长尾绿猴胚胎细胞

目的:小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养可应用于：（1）细胞保种；（2）分子生物学研究；（3）基因治疗相关研究。实验原理:将小鼠的胚胎成纤维细胞（MEF）从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置MEF生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。

设备和试剂--6厘米细菌培养皿--M2培养基+1毫克/毫升牛血清白蛋白（sigma） --M16培养基+ 1毫克/毫升牛血清白蛋白（sigma） --BLS胚胎聚集针（DN-10 或DN-09）--ES细胞单细胞悬液--窄口移液管（处理细胞和胚胎）来自Pasteur移液管或其他合适的玻璃毛细管（移液管内径的应? 100μm ）--来自雌性促排卵的八细胞胚胎-- Tyrode’s液，酸性（ sigma） --CO2孵化器

如何运用BLS细胞融合仪及胚胎聚集针创建胚胎 注射器内吸入培养基，在35mm组织培养板上微滴（大致直径3mm）点样成若干行（列）。向培养板内小心注入石蜡油使其覆盖整板，注意不要使石蜡油直接倾倒在微滴上。石蜡油很容易越过这些微滴。石蜡油的量要完全覆盖这些微滴。使用配件按照说明操作，制作凹陷。37度，5%CO2条件下孵育培养板几小时，目的是让培养基在液滴内达到平衡。这一步可以在形成凹陷的步骤之前进行。实验前准备好待聚集的细胞，组织或胚胎，不要将它们长时间暴露在室温下或脱离最适培养条件时间过长。通过在组织培养板盖上加入几滴M2培养基和Tyrode’s酸溶液来去除卵透明带。将组织培养板的培养区域表面如此处理后，胚胎将本能的黏附在表面—因此我们需要使用盖。确认所有培养基溶液和酸液都接近室温。将胚胎放置在一滴M2培养基上。取尽可能少的内含10-20个胚胎的培养基，并移到一滴酸液上。重复这个步骤并将胚胎移到新的一滴酸液上。让胚胎在吸头内保持上下移动，观察卵透明带是如何溶解的。迅速将胚胎移入M2培养基。用几滴培养基溶液洗涤并移入刚才制成的凹陷中。胚胎培养条件是聚集产量的一个重要因素，因为胚胎要培养过夜，如果是四倍体胚胎在移入母体前需要培养48小时。在培养的每个细节都必须小心操作控制。这包括温度，大气，培养基，室温操作时间及矿物油质量。

胚胎显微操作-胚胎分割 (一)概况 胚胎分割是通过对胚胎进行显微操作，人工制造同卵双生或同卵多生的技术，它是扩大胚胎来源的一条重要途径，其理论依据是早期胚胎的每一个卵裂球都具有独立发育成个体的全能性。 本世纪三十年代，Pinrus等首次证明兔2细胞胚的单个卵裂球在体内可发育成体积较小的胚泡。之后，Tarkowski等人的实验胚胎学研究成果进一步证明了哺乳动物2细胞胚的每一个卵裂球都具有发育成正常胎儿的全能性。七十年代以来，随着胚胎培养和移植技术的发展和完善，哺乳动物胚胎分割取得了突破性进展。Mullen等于1970年二分2细胞期鼠胚，通过体外培养及移植等程序，获得了小鼠同卵双生后代。Willadsen于1979年通过分离早期胚胎的卵裂球，成功地获得了绵羊的同卵双生后代。国内张涌等通过分割小鼠、山羊早期胚胎，均获得了同卵双生后代。进一步研究表明，四分胚，八分胚也可以发育成新个体。窦忠英等将7日龄的牛胚胎一分为四，实现了同卵三生。值得说明的是，随着胚胎分割次数的增多，分割胚的发育能力明显降低，这可能与胞质的不断减少有关。 (二)分割方法 胚胎分割方法主要有显微操作仪分割和徒手分割两种。

美国加利福尼亚大学伯克利分校的科学家，利用单细胞Western技术在期刊SCIENCE ADVANCES（IF：12.804）发表文章：Assessing heterogeneity among single embryos and single blastomeres using open microfluidic design, Sci. Adv. 2020 6: eaay1751 22 April 2020. 本文利用单细胞Western技术与现有的工作流程整合在一起，为评估植入前胚胎发育固有的细胞间分子异质性开辟了新途径。

目的介绍四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠技术的操作环节,加快该技术的推广应用。方法综合分析近几年来国内外在小鼠四倍体胚胎与ES细胞嵌合的研究成果,

不需显微操作体细胞核移植的利益和前景远大。当前的成果包括降低装备费用，简化预备工作及实验技术要求低。任何做过胚胎方面试验和口吸管方面工作的人都能很快掌握。尽管用卵母细胞试验的直接工作没有显著减少，但降低了这些工作的技术难度。此外，与早期的技术相比，预备工作如制作工具可以省略。然而，应该注意到产生三倍体需要较多的卵母细胞。无透明带的胚胎可能有利于嵌合体的制作，克隆方法的简化也将有利于核移植的自动化。在卵母细胞成熟期间，用于建立该方法的供体细胞是贴壁的原代培养的颗粒细胞，这些细胞并不是都很适合做供体。随着方法的进一步改进，可能能用不同器官组织的传代细胞和血清饥饿培养的细胞。

电融合仪BLS在猪卵母细胞孤雌激活中的应用 电融合仪BLS在猪卵母细胞孤雌激活中的应用*刘晓1，2 张庆桥3 潘登科2** 陈扣扣2，4 张卫红2，4冯冲2，4 冯书堂2（1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所, 兰州,730050；2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100094；3.河北工程大学，邯郸，056038；4.甘肃农业大学,兰州,730070)摘要:目的 建立并优化BLS细胞融合仪在猪孤雌胚体外生产中的使用条件，同时为克隆胚的生产提供数据参考。方法 以体外成熟的猪卵母细胞为研究对象，研究了不同的电场强度、脉冲时程和脉冲次数对猪卵母细胞电激活效果及其对孤雌胚发育率的影响。结论 电激参数(1.2KV/cm 、100μs、2次脉冲)能够得到较高的卵裂率和囊胚率(70%、30%左右)；BLS细胞融合仪是一种经济高效的胚胎激活仪。关键词: 猪；孤雌激活；BLS融合仪

细胞迁移是一个活的生物生长和维持生命过程中不可缺少的的关键过程。为了完成相应的功能，体内的细胞经常会以特定的方向迁移到特定的位置。迁移是一个循环的过程，细胞向前端伸出突触，缩回其尾端。动物组织中的细胞发生迁移主要是为了响应特定的外部信号。 细胞迁移对于胚胎发育、伤口愈合、分化以及免疫应答等都是非常重要的过程。细胞迁移是血管疾病，慢性炎症疾病以及肿瘤形成等疾病的致病机理。因此，对那些具有促进（伤口愈合）或者抑制（肿瘤形成）细胞迁移作用的化合物的研究就具有非常重要的治疗意义。我们已经建立了一个使用Molecular Devices公司的SpectraMax paradigm多功能检测平台进行标准化的，自动化的高通量细胞迁移分析新方法。相对于划痕分析或者其他的2D伤口闭合实验，这个分析方法更加简单，更具可重复性。

摘要: 为研究不同冻结温度对猕猴桃果丁细胞结构和质构特性的影响, 将猕猴桃果丁分别在温度- 20, - 25, - 30 ℃速冻温度下冻结, 研究速冻前后猕猴桃果丁细胞结构、穿刺力、VC 和汁液流失率的变化。结果表明, 不同冻结温度下, 产品具有不同的质构特性。温度- 30 ℃的速冻对产品细胞结构的破坏较小, 解冻后产品不仅硬度损失少, 而且汁液的流失少, 但不同温度下冻结猕猴桃果丁的VC 变化不明显。因此, 温度- 30 ℃可作为猕猴桃果丁速冻的合适温度。关键词: 猕猴桃 速冻 温度 细胞结构 质构

人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)检测试剂盒人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)抗原、生物素化的人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

细胞的迁移运动不仅是细胞进行很多重要生理活动的基础，同时也是炎症反应和肿瘤发生等病理过程中的重要步骤和关键环节。细胞迁移 (cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。目前人们对恶性肿瘤的研究是多方面的，从癌症的产生到转移，血管供给以及分裂增殖都一直是医学和生物学研究的热点。恶性肿瘤与良性肿瘤的最大区别就在于是否可以对周遭组织进行浸润，结果是形成边界不分明的癌组织，或是进入血管转移到远端（见远端转移）。根据观察可将癌症浸润分为四步。首先癌细胞表面的粘附分子会减少，与周围的细胞彼此分离，被“解除束缚”。同时癌细胞与基底膜的粘附却会增加，这是癌细胞通过增加自身基底面层粘连蛋白（laminin）受体实现的。然后癌细胞会释放蛋白酶，用以降解细胞外基质成分，如Ⅳ型胶原酶，使基底膜受损，产生缝隙。最后是癌细胞阿米巴运动样的迁移，钻过基底膜的缝隙，到达底下的间质组织。癌细胞此后会继续用蛋白酶为自己在间质组织开路，直到血管，然后它会以同样方式进入血管，经血到转移后，又以同样方式出管。因此，癌症的形成与肿瘤细胞的迁移能力密不可分，这也成为了一个诊断和治疗癌症的一个靶点。研究细胞迁移的方法有很多，比如划痕法、实时细胞追踪、Transwell和细胞芯片等，本文将一一介绍现今比较主流的与细胞迁移相关的实验方法。

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验，而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。

基于单核细胞研究的必要性以及猴作为实验动物的优势，为满足客户需要，更好地助力生物药研发，IPHASE作为创新药体外研究生物试剂引领者，开发出了国内首家猴CD14+单核细胞阳选试剂盒！

超分辨率荧光显微成像技术在活细胞成像中的应用

☆双向各三束光片照明，360° 全方位成像；☆光片参数可变，适用于各种样品；☆简单易用的样品腔，可对活体动物和透明组织进行成像；☆可在水溶性缓冲液和透明溶剂中成像，并对不用溶剂进行折射率修正；☆水平方向光路的动态聚焦，带来佳的分辨率；☆超大工作距离，支持大样品体积10 x 10 x 10mm；☆放大倍率可在1.26x至12.6x调整。

美国的科研人员希望能够通过诱导多功能干细胞来源的内皮细胞（iPSC-EC）建立一个血管发育的模型。其中，对内皮细胞的剪切力是，血管发育中不可或缺的条件。流体剪切力能够使细胞排列紧密，有规律。这里以iPSC-EC细胞为例，使用ibidi Pump System 进行一个流动剪切力条件下的细胞培养与静置状态下的细胞培养的对比实验。

在体外培养条件下，动物细胞会自发融合，但是频率极低。因此，一般都需要添加具有诱导细胞融合效应的生物或化学药剂，或者采用电融合技术，人为地促进细胞融合。病毒诱导融合 病毒是最早采用的融合剂。常用于诱导动物细胞融合的病毒有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等，其中仙台病毒最常用。用作融合剂的病毒必须事先用紫外线或β-丙内酯灭活，使病毒的感染活性丧失而保留病毒的融合活性。用灭活的仙台病毒诱导细胞融合的优点：融合率较高，对各种动物细胞都适宜，且仙台病毒能在鸡胚中大量繁殖，容易培养；缺点：仙台病毒不稳定，在保存过程中融合活性会降低，并且制备过程比较烦琐。此外，病毒引进细胞后，可能会对细胞的生命活动产生干扰。

由异体细胞组成的多层皮肤替代品已被测试用于治疗不愈合的皮肤溃疡。然而，这种非天然皮肤移植不能永久移植，因为它们缺乏对与宿主组织整合重要的皮肤血管网络。在这项研究中，我们描述了使用三维生物打印技术制造一种可植入的多层血管化生物工程皮肤移植物。移植物是使用一个生物墨水包含人类包皮皮肤成纤维细胞(FBs)，人类内皮细胞(ECs)来自脐带血人类内皮细胞群体形成细胞(HECFCs)，和人类胎盘周细胞(PCs)悬浮在老鼠尾巴I型胶原蛋白形成真皮然后打印第二个生物墨水包含人类包皮角质形成细胞(KCs)形成一个表皮。在体外， KCs复制和成熟形成多层屏障，而ECs和pc自组装成相互连接的微血管网络。真皮生物墨水中的pc与ec内衬的血管结构相关，似乎能促进KC的成熟。当这些3D打印的移植物被植入免疫缺陷小鼠的背侧时，人ec内衬结构与从伤口床上产生的小鼠微血管一起接种，并在植入后4周内灌注。打印真皮中pc的存在增强了宿主微血管对移植物的侵袭和表皮网的形成。关键词：皮肤，组织工程，生物打印，再生医学，微血管系统影响声明三维打印可用于生成多层带血管化的人体皮肤移植，这可能会克服目前在无血管皮肤替代品中观察到 的移植物存活的限制。在皮肤生物墨水中包含人周细胞似乎可以促进皮肤和表皮的成熟。

实验方法原理:主要原理是通过电击法或CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂处理，使细胞膜的通透性发生暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。因RbCl法制备的感受态细胞转化效率较高，本实验操作以此为例说明。

肿瘤细胞的侵袭能力是肿瘤转移的一个重要特征。为了研究肿瘤细胞侵袭过程的机制，一系列体外细胞实验建立起来，用于研究细胞侵袭基底膜和基质的过程。体外侵袭实验首先是采用人工重构基底膜材料Matrigel，可以在37℃逐渐凝固成胶，结构与天然基质膜结构极为相似。通常的实验是在孔径8μm的滤膜上铺上一层Matrigel，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过。实验之后通过对穿过“基质膜”的细胞进行计数，来确定细胞的侵袭能力。这一方法非常仿真的模拟了细胞在生理状态下的侵袭过程，但是其也有一定的局限性。由于滤膜的不透光性，使得直接观察细胞伪足和骨架变化变得非常困难。

使用琼脂糖包埋胚胎脑组织, 振动切片机切片,免疫荧光组织化学技术漂染, 激光扫描共聚焦显微镜下观察, 这种技术比一般免疫组织化学技术在研究脑发育方面有更多的优越性。

通过使用C2MAP对培养上清液的多种成分进行同时分析，分别鉴定出了Kynurenine、2-Aminoadipic acid，作为在未分化iPS细胞、外胚层分化细胞中表示特征性波动的标志物成分。结果表明，所鉴定出的标志物成分是与细胞的未分化/外胚层分化状态密切相关的因子。因此，通过使用本系统，可以对细胞状态进行非侵袭性的评价。

肽图分析是一种综合表征蛋白生物治疗药物的重要技术。通常采用反相UHPLC/HPLC 法进行分析，但是如果消化物中含有亲水性多肽，例如糖肽，则会丢失一些重要信息。本应用简报报导了将Agilent ZORBAX 快速高分离度300-HILIC 1.8 μ m LC 色谱柱与飞行时间质谱(TOF MS) 联用，可实现糖蛋白红细胞生成素（EPO，一种控制红细胞生成的糖蛋白激素）消化物的肽图分析。利用HILIC（亲水作用色谱）流动相中的高有机溶剂体系，可在HILIC 色谱柱上实现糖肽的有效溶解、保留及分离。本应用简报通过比较分离效果、序列覆盖率以及反相和HILIC 数据，证实了HILIC 是RPLC/MS 多肽分析的一种正交、互补的方法。

活细胞培养荧光显微镜由于可以进行活细胞常规培养条件，例如：温度控制，湿度控制，CO2浓度控制，O2浓度控制，同时配置高速摄像头可以进行时间序列（Time-Lapse）,结合多色荧光滤片切换，LED单波长光源激发，可配备相差(Phase Contrast)，微分干涉（DIC），荧光等对照方式可以更加直观详细的进行细胞形态记录而受到广大科研用户的认可。近年来，倒置荧光显微镜配置活细胞培养装置的相关实验越来越普遍，目前市面上集成的荧光成像系统很多，例如：GE公司的DELTAVISION活细胞成像系统，ZEISS公司的CELL OBSERVER系统，或其它大品牌公司的整套活细胞成像系统，价格昂贵（20万美元以上），维护成本高，厂家工程师上门速度通常比较慢或者收费贵，常规实验室难以负担。目前各实验室通常都配备有倒置荧光显微镜，活细胞培养装置是模块化设计的产品，广州科适特科学仪器有限公司提供一种优惠简便的解决方案，定制整套活细胞或对现有的荧光显微镜进行活细胞升级，购置成本低，拆装方便，兼容目前市场主流的各大显微镜平台，例如：徕卡，尼康，奥林巴斯，蔡司等都可以提供定制的适配器。

近期，广医一院需要一套显微镜对细胞进行培养观察，要求相衬成像效果好，图像清晰，广州明慧工程师和老师沟通后推荐了培养用的倒置生物显微镜NIB610，可以在超净台内进行细胞的观察、取样和处理，细胞取样和无菌操作更方便，轻易获得高清晰，高反差的宽视野图像。老师反馈成像效果媲美高级显微镜的成像效果，同时大大提升工作效率。

实验原理:带有外源DNA 的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量复制、繁殖，才能够有机会获得纯的重组质粒DNA，该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl 等化学试剂）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，能容许外源DNA 的载体分子通过。

细胞复苏-细胞传代-细胞冻存的注意事项应用。细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM完全培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。

荧光微球系列细胞荧光标记试剂是近年研发的一种新型染料，具有强烈、稳定的荧光，不转染周围细胞，可以长时间地追踪活细胞迁移、运动、贴附的特点。它可使用于MSCs、胚胎干细胞、肿瘤细胞以及心肌、平滑肌细胞等各类细胞的标记。

CloneSelect单细胞分离系统（CloneSelect Single Cell Printer）采用类似喷墨打印的技术，柔和地产生包裹细胞的液滴无接触地直接分配到微孔板中（图1）。同时，该系统借助智能图像分析，确认细胞数目，分析细胞的形态（大小和圆度）及荧光强度，联动的真空装置将不符合要求的液滴（如空液滴或者含多个细胞的液滴）直接吸走，而符合要求的细胞液滴则分配至微孔板，从而实现对单个细胞的分选和接种。单细胞分离系统是一种可比移液器操作的柔和的单细胞分离技术，而流式分选由于高的液体剪切力和电压的影响，会降低敏感细胞和部分受损细胞（如电转后的细胞）的成克隆率，因此单细胞分离系统更适用于基因工程细胞的克隆，维持细胞活力，并提供直接的单克隆性图像证据。