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人急淋白血病细胞系

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人急淋白血病细胞系相关的论坛

  • 澳一种白血病新药临床试验效果较好

    新华社悉尼12月11日电(记者赵小娜)澳大利亚研究者日前表示,他们对一种白血病新药的试验显示出较好的初步效果,有20%的患者血液中已检测不到癌细胞,这种新药有可能为白血病患者带来治愈希望。 据当地媒体报道,慢性淋巴细胞性白血病是澳大利亚最常见的白血病类型,对这种病一直缺乏有效的治疗方法。澳大利亚“沃尔特与伊丽莎?霍尔医学研究所”经数年研究开发出了这种代号为ABT-199的新药,目前正在墨尔本两家医院对数十名患者进行临床试验。 研究人员康宁·塔姆博士说,经过一年半的试验,有20%的患者血液中已检测不到癌细胞。他说,之前很多患者对化疗和其他治疗方法没有任何积极反应,只能任病情恶化,而“新药完全改变了这一现状”,患者有望恢复健康重回正常生活。 塔姆博士表示,这种药物上市销售还需几年时间,但对愿意参与试验的患者,研究者现在即可提供这种药物。(完)

  • FDA批准Gazyva用于治疗慢性淋巴细胞性白血病

    美国食品药品监督管理局(FDA)近日批准了Gazyva(obinutuzumab)与苯丁酸氮芥联用治疗初治型慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者。CLL是一种缓慢加重的渐进性血液与骨髓系统疾病。根据美国国家癌症研究所估计,今年将有15680名美国人被确诊患有该疾病,4580人因CLL死亡。Gazyva有助于免疫系统的某些细胞攻击癌细胞,并且需要与另一种CLL治疗药物——苯丁酸氮芥合用。在对重症CLL患者的治疗过程中,Gazyva在安全性和有效性方面表现出显著改善,此外,FDA还授予此药优先审查和孤儿药地位。FDA药物评价研究中心血液/肿瘤部门主管,Richard Pazdur博士说:“FDA对Gazyva的批准意味着对CLL患者疗法的重要补充,同时也反映了突破性疗法认定的优势,此项认定使我们与企业共同合作,加快重要新药物的开发、评估和上市。”此次批准是基于一项涉及356名受试者的随机、开放性、多中心临床研究,评估了Gazyva-苯丁酸氮芥联用组和苯丁酸氮芥单用组的药效。结果表明,联用组患者的无进展生存期得到显著提高(23个月vs11.1个月)。联用组患者的最常见不良反应包括输液反应、白细胞减少(中性粒细胞减少症)、血小板水平降低(血小板减少症)、红细胞数目降低(贫血)、肌肉和骨骼疼痛、发热等。Gazyva的说明书中含有黑框警告,提示Gazyva与乙肝病毒的再活化及一种罕见病有关,该罕见病(进行性多灶性白质脑病)能损伤大脑白质中覆盖和保护神经的物质,这是此类药物(包括其它单克隆抗体)共有的已知风险。Gazyva由罗氏子公司基因泰克上市销售。转自:http://www.hfoom.com/industry/20131106/376.html

  • 流式细胞仪在白血病诊断的应用

    流式细胞仪在白血病诊断的应用 。正文在附件里。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=2421]相关附件[/url]

  • 惊!劣质卫生纸易引发白血病

    根据流行病学的统计,中国白血病的自然发病率为3/10万~4/10万,并成增长趋势。卫生纸是每个家庭必备的生活用品,但是你可能不知道,它居然也会引发白血病。白血病又叫血癌,是一种难以治疗的疾病。劣质卫生纸易引发白血病 有些女孩子平时在穿着打扮上非常注意,舍得花几百几千买新衣服和化妆品,但在选择卫生纸这样的细节化商品时,却不太在意,往往拣廉价便宜的买。殊不知,有些劣质卫生纸虽然颜色亮白,是因为其中添加了荧光增白剂或滑石粉,长期与皮肤接触容易引发白血病。还有的用废纸经过漂白后加工而成,很可能含大肠杆菌、肝炎病毒等。所以对小小的卫生用品千万不能掉以轻心,一定要选购正规品牌的产品,不要因追求一时的廉价而伤害了自己的一生健康。从生活点滴中学会预防白血病 近年来,有关白血病的报道频现报端,引起了广大读者的关注。由于白血病病情发展变化快、治疗难度大、死亡率高,以至于让人感到“谈白色变”。专家级介绍,人类白血病的确切病因至今未明,许多因素被认为和白血病的发病有关。病毒被认为是主要的因素。此外尚有遗传因素,放射性因素,化学毒物或药物等要素。 全国目前有400万名白血病患者,每年新增约4万名白血病患者,其中2万多名是儿童,而且以2~9岁的儿童居多,其中城市白血病患儿比例占1/3,导致城市白血病患儿增多的罪魁祸首不排除家庭装修造成的污染。因为装修中常用的黏合剂、涂料、地板砖、夹板等材料会释放出甲醛、铅、苯等有毒物质,对人体的血液系统造成损害,抵抗力较弱的人就容易引发白血病。 因此建议,第一,装修住宅最好选用符合环保要求对人体无害的材料,入住前最好开窗通风一周以上,请室内环境监测部门进行监测,合格后再入住,一旦出现不明原因的出血、低烧、关节痛、头晕等症状就要到医院进行检查。 第二,不要滥用药物。使用氯霉素、细胞毒类抗癌药、免疫抑制剂等药物时要小心谨慎,必须有医生指导,切勿长期使用或滥用。此外,尽量少用或不用染发剂。美国研究人员发现使用染发剂(尤其是大量使用)的女性,患白血病的危险是普通人的3.8倍。经常接触染发剂的理发师、美容师、整容师也有潜在危害。 第三,避免辐射。一项最新研究发现,开灯睡觉的儿童或者自然睡眠模式受人造光线干扰的人,患癌症的可能性比平常人要大。最近,研究人员在伦敦举行的儿童白血病大会上提出,儿童白血病发病率增多与夜晚暴露在灯光下有关系。因此,一上床睡觉,人们就应该把灯关掉,直到第二天早晨醒来。还应注意远离高压线、变电站及正在使用的微波炉等。 第四,注意饮食卫生。因为含有化肥、农药的蔬菜水果等食物,食用后经消化吸收进入血液,容易破坏骨髓的正常造血功能,从而发病。所以,蔬菜、水果食用前要清洗干净,把化肥农药的残留量降至最低限度。 第五,预防疾病就是要多运动,中医讲“正气存内,邪不可干”,意思是说人体正气(即免疫力)充足了,病邪就不容易侵犯人体。而增强正气的最有效的方法就是多运动。

  • 【资料】人肝癌细胞系研究进展

    肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是发病率高、治疗困难、死亡率高的恶性肿瘤,全球每年有1000000人死于肝癌。我国肝癌的死亡率在所有恶性肿瘤中居第二位,年死于肝癌的人数占全世界肝癌年死亡总数的53%。虽然肝癌的诊断和治疗有了长足的进步,但生存率在总体水平上变化不是很明显。迄今已建立的一系列人肝癌细胞系(cell line)和人肝癌细胞系的动物模型,为肝癌的发病机理和治疗研究奠定了良好的基础。咱们坛子里是否有做这方面工作的战友,分享一下相关文献。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=122088]人肝癌细胞系研究进展[/url]

  • 流式细胞术详解 13.14章节

    十三.流式细胞术在血液学中的应用 淋巴瘤免疫分型 目前淋巴瘤的分类方法已从LSG的形态学分类逐渐转变为REAL分类法, REAL分类法是以肿瘤发生源为基础的分类方法,在原来的形态学基础上加上免疫学分型后再加以分类,这种分类方法不仅能够推断肿瘤的发生源,对治疗也有指导意义。因此淋巴瘤的免疫分型越来越重要。如同白血病免疫分型一样,淋巴瘤的免疫分型也是利用单克隆抗体检测淋巴瘤细胞的细胞膜和细胞浆抗原,分析其表现型,以了解被测淋巴瘤细胞所属细胞系列及其分化程度。流式细胞仪能对多数的淋巴瘤细胞的细胞膜和细胞浆抗原迅速客观地做出检测,在淋巴瘤的免疫分型中起着不可替代的作用。临床淋巴瘤的免疫分型的检测标本一般是淋巴结、脾脏、胸水、腹水等。在临床淋巴瘤的免疫分型工作中常可遇到以下四种情况:①B细胞系淋巴瘤②T/NK细胞系淋巴瘤③淋巴细胞系以外的造血细胞肿瘤④造血细胞以外的肿瘤。REAL分类淋巴瘤的免疫表型见表12.8。*:弱表达或阴性。BLBL :前B原始淋巴细胞淋巴瘤/白血病; BSLL: B-小淋巴细胞淋巴瘤; LPL:淋巴浆细胞样淋巴瘤; MCL: 斗篷细胞淋巴瘤; FCL:滤泡中心淋巴瘤; MZL: 边缘带B细胞淋巴瘤; SMZL :脾MZL ;HCL:毛细胞白血病; PC:浆细胞瘤;DLBL: B-弥漫性大细胞淋巴瘤; BL: Burkitts淋巴瘤; HBLB:高度B细胞淋巴瘤, Burkitts样; TLB L: 前T原始淋巴细胞淋巴瘤/白血病; TPLL: T幼淋细胞白血病; LGLT:大颗粒淋巴细胞白血病, T细胞型[col

  • 流式细胞术详解 12章节

    十二. 流式细胞术在血液学中的应用 白血病免疫分型其临床意义 目前公认的系列特异性指标是:T淋巴细胞系--胞浆CD3(cCD3),B淋巴细胞系-- cCD22或cCD79,髓系---MPO 或cCD13,一般可先用他们区分细胞系列后再进一步分析某一系列亚型和分化阶段。1. ALL的免疫学分型1986年前分为普通型ALL(cALL)、未分化细胞ALL (Null-ALL)、T细胞ALL( T-ALL) 、前B细胞ALL (PreB-ALL)、B细胞ALL (B-ALL)五型;1986-1994年分为两大类九型(非T-ALL六型,T-ALL三型),九十年代后期有人按临床实用性一般分为B祖细胞ALL、前B细胞ALL、B细胞ALL、T细胞ALL四型。表12.1-表12.4列出ALL的五型、九型( B[color=blac

  • 稳定细胞系助力重组蛋白高效生产

    [b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]在蛋白质研究领域,稳定细胞系的应用已成为生产高质量结构生物学蛋白质的关键手段。随着技术的不断进步,稳定细胞系的生成与筛选方法得到了显著改进,从而推动了蛋白质生产的高效化与精准化。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]细胞系的建立和应用[/font][font=宋体][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞系[/font][/font][/b][font=宋体]因其稳定的蛋白表达和适当的翻译后修饰而被广泛用于结构生物学研究。这些细胞系能有效地生产具有复杂糖基化模式的蛋白质,这对于确保蛋白质的功能和稳定性至关重要。糖基化缺陷细胞系通过特定的基因改造,能够分泌脱糖基化糖蛋白,为蛋白质生产提供了更加纯净的原料。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]稳定细胞系的生成[/font][/b][font=宋体][font=宋体]传统的稳定细胞系生成技术如瞬时转染,虽然方法简便,但存在整合频率低、转基因沉默等问题。为了克服这些困难,研究者们开发出了一系列新技术,如细胞分选技术、位点特异性重组(如[/font][font=Calibri]FLP/FRT[/font][font=宋体]系统)、转座子系统(如[/font][font=Calibri]piggyBac[/font][font=宋体])、慢病毒系统以及噬菌体整合酶等,提高了稳定细胞系的生成效率和稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]序列特异性基因组工程也为稳定细胞系的生成提供了新的思路。通过敲除或修饰特定的基因,研究者们能够实现对细胞功能的精准调控,从而优化蛋白质生产的效率和纯度。例如,一种同时缺乏[/font][font=Calibri]GnTI[/font][font=宋体]和谷氨酰胺合成酶([/font][font=Calibri]GS[/font][font=宋体])活性的[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞系被成功开发出来,为高效筛选具有[/font][font=Calibri]GS[/font][font=宋体]标记的稳定细胞系提供了有力工具。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]稳定细胞系与瞬时转染的比较[/font][/b][font=宋体]稳定细胞系相较于瞬时转染具有多个优点,包括能够进行大规模生产和保持高水平的蛋白表达稳定性。尽管瞬时转染在某些情况下能快速产生大量蛋白,但其表达水平和重复性通常不如稳定细胞系。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]展望[/font][/b][font=宋体]近年来,利用稳定细胞系高效生产结构生物学蛋白质已成为研究的热点和趋势。通过引入新技术、优化筛选方法和改进整合系统,不仅能够提高蛋白质生产的效率和纯度,还能够为结构生物学研究提供更加精准、可靠的实验工具。随着基因编辑和细胞工程技术的进步,预计在未来,通过精确的基因操作能够更有效地创建和利用稳定细胞系。这些技术的进步将促进结构生物学和药物开发中蛋白质的高效和可持续生产。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本文由义翘神州进行整理,同时提供[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][u][font=宋体][color=#0000ff]稳定细胞系构建服务[/color][/font][/u][/url][font=宋体],详情可点击了解![/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献:[/font][font=Calibri]Büssow K. Stable mammalian producer cell lines for structural biology. [/font][i][font=Calibri]Curr Opin Struct Biol[/font][/i][font=Calibri]. 2015 32:81-90. doi:10.1016/j.sbi.2015.03.002[/font]

  • 【转帖】我国年增2万白血病患儿 大多放弃治疗等待死亡

    ●数据  省第一人民医院每年新增诊断的白血病患儿病例达20~30个。我省白血病患儿每年至少超过150名。我国目前至少有400万白血病患者,每年新增约4万名白血病患者,其中50%是儿童。  ●费用  儿童急性淋巴性白血病分为低危、中危和高危,其中低危、中危的患儿在2~2年半的治疗时间里至少要花费8~10万元,如是高危,要考虑骨髓移植,费用达30~40万元。  ●痛心  被检查出的白血病患儿,大多因为没钱选择了放弃。然而,放弃的后果只有一个——死亡。  有钱没钱,回家过年。可是,两岁的小雨和12岁的小杰,一时却回不了家。  他们患了白血病,春节期间需要留在医院接受治疗。小雨的父亲龙中祥不得不接受这个事实,整日苦思下一步该去哪里筹借那“无底洞”般的医药费。  小杰的母亲李琼华今年40岁,却陡然间苍老了许多,除了向亲朋借钱给儿子治病,她不知道还能走何种途径来拯救儿子。问题是,亲朋能借的都借了,治疗却刚刚起步。  面对巨额的治疗费用,越来越多的父母发出了无奈的呐喊:拿什么来拯救你,白血病患儿?  病例  一人患病全家皆悲  如果不是因为患有白血病,12岁的小杰,此刻应该正与小伙伴们享受着愉快的寒假。不幸的是,他住进了省第一人民医院儿科。  母亲李琼华清楚地记得,去年8月13日,小杰突然出现发热症状,领去县医院检查后,被告知可能患有白血病。由于县城医院条件有限,李琼华领着儿子来到昆明。医生说,小杰至少要花三年时间治疗,否则就只能等死。  他们本是石林县一个乡村的普通农民家庭,过着平时种地闲暇打工的日子,碰上老天眷顾收成好时,年收入可达一万元。年关将至,其他人忙着回家过年,李琼华却只能留在医院照顾儿子,丈夫依旧在外打工挣医药费。  无独有偶,小杰病房的隔壁,还住着一个年仅两岁的娃娃小雨,患的是急性淋巴性白血病。父亲龙忠祥是位退伍军人,一向坚强乐观,近期的心情却日益沉重起来。  妻子和儿子都是东川户口,每月领取低保过日子,他自己打点零工月收入不过2000元。如今,他们不得不面对的现实是:前两个月的治疗费用就达6万多,这以后该怎么办?  现状  发病率呈上升趋势  根据近五年的统计,省第一人民医院每年新增诊断的白血病患儿病例达20~30个。而昆明市儿童医院每年收治白血病及恶性肿瘤患儿可达百余名。目前昆明市儿童医院血液科病房里仍有10多名白血病患儿。照此估算,如果再加上昆医附一院和解放军昆明总医院这两家具备收治白血病患儿资质的医院,我省白血病患儿每年至少超过150名。  在省第一人民医院儿科副主任医师马燕看来,长达10余年与白血病儿打交道,她明显感觉白血病发病率呈上升趋势。  据中国发布的流行病学统计,目前至少有400万白血病患者,每年新增约4万名白血病患者,其中50%是儿童。马医生介绍,白血病已成为威胁儿童健康的“主要杀手”。  探因  或与环境污染有关  究竟是什么因素导致儿童白血病患病率增加呢?“确切的病因还是个谜。”马医生告诉记者,迄今为止,国内外科学家并没有发现导致儿童白血病的明显诱因。  不过,根据多年来的临床经验及相关研究发现,马医生认为环境因素是导致白血病的重要诱因之一。根据医学记载,当年日本长崎广岛两颗原子弹爆炸后,当地白血病患者3到7年间白血病发病率比正常的地区高20倍,一直到20年以后它才逐渐下降,这让科学家将白血病与环境污染挂上了钩。  马医生举例说,目前正在住院接受化疗的小雨,极有可能就是受了装修油漆的刺激,因为小雨和家人搬到新装修一个月的房子后,就检查出患了白血病。此前,还有一位4岁左右的白血病患儿,其母亲在怀孕期间和生育之后一直留在发廊工作,估计是长期接触发胶所致。  昆明市儿童医院大内科主任田新是儿童医院从华西医科大引进的医学专家,谈及儿童白血病的病因时,他也表示“目前尚未完全明了”。但根据经验,白血病病因可能与病毒感染、物理和化学、遗传素质等因素有关。  纠正  白血病并非“不治之症”  包括李琼华和龙忠祥在内,在很多人看来,患上白血病俨然就等于宣判了死刑。事实上,时代在发展,医学在进步,如果得到规范治疗,大部分白血病患儿都可以救治。  马医生告诉记者,长久以来儿童白血病治疗面临着两大阻碍:一是对白血病的认知度不够,认为白血病是“不治之症”;二是白血病的治疗费用过高,一般家庭无法承担。随着医学技术的发展,儿童白血病早已摆脱了70年代以前的“死刑宣判”。以占据白血病总类比例85%的急性淋巴性白血病的治疗情况为例,从仅能存活数月到可获得完全缓解,如今已经逐步提高到五年无病生存率。目前,国际上5年无病生存率已达90%;国内经过30多年的努力,治疗方法也日趋成熟。  困境  治疗周期长且费用贵  在马医生看来,即便可以提高家长对儿童白血病救治的认知度,目前却无力解除另一个阻碍——巨额的治疗费用。  据儿童医院田医生介绍,儿童急性淋巴性白血病分为低危、中危和高危,其中低危、中危的患儿在2~2年半的治疗时间里至少要花费8~10万元,如是高危,要考虑骨髓移植,费用达30~40万元。  少则10万多则40万的治疗费用,对于原本拮据的家庭来说,无异于一笔天文数字。据马医生透露,此前虽然每年被检查出的白血病患儿将近二三十个,但大多因为没钱选择了放弃,最终留下了接受规范治疗的不过两三个。  去年9月份起,昆明市儿童医院等单位成立了“‘绿叶爱心’行动——贫困白血病儿童救助项目”,希望通过多渠道募集资金帮助贫困儿童获得治疗。不料,由于宣传力度不够,4个多月过去了,募集到的资金还不够救助一个孩子。  期待  建立白血病救助资金  田医生告诉记者,针对不少农村家庭无足够费用医治的状况,昆明市儿童医院现已开展白血病儿童经济治疗方案,整个近3年的治疗只需几千元。同时,因为新农合医保政策的建立,近年来前来看病治疗的农村儿童增多,白血病报销比例为30%。  从2009年10月起,经中国红十字基金会批准,确定云南省第一人民医院为  “小天使基金”在云南省的定点医院,收治“小天使基金”资助的白血病儿童。不过,由于申请人数较多,“小天使基金”资助金额不超过5万元,马医生忧心忡忡:“真正能受到帮助的,毕竟只是少数”。  记者从省红十字会和省慈善总会获悉,在中国红十字会“小天使基金”进入云南之前,我省在白血病患儿的救助政策方面一直处于空白状态。马医生坦言,媒体呼吁、社会募捐只能解一时之忧,难以解决治疗白血病这类大病所需的巨额费用,更不可能恩泽所有的患儿。  田医生指出,目前成都、上海已经通过给儿童购买40元/年的保险建立白血病等大病救助资金,昆明可以借鉴。此外,武汉早在2009年12月就成立了白血病患儿救助基金,由政府注入200万元,市红十字会和市慈善会分别拿出10万元作为启动资金。  温馨提醒  两岁的小雨,12岁的小杰,目前分别住院于省第一人民医院住院楼4楼儿科一区2402病房和2403病房。

  • 慢病毒构建稳转细胞系:原理、步骤与优势解析

    [font=宋体]慢病毒构建稳转细胞系的原理主要是利用慢病毒载体将外源基因导入宿主细胞,并实现外源基因的稳定表达。具体来说,构建稳转细胞系的核心是将慢病毒矢量载体导入宿主细胞中,慢病毒载体通常包含病毒的复制和包装组件,以及外源基因的表达调控序列。当慢病毒载体被导入宿主细胞后,它可以利用细胞的复制和转录机制将外源基因插入宿主细胞的染色体中,从而实现外源基因的稳定表达。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]构建稳定的慢病毒转染细胞系是在细胞中稳定表达外源基因的一种有效方法。下面是一般慢病毒构建稳定转染细胞系的步骤:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、选择慢病毒载体: 选择适当的慢病毒载体,通常是一个包含[/font][font=Calibri]LTR[/font][font=宋体]、包装信号、引导[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]序列和多功能质粒载体的质粒。这个载体应该包含要表达的外源基因。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、转染慢病毒包装细胞: 使用慢病毒包装细胞系,例如[/font][font=Calibri]293T[/font][font=宋体]或其他适合的细胞系。这些细胞通常被选择因为它们能够支持慢病毒复制和包装。将慢病毒载体与包装蛋白的表达质粒一同转染进这些细胞中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、病毒产生和收集: 慢病毒包装细胞会开始产生慢病毒颗粒,这些颗粒包含了慢病毒载体和外源基因。培养一定时间后,收集细胞培养上清液,这是富含病毒的液体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、测定病毒滴度: 对采集的上清液进行病毒滴度的测定,通常可以通过转染一定数量的目标细胞,然后测定这些细胞的感染率来确定病毒的滴度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、转染目标细胞: 将上一步获得的病毒用于转染目标细胞。这些目标细胞可以是要建立稳定转染细胞系的细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、筛选稳定细胞系: 添加适当的筛选物质,例如抗生素,以选择表达了外源基因的细胞。这可以通过在培养基中添加抗生素,使得只有表达了外源基因的细胞能够存活下来。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]、单克隆分离: 对稳定表达细胞群进行单克隆分离,以确保每个克隆都来自单一细胞。这有助于保持表达的一致性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]8[/font][font=宋体]、验证表达: 对所得的单克隆细胞系进行验证,确认外源基因的表达水平和稳定性。这可以通过[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Western blotting[/font][font=宋体]等分子生物学技术来实现。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过这些步骤,可以建立一个稳定表达外源基因的慢病毒转染细胞系,为后续的实验和研究提供了有力的工具。这种方法常用于基因功能研究、药物筛选和基因治疗等领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]慢病毒构建稳转细胞系的优点:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]与常用的转染方法相比,慢病毒构建稳转细胞系有以下几个优点:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①高效性:慢病毒能够将外源基因整合到宿主细胞基因组中,实现稳定的外源基因表达。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②特异性:由于慢病毒的感染和复制比较特异,只会影响一定类型的细胞,因此可以实现对具体细胞的选择性转染。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③安全性:慢病毒的基因转移速度较缓慢,对宿主细胞和人体的损伤较小,因此具有较高的安全性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][b]稳转细胞株构建服务[/b][/url],包含过表达细胞系构建服务和[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]稳定细胞株开发服务,详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service[/font][/font]

  • 西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡

    西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡在我国,西达本胺已获批作为PTCL临床用药。西达本胺属于苯酰胺类化合物,是我国自主研发的首个亚型选择性口服HDACI,国家食品药品监督管理局已批准其用于临床试验,其选择性抑制I类HDAC1、2、3亚型和II类HDAC10亚型,可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡,阻滞周期、引发DNA损伤,还可以增强抗肿瘤免疫反应。与其他抗肿瘤药物相比,西达本胺疗效好、选择性高、不良反应少。西达本胺可激活死亡受体途径和线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其中最为主要的是线粒体凋亡途径,该途径受Bcl-2家族介导的细胞色素C释放通路调控。抗凋亡蛋白Bcl-2表达受到抑制,促凋亡蛋白Bax表达上调,使线粒体膜电位降低,细胞色素C释放到细胞质中,Caspase途径被激活,细胞发生凋亡。例如:西达本胺增强B淋巴瘤细胞组蛋白H3、H4 乙酰化水平,使线粒体膜电位降低随后激活Caspase 3,促进细胞凋亡;在肾癌中,它可以下调Bcl-2表达,上调Bax表达,随着药物浓度增加引起786-O 细胞凋亡。西达本胺可以调控ROS水平。HDACI可以上调ROS水平,导致DNA双链损伤。研究证明,西达本胺作用于白血病细胞后,诱导细胞内ROS产生,细胞凋亡增加[17]。此外,在胰腺癌细胞系中,西达本胺明显增强细胞内ROS的产生,上调γH2AX(DNA双链断裂的标志物)表达水平,诱发细胞DNA损伤。西达本胺通过调控细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent kinases,CDKs)以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(Cyclin-dependent kinases inhibition,CDKI)的表达阻滞细胞周期。例如,西达本胺使MM细胞系P21、P27的表达量增高,CDK4、CDK6、Cyclin D2表达量下降,阻滞MM细胞系于G1期[19]。在NK/T细胞淋巴瘤中,西达本胺上调P21表达,下调Cyclin E表达,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,从而抑制细胞的增殖。

  • 【原创大赛】西达本胺对SCLC细胞系在体外水平的作用及机制

    [size=16px]西达本胺对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系在体外水平的作用及机制[/size][size=16px]西达本[/size][size=16px]胺属于苯[/size][size=16px]酰胺类化合物,是我国自主研发的首个亚型选择性口服[/size][size=16px]HDAC[/size][size=16px]I[/size][size=16px],国家食品药品监督管理局已批准其用于临床试验[/size][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][size=16px]其选择性抑制[/size][size=16px]I[/size][size=16px]类[/size][size=16px]H[/size][size=16px]DAC1[/size][size=16px]、[/size][size=16px]2[/size][size=16px]、[/size][size=16px]3[/size][size=16px]亚型和[/size][size=16px]I[/size][size=16px]I[/size][size=16px]类[/size][size=16px]H[/size][size=16px]DAC10[/size][size=16px]亚型,可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡,阻滞周期、引发[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]损伤,还可以增强抗肿瘤免疫反应。与其他抗肿瘤药物相比,西达本胺疗效好、选择性高、不良反应少。[/size][size=16px]西达本胺可激活死亡受体途径和线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其中最为主要的是线粒体凋亡途径,[/size][size=16px]该途径[/size][size=16px]受[/size][size=16px]B[/size][size=16px]cl-2[/size][size=16px]家族[/size][size=16px]介[/size][size=16px]导的细胞色素[/size][size=16px]C[/size][size=16px]释放通路调控。抗凋亡蛋白[/size][size=16px]B[/size][size=16px]cl-2[/size][size=16px]表达受到抑制,促凋亡蛋白[/size][size=16px]Bax[/size][size=16px]表达上调,使线粒体膜电位降低,细胞色素[/size][size=16px]C[/size][size=16px]释放到细胞质中,[/size][size=16px]C[/size][size=16px]aspase[/size][size=16px]途径被激活,细胞发生凋亡。例如:西达本[/size][size=16px]胺增强[/size][size=16px]B[/size][size=16px]淋巴瘤细胞组蛋白[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H4 [/size][size=16px]乙酰化水平,使线粒体膜电位降低随后激活[/size][size=16px]C[/size][size=16px]aspase[/size][size=16px] [/size][size=16px]3[/size][size=16px],促进细胞凋亡;在肾癌中,它可以[/size][size=16px]下调[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px]表达,上调[/size][size=16px]Bax[/size][size=16px]表达[/size][size=16px],随着药物浓度增加引起[/size][size=16px]786-O [/size][size=16px]细胞凋亡[/size][size=16px]。[/size][size=16px]西达本[/size][size=16px]胺可以[/size][size=16px]调控[/size][size=16px]R[/size][size=16px]OS[/size][size=16px]水平。[/size][size=16px]H[/size][size=16px]DACI[/size][size=16px]可以上调[/size][size=16px]R[/size][size=16px]OS[/size][size=16px]水平,导致[/size][size=16px]D[/size][size=16px]NA[/size][size=16px]双链损伤。研究证明,西达本[/size][size=16px]胺作用[/size][size=16px]于白血病细胞后,诱导细胞内[/size][size=16px]R[/size][size=16px]OS[/size][size=16px]产生,细胞凋亡增加。此外,在胰腺癌细胞系中,西达本[/size][size=16px]胺明显[/size][size=16px]增强细胞内[/size][size=16px]ROS[/size][size=16px]的产生,上调γ[/size][size=16px]H2AX[/size][size=16px]([/size][size=16px]D[/size][size=16px]NA[/size][size=16px]双链断裂的标志物)表达水平,诱发细胞[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]损伤[/size][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]18][/size][/font][size=16px]。[/size][size=16px]西达本[/size][size=16px]胺通过[/size][size=16px]调控细胞周期蛋白([/size][size=16px]Cyclin[/size][size=16px])、细胞周期蛋白依赖性激酶([/size][size=16px]Cyclin-dependent kinases[/size][size=16px],[/size][size=16px]CDKs[/size][size=16px])以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂([/size][size=16px]Cyclin-dependent kinases inhibition[/size][size=16px],[/size][size=16px]CDKI[/size][size=16px])的表达阻滞细胞周期。例如,西达[/size][size=16px]本胺使[/size][size=16px]MM[/size][size=16px]细胞系[/size][size=16px]P21[/size][size=16px]、[/size][size=16px]P27[/size][size=16px]的表达量增高,[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK4[/size][size=16px]、[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK6[/size][size=16px]、[/size][size=16px]Cyclin D2[/size][size=16px]表达[/size][size=16px]量下降,阻滞[/size][size=16px]M[/size][size=16px]M[/size][size=16px]细胞系于[/size][size=16px]G[/size][size=16px]1[/size][size=16px]期。在[/size][size=16px]N[/size][size=16px]K/T[/size][size=16px]细胞淋巴瘤中,西达本胺上调[/size][size=16px]P21[/size][size=16px]表达,下调[/size][size=16px]Cyclin E[/size][size=16px]表达,诱[/size][size=16px]导细胞发生[/size][size=16px]G0/G1[/size][size=16px]期阻滞,从而抑制细胞的增殖[/size][size=16px]。[/size][size=16px]目前为止,关于西达[/size][size=16px]本胺在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]中的研究并不多,为探究西达本胺对[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系[/size][size=16px]的作用及机制,探究[/size][size=16px]西达本胺对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系在体外水平的作用及机制[/size][size=16px],发掘西达[/size][size=16px]本胺在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]治疗中的潜力,为[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]靶[/size][size=16px]向治疗[/size][size=16px]提供新的思路[/size][size=16px]仍有重要意义[/size][size=16px]。[/size]

  • 敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系抑制作用的机制研究

    敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系抑制作用的机制研究

    [align=center]敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系抑制作用的机制研究[/align]敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系 EMT 的影响提取对数生长期的 H69、H82、H526、SW1271 对照组及实验组细胞总蛋白,利用Western blot 检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 的表达量。E-粘连蛋白(E-cadherin) 表达下调是 EMT 的一个主要标志,削弱了上皮细胞之间的强大粘附力,使细胞流动性增强。N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)上调,导致肿瘤细胞骨架重排,促进肿瘤的转移。结果如图 显示,与对照组相比,实验组 E-cadherin 表达量增加,而 N-cadherin、Vimentin 表达量显著下降,证明 MSI1 低表达使小细胞肺癌细胞的 EMT 过程受到明显抑制。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232328545719_4765_5389809_3.png[/img]图 EMT 相关蛋白在 H69、H82、H526、SW1271 对照组与实验组的表达情况 敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系周期的影响提取对数生长期的 H69、H82、H526、SW1271 对照组及实验组总蛋白,利用Western blot 检测敲低 MSI1 对 SCLC 细胞周期的影响。结果如图 4-2 显示,在细胞系 H69、H82 中,与对照组相比,实验组 Cyclin B1 表达上调,Cyclin A2 的表达下调,说明敲低 MSI1 后,细胞阻滞于 G2 /M 期。细胞系 H526 中,与对照组相比,实验组 Cyclin E1 表达上调,Cyclin A2 的表达下调,说明敲低 MSI1 后,细胞阻滞于 G1 /S 期。细胞系 SW1271 中,与对照组相比,实验组Cyclin D1 表达上调,Cyclin E1 表达下调,说明敲低 MSI1 后阻滞其于 G1 期。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232328548906_4460_5389809_3.png[/img]图 周期相关蛋白在 H69、H82、H526、SW1271 对照组与 MSI1 敲低组的表达情况 敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系凋亡的影响提取对数生长期的 H69、H82、H526、SW1271 对照组及实验组细胞总蛋白,利用Western blot 检测敲低 MSI1 对 SCLC 细胞凋亡的影响,因此我们检测了 Caspase 信号通路相关蛋白 BCL-2,BAX,Cytochrome c,Caspase 3,cleaved Caspase 3,PARP, cleaved PARP。结果如图 4-3 所示,与对照组相比,实验组的抗凋亡蛋白 BCL-2 表达下调,促凋亡蛋白 BAX 显著上调, Cytochrome c,cleaved Caspase 3,cleaved PARP 显著上调,Caspase 3 的表达下调,PARP 无明显变化。这些结果表明,在 SCLC 细胞中, 敲低 MSI1 诱导 SCLC 细胞凋亡,且诱导凋亡的的机制可能是激活了 Caspase 凋亡途径。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232328545353_2689_5389809_3.png[/img]图 凋亡相关蛋白在 H69、H82、H526、SW1271 对照组与实验组的表达情况4 敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系 Wnt 信号通路的影响MSI1 作为一种干细胞决定因素发挥作用,促进癌细胞存活、肿瘤进展,大量研究证实 MSI1 在肿瘤中发挥作用与 Wnt 信号通路密切相关,而 β-Catenin 是 Wnt 信号通路下游关键调控分子,细胞表面标记物 CD44、CD133 是肿瘤干细胞标志物,因此本研究检测在人 SCLC 细胞中 MSI1 敲低后 β-Catenin、CD44、CD133 的表达情况。结果如图所示,与对照组相比,实验组的 CD44、CD133、β-Catenin 的表达量明显下调,敲低 MSI1 后在一定程度上抑制了 Wnt 信号通路,表明 MSI1 在人小细胞肺癌细胞中通过激活 Wnt 通路发挥作用。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232328553033_2421_5389809_3.png[/img]图 Wnt 信号通路相关蛋白 H69、H82、H526、SW1271 对照组与实验组的表达情况

  • 【简讯】新家具甲醛超标致小儿患白血病 厂商赔偿8万

    日前,本市闸北区法院一审判决了一起白血病患儿状告家具厂和家具商场案,家具厂被判补偿原告医疗费、护理费、精神损失费等共计人民币8万元,家具商场对补偿款承担连带责任。 这名现年10岁的白血病患儿叫瑛瑛。2000年6月,瑛瑛的家人在本市沪太路上的一家家具商场订购了一套木制儿童家具,总价为人民币2300元。2002年9月,瑛瑛开始入住这套家具所在的房屋。同年年底,瑛瑛身体开始出现咳嗽、发烧等症状,虽经治疗仍未见好转。直至2005年6月,瑛瑛被上海第二医科大学附属上海儿童医学中心确诊为急性白血病。2005年7月,瑛瑛的家人委托有关部门对这套家具中的大橱隔板进行检验,结论为:该样品甲醛释放量为5.3mg/L,属于严重超标。 瑛瑛的家人在起诉时认为:因这套家具甲醛严重超标,致使瑛瑛患上白血病,要求家具厂赔偿瑛瑛已支付的医疗费、护理费、精神损失费等共计人民币16万余元,并对今后治疗费保留诉权。原告还要求家具商场承担连带赔偿责任。 法院在判决中认为:本案中这套家具在出售五年后仍被检验出甲醛释放量严重超标,应认定该家具存在严重的质量缺陷,该质量缺陷显然会对人体健康造成影响和损害。由于技术原因,目前无法对家具的甲醛释放量超标与瑛瑛罹患急性白血病之间的因果关系进行鉴定,但并不能就此排除两者之间不存在因果关系,如由原告来承担本案无法鉴定所导致的诉讼风险,明显有违公平正义之原则,所以作出了上述判决。来源:文汇报

  • MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达

    MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达

    MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达细胞模型的构建实验方法与步骤 细胞的复苏 1.复苏前的准备:打开水浴锅,设置温度37℃;紫外线将超净台消毒30 min;配置完全培养基。 2.将要复苏的H69、H446细胞从液氮取出,用一次性PE手套包裹冻存管,迅速放入水浴锅中震荡,使其快速融化。 3.在15 mL离心管中加入5 mL完全培养基及融化的细胞悬液,900 r/min离心8分钟,弃去上清,得到细胞沉淀。 4.在25 cm2的培养瓶中加入5 mL完全培养基,并用1 mL培养基将沉淀的细胞重悬并加入准备好的培养瓶中,放入CO2恒温培养箱中继续培养。 细胞的传代 1.选取在悬浮培养瓶中生长至90%的H69细胞,用移液枪将细胞悬液移入15 mL离心管中,选取在贴壁培养瓶中生长至90%的H446细胞,用PBS溶液将细胞吹至漂浮,并移入15 mL离心管中,两种细胞均900 r/min离心8分钟,弃掉上清。 2.分别在3个25 cm2培养瓶中加入5 mL完全培养基,在细胞沉淀中加入3 mL培养基并充分吹打混匀,将3 mL细胞悬液平均放入3个培养瓶中并混匀,放入培养箱中继续培养。 MSI1低表达细胞模型的构建1.从-80℃冰箱取出慢病毒载体冰上融化,将慢病毒用空白培养基稀释为滴度2×108,充分混匀,准备好病毒感染增强液。2.将25 cm2悬浮培养瓶中H69细胞移入15 mL离心管中并用移液枪充分吹打混匀,取其中500 μL放入细胞计数仪中计数,取出1.2×106个细胞置入新的离心管中,加入空白培养基至6 mL。3.在12孔板中以MOI=10的病毒滴度进行感染,培养16 h。4.16 h后将细胞悬液离心,换成不加双抗的完全培养基继续培养,72 h后观察荧光。5.待细胞生长至状态良好,加入1 μg/mL嘌呤霉素筛选至90%以上细胞均产生荧光。荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测MSI1在mRNA水平的表达 总RNA的提取分别将细胞离心,PBS缓冲液清洗2次,900 r/min离心8 min,得到细胞沉淀。分别加入1 mL Trizol,用移液枪吸打至细胞完全破裂,加入200 μL氯仿,震荡30 s,室温静置10 min,以有效分离无机相和有机相,随后4℃,12,000 g/min离心15 min。将上清移至高压过的1.5 mL离心管中,加入与上清等体积的异丙醇,轻柔颠倒震荡数次,室温静置10 min,随后4℃,12,000 g/min离心10 min。弃去上清,加入75%无水乙醇,4℃,12,000 g/min离心5 min。弃去上清,沉淀置于冰上自然干燥,但不可完全干燥。用30 μL DEPC水溶解总RNA。用NanoDrop One超微量分光光度计进行定量和纯度检测,用1%琼脂糖凝胶电泳进行完整性检测。 cDNA的合成逆转录体系试剂名称使用量模板RNAMonScriptTM 5*RT111 All-in-One MixMonScriptTM dsDNaseNuclease-Free Water1 μg4 μL1 μLup to 20 μL将混合液轻柔吹打混匀,瞬时离心,37℃ 2 min,55℃ 15 min,85℃ 5 min,得到cDNA。 Q-PCR检测MSI1 mRNA的表达GAPDH引物序列:Forward primer:Reverse primer:5’-GGTCGGAGTCAACGGATTTG-3’5’-ATGAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3’MSI1引物序列:Forward primer:Reverse primer:5’-GAACCATCCCGTCCTGTATCA-3’5’-GAAACCATGAAGCCCCAACC-3’Q- PCR反应体系:Q-PCR反应体系试剂名称使用量cDNAForward primerReverse primerMonAmpTM Chemhs qPCR MixLow ROXNuclease-Free Water50 ng0.2 μL0.2 μL5 μL0.1μLup to 10 μLQ-PCR反应程序: Q-PCR反应程序反应步骤反应温度反应时间循环次数预变性95℃10 min1变性95℃10 s40退火55-65℃10 s延伸72℃30 s溶解曲线溶解曲线按仪器默认溶解曲线 结果采用t检验,用Graphpad prism5计算MSI1在mRNA水平的表达量。 Western blot检测MSI1在蛋白水平的表达总蛋白的提取将对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞移入15 mL离心管中,900 r/min离心8 min,并用PBS溶液洗涤2次,以去除培养基中血清影响。分别加入含PMSF的蛋白裂解液100 μL,与细胞充分混匀。4℃裂解1小时后,4℃,12000 g/min离心15 min,将上清移至新的离心管中,得到细胞总蛋白。 BCA法测定蛋白浓度 将Solution A和Solution B以50:1的体积比配置BCA工作液,充分混匀。将2 mg/mL蛋白标准品等比稀释,最小浓度为125 μg/mL,并分别与配置好的200 μL BCA工作液混匀,铺入96孔板中。37℃孵育30 min,测定波长562 nm处OD(光密度值)值,并绘制蛋白标准曲线。取适量H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白,20:1稀释后,与200 μL BCA工作液混合均匀。37℃孵育30 min,用酶标仪测定波长562 nm处OD值,根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。Western blot检测MSI1蛋白的表达 分别收集对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白,加入相应体积4×SDS Loading Buffer,沸水浴煮5 min,分别取40 μg细胞总蛋白,在提前配制的10% SDS-PAGE分离胶电泳。电泳结束后,将蛋白转至PVDF膜上。用含5%脱脂牛奶的封闭液 37℃封闭1.5 h。弃去封闭液,用TBST缓冲液洗3次,每次10 min,加入MSI1兔单克隆抗体(1:1000),并以GAPDH为内参,加入GAPDH鼠单克隆抗体(1:5000);4℃孵育过夜,次日用TBST缓冲液洗膜3次,每次10 min。在敷有MSI1抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗兔IgG(1:5000),在敷有GAPDH抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗鼠IgG(1:5000),37℃敷育1 h,TBST 缓冲液洗膜3次,每次10 min。用增敏化学发光底物试剂检测,暗室曝光显影。在GAPDH表达量相同的情况下比较MSI1的表达情况。多次重复,应用ImageJ计算出各个蛋白条带的灰度对比,结果采用t检验,并应用Graphpad prism5作出柱状图。 MSI1在人小细胞肺癌细胞系中高表达 提取人正常肺上皮细胞BEAS-2B、小细胞肺癌细胞H446、H69的RNA,利用Q-PCR检测MSI1在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况,结果如图2-1显示,MSI1在小细胞肺癌细胞系H446、H69中的表达远远高于正常肺上皮细胞。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428158_6718_5389809_3.png1 MSI1 mRNA在小细胞肺癌细胞系中的表达(**代表与正常肺上皮细胞相比,小细胞肺癌细胞MSI1表达量增高具有统计学意义,P0.01)。 MSI1低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系H69细胞,使用慢病毒感染技术敲低MSI1的表达,同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响,待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选,然后在荧光显微镜下观察如图2-2,可见H69-NC、H69-shMSI1细胞均产生绿色荧光,表明人小细胞肺癌H69细胞慢病毒感染成功。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428036_9359_5389809_3.png MSI1低表达细胞模型的构建。应用shMSI1慢病毒载体感染H69细胞,利用嘌呤霉素筛选,并在荧光显微镜下观察。 荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测MSI1的mRNA表达水平提取对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞的RNA,并测量RNA浓度及完整性,用1%琼脂糖凝胶电泳检测完整性可见,RNA有三条带,从上到下依次为28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA,且28S rRNA的亮度是18S rRNA的两倍。用NanoDrop One超微量分光光度计测定人总RNA的A260/A280的值为2.00左右,A260/A230的值为2.30左右,说明提取的RNA质量和完整性很好,可以用于后续试验。利用Q-PCR技术检测各细胞内MSI1 mRNA相对表达量,结果如图2-3所示,与对照组相比,H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量明显降低(P0.01),抑制率约为75%。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434330_8277_5389809_3.png MSI1在RNA水平的表达(***代表与对照组相比,H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量下降具有统计学意义,P0.001)。 Western blot检测MSI1蛋白表达水平将BSA标准品(2 mg/mL)进行等比稀释,最低浓度为125 ug/mL,并应用BCA蛋白质浓度测定试剂盒测定在波长562 nm下的OD值,以OD值为纵坐标,对应蛋白质浓度(μg/mL)为横坐标,绘制标准蛋白曲线如图2-4所示。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201435248_4142_5389809_3.png图2-4 标准蛋白曲线分别提取H69-NC、H69-shMSI1细胞的总蛋白质,利用Western blot技术检测各细胞内MSI1蛋白的表达情况。结果如图2-5所示,与对照组相比,MSI1蛋白表达在H69-shMSI1细胞中明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功。ahttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201437240_855_5389809_3.pngbhttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434999_3303_5389809_3.png图2-5 MSI1蛋白水平表达:(a)MSI1蛋白表达条带;(b)MSI1蛋白的相对表达量。(*表示与对照组相比,H69-shMSI1组MSI1蛋白表达下降具有统计学意义,P0.05)。首先验证MSI1在小细胞肺癌细胞系中的表达情况,利用Q-PCR技术检测在RNA水平,MSI1在肺正常上皮细胞及小细胞肺癌细胞系中的表达,结果显示,MSI1在小细胞肺癌细胞中的表达明显高于正常肺上皮细胞。随后以人经典型小细胞肺癌细胞系H69细胞为研究对象,构建MSI1低表达细胞模型,应用shMSI1慢病毒载体感染H69亲本细胞,同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响,利用Q-PCR及Western blot验证MSI1在RNA及蛋白水平的表达,结果显示,H69-shMSI1组MSI1的mRNA及蛋白的表达明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功,可以用于后续实验。

  • 求助一篇中文文献!谢谢!

    各位大侠帮帮忙啊~~【序号】:1【作者】:费新红、许小平、陈莉、高磊、吕书晴、陈少谊、许晓巍【题名】:小鼠多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性观察【期刊】:白血病·淋巴瘤【年、卷、期、起止页码】:2004, 13(2)【全文链接】:

  • 在人类骨髓中发现可以分化为整个免疫系统所需细胞的祖细胞

    近日,来自加利福尼亚大学的研究者发现了在人类骨髓干细胞和所有的免疫细胞之间存在一类“环节缺失”(missing link)的细胞。这或许为我们深入理解免疫系统以及免疫系统疾病发生的分子机制提供帮助。相关研究刊登在了9月2日的国际杂志Nature Immunology上。这项研究是在人类骨髓中进行的,因为其包含了产生人类自出生后所需血液的所有的干细胞。理解成人正常血液的形成是揭开白血病发病机制关键的一步。之前的研究中,研究者重点研究了骨髓中的血液干细胞,这种干细胞生存时间比较久,可以再生,而且可以产生所有的血液细胞。在这过程中,干细胞可以分裂产生其发育的中间状态体,称为前体干细胞,前体干细胞可以产生血液的不同谱系,比如产生红细胞或者血小板等。和干细胞一样,祖细胞也非常稀少,因此研究就好比海里捞针一样,研究者Lisa这样说,此前的研究工作中,他们发现了一种具有部分分化能力、相当成熟的淋巴祖细胞。在这项最新的研究中,研究者描述了一种更为原始的可以分化为整个免疫系统所需细胞的祖细胞。

  • 央视:90%的白血病患儿家中曾在半年内做过装修

    【央视调查:90%的白血病患儿,家中曾在半年内做过装修】装修不当导致室内装修污染,很可能诱发人体多种疾病。北京儿童医院的数据显示,90%的白血病患儿家中曾在半年内做过装修,国际卫生组织也表示,每年全世界大概有400余万人死于室内空气污染,而造成室内空气污染的最重要因素就是油性涂料。

  • MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中的表达及 MSI1 低表达细胞模型的构建

    MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中的表达及 MSI1 低表达细胞模型的构建

    [font='times new roman'][color=#000007]MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000007] [/color][/font][color=#000007]在人小细胞肺癌细胞系中的表达及[/color][color=#000007] [/color][font='times new roman'][color=#000007]MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000007] [/color][/font][color=#000007]低表达[/color][color=#000000]细胞模型的构建[/color]MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中高表达提取人正常肺上皮细胞 BEAS-2B,SCLC-A 型 H69、H209、DMS153 细胞,SCLC-N 型 H446、H82、H2066 细胞,SCLC-P 型 H526、H211 细胞,SCLC-Y 型 H841、DMS114、SW1271 细胞的 RNA,利用 q-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 检测 MSI1 在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况,结果如图 2-1 显示,MSI1 在小细胞肺癌细胞系中的表达远远高于正常肺上皮细胞,综合分析,选取了 H69、H82、H526 及 SW1271 细胞用于后续实验。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326443512_4838_5389809_3.png[/img]图 小细胞肺癌细胞系中 MSI1 mRNA 的表达(***P0.001)MSI1 低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系 H69、H82、H526、SW1271 细胞,使用慢病毒感染技术敲低 MSI1 的表达,同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响,待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选, 然后在荧光显微镜下观察如图 , 可见 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2细胞均产生绿色荧光,表明人小细胞肺癌细胞慢病毒感染成功。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326451025_2121_5389809_3.png[/img]图 慢病毒感染后 4X 荧光显微镜下图片(H69、H82、H526、SW1271 明场及荧光照片) 敲低 MSI1 后转录和蛋白水平验证分别提取对数生长期的 H69-NC 、H69-shMSI1-1 、H69-shMSI1-2 、H82-NC 、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 RNA 和蛋白,利用 q-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 技术分别检测各细胞 MSI1 mRNA 相对表达量,结果如图 所示,与对照组相比,H69-shMSI1-1、 H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 组 MSI1 mRNA 表达量明显降低(P0.01), 抑制率约为 75%。利用 Western blot 技术检测各细胞内 MSI1 蛋白的表达情况。结果如图 2-3 所示,与对照组相比,MSI1 蛋白表达在 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞中明显降低。表明 MSI1 低表达细胞模型构建成功。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326454704_2148_5389809_3.png[/img]图 敲低 MSI1 在转录水平和蛋白水平的验证(***P0.001)

  • 发挥某抗精神病药物的转换功效 癌症干细胞也能“改邪归正”

    新华社温哥华5月26日电(记者马晓澄)加拿大研究人员日前在学术期刊《细胞》上发表研究报告说,他们在实验中发现,抗精神病药物甲硫达嗪可使癌症干细胞“改邪归正”,成为正常细胞,而药物使用不会对其他正常的人体细胞产生副作用。研究人员称,基于这项研究成果,有望研发出新的癌症治疗药物。 癌症干细胞被认为是很多癌症的“罪魁祸首”,传统的癌症疗法如化疗不仅会杀死癌症干细胞,同时也会伤害人体其他正常细胞,从而导致脱发、恶心和贫血等副作用,而且病症还容易复发。 由于癌症干细胞有别于普通干细胞,并不容易分化成稳定且不会分裂的细胞类型。来自加拿大麦克马斯特大学的研究人员利用这种差异性对大量药剂进行筛选,从中找到了近20种可对抗癌症干细胞的药物,其中抗精神病药物甲硫达嗪的实验效果最为理想。 他们在实验中发现,甲硫达嗪虽然不会直接杀灭癌症干细胞,但能促使它们分化成稳定的正常细胞类型,从而消除这种干细胞。研究报告的主要作者巴蒂亚说,甲硫达嗪通过把癌症干细胞转化成正常细胞类型,实现了消除癌症干细胞的目的,这一过程中不会对其他正常细胞产生副作用,这显然更有利于癌症病人的治疗和康复。 巴蒂亚说,他们下一步将在临床试验中检测甲硫达嗪的实际疗效,尤其是对那些经化疗后复发的急性骨髓性白血病病人。

  • 西达本胺促进SCLC细胞系组蛋白乙酰化

    西达本胺促进SCLC细胞系组蛋白乙酰化

    [align=left][size=18px]西达本胺促进[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系组蛋白乙酰化[/size][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px] [/size][size=16px]为验证西达本胺是否上调[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系的乙酰化水平,我们使用[/size][size=16px]Western blot[/size][size=16px]检测了不同浓度([/size][size=16px]I[/size][size=16px]C10[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC20[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC50[/size][size=16px])西达本胺处理[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后,[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系中乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平,并以组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平为对照。结果如图所示。在四种亚型细胞系中,总组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平无变化,乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达量随加药浓度增大而增多,这证明了西达本胺对[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系组蛋白乙酰化的促进作用,这种作用呈剂量依赖性。[/size][/align][align=left][size=18px]A[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350400898_8640_5887180_3.png[/img][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px]西达本胺通过线粒体凋亡途径诱导[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系凋亡[/size][/align][align=left][size=16px]我们的功能实验表明,西达本胺[/size][size=16px]可剂量依赖的[/size][size=16px]促进[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞[/size][size=16px]系[/size][size=16px]凋亡[/size][size=16px],但其机制尚未明确。[/size][size=16px]依据国内外报道,西达本胺主要通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡[/size][size=16px]。除此之外,[/size][size=16px]西达本胺[/size][size=16px]能[/size][size=16px]使[/size][size=16px]线粒体[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]双链断裂,发生损伤。[/size][size=16px]为探究其是否通过此途径在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系中发挥作用,我们检测了加药[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后,[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]DMS114[/size][size=16px]细胞中由线粒体介导的[/size][size=16px]C[/size][size=16px]aspase[/size][size=16px]信号通路相关蛋白[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px],[/size][size=16px]Bax[/size][size=16px],细胞色素[/size][size=16px]C[/size][size=16px],[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 9[/size][size=16px],[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved Caspase 9[/size][size=16px],[/size][size=16px]P[/size][size=16px]ARP[/size][size=16px],[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved [/size][size=16px]PARP[/size][size=16px],[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 3[/size][size=16px],[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved Caspase 3[/size][size=16px]以及[/size][size=16px]D[/size][size=16px]NA[/size][size=16px]双链断裂标志物[/size][size=16px] [/size][size=16px]γH2AX[/size][size=16px]表达水平。[/size][size=16px]Western blot[/size][size=16px]结果显示,[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 9[/size][size=16px],[/size][size=16px]P[/size][size=16px]ARP[/size][size=16px] [/size][size=16px],[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 3[/size][size=16px]表达水平无明显变化,[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px]表达下调,其余蛋白表达均上调。这些结果表明,在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞中,西达本胺可以通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。[/size][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][size=16px]A[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350402755_79_5887180_3.png[/img][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px]西达本胺通过抑制[/size][size=18px]C[/size][size=18px]yclin-CDK[/size][size=18px]复合物活性阻滞[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系周期[/size][/align][align=left][font='宋体'][size=16px]据文献报道,[/size][/font][size=16px]不同[/size][size=16px]HDACI[/size][size=16px]对不同细胞阻滞时相不一致。为验证西达本胺对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞周期的作用,我们检测了[/size][size=16px]经[/size][size=16px]西达本胺[/size][size=16px]处理[/size][size=16px]48[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后,[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]DMS114[/size][size=16px]细胞中细胞周期相关蛋白的表达水平,如图所示。[/size][size=16px]在[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]细胞系中[/size][size=16px]P21[/size][size=16px]、[/size][size=16px]P27[/size][size=16px]表达上调,[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin A2[/size][size=16px]与[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK[/size][size=16px]2[/size][size=16px]表达下调[/size][size=16px],[/size][size=16px]说明西达本胺阻滞[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]于[/size][size=16px]S[/size][size=16px]期。在[/size][size=16px]H446[/size][size=16px]细胞系中[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin E1[/size][size=16px]与[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK2[/size][size=16px]表达下调[/size][size=16px],说明西达本胺阻滞其于[/size][size=16px]G[/size][size=16px]1[/size][size=16px]/S[/size][size=16px]期。[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350422585_1956_5887180_3.png[/img][size=16px] [/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350405804_8826_5887180_3.png[/img][/align][align=left][size=18px]小结[/size][/align][size=16px]1[/size][size=16px].[/size][size=16px]西达本胺可以增强[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系组蛋白乙酰化水平。[/size][size=16px]2.[/size][size=16px]西达本胺诱导[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞凋亡的机制可能与其激活线粒体介导的[/size][size=16px]caspase[/size][size=16px]凋亡途径有关。[/size][size=16px]3[/size][size=16px].[/size][size=16px]西达本胺可阻滞[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞周期,可能与其上调细胞周期蛋白激酶抑制剂表达、从而抑制[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin-CDK[/size][size=16px]复合物活性有关。[/size]

  • 常喝饮料易患白血病?纯属虚构

    最近网络上一直在传小孩只喝饮料容易患白血病,谣言一出立刻引起家长们的恐慌。但是事情的真相果真如此么?专家解释,常喝的饮料中含量最多的是一种叫甜味素的添加剂,下面来为您介绍关于甜味素对人体有何危害。甜味素白色粉末,无臭,有强烈甜味。又名天冬甜素(Aspartame),俗名甜味素,别名为阿司帕坦、阿斯巴甜、天冬甜精、依括片。是由L-天冬氨酸和L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐缩合合成而得。化学名为天冬酰苯丙氨酸甲酯,其甜度为蔗糖的180倍,甜味与砂糖十分相似,并有清凉感,无苦味或金属味。0.8%的水溶液PH值为4.5—6。长时间加热或高温可致破坏。在水溶液中不稳定,易分解而失去甜味,低温时和PH值3~5较稳定。用时现配或在降冻食品中使用较为理想。甜味素于1965年被发现。由美国Seark公司开发并取得专利,1974年美国食品药品管理局(FDA)批准用作食品添加剂,甜味素以其无毒、低热、高甜、不致肥胖、不引起龋齿,不致心血管疾病等优点而被广为使用。恒远温馨提示:天冬甜素分解的苯丙氨酸不是含苯环的有机化合物,因此不会致癌。小孩常喝饮料不会导致白血病,但是太依赖饮料可能导致儿童食欲下降、营养状况不良、体质下降,使得免疫力下降。饮料中的添加剂是食用性的,在安全范围内对人体没有太大影响。但是超标超量会对人体的肾脏产生影响,造成人体免疫系统紊乱。

  • 培养细胞可替动物用于制药试验

    按照欧洲法律,制药和化妆品领域用动物做实验是受到限制的,但这些产品必须保证对人体的安全,为此一些大的公司不得不寻找替代性方法。据美国科学促进会网站近日报道,最近发表在网络期刊《生物医学中心:基因组学》上的一篇论文提出了一种前卫的替代方法,用实验室培养的人类细胞替代动物实验。通过检测这些培养细胞的反应,就能区分出哪些化学品会造成过敏,并能预测过敏程度。 人们在日常的工作和生活中,每天都会接触到各种各样的化学制品,如机器油、洗涤剂、肥皂、各种日用化妆品等。而过度频繁地接触某种化学品,有可能导致过敏性皮炎、发痒和湿疹。除非找到造成过敏的化学药品源头,否则很难根治湿疹和其他过敏症状。 欧盟2009年发布的化妆品行业指导第7修正案规定,禁止在动物身上试验化妆品及其成分,这也意味着很难保证新开发的化妆品不会造成人体过敏。 瑞典伦德大学的研究人员利用全基因组特征检测了人类骨髓白血病细胞系对已知化学药品的反应。根据检测结果,他们确定了200个基因的“生物标记特征”,能精确区分出会造成过敏的化学药品。将这些特征和已知的化学品性质相对照,就能预测该化学品是否造成过敏和过敏程度。 “根据化学制品登记、评估与批准管理规定,欧盟所有新出的和原有的化学制品都要经过安全测试,这一规定涵盖的化学品数量已经超过3万种,而且还在增加。”论文合著者卡尔·伯瑞贝克教授说,这要求有合适的方法来测试,“新替代方法中所用的细胞来自人体,尽管还处于初期阶段,但其效果更快也更好。它提供了一种通过识别低免疫原性的化学品来降低过敏风险的方法,确保消费者长期使用的化学制品是安全的”。

  • 钟南山:90%白血病患儿家里曾豪装

    12月13日,由广东省室内环境卫生行业协会主办的“关注婴幼儿室内环境、关爱婴幼儿健康成长”高峰论坛在广州举行。中国工程院院士、呼吸疾病国家重点实验室主任钟南山在演讲中引用了中国环境保护协会有关统计资料,数字触目惊心:90%白血病患儿家中曾进行过豪华装修,每年210万儿童死于豪华装修;  80%的家庭装修甲醛超标;  70%孕妇流产和环境污染有关;  每年我国因室内环境污染引起的死亡人数高达11.1万人。

  • 高压线会导致儿童白血病吗?

    高压线会导致儿童白血病吗?

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/04/201404261737_497463_1609805_3.jpg最近这些年,各地因为供电公司修建高压线和变电站引发的抗议冲突事件屡见不鲜,在网上随意一搜索,就是一长串:北京昌平数十业主抗议高压线施工担心电磁辐射影响 青岛业主抗议楼盘旁建变电站广州变电站建设因是否有辐射之争受阻南昌红谷滩“变电站之争” 新址仍遭居民抵制成都驷马桥小区修建变电站,小区业主团结起来抗议…………高压线一类的电力设施如此不受欢迎的原因之一是人们担心高压电产生的电磁辐射(其实更准确的说法应该是电磁场),那么科学界真的有研究结果证明这种电磁场会对人体健康产生危害吗,包括经常提到的高压线会让儿童患白血病的可能性增加?

  • 流式细胞术详解 21.22章节 &参考文献

    95%。目前细胞分选主要用于研究,临床应用较少。血液学应用最多的是造血干细胞的研究,最近随着造血理论的深入研究关于造血干细胞究竟是否都是CD34+细胞出现一些争论,实验研究证明, CD34-造血干细胞较CD34+造血干细胞更具造血潜能,这些实验研究所用的CD34- 和CD34+细胞就是通过细胞分选获得的。小鼠造血干细胞分选一般按lin-c-Kit+CD34+/ lin-c-Kit+CD34-分选,人造血干细胞分选一般按lin-CD34+/ lin-CD34-分选。 为避免某些遗传性血液病如海洋性贫血、异常血红蛋白病的纯合子出生,产前诊断非常重要,这些疾病的主要靶细胞是红细胞,而孕妇血循环中存在着胎儿有核红细胞,只是数量非常少,利用流式细胞仪可从孕妇血液中分选出胎儿有核红细胞(分选条件:CD45-GPA+)进行基因分析,作出产前诊断。利用流式细胞仪分选免疫担当细胞进行细胞免疫学研究也是目前的热门课题。总之,流式细胞仪能够分选出你想得到的任何一亚群细胞,只要你想得到的某一亚群细胞有合适的单克隆抗体标记,流式细胞仪的分选功能将得到越来越多的科学研究和临床应用。二十二. 流式细胞术在血液学中的应用 其他流式细胞仪可能在两方面对骨髓增生异常综合症(MDS)有用,一是测定CD34阳性细胞数,以监测病情,二是测定核蛋白增殖因子(PCNA),有报告PCNA再在生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、白血病三种疾病中表达有明显差异,可辅助鉴别诊断。 此外流式细胞仪也可检耐药蛋白,如肺耐药相关蛋白(LRP)、多药耐药蛋白(MRP)、 P170等。 流式细胞仪也可检测细胞因子,细胞内细胞因子如白介素系列(IL-1—IL-14),肿瘤坏死因子(TNF),干扰素(IFN)等,[/color

  • 【转帖】第四种淋巴细胞—NKT细胞

    第四种淋巴细胞—NKT细胞 通常认为,构成机体免疫系统的淋巴细胞有三种细胞系组成,一是由胸腺产生的T细胞,二是由骨髓分化而来的产生抗体的B细胞,三是自然杀伤(NK)细胞。而新近发现存在第四种淋巴细胞—NKT细胞。1. NKT细胞的发现1986年,克隆成功了NKT细胞的特征性抗原受体基因。将其命名为Va14基因,与其他T细胞抗原受体的(TCR)基因不同,有其独特的结构特征。1987年美国国立卫生研究所的Fawlkes与瑞士的Budd分别领导的两个研究小组报告指出,胸腺细胞中的T细胞通常不能表达受体,仅有部分未成熟T细胞选择表达V-β8.2受体。随后的研究证明这种细胞不是T细胞,考虑是NK细胞的受体,这种细胞集团的数量极少,生理意义不明。1994年,这两个研究小组的研究人员发现,他们报道的细胞为同一细胞,从此NKT细胞的研究引起人们的广泛关注。T细胞识别的抗原是蛋白质,而NKT细胞是别的抗原是α-Gal-Cer即所谓的糖脂质,这是该免疫系统与通常的免疫系统重要的不同点。NKT细胞的分化与T细胞不同的是在胸腺形成前的胎生初期6.5日在胸腺外组织分化。NKT细胞与T细胞比较,机能处于不发达状态。T细胞分化为功能不同的Th1和Th2细胞群,Th1细胞产生INFγ及IL-2,引起迟发行过敏症等细胞性炎症。Th2细胞能产生IL-4和IL-10,参与变态反应及抗体产生等体液免疫反应。而NKT细胞不但能分泌Th1和Th2细胞因子,同时还具有与CD8+伤害性T细胞(cytotox-ic Tlymphocyte,CTL)相同的杀伤靶细胞作用。毫无疑问,NKT细胞在免疫调节系统中占有重要位置。NKT细胞与疾病可能有诸多关系,可能与自身免疫性疾病的发病机制、变态反应的调节、抗肿瘤作用、及抑制寄生虫感染等有关。2. NKT细胞的多样性分化NKT细胞具有T细胞和NK细胞细胞两重性质,既能表达Va14/Ja281特定的T细胞受体又能由CD1介导识别脂质抗原。NKT细胞的分化是否依赖胸腺尚有争议。根据其表达TCR等多种表面抗原的不同,提示NKT细胞存在两个以上细胞群。从CD4/8的表达看,可将其分为(1)CD4-NKT细胞,(2)CD8-NKT细胞,(3)CD4和CD8均不能表达的DN-NKT细胞。第一类的全部和第二类的半数是Va14/Ja281-T细胞。3.人类NKT细胞人末梢血中的DN-NKT细胞V区域,可高度表达Va24/JaQ(这与鼠的Va14/Ja281高度相似)及Vβ11(与鼠Vβ18高度相似)。这种TCR的组合表达可见于DN-NKT细胞和CD4+细胞。而未见于CD8+细胞。小鼠的CD1相当于人的CD1d的Va24/JaQ。此外,人末梢血中1~2%的T细胞能表达抑制性受体,即抑制型NK细胞受体(KIR),而Va24/JaQ+细胞则不能表达。它的NK相关分子是CD16、CD56或CD57,Va24/JaQ+细胞异不能表达这些分子。在小鼠中还可以看到Va24/Ja281+T细胞以外的NKT细胞。人类Va24/JaQ+细胞与KIR+T细胞能形成不同的亚群。且具有不同的功能。4. NKT细胞分化的胸腺依赖性这是目前存在争议的问题,可以肯定地说NKT细胞分化过程中胸腺是有作用的。NKT细胞多见于胸腺及脾脏以外的肝脏和骨髓种,胸腺缺损的小鼠与正常小鼠比较,NKT的分化并不少。将出生三日小鼠的胸腺摘除,虽然NKT细胞的分化显著受到抑制,但此时CD8+NKT细胞的分化未受到影响。由此认为CD8+NKT细胞在胸腺外分化的可能。5. NKT细胞产生细胞因子的意义 NKT细胞是指能够表达NKT细胞标志NKT1.1的T细胞,其机能具有T细胞和NKT细胞双重特征。NKT细胞在TCR和NKR介导下,产生大量的IL-4及INFγ,对肿瘤细胞有细胞伤害作用。 NKT细胞能表达T细胞的TCR与NK细胞的NKR-P1两种受体,特别是NKT细胞多数表达Va14TCR,识别CD1抗原,而NKR-P1识别各种糖链。 NKT细胞,特别是CD4-NKT细胞,对TCR刺激可产生大量IL-4及IFNγ,同时具有ThO型细胞因子产生能力。NKT细胞不但产生IL-4的主要细胞,而且强力产生IFNγ。IFNγ参与自身Th1诱导,具有极强的Th1诱导能力,从而是IL-2产生亢进。它同时还具有Th2细胞分化抑制功能。IL-12能诱导NKT细胞产生IFNγ。IL-12对TCR的刺激是IFNγ的产生显著亢进。综上所述,NKT细胞不但是IL-4和IFNγ的强力产生细胞,同时参与Th1/Th2分化的抑制,而这些作用都不是单纯的。 虽然NKT细胞能大量产生细胞因子,但仅在机体内保持这种功能。当初一度认为,NKT细胞只是IL-4的产生细胞,而不是Th2分化的必需细胞。并不认为在CD1缺损的小鼠中NKT细胞的分化和对TCR刺激使IL-4产生减少,且对Th2分化必需的IL-4及IgE的产生没有多大影响。但给小鼠投于α-GalCer可使NKT细胞活化,IL-4的产生诱导Th2的应答。有报告指出,同样投于α-GalCer,可使NKT细胞产生IFNγ而致IgE产生低下。由此可见,NKT细胞能产生IL-4与IFNγ两种功能相反的细胞因子。这种微妙的协调作用可能是NKT机能表达的重要特征。NKT细胞的活化通常伴有T细胞、B细胞及NK细胞的活化,这对NKT细胞活化后的免疫应答有较大影响。

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