氨基甲酰氨基异丁基

黄酒中γ-氨基丁酸含量测定的辛酸历程 近日实验室收到一批黄酒样品，该批黄酒是用发芽糙米为原料酿造而成，客户要求测定黄酒中的γ-氨基丁酸含量。由于之前实验室以丹磺酰氯为衍生试剂，建立了高效液相色谱法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的实验方法，并对实验方法的线性、精密度以及回收率进行了确认，均可以满足发芽糙米中γ-氨基丁酸含量测定要求，因此拿到黄酒样品后直接按照发芽糙米的前处理方法和色谱方法进行分析。链接如下：http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20141226/5591256/。然而事与愿违，在测定的液相色谱图中压根就没有见到γ-氨基丁酸的色谱峰，反而在11.5min左右有个小的色谱峰，其峰高与发芽糙米中γ-氨基丁酸峰高有点相似，初步怀疑是保留时间发生了漂移，与发芽糙米样品色谱图对比后发现，在发芽糙米样品色谱图中该保留时间处也出现了一个相似的小峰，因此将该色谱峰是γ-氨基丁酸的可能性排除。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412311333_530568_1669358_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412311334_530570_1669358_3.jpg 原本该实验到此结束，准备将实验结果反馈给客户：黄酒中γ-氨基丁酸的检测结果为“未检出”。为了保证数据的准确性和可靠性，在黄酒样品中进行加标实验，结果在加标的色谱图中也未在相应的保留时间出峰，而且11.5min左右的色谱峰也没有增大，因此决定先将“未检出”的结果搁置，并对实验方法进行分析。 经过对样品前处理过程和色谱方法的分析，觉得可能造成加标样品中γ-氨基丁酸未检出的原因可能有：（1）保留时间漂移。由于流动相需要调节pH值，同时样品前处理过程中也涉及到酸、碱溶液的使用，怀疑是流动相或者样品pH的改变导致保留时间的漂移，从而未在原有的保留时间出现应有的色谱峰。然而重新配制流动相和前处理样品，加标样品测定结果依然是“未检出”，对比加标和不加标样品的色谱图，两者几乎一样，也没有峰面积或峰高变化明显的色谱峰；（2）衍生试剂失效。丹磺酰氯对光和湿敏感，不稳定，放置时间久了会生产二氯亚砜并继续分解成其他物质，影响其在有机溶剂中的溶解度，也会影响结果。可是为了排除衍生试剂的问题，重新打开一瓶刚购置不久的丹磺酰氯试剂，并重新试验，结果仍然不理想；（3）衍生条件控制不当。之前用相似的方法测定牛磺酸含量以及测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量时曾出现过衍生过程条件控制不当造成衍生不完全或者不能衍生的情况，可是与黄酒样品同一批处理的γ-氨基丁酸标准溶液和发芽糙米样品均能衍生成功，并正常出峰，为何唯独黄酒样品不出峰呢？在百思不得其解之际，看到同事在滴定黄酒中总酸，忽然间若有所悟：黄酒中的γ-氨基丁酸需要在碱性条件下才能与丹磺酰氯发生衍生反应，而黄酒是酸性介质，pH值一般在3~5之间，同时黄酒为酿造产物，对酸碱性具有一定的缓冲能力。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412311336_530572_1669358_3.jpg 通过比较发现：黄酒为酸性样品，缓冲能力较强，按照发芽糙米样品前处理方法直接加入0.5mL 碳酸钠（pH9.8）可能不能达到合适的衍生反应条件，最终导致黄酒样品中γ-氨基丁酸“未检出”。 找到问题后调整实验方案，先将黄酒样品调整至中性，然后再按照发芽糙米样品方法进行前处理。调整实验方案后，黄酒样品中γ-氨基丁酸测定的色谱图如下图。从色谱图中可以发现，经过实验方案的调整黄酒样品中检出了γ-氨基丁酸的存在。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412311337_530573_166

点击查看FDA声明原文　　FDA警告，过量服用对乙酰氨基酚药物将会导致肝功能衰竭甚至死亡，高危人群包括在24小时内服用超过处方规定剂量药物的患者，同时服用超过一种含对乙酰氨基酚成分药物的患者，以及在服用含对乙酰氨基酚成分药物时饮用含酒精饮料的患者。　　FDA自2011年起开始要求制药企业将对乙酰氨基酚的含量控制在每单位325毫克以内，但截止至2014年1月14日，市场上仍有部分单位对乙酰氨基酚含量超过325毫克的药物正在流通销售。　　FDA表示，将在近期启动相关法律程序，禁止开具每单位对乙酰氨基酚含量超过325毫克的药物处方。　　国内康泰克、百服宁等超标近54% 调查发现，国内多家知名品牌感冒药的对乙酰氨基酚含量高于每单位325毫克，包括新康泰克、百服宁等。　　中美史克生产的新康泰克美扑伪麻片(红装)，其每片对乙酰氨基酚含量同样是500毫克。　　上海施贵宝制药有限公司生产的日夜百服咛、加合百服宁的每单位对乙酰氨基酚含量为500毫克，超出美国FDA规定含量上限54%。　　此外，有多个品牌感冒药的单位对乙酰氨基酚含量达到美FDA规定的上限325毫克，它们分别是：白加黑、泰诺、银得菲。　　其他品牌如快克、感康、康必得等单位对乙酰氨基酚含量在250毫克以内。　　走访沪上多家药房后发现，最为常见的白加黑、新康泰克等感冒药均为处方药，需要处方及身份证才能购买。　　大量非处方药含对乙酰氨基酚　　不过，一药房工作人员提醒道，前述感冒药被转为处方药管理，并非缘于对乙酰氨基酚的过量，而是系其含有伪麻黄碱的缘故。　　事实上，由于良好的镇痛祛热疗效，对乙酰氨基酚药物使用普及度很高，国内亦将其列为非处方药(OTC)，即不需要持有医生处方即能买到，同时也能通过网络合法销售。　 搜索淘宝等线上商城后发现，在网上不仅可以随意买到各种各样品牌的对乙酰氨基酚药品，而且购买数量亦完全没有限制。　　沪上一医药销售人员表示，由于在各种药物中使用广泛，以及非处方药可以任意购买的缘故，患者容易同时购买多种含有对乙酰氨基酚的药物，导致患者在不知情的情况下过量服用。　　根据FDA统计，在1998年至2003年间，对乙酰氨基酚过量服用是导致病人肝衰竭的主要原因。美国疾病控制中心在2007年也曾经发布报告称，全美每年有1600起急性肝功能衰竭，其中对乙酰氨基酚过量服用是最大缘由。　　该销售人员解释道，美FDA长期以来都对药物中对乙酰氨基酚的含量作出规定，但因为非处方药的关系，仍有大量患者过量服用，所以FDA将对乙酰氨基酚的含量限制在325毫克以内，也是为了在不影响疗效的情况下尽可能的让患者减少服用，降低副作用。　　FDA在此次声明中亦表示，将采取新的行动针对对乙酰氨基酚类的非处方药进行监管。　　小知识：对乙酰氨基酚(扑热息痛)　　对乙酰氨基酚是乙酰苯胺类解热镇痛药，别名有乙酰氨基酚、扑热息痛、醋氨酚、退热净等。该药具有解热镇痛作用，主要用于缓解轻、中度的疼痛，如关节痛、头痛、神经痛、牙痛及痛经等。　　作为非处方药，虽然有质量稳定，疗效确切的优点，但该药的滥用，使用不当也会产生不良反应或严重的肝毒性和肾毒性。　　此药对肝损害是最主要的不良反应，其次是引起肾衰，此外也可能导致血小板减少、哮喘发作等症状。　　在无其他药物或无酒精干扰情况下，对乙酰氨基酚的安全剂量为：成人口服每次300-600毫克，最大日剂量不超过4000毫克，退热疗程不宜超过3天，镇痛疗程不宜超过5天。儿童12岁以下按体重每次10-15mg/kg，疗程不宜超过3天。　　若患者饮酒或空腹或与其他药物有相互作用的药物合用时，应调低剂量或禁用。

纺织品中4-氨基偶氮苯的检出限、回收率的验证报告前言：随着GB 18401，Oeko—Tex Standard 100，Eco—Lable等多项国内外法规的实施，禁用偶氮染料的检测越来越受到重视，这些染料被人体皮肤吸收后可能在体内分解产生多种有害芳香胺，经人体的活化作用使细胞的DNA结构和功能发生改变．从而诱发细胞癌变或畸变等病变。4一氨基偶氮苯(4一amino azo benzene．简称4一AAB)是这些有害芳香胺中的一种，在Oeko—Tex Standard 100等标准中，4一氨基偶氮苯属于禁用芳香胺的一种。为了实验室在4-AAB测试上的精确度，本文分析了方法的线性范围、加标回收率、方法复现性、方法检测限等内容。1、试验部分1.1 仪器设备与试剂安捷伦7890-5975C气质联用仪，毛细管色谱柱：DB-5MS 30m×0.25mm×0.25μm；恒温水浴锅；振荡器；分析天平。4-氨基偶氮苯标准品，固体粉末，纯度99.0%；蒽-d10标准品，固体粉末，纯度97.8%，均购自安谱科学仪器有限公司。氢氧化钠、氯化钠、连二亚硫酸钠、叔丁基甲醚，均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司，所用水为三级水。标准溶液：4-氨基偶氮苯标准液，100mg/L，溶解在叔丁基甲醚中；蒽-d10，100mg/L内标液，溶解在叔丁基甲醚中。均保存在密封棕色样品瓶中放置冰箱冷藏，保质期1个月。蒽-d10内标工作液（2mg/L）：用叔丁基甲醚配制，此溶液现配现用。4-氨基偶氮苯标准液（0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L）：用叔丁基甲醚配制，此溶液现配现用。1.2 样品前处理将纺织样品剪成5mm×5mm的小片，混合。从混合样中称取1.0g，精确0.01g，置于反应器中，加入9mL20g/L（pH值=13.7）的氢氧化钠溶液，将反应器密闭，用力振摇，使所有试样浸于液体中。打开瓶盖，再加入1.0mL200mg/mL的连二亚硫酸钠溶液，将反应器密闭，用力振摇，使溶液充分混匀。置于40℃恒温水浴中保温30min。取出后1min冷却到室温。 然后加入10mL蒽-d10内标工作液，再加入7g氯化钠，将反应器密闭，用力振摇混匀后于机械振荡器中振摇45min，静置，待两相分层后，取上层清液进行GC/MS分析。1.3 GC-MS仪器条件毛细管色谱柱：DB-5MS 30m×0.25mm×0.25μm；载气：氦气（≥99.999%）；流量：1.0mL/min；进样口温度：250℃；质谱接口温度：280℃；离子化方式：EI，70eV；质量扫描方式：定性分析使用全扫描（scan）方式；定量分析使用选择离子（sim）方式，监测离子为：4-氨基偶氮苯197u，蒽-d10内标188u；柱温：50℃（0.5min），25℃/min→260℃（5min）；进样量：1μL；进样方式：不分流进样。在此仪器条件下，4-氨基偶氮苯和内标蒽-d10混标溶液的总离子流图和质谱图如下： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211406_556443_2974654_3.jpg 图1 4-氨基偶氮苯和内标蒽-d10混标溶液的总离子流图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211406_556444_2974654_3.jpg 图2 4-氨基偶氮苯的质谱图2、结果与讨论2.1、方法的线性范围线性范围是指试样浓度与响应讯号之间保持线性关系的浓度范围。配制标准系列溶液，其中4-氨基偶氮苯的浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L，标准溶液进行GC-MS分析，得到内标校正曲线。曲线的各标准点浓度回读值及曲线线性方程和线性相关系数见表1，曲线如图3.本次试验对内标曲线进行了方法线性的验证。 表1 4-氨基偶氮苯标准曲线线性方程、线性相关系数及标准溶液浓度回读结果标准溶液浓度/（mg/L）标准溶液浓度回读值及回收率标准溶液浓度回读值/（mg/L）回收率0.50.4794.0%1.00.9494.0%2.02.02101.0%5.05.20104.0%标准曲线线性方程Response=2.044e-002*Amt-2.507e-002线性相关系数R20.995http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211406_556445_2974654_3.jpg 图3 标准曲线图由R2及线性方程对标准溶液浓度的回读情况可认为此标准曲线线性良好，因此，4-氨基偶氮苯在0.5～5.0mg/L的范围内线性良好。2.2 方法的准确性和重复性验证方法的准确性验证通过加标回收率体现。在待测样品中加入一定已知浓度的标准样品，混合均匀后，按照GB/T 23344-2009方法进行前处理和仪器分析，据算回收率。回收率计算公式为：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211425_556473_2974654_3.png。本试验选择的是阴性样品进行加标试验，http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211425_556474_2974654_3.png。在本试验中，通过对阴性样品进行3个浓度水平的加标试验计算回收率。试验结果见表2。方法重复性验证是指在相同的测量条件下，对同一被测量进行连续多次测量所得结果之间的一致性。重复性的估算方法通过在同一实验室内，由同一试验人员用相同的试验设备至少做6次平行试验，测得的数据用统计的方法计算精密度，一般用相对标准偏差表示。本试验在相同的检测条件下，称取1.0g阴性纺织品样品，分别进行3个浓度水平的加标试验，每个水平进行6次平行试验，通过计算相对标准偏差RSD体现方法的重复性效果。试验结果见表2。 表2 4-氨基偶氮苯3个水平加标试验及6次平行测定的结果试验次数加标水平/（mg/kg）5.010.050.0测定值回收率测定值回收率测定值回收率