尿嘧啶核苷用于细胞

氟甲阿糖尿嘧啶(又稱作L-FMAU) 為一種藥物其為核苷類似物其有4種異構物L-form的FMAU和D-FMAU 其中L和D都各有α/β共有4種L的α/β和D的α/β圖譜上有何不同~~請高手指教

最近在做一个建立岛津高效液相色谱法测定5-氟尿嘧啶浓度的试验，用5-嗅尿嘧啶做内标，但是5-氟尿嘧啶和5-嗅尿嘧啶没有分离开，应该怎么办？

求助：GB5413.40 核苷酸标准品中有5种核苷酸的标准品要购买，不知道应该买哪里的。请教各位，能具体告知下购买的品牌和货号吗？胞嘧啶核苷酸 CMP：标准品，C9H14N3O8P，纯度≥99%次黄嘌呤核苷酸 IMP：标准品，C10H13N4O8P，纯度≥99%鸟嘌呤核苷酸 GMP：标准品，C10H14N5O8P，纯度≥99%尿嘧啶核苷酸 UMP：标准品，C9H13N2O9P，纯度≥99%腺嘌呤核苷酸 AMP：标准品，C10H14N5O7P，纯度≥99%

测试C18色谱柱的柱效，用到尿嘧啶，主要是看该色谱柱的死时间大小。由于尿嘧啶出峰时间短，理论塔板数也相应较小。近日遇到这样的投诉，甲苯的塔板数可以达到证书上的85%，但是客户觉得尿嘧啶的塔板数过小，为难的是厂家的证书上连尿嘧啶的塔板数都没有，那么尿嘧啶的塔板数是否具有参考的价值呢

有朋友做过6-甲基尿嘧啶的LC分析吗?请问流动相和波长分别是什么?C18可以分开吗?

为什么以尿嘧啶测定C18色谱柱的死时间？

[color=#444444]最近用安捷伦6495[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]想着对尿嘧啶摸方法，TIC图里面母离子不出峰，而且在最开始的时候有倒峰，靠近最后的时候有一个149的不知知道是什么的峰，求大神解答[/color]

测柱效标准品，尿嘧啶、萘、芴等样品的浓度是多少？用什么溶解

一、原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞 计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞 如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/08/27/A1377590583.jpg二、仪器、用品与试剂1. 仪器、用品：同常规细胞培养2. 试剂：BrdU(1.0 mg/ml)，甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液三、操作步骤1. 细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使最终浓度为10 μg/ml。2. 44小时加秋水仙素，使每ml中含0.1 μg。3. 48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。4. 常规染色体制片。5. 染色体玻片置56 ℃水浴锅盖上，铺上2×SSC 液，距紫外灯管6 cm处紫外照射30分钟。6. 弃去2×SSC液，流水冲洗。7. Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。8. 镜检100个分裂相，计第一、二、三、四细胞期分裂指数。9. 计算：细胞 周期(Tc)=48/(小时)附：（1）BrdU配制: BrdU 10 mg十双蒸水10ml 4 ℃下避光保存。（2）2×SSC配制: NaCl 1.75克，柠檬酸三钠，2H2O 0.88克，加水至100 ml，4 ℃保存。

没有尿嘧啶可以用丙酮来测C18柱的死体积吗？

作者：何冰题目：5-氟尿嘧啶壳聚糖微球的制备与表征期刊：天津大学年份：2007链接：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?dbcode=CMFD&QueryID=4&CurRec=186&dbname=CMFD0911&filename=2008186937.nh&urlid=&yx=

5-氟尿嘧啶、阿霉素和柔红霉素在医院废水中的去向和通过活性污泥法的去除以及通过膜生物反应系统的治理[img]http://bbs.instrument.com.cn/images/affix.gif[/img][url=http://bbs.instrument.com.cn/download.asp?ID=197186]5-氟尿嘧啶、阿霉素和柔红霉素在医院废水中的去向和通过活性污泥法的去除以及通过膜生物反应系统的治理.pdf[/url]

[font=宋体][font=宋体]在生物学和医学研究中，细胞增殖是一个关键过程，对于理解生命活动的基本规律以及疾病的发病机理具有重要意义。随着科技的发展，流式细胞仪作为一种高效、灵敏的分析工具，广泛应用于细胞增殖的检测。流式细胞仪通过快速分析单个细胞，可以对细胞周期、细胞增殖活性、细胞凋亡等多个方面进行研究。本文将探讨流式细胞仪在检测细胞增殖方面的主要方法，包括但不限于溴脱氧尿苷（[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]）掺入法、细胞周期蛋白检测法以及细胞大小分析法等，以期为读者提供全面的技术应用概览。流式细胞仪检测细胞增殖方法：[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]（氚离子）掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]原理：是在细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时，用[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]脱氧胸腺嘧啶核苷代替普通的脱氧胸腺嘧啶核苷掺入新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中，增殖的细胞因为掺入[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]而具有放射性，通过定量检测样品细胞的放射性大小而反映细胞的增值活性[/font][/font][font=宋体][font=宋体]缺点：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）使用的是具有放射性的同位素，操作较为复杂，同时需要采取放射性保护措施 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）低比例高活跃增殖和高比例低活跃增殖可能得到的是相同的结果，用此方法无法进行鉴别 [/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）此方法无法进一步得到具有活性的增值细胞用于下一步的研究 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]） 此方法时间较短，无法检测加入前细胞的增殖情况，而且检测到放射性只能说明细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成，而不能提供合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的细胞是否进入增殖阶段的信息[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、相对计数法[/font][/font][/b][font=宋体]原理：将对照组和各实验组控制在相同条件下直接计数然后比较计数结果得到增殖结论[/font][font=宋体]注意点：[/font][font=宋体][font=宋体]对照组与实验组每种细胞所加浓度必须相同，每组至少设置[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔，这样每个孔可以得到[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]个细胞数，将[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔取平均值后就是这个组的结果。如果同时需要得到每孔目标细胞增殖后的绝对参数，在每孔细胞中加入[/font][font=Calibri]1*105PE[/font][font=宋体]标记的人工微球作为内参[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]收集各组的细胞于[/font][font=Calibri]EP[/font][font=宋体]管中，注意必须尽量将各组的所有细胞都收集起来。标记需要计数细胞的标志表型的荧光素偶联抗体，[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃静置[/font][font=Calibri]30min[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤一次，洗去游离的抗体[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、示踪染料标记法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]示踪染料与细胞结合的方式：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）能够与细胞内的蛋白质上的氨基发生非特异性的共价结合 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）能够非特异性地嵌入细胞膜的脂质双分子层中与细胞发生非共价性结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原理：示踪染料的荧光信号都很强，当细胞分裂时，母细胞内的染料会被平均分配到子细胞中，细胞荧光信号会被减弱一半，所以通过检测减弱的、发射示踪染料荧光信号的细胞比例就可以判断细胞增殖的强弱。当荧光强度减弱到标记时的[/font][font=Calibri]1/2[/font][font=宋体]以及以下的细胞都是增殖后的细胞，这些细胞所占比例越高则代表细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]标记方法：[/font][font=宋体][font=宋体]①纯化增殖反应的目标细胞，将细胞的浓度调整为[/font][font=Calibri]1*106/ml[/font][font=宋体]，加入[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体]，其标记浓度为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]微摩尔[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]升。置于[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃水浴中标记[/font][font=Calibri]15min[/font][font=宋体]，在标记过程中每隔一段时间混匀细胞一次[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②加入预冷、含有血清的培养基终止标记，在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃冰箱中静置[/font][font=Calibri]5min[/font][font=宋体]，离心沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③用培养基再洗涤一次，尽量洗净未结合的游离的[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体]，然后将目标细胞静置在增殖体系中[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]EdU[/font][font=宋体]掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]5-[/font][font=宋体]溴脱氧尿嘧啶核苷是胸腺嘧啶核苷的类似物，其特点是胸腺嘧啶环上[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]位[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]连接的甲基被溴取代，在细胞增殖[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时可以与内源性的胸腺嘧啶核苷竞争掺入到新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中，而[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体可以特异性的识别[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]，不与胸腺嘧啶核苷结合，所以可以用于检测细胞增殖[/font][/font][font=宋体][font=宋体]适用范围：适用于体内检测目标细胞的增殖，一般将[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]掺入小鼠的应用水中或经腹腔注射，经过一段时间后，取出目标细胞制成单细胞悬液然后用多聚甲醛固定细胞，后用打孔剂皂苷在细胞膜上打孔，最后标记荧光素偶联抗[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体，目标细胞的[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]阳性细胞就是增殖的细胞，阳性比例越高，增殖越活跃。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、其他方法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]细胞周期法检测细胞增殖：流式细胞术能够检测细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量，所以可以检测细胞周期。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的细胞，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的量处于二倍体和四倍体之间[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]处于[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期时，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]量为四倍体。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期的细胞比例越高说明细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]检测细胞增殖：[/font][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]（增殖细胞核抗原），在细胞核合成且只存在于细胞核内，是[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]聚合酶的辅助蛋白，所以与细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的合成关系密切，是反映细胞增殖状态的良好指标[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Ki-67[/font][font=宋体]检测细胞增殖：是一种与细胞增殖特异相关的核抗原[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CD71[/font][font=宋体]检测细胞增殖：是转铁蛋白受体，表达于细胞的表面，该受体广泛表达于各种恶性肿瘤细胞表面，正常细胞表达较少，与肿瘤细胞的增殖密切相关[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url]，更多关于流式细胞仪检测细胞增殖详情欢迎咨询，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

翻译版[img]http://bbs.instrument.com.cn/images/affix.gif[/img][url=http://bbs.instrument.com.cn/download.asp?ID=197188]5-氟尿嘧啶、阿霉素和柔红霉素在医院废水中的去向和通过活性污泥法的去除以及通过膜生物反应系统的治理.doc[/url]

采用高效液相色谱法测定虫草中的核苷类成分，优化后的色谱条件为YMC-Polyamine 柱(250mm × 4.6mm，5μm)；采用梯度洗脱，流动相：乙腈- 水(V/V)：0～15min 为90:10，15～20min 为86.5:13.5，20～30min 为75:25，30～35min 为70:30；流速：1mL/min；柱温：30℃；检测波长：259nm；进样量：10μL。结果表明：胸腺嘧啶、虫草素、尿嘧啶、腺苷、腺嘌呤、尿苷、鸟嘌呤、次黄嘌呤均能得到较好分离，该方法稳定性好、精密度高、重现性好，适用于虫草中的核苷类成分的分析。经分析发现，蛹虫草子实体核苷类物质组成大致相似，但含量差异非常显著，同时发现蛹虫草培养基残基及固体发酵产物中虫草素含量较高，其他核苷类成分很少，因此认定蛹虫草培养基残基及固体发酵产物是非常优良的分离纯化虫草素的原料。

由于要测一些酶的活性实验室订购了一下一些酶（试剂）：辣根过氧化物酶葡萄糖氧化酶磷酸葡萄糖变位酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（辅酶Ⅱ，NADP+）尿嘧啶核苷-5'-二磷酸葡萄糖（UDPG）D-果糖-6-磷酸二钠盐（6-磷酸果糖）D-葡萄糖-1-磷酸二钠盐（1-磷酸葡萄糖）现在要稀释这些酶（试剂）1.用蒸馏水稀释可以吗？如果不可以，用什么缓冲剂比较好？2.稀释后的溶液可以长时间保存吗？如不能，最长的时间是多久？小弟初入此道，望各位大侠细心解答，不胜感激！！

[align=left][color=black]核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。根据碱基的不同，分别有胞嘧啶核苷酸（CMP）、腺嘌呤核苷酸（AMP）、尿嘧啶核苷酸（UMP）、[/color]鸟嘌呤核苷酸（GMP）及次黄嘌呤核苷酸（IMP）等。由于核苷酸类化合物的极性较强，在常规反相C18色谱柱上难以保留，通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。[/align][align=left][b]第一部分[color=red]CAPCELL PAK C18 AQ[/color]检测方法[/b][/align][align=left][/align][align=left][b]C[color=black]APCELL PAK C18 AQ[/color][/b][color=black]色谱柱可耐受纯水条件，适用于极性较大物质的高水相条件下的分析，因此也非常适合《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》。[/color][color=black]按照国标方法，对核苷酸标准品以及样品进行分析，可得到良好线性以及定量分析结果；对30个样品进行前处理后进行分析，样品中各核苷酸与其前后杂质分离良好，且不同样品之间各核苷酸的保留时间相一致。[/color][/align][align=left][b][color=red] [/color][/b][/align][align=left][b]《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》方法微调[/b][/align][align=left][img=,600,248]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051502543279_7587_2222981_3.jpg!w813x337.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051503129151_4402_2222981_3.jpg!w776x226.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left] 下表为样品定量浓度结果[/align][align=left][img=,600,126]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051455159701_7741_2222981_3.jpg!w900x190.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,221]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456000129_1190_2222981_3.jpg!w844x311.jpg[/img] 上图为核苷酸样品与标准品的对比谱图[/align][align=left][/align][align=left]基于个别样品分析时遇到的CMP与其前杂质未得到良好分离的情况，通过对洗脱条件进行调整，可实现CMP与其前杂之间的良好分离。[/align][align=left][img=,600,215]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456501881_4082_2222981_3.jpg!w843x303.jpg[/img][img=,600,175]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456507871_7358_2222981_3.jpg!w900x263.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left][b]第二部分[color=red]CAPCELL PAK ADME[/color]色谱柱的分析[/b][/align][align=left][color=black]CAPCELLPAK ADME[/color][color=black]键合了笼状金刚烷基团，兼具高极性和疏水性特点，对高极性化合物有出色的保持和分离效果。[/color]在国标原条件下，不论是标准品还是样品均可使用CAPCELL PAK ADME得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。[/align][align=left]值得注意的是，ADME色谱柱的溶出顺序与常规反相C18色谱柱不尽相同，再次印证了其独特的保留分离模式。对于不局限于C18色谱柱的老师来说，具有独特溶出模式的CAPCELL PAK ADME色谱柱是分析强极性化合物的不二之选。[/align][align=left][img=,500,346]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051457304991_1509_2222981_3.jpg!w758x525.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸标准品的分析结果[/color][/align][align=left][/align][align=left][img=,500,347]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051458490969_9562_2222981_3.jpg!w758x527.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸实际样品的分析结果[/color][/align]

很多种类的极性化合物分离条件。􀂗 UDP-葡萄糖􀂗 UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、磷酸半乳糖􀂗 葡萄糖􀂗 蔗糖􀂗 红细胞中的UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、三磷酸腺苷（ATP）􀂗 ADP-葡萄糖、CDP-葡萄糖􀂗 糖核苷酸􀂗 胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤􀂗 三磷酸腺苷（ATP）、一磷酸腺苷（AMP）􀂗 黄嘌呤-磷酸、鸟嘌呤-三磷酸􀂗 体液中的黄嘌呤、尿酸、次黄嘌呤􀂗 色胺、五羟色胺、多巴胺􀂗 L-天冬氨酸、L-精氨酸􀂗 L-精氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸􀂗 谷氨酸、赖氨酸􀂗 亮氨酸、异亮氨酸􀂗 L-甲硫氨酸、L-谷氨酸􀂗 甲基琥珀酸、戊二酸、草酸、肌酸、4-羟脯氨酸、天冬氨酸、鸟氨酸􀂗 叶酸􀂗 抗坏血酸􀂗 胆汁酸􀂗 柠檬酸、马来酸、反式乌头酸􀂗 马来酸、富马酸􀂗 3-羟基肉桂酸􀂗 矮壮素、甲哌啶􀂗 苯海拉明􀂗 4-二甲氨基吡啶􀂗 草甘膦􀂗 三聚氰胺、三聚氰酸􀂗 胍

很多种类的极性化合物分离条件。􀂗 UDP-葡萄糖􀂗 UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、磷酸半乳糖􀂗 葡萄糖􀂗 蔗糖􀂗 红细胞中的UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、三磷酸腺苷（ATP）􀂗 ADP-葡萄糖、CDP-葡萄糖􀂗 糖核苷酸􀂗 胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤􀂗 三磷酸腺苷（ATP）、一磷酸腺苷（AMP）􀂗 黄嘌呤-磷酸、鸟嘌呤-三磷酸􀂗 体液中的黄嘌呤、尿酸、次黄嘌呤􀂗 色胺、五羟色胺、多巴胺􀂗 L-天冬氨酸、L-精氨酸􀂗 L-精氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸􀂗 谷氨酸、赖氨酸􀂗 亮氨酸、异亮氨酸􀂗 L-甲硫氨酸、L-谷氨酸􀂗 甲基琥珀酸、戊二酸、草酸、肌酸、4-羟脯氨酸、天冬氨酸、鸟氨酸􀂗 叶酸􀂗 抗坏血酸􀂗 胆汁酸􀂗 柠檬酸、马来酸、反式乌头酸􀂗 马来酸、富马酸􀂗 3-羟基肉桂酸􀂗 矮壮素、甲哌啶􀂗 苯海拉明􀂗 4-二甲氨基吡啶􀂗 草甘膦􀂗 三聚氰胺、三聚氰酸􀂗 胍

绝大部分RNA分子都是线状单链，但是RNA分子的某些区域可自身回折进行碱基互补配对，形成局部双螺旋。在RNA局部双螺旋中A与U配对、G与C配对，除此以外，还存在非标准配对，如G与U配对。RNA分子中的双螺旋与A型DNA双螺旋相似，而非互补区则膨胀形成凸出（bulge）或者环（loop），这种短的双螺旋区域和环称为发夹结构（hairpin）。发夹结构是RNA中最普通的二级结构形式，二级结构进一步折叠形成三级结构，RNA只有在具有三级结构时才能成为有活性的分子。RNA也能与蛋白质形成核蛋白复合物，RNA的四级结构是RNA与蛋白质的相互作用。正是由于RNA具有复杂的二、三级结构，而这些结构又会引起核酸电泳时的速度变化，使得电泳的速度与其分子量大小不一定呈正相关，故而RNA电泳需要用变性电泳的方法（这里我不多说变性的方法）。 　　（一） tRNA的结构　　tRNA约占总RNA的15%，tRNA主要的生理功能是在蛋白质生物合成中转运氨基酸和识别密码子，细胞内每种氨基酸都有其相应的一种或几种tRNA， 因此tRNA的种类很多，在细菌中约有30~40种tRNA，在动物和植物中约有50~100种tRNA。　　1. tRNA一级结构：　　tRNA是单链分子，含73~93核苷酸，分子质量为24 000～31 000，沉降系数4S。含有10%的稀有碱基。如二氢尿嘧啶（DHU）、核糖胸腺嘧啶（rT）和假尿苷（ψ）以及不少碱基被甲基化, 其3’端为CCA-OH，5’端多为pG, 分子中大约30%的碱基是不变的或半不变的，也就是说它们的碱基类型是保守的。　　2. tRNA二级结构：　　tRNA二级结构为三叶草型。配对碱基形成局部双螺旋而构成臂，不配对的单链部分则形成环。三叶草型结构由4臂4环组成。氨基酸臂由7对碱基组成，双螺旋区的3’末端为一个4个碱基的单链区-NCCA-OH 3’，腺苷酸残基的羟基可与氨基酸α羧基结合而携带氨基酸。二氢尿嘧啶环以含有2个稀有碱基二氢尿嘧啶（DHU）而得名，不同tRNA其大小并不恒定，在8-14个碱基之间变动，二氢尿嘧啶臂一般由3~4对碱基组成。反密码环由7个碱基组成，大小相对恒定，其中3个核苷酸组成反密码子（anticodon），在蛋白质生物合成时，可与mRNA上相应的密码子配对。反密码臂由5对碱基组成。额外环在不同tRNA分子中变化较大可在4~21个碱基之间变动，又称为可变环，其大小往往是tRNA分类的重要指标。TψC环含有7个碱基，大小相对恒定，几乎所有的tRNA在此环中都含TψC序列，TψC臂由5对碱基组成。　　3. tRNA的三级结构：　　二十世纪七十年代初科学家用X线射衍技术分析发现tRNA的三级结构为倒L形（图3-20b）。tRNA三级结构的特点是氨基酸臂与TψC臂构成L的一横，-CCAOH3’末端就在这一横的端点上，是结合氨基酸的部位，而二氢尿嘧啶臂与反密码臂及反密码环共同构成L的一竖，反密码环在一竖的端点上，能与mRNA上对应的密码子识别，二氢尿嘧啶环与TψC环在L的拐角上。形成三级结构的很多氢键与tRNA中不变的核苷酸密切有关，这就使得各种tRNA三级结构都呈倒L形的。在tRNA中碱基堆积力是稳定tRNA构型的主要因素。　　（二）mRNA　　原核生物中mRNA转录后一般不需加工，直接进行蛋白质翻译。mRNA转录和翻译不仅发生在同一细胞空间，而且这两个过程几乎是同时进行的。真核细胞成熟mRNA是由其前体核内不均一RNA（heterogeneous nuclear RNA，hnRNA）剪接并经修饰后才能进入细胞质中参与蛋白质合成。所以真核细胞mRNA的合成和表达发生在不同的空间和时间。mRNA的结构在原核生物中和真核生物中差别很大。下面分别作一介绍：　　1. 原核生物mRNA结构特点　　原核生物的mRNA结构简单，往往含有几个功能上相关的蛋白质的编码序列，可翻译出几种蛋白质，为多顺反子。在原核生物mRNA中编码序列之间有间隔序列，可能与核糖体的识别和结合有关。在5’端与3’端有与翻译起始和终止有关的非编码序列，原核生物mRNA中没有修饰碱基， 5’端没有帽子结构，3’端没有多聚腺苷酸的尾巴（polyadenylate tail，polyA尾巴）。原核生物的mRNA的半衰期比真核生物的要短得多，现在一般认为，转录后1min，mRNA降解就开始。　　2. 真核生物mRNA结构特点　　真核生物mRNA为单顺反子结构，即一个mRNA分子只包含一条多肽链的信息。在真核生物成熟的mRNA中5’端有m7GpppN的帽子结构，帽子结构可保护mRNA不被核酸外切酶水解，并且能与帽结合蛋白结合识别核糖体并与之结合，与翻译起始有关。3’端有polyA尾巴，其长度为20~250个腺苷酸，其功能可能与mRNA的稳定性有关，少数成熟mRNA没有polyA尾巴，如组蛋白mRNA，它们的半衰期通常较短。

http://photocdn.sohu.com/20120710/Img347740451.jpg 加州大学洛杉矶分校的工程师们开发了一种全新的光学显微镜，显微镜上配备了世界上最快速的相机，可用于探测“流氓”癌细胞。　　【搜狐科学消息】据国外媒体报道，美国加州大学洛杉矶分校（UCLA）的工程师们近日研制出了一款世界上最快速的相机，可用于探测难以捉摸的“流氓”癌细胞。这一科研成果的研究报告发表在了最新一期的《美国国家科学院院刊》上。　　从大量各类正常细胞中识别和分离出一些罕见细胞对于某些疾病的早期发现、监测和治疗来说正在变得越来越重要。这些罕见细胞中，在体内自由移动的癌细胞就是一个很好的例子。通常情况下，在10亿个健康细胞中也只有一小撮癌细胞，然而它们会抢先转移，癌细胞扩散导致癌症患者的死亡率高达约90%。这样的“流氓”细胞除了癌细胞以外，还包括用于再生医学的干细胞及其它类型的细胞。不幸的是，检测这样的细胞是很困难的。要取得良好的统计准确性需要一台自动化、高通量的仪器，可以在相当短的时间内对数以百万计的细胞进行检测。配备了数码相机的显微镜是目前分析细胞的唯一设备，但是该设备对于这项研究来说速度显得太慢了。　　现在，美国加州大学洛杉矶分校（UCLA）的工程师们开发了一种全新的光学显微镜，可以让这项艰巨的任务变得轻松许多。加州大学洛杉矶分校电气工程学院的工程师巴赫拉姆•贾拉利(Bahram Jalali)说：“为了抓拍到这些难以捉摸的细胞，相机必须具备在非常高的帧速率下持续捕获并对数百万张图像进行数字化处理的能力。传统的CCD和CMOS摄像头达不到这样的速度和灵敏度，因为从像素阵列读取数据需要时间，它们在速度极快的情况下对光变得不那么敏感。”　　目前的流式细胞仪具有较高的通量，但是因为它依靠单点的光散射而不是拍照，在检测非常罕见的细胞类型时还不够灵敏，比如对于那些目前处于早期阶段或癌细胞转移前的癌症患者不适用。为了克服这些限制，巴赫拉姆•贾拉利和UCLA的的生物工程学副教授迪诺•迪•卡罗（ Dino Di Carlo）领导的一个包括生物技术、光学、高速电子和微流体的跨学科研究团队开发出了高通量流式光学显微镜，这款显微镜非常灵敏，具备实时探测含量为百万分之一的罕见细胞的能力。　　贾拉利的团队以他们在2009年创建的光子时间飞梭相机技术为基础，研制出了世界上最快的连续运行的相机。贾拉利、迪•卡罗和他们的同事在报告中描述了他们如何将这台相机与先进的微流体和实时图像处理技术进行整合，以对血液样本中的细胞进行分类。新的血液筛查技术每秒可筛查10万个细胞，比传统的基于成像的血液分析仪高出约100倍的通量。迪•卡罗说：“这项科研成果需要与一些尖端技术进行整合，通过生物工程部门、电气工程部门和加州纳米技术研究院的合作，并采用了UCLA细胞诊断学部门开发的重要的技术基础设施。”贾拉利和迪•卡罗均是加州大学洛杉矶分校的加州纳米技术研究院的成员。　　他们的研究演示了如何实时辨别血液中罕见的乳腺癌癌细胞。初步结果表明，这种新技术有可能迅速地在大量血液中检测到极稀少的循环癌细胞，并将提高癌症早期检测、监测药物和放射治疗的效率。加州大学洛杉矶分校的电气工程和生物工程的项目经理本田惠介(Keisuke Goda)说：“这项技术可以大大减少错误，并将降低医疗诊断成本。”　　研究人员通过将实验室生长的癌细胞与模拟现实生活中的病人的不同比例的血液进行混合得到了检测结果。加州纳米技术研究院的一名成员格达（Goda）说：“为了进一步验证该技术的临床应用效果，我们目前正在与临床医生合作进行临床试验。这项技术也将可能用于进行尿液分析、水质监测和相关的应用。”（尚力）

化妆品功效性原料物经皮吸收，主要是通过角质层和活性表皮浸润真皮，直接作用于靶细胞。皮肤对大多数功效性原料物是经皮给药的屏障，许多化妆品功效性原料物透皮给药后，渗透速率达不到治疗要求，所以，寻找促进化妆品功效性原料物透皮吸收的方法，是开发透皮给原科物系统的关键。它包括物理方法和化学方法。研究得最多的是化学方法是使用渗透促进剂，此外，化学方法，还有化学结构改造，如合成具有较大透皮速率的前体药物，使用微乳、脂质体等技术，对蛋白质等水溶性大分子原洲物，离子导入和超声波等物理方法应用较多。化妆品渗透促进剂常用的可分为以下几类，见表1。 【这个表格 导不进来 大家可以看看下面 23 4楼】表1 渗透促进剂一览表 类型 举例 药物 作用机制亚砜类 二甲基亚砜（DMSO）、癸基甲基亚砜（DCMS） 氢化可的松、水杨酸、溴乙啡啶、茶碱、氟灭酸、丙炎松等 角质层细胞内蛋白质变性；破坏角质层细胞间脂质的有序排列；脱去角质层脂质，脂蛋白吡咯烷酮类 2-吡咯酮、5-甲基-2-吡咯酮、1,5-二甲基-2-吡咯酮 ******、正辛醇、苯甲酸、倍他米松、甲灭酸 低浓度分配进入角蛋白，高浓度影响角质层脂质流动性并促进药物在角质层的分配；增加角质层的含水量Azone及其类似物 Azone 氯林可霉素磷酸酯、褐霉素钠、氟尿嘧啶、丙缩羟强龙、地塞米松、醋酸环戊酮缩去炎松 渗入皮肤角质层，降低细胞间脂质排列的有序性；脱去细胞间脂质形成孔道；增加角质层含水量；降低角质层脂质的相转变温度脂肪酸及其酯 油酸、肉豆蔻酸异丙酯、丙二醇二壬酸酯、癸二酸二乙酯 水杨酸、雌二醇、芬太尼、********、肝素、吲哚美辛 渗入角质层脂质，影响其有序排列；降低角质层脂质双分子层的相转变温度；引起角质层脂质固–液相分离和晶型转变；增加药物在角质层的分配表面活性剂 月桂醇硫酸钠、泊洛沙姆 氟灭酸、水杨酸 使角质层脂质排列无序化；乳化皮肤表面脂质，改善药物在角质层的分配醇类 乙醇、异丙醇、正十二醇、正辛醇 水杨酸、雌二醇、纳洛酮、左旋-18-甲基炔诺酮 作为溶剂增加药物在角质层的溶解度；脱去角质层脂质；渗入角质层脂质，影响其排列有序性多元醇类 丙二醇、丙三醇 水杨酸、5-氟尿嘧啶 使角蛋白溶剂化，占据蛋白质的氢键结合部位，减少药物-组织间的结合；增加并用的其他渗透促进剂在角质层的分配萜烯类 桉树脑、d-苎烯、橙花叔醇 普鲁卡因、吲哚美辛、5-氟尿嘧啶、肝素 促进药物在角质层的扩散；破坏角质层细胞间脂质屏障；提高组织电导率，打开角质层极性孔道；增加药物从基质向角质层的分配胺类 尿素、十二烷基-N,N-二甲基氨基乙酯 5-氟尿嘧啶 促进角质层水化，在角质层形成亲水性孔道；破坏角质层脂质结构酰胺类 二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺 ******、正辛醇、氢化可的松 低浓度时分配进入角蛋白区，高浓度时影响角质层脂质的流动性环糊精类 环糊精、2-羟丙基-环糊精 Liavozolel 将药物形成包合物，提高溶解度，并可把药物分子传递到皮肤表面氨基酸及其酯 L-异亮氨酸、十二烷基焦谷氨酸酯 雌二醇、左旋-18-甲基炔诺酮、茶碱 松弛皮肤的角蛋白，影响角质层脂质排列的有序性大环化合物 十五烷酮 氢化可的松 增加药物在角质层中的溶解度有机溶剂类 醋酸乙酯 水杨酸 破坏角质层脂质排列的密实性磷脂类 卵磷脂、豆磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺 二氢麦角胺、异三梨醇硝酸酯、茶碱、吲哚美辛 促进药物从基质中释放，增加药物在皮肤中的扩散；作用于角质层细胞膜脂质，改善其渗透性

4月20日，国际著名杂志《科学》Science上刊登了来自麻省理工学院和波士顿大学的研究人员的最新研究成果“Oxidation of the Guanine Nucleotide Pool Underlies Cell Death by Bactericidal Antibiotics，”，文章中，研究者揭开了三类主要的抗生素潜在的杀伤机制：药物生成了一些破坏性分子，通过一连串细胞事件对细胞DNA造成了致命性的损伤。青霉素和其他抗生素的出现使医药发生了革命性的改变，将曾经是致死性的疾病转变为了容易治愈的疾病。然而，尽管抗生素在临床上应用已有70多年，其杀死细菌的确切机制却仍是一个待解之谜。研究人员表示详细了解这一机制可以帮助科学家们改进现有的药物。在过去40年只有少数的新抗生素被开发出来，而大量的细菌株却对当前可用的药物产生耐受。波士顿大学生物医药工程学教授James Collins说：“这有可能提高我们当前‘武器库’的杀伤效应，减少所需剂量，或使细菌株对现有的抗生素重新敏感。破坏性的自由基2007年，Collins证明三类主要的抗生素——喹诺酮类、β-内酰胺类和氨基糖苷类——可通过生成高度破坏性的分子羟基自由基（hydroxyl radicals）来杀伤细菌细胞。当时，他和其他的研究人员就猜测自由基对它们遭遇的所有细胞成分发动了全面的攻击。麻省理工学院生物学教授Graham Walker 说：“它们几乎对一切都产生反应。它们会追击脂质、它们能氧化蛋白，它们能氧化DNA。”然而在新研究中，研究人员发现这种损伤大部分并非是致命性的，研究人员证明能对细菌造成致死性损伤的是羟基诱导的鸟嘌呤损伤，鸟嘌呤（G）是组成DNA的四个基本核苷酸碱基之一。当这种损伤的鸟嘌呤插入到DNA中时，细菌会致力修复这种损伤，但最终加速了自身的死亡。“这并非是导致所有杀伤效应的原因，但事实它却占据了相当重要的比重，”Walker说。最初，Walker对于DNA修复酶的研究令到研究人员怀疑这种氧化鸟嘌呤有可能在抗生素介导的细胞死亡中发挥了作用。在第一个研究阶段，他们发现了一种特异的DNA聚合酶DinB非常善于利用氧化鸟嘌呤元件来合成DNA。然而，DinB不仅在DNA复制过程中将氧化鸟嘌呤插入到了其正确碱基对胞嘧啶（C）的对面，还将其插入到了腺嘌呤（A）的对面。研究人员发现当太多氧化鸟嘌呤被掺入到新的DNA链中时，细胞将无法成功去除这些损害，因此导致了死亡。基于这些基础的DNA修复研究，Walker和他的同事们于是猜测抗生素生成的羟基自由基是否有可能引发了相同的一连串的DNA损伤。事实证明果然如此。一旦抗生素处理导致的氧化鸟嘌呤插入到DNA中，一个旨在修复DNA的细胞系统就会采取行动。一些称之为MutY 和 MutM的特异性酶通过剪断DNA来启动胞修复过程，正常情况下这一修复机制可以帮助细胞应对DNA中存在的氧化鸟嘌呤。 然而这种修复也是具有高风险的，因为它需要打开DNA双螺旋，在错误碱基被替换时切断DNA链。如果两种这样的修复在DNA反向链附近的位置同时发生，那么DNA就会发生双链断裂，这通常对细胞具有致命效应。“原本应该保护你，确保准确性的系统变成了刽子手。”Walker说。哈佛医学院微生物和免疫生物学教授Deborah Hung说：“新研究代表随着我们重新了解抗生素的作用机制会开启下一个重要的篇章。我们过去思考我们所知的，现在我们意识到所有的简单假设都是错误的，它其实更为的复杂。”

尿干化学法分析仪和传统显微镜镜检是基于两种不同原理的检验手段，因此检测结果可能存在一定程度的差异。临床中两种诊断血尿方法常配合使用以达到检测效率与质量的统一，总结起来，对检测结果的影响因素主要有以下几方面。　　3．1 假阳性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阳性，但镜检却呈阴性 。其原因包括：(1)尿液分析仪潜血实验可与完整红细胞阳性反应，也能够与血红细胞释放的血红蛋白(hemoglobin，Hb)进行反应，这与显微镜只能够观察到完整的红细胞存在差异。健康人群尿Hb水平极低，定为阴性；(2)肌红蛋白(myoglobin，Mb)分子中包含Hb基团，当骨骼肌、心肌严重受损，血MB浓度升高，经肾排泄，导致尿液MB水平升高，潜血反应因此呈阳性，而显微镜检查却呈阴性；(3)部分患者尿中存在对热不稳定的酶，也可导致试剂块发生颜色变化，发生潜血反应；氧化性物质的污染也是造成潜血反应假阳性因素；高温或标本存放时间过长导致潜血反应阳性率增高 ；(4)尿试纸条超过保质期，或没有妥善保存、操作不当、仪器故障等均可能造成假阳性。　　3．2 假阴性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阴性，但镜检却呈阳性。其原因包括：(I)食物、药物影响：某些饮食、药物可引起尿液成份的改变如当尿液中存在大量的维生素时，维生素具有的强还原性使其竞争性结合反应产生的氧，导致尿试纸条无法出现潜血反应即出现假阴性反应；(2)高蛋白、高比重尿样削弱了试剂块潜血反应的敏感度，使能够发生反应的成分被包裹，反应试剂无法接触到，从而出现假阴性结果。　　3．3 离心对检测结果的影响 离心中若速度过快，致使有形成分遭到破坏；但过慢时，沉渣中可能无法找到，以至于漏掉。因此对检验结果出现怀疑时，可实验潜血证实进行验证。总之，随着尿干化学分析仪普及，工作效率得到了极大提升，也使检测红细胞敏感度提高，但显微镜镜检也是无法替代的。对于疑似阳性反应的病例，应采用尿沉渣镜检进行复测，以求结论准确，提高检测可靠性。

DNA甲基化是表观遗传学的重要研究内容之一，它可以在转录水平抑制基因的表达。具体的过程是在胞嘧啶－鸟嘧啶（CpG二核苷酸）的5位碳原子上添加了一个额外的甲基团，形成5－甲基胞嘧啶。CpG二核苷酸密度较高的区域在人体基因组中呈非随机分布于，优先分布于基因的启动子区，并被称为CpG岛 。对于癌症，其基因组的甲基化分布发生变化 。正常状态下应甲基化的区域未甲基化，而症状状态下非甲基化区域出现甲基化，例如CpG岛相关启动子呈超甲基化。这可导致受累基因座的染色质结构发生变化，致使基因沉默。启动子超甲基化可导致有关肿瘤演进的重要基因再次沉默，例如那些有关DNA修复、细胞周期调控和凋亡的基因。因此，可以认为DNA甲基化与肿瘤研究密切相关。肿瘤中某些基因的DNA甲基化状态的变化通过其生物学特征反映出来。因此，评估DNA甲基化的快速高通量方法对研究者和临床医生在诊断、治疗和预后都非常有实用价值 。当前对于DNA甲基化研究，普遍使用的方法有甲基化特异性PCR，变性高效液相色谱法（DHPLC），联合亚硫酸氢钠限制性内切酶分析法（COBRA）等，这些方法各有优势，但是均存在诸如实验设计复杂，易产生假阴性或假阳性等问题，提示科学家寻找更加容易且准确的分析手段。甲基化敏感性高分辨熔解分析（MS-HRM）是近年兴起的一种适用于评估特定基因DNA甲基化的新技术。它基于当前实时荧光PCR仪器的前沿应用 – 高分辨率熔解曲线分析（HRM），使用既可扩增甲基化序列也可扩增非甲基化序列的引物对来自经重亚硫酸盐修饰的DNA的相关区进行PCR扩增。重亚硫酸盐修饰DNA，让非甲基化的胞嘧啶转换为尿嘧啶，而5－甲基胞嘧啶保持不变，随后通过PCR扩增检测感兴趣区域的甲基化状态。在MS-HRM中，在饱和的DNA结合染料存在的情况下进行PCR反应，在扩增后进行高分辨熔解曲线分析，HRM分析的特点为可以区分扩增产物中少至1个碱基变化的序列差异，从而通过尿嘧啶/胞嘧啶的差异判断扩增子来源于甲基化还是非甲基化的初始模板变异体。MS-HRM可评估引物之间整条扩增子的甲基化状态。由于它是一种闭管方法，可初步快速评估甲基化。相比于传统的方法，它的成本低廉，分辨率高，通量灵活（最多一次筛查384个样本，最少几个样本），并且准确率大大提升。结合标准品的特征熔解曲线，还可以对样本中存在的甲基化DNA比率进行基本的定量。更多有关特定CpG位点的甲基化的详细信息，可采用重亚硫酸氢盐修饰后测序分析。http://www.biomart.cn/upload/asset/2010/07/30/1280471779.jpgLightCycler主要应用：实时荧光PCR技术进行快速准确的DNA甲基化分析我们使用罗氏诊断公司的LightCycler®480高分辨熔解扩增试剂盒在LightCycler®480实时荧光PCR仪上，通过MS-HRM测定法对两种已知的经过启动子（FANCE和MGMT）甲基化的DNA修复基因的检测性能。材料和方法将多种细胞株的DNA样本作为检测模板。每μg的每种DNA样本都经过重亚硫酸盐修饰。通过在正常DNA（经过重亚硫酸盐修饰）池中按50％、25％、10%、5％和1％稀释100％的甲基化对照DNA（经过重亚硫酸盐修饰）以创建甲基化标准品。MS-HRM引物按Wojdacz和Hansen描述的方法设计。使用LightCycler®480高分辨熔解扩增试剂盒在96孔LightCycler®480仪器中执行扩增和熔解反应。http://www.biomart.cn/upload/asset/2010/07/30/1280471781.jpg图1：（a）含100％甲基化和非甲基化质控品和50％、25％、10％、5％和1％的甲基化标准品的FANCE MS-HRM测定法。使用“Tm Calling”和“HRM基因扫描”软件模块分析的数据。（b）含100％甲基化和非甲基化质控品和50％、25％、10％、5％和1％的甲基化标准品的MGMT MS-HRM测定法。使用“Tm Calling”和“HRM基因扫描”软件模块分析的数据。