吕氏碱性美蓝染色液

染色方法　　微生物染色方法一般分为单染色法和复染色法两种。前者用一种染料使微生物染色，但不能鉴别微生物。复染色法是用两种或两种以上染料，有协助鉴别微生物的作用。故亦称鉴别染色法。常用的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法，此外还有鉴别细胞各部分结构的（如芽胞、鞭毛、细胞核等）特殊染色法。食品微生物检验中常用的是单染色法和革兰氏染色法。1、单染色法　　用一种染色剂对涂片进行染色，简便易行，适于进行微生物的形态观察。在一般情况下，细菌菌体多带负电荷，易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。因此，常用碱性染料进行单染色，如美兰、孔雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等。若使用酸性染料，多用刚果红、伊红、藻红和酸性品红等。使用酸性染料时，必须降低染液的PH值，使其呈现强酸性（低于细菌菌体等电点），让菌体带正电荷，才易于被酸性染料染色。　　单染色一般要经过涂片、固定、染色、水洗和干燥五个步骤。　　染色结果依染料不同而不同：　　石碳酸复红染色液：着色快，时间短，菌体呈红色。　　　　美兰染色液：着色慢，时间长，效果清晰，菌体呈兰色。　　草酸铵结晶染色液：染色迅速，着色深，菌体呈紫色。2、革兰氏染色法　　革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。　　细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。　　革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。　　另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。本文来自检验地带网　　革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：　　１）涂片固定。　　２）草酸铵结晶紫染1分钟。　　３）自来水冲洗。　　４）加碘液覆盖涂面染1分钟。　　５）水洗，用吸水纸吸去水分。　　６）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。　　７）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。　　染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

来源：生物秀染色剂的分类一、按来源可以分为 1.天然染色剂：主要是苏木素，胭脂红，地衣红，番红花。 2.合成染色剂：是从煤焦油中提取的苯衍生物。在生物染色中还使用一些无机化合物，如硝酸银，氯化金，磺，锇酸，高锰酸钾等。 二、按主要用途分为 1.胞核染色剂：苏木素，胭脂红，甲苯胺蓝，美蓝，孔雀绿等。 2.胞浆染色剂：伊红，淡绿，橘黄G,酸性品红,苦味酸等。 3.脂质染色剂：苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑，硫酸尼罗蓝及油红等。 三、按染色剂分子中的发色团可分为九类 1.亚硝基类：发色团为亚硝基（-NO)如萘酚缘-B。 2.硝基染料：发色团是硝基（-NO2）如苦味酸。 3.偶氮类：发色团为偶氮基（-N=N-）属于这一类的染色剂的橘黄G,刚果红,俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。 4.醌亚胺类：这类染料含有两个发色团，一个是印胺基（-N=），一个是醌型苯环，如硫堇，美蓝，甲苯胺蓝O,硫酸尼罗蓝,中性红,碱性藏红花O，焦油紫等。 5.苯甲烷染料：发色团是醌型苯环，如孔雀缘，浅绿，碱性品红，酸性品红，结晶紫，甲基缘等。 6.山叮染料：发色团是醌型苯环，如派罗宁，伊红Y等。 7.蒽醌染料：此类染色剂含有色原蒽醌，如茜素和胭脂虫酸。 8.噻唑类。 9.喹啉类。 8，9类染色剂使用极少。 四、按染色剂的化学性质分类 染色剂的干粉是稳定的盐类，它们在溶液中则电离成酸性或碱性染色剂。如酸性染色剂，能够产生氢离子（H+)或其它阳离子(Na+),而其本身成为带负电荷的阴离子者。这类染色剂一般用于染细胞浆，如伊红Y，苦味酸，橘黄G等。碱性染色剂，能产生氢氧根离子（OH -)或其它负离子(如Cl-),而本身成为带正电荷的阳离子者。这类染色剂常用于染细胞核,如碱性品红等。 1.酸性染色剂：色原——助色团——Na→[色原-助色团]+Na+。常用的如伊红，酸性品红，苦味酸，橘黄G，刚果红，水溶性苯胺蓝，淡绿等酸性染料常用以染细胞浆等碱性成份。 2.碱性染色剂：色原——助色团——Cl→[色原-助色团]++Cl。常用的如苏木素,卡红,次甲基蓝,甲苯胺蓝,硫堇,美蓝等碱性染料常用以染细胞核等酸性成份。 严格地说，酸性染色剂的溶液并不一定呈酸性。同样，碱性染色剂的溶液也未必呈碱性。所谓酸性和碱性染色剂仅指它们电离后其分子的主要染色部分是阳离子还是阴离子。因此称为阳离子型染色剂或阴离子型染色剂更为适当。 常规H.E染色中苏木素染液的PH值约为7，此时胞核的化学成份电离产生H+，而其本身成为带电荷的阴离子，所以被阳离子型的碱性染料剂所着色。伊红染液为弱酸性。细胞的化学成份从溶液中获取H+而成为带正电荷的阳离子，因此与阴离子型的酸性染色剂（伊红）相结合，染作红色，这就是H.E染色分别显示核和胞浆的机制。 3.中性染色剂：这是酸性染色剂和碱性染色剂的复合物，又可称为复合染料。是由碱性染料（色碱的盐）和酸性染料（色酸的盐）配制而成。其中染色剂的分子很大，所以往往水中溶解度较低，需用酒精做溶剂。血液学中的血液涂片经常使用的瑞氏染色剂及姬姆萨染色剂就是这种混合染色剂。其中的各种不同成分可分剔使核、胞浆和颗粒着色。

我想知道美兰染色剂那里有的买.谢谢

碱性染料染色色光和强度的测定[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=47970]碱性染料染色色光和强度的测定.pdf[/url]

甲基蓝染色液怎么配制的，我急用~~~~~~~~~~注:不是亚甲基蓝

方法简介　　是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰（Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。 　　未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察 。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。

将革兰氏染色的第一液滴加在已固定的涂片上染色，一般染()，用水洗去。 A、30秒 B、60秒 C、80秒 D、90秒

革兰氏染色加入染色剂需要一直加热吗？

进行革兰氏染色验证试验时，载玻片先用脱脂棉沾酒精擦拭干净，再在酒精灯火焰上来回烤热杀菌下，然后用滴头加入什么液体一~二滴，再用灭菌过的接种针接种一环将培养物涂布再液滴表面，以将培养物涂片开来，我看革兰氏染色操作视频是这样的，但是标准的操作方法并没有提到用滴头加入什么液体一~二滴，而是直接接种涂布啊。

[size=18px][font=宋体] 在大肠菌群测定过程中，革兰氏染色（Gram Stain）又是一步很重要的鉴定阶段，革兰氏染色的正确性直接关系到能否正确判断该菌落是不是大肠菌群，而革兰氏染色正是一门难以掌握的最基本的细菌学实验技术，许多分析人员因缺少这方面熟练技术而显得对革兰氏染色结果没有把握，有的只好通过多次反复试验以求得一个仍不很肯定的判断结果，既浪费时间又不能保证染色结果是否正确，很可能还导致大肠菌群测定错误或失败，我们在多年的大肠菌群测定分析的实践基础上，通过纯培养一株大肠杆菌（Escherchiacoli ）和一株枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis）并进行多种条件下的革兰氏染色实验比较，以观察革兰氏染色易受哪些因素影响，从而进一步研究这项技术的最佳操作方法。[/font][/size][font=宋体][size=18px][font=宋体]1 [/font][/size][size=18px][font=宋体]实验材料1.1 大肠杆菌 大肠杆菌是大肠菌群中很重要也很有代表性的一种．在某次大肠菌群测定过程中，选取伊红美兰琼脂培养基上不同的典型菌落，按《应用微生物学实验法户〕 中大肠菌群细菌分离法得到甲基红试验阳性、VP 试验阴性、发酵柠檬酸盐阴性、利用脉酸试验阴性等特征的一株大肠杆菌．[/font][/size][font=宋体][size=18px]2 [/size][size=18px]实验结果与分析 2.1菌龄的影响 16h 和24h的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌革兰氏染色均能得到正确结果，但32h以上的枯草芽抱杆菌有13.3％出现阴性结果。出现阴性反应的枯草芽抱杆菌同时发现很多菌体已经不呈典型杆状，显然由于培养时间过长，枯草芽抱杆菌（阳性菌）或已死亡或部分菌自行溶解了，造成细胞壁通透性增大而呈假阴性。因此在大肠菌群测定时，细菌在伊红美兰琼脂培养基上培养时间不宜超过24h，以免阳性菌呈假阴性干扰革兰氏染色的正确性．2.2细菌堆积密度影响 涂片时生理盐水中细菌浓厚时，菌体明显堆积在一起，从而影响酒精脱色效果，甚至在细菌堆中仍残留结晶紫，因而无论大肠杆菌还是枯草芽抱杆菌，凡密集成堆的常常呈阳性反应，而均匀分散的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌都能得到正确结果，因此测定时应以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准． 我们认为在大肠菌群革兰氏染色时菌龄、细菌密集程度、媒染时间、酒精脱色程度这几方面因素会对染色的正确性产生影响．在大肠菌群测定时，革兰氏染色的最佳条件应该是：细菌在伊红美兰琼脂培养基上培养时间不宜超过24h ，涂片时应以分散开的细菌染色为准，碘媒染时间以1 min为宜，酒精脱色程度是革兰氏染色的关键，脱色时间应严格控制在2S 一30S之间。为进一步确证革兰氏染色操作正确，应把未知菌伊红美兰琼脂培养基上的典型菌落（cdony）与已知的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌的混合菌同片染色，如果混合菌能分辨出阳性菌和阴性菌，则也能肯定未知菌革兰氏染色结果是正确的．[/size][/font][/font]

革兰氏染色阳性细菌，在显微镜下呈()色。 A、红 B、紫 C、黄 D、绿

我最近做总大肠菌群的革兰氏染色镜检的时候，发现沙黄总是没办法染色，最后的颜色不知道是结晶紫脱色不成功留下来的微紫红色，还是什么颜色，没办法对革兰氏阳性菌和阴性菌进行有效区分，大家有谁有用过什么厂家的革兰氏染色试剂盒或者厂家的沙黄好用的给推荐一下，我愁死了

我想买革兰氏染色试液，谁买过，哪个厂家质量好

革兰氏染色是固定的目的是什么？

革兰氏染色法不仅用来观察细菌的形态，而且它还是细菌鉴定的重要方法，它可将全部细菌区分别革兰氏阳性菌和阴性菌两大类。革兰氏染色法的步骤为：涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。　　涂片 与单染色法相同。　　固定 与单染色法相同。　　结晶紫染色 染色1分钟，然后水洗并用吸水纸吸干。　　碘液媒染 染色1分钟，然后水洗并吸干。　　酒精脱色 用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止（大约半分钟），然后立即水洗，并吸干。　　番红复染 染色3分钟左右，然后水洗并吸干。　　镜检 在显微镜油镜头下观察，菌体显蓝紫色的为革兰氏阳性菌；菌体显红色的为革兰氏阴性菌。

革兰氏染色仪 哪个好？谁知道啊

GS-Smart小型自动凝胶染色摇床在考马斯亮蓝染色实验中的应用考马斯亮蓝染色法（CBB染色法）是目前蛋白质染色实验中相当常用的方法，它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，号称目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一，而又比硝酸银染色等其他方法更简便且更加容易操作，因而得到了广泛应用。考马斯亮蓝染色法的全实验过程有两个关键且耗时较长的步骤，分别是染色和脱色。通常，为了让蛋白凝胶能够充分的染色和脱色，一般会先后将CBB染色液、脱色液加入持续摇摆的脱色摇床工作池，再置入凝胶使其充分浸润洗涤，从而实现染色脱色。普通的脱色摇床除了工作池的摆动频率可以调节外，并没有其他参数可以设置，进液、换液和排液等步骤都必须由实验人员手动完成。而且启动后，由于工作池一般是持续不停的摆动，因而染色、脱色时间也只能靠实验人员自己把握。所以，普通考马斯亮蓝染色脱色实验一般都需要有实验人员值守。此外，为固定蛋白质和维持CBB在染色前的酸性环境，同时也为了去除前期电泳残留物质对染色的干扰，通常配置的CBB染色液或脱色液中有时会加入具有神经毒性的甲醇和强刺激性的乙酸，且配好的CBB染色液一般总体呈棕黑色（CBB R-250）。而普通脱色摇床的工作池完全敞开暴露，所以摆动过程中有可能溅出溢出CBB染色液、脱色液，还有可能挥发出有毒化合物。这样不仅容易造成污染，甚至可能产生安全隐患，进而危害实验人员的健康。鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床（又名自动凝胶染色仪）可以很好地解决以上普通考马斯亮蓝染色脱色实验所面临的问题，同时也能带来更多便利。首先，她的智能编程功能可以实现进液、换液、出液、定时摇动、废液回收的自动运行，全过程无需人员值守，从而真正全自动完成CBB染色脱色实验。其次，她配备了可封闭的染色池，能有效防止CBB染色液、脱色液溅出溢出，阻隔挥发物质，从而大大降低污染风险，保护实验人员的健康。染色池还有多款尺寸可选，甚至可以定制，从而尽可能多地满足不同科研工作者对考马斯亮蓝染色脱色实验的不同需求。第三，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床操作起来也十分简单方便，只需“加入溶液、置入凝胶、设置管路程序、点击运行”四个简单的步骤，便可轻松搞定考马斯亮蓝染色、脱色的全过程，省时省力省心。另外，再值得一提的是，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床还拥有国际外首创的机身与储液瓶一体化设计，与市场同类产品相比，减少了分散在外的瓶瓶罐罐，节省了实验室空间，同时也美化了整体外观。本文关键词：染色摇床,自动凝胶染色摇床,考马斯亮蓝染色,CBB染色

为一种生物染色剂，必须同时满足两个要求：具有鲜艳透明的颜色，而且能与组织细胞相结合。染色剂分子能够显示颜色的基因，称为发色团。主要的发色团有：亚硝基和偶氮基显示的颜色较强，在染色剂中有一个这样的发色团，就可染出颜色。其他的发色团则不是这样，必须有几个发色团，有醌的分子中就有四个发色团，（2个羰基2个烯基）。 大量的合成染料都是由煤焦油蒸馏得到的，它们都是苯的衍生物，所以苯环是合成染料的基础。苯本身是无色的，但其氢原子为某发色团取代后就带有了颜色。含有发色团的苯环化合物，称为色原。 苯+发色团=色原 色原还不能很好地与组织细胞相结合，即使着了色也很容易脱去。因此仅仅具有色原还不能成为染色剂，染色剂分子中还需具备促使染色剂与组织细胞相结合的基因，这样基国在称为助色团。如—NH2 —COOH —OH —SO3H 氨基 羧基 羟基 磺酸基 氨基在溶液中形成阳离子（+），为碱性；其它羟基，羧基和磺酸基皆带阴离子（-）故为酸性。如三硝基甲苯是个色原，它虽有发色团—硝基，但因缺乏助色团，所以没有染色作用，不能称为染料。假如三硝基苯分子中的一个氢原子被羟基置换，则所生成的化合物既具有发色团而又得到了助色团—羟基，这就成了常用的酸性染料苦味酸。 这就可以看出，助色团的作用在于使色原形成盐类，可以在溶液中电离成为带电的离子，这样才能与相应的组织细胞的成份相结合。

最近要评审了，这段时间做了个练习。用棉签在厕所擦拭，弄了4个水样，同时做总大肠和粪大肠。结果是粪大肠阳性，按理说总大肠是不是也该阳性？可是我染色镜检的时候，染出来是紫色（革兰氏阳性）。。。。。搜了些资料，都说脱色是革兰氏染色的关键，脱色不够，容易染成假阳性；脱色过度，容易染成假阴性。那么问题来了，怎么把握这个关键呢？各位老师可有什么[color=#33cc00]诀窍[/color]可以指教指教，比如看到什么现象表示脱色刚好，或是脱色过度。。。。先谢过各位老师了。

各位前辈好！最近练手革兰氏染色，拿江河水样，用多管发酵法和滤膜法。两个涂片结果都是红色，表明是革兰氏阴性菌。但有个疑问，是担心酒精脱色没把握好，导致把阳性菌变成假阴性。想问一下各位负责总大肠菌群的前辈，你们试验中会做一个革兰氏阳性菌来对照吗？个人觉得水体中（本人使用钱塘江水），不太可能出现革兰氏阳性菌，这种想法是不是不严谨呢。以及CMA认证时，担心老师会要求现场操作革兰氏染色，求问，大家有什么建议，比如什么地方需要注意。还有大家染色时都是在无菌操作台，还是只是在一般实验室，使用酒精灯保证一个无菌区呢？问题有点多，谢谢各位先。

一、埃利希(Ehrlich)氏苏木精染液 先将苏木精2g溶于100mL乙醇中，再加冰醋酸10mL，混合后加蒸馏水100mL和100mL甘油，然后加硫酸铝钾(约10g)至饱和，搅拌均匀，倒入瓶中。将瓶口用1层纱布包着小块棉花塞上，放在暗处通风的地方，并经常摇动促进“成熟”，直到液体颜色变为深红色为止。成熟时间约2-4周。若加0.4g碘酸钠可加快成熟。 二、吉姆萨(Giemsa)氏母液 将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66mL)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。然后再加入甲醇(66mL)，搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。 临用时用pH 6.8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。 三、瑞(Wright)氏染液 称取瑞氏染料粉末0.1g于研钵内研细后，加入少量甲醇再反复研磨，最后将全部甲醇(总共60mL)加入研匀，染料全部溶解后，将染液保存于棕色瓶内备用。 四、醋酸洋红染液 将洋红粉末1g倒入100mL45%醋酸溶液中，边煮边搅拌，煮沸(沸腾时间不超过30s)，冷却后过滤，即可使用。也可再加入1%～2%铁明矾水溶液5-10滴，至此液变为暗红色而不发生沉淀为止。如制作永久标本染色时，可加入饱和氢氧化铁或醋酸铁(媒染剂)溶液数滴，至染色液呈浅蓝色为止。 五、硫堇染液(工作液) ①干液(硫堇)：硫堇1g或2g溶于100mL 50%乙醇中，溶解后过滤备用； ②醋酸钠缓冲液：醋酸钠3H2O 9.7g，巴比妥钠14.7g，溶于500mL蒸馏水中； ③0.1 mol／L盐酸； 按①：②：③=40：28：32比例配成混合液，调pH5.7±0.2，即得硫堇工作液。 六、0.02%盾纳斯绿B(Janus Green B) 用0.9%生理盐水溶液配制。 七、甲基绿—派洛宁染液(Unna试剂) 派洛宁0.25 g，甲基绿0.15g，95%乙醇20mL，甘油20mL。将以上试剂混合溶解后用0.5%苯酚水溶液稀释至100 mL。 八、卡诺(Carnoy)氏液 配方1：无水乙醇3份，冰醋酸1份，混匀即可。 配方2：无水乙醇6份，冰醋酸1份，氯仿3份，混匀即可。 九、酸性生理盐水的配制将10mL 0.1 mol/L盐酸加入300mL生理盐水中，调整其pH值至2.5～3.5。 十、迈耶(Mayer)氏蛋白甘油粘贴剂 取一个鸡蛋的蛋清，充分搅拌成泡沫状，然后用粗滤纸或双层纱布过滤，经过数小时即可滤出透明蛋白液。再加入等量的甘油并轻轻摇动，使两者混合。最后加入少许麝香草酚防腐。可保存几个月，半年以后不宜使用。 十一、血管注射标本色剂 红色色剂：银珠3g，明胶15g，蒸馏水100mL； 蓝色色剂：普鲁士蓝1 g，明胶15g，蒸馏水100mL。 将银珠和普鲁士蓝分别在研钵内研细，加入温水少许搅和，将明胶和蒸馏水倒入250mL烧杯内，置水浴锅中隔水加热沸腾使明胶完全熔化，过滤后分别倒入盛有银珠和普鲁士蓝的研钵内搅拌均匀。最后分别倒回烧杯中，并置入水浴锅内保温。水温视明胶浓度而定。亦可用代用品淀粉(2份)、甲醛(1份)、甘油(1份)、水(6-8份)和其他红、蓝色染料进行配制。先将淀粉、甲醛和甘油混匀，再加入染料进行搅拌，逐渐加入水调匀。

大家平时用到的革兰染色液是怎么验收的啊？CNAS里有要求要实验验收。

染色用的考马斯亮蓝染液弄到手上了，怎么弄掉啊，对身体有危害吗？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09508.gif

指示剂 核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中 呈紫兰色，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色，它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似.　　指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液.载样缓冲液的作用有①增加样 品密度，使其比重增加，以确保DNA均匀沉入加样孔内.②在电泳中形成肉眼可见的指 示带，可预测核酸电泳的速度和位置.③使样品呈色，使加样操作更方便.染色剂 核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其 次是银染色.　　溴化乙锭(ethidium bromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对 之间，在紫外线激发下，发出红色荧光.根据情况可在凝胶电泳液中加入终浓度为 0.5ug/ml的EB，有时亦可在电泳后，将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10～15min.琼脂 糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，其DNA量一般5ng，当溴化乙锭太多，凝胶染 色过深，核酸电泳带看不清时，可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察.　　银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛 使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染色黑褐色.主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色. 也用于琼脂糖凝胶染色.其灵敏度比EB高200倍.但银染色后，DNA不宜回收.来源：生命经纬

有没有做生活饮用水中滤膜法的总大肠菌群，革兰氏染色这一步能否省掉，谢谢

常用染色剂及配制供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。 一、苏木素-伊红染色的基本原理 苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。 苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。常配制一大瓶，备长期使用。另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈长，染色的效果愈低。这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物，故一次不宜配制过多，还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。它的优点是配制后即可使用。 成熟的苏木素对组织并无亲和力，须加入含金属离子的媒染剂，才能达到染色的目的。一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色，对染色质有很大的亲和力，水和酒精都不能使其褪色。用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子，苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色，不溶于水，因此，故不能配制大量含媒染剂的混合液，一般用时现配，或在染色过程中，先用铁明矾媒染，然后再染苏木素，如磷钨酸苏木素染色即是。 常规苏木素染色的对比染色是用伊红，也有采用焰红，因为焰红比伊红色泽更鲜明，此外还有采用橘黄G，比布里希猩红，波尔多红等作为对比染色。 苏木素-伊红染色，在组织病理学中，是一种日常使用最为广泛的常规染色方法。一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据。再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色。 二、染液的配制 在实验室内常用的苏木素染液有以下几种，不同的仅是染色时间以及比较每种染色方法彼此的优缺点，不过各有优劣。 （一）苏木素染液的配制方法如下 1.Harris氏苏木素液 甲液：苏木素 1g 无水酒精 10ml 乙液：硫酸铝钾 20g 蒸馏水 200ml 丙液：一氧化汞 0.5g 经典的配制方法是，先将甲液加热溶解后，密封待用，再将乙液加热溶解至沸，去火，待溶液仍处于小沸腾状态时再将甲液徐徐倾入其中，全部混合后，再使溶液在短时间内加热至沸腾，去火，最后，将氧化汞缓慢倾入溶液中（氧化汞一定要慢慢少量分次加入，切忌急躁。因氧化汞倒入后，溶液会迅速膨胀易沸出容器外而发生危险。）此时液体变为深紫色，待氧化汞全部放入后，再将溶液加温至沸腾片刻，立即将溶液放入流动的冷水中，并缓缓地连续摇晃至溶液完全冷却为止。隔夜后过滤，加入冰醋酸（按5%比例）混匀，再过滤后保存于冰箱内备用。 我们在实验工作中摸索了一种Harris氏苏木素的配制方法，染色效果很好，特介绍如下。 配方：（配制2000ml） 苏木素 9g 硫酸铝胺（铵明矾） 200g 氧化汞 7g（5—10g） 冰醋酸 100ml 蒸馏水 2000ml 器具： 3000毫升三角烧瓶 1个 200毫升量筒 1个 1000毫升量筒 1个 漏斗 1个（大） 滤纸 1大张 另备脱脂棉、电炉、湿抹布、大称量纸、流水槽等。 （器具要求达到化学洁净） 配法： 1．将苏木素溶于100毫升无水乙醇中，密封备用。 2．将200克铵明矾溶于2000毫升蒸馏水中，加热至沸。 3．去火。加入苏木素酒精搅拌，加热至沸。 4．去火。缓缓加入氧化汞。 5．微火煮至有金属膜产生。 6．去火。以湿抹布包住三角烧瓶的颈部。迅速放置于冷水浴中冷却，缓缓摇动烧瓶至液体完全冷却为止。 7．静置避光过夜。棉花过滤。滤液中加入冰醋酸（按5%的比例加入），混匀，滤纸过滤，备用。 注意事项： 1．配制好的苏木素液，未经使用的可长期置冰箱（冷藏）内保存。 2．盛液体的烧瓶要质优并且容积要大，防止忽速冷却对破裂和煮沸时液体溢出。 2.Hansen氏苏木素液 甲液：苏木素　　　　　　　　　　　1g 　　　无水酒精　　　　　　　　　　10ml 乙液：硫酸铝钾（钾明矾） 　　　　20g 　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　200ml 丙液：高锰酸钾　　　　　　　　　　1g 　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　16ml 　　先将甲液加热溶解，然后将乙液加热溶解，将甲、乙两液混合。再将丙液溶解后缓缓滴入，待全部混合后，再次煮沸一分钟，冷却后过滤，即可使用。 3.Heidenhain氏铁苏木素液 甲液：硫酸铁铵（紫色结晶）　　　　5g 　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　100ml 乙液：苏木素　　　　　　　　　　　0.5g 　　　无水酒精　　　　　　　　　　10ml 　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　90ml 　　此液要求硫酸铁铵只有紫色的透明结晶才能使用；苏木素是溶于洒精中然后加水。苏木素液需放置4-5周才能成熟。临用时将甲、乙两液等量混合后使用。（也可先将苏木素用无水酒精配成5%的贮备成熟，用时取10毫升加蒸馏水至100毫升使成乙液） 　　此苏木素液能染许多结构，但只能用于退行性染色法，需要熟练的分化，初学者宜用减半浓度的铁明矾分色，熟悉后再用原浓度分色。 　　此液与其它的苏木素染色技术有两个不同a.媒染剂与苏木素分开使用。b.所用的媒染剂亦用作为分色剂。 4．Ehrilich氏酸性苏木素液 主要应用一般染色和粘液，骨组织的染色 配方： 苏木素 2g 纯酒精 100ml 甘油 100ml 蒸馏水 100ml 冰醋酸 10ml 钾明矾 15g 将苏木素溶于纯酒精，再将钾明矾溶于蒸馏水中，溶解后将甘油倾人混合，然后加入苏木素酒精混合，最后加人冰醋酸，溶液全部混合后，应暴露在日光下使其自然成熟，时间约要三个月。（若加人300毫克碘酸钠，使苏木素迅速氧化则可立即使用。）此液贮存愈久染色力愈强。（可保持数年之久）染色时间5——20分钟，结果甚佳。 5．Delafreld氏苏木素液 主要应用于一般染色，弹力纤维的染色。 甲液： 苏木素 4g 纯酒精 25ml 乙液： 饱和铵明矾水溶液（约 10％）40毫升 丙液： 甘 油 100ml 甲 醇 100ml 先将苏木素溶于酒精，再将甲液混合在乙液中，置于白色瓶中并暴露在阳光下约一周，然后过滤，将丙液加人滤液中，待溶液呈暗灰色时再过滤，滤液密封保存。 6．Mayer氏明矾苏木素液 主要应用于一般染色，骨组织染色，及免疫组化染色。 配方： 苏木素 0.1g 钾明矾 5g 碘酸钠 0.02g 拘椽酸 0.1g 水合氯醛 5g 蒸馏水 100ml 先将苏木素及水煮沸溶解，加人钾明矾与碘酸钠，搅动直到全部溶解为止。再加人水合氯醛和拘椽酸，完全溶解后染液呈蓝紫色。加热煮沸五分钟，冷却后过滤即成。 此染液染切片5——15分钟，不需分化，充分水洗后，可使细胞核显蓝色并且非常细致清晰，通常用于对比染色。 7．Weigert氏铁苏木素液 甲液 苏木素 1g 无水酒精（或 95％酒精） 100ml 乙液 29％三氯化铁水溶液 4ml 蒸馏水 95ml 盐酸 1ml 临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。 由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。 8．Mallory氏磷钨酸苏木素

革兰氏菌染色步骤