。2.2精密度试验 取10μg/ml熊果酸对照品溶液，按上述色谱条件进样，重复进样6次，测得RSD为1.09%，表明仪器性能良好。2.3重复性试验 取同一批山楂样品5份，按上述样品制备项下方法，依法操作制备样品溶液。平行测定5次，结果熊果酸的平均含量为0.57%，RSD为1.83%。表明该方法重现性良好。2.4稳定性试验 取同一批山楂制备的样品溶液，在常温下放置，分别于0、6、24、48、72h分别测定1次，结果RSD为1.10%，表明该样品溶液的稳定性良好。2.5回收率试验 精密称取已知熊果酸的山楂样品约0.5g，共5份，分别精密加入对照品溶液(熊果酸浓度为0.05088mg·ml-1)10ml，按上述样品制备方法制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，计算平均回收率，结果(见表1)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609090847_608932_1669358_3.jpg3、讨论 山楂作为常用的中药材（饮片）之一，在2015年版药典收录的方法中，未采用HPLC或者更先进的方法测定其活性成分的含量。本实验方法刚好弥补了这个空缺，更好的体现中药现代化要与时俱进的要求，更符合中国中药标准现代化的要求。本方法操作简便，较更好的鉴别山楂内在质量的优劣，可以替代熊果酸薄层鉴别，更具有科学性。参考文献：国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）．北京：化学工业出版社，2015:31国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部.北京:化学工业出版社，2010:30南京中医药大学.中药大辞典(上册).上海:上海科学技术出版社，1986:170中药大辞典(上册).上海科学技术出版社，中华人民共和国药典2010版，1986:170.李贵海，孙敬勇，张希林，等.山楂降血脂有效成分的实验研究.中草药，2002，333(1):50.熊斌，雷志勇，陈虹.熊果酸药理学的研究进展.国外医学药学分册，2004，6(31):133.5中国药典62010年版一部国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部.北京:化学工业出版社2005:198.曾

高效液相色谱法测定促进消化片中熊果酸的含量 本所研制的促进消化片由山楂、麦芽、鸡内金、莱菔子等药味组成，具有清胃消食之功效。用于脾胃虚弱所致的食积，症见不思饮食、嗳腐酸臭、脘腹胀满；消化不良见上述证候者。其中君药为山楂。 中药山楂是蔷薇科山楂或山里红的干燥成熟果实。具有消食健脾，行气散瘀功效，用于肉食积滞，胃脘账满，泻痢腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，疝气作痛；高血脂症。主产山东、河北、河南、辽宁、山西等省，多为栽培。 随着中药现代化发展战略的提出，为控制产品质量，确保临床疗效，对中药的鉴别和检查提出了很高的要求。本文采用高效液相色谱法对方中山楂的有效成分熊果酸进行含量测定，为建立促进消化片的质量标准提供依据。材料与方法1 仪器与材料安捷伦1200 配紫外检测器循环水式真空泵（河南郑州）旋转蒸发仪（东京理化）紫外可见分光光度计（瓦里安）SZ-97A自动三重水蒸馏器（上海亚荣生）电子天平（万分之一，梅特勒托利多）超声波清洗机（昆山）熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所），促进消化片（本所自制），阴性对照（自制），甲醇（分析纯、色谱纯，国药）2 方法2.1 色谱条件色谱柱为依利特 (250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-水：醋酸(65∶34：1)；检测波长210nm；体积流量1mL﹒min-1；柱温38℃；进样量20μl。理论塔板数按熊果酸峰计算，应不低于3000。2.2 溶液的配制2.2.1对照品贮备液的制备精密称取于五氧化二磷干燥器中减压干燥24小时的熊果酸10.56mg，溶于适量甲醇，移至50mL容量瓶中，加甲醇定容，制成每1mL含熊果酸0.2112mg的溶液，作为熊果酸对照品贮备液。2.2.2对照品溶液的制备精密量取熊果酸对照品贮备液1mL置5mL容量瓶中，加甲醇定容，制成每1mL含熊果酸0.04224mg的溶液，作为熊果酸对照品溶液。2.2.3供试品溶液的制备取100片促进消化片粉碎过120目筛，精密量取粉末1g，甲醇超声提取30分钟，过滤，滤液水浴蒸干后，残渣加适量甲醇，超声处理30 min，转入50 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，以0.45[/size

重赏之下，必有莽夫！ 前段时间，本人做一中药复方中齐墩果酸的含测条件摸索，因为方法和操作的错误，导致了保留时间的大转移。实验做了三天才有点道道。下面一一给大家介绍。（唉，本人的实验能力还是太差了，学习啊。）一.样品分子结构http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/04/201004181824_213006_1760187_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/04/201004181825_213007_1760187_3.jpg齐墩果酸，CAS号：508-02-1 熊果酸，CAS号： 77-52-1它们两个是同分异构体。出峰顺序为：齐墩果酸，熊果酸。二.样品来源某中药复方颗粒剂，君药中含有齐墩果酸等化学成分，具有与复方相似的药理作用。于是，我们拟对齐墩果酸的含测条件进行摸索。样品处理为：取药材60%、70%、80%、92%、95%的醇提取液，水浴蒸干，加甲醇定容；取颗粒甲醇超声的续滤液，分别10000r/min离心10min后，取上清液注入高效液相色谱仪。齐墩果酸对照品来源于中国药品生物制品检定所。三.色谱条件：Agilent1100（四元泵、柱温箱、自动进样器、紫外检测器），月旭XB-C18，5μm，4.6*250mm，伊利特ODS2，5μm，4.6*250mm，柱温25℃，流速1ml/min,流动相为甲醇：0.1%磷酸（80：20）检测波长为210nm，进样量：10μl。色谱条件一共摸了三天，下面一一给大家介绍。齐墩果酸保留时间大转移（第一天）查阅资料得知，有人曾做过君药中齐墩果酸的含测。我们就先采用他的方法。甲醇：0.1%磷酸80：20。1ml/min。25℃。210nm。10μl。我们先用月旭柱，XB-C18，5μm，4.6*250mm。先随便找了一个以前师兄师姐配的齐墩果酸对照品，浓度未知，连续进了两针，图谱如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/04/201004181836_213013_1760187_3.jpg 图1http://