[align=center][b][font='times new roman'][size=18px]卷柏[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]穗花杉双黄酮[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]测定[/size][/font][/b][/align][font='tahoma'][size=14px]小记：[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]我们当时接收到客户样品，进行测定出现[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]跟之前[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]枳壳的问题，发现样品有可能是被提取过又卖出的，含量没测到，后来去药店买来饮片测[/size][/font][font='tahoma'][size=14px] [/size][/font][font='tahoma'][size=14px]是没有问题的[/size][/font][font='tahoma'][size=14px][color=#000000]。[/color][/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211231829035304_6700_1858223_3.jpeg[/img][/align][font='times new roman']1 [/font][font='times new roman']材料与试剂[/font][font='times new roman']乙腈（色谱级）、[/font][font='times new roman']甲醇、磷酸[/font][font='times new roman']（分析纯）、[/font][font='times new roman']穗花杉双黄酮[/font][font='times new roman']（购自中检院）、[/font][font='times new roman']卷柏[/font][font='times new roman']药材[/font][font='times new roman']样品（送检样品）[/font][font='times new roman']和药店购买[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']2 [/font][font='times new roman']色谱条件[/font][font='times new roman']LC-20AT[/font][font='times new roman'][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]（日本岛津），色谱柱：[/font][font='times new roman']Zorbax[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']SB[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']C18(250mm*4.6μm*5μm)[/font][font='times new roman']（安捷伦），流动相：以[/font][font='times new roman']甲醇[/font][font='times new roman']-[/font][font='times new roman']0.1%[/font][font='times new roman']磷酸水[/font][font='times new roman']梯度洗脱[/font][font='times new roman']；[/font][font='times new roman']柱温[/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']℃[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']检测波长为[/font][font='times new roman']33[/font][font='times new roman']0nm[/font][font='times new roman']，流动相如下表：[/font][align=center][img=,690,152]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211231831114264_3477_1858223_3.jpg!w690x152.jpg[/img][/align][align=left][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']溶液制备[/font][font='times new roman']（按照中国药典[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']020[/font][font='times new roman']年版一部[/font][font='times new roman']卷柏[/font][font='times new roman']项下测定）[/font][/align][font='times new roman']对照品溶液的制备[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']取穗花[/font][font='times new roman']杉双黄酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每[/font][font='times new roman']1m[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman']含[/font][font='times new roman']0.1[/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman']mg[/font][font='times new roman']的溶液，即得。[/font][align=center][font='times new roman'] [img=,671,183]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211231832332250_1831_1858223_3.jpg!w671x183.jpg[/img][/font][/align][align=center][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']穗花杉双黄酮[/font][font='times new roman']对照品色谱图[/font][/align][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']供试品溶液[/font][font='times new roman']的制备[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']取本品粉末（过三号筛）约[/font][font='times new roman']0.2g[/font][font='times new roman']，精密称定，[/font][font='times new roman']置具塞[/font][font='times new roman']锥形瓶中，精密加入甲醇[/font][font='times new roman']50m[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman']，称定重量，加热回流[/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman']小时，放冷，再称定重量，用甲醇[/font][font='times new roman']补足减失的[/font][font='times new roman']重量，摇匀，滤过，[/font][font='times new roman']取续滤液[/font][font='times new roman']，即得。分别精密吸取对照品溶液[/font][font='times new roman']10[/font][font='times new roman']μ[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman']，注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]，测定，即得。[/font][align=center][img=,683,186]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211231832537485_797_1858223_3.jpg!w683x186.jpg[/img][/align][font='times new roman'][/font][align=center]卷柏药材色谱图[/align][font='times new roman']结果：客户送检样品[/font][font='times new roman']穗花杉双黄酮[/font][font='times new roman']未检出，药店购买卷柏药材[/font][font='times new roman']穗花杉双黄酮[/font][font='times new roman']含量为[/font][font='times new roman']0.[/font][font='times new roman']41%[/font][font='times new roman']注：[/font][font='times new roman']因为卷柏回流时间比较长，要多关注冷凝水及水浴锅，以免冷凝不及时，溶液挥干，影响提取效果。[/font][font='times new roman']我们再购买药材时不仅要从性状进行鉴别，更要根据中国药典进行含量检测，有必要的可以要求出示相关检测报告，以免买到劣药或者假药。[/font]
黄酮类化合物在自然界分布非常广泛，是一类非常重要的天然有机化合物。传统意义上黄酮类化合物主要是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物，现在泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物。根据黄酮类化合物结构特点，可分为黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇、查耳酮、异黄酮、双黄酮、花色素等种类。黄酮类化合物具有多方面的生物活性，如葛根总黄酮及葛根素(puerarin)、银杏叶总黄酮等具有扩张冠状血管作用，临床用于治疗冠心病；水飞蓟素(silymarin)、异水飞蓟素( silydianin)及次水飞蓟素(slychristin)等有肝脏保护作用，临床上用于治疗急、慢性肝炎、肝硬化及多种中毒性肝损伤等；木犀草素(luteolin)、黄芩苷( baicalin)、黄芩素(baicalein)以及槲皮素等具有抗菌、抗病毒作用；牡荆素( vitexin)、桑色素、儿茶素等具有抗肿瘤作用等。游离黄酮类化合物一般难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等有机溶剂及稀碱水溶液中。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中。花色苷及其苷元以离子形式存在具有盐的通性，亲水性较强，水溶度较大。黄酮化合物单体的分离主要依靠各种色谱方法来实现，除经典的柱色谱法和薄层色谱法、HPLC外，近年来HSCCC已经得到广泛的应用。对于多数极性较弱的黄酮苷元，在进行HSCCC分离实验时，通常可以选用氯仿-甲醇-水的溶剂系统，而氯仿-甲醇-水(4:3:2或5:3:2)则是最常用的溶剂系统。根据被分离样品的具体情况，在上述溶剂系统的基础上，对组成诸元的比例进行适当的调整，就能获得良好的分离效果。还有些苷元也可采用正己烷（石油醚）-乙酸乙酯-甲醇-水的溶剂系统，通过调整溶剂的组成比例来实现有效分离。对于极性较强的黄酮糖苷类成分的HSCCC分离，通常使用的是乙酸乙酯–水为基本结构的溶剂系统，可以通过添加正丁醇、甲醇、乙醇、乙酸来调节溶剂系统的极性。分离这类化合物的典型性溶剂系统有：氯仿-[color
作者：张洪涛;蔡俊安;郭鑫慧;（河南百年康鑫药业有限公司;）摘要：目的采用高效液相色谱法测定双黄连颗粒中绿原酸的含量。方法用外标一点法,Diamonsil ODS1 C18色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(15:85:1)为流动相,流速为1.0mL/min,λ=324nm。结果绿原酸在0.060～1.210μg范围内呈良好线性,回归方程为Y=105427X+586.43,r2=0.9995,平均加样回收率为99.3%,RSD=0.82%(n=6)。结论本方法简便、准确,专属性强,测定结果重复性好,为双黄连颗粒中绿原酸的定量分析提供了科学有效的方法 。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208131049_383398_1606903_3.jpg
检测中药中的多糖，皂苷，黄酮，木脂素用什么液相色谱柱？
先来简单说一下鸡蛋的形成。母鸡成年之后，卵巢会产生卵黄。卵黄进入输卵管中一段存在许多腺体的地方，会刺激它们分泌蛋白。这些蛋白把卵黄包裹起来。大约3小时后卵黄表面裹上一层厚厚的蛋白形成蛋壳膜。这个蛋的“雏形”进入子宫，随着子宫液的渗入，蛋白重量增加，蛋壳膜膨胀，碳酸钙等物质沉积在蛋壳膜上形成蛋壳，从而形成完整的鸡蛋，由子宫收缩而排出体外。 在完全发育的健康母鸡中，这个生产流程配合得很好。但是，对于那些刚开始下蛋的母鸡，各部位的配合还不熟练，就可能出现“异常”。比如，产生了一个卵黄之后，“控制中心”没有收到信号，于是又产生一个卵黄。两个卵黄进入输卵管，虽然增加了后续部门的负担，但这些部门稍微加点班，还是能够正常工作。于是，这两个卵黄被蛋白包裹、成形，排出体外，双黄蛋就这样产生了。
寒冷的冬天，整个人都是懒洋洋的，尽管有很多试验经历、色谱柱使用体会、很多的原创素材，都懒的起笔。2013年马上来临，趁着2012年的第五届原创大赛，赶快记录一篇原创，分享自己更多的使用体会与试验经历给大家探讨。这次检测的是大豆异黄酮，说起这个，估计很少人接触，而我已经跟它已经认识了好几年。异黄酮是一类物质，有苷和苷元之分，可是接触了很久都不知道苷和苷元有什么区别，为什么这个叫苷，另外一个就叫苷元。而且保健品中有很多叫甙，我也搞不清楚甙和苷有什么区别。大豆异黄酮的测定，目前存在的标准方法：GB/T 23788-2009保健食品中大豆异黄酮的测定方法 高效液相色谱法NY/T 1252-2006大豆异黄酮http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281607_416709_1608710_3.jpg实验过程：色谱柱：Topsil 液相色谱柱（C18，5um，4.6*250mm）检测波长：260nm流动相：乙腈+0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱流速：1.0mL/min进样量：20ul先晒晒标准上的图谱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281611_416712_1608710_3.jpg以下是我测定的色谱图，根据出峰顺序依次是大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素。标准色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281614_416716_1608710_3.jpg保健食品样品色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281615_416718_1608710_3.jpg总结：1、总体来说，4个组分的保留时间和色谱峰都能与标准对应重现2、色谱峰的理论塔板数都很好，这根柱子已经用了一段时间，具体测了多少样品就不清楚了3、以前检测测的是大豆素和染料木素，同时测定4个还是第一次，效果还算满意你测试过大豆异黄酮吗？有经验赶快讨论吧
开幕式《星光》部分，著名钢琴演奏家郎朗与5岁的小姑娘李木子用钢琴弹奏出浪漫的旋律。 郎朗曾经参加过多次大型演出，但他表示，这次在北京奥运会的演奏与之前完全不同。对于他的搭档，郎朗给了她很高的评价，他说：“小姑娘才5岁，非常天真可爱。她能代表新一代中国人纯朴、努力、勤学、开放的精神。”
大豆异黄酮是从植物中提取，与雌激素有相似结构，因此又称植物雌激素，大豆异黄酮的雌激素作用影响到激素分泌、代谢生物学活性、蛋白质合成、生长因子活性，是天然的癌症化学预防剂。主要成分：大豆甙(Daidzin)，大豆甙元(Daidzein)，染料木甙(Genistin)，染料木素(Genistein)，黄豆甙(Glycitin)，黄豆甙元(Glycitein)。迪马科技用户采用Endeavorsil C18超高效液相色谱柱成功实现8分钟内6种大豆异黄酮的良好分离，对于大豆异黄酮的分离和检测具有实际意义。UPLC色谱分析条件*：色谱柱：Endeavorsil C18 50 × 2.1 mm, 1.8 μm（Cat.#.：87002）流动相：A：0.2%的磷酸水溶液，B：乙腈时间（min）02467A（%）9085706090B（%）[align=cente
有高手做过黄酮醇苷的检测嘛？？我现在要做，难做吗？？急........我要用液相测定的是银杏提取液中的黄酮总量，包括槲皮素，异鼠李素，山奈素.....因为课题比较急，希望高手伸出援手，谢谢.......
[align=center][b]超高效液相色谱-串联质谱法测定大豆中大豆异黄酮的含量[/b][/align][align=center]户江涛[/align][align=center]（农业农村部豆类产品质量安全风险评估实验室（佳木斯），黑龙江省农垦科学院测试化验中心，黑龙江佳木斯 154007 ）[/align]摘要：采用超高效液相色谱-串联质谱法建立了检测大豆中大豆异黄酮含量的分析方法。试样经90%甲醇水提取后，6种大豆异黄酮在C[sub]18[/sub]色谱柱上以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相，进行液相色谱分离；质谱检测采用电喷雾正离子化模式和多反应监测模式（MRM）。结果表明，6种大豆异黄酮分别在0.01~0.5 mg/L（D、GL、G）和0.002~0.1 mg/L（De、GLe、Ge）范围内线性关系良好，相关系数（R）为0.9993~0.9998，定量限（LOQ）为0.0001 g/kg。在大豆空白样品添加浓度分别为0.01、0.05、0.2 g/kg（De、GLe、Ge）和0.2、1、2 g/kg（D、GL、G），6种大豆异黄酮的平均回收率为86.6%~96.2%，相对标准偏差（RSD）为1.07%~5.93%（n=6）。本方法简便、灵敏、抗干扰，适用于大豆中大豆异黄酮含量检测。关键词：超高效液相色谱-串联质谱；大豆；大豆异黄酮[align=center]Determination of soybeanisoflavone in soybean by ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry[/align][align=center]HU Jiangtao[/align][align=center]([i]Laboratory of Qualityand Safety Risk Assessment for Soybean products, Ministry of Agriculture andRural Affairs, Testing and Analysis Center of Heilongjiang Academy of LandReclamation Sciences, Jiamusi 154007,China[/i])[/align][b]Abstract：[/b]A methodwasdeveloped for the determination of soybeanisoflavone in soybean by ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS). The samples were extracted by 90% methanol-water, then 6 soybean isoflavones were separated on aWaters BEH C[sub]18[/sub] column with gradient elution with the mobile phase of0.1% formic acid and acetonitrile, and finally detected by positive eletrosprayionization-mass spectrometry(ESI[sup]+[/sup]-MS/MS) in multiple reactionmonitoring(MRM) mode. The results showed the linearities of 6 soybean isoflavones were good in the concentrationrange of 0.01~0.5 mg/L（D、GL、G）and 0.002~0.1 mg/L（De、GLe、Ge）, the correlation coefficients were 0.9993~0.9998. The limitof quantification(LOQ) of soybean isoflavone was 0.0001 g/kg. At the spiked levels of 0.01、0.05、0.2 g/kg（De、GLe、Ge）and 0.2、1、2 g/kg（D、GL、G） in the blank soybean samples, the mean recovery of soybeanisoflavone was 86.6%~96.2%, andthe relative standard deviation(RSD) was 1.07%~5.93%（n=6）.This method is simple,sensitive, anti-jamming and suitable for simultaneous determination of soybean isoflavone in soybean.[b]Key words: [/b]ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry (UPLC-MS/MS) soybean soybean isoflavone大豆异黄酮（soybean isoflavone）是一族化合物的统称，是大豆植物体内的一种次生代谢产物，是大豆主要活性成分之一，其母核为3-苯并吡喃酮，主要包括大豆苷、大豆黄苷、染料木苷及其相应苷元[sup][/sup]。研究表明，大豆异黄酮除具有天然抗氧化作用外[sup][/sup]，还具有降低胆固醇含量、预防多种癌症及改善妇女更年期综合征等多方面生物功效[sup][/sup]。大豆异黄酮主要存在于大豆籽实中，其总含量约为0.4~5 g/kg，其中大豆苷、大豆黄苷和染料木苷这三种含量约占总量的97%~98%，而其对应的苷元含量仅占2%~3%左右[sup][/sup]。目前，大豆异黄酮的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）[sup][/sup]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[sup][/sup]、紫外分光光度法[sup] [/sup]、质谱法（HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[sup][/sup]）等。紫外分光光度法[sup] [/sup]只能测定大豆异黄酮总量，且灵敏度不高；[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[sup][/sup]需要对异黄酮进行衍生，前处理复杂；目前，大豆异黄酮检测现有的国家标准GB/T 26625-2011[sup] [/sup]采用的是高效液相色谱法（HPLC），在实际检测过程中发现，由于紫外检测器灵敏度不高，存在个别样品中异黄酮相应苷元检测不到的情况；同时大豆提取液中含有蛋白、脂肪等杂质影响色谱柱柱效，以至于不能满足分离度要求，严重干扰低含量组分峰面积积分定量。而[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法质谱检测器灵敏度高，通过选定大豆异黄酮的特征离子，能有效去除上述杂质干扰，定量更加准确可靠。目前，国内外采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法检测大豆中大豆异黄酮含量的文献很少[sup][/sup]。本文对大豆中大豆异黄酮检测的前处理方法借鉴GB/T 26625-2011[sup][/sup]，提取液改用UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS测定。该方法前处理过程简便、灵敏度高、分析时间短、抗干扰能力强，适用于大批量大豆样品中大豆异黄酮含量的检测。[b]1 实验部分[/b]1.1 材料与试剂大豆苷（daidzin,记为D，以下同）、大豆黄苷（glycitin,GL）、染料木苷（genistin, G）、大豆素（daidzein,De）、大豆黄素（glycitein, GLe）、染料木素（genistein,Ge）（纯度≥99%，Dr.Ehrenstorfer公司）；甲醇、乙腈、甲酸（色谱纯，Fisher公司）；实验用水为Millipore纯水仪制备。1.2 仪器与设备Acquity UPLC型超高效液相色谱仪（Waters公司）；XEVO TQ-S三重四级杆质谱仪（Waters公司）；KQ-500DE型超声波仪（昆山市超声仪器有限公司）；涡旋混合器（IKA公司）；CR21GⅢ型高速离心机（HITACHI公司）。1.3 大豆异黄酮标准储备液的配置分别称取适量的D、GL、G、De、GLe、Ge标准品，用甲醇配置成质量浓度为1mg/mL标准储备液，于-18℃冰箱保存（有效期6个月），待用；使用时用10%甲醇水逐级稀释成所需浓度的混合标准工作液，现用现配。1.4 样品前处理提取：称取粉碎均与后的试样1.0g（精确到0.01g）于50mL聚乙烯离心管中，加入10.0 mL90%甲醇水，涡旋混合30 s后置于60℃超声波清洗器中提取30 min，在离心机中以15000 r/min离心5 min，将上清液转移至100 mL容量瓶中，残渣再加入10.0 mL90%甲醇水溶液按上述步骤提取后，合并两次上清液于100 mL容量瓶中，用10%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀。a）De、GLe、Ge的测定：取1 mL过0.22ｕm有机系微孔滤膜，供UPLC/MS/MS分析测定；b）D、GL、G的测定：由于D、GL、G含量较高，需要将a）中过完滤膜的待测液用10%甲醇水稀释50倍后，供UPLC/MS/MS分析测定。1.5 液相色谱及质谱条件液相色谱：色谱柱:Waters BEH C[sub]18[/sub]（1.7 μm，50mm×2.1mm）；柱温：30℃；流速：0.5 mL/min；进样量：1μL；流动相A：乙腈；流动相B：0.1%的甲酸水溶液。梯度洗脱程序：0~0.5min，10% A；0.5~3. 0 min，10%~100% A；3. 0 ~4. 0 min，100%A，4 ~4.1.1min，100% A~10% A，4.1 ~5.0min 10% A。质谱：离子源：电喷雾离子源( ESI [sup]+[/sup] ) ；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测( MRM)；毛细管电压：3.2 kv；离子源温度：150℃；去溶剂气温度：500℃；去溶剂气流量：1000 L /h；定性、定量离子对及碰撞能量见表1。[align=center]表1大豆异黄酮的质谱参数[/align][align=center]Table 1 MRM parameters of soybean isoflavone[/align] [table][tr][td] [align=center]Analyte[/align] [/td][td] [align=center]Cone/V[/align] [/td][td] [align=center]Parent ion/(m/z)[/align] [/td][td] [align=center]Daughter ion/(m/z)[/align] [/td][td] [align=center]Collision energy/V[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]417[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]255﹡[/align] 137[/td][td] [align=center]27[/align] [align=center]18[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]G[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]433[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]271﹡[/align] 153[/td][td] [align=center]21[/align] [align=center]50[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]GL[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]447[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]285﹡[/align] 270[/td][td] [align=center]25[/align] [align=center]46[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]De[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]255[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]137﹡[/align] 181[/td][td] [align=center]30[/align] [align=center]26[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]Ge[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]271[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]153﹡[/align] 215[/td][td] [align=center]30[/align] [align=center]25[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]GLe[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]285[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]242﹡[/align] 168[/td][td] [align=center]27[/align] [align=center]35[/align] [/td][/tr][/table]﹡quantitativeion[b]2 结果与讨论[/b]2.1 色谱及质谱条件的优化流动相的选择：对比了酸性体系（0.1%甲酸水溶液）与非酸性体系（纯水、乙酸铵溶液）分别与甲醇、乙腈的流动相体系组合，结果发现目标物在酸性体系中比非酸性体系响应更高、峰形更好；同时大豆提取液中含有蛋白、脂肪等杂质可能会残留在色谱柱上，影响色谱柱的使用寿命，而乙腈比甲醇体系洗脱能力更强，可以有效去这些杂质。综合考虑目标物信号强度、色谱分离效果以及除杂等因素，本研究采用0.1%甲酸水溶液+乙腈流动相体系。质谱的选择：根据6种大豆异黄酮的分子量，用10%甲醇水配置1.0 mg/L 大豆异黄酮标准溶液直接注射到质谱中，在正离子模式下分别对各种组分进行母离子及对应子离子全扫描，最终确定的质谱条件见表1。2.2 质谱法（UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS）与色谱法（HPLC）的比较国家标准《GB/T 26625-2011粮油检验大豆异黄酮含量测定高效液相色谱法》[sup][/sup]中规定的大豆异黄酮检测方法为HPLC法。对同一大豆样品分别采用本文UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法（MRM色谱图见图1、2）和GB/T 26625 HPLC法检测，结果表明这两种方法测定的大豆异黄酮总含量值基本一致。由于De、GLe、Ge这三种苷元在大豆中含量很低，用HPLC法检测时，紫外检测器灵敏度不高，存在个别样品中上述三种组分检测缺失的情况；同时在实际大批量样品检测中发现，随着进样次数的增加，色谱柱柱效下降，大豆提取液中存在的蛋白、脂肪等杂质对含量低的目标物峰干扰越来越大，定量困难。研究发现，同浓度的大豆异黄酮在质谱检测器上的响应值要远远超过紫外检测器，同时质谱法可以通过选定大豆异黄酮的特征离子，有效地去除杂质的干扰，其目标物分离度不受色谱柱进样次数增加的影响，定量更加准确可靠。[align=center][img=,690,651]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050912587968_4111_3299836_3.jpg!w690x651.jpg[/img][/align][align=center]图1 大豆异黄酮标准溶液（0.01mg/L）MRM色谱图[/align][align=center]Fig.1 MRM chromatograms of soybean isoflavone standard solution at 0.01 mg/L[/align][align=center][/align][align=center][img=,690,653]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050913342201_5843_3299836_3.jpg!w690x653.jpg[/img][/align][align=center]图2 大豆样品中大豆异黄酮MRM色谱图[/align][align=center]Fig.2 MRM chromatograms of soybean isoflavone in soybean[/align]2.3线性范围和定量限吸取不同体积的大豆异黄酮标准储备液（1.3），用10%甲醇水分别配置0.002、0.005、0.01、0.05、0.1（De、GLe、Ge）和0.01、0.05、0.1、0.2、0.5（D、GL、G）的大豆异黄酮上机混合标准溶液，以各自定量离子的峰面积为Y对应质量浓度X（mg/L）做标准曲线，得到的线性方程和相关系数见表2。结果表明，大豆异黄酮标准溶液在各自浓度范围内线性良好，相关系数R为0.9993~0.9999。以10倍信噪比（S/N）计算，大豆异黄酮上机液最低定量浓度为0.001 mg/L，通过公式（1）计算得到大豆中大豆异黄酮含量，最终确定本方法大豆异黄酮的定量限（LOQ）为0.0001 g/kg。糠氨酸质量分数计算公式：[align=center][img=,207,87]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050915166414_5621_3299836_3.jpg!w207x87.jpg[/img] ………………（1）[/align] 式中：X为试样中大豆异黄酮含量，以g/kg计；C为大豆异黄酮上机浓度（mg/L）；V为定容体积（V=100）。表2 大豆异黄酮标准溶液的线性方程和相关系数[align=center]Table 2 Linear equation and correlation of soybean isoflavone in 10% methanol-water standard solutions[/align] [table][tr][td] [align=center]Analyte[/align] [/td][td] [align=center]Linear range/(mg/L)[/align] [/td][td] [align=center]Linear equation[/align] [/td][td] [align=center]R[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D[/align] [align=center]GL[/align] [align=center]G[/align] [align=center]De[/align] [align=center]GLe[/align] [align=center]Ge[/align] [/td][td] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [/td][td] [align=center]Y=2393.6x+479.38[/align] Y=1885x+139.66 [align=center]Y=1470.9x+187.97[/align] [align=center]Y=4287.9x+442.79[/align] [align=center]Y=3521.7x-103.62[/align] [align=center]Y=1993x+122.79[/align] [/td][td] [align=center]0.9995[/align] [align=center]0.9999[/align] [align=center]0.9993[/align] [align=center]0.9998[/align] [align=center]0.9997[/align] [align=center]0.9998[/align] [/td][td] [/td][/tr][/table]2.4回收率和精密度大豆中De、GLe、Ge含量较低，而D、GL、G含量较高，故本方法准确度实验分为高低浓度梯度组进行加标。称取大豆试样1.00 g，分别添加0.01、0.05、0.2 g/kg（De、GLe、Ge）和0.2、1、2 g/kg（D、GL、G），每个水平重复6次，同时做该大豆的空白本底实验。按照1.4前处理方法处理后上机检测，计算回收率（扣除空白），结果表明：不同添加浓度下，De、GLe、Ge的平均回收率为91.7%~96.2%，相对标准偏差（RSD，n=6）为2.78%~5.93%；D、GL、G的平均回收率为86.6%~93.8%，相对标准偏差（RSD，n=6）为1.07%~3.77%。[b]3 结语[/b]本文建立了超高效液相色谱-串联质谱法（UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS）测定大豆中大豆异黄酮含量的分析方法。该方法灵敏度高，线性范围宽，能同时覆盖大豆中多梯度浓度大豆异黄酮组分含量的测定。同时该方法具有较高的准确度和精密度，前处理步骤简单，分析速度快，可有效避免由于色谱柱柱效下降对最终检测结果的影响，特别适合大批量样品的检测。田娟娟, 宋宏哲, 张飞, 等. 水剂法纯化大豆异黄酮的研究. 大豆通报, 2005, 6:19-22. Hagen M K, Ludke A, Araujo A S, et al.Antioxidant characterization of soy derived products in vitro and the effect ofa soy diet on peripheral markers of oxidative stress in a heart disease model .Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, 2012,90(8):1095-1103. 徐春华, 张治广, 谢明杰, 等. 大豆异黄酮的抗氧化和抗肿瘤活性研究研究 . 大豆科学, 2010, 29(5): 870-873. 李俏俏, 王清路, 薛金艳, 等. 大豆异黄酮对绝经女性血清中脂类物质的影响的研究 . 大豆科学, 2009, 28(1):172-174. 胡润芳, 张玉梅, 陈宇华, 等. 大豆异黄酮含量的初步研究. 东南园艺, 2017, 6:9-11. 刘琴, 朱媛媛, 白兴梁. 不同种类大豆中大豆异黄酮含量及抗氧化性比较. 北京工商大学学报（自然科学版）, 2012, 30(6): 45-51. 袁凤杰, 姜莹, 董德坤, 等. 中国大豆核心种质异黄酮含量分析.中国粮油学报, 2011, 26(2):5-8. Tepavcevic V, Atanackovic M,Miladinovic J,et al. Isoflavone composition，total polyphenolic content，and antioxidant activity in soybeans of different origin. MedFood,2010,13(3):657-664 GB/T 26625-2011《粮油检验大豆异黄酮含量测定高效液相色谱法》. Liggins J,Bluck J C. Deidzein and genistein content of fruits and nuts. Journal ofNutritional Biochemistry,2000,11(6):326-331. 鞠兴荣, 袁建, 汪海峰. 三波长紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量的研究. 食品科学, 2001, 22(5):46-48.
【作者】 郭磊； 刘君；【机构】 哈药集团三精制药股份有限公司；【摘要】 目的:改善色谱分离条件,提高高效液相色谱法测定双黄连口服液绿原酸含量的准确度。方法:以Dikma DiamonsilC18柱(4.6×250mm,5μm)为色谱柱;水-冰醋酸(80∶1)、甲醇为流动相,梯度洗脱;检测波长324nm。结果:绿原酸进样量在7.984～79.84μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.99999),平均回收率为99.97%,RSD为0.17%(n=6)。结论:该方法简便、快速,结果准确、可靠,可替代2005版《中国药典》双黄连口服液中绿原酸的含量测定方法。 更多还原【关键词】 HPLC； 双黄连口服液； 绿原酸； 梯度洗脱； http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061542_381946_2352694_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061542_381947_2352694_3.jpg
花青苷和黄酮类(多酚类化合物Anthocyans and flavonoids)分子结构特点：含有苯并吡喃环，它们是植物组织中的水溶性色素的主要成分，具有各种色泽。常见有三种类型：花青苷素、黄酮类和儿茶素，均属于多酚化合物类，大量存在于自然界中。1．花青苷的色泽——红色(1)花青苷在酸性条件下呈红色，在中性条件下呈无色，在碱性条件下呈蓝色。(2)金属离子sn2+、Fe2+、Cu2+、Al3+与花青苷结合使花青苷呈蓝色。(3)亚硫酸盐类可以对花青苷进行漂白使之褪色，通过加热或酸化处理可去掉亚硫酸，使花青苷再生，重新恢复原来的红色。2．无色花青苷(Leucoanthicyanins)无色花青苷的结构与花青苷相似，以三聚体以上存在。自然界中无色花青苷存在于苹果、梨、葡萄和山楂等水果之中。它们与涩味有关，在无机酸中加热可以转化为花青苷，可参加酶促褐变反应。既可赋予食品(如酒、茶、香蕉、巧克力、越橘)以特殊的风味，也可影响食品的色泽，如使罐头果肉变红、变褐，在啤酒或其他酒中形成混浊物。3．黄酮类黄酮是一种多种多样，广泛存在着的呈无色至黄色的色素，其结构上与花青苷类不同之处在于它具有的是苯并吡喃酮结构。黄酮类的热稳定性比花青苷类好，热加工对它们的破坏不大。一些金属离子形成深色化合物，往往会造成食品的异常色泽。4．单宁(Tannin)来源：单宁存在于柿子、茶叶、咖啡、石榴等植物组织中，在未成熟时含量尤为多，它们的结构较为复杂，多是高分子多元酚类的衍生物，水解后可生成葡萄糖、没食子酸或其他多酚酸(鞣酸)。性质：①单宁与食品的涩味有关，能参加酶促褐变反应；②与Fe3+形成黑色物质；③与蛋白质形成不溶性沉淀可以用来对果汁的澄清；④含单宁高的植物可以作为制革工业中的植物性鞣质原料。
检测发酵液中的有机酸，黄酮，皂苷、木脂素、葡萄糖、多糖用什么色谱柱？发酵液的PH范围在2-5之间
用荧光光谱仪测定铋黄铜中铅元素的含量，稳定性差如何能提高其稳定性让误差在正负6ppm?
测量黄铜荧光光谱仪比直读光谱仪好在哪里？有销售告诉我，荧光光谱仪在黄铜方面比CCD直读光谱仪要好，说是黄铜有铜和锌两种常量，直读光谱仪测量锌会测量不准，然后铜的值算出来也就不准了，测量黄铜里面的锌真的不准吗？
杜仲黄酮清除亚硝酸盐作用的研究 实验目的：本实验通过对杜仲黄酮清除亚硝酸盐作用的研究，为研究抗肿瘤作用提供研究依据，也为利用杜仲这一天然资源提供了极有力的实验依据； 实验方法：采用95%乙醇冷浸提取杜仲中的黄酮类成分，根据在弱酸性条件下，亚硝酸盐能与氨基苯磺酸重氮化，再与α-萘胺偶合生成红色的化合物的原理，采用紫外光解法测定杜仲黄酮对亚硝酸盐的清除作用； 结果与讨论: 杜仲提取物中含黄酮类化合物在1.5%左右，对亚硝酸盐的清除率在70%--80%；用95%乙醇提取效果良好，适当浓度对亚硝酸盐的清除作用明显。 杜仲(Eucommiaulmoides Oliv)为杜仲科杜仲属落叶乔木，是我国特有的珍稀保护树种和传统名贵中药。杜仲主要含木脂素及其甙类、环烯醚萜类有机酸类及氨基酸、杜仲胶、微量元素等，杜仲在我国分布很广，适应性很强，主要分布于贵州、四川、湖北、湖南及陕西等省，其它地区也有引栽。杜仲是一种经济作物，神农本草经将其列为名贵中药和上品，杜仲皮和叶具有降压、扩张血管以及增强免疫功能的作用。 亚硝酸盐是一种允许使用的食品添加剂,在食品加工过程中主要作为发色剂、增香剂和防腐剂，是肉食类制品加工中应用历史最长、最为广泛的添加剂之一。随着农作物生产过程中大量化学肥料的使用，导致蔬菜等植物性食品中亚硝酸盐的含量升高。亚硝酸盐是亚硝胺类化合物的前体物质，在自然界和人体胃的酸性环境中，极易与胺化合,生成亚硝胺。亚硝胺类物质是一类具有很强致癌性的物质。动物实验和流行病学的研究都证明生物类黄酮具有广泛的抑癌和防癌作用，杜仲黄酮对亚硝酸盐的直接消除作用未见深入报道，本实验对此问题进行了实验研究。 现代药理研究报道：杜仲叶的化学成分及其药理作用与皮基本相似，因资源较易得，已成为当今药用开发热点，并取得不少成就，如杜仲胶囊、杜仲平压片、杜仲壮骨丸、杜仲冲剂等。日本以杜仲叶作为鸡饲料添加剂，生产低胆固醇和高密度脂蛋白的鸡蛋，用杜仲叶或其浸膏制成多种杜仲饮料等保健药品，作为抗高血压、高血脂等疾病药物。杜仲的降压作用是经过多年临床证实的，现代药理实验有效地揭示了这一作用的机理。有关杜仲抗肿瘤作用虽经现代药理实验证实，但尚需进一步研究，有报道称黄酮类成分可有效抑制亚硝酸盐的致癌作用，本试验通过对杜仲中黄酮类成分对清除亚硝酸盐作用的研究，为进一步证实抗肿瘤作用提供有力的实验依据。材料与方法1.仪器、试剂与药品1.1[size=14p
核磁共振波谱对一个黄酮化合物的结构分析与鉴定淡黄色粉末，mp 220～222℃。20D：-33.6（c，0.10，CH3OH）；AlCl3反应呈阳性，提示该化合物为黄酮类化合物。ESI-MS谱给出准分子离子(m/z)：421-；HRESI-MS给出+峰m/z：423.09159（计算值：423.09219），分子量为 422.08492，分子式为C19H18O11，不饱和度为 11.IR谱显示有酚羟基(3 356.9)，羰基(1 649.4)，苯环（1 602.2，1 472.7），碳氧键(1 288.4)；http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301101_520798_2672081_3.png1H-NMR谱中，5.05(1H，d，J=7.5Hz)有一糖端基氢信号，δ 3.16～3.71 有糖上其它氢信号.http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301103_520799_2672081_3.png13C-NMR谱中，δ60～100 有一组糖信号，TLC原位酸水解检出葡萄糖，说明该化合物含有一分子葡萄糖。13C-NMR谱中，δ90～180芳香区有 14 个碳信号，减去一个葡萄糖端基碳，还有 13 个碳信号，根据有关文献，推断该化合物母核为黄酮类化合物。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301104_520800_2672081_3.pngDEPT谱表明该化合物含有 1 个亚甲基，9 个次甲基，9个季碳，扣除葡萄糖的 1 个亚甲基，5 个次甲基，剩下 4 个次甲基，9 个季碳，表明该酮有四个芳氢被取代。δ179.1 为羰基碳信号，δ162.2，163.4，154.5，144.0，156.9，151.2 应为与氧相连的碳信号，除母核上两个连氧碳外，剩余四个碳应连有含氧基团。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301105_520801_2672081_3.png13C-NMR谱中，除了一组葡萄糖信号和 酮母核信号外，未见其它碳信号，可以断定黄酮母核上的四个含氧取代基团均为羟基。1H-NMR谱中，δ7.38(1H,s)和δ6.88(1H,s)为两个孤立芳氢信号，δ6.62(1H,d,J=2Hz)和δ6.38(1H,d,J=2.0Hz)为一组间位偶合氢信号，说明黄酮母核两个芳环中一个被邻位取代，另一个被间位取代。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301106_520802_2672081_3.png由以上信息可知，该化合物含有一个葡萄糖，一个 1,3,6,7-四羟基—黄酮。通过HSQC和HMBC，对该化合物的碳、氢信号进行了归属(如：表格)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301109_520804_2672081_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301109_520805_2672081_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301109_520806_2672081_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301109_520807_2672081_3.png结合HMBC谱发现，δ13.14 羟基氢与δ162.2（1 位碳）和δ98.2（2 位碳）及δ103.1（8b位碳）远程相关，证明此羟基连在 1 位碳上。δ6.38 氢与δ163.4（3 位碳）和δ162.2（1 位碳）及δ103.1（8b位碳）、δ94.2（4 位碳）远程相关，证明此氢连在 2 位碳上。δ6.6 氢与δ163.4（3 位碳）和δ156.9（4a位碳）及δ103.1（8b位碳）、δ98.2（2 位碳）远程相关，证明此氢连在 4 位碳上。δ6.88 [fon
目前，[b]我国是植物提取物的第一原料供应大国，也是植物提取物应用大国[/b]，据中国海关数据显示，2019年，我国植物提取物行业出口额达23.72亿美元（美国是最大的进口市场），进口额达8.49亿美元（美国、印尼和印度是前三进口市场）。在全球“禁抗、限抗”大背景下，国内外对可饲用植物提取物的需求日益增长，对于其产品和相应检测标准的需求也日益强烈。因为[b]没有统一的相关标准[/b]，这就严重影响了其生产效率以及资源浪费，对从事可饲用植物提取物的生产、加工以及进出口贸易的相关企业造成了极大的困扰。因此必须尽快制定颁布并实施可饲用植物提取物的相关标准并实现标准的国际化，确保在国际贸易中有据可依，提高我国可饲用天然植物提取物在国际上的竞争力。[b]2024年3月15日，国家标准《饲料添加剂淫羊藿提取物中黄酮醇苷的测定 高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法》 正式发布[/b]。该标准由TC76（全国饲料工业标准化技术委员会）归口 ，主管部门为国家标准化管理委员会。主要起草单位为中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 、中国医学科学院药用植物研究所 、天津博菲德科技有限公司 、湖南农业大学 、北京爱绿生物科技有限公司 、中国农业科学院饲料研究所。[来源：仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]
多多药业有限公司生产的双黄连注射液被叫停。今天，国家食品药品监督管理局在其网站上发出通知，要求各地暂停销售使用标示为多多药业有限公司生产的双黄连注射液。 16日，国家药品不良反应监测中心报告称，标示为黑龙江多多药业有限公司生产的双黄连注射液在使用中出现严重不良事件。为确保公众用药安全，决定暂停销售和使用标示为多多药业有限公司生产的双黄连注射液。 目前，国家食品药品监督管理局和卫生部正在对该事件发生的原因进行调查。 大家对此事件如何看待的，有什么想法、看法、观点，说说，晒晒！[em09502]
【作者】 王晓辉； 刘涛； 李清； 陈晓辉； 毕开顺；【Author】 WANG Xiaohui,LIU Tao,LI Qing,CHEN Xiaohui,BI Kaishun(School of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China)【机构】 沈阳药科大学药学院； 沈阳药科大学药学院 辽宁沈阳110016； 辽宁沈阳110016；【摘要】 对蒙古黄芪中5种异黄酮类成分的含量进行了反相高效液相色谱法测定。色谱柱为D iam ons il C18柱,流动相为乙腈-水系统,梯度洗脱,检测波长230nm,柱温35℃。毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷在20.12~201.2m g/L、芒丙花素-7-O-β-D-葡萄糖苷在4.62~46.2m g/L、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷在4.86~48.6m g/L、毛蕊异黄酮在9.24~92.4m g/L、芒丙花素在6.92~69.2m g/L时峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999 2,0.999 7,0.999 7,0.999 5和0.999 5。5种成分的加样回收率均高于94%,相对标准偏差(RSD)小于3.2%(n=9)。该法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于黄芪药材中5种主要异黄酮类成分的含量测定。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207301613_380608_2379123_3.jpg
[color=#333333]甘草是一种药食同源的草本植物,广泛用于中药处方与食品工业中。现今使用的甘草主要为其根与根状茎,而地上部分却作为畜牧饲料或燃料低值化处理。目前关于甘草根及根状茎的成分及生理活性研究已相当充分,而对甘草地上部分却研究较少。本论文通过对比分析光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）叶与根中物质组成和生理活性,确定光果甘草叶的研究价值 通过色谱分离和光谱技术分离并鉴定了光果甘草叶中的黄酮并对其活性进行评价 优化了光果甘草叶黄酮的测定和提取方法,并通过大孔树脂对光果甘草叶黄酮进行富集研究 研究了光果甘草叶黄酮对猪肉及其制品储藏过程中油脂氧化和蛋白氧化的抑制作用,以期为甘草叶的高值利用提供理论指导。[/color]
【作者】 翁水旺； 连劲龙；【Author】 Weng Shuiwang (Fujian Provincial Institute for Drug Control,Fuzhou 350001)Lian Jinlong (Fujian University of Medical Sciences,Fuzhou 350004)【机构】 福建省药品检验所； 福建医科大学 福州 350001； 福州 350004；【摘要】 目的:采用高效液相色谱法测定醋柳黄酮片中异鼠李素和槲皮素的含量。方法:采用Diamonsil C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.02mol/L磷酸溶液（54:46）,柱温40℃,检测波长368nm。结果:异鼠李素、槲皮素的线性范围分别为:6.5～32μg/ml（r=0.9996）、2.5～12.4 μg/ml（r=0.9991）,平均回收率为99.4％、99.8％。日内精密度RSD分别为1.22％、1.32％（n=6）;日间精密度RSD为1.07％、1.35％（n=5）。结论:本方法简便、准确,适用于该药的质量控制。 更多还原【Abstract】 Objective: A method was established for the determination of isorhamnetine and quercetin in flavone hippophaes tablets by HPLC.Methods:The HPLC system consisted of Diamonsil C18 column (250 mm×4.6 mm, 5μm), mobile phase of methanol-0.02mol/L phosphoric acid (54:46) .column temperature at 40℃,with detection at 368 nm. Results:The linear range of isorhamnetine and quercetin were 6.5-32μg/ml (r = 0.9996) and 2.5-12.4 μg/ml (r= 0.9991).The average recoveries were 99.4% and 99.8%,respectively.The wit... 更多还原【关键词】 醋柳黄酮片； 异鼠李素； 槲皮素； 高效液相色谱法； 【Key words】 Flavone hippophaes tablets； Isorhamnetine； Quercetin； HPLC；
[color=#444444]利用高效液相色谱检测黄芩黄酮类根茎叶中的有效成分，色谱峰均出现拖尾现象，尝试过的流动相有甲醇和0.1%磷酸水，甲醇和0.2%磷酸水，乙腈和0.2%磷酸水，甲酸和1%甲酸水，乙腈和1%甲酸水等色谱条件，但是色谱峰均出现拖尾现象，[/color][color=#444444]求助各位大神，有木有什么好的办法拯救色谱峰拖尾现象！！！谢谢大家！！[/color]
近日，中科院大连化学物理研究所赵宗保研究员领导的生物质高效转化研究组（1816组）在生物质能源研究中，首次实现葡萄糖和木糖同步利用生产油脂。这一重要研究成果于近日正式发表在《生物燃料生物技术》（Biotechnology for Biofuels，Hu et al., Biotechnology for Biofuels, 2011, 4: 25）上。生物质主要由纤维素、半纤维素和木质素组成，其水解产物具有葡萄糖和木糖并存的基本特点。将生物质水解产物转化为液体燃料面临的共性难点问题之一是葡萄糖和木糖并存的原料难以被微生物高效利用。生物柴油是重要的液体生物燃料，其规模化应用的瓶颈问题是油脂原料供应不足。微生物油脂具有与动植物油脂相近的脂肪酸组成，可用于制备生物柴油。大连化物所生物质高效转化研究组多年来致力于将生物质转化为生物柴油的研究。通过筛选发现，部分产油酵母可同步利用葡萄糖和木糖，在胞内积累油脂，菌体油脂含量达到59%。直接利用玉米秸秆水解液培养该产油酵母，菌体油脂含量达到39%。该研究成果对发展混合糖同步生物转化技术、降低微生物油脂生产原料成本、拓展生物柴油产业原料，均具有重要意义。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011092710581567.jpgdoi:10.1186/1754-6834-4-25PMC:PMID:Simultaneous utilization of glucose and xylose for lipid production by Trichosporon cutaneumCuimin Hu, Siguo Wu, Qian Wang, Guojie Jin, Hongwei Shen and Zongbao K Zhao Background Biochemical conversion of lignocellulose hydrolysates remains challenging, largely because most microbial processes have markedly reduced efficiency in the presence of both hexoses and pentoses. Thus, identification of microorganisms capable of efficient and simultaneous utilization of both glucose and xylose is pivotal to improving this process. Results In this study, we found that the oleaginous yeast strain Trichosporon cutaneum AS 2.571 assimilated glucose and xylose simultaneously, and accumulated intracellular lipid up to 59 wt% with a lipid coefficient up to 0.17 g/g sugar, upon cultivation on a 2:1 glucose/xylose mixture in a 3-liter stirred-tank bioreactor. In addition, no classic pattern of diauxic growth behavior was seen; the microbial cell mass increased during the whole culture process without any lag periods. In shake-flask cultures with different initial glucose:xylose ratios, glucose and xylose were consumed simultaneously at rates roughly proportional to their individual concentrations in the medium, leading to complete utilization of both sugars at the same time. Simultaneous utilization of glucose and xylose was also seen during fermentation of corn-stover hydrolysate with a lipid content and coefficient of 39.2% and 0.15 g/g sugar, respectively. The lipid produced had a fatty-acid compositional profile similar to those of conventional vegetable oil, indicating that it could have potential as a raw material for biodiesel production. Conclusion Efficient lipid production with simultaneous consumption of glucose and xylose was achieved in this study. This process provides an exciting opportunity to transform lignocellulosic materials into biofuel molecules, and should also encourage further study to elucidate this unique sugar-assimilation mechanism.
[b][size=15px][color=#595959]青刺果(Prinsepia utilis Royle)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]，又称阿纳斯果(Anas fruit)，是中国云南省一种独特的多年生木本油料植物。据《东巴经》和《滇南本草》等古籍记载，当地纳西族、藏族和摩梭人广泛利用青刺的根和叶果实，用于各种用途。这些包括治疗轻度至中度特异性皮炎，滋润皮肤，提供防止紫外线伤害的保护，帮助孕妇分娩，保护胃健康，降低动脉硬化的风险，以及[b]延缓衰老[/b]。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]该研究对油提取的残余物有效地重复利用，并在随后的提取和分离过程中鉴定出[b]黄酮[/b]类化合物。青刺果黄酮类化合物的[b]抗衰老作用[/b]尚未有系统的研究。因此，该研究的目的是[b]探讨青刺果黄酮的抗衰老特性[/b]。 [/color][/size] [size=15px][color=#595959][size=16px][/size][/color][/size][size=15px][color=#595959]首先采用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法等分析技术，对[b]青刺果黄酮（PURF）[/b]进行成分鉴定。接下来，DPPH、羟基自由基、超氧阴离子O2?、胶原酶和弹性蛋白酶通过体外生化试验进行初步检测。采用[b]斑马鱼[/b]模型验证其抗氧化性能，采用[b]D-半乳糖诱导小鼠衰老模型[/b]验证其抗衰老作用。采用[b]自然衰老HFF模型[/b]研究PURF的抗衰老机制。此外，使用[b]3D全层皮肤模型（3D full T-Skin?）[/b]模型确认了抗衰老靶点。 [/color][/size] [size=15px][color=#595959]体外生化实验表明，黄酮类化合物通过抑制DPPH、羟基自由基、超氧阴离子O2?、胶原酶和弹性酶，具有较强的抗氧化活性和抗衰老潜力。显著增强对斑马鱼的抗氧化作用，同时抑制ROS和炎症损伤，上调COL1A1、COL3A1、AMPK、mTOR基因表达，下调MMP-9、TGF-β、p21、p16基因表达，提示其潜在的抗衰老能力。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]从D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型中发现，PURF可显著提高SOD水平，同时降低HYP和MDA水平。此外，将PURF给予HFF细胞和3D全T-Skin?模型时，基因和蛋白的表达趋势一致，COL1A1、COL3A1、AMPK和mTOR基因上调，TGF-β、MMP-1、MMP-9、p21和p16基因下调。因此，这些初步研究结果表明，[b]黄酮可以通过调节AMPK/mTOR/TGF-β信号通路发挥作用[/b]。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][font=&][/font][font=&][/font][/color][/size][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][font=&][/font][/color][/size][size=15px][color=#595959]云南天然青刺果渣籽既往被认为是农业废弃物，该研究[b]成功提取并分离了其黄酮类成分，初步研究证明了它作为一种环保的抗衰老原料的潜力[/b]。[/color][/size][size=15px][color=#595959][font=&][/font][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]
红芪是豆科植物多序岩黄芪Hedysarum polybotrys Hand. -Mazz.的干燥根，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿的功效，临床主要用于治疗中气下陷、表虚自汗、气虚水肿及气虚血衰等[1]。现代药学研究表明红芪主要活性成分为多糖、黄酮和皂苷等[2-3]，具有抗氧化、调节免疫力、抗肿瘤、降血糖等药理作用，目前研究多集中在红芪多糖类、红芪黄酮类成分，而药理作用研究较少，但红芪黄酮类成分是除红芪多糖外主要的活性成分之一，具有抗肿瘤、抗氧化、改善肺纤维化、抗骨质疏松、降低骨骼肌损伤等药理作用[4]，且在抗氧化和改善肺纤维化方面的疗效优于黄芪。基于此，本文通过总结红芪黄酮类成分的药理作用及机制，为红芪黄酮类成分的进一步研究及临床应用提供理论依据。 1 抗氧化 自由基过氧化对于人体健康有直接或间接的影响，通过提高机体抗氧化能力，为人体氧化损伤疾病提供理论依据。研究表明黄酮类化合物能抑制脂质过氧化，有效清除自由基，具有良好的抗氧化作用[5]。赵沙沙等[6]研究表明，与其他红芪提取溶剂相比，95%乙醇提取物抗氧化活性最高，其中芒柄花素、美迪紫檀素、芒柄花苷单体的含量在95%乙醇提取物中达到2.2 mg/g，且芒柄花苷含量与提取物抗氧化活性存在一定量效关系。杨秀娟等[7]通过优化红芪总黄酮提取工艺，表明红芪黄酮类化合物具有较强的体外抗氧化活性。袁菊丽等[8]用正交法优化红芪总黄酮超声提取工艺，以其抗氧化活性为指标，发现红芪总黄酮溶液1～10 mg/mL具有良好的体外抗氧化能力，且呈一定的量效关系。 除具有良好的体外抗氧化活性，红芪黄酮类化合物还具有显著的体内抗氧化活性。红芪总黄酮对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用，且各剂量均可显著抑制丙二醛损伤，降低乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）释放及细胞内丙二醛含量，提高LDH和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性，其作用机制可能与清除氧自由基，提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关[9]。王伟等[10]研究表明红芪黄酮荭草素5 μmol/L通过促进核因子E2相关因子2（nuclear factor E2 related factor 2，Nrf2）的表达与移位，激活Nrf2发挥较好的抗氧化作用，使细胞中血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）表达量处于较低水平，保持较低的氧化应激水平，进而达到抗氧化作用。综上，红芪黄酮类成分具有显著的体内、外抗氧化活性，其作用机制可能与调控LDH、SOD和丙二醛等多种酶的含量及抗氧化相关因子的表达有关。具体机制见图1。 图片 2 改善肺纤维化 肺纤维化是一类极为复杂难治的呼吸系统疾病，其最重要的病理特点是成纤维细胞增殖、大量细胞外基质聚集、肺组织结构破坏。目前，临床上常用的改善肺纤维化药物多为激素类药物，这些药物不良反应多，价格昂贵[11-13]。研究表明，中医药在防治肺纤维化方面具有独特的优势，单味中药及其有效成分或中药复方可靶向调节相关信号通路而改善肺纤维化[14]。大量研究表明红芪黄酮类化合物具有显著的改善肺纤维化作用，并且红芪黄酮类化合物改善肺纤维化作用优于黄芪黄酮，其作用机制为减少细胞外基质沉积和抑制胶原纤维增生等。 2.1 减少细胞外基质沉积 张毅等[15]通过观察红芪总黄酮对博莱霉素5 mg/kg诱导的肺间质纤维化模型大鼠转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）蛋白表达及肺组织超微结构的影响，发现红芪总黄酮7.5、15.0、22.5 mg/kg均能抑制TGF-β1表达，显著改善肺纤维化大鼠的病理损伤、减少细胞外基质沉积，且以红芪总黄酮高剂量组效果作用最为明显。李娟等[16]通过观察红芪黄酮对博莱霉素5 mg/kg诱导肺间质纤维化模型大鼠肺功能的影响，表明红芪总黄酮7.5、15.0、30.0 mg/kg均能改善肺纤维化核型大鼠肺功能，且对肺的动态顺应性指标、容量指标及体积流量指标等均有不同程度的改善作用，提示红芪黄酮具有一定的抗肺纤维化的作用，其机制仍有待进一步深入探讨。 2.2 抑制胶原纤维增生 蔺兴遥等[17]通过研究红芪总黄酮37.41 mg/kg给药及气溶胶（气溶胶浓度3.5～4.0 mg/m3，给药时间40 min）给药方式对肺纤维化的影响，发现各红芪总黄酮给药组都具有改善肺纤维化的作用，肺组织中透明质酸及层黏连蛋白（laminin，LN）的含量显著下降，且气溶胶给药组疗效更为明显。并且比较了黄芪总黄酮15 mg/kg和红芪总黄酮15 mg/kg对肺间质纤维化疾病大鼠模型肺功能的影响，发现二者均具有抑制大鼠肺间质纤维化的作用，且红芪总黄酮疗效优于黄芪总黄酮[18]。苏韫等[19]在红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、透明质酸及LN的影响研究中发现，红芪总黄酮7.5、15.0、22.5 mg/kg均能通过减轻肺泡炎症，抑制胶原纤维增生、沉积，进而降低肺组织中透明质酸及LN的含量，来改善肺纤维化，其中红芪总黄酮疗效优于红芪多糖和红芪皂苷。王艺等[20]研究发现红芪总黄酮7.5、15.0、30.0 mg/kg均能通过降低肺组织中透明质酸、LN、羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）水平抵抗博来霉素诱导的大鼠肺间质纤维化，均可不同程度的改善大鼠肺间质纤维化。舍雅莉等[21]和李娟等[22]研究发现红芪总黄酮7.5、15.0、22.5 mg/kg可通过抑制肺纤维化大鼠微血管新生相关促进因子来改善肺纤维化，且呈剂量相关性。苏韫等[23]采用气管内滴注博莱霉素法建立肺纤维化模型，通过ig红芪总黄酮7.5、15.0、22.5 mg/kg 28 d，在第7、14、28天分3次采集标本并进行相关指标检测，结果发现红芪总黄酮可通过抑制基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）及基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）蛋白表达，使MMPs/TIMPs趋于平衡，来抑制肺纤维化进程。具体机制见图2。 图片 3 抗肿瘤 癌症是我国最难治愈的疾病之一，随着科技的不断发展，治疗癌症的手段也越来越多，但其治疗手段对人体的不良反应较大，而癌症又是一项治疗难度较大的疾病，故优化防治癌症的手段尤为重要。红芪异黄酮类是红芪的主要活性成分之一，且与红芪的生物特性息息相关[1]，其中毛蕊异黄酮、芒柄花素成分是红芪药材质量评价的重要指标性成分[24]，且对肝癌[25]、胃癌[26]、非小细胞肺癌[27]、宫颈癌[28]等均有治疗作用。研究表明，红芪黄酮类成分对胃癌、白血病、肺癌和前列腺癌等均有显著防治作用，其抗肿瘤的作用机制可能是通过抑制细胞生长增殖、诱导细胞凋亡和干扰细胞周期等。 3.1 抑制细胞增殖 红芪异黄酮类成分芒柄花素60 μmol/L通过在体外诱导细胞周期停滞，呈剂量相关性抑制前列腺癌细胞增殖，同时显著下调细胞周期蛋白D1（cyclin-dependent 1，cyclin D1）和细胞周期蛋白依赖激酶4（cyclin-dependent kinase 4，CDK4）的表达，对小鼠的肿瘤生长有明显的抑制作用[29]。王雅莉等[30-31]通过研究红芪总黄酮80 μg/mL对人慢性髓原白血病K562细胞增殖的影响，发现红芪总黄酮对K562细胞的生长具有显著的抑制作用，使K562细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂P21基因表达升高，增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）表达降低，从而发挥抗肿瘤作用。 3.2 诱导细胞凋亡 红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮50 μmol/L可通过降低胃癌细胞外信号调节激酶、上游核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）及信号转导和转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的表达，升高细胞色素C和B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）相关的细胞死亡激动剂、降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，诱导细胞凋亡，达到抗胃癌的作用[32]。红芪异黄酮类成分芒柄花素25 μmol/L可通过激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cystein-asparate protease，Caspase）级联的死亡受体介导外源性及依赖线粒体的内源性凋亡途径使咽鳞癌细胞凋亡进而发挥抗肿瘤作用[33]。Hu等[34]研究发现红芪异黄酮类成分芒柄花素50 mg/kg可能通过增加人骨肉瘤U2OS细胞Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）和凋亡蛋白酶活化因子-1（apoptotic protease activating factor-1，Apaf-1）的阳性细胞，同时，升高U2OS荷瘤小鼠的阳性细胞和Bax、Caspase-3和Apaf-1蛋白，下调雌激素受体α亚型（estrogen receptor alpha，ERα）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B，p-Akt）阳性细胞和蛋白质水平，促进细胞凋亡，发挥抗肿瘤作用。 3.3 干扰细胞周期 邓婉蓉[35-36]通过研究红芪总黄酮80 μg/mL对人体白血病的影响，发现红芪总黄酮可通过调控c-fos基因表达，抑制白血病干细胞G0/G1期DNA合成，从而抑制白血病细胞的增殖，达到红芪总黄酮抗肿瘤作用，并且结果表明其抑制作用具有量效关系。红芪异黄酮类成分芒柄花素150 μmol/L可增加非小细胞肺癌细胞的p21蛋白表达，降低细胞周期调节蛋白如cyclin A和cyclin D1的表达，促进Caspase-3和促凋亡蛋白Bax的表达，降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达，诱导G1期非小细胞肺癌细胞周期停滞和凋亡而成为肺癌治疗的潜在预防药物[37]。具体机制见图3。 图片 4 抗骨质疏松 随着人口老龄化的加重和生活水平的提升，我国骨质疏松发病率逐年上升。骨质疏松症是一种以骨量减少、骨质量下降和骨微结构退化为特征的全身性骨病，其成因是破骨细胞活性大于成骨细胞，导致骨吸收大于骨形成[38]。由于老年人的生理结构和各项生命指征呈下降趋势，故较易发病，严重影响其生活质量[39]。目前临床上用于治疗骨质疏松的药物不良反应较大[40]。而中药具有不良反应小、疗效确切等特点[41]，其中，植物活性成分已经被证明是预防骨质疏松新方法的潜在来源[42]，如多糖、黄酮等活性物质，这些活性物质通过调节骨特异性基质蛋白、转录因子、信号通路、靶点等发挥作用，通过自身特性治疗骨质疏松症[43]，可以最大程度的减少不良反应。目前关注度较高，患者易接受[44]。红芪黄酮类化合物对于多种原因诱导的骨质疏松均有显著防治作用，其机制可能是促进成骨细胞的增殖和分化，降低钙流失等，增大骨密度，维持骨平衡，增强骨质量来防治骨质疏松。 4.1 促进成骨细胞增殖、分化 方瑶瑶等[45-46]通过研究红芪多糖和黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞（rat bone marrow stromal cells，rBMSCs）和大鼠颅骨成骨细胞（rat calvarial osteoblasts，ROBs）成骨分化的影响，发现红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮通过激活胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factor-1 receptor，IGF-1R）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/Akt信号通路发挥作用，其中毛蕊异黄酮1 μmol/L可显著促进rBMSCs和ROBs细胞的成骨分化作用，并且优于红芪多糖。另外在5种黄酮类化合物毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、异甘草素和美迪紫檀素（0.001、0.010、0.100、1.000、10.000 μmol/L）对rBMSCs和ROBs细胞活性和成骨相关因子的变化研究中发现，5种不同黄酮类化合物均能促进rBMSCs和ROBs的增殖，提高碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性，增加Ca含量，增加钙化结节面积和数量，达到抗骨质疏松的作用。陈宇等[47]在红芪活性组分抗骨质疏松作用的谱效关系研究中发现，红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮10 μmol/L可以提高成骨细胞ALP活性，促进成骨细胞分化，进而发挥抗骨质疏松作用。吴虹[48]通过观察红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮15、30 mg/kg对去卵巢大鼠骨质疏松的防治作用，发现毛蕊异黄酮对去卵巢大鼠具有显著的骨保护效应，并存在一定的剂量效应关系，其作用弱于雌激素。槲皮素是一种植物类黄酮，也是红芪中的黄酮醇类成分，具有雌激素作用，Pang等[49]和Li等[50]用槲皮素2.5 μmol/L处理骨髓间充质干细胞，研究发现槲皮素可以增强ALP活性，促进细胞外基质的产生和矿化，并且上调Runt相关转录因子2（Runt-relatedtranscription factor 2，RUNX2）、成骨细胞特异性转录因子和骨桥蛋白等骨母细胞特异性标记基因的表达。此外，槲皮素还可通过雌激素受体调节骨母细胞特异性基因的表达，并且激活骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）/Smad信号通路。表明槲皮素可以通过雌激素受体介导的途径刺激BMSC分化为成骨细胞，并且BMP/Smad信号通路在其中具有重要作用。Zhang等[51]发现槲皮素5 μmol/L可通过抑制微小RNA-206（microRNA-206，miR-206）通路的表达和上调连接蛋白43的表达，从而促进骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化。 4.2 减少骨流失 袁真等[52]发现山柰酚、芦丁、槲皮素（浓度分别为50 mg/kg）3种活性成分均可以降低尿液中的Ca、P丢失，改善骨微结构并增加骨密度，且山柰酚效果最好。Kim等[53]研究表明高良姜素、淫羊藿苷、山柰酚和槲皮素等（0～50 μmol/L）黄酮类化合物可以增加人SV40转染成骨细胞的增殖，其中高良姜素、淫羊藿苷、山柰酚、槲皮素可减少唑来膦酸钠诱导的细胞损伤，尤其高良姜和山柰酚对唑来膦酸具有显著的细胞保护作用。另有研究发现槲皮素100 mg/kg可改善维甲酸诱导的骨质量系数、骨长、骨径、骨灰分含量和钙磷含量的降低，降低维甲酸诱导的氧化应激和骨质流失[54]。见图4。 图片 5 降低骨骼肌损伤 骨骼肌对于维持人体姿态和运动是必不可少的，但同时骨骼肌损伤也极为常见[55-56]。目前多用非甾体类抗炎药减轻肌肉损伤后的疼痛及炎症反应以恢复肌肉功能，治疗方案较为单一[57]。红芪黄酮类降低骨骼肌损伤的作用机制可能是减缓运动后大鼠骨骼肌中丙二醛、LDH和一氧化氮含量积累，有效清除氧自由基，提高SOD活性及抑制骨骼肌细胞凋亡。 5.1 提高相关酶活性 袁书立[58]研究发现红芪黄酮荭草苷40 mg/kg可有效减轻运动性骨骼肌损伤大鼠的骨骼肌炎症和氧化应激，与空白组相比，实验组的骨骼肌p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）的磷酸化水平降低（P＜0.05），此外，荭草苷可促进运动性骨骼肌损伤大鼠骨骼肌Nrf2的转录和转位，抑制Kelch样ECH关联蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）的转录和表达。其机制可能与p38 MAPK通路和Nrf2/ Keap1通路有关。与肌肉损伤组相比，槲皮素/β-环糊精凝胶可降低脂质过氧化、SOD和过氧化氢酶活性，降低骨骼肌炎症和氧化应激，从而达到降低骨骼肌损伤的作用[59]。红芪总黄酮0.2 mg/kg可延缓离心运动后大鼠骨骼肌活性氧、丙二醛及LDH含量的积累并提高SOD活性，表明红芪总黄酮对高强度运动后氧化应激所导致的骨骼肌损伤有明显的防治作用[60]。段云燕等[61]发现红芪总黄酮0.2 mg/kg对于离心运动后大鼠骨骼肌中一氧化氮含量的下降有一定减缓作用，推测红芪总黄酮可有效清除氧自由基、下调丙二醛及LDH含量、提高SOD活性进而达到降低骨骼肌损伤的作用。 5.2 抑制细胞凋亡 杨雅丽等[62]等研究表明一次离心力竭运动可激活大鼠骨骼肌细胞NF-κB信号分子，启动细胞的凋亡程序，而红芪总黄酮0.2 mg/kg可降低高强度运动引发的应激反应，从而延缓离心运动后骨骼肌疲劳和损伤的发生，其机制可能与降低骨骼肌组织NF-κB、Bcl-2/Bax、细胞色素C、Caspase-3表达水平、抑制骨骼肌细胞凋亡有关，见图5。 图片 6 抗动脉粥样硬化 动脉粥样硬化作为引起冠心病、缺血性脑血管病等疾病的常见病因，严重威胁人们的身体健康与生命安全，且近年来发病呈逐渐增高[63]。流行病学研究发现黄酮类化合物可通过抗氧化、防止血栓形成、改善内皮功能、调节血脂和调节糖代谢等作用发挥抗动脉粥样硬化作用[64-65]。 6.1 改善内皮功能 红芪黄酮类化合物二氢黄酮柚皮苷100 mol/L可以通过调节蛋白激酶Hippo-YAP蛋白下调人脐静脉内皮中促炎因子的表达恢复内皮屏障细胞的完整性，发挥抗动脉粥样硬化作用[66]。 6.2 调节相关酶活性 类黄酮通过调节NF-κB途径来调节抑制因子κB激酶或在NF-κB与脱氧核糖核酸结合的水平上发挥抗炎作用[67]，如槲皮素100 μmol/L可通过p38激酶抑制作用影响NF-κB活化，并抑制小鼠的动脉粥样硬化[68]。 6.3 防止血栓形成 有研究证明黄酮类化合物槲皮素2 mmol/L、芦丁能够阻断血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受体，抑制血小板活化及钙离子载体的促聚集作用，表明黄酮类化合物相关的抗血小板活性[69]。最新研究也发现槲皮素1.5 mmol/L对环氧合酶的抑制率高达90%，主要通过改变花生四烯酸的代谢来干扰血小板聚集[70]。通过不同细胞模型对柑橘黄酮类化合物进行抗动脉粥样硬化作用评估，结果发现在人肝癌细胞中柚皮素75 μmol/L可抑制胆固醇酯转移蛋白和微粒体甘油三酯转移蛋白，从而限制胆固醇酯和三酰甘油在脂蛋白形成中的可用性[71-72]。 7 防治肝纤维化 肝脏纤维化是一种损伤愈合反应，各种原因造成的肝损伤均可以导致肝纤维化的启动，肝损伤造成的肝细胞坏死、凋亡、炎症细胞浸润和细胞外基质的改变会刺激肝纤维化的形成。肝纤维化进一步会发展为肝硬化甚至肝癌，严重影响人类的健康[73]，由于肝纤维化早期是可逆的，而肝硬化是不可逆的，抑制或逆转肝纤维化是治疗慢性肝病的重要手段之一，因此肝纤维化的防治是国内外研究的热点问题。黄酮类化合物广泛存在于多种植物中，临床应用的多种治疗肝纤维化中药均含有黄酮类成分[74]。红芪黄酮类化合物通过抑制肝纤维化细胞的增殖、活化和转移及胶原纤维增生等来防止肝纤维化。 7.1 抑制细胞增殖、活化和迁移 张蒙蒙[75]研究表明毛蕊异黄酮80 mg/kg可显著抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化，其机制可能是毛蕊异黄酮通过提高Janus激酶2（Janus kinase 2，JAK2）和STAT3蛋白表达，激活JAK2/STAT3通路。邓坦[76]研究结果表明，毛蕊异黄酮200 μmol/L对TGF-β1诱导的肝纤维化细胞增殖、活化和迁移具有抑制作用，该作用可能与毛蕊异黄酮结合并下调细胞内雌激素受体β5（estrogen receptor β5，ERβ5）有关。另外槲皮素8～128 μmol/L在0～72 h对肝星状细胞的增殖有明显的抑制作用，并促进其凋亡，可能与调节Wnt/β-catenin信号通路，而达到抗肝纤维化的作用[77]。 7.2 抑制胶原纤维增生 槲皮素15 mg/kg可通过降低β-连环蛋白（β-catenin）和Wnt蛋白表达量，抑制Wnt/β-catenin信号通路，阻止肝纤维化的进展且具有肝保护作用[78]。此外槲皮素50 mg/kg还可通过降低神经源性基因Notch同源蛋白1（neurogenic locus notch homolog protein 1，Notch1）表达来影响Notch1通路，进而抑制M1极化，达到抗炎、抗肝纤维化的作用[79]，柚皮苷15、30 mg/kg均可通过降低丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）和HYP含量，抑制胶原增生进而抗肝纤维化显著降低四氯化碳诱导的肝脏系数升高，抑制胶原增生进而抗肝纤维化[80]。见图6。 图片 8 其他 红芪黄酮类化合物除具有抗氧化、改善肺纤维化、抗肿瘤、抗骨质疏松、降低骨骼肌损伤等药理作用外，还具有抗炎降血糖抑制肾纤维化等作用。姚艺等[81]研究发现芒柄花苷50 mg/kg可显著降低糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）大鼠血清血尿素氮、血肌酐和血糖水平，同时，肾小球内炎症和纤维化程度也有不同程度的改善，说明芒柄花苷可明显改善糖尿病大鼠肾功能。其机制可能是通过腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate- activated protein kinase，AMPK）/沉默信息调节因子1（silent information regulator 1，SIRT1）/叉头盒蛋白O1（fork head box protein O1，FoxO1）促进DN自噬，减轻肾脏损伤。此外，芒柄花苷可显著减轻DN大鼠糖代谢异常和肾脏损害，抑制肾纤维化，其机制可能与芒柄花苷激活AMPK和SIRT1表达，抑制FoxO1表达，改善肾脏氧化应激状况，抑制自噬，从而缓解DN的发生发展过程。 9 结语及展望 红芪作为甘肃的道地药材，其品质优良，产量宏丰，并有独特的采收加工方式，且已形成地理标志产物——米仓红芪。红芪主要含有多糖、黄酮、皂苷等多种活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节多种药理作用。红芪黄酮类成分是除红芪多糖外主要的活性成分之一。黄酮类化合物广泛存在于自然界的植物中，是植物的次生代谢产物，中药中也广泛存在，并且种类繁多，每个种类又有不同的药理作用。中药红芪中含有多种黄酮类化合物，如异黄酮类成分毛蕊异黄酮和芒柄花素、黄酮醇槲皮素、二氢黄酮柚皮苷等，具有抗氧化、抗肿瘤、改善肺纤维等药理作用，其中毛蕊异黄酮、芒柄花素成分是红芪药材质量评价的重要指标性成分，且对肝癌、胃癌、非小细胞肺癌、宫颈癌等均有显著治疗作用。 红芪最早列为黄芪项下，后因发展需要将红芪单独列出。红芪与黄芪具有相似的活性成分及功效，但多项研究表明，红芪黄酮类成分在抗氧化和改善肺纤维方面疗效优于黄芪，目前对于红芪的研究多集中在化学成分提取分离等基础研究上，对于红芪黄酮类成分药理作用及作用机制的研究较少。红芪作为具有升阳举陷、固表止汗、利水消肿等多重功效的中药，其在临床应用及新药研发上缺乏具体研究，故应加强红芪黄酮类活性成分的研究，尤其红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮和芒柄花素在抗肿瘤方面的研究及红芪黄酮类成分在抗氧化和改善肺纤维化方面的优势研究。中药材中化学成分的种类和含量是表征药材质量的重要标志，也是作为临床用药的合理选择，红芪在中医临床及中西药合用方面的研究是当前乃至未来持续关注的前沿领域[82]。因此，应加强红芪药材中黄酮类单体成分药理作用及临床应用的研究，为红芪药材的大规模种植及临床用药提供理论依据。
有关二氢黄酮的质谱裂解问题，数据如下： MS: 316(100) 298(9) 283(10) 269(3) 255(3) 196(34) 181(25) 170(34) 153(10) 这是全部的裂解数据。 化合物的结构式在附件里面，希望谁能帮我分析下怎么脱去一分子水和一个甲基，谢谢啦！
[color=black]超声波辅助提取苦荞麦黄酮类成分工艺研究[/color][align=center][color=black]张春艳[/color][url=#footnote_1]1[/url][font=times new roman][sup][size=13px][color=black],2[/color][/size][/sup][/font][font=times new roman][size=13px][color=black]，张丽娜[/color][/size][/font][font=times new roman][sup][size=13px][color=black]1,2[/color][/size][/sup][/font][/align][align=center][color=black](1.中国农业我科学院 作物科学研究所 重大平台中心，北京 100089；2.中国仪器仪表学会科学仪器设备验证评价中心（生命科学站），北京 100089)[/color][/align][color=black]摘要：[/color][color=black]为了优化苦荞麦中芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的提取工艺，本研究以芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚提取含量为指标，采用单因素实验比较了不同体积分数的甲醇和乙醇作为提取液提取上述三种成分，结果表明：对于芦丁和异槲皮素，以70%乙醇作为提取液的提取量高于以80%甲醇为提取液的提取量，所以本实验采用70%乙醇作为提取液。以三因素三水平正交实验探究不同体积分数乙醇为提取液对芦丁、异槲皮素、槲皮素和山奈酚提取量的影响。结果表明:超声提取法在提取液为70%乙醇,提取温度50℃,超声时间30 min条件下对芦丁和异槲皮素提取量最高，分别为15.58mg/g和0.50mg/g 而超声提取法在提取液为60%乙醇，提取温度25℃,超声时间15 min条件下，对槲皮素和山奈酚提取效果最佳。本研究为苦荞麦芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的提取提供依据。[/color][color=black]关键词：[/color][color=black]苦荞 麦提取 黄酮类[/color][align=center][color=black]Ultrasonic-assisted extraction process of buckwheat flavonoids[/color][/align][align=center][color=black]ZHANG Chunyan[/color][sup][color=black]1,2[/color][/sup][color=black],ZHANG Lina[/color][sup][color=black]1,2[/color][/sup][/align][align=center][color=black](1.Major Platform Center, Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100089, China 2. Scientific Instruments and Equipment Verification and Evaluation Center of China Instruments and Apparatus Society (Bioscience Station))[/color][/align][color=black]Abstract：[/color][color=black]In order to optimize the extraction process of rutin, isoquercetin, quercetin and kaempferol in buckwheat, this study took the extraction content of rutin, isoquercetin, quercetin and kaempferol as the index, and used the single factor experiment to compare the extraction of the above three components with different volume fractions of methanol and ethanol as the extraction solution. The results showed that: For rutin and isoquercetin, 70% ethanol as the extraction solution was higher than 80% methanol as the extraction solution, so 70% ethanol was used as the extraction solution in this experiment. Then three factors and three levels orthogonal experiments were conducted to explore the effects of different volume fractions of ethanol on the extraction of rutin, isoquercetin, quercetin and kaempferol. The results showed that the maximum extraction amounts of rutin and isoquercetin were 15.58mg/g and 0.50mg/g, respectively, under the conditions of 70% ethanol as extraction solution, 50℃ as extraction temperature and 30 min as ultrasonic time. Under the conditions of 60% ethanol, extraction temperature 25℃ and ultrasonic time 15 min, the ultrasonic extraction method had the best extraction effect on quercetin and kaempferol. This study provides the basis for the extraction of rutin, quercetin and kaempferol from Tartary buckwheat.[/color][color=black]Key words:[/color][color=black] buckwheat, ultrasonic extraction, flavonoids[/color][color=black]荞麦为蓼科苦荞麦属作物，一年生草本双子叶植物。荞麦分为普通荞麦(甜苦荞麦)及其亲缘种苦苦荞麦(鞑靼苦荞麦)，尤指前者。荞麦别名为乌麦、三角麦。我国是生产和出口苦荞麦的大国，主要种植分布在内蒙古、云南、山西、四川、贵州等地区。[/color][color=black]荞麦中主要含有黄酮类、糖苷类及有机酸类等化学成分。黄酮类主要包括芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚等。现代药理研究表明，荞麦具有抗氧化、抗肿瘤、抗敏、抗菌、抗病毒、降血脂、降血压等作用。芦丁作为苦荞麦中含量最高的成分，它难溶于水，可溶于热水、甲醇、乙醇、吡啶等有机溶剂，在光作用下逐渐变暗，熔点为195℃；异槲皮素难溶于水，熔点为 314-317℃，具有较好的祛痰、止咳、平喘作用；槲皮素几乎不溶于水，易溶于碱性水溶液，熔点为 314-317℃；山奈酚微溶于水，溶于热[/color][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%99%E9%86%87?fromModule=lemma_inlink%22 \t %22https://baike.baidu.com/item/%E5%B1%B1%E6%9F%B0%E9%85%9A/_blank][color=black]乙醇[/color][/url][color=black]，[/color][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%99%E9%86%9A?fromModule=lemma_inlink%22 \t %22https://baike.baidu.com/item/%E5%B1%B1%E6%9F%B0%E9%85%9A/_blank][color=black]乙醚[/color][/url][color=black]和碱，熔点为276℃。荞麦芦丁一直以来都是研究的重点，近年来文献报道也很多，关于芦丁、槲皮素等的提取方法，提取溶剂种类、体积分数的选择多种多样，有采用不同体积分数乙醇的，也有采用不同体积分数甲醇进行提取的，提取方式也各不相同。本文采用三因素三水平正交试验方法超声辅助提取荞麦中四种成分，考察不同体积分数提取液，超声温度、超声时间对芦丁等含量的影响。[/color][color=black]1、材料与方法[/color][color=black]1.1 、仪器与设备[/color][color=black]试验主要使用设备如下：[/color][table][tr][td][align=center][color=black]仪器名称[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]型 号[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]厂 家[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]电子天平[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2011F145-11[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]赛利多斯科学仪器（北京）有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]粉碎机[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]TUBE-MLL 100[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]艾卡（广州）仪器设备有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]超声波清洗仪[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]JP-040S[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]深圳市洁盟清洗设备有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]福立高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url][/color][/align][/td][td][align=center][color=black]LC5090[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]浙江福立分析仪器股份有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]UV紫外检测器[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]LC5090-UV[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]浙江福立分析仪器股份有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]Agilent XDB-C18色谱柱[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]XDB-C18(4.6ⅹ250mm 5 μm)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]安捷伦科技（中国）有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]离心机[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]PICO17[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]赛默飞世尔科技（中国）有限公司[/color][/align][/td][/tr][/table][color=black]1.2、材料与试剂[/color][color=black]湖南苦荞，来自于中国农业科学院作物科学研究所小棕作物课题高佳老师提供，地方品种；乙醇，甲醇 （HPLC Grade）赛默飞世尔科技（中国）有限公司；DMSO hplc 纯度≥99.7%。[/color][color=black]1.3、试验方法[/color][color=black]1）、芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚标准曲线制作[/color][color=black]精密称取芦丁标准品20.0mg，置于10ml容量瓶中，加入70%乙醇1ml ,配置浓度为2mg/ml的芦丁母液。分别取不同体积母液配置浓度为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0078125mg/ml溶液，过0.22um膜,放置2ml[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]小瓶中，待测。福立高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]（配置：5090二元高压输液泵、5090在线3路脱气器、5090柱温箱(BC[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]ABC[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]ABC[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]ABC[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]优水平[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]A2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]B3[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]C2[/color][/align][/td][td][/td][td][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]优组合[/color][/align][/td][td=5,1][align=center][color=black]A2B3C2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]A2B3C2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]A1B1C1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]A1B1C1[/color][/align][/td][/tr][/table][color=black]芦丁方差分析[/color][table][tr][td][align=center][color=black]方差来源[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]离差平方和[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]自由度[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]均方[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]F值[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]P值[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]显著性[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]A[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]30.42[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]15.21[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]13.92[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0001[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]**[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]B[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]19.12[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]9.56[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]8.75[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0016[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]**[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]误差[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]24.04[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]22[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]1.09[/color][/align][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]总[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]26[/color][/align][/td][td][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][/table][color=black]由表2可以看出，分析苦荞麦芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的提取量，结果表明，方差分析结果和极差分析结果保持一致。提取各成分含量影响因素的大小为乙醇体积分数超声温度超声时间，同样方法处理异槲皮素、槲皮素、山奈酚的数据，影响因素大小以芦丁保持一致，均为乙醇体积分数超声温度超声时间。从方差分析可知，乙醇体积分数、超声温度对芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚影响极显著、超声时间不显著。从表2极差分析结果可知，芦丁、异槲皮素提取最佳组合方式为A2B3C2,槲皮素、山奈酚最佳提取组合方式为A1B1C1。[/color][color=black]3、验证[/color][color=black]由于最优正交实验组合没有在正交表中得以体现，因此按照优化后的最佳组合方式A2B3C2，即在乙醇体积分数为70%，超声温度50℃、超声时间30分钟的条件下，选择三个不同产地的苦荞麦粉作为样品，提取芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的含量，重复三次试验,验证结果见表3。[/color][align=center][color=black]表3验证实验结果[/color][/align][table][tr][td][align=center][color=black]试验号[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]芦丁含量(mg/g)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]RSD%[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]异槲皮素含量(mg/g)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]RSD%[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]槲皮素含量(mg/g)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]RSD%[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]山奈酚含量(mg/g)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]RSD%[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][color=black]借母溪乡样品[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]13.83[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.69[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.441[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.94[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.033[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.95[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0063[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.96[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]13.64[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.435[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.031[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0063[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]13.78[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.443[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.032[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0064[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][color=black]湖南沅陵县样品[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]13.50[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.72[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.456[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.98[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.034[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.38[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0064[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.51[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]13.31[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.430[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.034[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0063[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]13.37[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.450[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.034[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0066[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][color=black]泸溪县样品[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]15.85[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]1.94[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.511[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.93[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.037[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.77[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0064[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.68[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]15.65[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.499[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.036[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0065[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]15.25[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.482[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.038[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0065[/color][/align][/td][/tr][/table][color=black] [/color][color=black]从表3可知，三个不同产地样品，重复三次测得芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的平均含量分别在13.39-15.58mg/g、0.440-0.497mg/g、0.032-0.037mg/g、0.063-0.065mg/g之间，RSD%值均小于5,该优化后的方法与文献比较具有一定的优势。[/color][color=black]4讨论[/color][color=black]试验研究了乙醇体积分数、超声温度、超声时间三个因素对苦荞麦芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚提取含量的影响，结果表明，乙醇体积分数为70%，超声温度50℃、超声时间30min条件下，不同产地苦荞麦中芦丁、异槲皮素提取量最高。乙醇体积分数为60%、超声温度25℃、超声时间15min时更利于槲皮素、山奈酚的提取。通过试验研究可以看出，芦丁、异槲皮素在有机溶剂体积比较高时，有较佳的提取效率，相反，槲皮素、山奈酚在有机溶剂体积比较小的时候，提取效率更高一些。通过该方法的建立可以为荞麦芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的提取方法提供依据。[/color][color=black]参考文献[/color][1] [url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Naveen+P&cauthor_id=28929052]P Naveen[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28929052/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Analytical Research and Development, Vidya Herbs Pvt. Ltd, Bengaluru, Karnataka, India.][sup]1[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Lingaraju+HB&cauthor_id=28929052]H B Lingaraju[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28929052/%22 \l %22affiliation-2%22 \o %22Phytochemistry Lab, Vidya Herbs Pvt., Ltd., Bengaluru, Karnataka, India.][sup]2[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Anitha&cauthor_id=28929052]Anitha[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28929052/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Analytical Research and Development, Vidya Herbs Pvt. Ltd, Bengaluru, Karnataka, India.][sup]1[/sup][/url], [url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Prasad+KS&cauthor_id=28929052]K ShyamPrasad[/url][sup]2. [/sup]Simultaneous determination of rutin, isoquercetin, and quercetin flavonoids in Nelumbo nucifera by high-performance liquid chromatography method.Int J Pharm Investig,2017 Apr-Jun 7(2):94-100.[2][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Jan+S&cauthor_id=35734108]SabbiJan[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Cytogenetics & Plant Molecular Biology Laboratory, Department of Botany, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]1[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Ahmad+J&cauthor_id=35734108]JavaidAhmad[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Cytogenetics & Plant Molecular Biology Laboratory, Department of Botany, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]1[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Dar+MM&cauthor_id=35734108]MohdMasaratDar[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-2%22 \o %22Department of Food Science & Technology, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]2[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Wani+AA&cauthor_id=35734108]AijazAWani[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Cytogenetics & Plant Molecular Biology Laboratory, Department of Botany, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]1[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Tahir+I&cauthor_id=35734108]InayatullahTahir[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-3%22 \o %22Plant Physiology and Biochemistry Research Laboratory, Department of Botany, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]3[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Kamili+AN&cauthor_id=35734108]AzraN Kamili[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-4%22 \o %22Centre of Research for Development (CORD), University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]4[/sup][/url][sup].[/sup]Development and validation of a reverse phase HPLC-DAD method for separation, detection & quantification of rutin and quercetin in buckwheat ( Fagopyrum spp .).J Food Sci Technol.2022 Jul 59(7):2875-2883.[3] 罗凤莲[sup]1,2[/sup],蒲培瑶[sup]1[/sup],超声波辅助提取苦苦荞麦总黄酮工艺研究. 农产品加工.2018,(02)[4] 王丽[sup]1,2[/sup],魏茂琼[sup]1,3[/sup],邵金良[sup]1,2[/sup],杜丽娟[sup]1,2[/sup],林昕[sup]1,3[/sup],汪禄祥[sup]1,2[/sup],苦荞麦类黄酮成分的含量测定与分析研究食品安全质量检测学报.2018,9(20).[5] 张继斌，王玉，徐浪，陈志元，丁苗.不同产地苦荞麦中黄酮类成分的含量测定与分析.食品研究与开发2018 年 12 月 第 39 卷第 24 期.[6] [url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Gao%20J%5bAuthor%5d]JiaGao[/url][sup]1[/sup],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Wang%20T%5bAuthor%5d]TingtingWang[/url][sup]1,2[/sup],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Liu%20M%5bAuthor%5d]MinxuanLiu[/url][sup]1[/sup],et al.Transcriptome analysis of filling stage seeds among three buckwheat species with emphasis on rutin accumulation[url=https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5738128/]PLoS One.[/url]2017 12(12):e0189672.Published online 2017 Dec 20.[7] 任强、吴昊、聂其婷、刘伟.HPLC-DAD法同时测定苦荞麦保健品中芦丁槲皮素山奈酚含量.济宁医学院学报2016,39(05).[url=#footnote_back_1]1[/url] [font=宋体][size=12px]作者简介：[/size][/font][font=宋体][size=12px]张春艳（1976—），女，工程师，主要从事高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]应用研究.Email:[/size][/font][font=宋体][size=12px]cyzhang08@163.com[/size][/font][font=宋体][size=12px] 通信联系人：张丽娜，女，副研究员.Email:[/size][/font][font=宋体][size=12px][color=black]zhanglina@caas.cn[/color][/size][/font]
高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)是由美国国家医学院Yiochiro Ito博士于1982年首先开始的。到目前为止，此项技术已用于生物化学、生物工程、医学、药学、天然产物化学、有机合成、化工、环境、农业、 食品、材料等领域。开展此项技术研究的科学家遍及美国、日本、中国、俄罗斯、法国、英国、瑞士等地。高速逆流色谱具有两大突出优点：1.聚四氟乙烯管中的固定相不需要载体，因而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象，特别适用于分离极性物质和具有生物活性的物质。2.由于其与一般色谱的分离方式不同，使其特别适用于制备性分离。最近的研究结果表明：一台普通的高速逆流色谱仪一次进样可达几十毫升，一次可分离近10g的样品。因此，在80年代后期被广泛地应用于植物化学成分的分离制备研究，本文就其在这方面的成果作一综述。1 生物碱生物碱是植物中一类重要的化学成分，在植物中分布非常广泛，至少有50多科120属以上的植物中已证明有生物碱存在，已知的生物碱种类也至少在2000种以上。到目前为止，用高速逆流色谱研究天然产物化学成分也以生物碱的研究报道得最多。正丁醇:丙酮:水(8:1:10)曾用于从委内瑞拉的箭毒中分离马枯素和Panarine，样品进样达700mg；正丁醇:氯化钠(0.1mol/L)(1:1)的两相溶剂体系用于从Strychnos usambarensis(马钱科)的树干和树皮(3:7:5:5)在70min内以1800r/min的转速从粉防已干根的提取物中分离了粉防己碱、去甲粉防己碱和轮环藤酚碱；从小蔓长春花植物的叶子中用正己烷:乙醇:水(6:5:5)体系分离长春胺和长春辛；分别用正己烷:乙酸乙脂:乙醇:水(6:3:2:5)和正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水(1:1:1:1)从红豆杉的粗提物中分离纯化了紫杉醇、cephalomannine、巴卡亭Ⅲ；以石油醚(bp.40～65℃):乙酸乙脂:甲醇:水(50:70:80:65)为两相体系从紫杉醇的混合物中分离得到了纯的紫杉醇和cephalomannine。有学者对粉防己的粗提物也进行了分离；从苦参总碱中分离了苦参碱和氧化苦参碱，从洋金花总碱中分离了莨菪碱、东莨菪碱及待定成分；从峨眉千里光粗碱中分离了金缘千里光碱、阔叶千里光碱和新阔叶千里光碱；从三尖杉总碱中分离异三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱。氯仿:甲醇:水(5:4:3)体系曾用于感染了枝顶孢属内部寄生菌的睡眠草，分离得到了麦角生物碱。Ito于1994年用新型的pH区带提取CCC技术从Crinum moores的抽取物中进样3g得到了3个纯的生物碱，此技术是HSCCC的一个较大的突破，它使植物的分离提取每次很方便地就达到了克量级。2 黄酮类似物黄酮类似物是一类比较重要的植物化学成分，它包括黄酮、异黄酮、二氢黄酮、花色苷元、儿茶精和属于黄酮异构体的橙酮，以及由它们所衍生的各式各样的衍生物。用氯仿:甲醇:水(4:3:2)体系曾从芫花总黄酮中一次进样100mg分离得到了3'-羟基芫花素、洋芹素、木犀草素；从山楂叶粗提物中分离金丝桃苷、槲皮素、芦丁、牡荆素、异牡荆素；以氯仿:甲醇:水(33:40:27)体系，700r/min转速，在70min内从黄酮混合物中分离出橙皮素，四羟基黄酮和槲皮黄酮，并有效地利用了梯度洗脱技术；Vanhaelen等将HSCCC与HPLC相结合从500mg的Ginkgo biloba(银杏属)的叶子萃取物中一次分离出了7个黄酮苷，其以水为固定相，开始以乙酸乙酯为流动相，然后在流动相中逐渐添加异丁醇，到分离结束时乙酸乙酯与异丁醇之比为(6:4)；Oka等以氯仿:甲醇:水(4:3:2)的体系在3500r/min下在8min内从See buckthourn的果实萃取物中分离得到了5个主成分，其分离速度完全可与HPLC相比较；还有学者也从大黄羟基蒽醌总苷元中分离了大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚等；用正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水(9:1:5:5)在1800r/min转速下在70min内从掌叶大黄的根茎中分离出大黄素甲醚、芦荟大黄酸、大黄酸、大黄酚和大黄素；将Epilobium parviflorum(柳叶菜属)的甲醇萃取物进样2g分离得到了槲皮苷、杨梅苷、异杨梅苷和没食子酸，两相系统为氯仿:甲醇:水(7:13:8)。Chen1992年利用氯仿:甲醇:水(4:3:2)的两相系统对5个黄酮类化合物进行了分离并进行了定量分析；Kapadia 1994年利用正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水(1:4:2.5:2.5)从Garcinia Kola(藤黄属)种子中也分离出了多个双黄酮。
紫外分光光度法测定广金钱草中总黄酮含量摘要：目的 建立广金钱草中总黄酮含量的测定方法。方法 以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂，以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定。结果 芦丁在4.4μg/ ml～53.1μg/ ml范围内呈良好的线性关系，r =0．999 9（n=7)，平均回收率为100.2％ ，RSD为1．5％。结论 本法简便易行，有助于广金钱草药材的质量控制。关键词 广金钱草；芦丁；总黄酮；分光光度法Determination of Total Flavonoids in Desmodium Styracifolium by UV SpectrophotometryLI Rui(Nanning Institute for Food and Drug Control, nanning 530001，China)Abstract：AIM To establish the determination method for total flavonoid compounds in Desmodium styracifolium．METHODS With A1NO3一NaNO2一NaOH as chromogenic agent，rutin was used as reference sample by ultraviolet spectrophotometry．RESULTS The absorbability and concentration of rutin had good linear in the range of 4.4μg/ ml～53.1μg/ ml,r =0．999 9（n=7)．The average recovery rate was 100.2％ and RSD was 1.5％．CONCLUSION The method is reliable and can be helpful to efectively the quality control of Desmodium stymcifolium．Keyword Desmodium styracifolium(Osbeck)Merr；；rutin；total ilavonoids；UV spectrophotometry
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