氟脱氧尿苷单磷酸盐

最近在分析三磷酸脱氧核苷(dCTP, dTTP, dATP, dGTP)。用的是强阴离子交换色谱，紫外检测器(DAD)，磷酸盐缓冲液，安捷伦1200系统。色谱柱用的是SAX柱子， 125*4.6 mm, 5um 填料。紫外波长260 nm. 以前实验室就是用 0.35 M 的磷酸二氢钾做等度洗脱，所以基线很平稳。但是因为有两个化合物保留时间太长，峰很宽，所以想改用磷酸盐浓度梯度洗脱。可是当我做0.1 M 到 0.5 M的梯度时， 基线吸收变高很多，以至最后出来的两个峰在上升的基线上了(图传不上来，一会儿再试试)。如果运行pH梯度，我的这款色谱柱需要很长的平衡时间。我买了Sigma 的 分析纯和HPLC纯度的磷酸盐；也在Thermo买了HPLC纯度的，但是情况都差不多。Bio-rad有净化磷酸盐的材料，但是用起来很麻烦，而且还不知道真的用起来效果如何。想在此求助高手们如何解决磷酸盐高浓度基线漂移问题的？或者有没有更好的用紫外检测器分析这些三磷酸形式核苷的方法 （质谱除外，条件不允许啊）？听说有的紫外检测器是可以补偿基线漂移的，不知道这安捷伦的检测器是否有这个功能？在设立紫外参数的时候，在检测波长的后面有一个参照波长，这个是否对检测有什么帮助和影响。先谢谢大家的热心帮助了！http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408142221_510356_2799469_3.png

[align=center][font=宋体][color=#444444][back=#F9F9F9][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法同时测定尿液中磷酸盐和草酸[/back][/color][/font][/align][align=center][font=楷体_GB2312]黄选忠[/font][/align][align=center][font=宋体]（湖北兴山县疾病预防控制中心，湖北兴山,443711）[/font][/align][b][font=宋体]摘要：[/font][/b][font=宋体]【目的】建立以SH-AC-3型阴离子交换柱为分离柱，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法同时测定尿样中磷酸盐和草酸的新方法。【方法】研究用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法同时测定尿液中磷酸盐和草酸的色谱条件，通过试验优化确定了各项色谱条件。【结果】以SH-AC-3型阴离子交换柱为分离柱，以6.0mmol/LNa[sub]2[/sub]CO[sub]3[/sub]-2.0mmol/LNaHCO[sub]3[/sub]为淋洗液，流量为1.0mL/min，等度洗脱可将磷酸盐和草酸与尿液中大量共存的氯化物、硝酸盐和硫酸盐等常见阴离子完全分离，通过抑制电导检测，磷酸盐含量分别在0.20～20.0mg/L、20.0～100.0mg/L，草酸的含量分别在0.05～5.0mg/L、5.0～25.0mg/L范围内与其峰高和峰面积呈良好的线性关系（相关系数r在0.9995～0.9998），方法应用于尿液中磷酸盐和草酸的同时测定，加标回收率分别为94.5%[/font][font=宋体]～104.7%和96.0～104.2%，[/font][font=宋体] 5[/font][font=宋体]次平行测定的相对标准偏差（RSD）小于3%（n=5）。【结论】本方法可用于尿液中磷酸盐和草酸的同时测定。[/font][b][font=宋体]关键词：[/font][/b][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法；[/font][font=宋体][color=#444444][back=#F9F9F9]尿液[/back][/color][/font][font=宋体]；硫氰酸盐；草酸；[/font][b][font=宋体]中图分类号：[/font][/b][font=宋体]O652.63[b] [/b][/font][b][font=宋体]文献标识码： 文章编号：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]泌尿系结石是临床上的常见病和多发病。其中纯草酸钙结石占85%以上，草酸钙+磷酸钙结石占10%以上[sup][1][/sup]。草酸代谢异常所引起的高含量草酸尿是泌尿系结石形成的主要原因[sup][2][/sup]。因此准确测定尿液中磷酸盐和草酸含量对研究结石形成机理、结石的鉴别等均具有重要意义。目前尿液中的磷酸盐（无机磷）的测定在《全国临床检验操作规程》中推荐的方法包括磷钼杂多酸紫外光度法和以硫酸亚铁或对甲氨基酚硫酸盐为还原剂的钼兰光度法[sup][3][/sup]，文献用氨基奈酚磺酸为还原剂的钼兰光度法[sup][4][/sup]测定尿磷，这些方法中紫外光度法存在干扰因素多，选择性差，而钼兰光度法则存在稳定性较差操作繁杂之缺憾。尿液中草酸的测定方法主要有光度法包括络合物褪色比色法[sup][5][/sup]和催化光度法[sup][6][/sup]、催化荧光法[sup][7][/sup]、高效液相色谱法[sup][8][/sup]和毛细管电泳法[sup][9][/sup]等，而比色法、光度法、荧光法等方法特异性差，样品前处理繁杂，高效液相色谱法和毛细管电泳法因需要专用仪器而使其应用受到限制。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法以其操作简便、样品无须特殊处理、易实现自动化和可多组分同时测定的优势现已成为无机阴离子和有机酸测定的首选方法，并成功应用于尿液中草酸[sup][10][/sup]的测定和草酸、磷酸根及枸橼酸的同时测定[sup][11][/sup]，但这类方法大多使用的是进口仪器并采用梯度洗脱的方式进行使其应用受限。本工作利用国产盛瀚CIC-100型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]和SH-AC-3型阴离子交换柱，以6.0mmol/LNa[sub]2[/sub]CO[sub]3[/sub]-2.0mmol/L NaHCO[sub]3[/sub]溶液为淋洗液， 1.0mL/min的流量等度洗脱，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]-抑制电导检测法同时测定尿液中磷酸盐和草酸的新方法，磷酸盐含量分别在0.20～20.0mg/L、20.0～100.0mg/L，草酸的含量分别在0.05～5.0mg/L、5.0～25.0mg/L范围内与其峰高和峰面积呈良好的线性关系（相关系数r在0.9995～0.9998），方法应用于尿液中磷酸盐和草酸的同时测定，加标回收率分别为：[/font][font=宋体]94.5%[/font][font=宋体]～104.7%和96.0～104.2%，[/font][font=宋体]5[/font][font=宋体]次平行测定的相对标准偏差（RSD）[/font][font=宋体]在0.85%[/font][font=宋体]～2.07%[/font][font=宋体]，以3倍信噪比（3N/b）计，磷酸盐和草酸最低检出浓度分别为0.10mg/L和0.04mg/L。[/font][b][font=宋体]1[/font][font=宋体]、试验部分[/font][font=宋体]1.1[/font][/b][font=宋体]主要仪器[/font][font=宋体]CIC-100[/font][font=宋体]型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]（青岛盛瀚色谱公司，编号15601），抑制器：自再生抑制器，检测器：电导检测器，定量环体积为25μL；SHA—15自动进样器（青岛盛瀚色谱公司，编号AS1518050）；SH-AC-3型阴离子交换柱（250×4.0mm i.d,青岛盛瀚色谱公司，批号：1602037）；SH-AC-3型保护柱（50×4.0mm i.d,青岛盛瀚色谱公司，批号：1602037）。[/font][b][font=宋体]1.2[/font][/b][font=宋体]仪器工作条件及参数设置[/font][font=宋体]色谱仪：柱箱温度35℃，电流：75mA，量程：1档。[/font][font=宋体]自动进样器：全定量环取样，取样后清洗（每针之间），置换量70μL，取样量25μL，扎针深度4mm。[/font][b][font=宋体]1.3[/font][/b][font=宋体]主要试剂[/font][font=宋体]草酸标准溶液：1000 mg/L，称取优级纯草酸（H[sub]2[/sub]C[sub]2[/sub]O[sub]4[/sub]2H[sub]2[/sub]O）0.1401g用超纯水溶解，转入100mL容量瓶加水至刻度；H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup]标准溶液：1000mg/L，称取分析纯磷酸二氢钾0.1402g用超纯水溶解，转入100mL容量瓶加水至刻度。[/font][font=宋体]用前将各种标准溶液用纯水分别稀释成含H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup]和草酸分别为20.0mg/L和5.0mg/L（A液）、H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup]和草酸分别为200.0mg/L和50.0mg/L（B液）混合标准应用液备用。[/font][font=宋体]无水碳酸钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），草酸（优级纯，国药集团化学试剂有限公司），磷酸二氢钾（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。[/font][font=宋体]试验所用其他试剂均为AR级，试验用水为超纯水[/font][font=宋体]（[/font][font=宋体]18.2[/font][font=宋体]ΜΩcm[/font][font=宋体]）[/font][font=宋体]。[/font][b][font=宋体]1.4[/font][/b][font=宋体]试验方法[/font][align=left][b][font=宋体]1.4.1[/font][/b][font=宋体]标准曲线的绘制 取混合标准应用液（A液）0.10、0.20、0.40、1.0和2.00mL及B液1.0、2.0、4.0和5.00mL于10mL容量瓶中加纯水至刻度，混匀，配制成含H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup]0.20[/font][font=宋体]～[/font][font=宋体]100.0 mg/L[/font][font=宋体]、草酸为0.05[/font][font=宋体]～[/font][font=宋体]25.0 mg/L[/font][font=宋体]的标准系列，各管取1.5mL于样品瓶中，启动自动进样器进样分别测定各组分的峰面积（S）和峰高（H），以S及H对各组分浓度(C)绘制工作曲线。[/font][/align][align=left][b][font=宋体]1.4.2[/font][/b][font=宋体]尿样的采集 用清洗干净并干燥的聚乙烯瓶采集尿样50mL储存于4℃冰箱待测定。[/font][/align][b][font=宋体]1.4.3[/font][/b][font=宋体]尿样测定 取新鲜尿样经8000转/[/font][font=宋体]min[/font][font=宋体]离心10min，取上清液[/font][font=宋体]用高纯水稀释50或100倍后分别用C18柱净化、用0.22μm滤膜过滤后取1.5mL于样品瓶中，启动自动进样器进样测定各组分的S和H，以标准曲线法定量，同时进行加标回收试验。[/font][b][font=宋体]2[/font][font=宋体]、结果与讨论[/font][font=宋体]2.1[/font][/b][font=宋体]色谱条件的选择[/font][b][font=宋体]2.1.1[/font][/b][font=宋体]淋洗液浓度的选择 试验结果表明，当以Na[sub]2[/sub]CO[sub]3[/sub]+NaHCO[sub]3[/sub]溶液为淋洗液,其浓度在6 mmol/L+1 mmol/L[/font][font=宋体]～[/font][font=宋体]6 mmol/L+3 mmol/L[/font][font=宋体]范围内，SH-AC-3型阴离子交换柱均可将磷酸盐（以[/font][font=宋体]H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup][/font][font=宋体]计，在本试验条件下，H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup]和HPO[sub]4[/sub][/font][sup][font=宋体]2-[/font][/sup][font=宋体]和并为一个峰，实际上H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup]已转化成HPO[sub]4[/sub][/font][sup][font=宋体]2-[/font][/sup][font=宋体]）[/font][font=宋体]与硝酸盐和硫酸盐、草酸与硫酸盐和硫氰酸盐等常见阴离子完全分离，各组分的分离度（R，相对于后续组分，如磷酸盐的R是相对于硫酸盐的，下同）在1.50[/font][font=宋体]～6.49，[/font][font=宋体]满足相邻两峰完全分离（R=1.5）的标准[sup][12][/sup]，[/font][font=宋体]试验[/font][font=宋体]选择6.0mmol/LNa[sub]2[/sub]CO[sub]3[/sub]-2.0mmol/L NaHCO[sub]3[/sub]溶液为淋洗液，试验结果见表1。[/font][font=宋体] [/font][align=center][font=宋体]表1 Na[sub]2[/sub]CO[sub]3[/sub]+NaHCO[sub]3[/sub]溶液浓度（mmol/L）选择试验结果（流量1.0 ml/min）[/font][/align] [table=472][tr][td=1,2] [align=center][font=宋体]组分[/font][/align] [/td][td=2,1] [align=center][font=宋体]6.0mmol/L+1.0mmol/L[/font][/align] [/td][td=2,1] [align=center][font=宋体]6.0mmol/L+2.0mmol/L[/font][/align] [/td][td=2,1] [align=center][font=宋体]6.0mmol/L+3.0mmol/L[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]T/min[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]R[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]T/min[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]R[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]T/min[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]R[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup][/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]11.561[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]1.50[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]10.991[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]2.59[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]10.688[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]2.83[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]SO[sub]4[/sub][sup]2-[/sup][/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]12.778[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]4.13[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]13.144[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]4.29 [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]13.054[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]4.28[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]草酸[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]16.797[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]6.14[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]17.271[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]6.49[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]17.098[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]6.46 [/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]SCN[sup]-[/sup] [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]24.891[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]/[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]24.927[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]/[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]25.337 [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]/[/font][/align] [/td][/tr][/table][b][font=宋体]2.1.2[/font][/b][font=宋体]淋洗液流量的选择 对于一定的淋洗液，不同的流量将使组分的保留时间（T）和分离度将发生变化。试验结果表明，当淋洗液流量从0.8mL/min增加至1.2mL/min时，各组分的保留时间逐渐缩短，分离度逐渐变小，但磷酸盐和草酸的分离度远大于1.5，表明相邻两组分已[/font][font=宋体]完全分离，见表2。[/font][font=宋体]在保证待测组分与干扰离子完全分离的前提下尽量使用较低的流量，以降低系统压力延长泵的使用寿命，故淋洗液[/font][font=宋体]流量选定为[/font][font=宋体]1.0mL/min[/font][font=宋体]。[/font][align=center][font=宋体]表2 淋洗液流量选择试验结果（6.0mmol/LNa[sub]2[/sub]CO[sub]3[/sub]-2.0mmol/LNaHCO[sub]3[/sub]）[/font][/align] [table=528][tr][td=1,2] [align=center][font=宋体]组分[/font][/align] [/td][td=2,1] [align=center][font=宋体]0.8ml/min[/font][/align] [/td][td=2,1] [align=center][font=宋体]1.0ml/min[/font][/align] [/td][td=2,1] [align=center][font=宋体]1.2ml/min[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]T[/font][font=宋体]/min[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]R[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]T[/font][font=宋体]/min[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]R[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]T[/font][font=宋体]/min[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]R[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup][/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]13.543[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]2.75[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]10.969[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]2.63 [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]9.151 [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]2.57 [/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]SO[sub]4[/sub][sup]2-[/sup][/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]16.282[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]4.50[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]13.178[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]4.30[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]10.995[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]4.24[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]草酸[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]21.338[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]6.64[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]17.320[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]6.52 [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]14.480[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]6.48 [/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]SCN[sup]-[/sup] [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]30.636[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]/[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]25.047[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]/[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]21.175 [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]/[/font][/align] [/td][/tr][/table][b][font=宋体]2.1.3[/font][/b][font=宋体]色谱柱的选择 在[/font][font=宋体]6.0mmol/LNa[sub]2[/sub]CO[sub]3[/sub]-2.0mmol/LNaHCO[sub]3[/sub][/font][font=宋体]溶液流量1.0mL/min洗脱条件下[/font][font=宋体]，考察了青岛盛翰色谱公司生产的SH-AC-1型和SH-AC-3型阴离子交换柱对磷酸盐与硝酸盐和硫酸盐、草酸与硫酸盐和硫氰酸盐等常见[/font][font=宋体]阴离子[/font][font=宋体]的分离情况，结果表明，在此条件下SH-AC-1型柱对磷酸盐与硝酸盐和硫酸盐、草酸与硫酸盐的分离效果比SH-AC-3型柱要差，各组分分离度明显偏低，故本试验选择SH-AC-3型阴离子交换柱为分离柱。[/font][b][font=宋体]2.1.4[/font][/b][font=宋体]柱箱温度的确定 考察了柱温在30℃、35℃和40℃时各组分的分离效果，结果显示，在30℃[/font][font=宋体]～[/font][font=宋体]40[/font][font=宋体]℃范围内，磷酸盐与硝酸盐、硫酸盐，草酸与硫酸盐、硫氰酸盐等[/font][font=宋体]阴离子[/font][font=宋体]完全分离，且随着柱温的升高组分的保留时间稍微缩短，分离度逐渐下降，但均在1.5以上，在保证适宜的保留时间和较高的分离度的前提下，尽量采用较低的柱温，本试验确定柱箱温度为35℃。[/font][b][font=宋体]2.2[/font][/b][font=宋体]标准曲线[/font][font=宋体]按照1.4.1配制标准系列，测定各管的峰面积（S）和峰高（H），以S、H对浓度（C）绘制标准曲线，其标准曲线的试验结果列于表3。从表3可见，H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup]分别在0.20～20.0mg/L[/font][font=宋体]和[/font][font=宋体]20.0[/font][font=宋体]～100.0mg/L范围内与峰面积和峰高均呈良好的线性关系，相关系数r在0.9995[/font][font=宋体]～0.9997[/font][font=宋体]，但在[/font][font=宋体]0.20[/font][font=宋体]～100.0mg/L范围内则线性较差，以峰面积和峰高计相关系数r仅为0.9990和0.9983。[/font][font=宋体]草酸则分别在0.05～5.0mg/L[/font][font=宋体]和[/font][font=宋体]5.0[/font][font=宋体]～25.0mg/L [/font][font=宋体]范围内与峰面积和峰高均呈良好的线性关系，相关系数r在0.9994[/font][font=宋体]～0.9998[/font][font=宋体]，在[/font][font=宋体]0.05[/font][font=宋体]～25.0mg/L [/font][font=宋体]范围内时[/font][font=宋体]则[/font][font=宋体]线性较差，但[/font][font=宋体]相关系数r仍达0.9995和0.9991，能满足分析方法的相关要求[/font][font=宋体]。同时在计算测定结果时均可分别用峰面积和峰高计，并应根据样品浓度范围采用分段计算的方式计算结果，以减少测量误差，尤其对低含量的样品。其中，含20.0mg/L的H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup]和5.0mg/L的草酸标准溶液色谱图见图1。[/font][align=center][font=宋体]表3 标准曲线试验结果[/font][/align] [table=589][tr][td=1,2] [align=center][font=宋体]组分[/font][/align] [/td][td=3,1] [align=center][font=宋体]以峰面积计[/font][/align] [/td][td=2,1] [align=center][font=宋体]以峰高计[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]线性范围/mg/L[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]回归方程[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]相关系数/[i]r[/i][/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]回归方程[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]相关系数/[i]r[/i][/font][/align] [/td][/tr][tr][td=1,3] [align=center][font=宋体]H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup][/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.20[/font][font=宋体]～20.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]S=54739.17C-13358.36[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99973[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]H=1778.29C-410.68[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99959 [/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]20.0[/font][font=宋体]～100.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]S=70195.33C-375912.30[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99975[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]H=2457.32C-16524.20[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99951[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]0.20[/font][font=宋体]～100.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]S=66382.29C-82677.80[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99902[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]H=2287.74C-3482.42[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99833[/font][/align] [/td][/tr][tr][td=1,3] [align=center][font=宋体]草酸[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.05[/font][font=宋体]～5.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]S=100896.10C-4446.88[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99952[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]H=2475.41C-94.43[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99947[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]5.0[/font][font=宋体]～25.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]S=115321.78C-25752.87[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99951[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]H=3130.88C-3837.95[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99982[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]0.05[/font][font=宋体]～25.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]S=116032.36C-39070.40[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99953[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]H=2973.73C-818.44[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.99917[/font][/align] [/td][/tr][/table][b][font=宋体]2.3[/font][/b][font=宋体]方法的精密度和检出限[/font][font=宋体]对高、低浓度的标准溶液各平行测定5次，计算[/font][font=宋体]磷酸盐和草酸[/font][font=宋体]峰面积的RSD，[/font][font=宋体]同时测定[/font][font=宋体]仪器30min的基线噪声，以3倍基线噪声除以标准曲线（峰面积计）的斜率[/font][font=宋体]（3N/b）[/font][font=宋体]计算[/font][font=宋体]磷[/font][align=center][font='Times New Roman','serif'][img=,330,307]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009110906325399_3004_3389662_3.png!w330x307.jpg[/img][/font][/align][align=center][font=宋体]图1 标准溶液色谱法图[/font][/align][align=left][font=宋体]酸盐和草酸[/font][font=宋体]的检出限，[/font][font=宋体]5[/font][font=宋体]次平行测定的[/font][font=宋体]RSD[/font][font=宋体]在0.85%[/font][font=宋体]～2.07%[/font][font=宋体]，方法的重复性良好，磷酸盐和草酸的最低检出浓度分别为0.10mg/L和0.04 mg/L，若以尿样稀释50倍计，则磷酸盐和草酸的检出限分别为5.0mg/L和2.0 mg/L，见表4。[/font][/align][align=center][font=宋体]表4 [/font][font=宋体]方法的精密度和检出限[/font][/align] [table=520][tr][td=1,2] [align=center][font=宋体]组分[/font][/align] [/td][td=3,1] [align=center][font=宋体]标液1[/font][/align] [/td][td=3,1] [align=center][font=宋体]标液2[/font][/align] [/td][td=1,2] [align=center][font=宋体]检出限/mg/L[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [font=宋体]浓度/mg/L[/font] [/td][td] [align=left][font=宋体]平均峰面积[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]RSD/%[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]浓度/mg/L[/font][/align] [/td][td] [align=left][font=宋体]平均峰面积[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]RSD/%[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup][/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]4.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]201934.4[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]2.07[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]20.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]1083821.5[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]1.38[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.10[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]草酸[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]1.0 [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]98277.4[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]1.45[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]5.0 [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]500710.4[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.85 [/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.04[/font][/align] [/td][/tr][/table][b][font=宋体]2.4[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]共存阴离子[/font][font=宋体]的影响[/font][font=宋体]在本试验条件下，磷酸盐[/font][font=宋体]和草酸与常见阴离子的色谱图见图2，从图2可见，目标组分与常见阴离子能完全分离。但[/font][font=宋体]尿液中含有大量的有机物和氯化物、硝酸盐和硫酸盐等阴离子，[/font][align=center][img=,411,318]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009110906424636_6899_3389662_3.png!w411x318.jpg[/img][/align][align=center][font=宋体]图[/font][font=宋体]2 [/font][font=宋体]磷酸盐、草酸与常见阴离子分离色谱图[/font][/align][font=宋体]当尿样经50或100倍稀释后可降低氯化物、硝酸盐和硫酸盐等阴离子的影响，经过C18柱的净化可以消除有机物的干扰。试验特别考察了氯化物、硝酸盐和硫酸盐对磷酸盐[/font][font=宋体]和草酸[/font][font=宋体]测定结果的影响，结果表明，[/font][font=宋体]500mg/L[/font][font=宋体] Cl[sup]-[/sup][/font][font=宋体]、300mg/L[/font][font=宋体] NO[sub]3[/sub][/font][sup][font=宋体]-[/font][/sup][font=宋体]、200mg/L[/font][font=宋体] SO[sub]4[/sub][sup]-2[/sup][/font][font=宋体]对[/font][font=宋体]4.0mg/L[/font][font=宋体]磷酸盐[/font][font=宋体]和1.0mg/L草酸[/font][font=宋体]的[/font][font=宋体]测定结果无明显影响（测量误差在±5%范围内），[/font][font=宋体]分离色谱图[/font][font=宋体]见[/font][font=宋体]图3，说明方法有较好抗干扰能力。[/font][font=宋体] [/font][align=center][img=,380,341]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009110906503039_3767_3389662_3.png!w380x341.jpg[/img][/align][align=center][font=宋体]图[/font][font=宋体]3 [/font][font=宋体]磷酸盐、草酸与[/font][font=宋体]500mg/L[/font][font=宋体] Cl[sup]-[/sup][/font][font=宋体]、300mg/L[/font][font=宋体] NO[sub]3[/sub][/font][sup][font=宋体]-[/font][/sup][font=宋体]、200mg/L[/font][font=宋体] SO[sub]4[/sub][sup]-2[/sup][/font][font=宋体]分离色谱图[/font][/align][b][font=宋体]2.5[/font][/b][font=宋体]尿样测定及回收率试验结果[/font][font=宋体]按试验方法1.4.3的步骤对尿样进行处理后取1.5mL样液于样品瓶中，启动自动进样器进样测定各组分的峰面积（S）和峰高（H），以标准曲线法定量，同时进行加标回收试验。3[/font][align=center][font=宋体]表5 尿样（稀释50倍）测定及回收率试验结果（以峰面积计）[/font][/align] [table=569][tr][td=1,2] [align=center][font=宋体]组分[/font][/align] [/td][td=3,1] [align=center][font=宋体]尿样1[/font][/align] [/td][td=3,1] [align=center][font=宋体]尿样2[/font][/align] [/td][td=3,1] [align=center][font=宋体]尿样3[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]本底/mg/L[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]加入量[/font][/align] [align=center][font=宋体]/mg/L[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]回收率[/font][/align] [align=center][font=宋体]/%[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]本底[/font][/align] [align=center][font=宋体]/mg/L[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]加入量[/font][/align] [align=center][font=宋体]/mg/L[/font][/align] [/td][td] [align=left][font=宋体]回收率[/font][/align] [font=宋体]/%[/font] [/td][td] [align=center][font=宋体]本底[/font][/align] [align=center][font=宋体]/mg/L[/font][/align] [/td][td] [align=left][font=宋体]加入量[/font][/align] [font=宋体]/mg/L[/font] [/td][td] [font=宋体]回收率[/font][font=宋体]/%[/font] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup][/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]18.11[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]20.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]104.7[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]14.72[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]10.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]99.3[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]19.83[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]4.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]94.5[/font][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][font=宋体]草酸[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.74[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]5.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]104.2[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.44[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]2.50[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]98.4[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]0.62[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]1.0[/font][/align] [/td][td] [align=center][font=宋体]96.0[/font][/align] [/td][/tr][/table][font=宋体]份尿样（稀释50倍）磷酸盐和草酸的测定结果分别在14.72mg/L[/font][font=宋体]～18.11[/font][font=宋体]mg/L[/font][font=宋体]和0.44mg/L[/font][font=宋体]～[/font][img=,593,257]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009110906594847_9216_3389662_3.png!w593x257.jpg[/img][align=center][font=宋体]图4 尿样及其加标色谱图[/font][/align][font=宋体]曲线1、尿样[/font][align=center][font=宋体] 2[/font][font=宋体]、尿样加20mg/L[/font][font=宋体]的H[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][sup]-[/sup]和[/font][font=宋体]5mg/L[/font][font=宋体]草酸[/font][/align][font=宋体]0.74[/font][font=宋体]mg/L[/font][font=宋体]，加标回收率分别为：94.5%[/font][font=宋体]～104.7%和96.0～104.2%，[/font][font=宋体]结果见表5。其中尿样1本[/font][font=宋体]底及加标样色谱图见图4.[/font][b][font=宋体]3 [/font][font=宋体]小结[/font][/b][font=宋体]本工作采用国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]设备，建立了以SH-AC-3型阴离子交换柱为分离柱，[/font][font=宋体]6.0mmol/LNa[sub]2[/sub]CO[sub]3[/sub]-2.0mmol/LNaHCO[sub]3[/sub][/font][font=宋体]溶液[/font][font=宋体]为淋洗液、流量1.0mL/min等度洗脱，抑制电导检测-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法同时测定尿液中磷酸盐和草酸的分析方法。方法具有良好的重现性和准确性，操作简便快速，[/font][font=宋体]尿样通过C18柱的净化可以消除有机物的影响，尿液稀释50或100倍后可降低氯化物、硝酸酸盐和硫酸盐的影响。[/font][font=宋体]方法采用自动进样器进样，降低了人为误差和检验人员的工作强度，在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]工作时不需要人员值守，检验人员可同时进行其他项目的检测工作，提高了工作效率，本法适用尿液中磷酸盐和草酸的同时测定。[/font][font=宋体]参考文献[/font][font=宋体]1[/font][font=宋体]）苏海龙，郑 煜.草酸钙结石形成的代谢性变化研究[J]，[/font][font=宋体]现代泌尿外科杂志，2012,17（6）：610-612[/font][font=宋体]2[/font][font=宋体]）[/font][font=宋体]马腾骧，孙 光. 现代泌尿外科学[M].天津：天津科学技术出版社，2000:587-588[/font][font=宋体]3[/font][font=宋体]）尚 红，王毓三，申子瑜[/font][font=宋体]. [/font][font=宋体]全国临床检验操作规程（第4版）[M].北京：人民卫生出版社，[/font][font=宋体]2015[/font][font=宋体]：259-262[/font][font=宋体]4[/font][font=宋体]）陈世惠[/font][font=宋体].[/font][font=宋体]尿磷测定方法的研究[/font][font=宋体][J][/font][font=宋体].[/font][font=宋体]中国工业医学杂志，1999,12（3）：191-192[/font][font=宋体]5[/font][font=宋体]）李桂兰.[/font][font=宋体]锆-偶氮胂Ⅲ络合物比色法[/font][font=宋体][url=http://www.docin.com/p-832791022.html?docfrom=rrela][color=#3C3C3C][back=#F9F9F9]测定[/back][/color][color=#3C3C3C][back=#F9F9F9]尿草酸[/back][/color][/url][J][/font][font=宋体].[/font][font=宋体]临床检验杂志，1997,15（2）：86-87[/font][font=宋体]6[/font][font=宋体]）张爱梅，贾丽萍，牛学丽[/font][font=宋体].[/font][font=宋体]表面活性剂增敏阻抑动力学光度法测定痕量草酸[/font][font=宋体][J][/font][font=宋体].[/font][font=宋体]分析化学，2003,31（9）：1115-1118[/font][font=宋体]7[/font][font=宋体]）陈兰化，赵丹华[/font][font=宋体].[/font][font=宋体]催化荧光法测定痕量草酸[/font][font=宋体][J][/font][font=宋体].[/font][font=宋体]光谱学与光谱分析，2003,23（1）：203-204[/font][font=宋体]8[/font][font=宋体]）彭 婕，郭卫红，谈恒山[/font][font=宋体]，等.[/font][font=宋体]高效液相色谱法[/font][font=宋体]测定人尿液中草酸的含量[J][/font][font=宋体].[/font][font=宋体]中国医院药学杂志，2006,26（3）：299-301[/font][font=宋体]9[/font][font=宋体]）[/font][font=宋体][color=#444444]谈绮文,郭 玮,顾梅秀,等.高效毛细管电泳法测定尿液中微量草酸和柠檬酸[J].中华检验医学杂志,2014,37(4):281-284[/color][/font][font=宋体]10[/font][font=宋体]）颜金良，高 杰，颜勇卿，等.[url=http://www.docin.com/p-832791022.html?docfrom=rrela][color=#3C3C3C][back=#F9F9F9][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法[/back][/color][color=#3C3C3C][back=#F9F9F9]快速[/back][/color][color=#3C3C3C][back=#F9F9F9]测定[/back][/color][color=#3C3C3C][back=#F9F9F9]人尿液[/back][/color][color=#3C3C3C][back=#F9F9F9]中[/back][/color][color=#3C3C3C][back=#F9F9F9]草酸含量研究[/back][/color][/url][J]，中国卫生检验杂志，2009,19（3）：554-555[/font][align=left][font=宋体]11[/font][font=宋体]）陈梅兰，叶明立，范云场，等.[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]抑制电导测定尿液中草酸根、磷酸根及枸橼酸根离子[J]，药物分析杂志，2009，,29（9）：1466-1469 [/font][/align][font=宋体]12[/font][font=宋体]）[/font][font=宋体]许春向，邹学贤.现代卫生化学[M].北京：人民卫生出版社，2000:491-492[/font][align=left] [/align]

湖库富营养化指标之磷酸盐测试方法比较 磷酸盐虽然没有毒，但它是水华/赤潮生物的营养基础，所以在环境标准以及饮用水标准中都有磷酸盐这个项目。本文对各种磷酸盐分析方法进行分析，指出了不同方法的优缺点，便于对方法的理解和选择。1、离子色谱法 方法原理：利用离子交换的原理，连续对多种阴离子进行定性和定量分析。水样注入碳酸盐-碳酸氢盐溶液并流经系列的离子交换树脂，基于待测阴离子对低容量强碱性阴离子树脂（分离柱）的相对亲和力不同而彼此分开。被分开的阴离子，在流经强酸性阳离子树脂（抑制柱）时，被转换为高电导的酸型，碳酸盐-碳酸氢盐则转变成弱电导的碳酸（清除背景电导）。用电导检测器测量被转变为相应酸型的阴离子，与标准进行比较，根据保留时间定性，峰高或峰面积定量。一次进样可连续测定六种无极阴离子（F-、Cl-、NO3-、HPO32-和SO42-）。 检出限：当电导检测器的量程为10μS，进样量为25μl时，HPO42-检出限为0.12mg/L。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/10/201210081029_395003_1653274_3.jpg 优点：从上图中就能看出，它可以同时测定多种离子，且分析速度不慢。 缺点：灵敏度相对低，不适用于饮用水检测；但如果换成废水检测的话，由于基体复杂，干扰较大，也比较难精确定量。2、等离子发射光谱法(ICP-AES) 分析原理：ICP则是利用氩等离子体产生的高温使试样完全分解形成激发态的原子和离子，由于激发态的原子和离子不稳定，外层电子会从激发态向低的能级跃迁，发射出特征谱线。光强度与待测元素浓度成正比，通过光栅等分光后，利用检测器检测总磷特定波长的强度就可以得到总磷浓度。 方法检出限：0.015mg/L http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/10/201210081025_394990_1653274_3.jpg☆美国Thermo 单道扫描等离子体发射光谱仪ICP-AES 优点：测试方便，准确度较高 缺点：无法区分正磷酸盐和其他组分磷，测试结果为总磷3、分光光度法 分光光度法以其仪器配置的廉价，普及性比较广常用光度法有：氯化亚锡还原钼蓝法、孔雀绿-磷钼杂多酸法以及钼酸铵分光光度法 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/10/201210081026_394992_1653274_3.jpg☆S22PC型可见光分光光度计3.1 氯化亚锡还原光度法 方法原理：在酸性条件下，正磷酸盐与钼酸铵反应，生成磷钼杂多酸。当加入还原剂氯化亚锡后，则转变成蓝色络和物，通常即称为钼蓝。灵敏度较低，干扰也较多 [font='Tim