小鼠胚胎成纤维细胞

目的:小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养可应用于：（1）细胞保种；（2）分子生物学研究；（3）基因治疗相关研究。实验原理:将小鼠的胚胎成纤维细胞（MEF）从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置MEF生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。

人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)检测试剂盒人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗原、生物素化的人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人成纤维细胞生长因子4(FGF4)ELISA试剂盒人成纤维细胞生长因子4(FGF4)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人成纤维细胞生长因子4(FGF4)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人成纤维细胞生长因子4(FGF4)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人成纤维细胞生长因子4(FGF4)抗原、生物素化的人成纤维细胞生长因子4(FGF4)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人成纤维细胞生长因子4(FGF4)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)ELISA试剂盒人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)抗原、生物素化的人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)检测试剂盒人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)抗原、生物素化的人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

由异体细胞组成的多层皮肤替代品已被测试用于治疗不愈合的皮肤溃疡。然而，这种非天然皮肤移植不能永久移植，因为它们缺乏对与宿主组织整合重要的皮肤血管网络。在这项研究中，我们描述了使用三维生物打印技术制造一种可植入的多层血管化生物工程皮肤移植物。移植物是使用一个生物墨水包含人类包皮皮肤成纤维细胞(FBs)，人类内皮细胞(ECs)来自脐带血人类内皮细胞群体形成细胞(HECFCs)，和人类胎盘周细胞(PCs)悬浮在老鼠尾巴I型胶原蛋白形成真皮然后打印第二个生物墨水包含人类包皮角质形成细胞(KCs)形成一个表皮。在体外， KCs复制和成熟形成多层屏障，而ECs和pc自组装成相互连接的微血管网络。真皮生物墨水中的pc与ec内衬的血管结构相关，似乎能促进KC的成熟。当这些3D打印的移植物被植入免疫缺陷小鼠的背侧时，人ec内衬结构与从伤口床上产生的小鼠微血管一起接种，并在植入后4周内灌注。打印真皮中pc的存在增强了宿主微血管对移植物的侵袭和表皮网的形成。关键词：皮肤，组织工程，生物打印，再生医学，微血管系统影响声明三维打印可用于生成多层带血管化的人体皮肤移植，这可能会克服目前在无血管皮肤替代品中观察到 的移植物存活的限制。在皮肤生物墨水中包含人周细胞似乎可以促进皮肤和表皮的成熟。

FGF-23简介成纤维细胞生长因子23或FGF23是一种蛋白质，由FGF23基因编码，它是成纤维细胞生长因子（FGF）家族的成员，参与磷酸盐和维生素D的代谢和调节，它的主要功能似乎是调节血浆中的磷酸盐浓度。FGF23由骨细胞分泌，以应对钙三醇的增加。FGF23作用于肾脏，减少NPT2的表达，NPT2是近端肾小管的钠磷共转运体。FGF23还可能抑制1-α-羟化酶，降低其激活维生素D的能力，随后损害钙的吸收。

设备和试剂--6厘米细菌培养皿--M2培养基+1毫克/毫升牛血清白蛋白（sigma） --M16培养基+ 1毫克/毫升牛血清白蛋白（sigma） --BLS胚胎聚集针（DN-10 或DN-09）--ES细胞单细胞悬液--窄口移液管（处理细胞和胚胎）来自Pasteur移液管或其他合适的玻璃毛细管（移液管内径的应? 100μm ）--来自雌性促排卵的八细胞胚胎-- Tyrode’s液，酸性（ sigma） --CO2孵化器

胚胎显微操作-胚胎分割 (一)概况 胚胎分割是通过对胚胎进行显微操作，人工制造同卵双生或同卵多生的技术，它是扩大胚胎来源的一条重要途径，其理论依据是早期胚胎的每一个卵裂球都具有独立发育成个体的全能性。 本世纪三十年代，Pinrus等首次证明兔2细胞胚的单个卵裂球在体内可发育成体积较小的胚泡。之后，Tarkowski等人的实验胚胎学研究成果进一步证明了哺乳动物2细胞胚的每一个卵裂球都具有发育成正常胎儿的全能性。七十年代以来，随着胚胎培养和移植技术的发展和完善，哺乳动物胚胎分割取得了突破性进展。Mullen等于1970年二分2细胞期鼠胚，通过体外培养及移植等程序，获得了小鼠同卵双生后代。Willadsen于1979年通过分离早期胚胎的卵裂球，成功地获得了绵羊的同卵双生后代。国内张涌等通过分割小鼠、山羊早期胚胎，均获得了同卵双生后代。进一步研究表明，四分胚，八分胚也可以发育成新个体。窦忠英等将7日龄的牛胚胎一分为四，实现了同卵三生。值得说明的是，随着胚胎分割次数的增多，分割胚的发育能力明显降低，这可能与胞质的不断减少有关。 (二)分割方法 胚胎分割方法主要有显微操作仪分割和徒手分割两种。

目的介绍四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠技术的操作环节,加快该技术的推广应用。方法综合分析近几年来国内外在小鼠四倍体胚胎与ES细胞嵌合的研究成果,

实验目的：新生大鼠1-3的心脏组织，需要提取样品组织的心肌细胞和成纤维细胞，以便后续用于加药研究。

目的：探讨丙戊酸镁对小鼠急性脑缺血再灌注损伤的预防作用及其机制。方法：取小鼠随机分为假手术组、模型组和丙戊酸镁高、低剂量（0.04、0.02 mgg－1）组，每组10 只，灌胃给予相应药物，每日2 次，连续14 d，末次给药1 h 后对后3 组小鼠建立急性脑缺血再灌注损伤模型，建模成功后检测各组小鼠脑指数和脑组织中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，并观察大脑皮层和海马CA1 区细胞形态的变化。结果：与模型组比较，丙戊酸镁高、低剂量组小鼠神经元损伤减轻，脑指数和MDA含量明显降低，GSH-Px活性明显升高（P＜0.01 或P＜0.05），且丙戊酸镁高剂量组SOD活性明显升高（P＜0.01）。结论：丙戊酸镁对小鼠急性脑缺血再灌注损伤具有预防作用，其机制可能与抗氧化作用有关。

心脏受损后，心肌细胞会停止运动，产生成纤维细胞，导致心肌硬化，并对正常细胞功能产生影响。纤维化一旦形成，无法逆转。目前针对纤维化的疗法仅能限制其进展。利用CAR-T的靶向杀伤能力，则可以定向去除心肌成纤维细胞，改善预后。

如何运用BLS细胞融合仪及胚胎聚集针创建胚胎 注射器内吸入培养基，在35mm组织培养板上微滴（大致直径3mm）点样成若干行（列）。向培养板内小心注入石蜡油使其覆盖整板，注意不要使石蜡油直接倾倒在微滴上。石蜡油很容易越过这些微滴。石蜡油的量要完全覆盖这些微滴。使用配件按照说明操作，制作凹陷。37度，5%CO2条件下孵育培养板几小时，目的是让培养基在液滴内达到平衡。这一步可以在形成凹陷的步骤之前进行。实验前准备好待聚集的细胞，组织或胚胎，不要将它们长时间暴露在室温下或脱离最适培养条件时间过长。通过在组织培养板盖上加入几滴M2培养基和Tyrode’s酸溶液来去除卵透明带。将组织培养板的培养区域表面如此处理后，胚胎将本能的黏附在表面—因此我们需要使用盖。确认所有培养基溶液和酸液都接近室温。将胚胎放置在一滴M2培养基上。取尽可能少的内含10-20个胚胎的培养基，并移到一滴酸液上。重复这个步骤并将胚胎移到新的一滴酸液上。让胚胎在吸头内保持上下移动，观察卵透明带是如何溶解的。迅速将胚胎移入M2培养基。用几滴培养基溶液洗涤并移入刚才制成的凹陷中。胚胎培养条件是聚集产量的一个重要因素，因为胚胎要培养过夜，如果是四倍体胚胎在移入母体前需要培养48小时。在培养的每个细节都必须小心操作控制。这包括温度，大气，培养基，室温操作时间及矿物油质量。

样品介绍：小鼠肺组织是实验研究中经常出现的实验组织。通过制备小鼠肺组织的单细胞悬液，可以将肺组织中的细胞分散为单个细胞，并保持其完整的细胞膜和细胞器结构。通过单细胞悬液的制备，研究人员可以对每个单个细胞进行分析，了解其基因表达、蛋白质水平、代谢状态等信息。

应用说明《多球、共培养、3D肿瘤试验的实时活细胞分析》描述了使用Incucyte® 活细胞分析系统和Incucyte® 3D多肿瘤球分析来研究3D肿瘤多球的生长，可与成纤维细胞或免疫细胞共培养，捕捉采用单时间点方法可能错失的数据。增强型景深明场（DF-明场）图像采集能够对生长在细胞外基质（Matrigel™ ）上的多肿瘤球进行长时间成像。

美国加利福尼亚大学伯克利分校的科学家，利用单细胞Western技术在期刊SCIENCE ADVANCES（IF：12.804）发表文章：Assessing heterogeneity among single embryos and single blastomeres using open microfluidic design, Sci. Adv. 2020 6: eaay1751 22 April 2020. 本文利用单细胞Western技术与现有的工作流程整合在一起，为评估植入前胚胎发育固有的细胞间分子异质性开辟了新途径。

不需显微操作体细胞核移植的利益和前景远大。当前的成果包括降低装备费用，简化预备工作及实验技术要求低。任何做过胚胎方面试验和口吸管方面工作的人都能很快掌握。尽管用卵母细胞试验的直接工作没有显著减少，但降低了这些工作的技术难度。此外，与早期的技术相比，预备工作如制作工具可以省略。然而，应该注意到产生三倍体需要较多的卵母细胞。无透明带的胚胎可能有利于嵌合体的制作，克隆方法的简化也将有利于核移植的自动化。在卵母细胞成熟期间，用于建立该方法的供体细胞是贴壁的原代培养的颗粒细胞，这些细胞并不是都很适合做供体。随着方法的进一步改进，可能能用不同器官组织的传代细胞和血清饥饿培养的细胞。

观察2型糖尿病模型db/db小鼠胰岛β细胞的超微结构、胰岛素表达及数量变化，探讨β细胞的病理改变与2型糖尿病病因的关系。 分别选取3、5、8月龄尾静脉空腹血糖高于10.1mmol/L，且肥胖的db/db自发性糖尿病小鼠，每组8只，作为糖尿病组；选取相应年龄段尾静脉空腹血糖低于6.0mmol/L，体重正常的db/+m表型正常小鼠，每组8只，作为对照组。于相应年龄段取胰尾，用于透射电镜观察、免疫组织化学观察和图像分析。

利用激光剥蚀电感耦合等离子体质谱(LA-ICP-MS)对不同实验条件下培养成纤维细胞中金、银纳米颗粒分布进行空间分辨生物成像。通过优化扫描速度、剥蚀频率和激光能量，获得了较高的空间分辨率。纳米颗粒相对于细胞的子结构是可见的，并且随着孵育时间的增加，纳米颗粒会在核周区域聚集。在矩阵匹配标定的基础上，提出了一种在单细胞水平上定量测定金属纳米颗粒数量的方法。这些结果提供了纳米颗粒/细胞相互作用的见解，并对组织诊断和治疗中分析方法的发展具有启示意义。

为了提高体外皮肤组织模型的物理相关性和可翻译性，增强其结构复杂性是非常重要的。通过使用3D生物打印技术和合适的生物墨水，可以调节真皮和表皮的结构并将细胞和材料精确地沉积在所需的位置。在本研究中，使用BIO X生物打印全厚度皮肤组织模型。真皮使用原代真皮成纤维细胞嵌入GelXA skin bioink进行生物打印，表皮含有高浓度角质形成细胞嵌入ColMA，沉积在真皮顶部。皮肤模型总共培养了14天，在开始气液界面培养的第6天和培养的第14天结束时收集了样品。第1类人胶原蛋白（角蛋白14）的免疫荧光染色，角蛋白10和丝蛋白表明，所有标记物的表达均随时间增加。真皮中的胶原蛋白网络得到加强，并且表皮中的角质形成细胞明显地自我重组：随着大量的丝聚蛋白向表皮的外层移动，在角质形成细胞中角质蛋白10急剧增加。这些结果表明，强健的皮肤组织模型可以通过3D生物打印来创建，从而验证了该技术在该领域的适用性。

细胞对暴露的纳米颗粒反应在各种环境中都是必不可少的，尤其是在纳米毒性和纳米医学中。这里,14纳米金纳米粒子在3T3成纤维细胞在一系列脉冲追踪实验研究了30分钟孵化脉冲和追逐时间从15分钟到48小时。里面的金纳米粒子及其聚合量化细胞超微结构的激光烧蚀电感耦合等离子体质谱法，可以用于评估表面增强拉曼散射(SERS)信号。通过这种方法，可以分别获得它们在微米尺度上的定位信息和它们的分子纳米环境，并且可以将它们联系起来。因此，纳米颗粒从细胞内摄取、细胞内加工到细胞分裂的路径是可以遵循的。结果表明，细胞内纳米粒子及其积聚和聚集支持高SERS信号的能力与纳米粒子的数量和高局部纳米粒子密度没有直接关系。SERS数据表明，细胞内聚集的几何形状和粒间距离必须在内体成熟过程中发生变化，并对特定的金纳米粒子类型起关键作用，才能成为高效的SERS纳米探针。这一发现得到了TEM图像的支持，它只显示了一小部分具有小颗粒间距的团聚体。经过不同的捕集时间后得到的SERS光谱显示，金纳米粒子内体加工后，其生物分子电晕的组成和/或结构发生了变化。

因小鼠的基因和人类基因达到了极高的相似度，最高可以达到98%，在小鼠身上做实验获得的结果，和人类身上的很是相似，很多人类难以治愈的疾病，可以在小鼠身上找到相似性状，从而加以实验发现治病基因。使用扫描电镜对小鼠各器官细胞微观形貌的观察在临床病理上的研究有重要意义。本篇文章我们分享的是关于小鼠各器官在扫描电镜下的微观形貌。

整合素是一种跨膜蛋白，在介导细胞黏附到细胞外基质（ECM）过程中发挥重要的作用。整合素在和配位体结合并发挥作用之前需要被激活。Kindlin和talin如何在非造血细胞中介入激活整合素这一过程的原理并不十分清晰。美国的科研人员发现缺少成纤维细胞，talin或kindlin都不能激活β1整合素，从而不能粘附到纤维粘联蛋白表面上；甚至不能由Mn2+介导的整合素粘连构象发生转变。使用Mn2+可以激活talin而不是kindlin缺陷细胞的部分整合素功能，使其活化和粘附在纤维粘连蛋白表面上。而具有方向性的粘附实际是由Kindlin直接诱导结合桩蛋白，可以反过来会粘附斑激酶（FAK）导致FAK活化并形成片状伪足。这一研究结果表明，talin和Kindlin协同激活整合素与纤维粘连蛋白的结合，并随后Kindlin会独自形成一个特别的信号位点，形成新的蛋白粘附位点。

Bead Ruptor 24 Elite多功能生物样品均质器用于从动物组织、细胞（肺成纤维细胞）抽提人冠状病毒RNA的技术方案。

将氧化铁纳米粒子与银纳米粒子、金纳米粒子、银磁铁矿和金磁铁矿分别通过内吞作用引入到成纤维细胞中，形成多功能复合纳米粒子。含有无毒纳米粒子的细胞在外部磁场中是可置换的，可以在微流控通道中进行操作。在表面增强拉曼散射(SERS)映射、激光消融电感耦合等离子体质谱(LA-ICP-MS)微研磨和低温软x射线断层扫描(cryo soft- xrt)的基础上，得到了内体系统中复合纳米结构的分布。完整的玻璃化细胞冷冻软x光检查显示复合纳米粒子包裹体形成内聚体。纳米粒子提供了内质网环境中表面生物分子组成的SERS信号。SERS数据表明，纳米粒子在内质粒和溶酶体的恶劣环境中具有较高的稳定性和等离子体性质。该光谱指向银磁铁矿和金磁铁矿纳米结构表面的分子组成，与其他复合结构非常相似，但不同于研究细胞内纯银和金SERS纳米组成所得到的结构。由LA-ICP-MS数据可知，磁铁矿复合材料的吸附效率大约是纯金、银纳米颗粒的2 - 3倍。

杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。而这两种细胞分贝是经抗原免疫的小鼠细胞与小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是他的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有b细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才是具有持续增殖能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞。

杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。而这两种细胞分贝是经抗原免疫的小鼠细胞与小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是他的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有b细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才是具有持续增殖能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞。

活细胞培养荧光显微镜由于可以进行活细胞常规培养条件，例如：温度控制，湿度控制，CO2浓度控制，O2浓度控制，同时配置高速摄像头可以进行时间序列（Time-Lapse）,结合多色荧光滤片切换，LED单波长光源激发，可配备相差(Phase Contrast)，微分干涉（DIC），荧光等对照方式可以更加直观详细的进行细胞形态记录而受到广大科研用户的认可。近年来，倒置荧光显微镜配置活细胞培养装置的相关实验越来越普遍，目前市面上集成的荧光成像系统很多，例如：GE公司的DELTAVISION活细胞成像系统，ZEISS公司的CELL OBSERVER系统，或其它大品牌公司的整套活细胞成像系统，价格昂贵（20万美元以上），维护成本高，厂家工程师上门速度通常比较慢或者收费贵，常规实验室难以负担。目前各实验室通常都配备有倒置荧光显微镜，活细胞培养装置是模块化设计的产品，广州科适特科学仪器有限公司提供一种优惠简便的解决方案，定制整套活细胞或对现有的荧光显微镜进行活细胞升级，购置成本低，拆装方便，兼容目前市场主流的各大显微镜平台，例如：徕卡，尼康，奥林巴斯，蔡司等都可以提供定制的适配器。

通常所指的纤维素，是指不能被肠道的酶消化的植物细胞壁部分。 纤维素的效能对反刍和单胃家畜同样能增强消化能力，对反刍家畜尤为明显。纤维素、半纤维素对反刍家畜具有营养价值。