胆固醇用于细胞培养

胆固醇作为具有四环的脂质，是一种难以分解的强促炎分子，可加速动脉粥样硬化和非酒精性脂肪性肝炎。高胆固醇是心血管疾病的主要危险因素，目前没有药物能够通过直接促进胆固醇排泄来降低胆固醇。人类遗传学研究发现，功能丧失的去唾液酸糖蛋白受体1 (Asialoglycoprotein receptor 1, ASGR1) 变体与低胆固醇和降低心血管疾病风险有关。ASGR1仅在肝脏中表达并介导血液去唾液酸糖蛋白的内化和溶酶体降解。然而，ASGR1影响胆固醇代谢的机制尚不清楚。2022年8月3日，武汉大学宋保亮团队在Nature 在线发表题为“Inhibition of ASGR1 decreases lipid levels by promoting cholesterol excretion”的研究论文。该论文发现Asgr1缺乏通过稳定肝X受体α (liver X receptor α, LXRα) 来降低血清和肝脏中的脂质水平，LXRα上调ABCA1和ABCG5/G8，这分别促进胆固醇转运到高密度脂蛋白和排泄到胆汁和粪便。ASGR1缺乏阻断糖蛋白的内吞作用和溶酶体降解，降低溶酶体中的氨基酸水平，从而抑制mTORC1并激活AMPK，一方面AMPK通过减少其泛素连接酶BRCA1/BARD1来增加LXRα；另一方面，AMPK抑制控制脂肪生成的甾醇调节元件结合蛋白 (sterol regulatory element-binding protein, SREBP1)。抗ASGR1中和抗体通过增加胆固醇排泄来降低血脂水平，并显示出与阿托伐他汀或依折麦布这两种广泛使用的降胆固醇药物的协同有益作用。总之，该研究表明靶向ASGR1可上调LXRα、ABCA1和ABCG5/G8，抑制SREBP1和脂肪生成，从而促进胆固醇排泄并降低血脂水平。胆固醇稳态是通过肠道胆固醇吸收、血浆脂蛋白摄取、从头生物合成以及胆固醇分解代谢和排泄之间的复杂相互作用实现的。迄今为止，降胆固醇药物主要分为三大类：他汀类药物是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶 (HMGCR) 的竞争性抑制剂，通过降低胆固醇生物合成和上调低密度脂蛋白 (LDL) 受体 (LDLR) 提高低密度脂蛋白 (LDL) 摄取来降低血浆胆固醇；依折麦布是一种肠道胆固醇吸收抑制剂，通过抑制Niemann-Pick C1样1的内吞作用来阻止胆固醇摄入；PCSK9抑制剂通过稳定LDLR4增加肝脏LDL摄取。尽管这些药物已被广泛使用，但仍有很大一部分患者患有复发性心血管疾病 (cardiovascular disease, CVD)，他们的 LDL 胆固醇水平未能达到指南中推荐的目标水平。最重要的是，这些现有的降胆固醇药物都没有通过直接促进胆固醇分解代谢或排泄来降低胆固醇。mTORC1和AMPK是感知细胞营养和控制新陈代谢的两个主要调节器，它们通过多种机制受到反向调控。尽管AMPK已被提议作为代谢疾病的潜在治疗靶点，但泛AMPK激动剂会导致心脏肥大，从而阻碍其临床应用。除了激活AMPK的组织特异性作用外，细胞AMPK还受药物、营养物质和AMP的不同调节，导致不同靶点的磷酸化。因此，选择性激活AMPK对于在没有副作用的情况下开发药物至关重要。胆固醇通过ABCG5和ABCG8异二聚体排泄到胆汁和肠腔。ABCG5或ABCG8突变导致谷甾醇血症，这是一种以甾醇积累和过早动脉粥样硬化为特征的罕见疾病。小鼠肝脏中过表达ABCG5/G8基因增加了肝胆分泌胆固醇同时降低了血浆胆固醇。ABCG5/G8的表达主要受LXR在转录水平上的调节，LXR的药理激活通过上调ABCG5/G8增加胆固醇流出。然而，LXR也增加了SREBP1（也称为 ADD1），它驱动脂肪酸生物合成基因的表达，导致肝脏脂肪有害变性和高甘油三酯血症。因此，在临床上直接使用LXR激动剂不能用于治疗高胆固醇血症。该研究揭示mTORC1和AMPK可以被ASGR1所调控。mTORC1被去唾液酸糖蛋白的溶酶体消化释放的氨基酸激活，这些氨基酸通过ASGR1介导的内吞作用进入肝细胞。抑制ASGR1会阻断受体介导的内化和随后的去唾液酸糖蛋白的溶酶体消化，从而激活AMPK并抑制mTORC1。这种机制为选择性激活AMPK提供了高度定位的信号。ASGR1的调控LXR的机制模型（图源自Nature ）胆固醇流出通过增加LXRα和ABCG5/G8，LXRα使ABCA1升高，显示更高的高密度脂蛋白 (HDL) 胆固醇和更低的低密度脂蛋白 (LDL) 胆固醇，也改善了脂蛋白谱。由于mTORC1抑制和AMPK激活，SREBP1被抑制，因此阻止了脂肪生成。此外，缺失Ttc39b增加了LXRα和ABCG5/G8而没有激活SREBP1，证实ABCG5/G8的表达可以与SREBP1的表达分离。由于ASGR1几乎只在肝细胞中表达，因此靶向ASGR1绕过了泛AMPK激动剂的不良副作用，为肝脏特异性激活AMPK和抑制mTORC1 铺平了道路。总之，该研究提供了一种独特的降低胆固醇的方法，抑制ASGR1会增加胆汁和粪便中的胆固醇排泄，ASGR1的功能丧失变体与降低非HDL胆固醇和减少复发性心血管疾病相关，这提示抑制ASGR1是治疗心血管疾病安全有效的方法。原文链接https://www.nature.com/articles/s41586-022-05006-3

p style=" text-indent: 2em " 《细胞》子刊：高胆固醇竟会加速干细胞增殖，使肠道肿瘤生长加速100倍! /p p 　　在以往的研究中我们发现：高胆固醇饮食和胃肠道癌症密切相关。但是高胆固醇和胃肠道癌之间到底存在着什么样的联系呢? /p p 　　在最近一期的《Cell Stem Cell》上，一篇名为“Phospholipid Remodeling and Cholesterol Availability Regulate Intestinal Stemness and Tumorigenesis”的文章揭开了高胆固醇促进癌症发展的一角：发现小肠干细胞中一旦缺少某种酶，癌症就会开始疯狂增长，最终可使癌症发展速度增加100倍! /p p style=" text-align: center " img title=" 1.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/a09f5498-822c-4b04-a679-8d9bdb577392.jpg" / /p p 　　来自加利福尼亚大学洛杉矶分校参与本次研究的Peter Tontonoz教授说道：“我们发现胆固醇会影响小肠干细胞的增殖速度，从而加速肿瘤形成速度，而相对于正常的水平来说，这个加速过程高达100倍!” /p p 　　丢失的酶，疯长的干细胞! /p p 　　Tontonoz教授在研究中发现：缺少了Lpcat3酶之后，小肠干细胞开始疯狂增殖。于是研究人员开始研究Lpcat3酶的作用。在小鼠模型中，研究人员利用荧光标记法标记了小鼠的肠道细胞，结果发现：缺失Lpcat3酶的小肠干细胞，增殖速度接近正常情况下的3倍! /p p style=" text-align: center " img title=" 2.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/53bb7384-b92c-492c-9497-644c25d04300.jpg" / /p p 　　为此，研究人员开始探索Lpcat3酶缺失到底怎样促进干细胞增长。而在这里，便牵出了我们的主角：胆固醇。 /p p 　　干细胞疯狂增长背后：都是高胆固醇惹的祸! /p p 　　为了探索Lpcat3酶的作用，研究人员进行了进一步研究，发现在Lpcat3酶缺失细胞中，促进胆固醇合成的基因表达上调! /p p style=" text-align: center " img title=" 3.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/24b36d50-a542-4702-a9af-e2f5a8f484aa.jpg" / /p p 　　那么干细胞增长和高胆固醇之间有什么关系呢? /p p 　　研究人员在缺少Lpcat3酶表达的细胞中加入了抑制胆固醇合成的药物，结果发现干细胞的疯狂增长停滞! /p p 　　而为了进一步弄清楚高胆固醇和干细胞增长之间的关系，研究人员在小鼠模型中进行了实验：高胆固醇饮食的小鼠体内小肠干细胞的增速比正常的小鼠快了五分之一! /p p style=" text-align: center " img title=" 4.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/4a7c3fdc-0eb8-4e21-99b1-ec833841680e.jpg" / /p p 　　疯狂增长的干细胞成了癌细胞生长的温床。通过小鼠的肠癌模型发现：在缺少Lpcat3酶的小鼠体中，肿瘤细胞的发生发展更快，小鼠的生存期大大缩短! /p p style=" text-align: center " img title=" 5.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/2fe37f59-f46b-4d72-89ae-029735f07ff2.jpg" / /p p 　　研究人员说道：“高胆固醇使得干细胞的增殖能力增加，从而使肠道内的癌症疯狂增长，增速高达100倍!”胆固醇是人体必需的元素，是细胞膜的重要构成部分，但是富含饱和脂肪和反式脂肪的食物却会为机体带来不必要的胆固醇，这会使得我们机体的胆固醇不断升高。 /p p 　　因此，参与此次研究的Tontonoz教授说道：“我们应该避免使用过多加工过的食物：比如红肉。”在下一个阶段，研究人员将研究胆固醇在其他癌症中的作用。与此同时，本次研究也为他汀类药物降低癌症风险提供了一定的佐证。 /p p 　　而在饮食选择方面，合理的摄入营养元素才是健康的选择。多吃蔬菜水果。 /p

近日，全国标准物质管理委员会召开国家二级标准物质评审会，江苏省计量院化学所研制的甲醇中胆固醇溶液标准物质(2种)通过专家评审。 　　评审会上，项目负责人就此次申报的溶液标准物质的制备过程、定值方法、均匀性及稳定性考察、不确定度评定等方面内容进行了汇报。最终，专家组一致同意江苏省计量院研制的甲醇中胆固醇溶液标准物质(2种)通过国家二级标准物质的定级鉴定。 　　液相色谱仪作为一种常见的分析仪器，广泛应用于食品医药、环境化学、石油化工等行业相关产品的分析，台件保有量巨大。本次通过的甲醇中胆固醇溶液标准物质可用于液相色谱仪示差折光检测仪和蒸发光散射检测器的检定和校准工作。 　　近5年来，江苏省计量院化学所在各类科研项目的支持下，研制并获批国家有证标准物质19种，包括气体、有机溶液、无机溶液等多个品种。通过总结研制经验和专家指导意见，江苏省计量院将加大标准物质研制投入力度，为提升检测技术和科研能力，拓宽产业计量业务维度贡献更多力量。

鸡蛋胆固醇不可怕，降低炎症也有它糖尿病患者早餐吃一个鸡蛋和吃一碗燕麦粥是一样健康的？甚至鸡蛋更健康？College of Agriculture, Health, and Natural Resources的营养学教授Maria-Luz Fernandez的最新研究成果表示鸡蛋可能对糖尿病患者属于更健康的饮食。Fernandez教授和她的同事们得到的证据表明，一个鸡蛋可能不仅属于糖尿病患者饮食中可以接受的类别，它可能会被证明提供意想不到的保护，防止潜在的可能导致心脏疾病的炎症进程。这篇研究发表在最近的Nutrients。Fernandez教授解释说，糖尿病影响了近25万美国人和全球各地多达400万人的生活。糖尿病患者往往需要控制他们的饮食——包括避免高脂肪、胆固醇、钠和糖。大多数糖尿病患者都了解。吃谷物如燕麦片是有好处的。而鸡蛋因为它的胆固醇含量，不属于合适饮食。但Fernandez教授和她的同事们质疑这种假设。不能忽视的事实是：鸡蛋充满了高质量的蛋白质和其他有价值的营养元素；在世界大部分地区市场都有供应，而且容易煮食。此外，它们的味道很好。“鸡蛋含有类胡萝卜素叶黄素和玉米黄素，是天然的色素，能够防止体内氧化应激和炎症，”Fernandez教授表示。研究人员选择了患有2型糖尿病的个体，所有个体都经过医生的诊治，并且病情在良好的控制之下。参与者随机选择每天消耗一个鸡蛋或一碗燕麦粥，并持续五周。再经过三周间歇期。在每个周期结束时，研究人员需要测量的所有主要和次要指标。在13周结束时，研究者发现血浆中总胆固醇，LDL，甘油三酯，血糖，或者其他任何参数的水平在两组之间并没有差异。这很有趣，因为之前的预期结果是燕麦片饮食会比鸡蛋好。而事实证明，两者效果类似。但真正让人吃惊的是，炎症过程的标记物在鸡蛋组的含量是下降的。这一发现的重要意义是糖尿病患者有一个明显特征是具有低度炎症，通过食用鸡蛋，炎症被降低。肿瘤坏死因子（TNF）-α和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的水平降低。该研究是临床干预实验。不过持续时间短，而且没有包括未经控制的糖尿病患者和有并发症的糖尿病患者。研究人员计划未来会在较长的时间段内测量一个较大的队列

01研究背景在生命科学领域，肠道吸收胆固醇和肝脏合成新胆固醇之间的相互平衡对维持胆固醇的平衡至关重要，然而人们对这些过程的调节机制仍然知之甚少。本期案例研究首次发现并命名了一种肠道激素——Cholesin（肠抑脂素），并揭示了Cholesin在调控机体胆固醇稳态方面的作用和调控机制。Cholesin-GPR146信号轴介导了肠道胆固醇吸收和对肝脏胆固醇合成的抑制作用，这种新发现的激素胆固醇素有望成为防治高胆固醇血症和动脉粥样硬化的有效药物。下面，让我们一起探究这篇近期发表在Cell的优质文章吧！https://doi.org/10.1016/j.cell.2024.02.024IF: 64.5 Q102研究内容近日，清华大学生命科学学院王一国副教授和南方医科大学南方医学院张惠杰教授在国际知名期刊Cell上发表了 “A gut-derived hormone regulates cholesterol metabolism” 的论文。在此项研究中，作者选用NanoTemper公司的Monolith分子互作仪进行其中肠抑脂素受体的验证工作，MST的技术优势不负众望并发挥了重要作用。为了研究GPR146是否是Cholesin的受体，研究团队使用Monolith分子互作仪检测了Gpr146—/—在小鼠组织中Cholesin的结合情况。在Gpr146—/—小鼠的组织和原代肝细胞中，Cholesin的结合完全消失。进一步的实验证实Cholesin与GPR146的结合具有很高的亲和力。根据GPR146的保守性和预测结构，研究团队通过将6个氨基酸与丙氨酸重置生成了GPR146的突变体。与WTGPR146相比，突变体GPR146对Cholesin的亲和力明显降低，并且无法恢复GPR146—/—原代肝细胞与Cholesin的结合。所有这些体外和体内结合实验都证明GPR146是Cholesin的受体。在此验证工作的基础上，科研团队继续开展后续的实验。图1. 微量热泳动技术(MST)定量测定肠抑脂素-His与GPR146 (野生型或突变体)的结合亲和力。蓝色曲线代表的是野生型GPR146与肠抑脂素-His的结合，平衡解离常数是21.34±0.98 nM 红色曲线代表的是突变型GPR146与肠抑脂素-His的结合。平衡解离常数是971.0±91.5 nM。03技术优势在这篇科研工作中，通过微量热泳动（MST）技术检测到野生型和突变型肠抑脂素-His对GPR146结合的验证。该技术对于分子互作亲和力的检测，Monolith系列仪器不依赖于分子量的改变，蛋白用量少，可以在溶液中表征肠抑脂素-His与GPR146的亲和力，十分有利于蛋白的结构平衡。Monolith分子互作检测仪（点击图片 查看更多）

茂默科学以客户为本、合作共赢的理念，致力于帮忙客户提供整体实验方案。力求解决行业内客户对科学仪器选型难、维护难的处境。通过不断优化公司运作和提升服务质量，目前已赢得业内人士和广大客户广泛认可，拥有广泛而稳固的合作伙伴和客户群体。茂默科学现介绍细胞培养实验室设备配置及用途，想要了解更多仪器、实验室仪器选配、实验室整体打包方案制定，敬请咨询~1. 超净工作台实验室设备目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作，具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式（垂直式）和外流式（水平层流式）。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。（1） 侧流式工作台：空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧，形成气流屏障保持工作区无菌，工作台结构为封闭式；（2） 外流式工作台：净化后的空气面向操作者流动，因而外方气流不致混入操作，工作台结构为开放式，但进行有害物质实验操作对操作者不利。 超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度，符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级，用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均 2. 显微镜倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备，主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许，建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，可随时拍摄并记录细胞生长情况。3. 培养箱体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，一般适生长温度为37℃，温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时，变不利于细胞生存，温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此，可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是、佳选择。（1） 恒温培养箱：应选隔水式或晶体管式自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜，其缺点是只宜于作密闭式培养。（2） CO2培养箱：目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2（常用浓度为5％），易于稳定培养液pH，适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时，为使培养瓶内与外界保持通气状态，可将瓶盖略微旋松，为避免细胞被污染，使用这种培养方式时，培养箱内空气必须保持清洁，需定期用紫外线照射或酒精消毒，同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽，防止培养液蒸发，保持箱内相对湿度。（3） 细胞培养耗材：培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。4. 烘箱（干燥箱）用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，烘箱内温度一般要达到160℃以上，通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门，以免骤冷导致玻璃器皿破裂，应等温度自然下降至100℃以下后可开门。5. 水纯化装置细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合，可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便，可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液枪、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能，有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。6. 冰箱细胞培养实验室必备设备，应专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。普通冰箱：储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品，可短期保存组织样本。-20℃低温冰箱、超低温冰箱：用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂，如酶、血清等。7. 细胞冷冻储存器储存器常用的液氮容器，根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素：容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L，可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度、低温度可达-196℃，使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发，需注意观察剩余液氮量，及时补充，避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择，可配置有电子控制器的液氮储存器，实现冻存自动化；并可监测液氮水平和样品温度，确保样品温度始终处于设定温度点；可配置报警系统，设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警；同时具备热气体旁路系统，防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐，从而更有效地保护样品，防止容器内升温。另外，可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮，保证样品安全。8. 离心机细胞培养时，通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机；若要做细胞沉降，需要使用80-100G离心力，因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求，有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。9. 天平常用的有精密天平和分析天平。 分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平：取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平；取样量100-10mg，选用精确度0.01mg的天平；取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准，可选择有自动校准功能的天平，方便维护。天平使用需要注意清洁，避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。

细胞在体外能够成功生长，培养基的选择及培养方法的优化十分关键。细胞在单纯的培养基中不能存活，各种类型的细胞培养中必须提供某些生长因子、黏附和伸展因子、微量元素等营养物质。传统培养基中一般会添加动物血清如牛血清等。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。其中胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 血清培养的优势与局限采用天然来源的血清作为细胞培养添加物，优势在于提供丰富全面的细胞生长必需的营养，并且提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，调节其活性。结合蛋白还能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。血清还是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。但血清的使用也存在一定局限性。(1)血清可能含有细胞生长抑制因子和毒性因子，存在潜在毒性；(2)血清的获取成本高，价格较为昂贵；(3)血清由于成分不完全明确，给细胞培养的标准化带来困难，同时也给细胞表达目的产物纯化等下游操作带来困难。 无血清培养优势由于常规血清培养基存在上述问题，近年来无血清培养基越来越受到重视，其开发和应用渐成趋势。无血清培养基不含动物血清或其他生物提取液，仍可使细胞在体外较长时间生长、增殖或维持。无血清培养基可以针对特定的细胞类型配制专用的培养基，如爱必信生物研发推出的人间充质干细胞培养基，可以帮助精确地控制细胞的增殖和分化过程等。无血清培养基尤其应用于哺乳动物细胞的大规模工业培养。同时，它也是研究细胞生长、增殖、分化及基因表达调控的有力工具。无血清培养基具有以下优点：(1)其组成明确，可避免血清不同批次带来的质量变动，提高可重复性。(2)避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染风险。(3)避免血清不明组分对实验研究的影响。(4)有利于体外培养细胞的分化。(5)可提高细胞产物的表达水平并易于纯化。 所以，说了这么多，您是在进行细胞的常规有血清培养还是无血清培养呢？您更看好哪一方呢？爱必信生物提供优质、高性价比的血清产品，降低您的常规细胞培养成本！ 货号 品名 规格 价格 abs972 胎牛血清(优级) 500ml 3465 abs973 胎牛血清(优级),辐照 500ml 3675 abs974 胎牛血清(标准级) 500ml 2541 abs975 胎牛血清(标准级),辐照 500ml 2751 abs993 无外泌体胎牛血清 50ml 2478 abs976 新生牛血清(超级) 500ml 2268 abs980 澳洲新生牛血清 500ml 1155 abs981 BHK细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs983 Vero细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs985 二倍体细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs987 CHO细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685针对现今越来越旺盛的无血清培养需求，爱必信生物特研发推出无血清干细胞培养的全面解决方案：！ 产品用途 货号 品名培养基 abs9401 Xeno-Free人间充质干细胞培养基（无酚红） abs9402 Xeno-Free人间充质干细胞培养基 abs9403 人多能干细胞条件培养基 abs9404 人多能干细胞完全培养基 abs9405 人多能干细胞分化培养基 abs9419 人脐带间充质干细胞无血清培养基(无酚红） abs9420 人脂肪干细胞无血清培养基(无酚红）基质胶 abs9410 即用型基质胶潜能分化 abs9406 人间充质干细胞成软骨分化试剂盒 abs9407 人间充质干细胞成脂分化试剂盒 abs9408 人间充质干细胞成骨分化试剂盒分化鉴定 abs9414 成脂检测染液 abs9415 成骨检测染液 abs9416 成软骨检测染液消化液 abs9409 人多能干细胞消化液 abs9411 Xeno-Free细胞消化液冻存液 abs9417 无血清细胞冻存液（科研级） abs9412 ES/iPS细胞冻存液 abs9413 无血清细胞冻存液（治疗级）添加物 abs9120 B27 NeuroMix (50x) abs44077956 Recombinant Human Transferrin重组人转铁蛋白更多细胞培养产品： 产品用途 货号 品名血清 abs972 胎牛血清(优级) abs973 胎牛血清(优级),辐照 abs974 胎牛血清(标准级) abs975 胎牛血清(标准级),辐照 abs976 新生牛血清(超级) abs980 澳洲新生牛血清 abs993 无外泌体胎牛血清抗生素 abs9245 青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗) abs9246 青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液(100×三抗) abs9244 青霉素-链霉素溶液(100×双抗) abs47014828 Hygromycin B(潮霉素B)消化液 abs47047375 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红 abs47014935 Accutase Cell Detachment Solution abs47014937 Trypsin (0.25%), Phenol Red abs47014938 Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol RedDMSO abs9187 二甲基亚砜(DMSO)(细胞培养级)添加物 abs9156 BSA（细胞培养级） abs42019847 Insulin重组人胰岛素 abs9169 Insulin, from Bovine Pancreas abs9119 Bovine Pituitary Extract (BPE) abs80002 鸡胚提取物Absin特色产品线（全部现货）：WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)... 爱必信(上海)生物科技有限公司联系邮箱：info@absin.cn公众平台：爱必信生物

1、细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史，细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。1.1 平衡盐溶液（balanced salt solution，BSS）BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank' s与Hank' s的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank' s常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份，参与细胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液，前者缓冲能力较弱，适合于密闭培养；后者缓冲能力较强，适合于5% CO2的培养条件。表1-1 几种常用的BSS配方（g/L）名称PBS（无Ca2+、Mg2+）PBS（含Ca2+、Mg2+）Earle’sHank’sD-Hank’sKrebs-RingerNaCl8.008.006.808.008.007.00KCl0.200.200.400.400.400.34CaCl2--0.200.14-MgCl2• 6H2O-0.10---MgSO4• 7H2O--0.20.2-Na2HPO41.151.15-0.0480.0480.10Na2HPO4• 2H2O--0.14--0.207KH2PO40.200.20-0.060.06NaHCO3--2.200.350.35-葡萄糖--1.001.00-1.80酚红--0.010.010.01-目前用于细胞培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。此外，血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。目前，血清多作为一种添加成分与合成培养基混合使用，使用浓度一般为5~20 %，最常用是10 %。1.2 合成细胞培养基合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。最早开发的基础培养基（minimal essential medium, MEM），其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上，DMEM、IMDM、HAM F12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍，其特性及应用的范围见下表：哺乳动物细胞培养基：培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后，可广泛用于多种细胞培养，并用于病毒学、疫苗生产等MEM细胞培养基MEM（Minimal Essential Medium）培养基有含Earle' s平衡盐的类型，也有含Hanks' 平衡盐的类型；有高压灭菌型的，也有过滤除菌型的；还有含非必需氨基酸的类型。是最基本、适用范围最广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM（Dulbecco’s modified Minimal Essential Medium）是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的，各成分份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM（Iscove’s modified DMEM ）是由Iscove在DMEM基础上改良，增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交瘤细胞培养，以及无血清培养的基础细胞培养基。GMEM细胞培养基Glasgow’s MEM培养基是MEM的改进型，用于支持BHK-21细胞的生长。原配方以BME为基础， 加入10%磷酸胰蛋白(月示)肉汤，氨基酸和维生素浓度加倍。RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计，含有BSS、21种氨基酸、维生素等，广泛适于多种正常细胞和肿瘤细胞的培养，也用做悬浮细胞培养。HamF12细胞培养基含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F12适用于CHO细胞，也是无血清细胞培养基中常用的基础细胞培养基。DMEM/F12细胞培养基将DMEM和F12按照1:1比例混合，混合后营养成份丰富，血清使用量也减少，常作为开发无血清细胞培养基时的基础细胞培养基。McCoy' s5AMcCoy' s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)原代细胞的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。William' s Medium E适用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。神经元基础培养基可为神经元生长提供基础营养物质。昆虫细胞培养基：培养基名称特性及应用范围Grace' s昆虫培养基Grace昆虫培养基（Grace' s Insect Medium）最初设计为支持澳大利亚白星橙天蚕蛾 (Antherea eucalypti) 细胞 的生长，是对Wyatt培养基的改良，以更接近 Antherea 血淋巴。Grace用这种培养基建立了第一个连续细胞系。适当补充添加剂后，该基本培养基已用于培养各种昆虫细胞，包括多种鳞翅类以及一些双翅类昆虫。Grace昆虫细胞培养基主要作为 培养基基础，用于培养Sf9 和Sf21细胞系，也用于其它鳞翅类昆虫细胞系的生长和维持。Grace' s培养基(Grace’s Insect Cell Culture Medium) 是无血清培养基，使用时需要补充血清，从而为细胞提供必要的营养因子。添加5 -20%胎牛血清后，Grace昆虫细胞培养基可以用于培养多种昆虫细胞。IPL-41 昆虫培养基 IPL-41昆虫培养基（IPL-41 Insect Medium）旨在用于大规模扩增草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）细胞系，也常用于通过杆状病毒表达系统（BEVS）进行蛋白表达。 IPL-41培养基是对原始IPL配方的改良，由美国农业部昆虫病理实验室Weiss等人开发，用于大规模扩增草地贪夜蛾衍生细胞系。Weiss向基础培养基中加入了胎牛血清和TPB培养基（Tryptose Phosphate Broth），成功地实现了IPL-21 AE (III)细胞系的大规模连续培养。该培养基主要用于培养和维护鳞翅类衍生细胞系和扩增这些细胞系的病毒。IPL-41培养基基础也以用于无血清夜蛾细胞的杆状病毒重组蛋白表达。Shield' s & Sang Insect向Sheilds-Sang M3昆虫培养基中添加10%胎牛血清后广泛用于培养各种果蝇细胞系。Sheilds-Sang M3昆虫培养基（Sheilds and Sang M3 Insect medium） 基于D22培养基。该培养基支持黑腹果蝇衍生细胞的生长。Sheilds和Sang将原配方中的氯化物除去，用谷氨酸盐提供钠和钾离子，并用游离氨基酸替代乳白蛋白水解物。Bis-Tris作为缓冲剂放置pH变动。Schneider' s 果蝇培养基 很多昆虫组织培养基的配方是模拟特定昆虫体液的主要物理化学性质。针对相同物种的不同培养基成分的相似度可能比针对不同物种的培养基之间更低。有多种培养基用于果蝇细胞和组织的体外培养。应用最多的是Schneider 培养基、D-22 培养基。果蝇细胞用于研究各种生物化学过程，包括遗传学、内分泌学、生理学和细胞生物学等方面，以及重组蛋白的表达。加入5-20% 胎牛血清后Schneider培养基能够支持黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）原代细胞和建立的细胞系的快速生长。该培养基用于培养和维护果蝇胚胎衍生的细胞系以及其它双翅目昆虫细胞培养物细胞培养基常用几种重要的添加成分及使用过程中应注意的问题酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。一般情况下，可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值，但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响，也可通过纯化技术去除，但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 ～7.4范围内具有较好的缓冲能力，在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34 g /L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10～25 mmol/L。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖的条件下，细胞也可以代谢丙酮酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4 ℃下放置1周可分解50 %，使用中最好单独配制，置-20 ℃冰箱中保存，使用前加入细胞培养液中。赖氨酸（L-lysine）：分子量大于70,000的多聚赖氨酸可以用于促进细胞贴壁生长，也可以用于组织学(Histology)分析时的粘片剂。Poly-L-lysine和Poly-D-lysine都可以用于促进细胞的贴壁生长。Poly-L-lysine可以被某些细胞所消化并吸收，摄入过多的Poly-L-lysine会产生一定的细胞毒性。如果遇到Poly-L-lysine有细胞毒性的情况，可以考虑选用Poly-D-lysine，因为右旋的聚赖氨酸是不会被生物吸收利用的，所以毒性更低。远慕生物致力于生物技术和生命科学等行业领域，专注于植物生物学技术研究，以满足全球不断增长的食品，能源、医药日益增长的需求和发展。目前远慕生物制造和提供的产品主要有动物细胞培养产品（包括细胞培养基、FBS、缓冲溶液、抗菌剂和其他试剂）和植物生物学产品（包括植物组织培养基、凝胶系列产品、植物生长调节剂、抗生素&抗菌剂、生化试剂以及植物组培容器和耗材）。

2022年9月2日，奥浦迈正式在科创板挂牌上市，截至目前股价涨60%，市值达到104亿元人民币。中国细胞培养基市场仍以进口产品为主，赛默飞（Gibco品牌）、丹纳赫（HyClone品牌）和默克三大供应商占到三分之二的市场份额，国产化替代空间巨大。国产细胞培养基厂商中，甘肃健顺、奥浦迈占比较大，其他的供应商还有中山康天晟和、上海倍谙基、源培生物、沃美生物、迈邦生物、多宁生物等。抗体和蛋白药物的细胞培养基，进口产品一般在200-300元/升，国产产品一般在100元/升左右。细胞和基因治疗的培养基几乎完全依赖进口，售价一般在3000-4000元/升。根据咨询机构的数据，2020年中国抗体和蛋白药物细胞培养基市场规模为7.27亿元左右。考虑到中国生物医药从2015年的爆发开始，2019年开始才陆续进入商业化阶段，未来几年仍将高速增长的趋势。赛默飞、丹纳赫、默克占据国内培养基市场的三分之二，如果具体到抗体和蛋白药物领域，三家外企的份额更是达到了81.4%，国产化替代空间更加巨大。2019-2021年，奥浦迈的营业收入从2602万元迅速增加到1.28亿元。相比之下，纯化填料供应商纳微科技2021年的营业收入为4.46亿元。总结中国生物医药行业处于蓬勃发展的新时代，商业化也处在发端，未来几年国际化热潮也将来临。在这种背景下，供应链的国产化替代迎来重要的发展机会。除了细胞培养基、纯化填料，工艺设备端的细胞反应器、纯化设备是国产化替代的重要部分。除了试剂耗材和工艺设备外，分析仪器的差距更大，国产化替代面临更大的挑战

细胞培养也叫细胞克隆技术，在整个生物工程技术领域，细胞培养都是一个必不可少的过程。目前主要有两种基本的细胞培养体系，一种是细胞在人工基质上单层生长（贴壁培养），另一种是细胞在培养基中自由漂浮生长（悬浮培养）。贴壁培养和悬浮培养的细胞无论在细胞形态和培养条件上有诸多不同。第一来源和形态不同： 悬浮细胞的生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，细胞大体呈球形或椭球型（见下图）。这类细胞一般为淋巴细胞等血液系统来源的细胞。悬浮细胞 贴壁细胞生长必须有可以贴附的支持物表面，依靠自身分泌的或培养基中提供的黏附因子才能爱表面生长和繁殖。细胞在未贴附于底物之前一般似球体样，当与底物贴附后，细胞将逐渐延伸展形成一定的形态（见下图）。贴壁培养细胞主要包括正常细胞和肿瘤细胞，比如成纤维细胞，骨骼组织（骨及软骨），心肌与平滑肌、肝、肺、肾、乳腺皮肤神经胶质细胞，内分泌细胞，黑色素细胞及各种肿瘤细胞等。 上皮细胞型 成纤维细胞型 贴壁细胞与悬浮细胞在显微镜下的区别贴壁细胞分为两种，上皮细胞型和成纤维细胞型，在显微镜下观察时，贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形，而且晃动培养液时，细胞不动。悬浮细胞漂在培养液中，呈圆形，晃动培养液时细胞也随着漂动。 第二培养条件和方式不同： 贴壁细胞一般使用滚屏或T瓶进行培养。如果使用微载体，也可以用微载体培养瓶或生物反应器进行培养。 培养过程中的温度/湿度/CO2的环境条件控制，可由培养箱提供。 滚瓶机 微载体培养瓶 T瓶 悬浮细胞培养，可以使用小型细胞工厂、飞旋瓶、生物反应器进行培养。 细胞工厂和飞旋瓶培养中需要的温度/湿度/CO2的环境条件控制，可由培养箱提供。生物反应器自带条件控制功能。 小型细胞工厂Celline 飞旋瓶生物反应器 WIGGNS培养箱在设计之初就考虑了培养箱内部兼容用电设备。在具有传统培养箱的所有功能之外，WIGGENS CO2培养箱系列，采用了高效的循环系统保证了温度、CO2、湿度的均匀性。内置电源插孔设计，箱体内可以直接使用磁力搅拌器，摇床等用电设备。箱体右侧中部开孔，带硅胶塞，方便培养过程监控及对设备进行验证。箱体底部的导轨设计，可用于大型滚平机的推进和推出操作。加固隔板设计，实现了一机多能，灵活使用的特点。WIGGENS 二氧化碳培养箱

地沟油&rdquo 检验向来具有很高的技术难度，国内某机构在筛查了&ldquo 地沟油&rdquo 可能涉及的80多个技术检验项目后，已经找到了包括多环芳烃、胆固醇、电导率和特定基因组成等4类能够排查&ldquo 地沟油&rdquo 的有效指标，初步建立了&ldquo 地沟油&rdquo 检验的指标体系。 上海安谱公司参考《GB 23213-2008 植物油中多环芳烃的测定》和《GB 25223-2010 动植物油脂甾醇组成和甾醇总量的测定》推荐以下色谱耗材! 下载：地沟油中多环芳烃和胆固醇检测耗材选择指南.pdf 上海安谱科学仪器有限公司 地址：上海市斜土路2897弄50号海文商务楼5层 [200030] 电话：86-21-54890099 传真：86-21-54248311 网址：www.anpel.com.cn 联系方式：shanpel@anpel.com.cn 技术支持：techservice@anpel.com.cn

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科学家们运用德国Nanoscribe的Photonic Professional系列3D打印系统，在复杂的3D打印支架上设计定制化的神经元网络。这新型的细胞培养微体系结构可以按定制的3D路径引导单个神经元突起和神经元细胞附着。这项研究为未来在探索细胞行为，信息传递和控制整个网络活动方面量身定制更复杂的3D神经元网络奠定了基础。使用Nanoscribe的3D打印系统，德国汉堡大学混合纳米结构中心的科学家们联合德国汉堡大学分子神经中心-汉堡艾本多夫医学中心以及格里夫斯瓦尔德大学物理研究所，一起研发了由管道相连接的多组柱状体3D复杂微结构支架。这款支架是用Nanoscribe自行研发的IP-Dip光刻胶进行3D打印，由多组高度不同且顶部镂空的柱状体和独立的通道相连接组成。由Nanoscribe的3D打印设备制作的神经元细胞培养微结构，用于详细研究神经元网络。图片来自于Cornelius Fendler, Research Group Blick, Center for Hybrid Nanostructures, Universit?t Hamburg相连接的神经元网络可帮助科学家更好了解大脑的功能。例如，大脑处理信息的容量，学习过程中所产生的神经元新连接及发展和病变神经元的活动等等。因此，低密度体外神经元细胞培养对于研究细胞层面神经元是非常有价值的。但是，二维体外神经元培养达不到模拟神经系统中所能观察到的独有的三维连接和极其复杂的信号处理。然而随着3D微加工技术的发展和进步，科学家们已经能实现通过新型研发的细胞培养支架，从三位角度来引导神经元细胞的生长和信号处理。Nanoscribe3D微加工技术具有极高的设计自由度，因此在任意空间方向上都可自由设计柱状体和微通道。这也是微通道可充当定制化3D路径引导神经元细胞突起的原理。这定制化3D复杂微结构的概念使神经元网络的体外研究有望得到实现。科学家们为了促进神经元细胞黏附力和活力，利用氧化铝和派瑞林C涂层的3D微观结构来培养原代大鼠小脑颗粒神经元。该几何结构可进行拓扑诱导，而多聚赖氨酸的选择性沉淀可进行化学诱导。在这一系列作用下而产生的定制路径用来进行神经元网络体外细胞培养，以促进神经元细胞突起生长。3D打印细胞培养微支架内部特写图3D微加工用于复杂生物兼容性支架使用Nanoscribe的3D微加工技术并配合其新型研发的IP-Visio光刻胶，可以打印极其复杂的3D微支架，来进行用于细胞研究的微环境仿真模拟实验。IP-Visio是一款新型光刻胶，具有无生物毒性的特点，适合生命科学领域应用。此外，此款光刻胶还具有低自发荧光的特点，可以在不干扰打印结构的前提下通过荧光显微镜分析观察细胞。更多有关微纳3D打印产品和技术咨询，欢迎联系Nanoscribe中国分公司 - 纳糯三维科技（上海）有限公司德国Nanoscribe 超高精度微纳3D打印系统： Photonic Professional GT2 双光子微纳3D打印设备 Quantum X 灰度光刻微纳打印设备可应用于微光学，微型机械，生物医学工程，力学超材料，MEMS，微流体等不同领域。

1、细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM完全培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。BIOCEN系列离心机WA系列恒温水浴 2、细胞传代当细胞密度达到80%~90%（过早产量不足，过晚细胞状态不佳，1:2至1:10以上的比率传代培养，一般1:3至1:5细胞一代，即从细胞接种到分离再培养的一段时间，非细胞有丝分裂次数）时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶（注意：消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度）进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。加入适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。WCI系列二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱专用摇床超高产率微型细胞工厂高密度培养专用摇瓶 3、细胞冻存当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。加入DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入lml冻存液（90%胎牛血清，10%DMSO。 一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整，冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养，另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质，如蔗糖，白蛋白等从而更好地保护细胞），放入冻存管内（管内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入4℃冰箱中冻存30min，然后放入-20℃冰箱中冻存30min，再置于-80℃冰箱内过夜。第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。 细胞冻存和复苏的原则是：慢冻速融，这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂，会导致细胞内冰晶的产生，从而使细胞产生内源性的机械损伤，引起细胞内环境渗透压，PH，电解质等的改变，进而促使细胞死亡。WIGGENS液氮罐系列冻存管冻存支架4、注意事项（1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热；（2）用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；（3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且减少污染；（4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小；（5）严格的无菌操作；（6）贴壁细胞消化适度：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化；（7）传代细胞所有的操作尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作，每种细胞使用一套器材。避免交叉感染；（8）传代细胞瓶口每次打开或者关闭都需要在酒精灯上消毒。悬浮细胞培养瓶贴壁细胞微载体培养瓶贴壁细胞滚瓶培养

阿拉丁细胞培养总动员，一起快乐实验吧 Aladdin&i-Quip的优势细胞培养细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术。细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的 技术。 细胞培养泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长。细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。 阿拉丁为您提供全面的细胞培养技术，现货充足的各种培养所需试剂。芯硅谷作为阿拉丁的耗材品牌，为细胞培养实验准备了各系耗材，包括：细胞培养板，深孔板，各容积培养皿、培养管等。阿拉丁-芯硅谷是您细胞培养实验的首选。 产品列表&mdash &mdash 细胞培养专用试剂货号品名规格CAS号包装A103539抗坏血酸 用于细胞培养50-81-7500gA103540抗坏血酸 用于植物细胞培养50-81-7100g,500gP110425L-苯丙氨酸 非动物源，EP, JP, USP ；用于细胞培养，98.5 to 10163-91-225g,100g,500gT108222L-苏氨酸JP, USP ；用于细胞培养，99.0-101.0%72-19-525g,100gI115775L-异亮氨酸EP, JP, USP73-32-525g,100g,500gE103809乙醇胺 99%，细胞培养专用141-43-5100ml,500mlT100896噻唑蓝(MTT) 98%298-93-11g,5g,25g,250mgC114435矮壮素 植物细胞培养级,&ge 99%(HPLC)999-81-55g,25gG115554D-半乳糖胺盐酸盐 for cell culture,99%1772-03-81g,5g,250mgC111538氯化钠 用于细胞和昆虫细胞培养，&ge 99.5% (T)7647-14-52.5kg,1kg,500gP100088亚碲酸钾 99.5%7790-58-125g,100gC139524干酪素 suitable for insect cell culture9000-71-9500gC110500干酪素 technical grade9000-71-92.5kg,500g,500mlH104201肝素钠 185 USP units/mg9041-08-11g,5gH123383肝素钠 &ge 180 USP units/mg9041-08-1100KU,250KU,500KU,1000KUB111605硼酸 用于细胞培养和植物细胞培养, &ge 99.5%10043-35-3500gM112543氯化锰,四水 昆虫细胞培养级，&ge 99%13446-34-9100gS104205水合胆酸钠 98%206986-87-05g,25g,100gS104206水合胆酸钠 for cell culture，&ge 99.0%206986-87-025g,100g产品列表&mdash &mdash 细胞培养专用耗材货号包装品名详细参数B1559-03100EA三角形细胞涂布棒三角推边宽度:30mm 全长:208mm 颜色:蓝色 材料:PP 是否消毒:是 包装类型:热封袋B1559-05100EA三角形细胞涂布棒三角推边宽度:60mm 全长:235mm 颜色:蓝色 材料:PP 是否消毒:是 包装类型:热封袋C1623-0250EA6孔细胞培养板孔数:6 孔径:35mm 生长面积:9.61cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:否 是否灭菌:是C1623-0450EA24孔细胞培养板孔数:24 孔径:16mm 生长面积:1.91cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:否 是否灭菌:是C1623-0650EA96孔细胞培养板孔数:96 孔径:7mm 生长面积:0.35cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:否 是否灭菌:是C1623-1250EA6孔细胞培养板,TC处理孔数:6 孔径:35mm 生长面积:9.61cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:是 是否灭菌:是C1623-1650EA12孔细胞培养板,TC处理孔数:12 孔径:22mm 生长面积:3.87cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:是 是否灭菌:是C1623-1750EA12孔细胞培养板孔数:12 孔径:22mm 生长面积:3.87cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:否 是否灭菌:是C1623-1850EA24孔细胞培养板,TC处理孔数:24 孔径:16mm 生长面积:1.91cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:是 是否灭菌:是C1623-1950EA96孔细胞培养板,TC处理孔数:96 孔径:7mm 生长面积:0.35cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:是 是否灭菌:是C4219-0120EA细胞刮刀手柄长度:250mm 刀片长度:30mm 是否灭菌:是C4219-0220EA细胞刮刀手柄长度:250mm 刀片长度:30mm 是否灭菌:是C4219-0320EA细胞刮刀手柄长度:400mm 刀片长度:18mm 是否灭菌:是C4219-0420EA细胞刮刀手柄长度:400mm 刀片长度:30mm 是否灭菌:是C6057-0150EA细胞筛材质:尼龙网 颜色:蓝色 尺寸:40&mu m 是否灭菌:是C6057-0250EA细胞筛材质:尼龙网 颜色:白色 尺寸:70&mu m 是否灭菌:是C6057-0350EA细胞筛材质:尼龙网 颜色:黄色 尺寸:100&mu m 是否灭菌:是D3815-0110EA384孔深孔板,方形孔类型:普通型 材质:聚丙烯 容积:120&mu l 颜色:透明 底部形状:V型 是否灭菌:否D3815-0310EA384孔深孔板,方形孔类型:低吸附型 材质:聚丙烯 容积:120&mu l 颜色:透明 底部形状:V型 是否灭菌:否D3815-0510EA384孔深孔板,方形孔类型:普通型 材质:聚丙烯 容积:190&mu l 颜色:透明 底部形状:V型 是否灭菌:否L1557-01100EAL型涂布棒长度:156× 38mm 颜色:蓝色 材质:ABS 是否消毒:是 包装类型:纸塑袋M4939-011EA覆四氟涂层微量取样匙类型:海曼型 长度:150mmP4184-0160EA60mm细胞培养皿尺寸:60× 15mm 生长面积:26.17cm2 TC处理:否 灭菌:伽马 描述:普通型适合悬浮培养P4184-0260EA60mm细胞培养皿,TC处理尺寸:60× 15mm 生长面积:26.17cm2 TC处理:是 灭菌:伽马 描述:标准型适合贴壁培养P4184-0360EA100mm细胞培养皿尺寸:100× 20mm 生长面积:55.65cm2 TC处理:否 灭菌:伽马 描述:普通型适合悬浮培养P4184-0460EA100mm细胞培养皿,TC处理尺寸:100× 20mm 生长面积:55.65cm2 TC处理:是 灭菌:伽马 描述:标准型适合贴壁培养P4940-011EA外覆PTFE涂层取样匙,双平头类别:双平头,圆形平头和锥形平头 长度:200mm 刀片尺寸(最宽的部位):约44× 6mmP4941-011EA外覆PTFE涂层取样匙,平头和勺头类别:平头和勺头 长度:225mm 直径:4.7mmR1596-04500EAPP培养管,无边外径× 高:12× 75mm 容量:5ml 材质:PP 类型:无刻度 是否消毒:否 包装类型:热封袋R1596-05500EAPS培养管,无边外径× 高:13× 75mm 容量:5ml 材质:PS 类型:无刻度 是否消毒:否 包装类型:热封袋R1596-11250EAPS培养管,无边外径× 高:16× 100mm 容量:8ml 材质:PS 类型:无刻度 是否消毒:否 包装:热封袋T1558-01500EAT型细胞涂布棒,已灭菌长度:140mm 颜色:蓝色 材料:ABS 是否消毒:是 包装类型:纸塑袋D1554-011000EA普通型接种环类型:1&mu L环形 材料:软性PP 全长:200mm 环直径:30mm 颜色:蓝色 是否消毒:是 包装类型:纸塑袋更多产品请访问阿拉丁官网www.aladdin-e.com

2016年4月26日，PALL生命科学事业部生物制药部宣布推出CadenceTM 声波分离器(CAS)，此款用于细胞培养发酵液的全新一次性使用分离器应用了声波分离技术。在一个封闭的系统中，无需离心，CAS即可提供稳定、可靠的细胞和蛋白质产量，同时显著降低用户成本及风险。CAS目前可立即订购、装运，同时可轻松与PALL生命科学事业部其他产品兼容，保证生物工艺的连续性。　　生物制药部总经理Michael Egholm博士介绍到：“我们在2015年底推出了关于连续处理的构想，引入了声波分离技术概念，作为一个有利的工具，可以为客户将生物反应器和下游工艺的临界空间连接起来。作为一系列即将问世的产品中的首发款，CAS将这个概念变成了现实。CAS技术是一项真正的革新，解除了细胞培养澄清对离心技术的依赖，缓冲液的使用减少了75%，且与我们的产品直接整合后可提供连续进料过程。”　　PALL生命科学事业部于2015年6月从FloDesign Sonics公司(FDS)获得了声波分离技术的独占许可证。CAS通过声波工作，声波应用于生物处理液体逆流，产生在各节点捕捉细胞的3D驻波，这会引导悬浮液中细胞的聚集和沉淀，进而为简单的提取“捕获”细胞。CAS可用于多种类型生物制品的纯化，包括重组治疗蛋白和单克隆抗体，而不受颗粒浓度或细胞培养浓度、浊度及活力的影响。　　作为Cadence系列产品的一部分，CAS的特点是可满足单克隆抗体及其他重组蛋白连续生产的关键操作技术要求。Cadence系列产品放大了一次性使用产品在功能集成和终端生物工程解决方案方面所带来的收益，可为用户提高生产效率及有效降低风险。

p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 简介 /span /strong /p p 　　用于重组蛋白和单克隆抗体(mAb)生产的细胞培养工艺有不同的方式。补料分批(Feb-Batch)工艺由于操作简单，且较易规模放大，被临床和商业化生产广泛采用，目前的技术发展已可在18天内获得20-30x10^6cells/mL的细胞密度，同时获得& gt 10g/L的滴度水平。 /p p 　　灌流工艺以往更多用于生产不稳定的产品，如血液凝集因子和酶类产品，但也有用于生产 mAb产品，如Remicade(英利昔单抗)。在灌流培养中，通过培养基置换，降低产物在反应器内的滞留时间，而灌流速率取决于特异性的产物和/或工艺需求。 /p p 　　近几年，在上游工艺中，基于灌流的工艺强化获得了极大的发展，驱动力主要来自于对降低成本和占地的需求，以及提高设备灵活性。随着细胞系、培养基和细胞截留设备的发展，现在的灌流工艺已可获得较高的细胞密度和产量，使其成为一个非常有吸引力的选择，包括mAb的生产。例如，在mAb生产中，结合2vvd的培养基置换速率，通常可达到50-60x10^6cells/mL的稳态细胞密度，以及高达4g/L/day的生物反应器产率。此外，浓缩补料分批(CFB)也可以通过培养基置换，维持高细胞密度，而将产物截留在生物反应器内。 /p p 　　灌流和CFB的差异在于所用的中空纤维膜的孔径。对于抗体，使用Per.C6细胞系，可在12-13天内，达到21.4g/L的终产物滴度(峰细胞密度& gt 150x10^6cells/mL)，而使用CHO细胞系时，可在16天内达到25.3g/L的滴度，峰细胞密度& gt 180x10^6cells/mL。随着生物反应器产率的提高，可使用占地更小、成本更低的一次性设备，来替代大规模的不锈钢设备(10,000-25,000L)，通过增加设备轮转或连续工艺，生产等量的产物。 /p p 　　尽管灌流工艺可使用基于过滤的细胞截留设备，如TFF和ATF，在生物反应器内获得并维持高细胞密度，但通常会要求使用较高的培养基置换速率，以将高密度细胞的活性维持在可接受的水平。与不同工艺相关的培养基成本是评估其生产等量产物时经济性的关键因素。而即使单位培养基成本适当，较高的培养基置换速率也会显著影响生产产品成本(CoG)，亦即，上游操作成本与培养基成本紧密相关。 /p p 　　生产单位产品的总生产CoG和上/下游成本的比重会随产物滴度和设备尺寸的变化而变化。在分析CoG的所有输入值中，一旦工艺确定，培养基用量及其成本是固定的，不管设备、设施等是否发生改变。细胞培养工程师的一个主要目标是降低培养基成本，同时获得高产量。本文使用相同的基础(basal)和补料(feed)培养基，稍作优化，开发了具有高生物反应器产率的不同细胞培养工艺(补料分批、灌流和CFB)，并比较了不同操作模式的生物反应器产率及其相关的培养基成本。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 实验 /span /strong /p p 　　实验使用生产单克隆抗体的重组CHO细胞系，不同工艺使用相同的3L生物反应器，培养基使用专利的基础(basal)和补液(feed)培养基，后者又分为两种补液-A和补液-B，均富含葡萄糖、氨基酸、维他命等。详细细胞系和种子扩增、生物反应器操作信息请参看原文。 /p p 　　对于补料分批培养，反应器起始工作体积1.5L，接种密度为0.5或2x10^6cells/mL，后者通过3天的N-1灌流来达到目标密度。生物反应器补液以每日葡萄糖水平为基础进行。 /p p 　　对于CFB工艺，使用50kD PS中空纤维过滤器的灌流设备，对于灌流，使用0.2μm PES中空纤维过滤器的灌流设备。接种密度1x10^6cells/mL，工作体积1.3L，一般第2天开始培养基置换，最大置换速率1vvd。灌流培养在第8天开始进行细胞废弃(cell bleeding)，以维持所需细胞密度和活性。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/b370cbae-a09d-4aad-901e-9998bacb5c16.jpg" title=" 1_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 不同细胞培养模式图解(xu et al, 2017) /span /strong /p p 　　细胞培养每日取样分析，详细分析内容和方法，请参考原文。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 讨论 /span /strong /p p 　　不同操作模式的细胞培养性能 /p p 　　实验测试操作模式包括：补料分批、灌流和CFB，使用相同的3L生物反应器规格以及基础和补料培养基组合，以便比较细胞/生物反应器产率和培养基成本。 /p p 　　补料分批模式 对于补料分批模式，接种密度为0.5或2x10^6cells/mL，后者通过N-1灌流，可使对数生长期降低2天，所以8天就可达到峰密度，而前者需要10天。两种条件达到的峰细胞密度范围均为20.2-26.2x10^6cells/mL。两种接种密度在第14天分别达到5.4± 0.1g/L和6.8± 0.2g/L的滴度。生物反应器单位体积产率(VPR)按最终生物反应器滴度除以培养周期计算。2x10^6cells/mL接种密度条件，相比0.5x10^6cells/mL，可获得更高的VPR(0.49± 0.01g/L/day vs. 0.39± 0.01g/L/day)，主要是由于前者降低了起始生长阶段的时间，延长了生产期。 /p p 　　灌流模式 在灌流培养中，使用了2种不同的培养基组成：1种只使用基础培养基，另一种为基础加补液-A。在培养过程中，通过合适的cell bleeding，维持较高的活性& gt 85%。只使用基础培养基时，平均细胞密度为44± 4.1x10^6cells/mL，从第8天至32天的日产量为0.7± 0.04g/L/day。在基础+补液条件中，随细胞密度的增加，补液-A作为培养基置换的一部分，逐渐引入，而总培养基置换率保持为1vvd，平均细胞密度增加至73.9± 5.4x10^6cells/mL，日产量增加至2.29± 0.28g/L/day。细胞特异性产率从16.0± 1.2pg/cell/day增加至30.1± 2.3pg/cell/day，从而使反应器产量增加~230%。 /p p 　　浓缩补料分批模式(CFB) 与灌流相似，评估了只使用基础培养基和使用基础+补液培养基的条件。与灌流工艺相比，CFB不需要进行cellbleeding，细胞质累积至更高的水平。当只使用基础培养基时，在第18天达到峰细胞密度72.0± 9.6x10^6cells/mL，上清液滴度为12.2± 0.6g/L。使用基础+6%补液-A+2%补液-B时，峰细胞密度为117.4x10^6cells/mL，第18天上清液滴度为21.4g/L，使用基础+8% 补液-A +8% Feed-B时，峰细胞密度为83.4x10^6cells/mL，第18天上清液滴度为36.7g/L。可见，增加补液-A和补液-B的量，可显著提高细胞特异性产率至45.1pg/cell/day。 /p p 　　细胞特异性产率、生物反应器产率和产物质量 /p p 　　当只使用基础培养基时，批次、灌流和CFB工艺可达到相似的qP，范围为14.7-17.1pg/cell/day。在此条件下，累积的细胞数量会直接影响产物滴度和单位体积产率。正如预期，批次培养的VPR显著较低，仅为0.08g/L/day，而灌流和CFB工艺由于可维持更高的细胞密度，可获得相当的VPR，0.68-0.70g/L/day。 /p p 　　浓缩补液培养基通常用于补料分批工艺，以提高细胞生长和细胞特异性产率。在此研究中，补加补液培养基，可显著提高qP和VPR。对于补料分批培养，qP提高至29.4-32.0pg/cell/day，VPR达到0.39g/L/day(接种密度0.5x10^6cells/mL)或0.49g/L/day(接种密度2x10^6cells/mL)。N-1灌流获得的更高的接种密度可提高VPR，因为缩短了生长期的时间，延长了生产期，提高产量。但是，即使与只使用基础培养基的灌流和CFB相比，补料分批培养的VPR仍较低，因为细胞密度差别显著。 /p p 　　相比补料分批工艺，只使用基础培养基以1vvd的速率进行培养基置换时，可轻松地将细胞密度提高2-3倍。而与只使用基础培养基的条件相比，在灌流培养中补充10%补液-A可使VPR提高~230%，qP提高~90%。相似的，在CFB工艺中，补充不同比例的补液-A和补液-B可将VPR提高至1.19-2.04g/L/day。 /p p 　　最近有报道显示，长寿命的人浆细胞可在体外维持120pg/cell/day的IgG分泌率，对于基因工程哺乳动物细胞，最高生产速率估计为~100pg/cell/day。qP的提高将来自于细胞系和培养基的优化。所以，理论上，在灌流工艺中，如稳态细胞密度维持为100x10^6cells/mL时，每日产量可高达10g/L/day。 /p p 　　实验同时评估了不同操作模式的产物质量特征，结果显示，CFB会形成更高水平的HMW和稍高的酸性异构体，主要是由于产物所暴露的细胞培养环境。在补料分批和浓缩补料分批中，产物滞留时间为整个培养周期。此外，在仅使用基础培养基的CFB工艺中，HMW最高，说明培养基组成可能在HMW形成中扮演了重要的角色。但是，产生的HMW仍低于5%，且大部分可在纯化步骤中去除。另一方面，即使是相同的高细胞密度环境和相似的培养基组成，灌流培养的酸性异构体和HMW更低，可能是由于产物在罐内更低的滞留时间。 /p p 　　培养基成本分析 /p p 　　由于细胞系或培养基组成的变化会显著影响产物滴度/产率，所以对不同操作模式的比较需使用相同的细胞系和培养基条件才有意义。本文使用从小规模生物反应器获得的细胞培养性能，来比较不同操作模式的培养基成本，并假定在规模放大时，不同工艺没有显著的产率下降。需要指出的是，实验中的灌流速率没有在对数生长期，以细胞特异性为基础，进行良好的优化。相反，在整个培养周期中，将灌流速率固定为1vvd。在不同的培养阶段，对细胞特异性灌流速率进行精细调节，应可进一步降低培养基用量和成本。 /p p 　　当只使用基础培养基时，生产每克抗体的培养基成本在批量和灌流工艺中都很高。加入适量的补料培养基，可降低每克mAb的培养基成本，且即使补料培养基相对较贵，细胞密度和qP的增加相比培养基成本的增加更加显著。 /p p 　　使用N-1灌流的补料分批的培养基成本比常规补料分批工艺低，N-1灌流需要3x基础培养基置换，但因接种密度的提高，继而获得的滴度的增加，抵消了培养基用量的增加。N-1灌流的补料分批和灌流的培养基成本相当，~$10/g mAb。这说明，虽然往常认为由于较高的灌流速率，灌流的培养基用量更高，继而培养基成本更高，但只需要生物反应器产率达到一定的阈值，从培养基成本上来看，还是相当有竞争力的。 /p p 　　CFB工艺的培养基成本与其它操作模式的趋势不同。在只使用基础培养基的条件中，成本与批量和灌流工艺相当，但CFB培养基成本会随补料培养基的使用而增加，其相对较高的培养基成本(& gt $17/g)可能是因为需要较长的细胞生长时间，在培养中，直到第10天，细胞密度达到峰水平，才开始出现显著的产物滴度增加。降低CFB培养基成本的一种方法是优化细胞寿命，延长批次时间，但更长的罐内滞留时间，可能会影响产物质量属性，或是进一步优化培养基，如替换昂贵的成分和优化其滴度。 /p p 　　总生产COG /p p 　　除了培养基成本的不同，使用诸如灌流和CFB之类的工艺，结合一次性设备，在小规模上进行生物制品生产，可显著降低成本投入，从而获得更加灵活的生产策略，当产品需求增加时，可以快速地进行规模扩展(scale out)，而不是规模放大(ScaleuP)。与传统不锈钢设备相关的固定成本，可以转变为“可变”的成本结构。基于此处的案例，灌流工艺的培养基成本实际上低于补料分批工艺。 /p p 　　进行总成本分析时，如下游均以批量模式进行，且认为不同工艺的劳动力成本相当，则本文建模分析结果显示，N-1灌流的补料分批和灌流工艺的下游CoG/g相当，分别为$63/g和$59/g，而标准补料分批和CFB工艺的下游CoG/g稍高，分别为$71/g和$81/g。对于mAb和不稳定的产品，基于灌流的连续工艺都可以提供显著的经济优势。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 总结 /span /strong /p p 　　在本研究中，比较了不同操作模式下，生物反应器的产率，包括补料分批、灌流和CFB工艺。对于研究的细胞系，qP高度取决于所用的培养基，不管采用哪种操作模式，这使得累积细胞密度成为决定产物滴度和生物反应器产率的主要因素。结果显示，补料分批培养生物反应器产率最低(0.39-0.49g/L/day)，而基于灌流的培养方式，由于可维持更高的细胞密度，产率相对较高，灌流为2.29g/L/day，CFB为1.19-2.04g/L/day。灌流的一个显著优势是可以达到并维持极高的细胞密度，用于产物形成。 /p p 　　灌流工艺一个经常观察到的缺点是培养基用量较高，因为需要进行连续的培养基置换，以维持所需的高活细胞密度。这里的研究显示，高产率灌流培养的培养基成本实际上低于补料分批工艺。CFB工艺的培养基成本最高，虽然在18天内达到了36.7g/L的极高滴度，为降低CFB工艺的培养基成本，建议可以精调培养基置换率，以在起始的生长阶段获得更好的培养基利用，或通过培养基优化，提高细胞特异性产率。 /p p 　　 i 小编出于交流目的编译此文，由于水平有限，不当之处，敬请谅解，详细内容，请参看原文。 /i /p p i 　　原文：S.Xu, J.Gavin, R. Jiang, et al., Bioreactor Productivity and Media Cost Comparison for Different Intensified Cell Culture Processes. Biotechnol. Prog., 2017, Vol. 00, No.00. /i /p p br/ /p

据近日报道，公安部指挥破获了浙鲁豫等地利用地沟油制售食用油特大案件。 今年6月以来，北京市食品安全监控中心多次组织多家有关单位的专家，对地沟油鉴定技术开展评估。在将近3个月时间中，检测人员综合运用色谱分析、光谱分析、理化分析及基因鉴定技术等现代分析测试手段，对地沟油鉴定开展了技术攻关，先后对80余个技术指标进行了全方位的筛选，确定了多环芳烃、胆固醇、电导率、特定基因等四大类、20余项有重要鉴别意义的项目，初步建立了地沟油检测的指标体系。 　 其中，胆固醇是一项重要鉴别项目。食用植物油中一般不含胆固醇或含量极低。根据地沟油中可能含有动物源性成分，可以推断如果检出胆固醇并超过一定范围，可怀疑该油脂为地沟油。 通过我们的相关实验表明，作为油脂性样品净化的**技术之一，凝胶色谱净化（GPC净化）可以发挥非常好的作用，在鉴别地沟油这项艰巨任务中，有着很大的应用潜力。请看相关应用报告。 点击下载：凝胶色谱净化-高效液相色谱法测定食用油中的胆固醇

公司近日获得Celartia公司的Petaka细胞培养板的中国区代理权！ Petaka细胞培养板对于国内的用户来讲，或许是一个比较陌生的产品。单是却已经风靡欧美等国，受到各国科学家的一致追捧！甚至有专家预言，它的出现，将改变大家的细胞培养观念！ Petaka细胞培养板为什么会如此之大的影响力呢？ 首先，基本性能优于传统的细胞培养； 其次，高仿真的体外模拟环境； 最后，多功能用途，一板多用； 更多的信息请查看http://premedlab.com/productshow.aspx?id=92&proid=300或者查询www.celartia.com。 更多的操作显示，请观看v.youku.com/v_show/id_XNDQ5ODkyNjky.html 简而言之， Petaka细胞培养系将改变研究人员传统的培养观念！为细胞培养提供更加真实的体外模拟环境，为获得更加精确的数据提供有理的保证。

美国辉瑞制药公司12月21日宣布召回一批总量约1.9万瓶的降胆固醇药立普妥，原因是有消费者投诉称该药物的瓶体散发“异常”气味。 　　辉瑞公司在一项声明中说，立普妥的药瓶是由外部制造商提供的，但辉瑞没有提供该厂家的具体名称。辉瑞还表示，瓶体散发的异味对患者身体健康所造成的影响“微乎其微”。 　　自今年8月以来，由于瓶体散发异味，辉瑞已先后4次召回立普妥，召回的药品总量超过36万瓶。该气味来自一种名为2，4，6-三溴苯甲醚的化合物，它常被用作木材防腐剂。 　　声明称，此次召回事件不会引起立普妥的市场供应短缺。立普妥是美国最畅销的处方药，去年销售额累计达75亿美元。

哺乳动物细胞培养过程哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各个过程进行简述：原代培养：从动物机体取出组织后切碎，经过各种酶（常用胰蛋白酶），螯合剂（常用EDTA）结合机械方法（吸液管反复吸吹）处理，分散成单细胞，置于合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。一般把从动物有机体内取出细胞开始培养，到繁殖十代以内的细胞培养称为原代细胞培养。经过原代细胞培养，细胞分裂繁殖，培养物逐渐增多长满培养空间，继而相互之间接触，发生接触抑制现象，生长速度逐渐减慢甚至停止。需要重新接种到新的培养瓶内进行传（继）代培养。传（继）代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传（继）代培养。细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如果细胞系的生存期有限，则称为有限细胞系。已获得无限繁殖能力，能持续生存的细胞系称为连续细胞系或无限细胞系。细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系，用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增值形成的细胞群，称为细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原珠形状不同的细胞群，成为亚株。哺乳动物细胞培养条件不同哺乳动物细胞在各个阶段的培养，都需要有基础的培养条件，归纳如下：1、无菌无毒的环境：对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。2、营养：液体合成培养基包含糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等；通常还需加入血浆、血清等天然成分3、适宜的温度和pH：人和哺乳动物细胞最适宜温度大多为36±0.5℃。适宜的酸碱度为pH 7.2-7.4。4、气体环境：气体环境一般为“95% 空气+5% CO2”混合气体。氧气是细胞代谢必须气体，CO2维持培养液pH。德国WIGGENS CO2培养箱，为细胞生长提供最佳环境，为您的细胞培养保驾护航。

可能很多人对Leica的产品PAULA（Personal AUtomated Lab Assistant）相对陌生，此产品的推出被Leica高层极度重视，被视为“掌上明珠”。PAULA是一款与客户共同设计开发的用于细胞培养实验室常规应用的数字细胞检测仪，是世界首台细胞培养个人自动实验助手。PAULA是可以放置在细胞培养箱中的小型倒置荧光显微镜，具有相差和红绿两色荧光的观察功能，在平板中直接下载APP进行连接观察和使用，可以实时进行实验的分析和检测为下游实验获取最佳细胞提供保障。细胞实验中无法进行样本的实时监测、对细胞计数的不准确和浪费时间、细胞状态不适用于下有实验、缺乏细胞的生长曲线以及转染蛋白的表达水平等问题会一直环绕在每一个实验操作者的身边。PAULA的出现这些烦恼将不再存在。PAULA部分功能简介使用用户管理模式进行使用：Administrator, Standard User, Guest(只能拍照)三种用户类型进行使用，有效地管理和使用彼此之间的实验数据，保护实验数据的安全。管理员身份可以对其他账号进行管理和查看，及时进行实验的指导和完善。数据自动命名：根据培养的细胞系种类和实验人员姓名来对细胞培养瓶进行命名，该命名会自动匹配到所拍摄的图片、视频、分析结果等等。并且配有条形码、二维码的扫描功能，准确的记录观察样本的信息。样本信息记录集成化数据库：所有数据都储存在电脑中具有备份功能、所有信息一目了然、具有过滤功能并且可以直接将结果导出到Excel中。集成化数据库Audit trail：操作记录可查，数据结果可被归为文档格式实验操作查询PAULA中含有分析模块，可以直接对样本进行分析和检测，抛弃只能人工目测检测的方法，使实验更佳严谨和专业：细胞融合度检查：没有PAULA之前只能靠目测进行估算，这种方式缺乏规范性、并且误差较大，很容易会对下游实验造成不良影响。PAULA可以进行自动快速检测，进行保存，并且可以绘制生长曲线、划痕实验检测，通过邮件提醒功能得知实验已经完成，不用担心样本的生长状态不适合而导致实验失败。细胞融合度检测和划痕实验检测转染效率检测：将外源基因导入样本细胞中对带有荧光细胞和总细胞数的检测，从而进行转染效率分析。转染实验和HELA细胞转染图北京德泉兴业商贸有限公司为徕卡授权代理商。徕卡显微系统是显微镜和科学仪器领域的全球先驱。十九世纪，公司从家族事业起步，如今成为全球知名企业，以无可匹敌的创新精神铸就辉煌历史。与科学界一贯的紧密合作是徕卡显微系统创新传统的关键，从而将用户的想法付诸实践并根据用户需要为其量身定制解决方案。徕卡显微系统的全球运作分为四个部门，它们均已成为其各自领域的领头羊：生命科学部门、工业部门、病理系统部门以及医疗显微镜部门。徕卡病理系统是一家自主运营的公司，为组织病理学实验室提供丰富多样的产品，适用于组织学中的每一步工作，并帮助提高整个实验室工作流程的生产率。公司在全球 100 多个国家设有代表处，在 7 个国家设有 12 家制造厂，在 19 个国家设立了销售和服务机构，并且具有全球性的代理商网络。公司总部设在德国的韦茨拉尔 (Wetzlar)。

细胞培养在科研界的地位举足轻重，很多成果可谓是成也细胞培养，败也细胞培养。影响细胞培养的因素有很多。其中很重要的一步就是为细胞选择适合的生长环境，为其选择成分适合又营养丰富的细胞培养基。以下介绍两款常用的细胞培养基，可满足多种细胞贴壁及悬浮培养需求，超强品质，久经考验，值得信赖！好物助研/推荐两款常用培养基DMEM（高糖）培养基DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培养基，由MEM培养基改良而来，起初是为小鼠成纤维biocomma® DMEM培养基是MEM培养基的改良版，包含高糖型和低糖型2种。DMEM高糖培养基可促进细胞贴壁，适用于生长快、高密度、粘附性低的细胞，如原代成纤维细胞、神经元、胶质细胞、平滑肌细胞、HUVEC，以及 HeLa、293、Cos-7 和 PC-12 等细胞系，是细胞培养中常用的培养基。RPMI 1640培养基biocomma® RPMI 1640培养基是McCoy's 5A培养基的改良版，最初是为淋巴细胞培养专门设计的。现已广泛应用于各种哺乳动物细胞尤其是悬浮细胞的培养，如 HeLa 细胞、Jurkat 细胞、 MCF-7 细胞、PC12 细胞、PBMC 细胞、星形胶质细胞和肿瘤细胞等，是细胞培养中使用非常广泛的培养基。产品特点方便即用型，经过滤除菌，高效便捷专业专业生产工艺，ISO9001认证，GMP 标准，全程可溯源化优质出色的培养效果，质量有保证稳定优选的原材料，保证批间一致性为何选择biocomma® /全产业链生产能力原材料筛选通过LC/MS、GC/MS做严格原料筛选，确保产品间批次间的稳定性与一致性。无菌生物工艺包材瓶子为无菌/无酶/无热原医药包材，由ASB和青木固一步法加工而成，无二次污染。四种无菌工艺采用环氧乙烷+湿热+超滤+辐照4道无菌工艺。自动化无菌灌装注射级用水，全程自动化无菌灌装。选择高品质的培养基，对于细胞培养而言，不仅可以确保您实验数据的稳定性和可重复性，更能节约宝贵的实验时间和精力。逗点生物biocomma® 细胞培养基，GMP标准生产车间，搭配超强的全产业链生产能力，完美把控出品，可为客户提供各类细胞培养的定制化产品及品牌一体化服务！如感兴趣，可通过400-860-5168转3309官方客服热线联系我们！

产品介绍 细胞生长对培养环境有着极高的要求， 如温度、CO2浓度、剪切、培养基浓度等。尤其是动物细胞，生长周期较长， 对培养条件运行的连续性、 稳定性和可靠性提出了非常高的要求。 ZWYC-290系列精密细胞培养振荡器是ZHICHENG公司推出的具有我国自主知识产权的细胞振荡器新品。 该产品凝聚了ZHICHENG公司中国研发团队二十年恒温振荡器的专业设计经验和现代生物技术的应用经验，携手海外专家攻关，在引进、消化、吸收国外一线同类旗舰产品的基础上，再创新提高而形成的技术成果。 应用范围ZWYC-290系列精密细胞培养振荡器是生物培养在进入发酵培养前最完善的培养装置，可广泛应用于微生物细胞发酵、动物细胞和植物细胞培养， 在生物医药、食品开发、生物农业环境治理等领域进行微生物培育、菌种或细胞系筛选等有着很好的应用前景， 也可应用于对温度、供氧、剪切等具有较高要求的细菌培养、动植物细胞培养、杂交和生物化学反应以及酶反应研究。 产品特点三大系统：指纹（密码）识别电子门系统、手机天网系统、数据无线传输采集系统五大功能：恒温、振荡、恒湿，光照、CO2六大亮点：自保温聚氨酯壳体、杀菌加湿器、紫外高效灭菌、导流冲洗通道、便捷可卸托盘，绿色粘板功能介绍:? 基本功能(恒温振荡)1、ZHICHENG公司精密细胞培养振荡器，单层振荡培养箱体，振幅12.5mm、25mm、50mm三档可调。全温型；转速为30-300r/min，可调并显示。2、专利技术的单轴悬挂滑杆五驱自平衡驱动单元，连续工作时间长，耗能少，能承受不平衡负载。3、稳定性能高，设备可在最大负荷状态下不间断运行，在启动、运转和停止过程中能保持平稳，设备在重启（包括断电来电）后，维持原有设置自动开启。4、独特的空气循环系统，内外空气持续环流，保证培养过程中有充足的空气补入确保温场均匀性，使腔体内无温度死角。5、超温报警保护功能：l 当实测温度超过报警设定值时培养振荡器报警；l 当实测温度超过断电设定值时加热器停止工作。6、 超速报警保护功能:l 当实测转速超过报警设定值时培养振荡器报警；l 当实测转速超过最高转速时，振荡平台停止振荡。 ? 可选功能（恒湿培养）l 控制范围：40-90%RH，精度：± 5%RH（可修正）l 最新发明专利技术：1）采用金属模块腔体蒸发技术，体积小，效率高，反应快。2）腔体内多通道的独特设计，形成了一次加热蒸发、二次高温消毒、三次压缩增压的制湿技术， 最终形 成高达140℃的雾状蒸汽迅速喷射，均匀扩散，不易形成水滴，而且湿度分布非常均匀。 ? 可选功能（光照培养）l 两种光照单元供选择：（1）日光光照系统：模拟日夜光照环境（2）LED不同光波组合系统：波长主要集中在红橙光和蓝紫光波段区域，主要应用于光合生物的培养 ? 可选功能（CO2培养）l 浓度范围：0-20%l 控制精度：±0.2%（浓度5%时），显示精度：±0.1%（可修正）l 国际顶级品牌的红外传感器，确保控制的高精度和高稳定性l 控制方式：P.I.D（微电脑环境扫描微处理芯片）l CO2供气瓶可自动切换 ? 可选功能（OD在线检测）l 完全替代繁琐的手工定时采样测量方法，是一种自动化教学、科研设备l 采用非接触式检测技术，在动态环境中获得真实的微生物细胞生长曲线l 可在线实时测量微生物细胞浓度的光密度（optical density,OD）值l 可选4、8、12和16通道, 适合正交试验、均匀实验和DOE设计实验l 可高效实现菌种筛选、培养基优化、发酵工艺优化研究和动力学分析l 根据研究需要，可更换激光波长，应用于酶、蛋白质等活性物质的检测 ? 可选功能（可选模块）l 具有短信报警等手机互联功能。l 数据无线传输采集系统。能更方便地记录设备的运行数据，实时监控摇床的运行状态。 ? 六大亮点l 一次成型的自保温高强度聚氨酯壳体，保温性能良好，强化了箱体的密封效果，提高了操作的稳定性和安全性。l 拥有最新发明专利技术的温度达140℃的灭菌加湿器，腔体灭菌彻底，加湿效果良好。l 紫外灭菌与循环风扇配合在风道内实现对循环空气的紫外高效灭菌功能。l 导流冲洗通道，便于及时冲洗，避免细菌污染。l 托盘与箱门连动，装卸便捷。l 独特的绿色粘板，粘性和稳定性好，节省空间，易于清洗维护。 技术参数产品名称ZWYC-290系列精密细胞培养振荡器控制方式P.I.D（微电脑环境扫描微处理芯片）显示方式5.6吋640×480点阵65K色真彩触摸式显示屏对流方式强制对流式振荡方式回旋振荡式驱动方式单轴驱动环境温度要求（℃）5～35工作室（个）1～3空气循环360m3/h曲线编程设定（段/步）反复、步调、温度阶梯、曲线编程设定：9/18(段/步)，每段时间：999.9（min）定时时间（min）0～9999温度传感器Pt100温度控制范围（℃）4～60温度分辨精度（℃）≤0.1温度波动度（℃）≤±0.1温度均匀度（℃）≤ 0.2（37℃时）可选功能湿度控制范围（%RH）40～90湿度控制精度（%RH）2～3湿度波动度（%RH）≤2振荡幅度（mm）∮12.5、25、50三档可调转速范围（r/min）30～300转速精度（r/min）≤±1平均照度（Lux）≥300紫外强度（mW/m2）≥400可选功能CO2传感器进口品牌的NDIR单束双波红外传感器CO2控制范围（%）0～20CO2控制精度（%）0.2（浓度5%时）CO2显示精度（%）0.1CO2恢复速度（开门1分钟后）≥95%（7天）测量通道选4、8、12和16通道可选噪音水平dB（A）≤70 dB（距离设备表面1m处）安全功能上、下限超温报警，上、下限超速报警，上、下限湿度报警，传感器故障报警，独立式过升防止器，独立式超温保护器（可调），独立式漏电、过电流跳闸保护，制冷机超荷保护，门与摇板连锁保护附属功能光照培养系统、自动停机、自动开机、温度/湿度表示校正、监视计时器、时钟显示、来电恢复、参数记忆、参数加密、可扩展RS-485接口制冷功能空冷式、R134.a 功率可控式制冷、无霜运行加速度柔性慢启动摇板数量1～3托盘类型粘性托盘（八块/单元）摇板尺寸（mm）850*450容积/单元（L）225最大装瓶量（支*容量）60*250ml 32*500ml 18*1000ml 10*2000ml 　8*3000ml 内胆尺寸/单元（长*宽*高）（mm）937*572*420外型尺寸/单元（长*宽*高）（mm）1080*960*590重量/单元（kg）98电源AC 220V 50/60Hz，1200W 创新点：一次成型的自保温高强度聚氨酯壳体，保温性能良好，强化了箱体的密封效果，提高了操作的稳定性和安全性。 拥有最新发明专利技术的温度达140℃的灭菌加湿器，腔体灭菌彻底，加湿效果良好。 紫外灭菌与循环风扇配合在风道内实现对循环空气的紫外高效灭菌功能。 采用非接触式检测技术，在动态环境中获得真实的微生物细胞生长曲线 精密细胞培养振荡器

细胞培养产品质量有了标准保障，由中国计量大学教授陈春主持制定的国家标准《细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的测定 气相色谱-质谱（GC-MS）法》（GB/T 43778-2024）近日正式发布并实施。该标准有效填补了当前细胞培养过程中有毒有害物质残留检测方法的空白，为细胞培养产品的质量控制提供了更为科学可靠的依据。细胞（含体细胞、干细胞）制剂的质量控制及其潜在有毒有害物质检测限值是其开展临床应用的前提。随着细胞制剂在生命健康领域中应用的快速发展和不断扩大，其临床应用及科研实验相关标准的制定成为关注焦点。“在细胞的分离培养制备过程中，实验人员会大量使用和接触培养瓶、移液管，这些材料属于非医疗器械，使用过程中有毒有害物质可能残留、迁移到培养液中，而且目前尚无相应的检测标准。”陈春介绍说，已有医疗器械类材料中有毒有害物质的检测标准，并不适用于细胞制备过程中培养液里有毒有害残留物的检测，且缺乏相应的检测标准，风险难以得到有效控制，可能引起不同细胞（干细胞）的分化潜能改变和致突变等，给后续的临床应用带来不良影响。陈春团队联合中国测试技术研究院生物研究所、中国计量科学研究院等10家单位，历时30个月，建立了气相色谱-质谱法检测标准，为细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的残留量提供灵敏、快速、有效的检测方法，保证细胞制剂质量安全及临床应用安全。

尊敬的科研工作者们！你们一定听说过CERO 3D Incubator & Bioreactor这款细胞培养系统吧！它在类器官研究领域具有显著优势，让我们一起来了解一下吧！首先，CERO提供了最佳的细胞培养环境，通过独特的3D细胞培养技术，监测和控制温度、pH和二氧化碳水平，为类器官的生长和发育提供最适宜的条件。其次，CERO能够提高类器官的复杂性和成熟度，模拟更真实的生理结构和功能。这对于研究类器官在特定生理环境下的反应和功能具有重要意义，让我们的研究更加接近真实，更有说服力。再次，CERO减少了对嵌入基质的依赖，提供最大的均匀性和稳定性(如CEROtubes有独特的鳍状设计)，使得类器官的培养更加标准化和可重复。这对于研究结果的可靠性和可比较性非常重要，让我们的实验更精准，更可信。最后，CERO适用于各种组织类型的类器官培养，如肝脏、肾脏、肠道、皮肤等，具有广泛的应用价值。无论你是研究肝脏还是皮肤，CERO都能满足你的需求。我们一起了解一下类器官的前世今生类器官的起源——自组织现象：类器官的起源可以追溯到1907年，当时44岁的美国贝克罗莱那大学教授威尔逊 (H. V. Wilson)发现通过机械分离的海绵(sponge)细胞可以重新聚集并自组织成为新的具有正常功能的海绵有机体，他的研究结果于1910年发表。Wilson, H. V. Development of sponges from dissociated tissue cells(1910)我们要知道类器官是由多个不同类型的细胞组成，协同工作以执行特定的功能，类似于真正的器官。它们可以是人工合成的，也可以是通过再生医学技术生长出来的。类器官的来源总结还有如下图六种：Xu et al. Journal of Hematology & Oncology (2018)近年来火热的干细胞研究，主要开始于上世纪末。1987年，A.J. Friedenstein发现间充质干细胞 (Mesenchymal Stem Cell,MSC)。1998年，美国生物学家James Thomson首次分离得到人胚胎干细胞。2007年，Thomson教授成功制造出人诱导多能干细胞 (induced Pluripotent Stem Cells,iPSC).如今，绝大多数类型的非肿瘤来源的人源类器官均可由MSC或iPSC发育而来，干细胞研究的飞速进展为类器官研究带来新的活力。近十余年类器官的发展，如下图类器官发展历程(Claudia Corrò et al. Am J Physiol Cell Physiol, 2020) CERO是如何促进类器官的研究进展的呢？我们这里有几个案例可以给大伙儿一起分享一下吧CERO进行心脏组织模型的研究（心脏类器官的研究案例）干细胞来源的心肌细胞在心血管研究、疾病模型和药物开发等领域受到越来越多的关注。研究方法：使用CERO作为一个完整的工作流平台，让干细胞以均匀的聚集体形式扩增，然后直接诱导成为大量的跳动的心脏体。使用CERO进行多能干细胞的扩增和心肌分化，与传统的轨道振荡器相比，可以提高心肌细胞的质量、均匀性、完整性和产量。研究结果：使用CERO可以实现从干细胞到心肌细胞的高效转化，形成具有生理功能的心脏组织模型，用于各种应用。CERO 3D与轨道振荡器的比较—鼠胚干细胞诱导心肌细胞后的3、8和13天分化研究 这里有一段来自CERO的客户（Jaya Krishnan教授，法兰克福歌德大学心血管再生研究所，Genome Biologics联合创始人）的评价：“我们所有研究的最终目标是识别和开发具有临床相关性的治疗人类心脏病的药物。为此，我们利用人类自组织的心脏类器官进行高通量药物筛选，以及利用体内的人类先天性疾病的遗传模型，作为我们的实验平台，结合腺相关病毒（AAV）和反义RNA作为治疗剂。CERO 3D大大简化了我们的心脏类器官生成的工作流程，并使我们能够显著提高类器官的生产规模。使用CERO 3D生成的类器官显示出更好的细胞组织，以及在生产批次内外的均匀性和一致性。” 不仅如此，CERO还应用于猪的肌源性类器官的研究（该研究于2022年在Cells上发表，影响因子≥4.9）三维细胞培养技术比平面表面更适合模拟体内细胞环境。球体是多细胞聚集体，我们旨在使用中型培养箱和生物反应器混合设备，制备无支架的肌源性起源球体，称为肌球体。首次使用这种技术从原始猪肌细胞（PMC）获得球体，并将其形态学和生长参数、标记物表达和肌源潜能与C2C12来源的球体进行了比较。两种细胞类型都能在生物反应器中在24小时后形成圆形球体。C2C12球体的平均直径（44.6µ m）大于PMC球体（32.7µ m），最大直径超过了1mm。C2C12细胞形成的聚集体较PMC更少，并具有更高的密集度（细胞核/平方毫米）。从球体中分离后，C2C12细胞和PMC开始再次增殖，并能够分化为肌源系谱，通过肌管形成和FActin、Desmin、MyoG和Myosin的表达来证明。在C2C12中，球体中观察到多核合体和Myosin的表达，表明加速了肌源分化。总之，中型培养箱和生物反应器系统适用于从原始肌细胞中形成和培养球体，并保持其肌源潜能。Cells 2022, 11,1453. https://doi.org/10.3390/cells11091453CERO还应用于脑类器官的发育研究：“跨发育过程中从中等到纳米尺度成像三维脑器官结构”并在2022年发表于HUMAN DEVELOPMENT文献索引：Development(2022)149,dev200439.doi:10.1242/dev.200439根据Paş ca等人（2015）的改良方案，使用CERO 3D培养箱-生物反应器的步骤如下：1、iPSCs解离：使用StemProAccutase将iPSCs解离成单细胞悬浮液。2、类器官形成：将1.5×106个iPSCs转移到AggreWell800板中，每个微孔中含有5000个细胞。使用培养基，包括50% DMEM-F12 GlutaMax、50%神经基底培养基。添加以下成分到培养基中：1:100 B-27、1:200 N-2、1:200 MEM-NEAA、1mM L-谷氨酰胺、1:1000 β-巯基乙醇、10μg/ml胰岛素。添加两种SMAD途径抑制剂dorsomorphin（1μM）和SB-431542（10μM），以及ROCK抑制剂Y-27632（10μM）。将具有和不具有霍乱弧菌诱导eGFP构建物的iPSC按10/90的比例混合。在最初的5天里，每天更换不含ROCK抑制剂的培养基。类器官培养：将类器官转移到CEROtubes中，放入旋转的CERO 3D生物反应器。从第5天到第12天，每隔一天喂养类器官。在第12天，改用含有bFGF（10ng/ml）而不是SMAD抑制剂的培养基培养4天。从第16天开始，类器官在未添加补充物的情况下维持，每隔一天更换一次培养基。LSFEM的器官样本准备LSFEM的器官样本准备包括固定、渗透化、免疫染色、嵌入和消化等步骤。通过对样本的处理和扩张，可以实现清晰的成像和超分辨率的分析。（F，G）示例展示了根据II方案（CERO培养制备）的3个月大脑器官样本（F）和根据I方案(6孔板培养制备)的2个月大脑器官样本（G）的光学切片。两者都经过Hoechest和ZO1的染色。综合以上步骤，CERO 3D生物反应器能够在中-纳米级光学分辨率下对整个脑器官体进行缩放，获得关于脑器官体结构和亚细胞细节的全面视图。同时，通过LSFEM的超分辨率成像，可以可视化保留有空间信息的突触，实现对超分辨率下的扩展神经回路的分析。通过LSFM和LSFEM的结合，CERO为成熟的脑类器官的分析提供了一种有效的方法。 总的来说，CERO在类器官研究方面具有多种优势，如提供最佳细胞培养环境、提高类器官成熟度与复杂性、标准化和可重复培养，适用于多种组织类型。类器官的优势在于模拟人体生理状态、提高实验可靠性与准确性，广泛应用于基础研究、药物研发、临床试验和再生医疗。让我们共同努力，将类器官研究推向新的高度！

p 　　生物医药产业是高新科技产业，随着生物医药产业的快速发展，我国生物制药产业也进入了快速上升期，而单克隆抗体药物在整个产业中无疑是最为重要的组成部分。目前生物制药产业发展面临人才短缺的挑战，而我国高等专业教育尚不能满足生物制药产业发展的需求，大部分生物医药相关专业毕业生缺乏该产业急需知识和技能而面临就业难。在职职工专业教育是生物医药产业正常运营的基础保障，更是各国药政机构监管的重点。随着新技术新方法和药政监管新政策持续涌现，生物医药技术专业教育和继续教育尤其重要。中国蛋白药物质量联盟将针对我国生物医药产业发展现状和国际产业技术的发展进步，特别是各国药政监管要求，推出生物制药产业技术系列职业培训。本期设为无血清细胞培养技术培训。 /p p 　　无血清细胞培养技术培训 /p p 　　自上世纪八十年代初期Jennie Mather博士主编出版第一部无血清细胞培养技术专著及在美国长岛冷泉港实验室举办第一届无血清细胞培养技术实验培训课程以来，无血清细胞培养技术迅速被生物医学研究机构及生物技术企业所使用，在基础研究及工业生产中起着极其重要的作用。 /p p 　　此培训旨在帮助大家了解无血清细胞培养的基本技术、思考如何选择和利用无血清细胞培养来满足基础研究及工业生产的需求，使无血清细胞培养技术在各领域得到更多更好的利用。 /p p 　　 strong 一、主办单位 /strong /p p 　　中国蛋白药物质量联盟 /p p 　　 strong 二、培训时间 /strong /p p 　　时间：2017年06月07日 PM 1:00-5:00 /p p 　　地点：上海远洋宾馆，虹口区东大名路1171号(近霍山路)多功能厅 /p p 　　 strong 三、培训目标人群 /strong /p p 　　本次培训旨为生物医药产业的技术研发负责人、细胞培养业务骨干温故知新 为职场新人、在校大学生以及对细胞培养感兴趣的相关人员夯实基础。 /p p 　　 strong 四、培训内容 /strong /p p 　　此培训班将首先由Mather博士介绍无血清细胞培养技术的发展历史，包括其在Sato博士实验室建立原代细胞无血清培养技术以及在基因泰克(Genentech)公司建立蛋白药生产CHO细胞无血清培养方法等历史回顾，其后由李荣皓博士介绍原代细胞、蛋白药表达细胞、疫苗生产细胞及细胞治疗所使用的细胞等多种不同类型细胞细胞的无血清细胞培养方法，和大家一起分析和讨论技术细节。最后中国蛋白药物质量联盟将颁发培训证书 /p p 　　 strong 五、主讲嘉宾简介 /strong /p p 　　Jennie Mather博士(美国)，珠海恺瑞生物科技有限公司共创人，是哺乳动物无血清细胞培养技术的创始人之一，1970至1978年在美国圣地亚哥加州大学(UCSD)Gordon Sato博士的实验室从事博士及博士后研究工作期间与实验室同事共同创建了无血清细胞培养技术。Mather博士在国际上首次使用F12/DMEM无血清细胞培养液从事无血清细胞培养，其后为Genentech公司创建了CHO细胞高密度无血清细胞培养方法，用来生产抗体及蛋白药物，先后为Herceptin等8个临床使用的蛋白药的工业化生产做出了重大贡献。Mather博士多年来一直活跃在无血清细胞培养技术领域，发表了多篇具有开创意义的无血清细胞培养技术的文章并组织撰写了世界上第一本无血清细胞培养技术专著，为无血清细胞培养技术的推广和和应用做出了杰出的贡献。Mather博士曾应邀于1981年在世界著名的美国长岛冷泉港实验室举办上国际上首次全面的无血清细胞培养技术讲习班，将无血清细胞培养技术迅速推广到国际生物医学研究及生物工程技术领域。Jennie与中国学术界的关系源远流长，在上世纪80年代初期通过其实验室访问学者中科院动物所庄临之教授将无血清细胞培养技术介绍到国内，并亲自于上世纪90年代至2000年代先后在北京举办了三届无血清细胞培养技术讲习班。 /p p 　　李荣皓博士，上世纪80年代师从于中国无血清细胞培养技术鼻祖庄临之研究员，其间利用无血清细胞培养技术建立了国际首例人胎盘滋养层细胞株以及国际首个无血清细胞培养麝香蛋白表达细胞株。1992年李博士加入美国Genentech公司Jennie Mather博士研究组，先后从事过细胞培养工艺开发以及蛋白新药研发工作。1996年李博士加入 Signal Pharmaceutical, Inc. (现Celgene公司)，成为该公司资深新药研发科学家，利用其无血清细胞培养技术为公司建立了数个高难度原代细胞药物筛选实验模型。数年之后李博士应Mather博士邀请，加盟Mather博士创建的Raven Biotechnologies公司，全面负责公司新药研发包括从早期的实验研究到临床试验抗体药生产的各个重要技术环节，并发明了国际首个细胞蛋白标记物高通量筛选(cell array)技术专利，为公司研发项目的顺利进行做出了杰出的贡献。 /p p 　　2006年李博士与另外两位旅美中国科学家在北京共同创办了Autekbio公司，成为中国第一家从事抗体药生产的服务公司。李博士作为公司的技术主管，负责为公司客户开发抗体生产细胞株，并为客户设计国产化的高密度无血清细胞培养基，使得抗体生产成本大为降低。2010年李博士应邀加入恒瑞，在短暂担任公司首任抗体部技术负责人职务之后离职回美，随后与Jennie Mather博士及武军先生共同创建了珠海恺瑞生物科技有限公司。 /p p 　　 strong 六、会议议程 /strong /p table border=" 0" cellspacing=" 0" cellpadding=" 0" width=" 606" tbody tr style=" height:35px" class=" firstRow" td width=" 95" style=" border-width: 1px border-style: solid border-color: windowtext padding: 0px 7px " height=" 35" p style=" text-align:center" strong span style=" font-size:19px font-family:宋体" 时间 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: none padding: 0px 7px " height=" 35" p style=" text-align:center" strong span style=" font-size:19px font-family:宋体" 报告题目 /span /strong /p /td td width=" 88" style=" border-top: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: none padding: 0px 7px " height=" 35" p style=" text-align:center" strong span style=" font-size:19px font-family:宋体" 报告人 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: none padding: 0px 7px " height=" 35" p style=" text-align:center" strong span style=" font-size:19px font-family:宋体" 单位 /span /strong /p /td /tr tr style=" height:28px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 28" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 13:20-13:30 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 28" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 欢迎致辞 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 28" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 史晋海博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 28" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 中国蛋白药物质量联盟秘书长 /span /p /td /tr tr style=" height:37px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 37" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 13:30-14:15 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 37" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 无血清细胞培养技术的发展历史及经验 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 37" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" Jennie Mather /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 37" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际无血清细胞培养鼻祖 /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr tr style=" height:36px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 14:15-15:00 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 原代细胞的无血清细胞培养方法 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 李荣皓博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际著名细胞培养专家， /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr tr style=" height:24px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 24" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 15:00-15:30 /span /strong /p /td td width=" 511" colspan=" 3" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 24" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:楷体" 茶歇/交流 /span /strong /p /td /tr tr style=" height:44px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 15:30-16:15 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 蛋白药表达细胞和疫苗生产细胞的无血清细胞培养方法 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 李荣皓博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际著名细胞培养专家， /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr tr style=" height:44px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 16:15-17:00 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 细胞治疗所使用的细胞的无血清细胞培养方法 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 李荣皓博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际著名细胞培养专家， /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr tr style=" height:44px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 17:00-17:30 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-indent: 77px" span style=" font-family:宋体" 问答讨论 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 李荣皓博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际著名细胞培养专家， /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr /tbody /table p 　　 strong 七、注册事宜 /strong /p p 　　培训说明：本次培训免费，证书费(自愿)500元/人，差旅食宿自理。 /p p 　　获取更多资讯，敬请联系中国蛋白药物质量联盟秘书处： /p p 　　联系人：蔡老师 /p p 　　电 话：+86-22-65378072 /p p 　　手 机：+86-18702257197 /p p 　　邮 箱：cailijuan1986@126.com /p p style=" text-align: right " 　　中国蛋白药物质量联盟 /p p style=" text-align: right " 　　2017年05月13日 /p p style=" text-align: center " 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 生物制药产业技术系列职业培训——无血清细胞培养技术培训 /span /strong /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　参会报名表 /span /strong /p p /p table border=" 1" cellspacing=" 0" cellpadding=" 0" tbody tr style=" height:38px" class=" firstRow" td style=" border-width: 1px border-style: solid border-color: rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 38" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 单位名称 /span /strong /p /td td colspan=" 2" style=" border-top: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 38" br/ /td td style=" border-top: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 38" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 联 系 人 /span /strong /p /td td style=" border-top: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 38" br/ /td /tr tr style=" height:36px" td style=" border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 单位地址 /span /strong /p /td td colspan=" 2" style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" br/ /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 联系电话 /span /strong /p /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" br/ /td /tr tr style=" height:76px" td style=" border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 76" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-family:宋体" 行业类别 /span /strong /p /td td colspan=" 2" style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 76" p style=" line-height: 29px" span style=" font-family:宋体" 联盟单位□& nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp 非联盟单位□& nbsp /span /p p style=" line-height: 29px" span style=" font-family:宋体" 学生□& nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp 赞助单位□ /span /p /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 76" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 电子邮件 /span /strong /p /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 76" br/ /td /tr tr style=" height:36px" td style=" border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) 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7px " height=" 36" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 手 & nbsp 机 /span /strong /p /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 电子邮件 /span /strong /p /td /tr tr style=" height:36px" td style=" border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" br/ /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" br/ /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 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生物反应器的应用生物反应器在生物技术，工艺开发和研究中发挥着至关重要的作用，其主要应用包括：1. 细胞株开发：台式生物反应器可用于评估各个细胞株的性能，包括生长和表达效率，这有助于确定最适合进行进一步工艺开发和放大的候选细胞株。2. 工艺开发：台式生物反应器广泛应用于工艺开发的早期阶段，包括了参数优化和工艺放大两方面，首先在较小规模上优化温度，pH，DO等工艺控制参数，然后再进行工艺放大研究，降低放大至较大体积的生物反应器中可能存在的成本和风险。更复杂的工艺开发包括了增强型工艺，例如灌流培养和连续培养。3. 培养基优化：台式生物反应器可以用于优化培养基和补料策略，以改善细胞生长、活力和蛋白质表达，有助于实现高效，稳定且成本可控的大规模细胞培养。4. 工艺表征：台式生物反应器可进行工艺缩小研究，在较小规模上模拟较大生物反应器的条件，有助于了解和解决工艺放大过程中可能出现的限制性因素，如氧气传质、混合效率、CO2分压和剪切力。5. 质量源于设计（QbD）：可以在台式生物反应器规模实施QbD开发原则，系统地研究和优化关键工艺参数，以确保产品质量的一致性。6. 临床样品制备：符合GMP要求的台式生物反应器系统，可用于临床前研究或早期临床试验中的小规模生产，以快速、经济地生产小批量的治疗性产品。Reference:cell culture bioprocess engineering, second edition细胞生长所处的生理压力生物制药中，CHO细胞作为常用的重组蛋白的表达体系，优化其生长和产物表达效率至关重要，然而生物反应器中CHO细胞却面临着多方面的生理压力，包括培养条件、营养供应和环境参数有关的各种因素，因此需要反应器提供良好的工艺参数控制，以维持合适的细胞生长微环境。 营养限制：CHO细胞的能量和生物合成严重依赖葡萄糖，葡萄糖浓度过低会导致细胞新陈代谢压力和活力降低；氨基酸是蛋白质合成所必需的，特定氨基酸含量不足会影响细胞生长和蛋白表达；细胞培养基中的生长因子、维生素和微量元素的不足也会影响 CHO 细胞的生理机能。 温度：温度波动会影响细胞的新陈代谢，对于细胞生长和蛋白表达通常所需最适温度不同，需要制定针对性控制策略。 pH值波动：pH 值的变化会导致培养基的酸化，影响分子的电离状态，并影响细胞的新陈代谢，维持pH值在最佳范围内对细胞活力和表达至关重要。 溶解氧浓度：溶解氧浓度过低会导致供氧不足，造成细胞应激，影响细胞生长和蛋白质表达。 二氧化碳分压：二氧化碳分压影响了pH控制，细胞代谢和生理功能，需要加以及时的检测和有效的控制策略。 渗透压：代谢物积累或营养浓度过高导致的高渗透压会对细胞造成压力，这会影响细胞体积大小调节和整体细胞功能。 剪切力：生物反应器中的搅拌和通气产生的能量耗散会对细胞造成剪切应力，过大的剪切应力会损伤细胞结构并影响其生产率。 代谢副产物：细胞新陈代谢产生的有毒副产物（如乳酸、氨）的积累会对细胞活力和蛋白表达产生不利影响。 细胞密度：高细胞密度和细胞聚集会导致营养和氧气的限制，造成压力，有效的混合和充分的氧气供应对防止这些问题至关重要。理解细胞所处的生理压力环境对于工艺条件优化，增强细胞活率，获得高表达产物和目标质量属性非常关键。工艺过程参数的控制在了解了细胞所处的生理压力之后，遵循质量源于设计（QbD）的指导原则，通过风险评估的方式确定关键工艺过程参数（CPP）, 重要工艺过程参数（KPP）及非重要过程控制参数（Non-KPP），制定参数各自的设定空间（DS），并在操作范围内进行控制，这整体上需要工艺过程分析技术（PAT）及生物反应器所配置过程控制策略，以提供一致的工艺性能和产品质量（CQA）。图片来源于网络生物反应器常用控制策略 开环控制：开环控制系统应用一组预定义的控制输入或设定点，而不连续测量实际输出，系统假定输入将实现所需的输出，而无需实时反馈。该控制策略的准确度依赖于高精度及快速响应的硬件配置。 闭环（反馈）控制：闭环控制使用传感器持续监测系统输出，将其与所需设定点进行比较，并实时调整控制输入以保持所需的条件。这种方法能更好地适应过程中的变化和干扰。该控制策略的准确度依赖于控制器模式，参数的预设和调节。 前馈控制：前馈控制可预测系统中的干扰，并在干扰影响输出之前调整控制输入。它是对反馈控制策略的补充。生物反应器控制器策略的应用 PID控制：PID 控制是一种闭环控制策略的实现形式，通过比较设定值和实际值（误差），使用比例、积分和微分项来计算控制输出。比例部分使用增益（Gain）乘以误差进行输出；积分部分累积 CV（控制输出）随时间变化的程度，以纠正误差；微分部分分析参数过去的变化率，并将其推断到未来，其动作单位为秒（你想推断多远），可以让回路在发生突发事件时迅速做出反应，但很容易受到测量噪音的影响。 PID同时可以结合死区（DB, Dead Band）来使用，例如pH的PID控制，细胞对于pH有一个适应范围，设定合适的DB值，避免酸，碱的反复添加和渗透压的升高。 级联控制：级联控制涉及主控制器与子控制器，主控制器的输出作为子控制器的设定值，从而更好地抑制干扰；子控制器可以为一个或多个，通过顺序级联或同时级联，以满足不同复杂程度工艺的需求。例如DO控制中，主控制器为DO PID控制器，子控制器为Air，O2，搅拌等控制器。 Profile控制：为控制器的设定值设定随时间变化的程序，控制器接受该设定值进行开环或闭环控制。例如补料泵的控制中，根据预测的细胞密度增加情况调整补料速度供给率，从而实现对营养物质浓度的前瞻性控制。复杂工艺应用需求常见的细胞培养方式为补料分批工艺（Fed Batch），需要多级的种子扩增步骤，主反应器中也需生长至稳定期进行蛋白表达，因此所需设备成本高，占地空间大，生产效率较低且产品质量一致性存在差异。随着灌流培养基，细胞截留设备及PAT技术等方面的发展，增强型工艺（Process Intensification）在生物制药中逐渐得以应用。根据对细胞和蛋白的截留，增强型工艺分为Concentrate Fed Batch, Dynamic perfusion及Continuous Perfusion等不同形式。Reference：Perfusion Cell Culture Processes for Biopharmaceuticals灌流工艺的开发通常在台式反应器中进行，相比Fed Batch系统具有如下组成及特点： 反应器从结构设计到工艺验证上应能支持系统长时间无菌培养的要求。 反应器的通气及搅拌系统配置应当满足高细胞密度培养对于传质和混合的要求，并进行充分的表征，以评估放大过程中的限制性因素。 细胞截留装置：支持切向流或声学细胞截留装置的无菌连接，截留装置控制器可选择接受生物反应器控制，细胞在截留装置中所受的生理压力（剪切力，温度变化，溶解氧浓度等）应当加以控制。 PAT整合：系统应当支持额外的电极整合，实时监控细胞密度、活力、二氧化碳分压等关键参数。 外置设备的拓展：可拓展外置天平等设备。 自动化控制系统：系统应配置自动化灌流程序或配方，实现高精度自动化的灌流速率，反应器液位及细胞密度控制，减少灌流工艺长时间培养过程中复杂的人为操作所带来的风险。英赛斯NestoBR台式生物反应器NestoBR是一款基于生物工艺进行设计和研发的先进型台式生物反应器系统，应用于生物制药及生物技术等方向的工艺研究和开发，系统设计满足生物行业对于反应器的高性能及法规方面的要求，可降低用户实验的批次失败风险，提高工艺开发能力，加速生命科学的研究发现，实现稳健化的技术转移。NestoBR产品特点紧凑化的结构设计：集成式工业控制器，直观的用户界面与交互；减少设备空间需求，易于使用。严格的材料选择及处理：高硼硅玻璃，耐高温，耐腐蚀；316L不锈钢，表面抛光及钝化处理，，易清洗，易清洁；垫圈采用EPDM材质，符合cGMP要求。基于工艺理解的产品设计：从细胞生所处的生长微环境出发，进行功能设计，拓展工艺可操作空间，保障批次稳定。丰富的高性能硬件配置：灵活的硬件配置方案，满足不同细胞或工艺在培养体积、温度控制、搅拌控制、通气控制等工艺方面的差异化要求。高级自动化软件架构：ISA88批处理控制高级自动化软件架构，将物理硬件、操作程序和个性化工艺的紧密的结合，为控制系统提供安全性，稳定性保障。符合cGMP法规要求： 根据用户需求，提供从设计、测试、验证、文件等一系列技术服务；系统设计与验证遵循ISPE GAMP5。快速稳定的自动化参数控制：控制系统配置不同的控制策略，实现快速，稳定，灵活的工艺过程参数自动化控制完善的批次过程监控与管理：系统配置趋势图，批次报告，用户管理，审计追踪功能满足复杂工艺应用需求：NestoBR提供长时间运行的无菌保障，完善的设备表征数据，可集成PAT，外置设备与灌流装置，可新增控制回路实现自动化灌流工艺操作。全面的安全性保障：提供生物反应器在使用，批次，软件，数据，工艺等方面全方位的安全保障。

一提到细胞培养，这是多少实验者的噩梦，简直… … 说多了都是泪。小编经过软磨硬泡终于从师兄师姐那里讨到了细胞培养秘籍，今天就大方一回，分享给大家。★ 血清与培养基的选择一般实验血清的添加比例为10%，也可根据细胞状态和生长速率适当增加或减少添加比例。对于培养基，建议选择商品化的，比较成熟，稳定性也较好。★ 培养瓶的选择目前商品化的细胞培养瓶主要为瓶盖是否带气孔两种。其中不带透气孔细胞培养瓶拧紧后需适当回旋瓶盖，保证CO2能顺利进入细胞培养瓶。细胞培养过程中，对于适应能力强的肿瘤细胞，可在传代3-4次后更换新的细胞培养瓶。对于非肿瘤细胞系如293T等细胞，建议每次传代更换新的细胞培养瓶来保证细胞状态。★ 细胞传代传代时通常使用胰酶消化法。该方法又分为干消化法和湿消化法。▶ 湿消化法：待细胞变圆，成流沙状脱落时即可加入新鲜培养基终止消化，1000rpm离心5min，弃去上清，用新鲜培养基重悬传代。▶ 干消化法：胰酶浸润后弃去胰酶，待细胞变圆后加入新鲜培养基吹下后再进行细胞传代。不同细胞的细胞间连接强度不一样，消化时间不同；不同细胞的贴壁能力不同，消化时间不同；消化时应观察细胞形态，避免因过度消化影响细胞活性。★ 细胞冻存与复苏当细胞生长状况较好或者代数较早时，需及时大量的冻存。细胞冻存密度通常为1-3×106个/ml。通常4℃放置0.5h，-20℃放置2h，-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。细胞复苏38℃水浴不时摇动，在1分钟内使其完全融化，1000rpm离心5min,弃去上清，用新鲜培养基重悬移入培养瓶中。★ 污染防控细胞培养最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和细胞系间交叉污染的防控。实验中需保持良好的操作习惯，所用材料的位置摆放要顺手，污染源和已灭菌物品要分开放置。实验室也需定期清洁与消毒。ECHO强大的活细胞成像工作站INCUBATOR+REVOLUTION智能电动化显微镜