乳酸杆菌选择性肉汤

乳杆菌～乳酸杆菌～激活后，在血平板上培养～长成的形态是什么样？？？

[font=SimSun, STSong, &]BGLB肉汤管培养大肠杆菌为什么会这样，是时间太久了吗？[/font]

1.抗菌药物贮存液制备 　　抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。2.药敏试验用抗菌药物浓度范围 　　根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。3. 培养基　　 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。4.接种物的制备　　 有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种　　 取无菌试管（13×100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉汤外，其余每管加入MH肉汤1ml，在第1管加入抗菌药物原液（如1280μg/ml） 0.4ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。6.孵育　　 将接种好的稀释管塞好塞子，置35℃普通空气孵箱中孵育16~20h；嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h；对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h。7.结果判断与解释 　　在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好，同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染，质控菌株的MIC值是否处于质控范围。以肉眼观察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的MIC。甲氧苄胺嘧啶或磺胺药物的肉汤稀释法终点判断，与阳性生长对照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC。根据NCCLS推荐的分界点值标准，判断耐药（resistant, R）、敏感(susceptible, S)或中介（intermediate, I）。S表示被测菌株所引起的感染可以用该抗菌药物的常用剂量治疗有效，禁忌症除外。R指该菌不能被抗菌药物的常用剂量在组织液内或血液中所达到的浓度所抑制，或属于具有特定耐药机理（如β-内酰胺酶），所以临床治疗效果不佳。I是指MIC接近药物的血液或组织液浓度，疗效低于敏感菌。还表示被测菌株可以通过提高剂量（如β-内酰胺类药物）被抑制，或在药物生理性浓集的部位（如尿液）被抑制。另外，中介还作为“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控，所导致较大的错误解释。

绪言随着人民生活水平的不断提高，乳制产品的种类日益丰富和多样化，人体所需的乳酸菌如嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜热乳链球菌和保加利亚乳杆菌等通常被作为重要成分加入到各种乳产品当中。乳制品被人体摄入之后，其中包含的活性菌也同时进入到人体内部消化系统，它们能够帮助平衡肠胃功能健康，抑制对人体有害的各类细菌繁殖，能够显著提高人的身体健康水平。但不是随便摄入活性菌就能够起到这种效果，而是需要摄入人体内的活性菌达到一定的数量才能够有效发挥作用。科学表明，人体内部活性菌数量要达到 97cfu/ g (m L) 以上才能够具有明显效果。实际上，科学家在对市场上出售的各种乳制品的研究分析发现，大多产品中的包含的乳酸菌的活跃度与浓度都严重偏低，这一方面是由于生产企业不负责任所导致，另一方面也与当缺乏一种行之有效的活性乳酸菌检测工具有关，因此也不难理解当前市面上为什么存在那么多含超低乳酸菌的乳制品。为有效检测出乳制品中活性乳酸菌的活力和浓度，市场上和学术界都有必要尽快找到一种科学有效的计算方法。当前，对于嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等计数方法已有一些研究文献，但都不是在其纯度较低条件下的计数方法，笔者通过文献综述发现，关于其他菌类计数方面的研究也有学者尝试过，但并没有取得突破性进展。对此，本文在已有研究文献的基础上，总结了一种新的非纯度条件下对活性菌计数的方法，能够有效针对嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜热乳链球菌和保加利亚乳杆菌进行科学合理的定量分析，为提高软制品产品品质提供可靠度科学测量工具。1. 材料与方法1. 1 供试菌种嗜热乳链球菌( S t r e p t o c o c c u st h e r m o p h i l u s , S T ) 、保加利亚乳杆菌( L actobacil lus delbr ueckii ssp.bulgaricus,LB) 、嗜酸乳杆菌( Lactobacill u s a c i d o p h i l u s , L A) 、双歧杆菌( Bif idobacter ia, BB) 、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei , LC) 均由华中农业大学生物科技学院微生物实验室提供。1. 2 仪器与设备厌氧培养箱; 厌氧培养罐; 好氧培养箱。1. 3 待检样品( 1) 已知菌样品： 以脱脂乳为培养基,在所需培养条件下分别培养供试的5 种菌,即为已知菌待检样品。( 2) 乳品样品： 为市售酸乳或乳酸菌发酵乳饮料, 均含有活性乳酸菌。2. 结果与分析2. 1 嗜热乳链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌对糖的利用情况将M R S 琼脂培养基中的葡萄糖分别以柳醇、纤维二糖、果糖、甘露醇、山梨醇等糖类代替, 配制成系列不同的M R S 琼脂培养基, 并制成平板, 分别接种ST 、LB、LA和BB 菌株, 在所需条件下培养, 观测平板上菌落的生长情况, 结果如表2 所示。从表2可以看出： 仅LA 可以利用柳醇, 故MRS-柳醇琼脂培养基可用于L A 的选择计数。当柳醇质量浓度为0. 5% 时, LA 便可形成大小合适的菌落。另外, M R S- 纤维二糖琼脂、MRS- 甘露醇琼脂和MRS- 山梨醇琼脂也可用于LA 的计数。2. 2 不同培养基平板上ST、LB、LA、BB 和LC 形成的菌落数检测结果按照国内外文献介绍的最先进的方法制成十种各不相同的实验培养基, 并制成平板,分别接种ST、LB、LA、BB 和LC 的纯培养菌株, 观察检测菌落的形成和数量，并分别做好相关试验数据记录。检测结果表明：s T-琼脂和M17-琼脂适合嗜热乳链球菌的计数; L C- 琼脂适合干酪乳杆菌的计数;M R S- N N L P 琼脂适合双歧杆菌的计数;MRS- pH5. 2 琼脂适合保加利亚乳杆菌的计数。MRS- 柳醇琼脂、MRS- 山梨醇琼脂、MRS-核糖琼脂和MRS- 葡萄糖酸盐琼脂均可用于LA 和LC 的计数, 但因LC- 琼脂培养基能抑制LA 和BB的生长, 从而适宜于L C 的选择计数, 因此当产品中只有L A和LC 存在时, 可用LC- 琼脂测定LC 的菌落数, 再用MRS- 柳醇琼脂或MRS- 山梨醇琼脂或MRS- 核糖琼脂或MRS- 葡萄糖酸盐琼脂测其总数,两者之差即为L A 的数量。2. 3 对几种含LA 和BB 的市售乳品的检测结果通过使用上述培养基进行菌类培养成熟后，在对市面上出售的乳制品进行抽样检测， 从检测结果分析来看： 所选的培养基和培养条件适合对S T 、L B、L A 和B B的选择计数,对照样品的检测结果接近实际菌数, 同时还发现除了对照样品和加LA 与BB的酸乳中LA 和BB 的数量较高外, 其它市售酸乳中含的LA 和BB 菌数均较低。2. 4 对几种市售产品中LC 的选择计数检测结果以L C- 琼脂培养基分别检测9 种市售乳品中干酪乳杆菌的数量, 其结果如表5 所示, 可见在其它乳酸菌存在下LC- 琼脂适合对干酪乳杆菌的选择计数。在所测的9 种产品中, 只有3 种干酪乳杆菌活菌数在106cfu/g( mL) 以上, 其余数量均较低, 而对照样品中的干酪乳杆菌数最高, 与实际数接近。3. 结束语本文通过设计研究方案，对含活性乳酸菌乳制品中不同活性菌的计算方法进行尝试，并取得了不错的试验效果。本文发现：用R I-琼脂培养基来分离热乳链球菌能够收到显著效果; 可用K L-乳酸菌培养基来分离干酪乳杆菌;用NG V-MMWN氨基培养基分离双歧杆菌; N L H-p C7.1碳酸培养基分离和提取保加利亚乳杆菌; NUL-氧脂酸 分离和提取嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌; 如果只需要提取和分离嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌, 则可在计算其总数量之后，在用N L-碳酸基培养基分离干酪乳杆菌数, 剩余即为嗜酸乳杆菌数量。希望本文的研究能过为有关食品质量监督部门和生产企业提供一种科学可靠的活性菌检测工具，以提高市场上乳制产品的质量。

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽孢杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌污染面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包**头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2。在厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～**5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌**面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包或馒头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2**厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～4．5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。**

文/李莎（华测检测） 鲜乳能够由液态转化为凝固态的发酵乳，并产生令人心怡的风味和丝滑的口感，这华丽的转变和其中的奥秘离不开微小的生命——乳酸菌。传统的酸奶就是由嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌混合发酵而成的。[b]乳酸菌简介[/b] 乳酸菌是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称。除极少数外，绝大部分都是人体内不可缺少的且具有重要生理功能的菌群，广泛存在于人体的肠道中。乳酸菌具有调节肠道微生态、促进营养成分在肠道的消化吸收、降低血清中的胆固醇含量、缓解高血压以及抗肿瘤作用等诸多益生功能，其分泌的物质如细菌素、胞外多糖、胞外糖苷酶等更是对机体健康有益的。 乳酸菌已经在食品发酵、医药、饲料等领域中长期应用。特别是在食品发酵领域，乳酸菌的品质和性能直接决定发酵乳品质的好坏。不同性能的乳酸菌能够产生不同黏度、风味和生理功能的发酵乳。乳酸菌能够利用鲜乳中的蛋白质进行生产繁殖，并产酸、酯、游离脂肪酸、游离氨基酸，当鲜乳的pH降低至酪蛋白的等电点时，酪蛋白变性凝固。乳酸菌分泌出的胞外多糖，还能将乳酸菌细胞和酪蛋白链接在一起形成网络结构，使得发酵乳的凝胶结构更加稳定。 经研究发现，将优良乳酸菌菌株进行组合有利于提升发酵乳的整体性能，将一种保加利亚乳杆菌与两种以上嗜热链球菌进行组合可以使混合乳酸菌同时具备发酵速率快、产品黏度好、特征风味浓郁等优良性能。 目前，主要通过收集天然乳酸菌来获得性能优良的新型乳酸菌。天然乳酸菌经过筛选、培育和研究，确定其种属，以及产酸、产香、益生功能等特性。由于越来越多功能性乳酸菌的发现，酸奶中除了添加嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌外，还会添加一些功能性乳酸菌，增加发酵乳的益生功能，例如降低胆固醇、降血糖、抗菌消炎、提高人体免疫力。一方面，这些功能性乳酸菌能够在生长过程中会分泌出一些胞外多糖、细菌素、胞外糖苷酶等物质。另一方面，嗜热链球菌菌株和保加利亚乳杆菌菌株存在局限性，它们不耐胃酸和胆汁，在经过人体消化道时，这些常规的乳酸菌会失活，而发酵乳中添加的功能性乳酸菌能够在肠道内大量存活，发挥调节肠道菌群平衡，促进人体消化吸收等作用，被人们认为是新一代的益生菌。[b]可用于食品的乳酸菌菌种名单[/b] 2010年卫生部办公厅发布了《可用于食品的菌种名单》（卫办监督发〔2010〕65号），其中包含乳制品中常用的两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种（保加利亚乳杆菌）、嗜热链球菌等。该公告还规定，对于新菌种需要按照《新资源食品管理办法》执行。2011年卫生部又发布了《关于批准翅果油等2中新资源食品的公告（2011年 第1号）》，其中将乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种和乳酸乳球菌双乙酰亚种列入《可用于食品的菌种名单》，增加了可用于食品的乳酸菌种类。 此外，这几年我国卫生计生委也陆续发布了一些公告，增加了可用于食品的菌种名单，其中也包含有乳酸菌。[b]乳酸菌与人体的肠道健康[/b] 在人体肠道中，双歧杆菌和乳杆菌在肠道中普遍存在。婴儿时期，母乳喂养的婴儿肠道中双歧杆菌的数量占绝对优势，而人工牛乳喂养的婴儿肠道中最初普遍没有双歧杆菌，或者个别的双歧杆菌数量处于波动之中，而且常定植某些其它厌氧菌如拟杆菌和梭状芽孢打菌等。婴儿停止母乳或人工喂养后，由于食物的摄取，其肠道转变为类似成年人肠道。健康成年人肠道微生物可大致分为三类：第一类乳酸菌，包括双歧奸菌、乳杆菌和链球菌等，与宿主共生；第二类腐败菌，如拟杆菌、梭菌、消化球菌、大肠杆菌和葡萄球菌等；第三类包括真细菌、瘤胃球菌和巨型球菌等。该时期，双歧杆菌和乳杆菌数量较儿童期显著减少，有害菌滋生。老年人肠道中双歧杆菌和乳杆菌数量减少，拟杆菌、梭菌、肠杆菌和链球菌数量显著增加。 乳酸菌与人体的健康息息相关，特别是人体的胃肠道，其中最主要的两种乳酸菌是双歧杆菌和乳杆菌。双歧杆菌参与宿主的消化代谢、免疫及抗感染过程，它能通过细胞上的磷酸与肠黏膜上皮细胞特异性结合构成生物学屏障，也可产生具有分解肠黏膜上皮细胞内复杂多糖的细胞外糖苷酶，刺激肠道产生免疫抗体和病毒抗体，降低肠道pH及氧化还原电位，从而拮抗肠道需氧菌和条件致病菌的入侵，维持肠道微生态平衡。对于某些腐败菌和低温细菌，双歧杆菌通过产生有机酸对其产生抑制作用从而起到抗菌作用；由于机体吞唾细胞的吞噬活性可以在双歧杆菌的存在下激活，从而提高了机体的抗感染能力及免疫功能；双歧杆菌可以降低机体胆固醇水平，因其在发酵过程中产生一种影响胆固醇合成的物质；双歧杆菌还可以调节肠道正常细菌菌群平衡，起到防止便秘的作用；双歧杆菌的代谢活动还可以明显增加血液中超氧化物歧化酶的含量，从而起到抗衰老的作用。 乳杆菌对人体健康同样十分重要。由于其发酵碳水化合物的终产物是乳酸，可以帮助机体消化吸收；乳杆菌可以通过酸化肠内环境来阻止某些有害菌与肠上皮细胞的黏附，从而阻碍有害菌在肠道内的定植，进而优化胃肠功能，减少了疾病的发生率；乳杆菌还可以刺激免疫球蛋白的产生，从而增强机体的免疫力。 乳酸菌无处不在，与人类和动物的健康息息相关。随着人们对乳酸菌进一步深入地研究，相信越来越多的新型乳酸菌和其益生功能及机理会被人类发现，并造福于人类。

本品是一种最基本的非选择性培养基，含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖。因含有动、植物两种蛋白质，苛养菌也可利用其中的营养进行增殖。 【用途】： 用于志贺氏菌的增菌培养 【贮藏条件】： 2～8℃,避光储存，拆封后及时放入冰箱冷藏； 【保质期】：6个月；【注意事项】 1、检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用； 2、请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰； 3、经过预培养的培养基严禁使用； 4、在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出，然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可； 5、弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人员指示方法处理。 有需要志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素的请私聊我。

食品工业上谈论的益生菌被定义为：益生菌是活的微生物，当摄入足够量时，对宿主起有益健康的作用。在谈论益生菌时必须满足三个条件：1） 活的微生物；2） 摄入足够的量；3） 对宿主健康有益。益生菌是从有益宿主健康出发给出的定义，目前研究较热的益生菌有：双歧杆菌、乳杆菌、芽孢杆菌、丁酸梭菌等，其中双歧杆菌、乳杆菌和芽孢杆菌都属于乳酸菌类，因此益生菌包括了部分乳酸菌，而乳酸菌不全是益生菌。 乳酸菌并不是一个严格的微生物分类规范，定义并不严谨，但目前已经得到大众的公认。因此食品工业上对乳酸菌的定义为：乳酸菌一般是指能发酵糖，主要生成乳酸的细菌的总称。在谈论乳酸菌时应该注意二个方面：1） 乳酸菌是一种细菌；2） 能发酵糖类生成乳酸。乳酸菌是从发酵糖产生乳酸的机理方面考虑给出的概念，对人类生活有益的乳酸菌有：双歧杆菌、乳杆菌、链球菌、明串珠菌等。并不是所有的乳酸菌都有益于人类健康，也有一些乳酸菌对人体是有害的，如有害的利斯特氏菌。目前市场上发酵奶制品中提到的乳酸菌传统意义上是指：1）保加利亚乳杆菌（Lactobacillus Bulgaricus）2）嗜热链球菌（Streptococcus Thermophilus）这两支菌是酸奶发酵过程中传统混合使用的乳酸菌。市场上发酵奶制品中提到的益生菌一般为：1）长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)2）青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)3）动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)4）干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)5）嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)6）鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)等等。它们也都是乳酸菌类，由于它们有的耐酸能经受住人体胃酸的考验，有的能在人体肠道中定植一段时间，总之能为人体肠道提供活的益生菌，因此现代微生态学研究中把它们定义为益生菌类。

1 目的要求（1）初步掌握乳酸菌活力测定的一般方法。（2）了解乳酸菌在乳发酵过程中所起的作用。2 基本原理乳酸菌的细胞形态为杆状或球状，一般没有运动性，革兰氏染色阳性，微需氧、厌氧或兼性厌氧，具有独特的营养需求和代谢方式，都能发酵糖类产酸，一般在固体培养基上与氧接触也能生长。酸乳风味的形成与乳酸菌发酵过程代谢的多种物质有关，而这些物质的产生与发酵速度等活力指标有密切关系。乳酸菌的活力可由多种参数确定，如细胞生长情况，细胞干重和光密度（OD值）等。由于乳液不透明，不能直接测OD值，可用NaOH和EDTA处理使其澄清后再测。较简便的活力测定包括凝乳时间，产酸和活菌数量等指标的检测。3 实验材料3．1样品 市售酸奶或乳酸菌饮料。3．2 培养基 MRS固体和液体培养基，复原脱脂乳培养基。3．3 实验用仪器设备 超净工作、恒温培养箱、鼓风干燥箱、高压蒸汽灭菌锅、冰箱、油镜显微镜、碱式滴定仪、天平、培养皿、移液管、试管、烧杯、量筒、温度计、酒精灯、接种针、载玻片等。4 实验方法与步骤4．1 菌种的分离（1）编号 取五支无菌水试管，分别用记号笔标明10-1、10-2～10-5。（2）稀释 将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25mL，移入含有225mL无菌水的三角瓶中，在漩涡混合器上充分振摇，使样品分散均匀，获得10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当稀释度。（3）倒平板 选用2～3个适宜浓度的稀释液，分别吸取1mL注入平皿内，然后倒入事先溶化并冷却至45℃左右的MRS固体培养基，迅速转动平皿使之混合均匀，待冷却凝固后倒置，于40℃培养48h。（4）分离 无菌操作，从培养好的固体平皿中分别挑取5个单菌落接种于液体MRS培养基中，置40℃培养箱中培养。（5）镜检 通过镜检，确定所分离的乳酸菌是乳杆菌还是链球菌。保加利亚乳杆菌呈杆状，单杆、双杆或长丝状；嗜热链球菌呈球状，成对、短链或长链状。4．2 接种按1%的接种量，将MRS液体培养物接种于已灭菌的复原脱脂乳中，另分别接种具有较高活力的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌作为对照。培养温度为保加利亚乳杆菌40℃， 嗜热链球菌45℃。4．3 观察与测定（1）观察： 观察并记录各试管的凝乳时间。（2）酸度测定：用NaOH滴定法，测定发酵乳液的滴定酸度。（3）计数：采用倾注平板法，测定活菌数量。

一．乳酸孢子简介1．孢子是一种与生殖有关的细胞（通常是单细胞），可以形成新生命的个体，普遍存在植物界的生殖循环中，会产生孢子的物种包括厥类苔藓等植物，还有真菌 （例如酵母菌、）等等。 对某些细菌来说，也有一种叫做「孢子」的特殊构造，是细菌在环境不适宜时，由整个细菌体浓缩形成的一种休眠孢子，可用以抵抗不良的环境，等到环境适合再萌芽。细菌孢子是细菌在恶劣环境时的变身，可协助细菌度过不适宜的环境。2．乳酸菌 乳酸菌是相当庞杂的菌群,为能利用碳水化合物进行发酵产生乳酸的一群细菌的总称。分类上，属革兰氏染色阳性菌，有些能有孢子产生。生存于人体内的乳酸菌有双叉菌、嗜酸乳杆菌及一种肠球菌，这些都是具有积极作用的好菌。乳酸菌用糖生产乳酸的过程叫做「乳酸发酵」. 所谓乳酸孢子，就是有孢子的乳酸菌。也叫孢子型乳酸菌、芽孢乳酸菌。孢子型乳酸菌就是一种在到达肠道之前呈休眠状态的有益菌。二．孢子型乳酸菌作用①使细胞活化：活化细胞、强化细胞机能.②净化肠道环境：调整肠道菌丛生态、改善肠道机能、抑制坏菌生长、减少肠道坏菌异常发酵、使肠道益菌增加。③净化血液：孢子型乳酸菌除了可以代谢产生蛋白质分解酵素及糖类分解酵素外尚可产生脂肪分解酵素，达到净化血液之效果。④增加免疫机能：乳酸孢子能刺激体内的各种防御因子，使其活化。⑤改善女性阴道感染。三．孢子型乳酸菌的优点与现有乳酸菌相比，它具有更好的耐热性、耐酸性、耐糖性、耐干燥，稳定性和保存性均好，还具有高乳酸的生成能力，在肠内也有高增殖力，孢子乳酸菌为真正可以达肠道后苏醒，开始萌芽、生长的独特乳酸菌。四．乳酸孢子的种类 乳酸孢子是能产生孢子的乳酸菌的总称。目前主要应用的是芽孢杆菌（即包括：地衣杆菌、枯草杆菌、蜡样穿孢杆菌、东洋杆菌等的孢子），在使用时多制成该菌休眠状态的活菌制剂，或与乳酸菌混合使用。五．孢子型乳酸菌的用途孢子型乳酸菌作为添加剂可用于营养食品，动物饲料以及农业中。在我国目前，乳酸孢子多作为益生素的成分之一用于饲料中。六．乳酸型孢子市场情况简介在国外，目前乳酸孢子已经用于保健品（如奶粉，酸奶等）行业。从网上报道的乳酸孢子生产厂家来看，台湾企业的乳酸孢子保健品市场很好，且他们的乳酸孢子原料来源多为从日本进口。在我国，乳酸孢子作为保健品暂时并不普遍，主要是乳酸孢子多作为益生素的成分之一用于饲料中。而且随着益生素部分代替抗生素在动物饲料中应用，前景看好。目前我国对于益生素年使用量在1000吨左右。

随着微生态学研究的不断发展，乳酸菌功能的进一步开发，越来越多的实验证明乳酸菌对人体健康有重要的作用，如改善胃、肠道菌群结构、预防肠道疾病、抑制病原菌生长、降低血清中胆固醇含量、提高机体免疫力、治疗脚气病、消除致癌因子、防衰老及延年益寿等。因此，近年来，乳酸菌被广泛应用于发酵乳制品行业。如在改善酸奶的风味方面，可以在发酵过程中增加一些能够改善酸奶风味的有益菌种：如丁二酮乳链球菌、醋化醋杆菌、肠膜明串珠菌及乳酪链球菌等；在提高酸奶的功能性方面，可以添加生物源功能因子———益生菌群，如保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等。但是，如何鉴定乳制品中是否含有加入的这类乳酸菌，以及含有哪一种或几种乳酸菌，一直是人们关注的问题。目前，已有一些关于嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等分选计数的报道，但大多基于它们纯培养的基础上，没有得到充分研究。本文对酸乳中多肽物质进行测定、分析与比较，找出不同的乳酸菌发酵酸奶时产生的活性多肽的特异性，并对6种市售酸乳中所含乳酸菌进行测定。 1 试验材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 供试材料 酸乳：市售，不同厂家的6 种酸乳分别标号为1＃、2＃、3＃、4＃、5＃、6＃，并且均为原味凝固型，生产日期相同的合格产品，均添加有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。其中只有1＃ 酸奶中添加了1 种新菌种。 1.1.2 主要试剂与药品超低分子量SDS-PAGE电泳Marker，分子量分别为20100、14400、7823、5856 u 和3313 u；多肽标准品；丙稀酰胺(Acr)；甲叉双丙稀酰胺(Bis)；三羟甲基氨基甲烷(Tris)；十二烷基磺酸钠(SDS)；四甲基乙二胺(TEMED)；过硫酸铵(AP)；三羟甲基甘氨酸(Tricine)；甘油；考马斯亮蓝G-250；巯基乙醇；聚乙二醇6000等。 1.1.3 主要仪器与设备TGL-16M 高速台式冷冻离心机，分子量1000 u 透析袋，Hoefer mini VE电泳槽，电泳仪、显微摄影系统，50 μL 微量进样器，PHS-3C 酸度计，超净工作台，电子天平，电热恒温培养箱，显微镜，电热恒温水浴锅，电热鼓风干燥箱等。 1.2 试验方法及参数确定 1.2.1 市售酸乳中多肽物质的提取离心除杂：分别取刚打开包装的新鲜市售酸乳样品各50 mL，然后于8000 r/min、4 ℃条件下冷冻离心20 min，取上清液。透析：取上清液置分子量1000 u 透析袋中，用蒸馏水于4 ℃冰箱中透析48 h，其间每隔4 h 更换1 次透析液。浓缩：用聚乙二醇6000 浓缩至原体积的1/3，即得到待检测多肽样品。 1.2.2 酸乳中多肽物质的检测Tricine -SDS -PAGE 电泳法。适合小肽分析的方法有很多，例如毛细管电泳、高效液相色谱、质谱、离子交换色谱、SDS-PAGE 电泳等。由于SDS-PAGE 电泳法对样品纯度要求不是很高，以及实验室条件等各因素限制， 最终采用适用于小肽分析的SDS -PAGE-Tricine 系统对水溶性多肽进行种类和分子量分析。通过大量试验，最终确定的电泳参数为：上样量为10 μL；凝胶浓度分别为：浓缩胶浓度4%，分离胶浓度15%；电流选择：浓缩胶时18 mA，分离胶时25 mA。 1.2.3 电泳后多肽的染色考马斯亮蓝G－250 染色液。 2 结果讨论 http://www.hopebiol.com/asphtml/admin/kindeditor/attached/image/20150206/20150206163557695769.png图1 是市售酸乳中多肽的电泳图谱，虽然有一点条带畸形和拖尾现象，但仍然可以较为清晰地数出多肽条带数。从电泳图谱中可以看出，这6 种酸乳都含有分子量低于7823 u 的小分子量物质，并且6 种酸奶的活性多肽在保加利亚乳杆菌和嗜热乳链球菌的特征谱带处都有谱带，其中2＃ 还含有分子量在3313~5856 u 之间的4 种肽类，但条带颜色很浅，可知其含量很低，这很可能是因为其添加了不同菌种的缘故。从迁移率上看，虽然6 种产品所含肽类基本相同，但从颜色深浅来定性的分析，其肽类含量还是有差异的。 3 结论酸乳中肽类物质产生的种类和含量与发酵菌种有着直接的关系。同时由于不同厂家生产条件的差异导致含量上的轻微差别，这主要体现在相同迁移率谱带的颜色深浅上。本文对6 种市售酸乳中多肽物质进行测定、分析与比较，结果表明，6 种酸乳的活性多肽在保加利亚乳杆菌和嗜热乳链球菌的特征谱带处都有谱带，即该6 种市售酸乳中均含有保加利亚乳杆菌和嗜热乳链球菌，与其配料中所添加菌种一致。

[b][size=12px][font=微软雅黑]关于蜡样芽孢杆菌[/font][font=微软雅黑][/font][/size][/b][size=12px][font=微软雅黑]1、蜡样芽胞杆菌[i][/i]为革兰氏阳性大杆菌，大小为1-1.3×3-5μm，兼性需氧，[/font][b][font=微软雅黑]形成芽胞[/font][/b][font=微软雅黑]，芽胞不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列，与炭疽杆菌相似。引起食物中毒的菌株多为周鞭毛，有动力。[/font][font=微软雅黑][/font][/size][size=12px][font=微软雅黑]2、[/font][font=微软雅黑]培养特性　　[/font][b][font=微软雅黑]蜡样芽胞杆菌生长温度为25-37℃，最佳温度30-32℃。在肉汤中生长混浊有菌膜或壁环，振摇易乳化[/font][/b][font=微软雅黑]。在普通琼脂上生成的菌落较大，直径3-10mm，灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，边缘常呈扩展状。[/font][font=微软雅黑][/font][/size][size=12px][font=微软雅黑]3、[/font][font=微软雅黑]耐热性　　蜡杆芽胞杆菌耐热，[/font][b][font=微软雅黑]其37℃16小时的肉汤培养物的D80℃值（在80℃时使细菌数减少90%所需的时间）约为10-15分钟；使肉汤中细菌（2.4×107/mL）转为阴性需100℃20分钟。其游离芽胞能耐受100℃30分钟，而干热灭菌[i][/i]需120℃60分钟才能杀死[/font][/b][font=微软雅黑]。[/font][font=微软雅黑][/font][/size][font=微软雅黑][size=12px]4、在欧洲大都由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引起；在我国主要与受污染的米饭或淀粉类制品有关。　蜡样芽胞杆菌食物中毒通常以夏秋季（6-10月）最高。引起中毒的食品常于食前由于保存温度不当，放置时间较长或食品经加热而残存的芽胞以生长繁殖的条件，因而导致中毒。[font=微软雅黑]（转载自[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, 'Helvetica Neue', 'PingFang SC', 'Hiragino Sans GB', 'Microsoft YaHei UI', 'Microsoft YaHei', Arial, sans-serif]食品微生物工程师[/font][font=微软雅黑]）[/font][/size][/font]

保健食品中仅含有乳杆菌和双歧杆菌两种有益菌。根据GB 4789.35-2016标准，乳杆菌数量等于乳酸菌总数（MRS平板计数结果）减去双歧杆菌数量（改良MRS平板计数结果）？会出现减成负数的结果吗？

[align=left][font='仿宋'][color=#000000]曾盈盈[/color][/font][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][font='宋体'][size=13px]目录[/size][/font][/align][url=#_Toc10970][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]III[/size][/font][url=#_Toc12352][font='times new roman'][size=16px]第1章 前言[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc1794][font='times new roman'][size=16px]第2章 乳酸链球菌素的性质及标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc2961][font='times new roman'][size=16px]2.1 Nisin的结构特点[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc27220][font='times new roman'][size=16px]2.2Nisin特性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc13288][font='times new roman'][size=16px]2.2.1溶解度[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc25604][font='times new roman'][size=16px]2.2.2[/size][/font][/url][url=#_Toc25604][font='times new roman'][size=16px]稳定性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc12757][font='times new roman'][size=16px]2.2.3抑菌性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc24549][font='times new roman'][size=16px]2.2.4[/size][/font][/url][url=#_Toc24549][font='times new roman'][size=16px]安全性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc14679][font='times new roman'][size=16px]2.3 Nisin作用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc17293][font='times new roman'][size=16px]2.4[/size][/font][/url][url=#_Toc17293][font='times new roman'][size=16px]使用方法[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc23803][font='times new roman'][size=16px]2.5 Nisin的使用标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc13684][font='times new roman'][size=16px]2.5.1 Nisin的使用标准和限量标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc5867][font='times new roman'][size=16px]2.5.3 Nisin的检测标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc26192][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.1 交叉反应率[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc16246][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.2 回收率[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc13812][font='times new roman'][size=16px]第3章 乳酸链球菌素在食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc1242][font='times new roman'][size=16px]3.1 [/size][/font][/url][url=#_Toc1242][font='times new roman'][size=16px]Nisin[/size][/font][/url][url=#_Toc1242][font='times new roman'][size=16px]在乳和乳制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc6265][font='times new roman'][size=16px]3.1.1在原料奶保鲜中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc22101][font='times new roman'][size=16px]3.1.2[/size][/font][/url][url=#_Toc22101][font='times new roman'][size=16px]在巴氏杀菌乳中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc1416][font='times new roman'][size=16px]3.1.3在酸奶中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc1225][font='times new roman'][size=16px]3.1.4在干酪保藏中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][url=#_Toc19182][font='times new roman'][size=16px]3.1.5在长货架期软雪糕奶浆中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][url=#_Toc11638][font='times new roman'][size=16px]3.2 Nisin在肉制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc9450][font='times new roman'][size=16px]3.2.1牛肉冷却肉保鲜[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc26522][font='times new roman'][size=16px]3.2.2在香肠中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc20948][font='times new roman'][size=16px]3.2.3在西式切片火腿中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc13302][font='times new roman'][size=16px]3.2.4[/size][/font][/url][url=#_Toc13302][font='times new roman'][size=16px]在即食腊肉制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc17421][font='times new roman'][size=16px]3.2.6[/size][/font][/url][url=#_Toc17421][font='times new roman'][size=16px]在泡凤爪制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc25989][font='times new roman'][size=16px]3.3 Nisin在罐藏食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc27734][font='times new roman'][size=16px]3.3.1在罐头食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc13547][font='times new roman'][size=16px]3.3.2在低盐酱菜中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc10241][font='times new roman'][size=16px]3.4 Nisin在啤酒酿造中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc31850][font='times new roman'][size=16px]3.5 Nisin在焙烤食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc31137][font='times new roman'][size=16px]3.6 Nisin在果汁饮料中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc18518][font='times new roman'][size=16px]3.7 Nisin在方便食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc10264][font='times new roman'][size=16px]3.8[/size][/font][/url][url=#_Toc10264][font='times new roman'][size=16px] Nisin[/size][/font][/url][url=#_Toc10264][font='times new roman'][size=16px]在热处理密封包装食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc2149][font='times new roman'][size=16px]3.9 Nisin在植物蛋白食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc32563][font='times new roman'][size=16px]3.10 Nisin在鱼贝类等海产制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc20563][font='times new roman'][size=16px]3.11 Nisin 在酱类制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc1607][font='times new roman'][size=16px]3.12 其他[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc19108][font='times new roman'][size=16px]第4章 结论[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]15[/size][/font][url=#_Toc25686][font='times new roman'][size=16px]参考文献[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]16[/size][/font][align=center][/align][align=center][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]第1章 前言[/size][/font][/align]食品在贮存中，极易受到微生物侵袭导致食物腐败变质，据统计，全世界大约有10%～20%的食品损失源于各种腐败变质，要使食品有一定的保藏期，就必须采用一定的措施防止微生物的感染和繁殖，采取防腐剂延缓视频腐败是一种最有效、最简捷、最经济的贮存食品手段。目前，我国食品行业所用防腐剂品种较少，人们追求对人体无害的防腐剂，于是无毒、高效的天然食品防腐剂乳酸链球菌素便引起人们的重视。乳酸链球菌素又称乳酸链球菌肽或音译为尼辛，是乳酸链球菌产生的一种多肽物质，由34个[url=/item/%E6%B0%A8%E5%9F%BA%E9%85%B8]氨基酸[/url]残基组成，[url=/item/%E5%88%86%E5%AD%90%E9%87%8F/6281359]分子量[/url]约为3500 Da。由于乳酸链球菌素可抑制大多数[url=/item/%E9%9D%A9%E5%85%B0%E6%B0%8F%E9%98%B3%E6%80%A7%E7%BB%86%E8%8F%8C/14130412]革兰氏阳性细菌[/url]，并对[url=/item/%E8%8A%BD%E5%AD%A2%E6%9D%86%E8%8F%8C/765328]芽孢杆菌[/url]的孢子有强烈的抑制作用，因此被作为[url=/item/%E9%A3%9F%E5%93%81%E9%98%B2%E8%85%90%E5%89%82/6199223]食品防腐剂[/url]广泛应用于食品行业。食用后在人体的生理pH条件和α—胰凝乳蛋白酶作用下很快[url=/item/%E6%B0%B4%E8%A7%A3/378219]水解[/url]成氨基酸，不会改变人体肠道内正常菌群以及产生如其它抗菌素所出现的抗性问题，更不会与其它抗菌素出现交叉抗性，是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品[url=/item/%E9%98%B2%E8%85%90%E5%89%82/2532023]防腐剂[/url]。1969年，联合国粮食及农业组织/[url=/item/%E4%B8%96%E7%95%8C%E5%8D%AB%E7%94%9F%E7%BB%84%E7%BB%87]世界卫生组织[/url](FAL/WHO)食品添加剂联合专家委员会确认[url=/item/%E4%B9%B3%E9%85%B8]乳酸[/url]链球菌素可作为食品防腐剂。1992年3月中国卫生部批准实施的文件指出：“可以科学地认为乳酸链球菌作为食品保藏剂是安全的”。迄今为止，已有英美法等五十多个国家和地区批准Nisin作为食品防腐剂使用，最近，中国也制定了Nisin产品的国家标准[font='times new roman'][size=16px][1][/size][/font]。[align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]第2章 乳酸链球菌素的性质及标准[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]2.1 Nisin的结构特点[/size][/font][align=left]乳酸链球菌素（Nisin； CNS：17.019； INS: 234）是由属于N型血清的某些乳酸链球菌在代谢过程中合成和分泌的具有很强杀菌作用的多肽抗生素类物质。它的成熟分子仅由34个氨基酸残基组成，分子式为C143H228N42O37S7，相对分子质量为3348。随着科技发展，人们深入研究，发现Nisin的类型有6种，分别为A，B，C，D，E和Z，其中对Nisin A和Nisin Z 的研究最为活跃，区别分别在于Nisin A 的第27位AA为His，而Nisin Z 的第27位AA为Asn，其抗菌特性几乎无差别[font='times new roman'][size=16px][2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]][/size][/font]，其分子结构见图1。[/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106201028412317_1856_1608728_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='宋体'][size=14px]图1-1 Nisin A的结构（Nisin Z在27位His位为Asn）[/size][/font][/align] Nisin是由34个氨基酸残基组成的多肽，N末端为异亮氨酸，C端为赖氨酸，含2种特殊氨基酸Dha和Dhb，有5个硫醚键形成的分子内环，其中1个称为羊毛硫氨酸，其他4个是β-甲基羊毛硫氨酸。活性分子常为二聚体或四聚体。由于它的独特结构使它一方面在酸性pH值条件下，可经115.6 ℃的高压灭菌而不失活；另一方面表现出对许多革兰氏阳性菌，包括葡萄球菌、链球菌、微球菌、分歧杆菌、棒杆菌、利斯特氏菌、乳杆菌、芽孢杆菌等有很强的抑制作用[font='times new roman'][size=16px][4][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]2.2Nisin特性[/size][/font]乳酸链球菌素（Nisin）的特性包括：溶解性、稳定性、抑菌性以及安全性。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.1溶解度[/size][/font][/align]乳酸链球菌素（Nisin）是一种浅棕色固体粉末，使用时需溶于水或液体中，且于不同pH值下[url=/item/%E6%BA%B6%E8%A7%A3%E5%BA%A6]溶解度[/url]不同。Nisin的溶解度随着pH值的下降而显著增加。如在水中（pH=7），溶解度为49.0mg/ml（Nisin）；若在0.02M [url=/item/%E7%9B%90%E9%85%B8]盐酸[/url]中，溶解度为118.0mg/ml（Nisin）；在碱性条件下，几乎不溶解。产品中由于含有乳蛋白，其水溶液呈轻微浑浊。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]稳定性[/size][/font][/align]乳酸链球菌素（Nisin）的稳定性也与溶液的PH值有关。如溶于PH=6.5的脱脂牛奶中，经85℃ 巴氏灭菌15分钟后，活性仅损失15%，当溶于PH=3的[url=/item/%E7%A8%80%E7%9B%90%E9%85%B8]稀盐酸[/url]中，经121℃15分钟高压灭菌仍保持100%的活性，可看出其耐酸耐热性能优良。当pH超过4时，特别是加热条件下，它在水溶液中的分解速度加快，活力降低；在pH等于5时，灭菌后丧失40%活性；pH为6.8时，灭菌后丧失90%活性。乳酸链球菌素加入食品后，受到牛奶、肉汤等大分子的保护，稳定性大大提高。Nisin的稳定性也与温度有关，Delevs-Hroughton报道，将添加250IU/g Nisin的pH等于5.6-6.0，含水量54%～58%的巴氏灭菌精制干酪贮藏于不同温度中，30个星期后，20℃ 中的Nisin残留量为90%左右，25℃ 为55%，30℃ 下降到不到40%[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.3抑菌性[/size][/font][/align]乳酸链球菌素对许多革兰氏阳性菌，包括葡萄球菌、链球菌、微球菌、分歧杆菌、棒杆菌、利斯特氏菌、乳杆菌、芽孢杆菌等有明显的抑制作用，尤其对产生芽孢的革兰氏阳性细菌有特效，对革兰阴性菌影响不大。可能是因为革兰阴性菌的细胞壁较复杂，仅能允许分子量60Da以下的物质通过，乳酸链球菌素的分子量达到 3150Da，因此无法到达细胞膜。通常，产芽孢的细菌耐热性很强，如鲜乳采用135℃ 、2s超高温瞬时灭菌，非芽孢细菌死亡率100%，芽孢细菌死亡率90%，还有10%芽孢细菌不能杀灭。Nisin抑制细菌的生长及芽孢的萌发是由于其对细胞表面的强烈吸附而引起细胞质的释放实现的。Nisin是带有正电荷的疏水短肽，因而它可以作用于革兰氏阳性菌细胞壁带负电荷的阴离子成分上，如磷壁酸、糖醛酸磷壁酸、酸性多糖和磷脂。相互作用的结果是与细胞壁形成管状结构,使得小分了量的细胞组成成分从孔道中泄露出来,导致细胞内外能差消失,对蛋白质、多糖等物质的生物合成产生抑制作用。而G-与NisinG+相比,其细胞壁成分复杂而且结构致密，Nisin无法通过，无法对其发挥作用，但当经过处理改变G-的细胞壁通透性后同样对Nisin敏感[font='times new roman'][size=16px][6][/size][/font]。通过分子模型分析了乳链菌肽与质膜之间的相互作用及其对磷脂的影响表明,乳酸链球菌素吸附在质膜上,其N末端比C末端更深入地插入脂肪层中,表明N末端和C末端具有不同的疏水特点。对乳链菌肽与不同的中性和负电性磷脂模型的研究结果表明, 乳链菌肽扰乱了膜中脂肪,尤其是磷脂酰甘油的正常排列。对乳酸链球菌素与卵磷脂模型的作用方式研究表明,乳链菌肽可显著地改善二软脂酰-sn-甘油酰-3-卵磷脂的多层分散形态,而不会引起脂肪晶相的显著改变。乳链菌肽能显著地干扰膜的渗透性与膜结构。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]安全性[/size][/font][/align]通过病理学家研究以及毒理学试验都证明乳酸链球菌素（Nisin）是完全无毒的。乳酸链球菌素（Nisin）可被消化道[url=/item/%E8%9B%8B%E7%99%BD%E9%85%B6]蛋白酶[/url]降解为氨基酸，无残留，不影响人体[url=/item/%E7%9B%8A%E7%94%9F%E8%8F%8C]益生菌[/url]，不产生[url=/item/%E6%8A%97%E8%8D%AF%E6%80%A7]抗药性[/url]，不与其它抗生素产生交叉抗性。世界上有不少国家如英、法、[url=/item/%E6%BE%B3%E5%A4%A7%E5%88%A9%E4%BA%9A]澳大利亚[/url]等，在包装食品中添加乳酸链球菌素（Nisin），通过此法可以降低灭菌温度，缩短灭菌时间，降低热加工温度，减少营养成份的损失，改进食品的品质和节省能源，并能有效地延长食品的保藏时间。还可以取代或部分取代化学防腐剂、发色剂（如[url=/item/%E4%BA%9A%E7%A1%9D%E9%85%B8%E7%9B%90]亚硝酸盐[/url]），以满足生产保健食品、绿色食品的需要。乳酸链球菌素为天然的多肽物质，食用后可被体内的蛋白酶消化分解成氨基酸，无微生物毒性或致病作用，因此其安全性较高。ADI: 0~3001U/kg (FAO /wHO, 1994)。雄性小鼠经口LDo09.2g/kg(bw)，雌性小鼠经口LD56.81g/kg(bw)，雄性大鼠经口LDso14. 70g/kg(bw)，雌性大鼠经口LD36.81g/kg(bw)。[font='times new roman'][size=16px]2.3 Nisin作用[/size][/font]（1）能有效抑制引起食品腐败的细菌和孢子,延长食品保存时间；（2) 降低灭菌温度,缩短热处理时间,减少营养成分的损失,改进食品的品质、风味、结构、颜色等性状 （3）它对食品的色、香、味、口感不产生副作用 （4）可取代或部分取代化学防腐剂,以满足生产健康食品、绿色食品的需要 （5）节省能源,增加有效工作时间 （6）它是一种多肽,可被人体内的酶降解、消化。乳酸链球菌素对蛋白水解酶如胰蛋白酶、胰酶、唾液酶和 消化特别敏感，但对粗制凝乳酶不敏感。（7）它的标准品纯度为2.5%,并定为1x101U/go.乳酸链球菌素既可以降低灭菌温度,又可以延长食品的保藏时间,在目前,具有这样双重作用的食品防 腐剂是不多见的。可以降低灭菌温度,这在食品加工中具有很大的实用价值[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]2.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]使用方法[/size][/font]GB2760规定,乳及乳制品、预制肉制品、熟肉制品、可直接食用的熟制水产品0.5g/kg 杂粮灌肠、米面灌肠、改变物理形状的蛋制品0.25g/kg 食用菌及菌类罐头、八宝粥罐头、酱油、酱及酱制品、复合调味料、除水之外的饮料类0.2g/kg 醋0. 15g/kg.其他国家的规定见表2.1。[align=center][font='宋体'][size=14px]表2.1 批准使用乳酸链球菌素的国家举例[/size][/font][/align][table][tr][td] [/td][td][font='宋体'][size=14px]国家[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]允许使用的食品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]最大使用量[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]澳大利亚[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪，经加工的干酪，罐装番茄[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]比利时[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]100[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]塞浦路斯[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪，凝结的干酪，罐装蔬菜[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]欧盟[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]E234，作为天然防腐剂[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]视具体食品和加盟国而定[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]法国[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]经加工的干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]意大利[/size][/font][/td][td][/td][td][font='宋体'][size=14px]500[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]墨西哥[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]允许使用[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]500[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]荷兰[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪，经加工的干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]800[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]秘鲁[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]允许使用[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]俄罗斯[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪，罐装蔬菜[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]800[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]英国[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]凝结的干酪，干酪，罐装食品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]美国[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]经加工的干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1000[/size][/font][/td][/tr][/table][align=left][/align][font='times new roman'][size=16px]2.5 Nisin的使用标准[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.1 Nisin的使用标准和限量标准[/size][/font][/align]乳酸链球菌素 nisinCNS号 17.019 INS号 234功能 防腐剂[table][tr][td][align=center][font='宋体'][size=14px]食品分类号[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='宋体'][size=14px]食品名称[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='宋体'][size=14px]最大使用量/(g/kg)[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='宋体'][size=14px]备注[/size][/font][/align][/td][/tr][/table][table][tr][td][font='宋体'][size=14px]01.0[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]乳及乳制品(01.01.01、01.01.02、13.0涉及品种除外)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]04.03.02.04[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]食用菌和藻类罐头[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.04.02.01[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]杂粮罐头[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.04.02.02[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]其他杂粮制品(仅限杂粮灌肠制品)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.07[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]方便米面制品(仅限方便湿面制[/size][/font][font='宋体'][size=14px]品）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.07[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]方便米面制品(仅限米面灌肠制品)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]08.02[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]预制肉制品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]08.03[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]熟肉制品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]09.04[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]熟制水产品(可直接食用)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]10.03[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]蛋制品(改变其物理性状)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.03[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]醋[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.15[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.04[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]酱油[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.05[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]酱及酱制品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]复合调味料[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]14.0[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]饮料类(14.01包装饮用水除外)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][/table][align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.3 Nisin的检测标准[/size][/font][/align]检出限2.0 mg/kg（mg/L）；定量限6.0 mg/kg（mg/L）。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.1 交叉反应率[/size][/font][/align]乳酸链球菌素100%；纳他霉素0.1%；苯甲酸钠0.1%；聚萘氨酸0.1%；山梨酸钾0.1%；对羟基苯甲酸0.1%；多粘菌素B1%；多粘菌素E1%；万古霉素1%；缬氨霉素1%；平阳霉素1%；环孢菌素A1%。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.2 回收率[/size][/font][/align]牛奶、饮料、乳制品（液态）回收率如下：——添加量为1 μg/mL时，回收率为78.6%～110.6%；——添加量为30 μg/mL时，回收率为98.7%～117.9%；——添加量为300 μg/mL时，回收率为79.4%～116.5%。肉制品、乳制品（固态）回收率如下：——添加量为0.5 μg/mL时，回收率为93.1%～105.9%；——添加量为10 μg/mL时，回收率为75.8%～116.3%；——添加量为100 μg/mL时，回收率为88.2%～112.4%。[align=center][font='times new roman'][size=16px]第3章 乳酸链球菌素在食品中的应用[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]3.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Nisin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在乳和乳制品中的应用[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.1在原料奶保鲜中的应用[/size][/font][/align]Nisin用于原料奶的保鲜是非常有效的，在世界许多国家，牧场往往远离加工厂，加上当地气候比较炎热，且无适宜的冷冻设备，因此通常在原料奶中加入Nisin，以增加原料奶的保质期。Anonynous等人研究证实，在寒冷、室温及较高温度下，添加30-S0IU/mL的Nisin，就可使原料奶保质期廷长1倍以上，孔保华等人在鲜奶中添加Nisin研究鲜奶在贮存期间的质量变化，结果如表3.1所示，在整个贮存期间对照组的细菌总数均高于添加Nisin的处理组，且随着Nisin用量的增加，细菌总数呈梯度下降；而且在整个贮存期间对照组pH明显低于其它组，下降速度较快，其它组pH下降速度较慢。这是由于添加Nisin抑制了细菌的活性，因而pH相对较高[font='times new roman'][size=16px][7][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在巴氏杀菌乳中的应用[/size][/font][/align]蒋艳在实验中发现，巴氏杀菌乳在整个贮存期间未添加Nisin的组、细菌总数均显著高于添加Nisin的各组样品，且随着添加Nisin浓度的增加，细菌总数逐渐减少、产品保质期延长（如表3.2），同时，对贮存期间巴氏杀菌乳酸度、风味的测定发现， Nisin对乳中的产酸菌有明显抑制作用且对风味没有影响。添加Nisin后，在4℃ 环境下保存，可使产品保质期达到12天左右，但由于Nisin价格较费，在实际生产中应考虑生产成本，确定合适的添加量。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.3在酸奶中的应用[/size][/font][/align]酸奶属高水分食品,水分活度约为0.90-0.95,酵母菌、霉菌及细菌等各种微生物都能生长,而最先导致酸奶腐败变质的微生物是细菌,它是最活跃量普遍的因素,起主导作用。因此抑制细菌的繁殖,就能有效地延长酸奶的保质期。潘利华的实验表明,在没有添加稳定剂的酸奶中, Nisin的添加量为500IU/ mL时,不影响发酵过程,也不能延长保质期。但在水果酸奶生产中,由于新鲜水果带入了酵母菌和细菌(210个/ml),致使产品在1周内即发生腐败,即使添加 Nisin对抑菌作用也无效,相反还会促进腐败菌的生长,在这种情况下添加香兰素(2g/kg)可以起到抑菌效果,而且对产品风味无影响。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.4在干酪保藏中的应用[/size][/font][/align]Nisin最初用于干酪的防腐，其已成功地用于硬制干酪、巴氏灭菌干酪、巴 氏灭菌乳、罐藏浓缩牛乳、高温灭菌乳、酸乳、乳制甜点等乳制品中。在干酪的加工过程中，Nisin是最有效的保护剂,干酪原料经80℃-100℃巴氏消毒后,梭菌芽孢仍能存活，乳酪中最常见的微生物为丁酸梭菌、酪丁酸梭菌、生抱梭菌,尤其是肉毒梭菌在加工的乳酪中产生毒素。Taraka等(1986)研究表明,在经巴氏处理的干酪中，加入500 IU/mL-1000IU/mL Nisin能阻止梭菌的生长和毒素的形成，同时还能降低食盐和磷酸盐的用量[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。加工干酪由于其高pH值、高水分和厌氧包装，故产品中存在的微生物问题主要是芽孢菌的生长， 如C sporogenes、C butyricum 和C tyrobutyricum，因此抑制加工干酪中的微生物就是抑制芽抱菌生长，有报道证实, Nisin作为加工干酪防腐剂有很好的作用。此外, C.botulinum对加工干酪的污染有日益增长的趋势，有研究表明, 12.5 -250.0 mg/kg的Nisin对加工干酪粉中防止C.botulinum的生长是有效的,它可延缓和防止C.botulinum的生长,并可延缓和防止C.botulinum毒素的产生。一般具有高水分、低盐和磷酸盐的产品要求应用的Nisin量较高. Natalia R等人也证实，一株产Nisin Z的Lactococcus lactis sp. lactis IPLA 729gB明显抑制 Vidiago酪中 C.tyrobutyricum 的生长。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.5在长货架期软雪糕奶浆中的应用[/size][/font][/align]Nisin能有效地抑制包括李氏菌在内的大多数革兰氏阳性菌。余保宁对Nisin在长货架期软雪糕奶浆的应用实验中发现、随着奶浆存放时间的延长, Nisin对微生物的抑制效果均表现为随着添加量的增加而增大，从细菌总数的数据分析看 Nisn的浓度大于或等于50mg/kg时,就能起到较好的抑菌作用。同时，有研究发现，添加不同防腐剂处理软雪糕奶浆观察其在4℃条件下菌数变化，发现Nisin和苯甲酸钠的抑菌效果较好，而且尤以Nisin的保鲜效果最佳、原因可能是 Nisin对梭菌和芽孢杆菌活性的抑制，这些产生内生孢子的细 菌是食品的主要腐败微生物，它们的孢子比营养细胞对Nisin更为敏感，这是由于孢子在软雪糕奶浆调和过程中已受到热损伤，因此变得对Nisn较为敏感。这也是Nisn比其它保鲜剂更适用于热加工食品防腐保鲜的重要原因。[align=center][font='宋体'][size=14px]表3.1 贮存期间细菌总数和[/size][/font][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][font='宋体'][size=14px]的变化[/size][/font][/align][table][tr][td] [/td][td=1,2][font='宋体'][size=14px]Nisin添加量（IU/g）[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]0天[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]4天[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]7天[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]11天[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]空白[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.9[/size][/font][font='宋体'][size=14px]×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]4[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.55[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9.0×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.49[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.6×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]7[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.05[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.6×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]9[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5.82[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]200[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.0×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]3[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.59[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.8×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.55[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.3×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]7[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.21[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.4×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]8[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.09[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]300[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.4×102[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.63[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.4×105[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.59[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.1×106[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.37[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.6×107[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.39[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]400[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.8×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]2[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.67[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.8×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.60[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.5×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]3[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.58[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.5×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.46[/size][/font][/td][/tr][/table][align=center][font='宋体'][size=14px]表3[/size][/font][font='宋体'][size=14px].2[/size][/font][font='宋体'][size=14px] 不同浓度Nisin添加量对巴氏杀菌乳在贮存期间细菌总数的影响[/size][/font][/align][table][tr][td=1,2][font='宋体'][size=14px]Nisin添加量（mg/kg）[/size][/font][/td][td=8,1][font='宋体'][size=14px]细菌总数（个/ml）[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]1天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]11天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]13天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]15天[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]0[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.9×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.8×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.7×10[/size][/font][/td][td][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]100[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.2×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.3×10[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]200[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.2×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.3×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9.2×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.3×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.3×10[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]300[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.1×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.1×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.1×10[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]400[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.9×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.2×10[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]500[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.4×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.7×10[/size][/font][/td][/tr][/table][align=left][/align][font='times new roman'][size=16px]3.2 Nisin在肉制品中的应用[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.1牛肉冷却肉保鲜[/size][/font][/align]将鲜牛肉在2℃条件下经24h预冷，用不同浓 度的Nisin溶液浸渍30s，沥干，真空包装。80℃热水浸渍25s，4℃下贮藏、观察。结果发现，在牛肉冷却肉保鲜中，Nisin有显著的抑菌作用,细菌总数明显降低，且保鲜效果随Nisin浓度增加而增强,其有效保鲜浓度为0.075g/kg，且与乳酸钠之间存在协同作用,而与山梨酸钾发生拮抗作用。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.2在香肠中的应用[/size][/font][/align]亚硝酸盐是常用的肉制品发色剂，能够有效地抑制肉毒杆菌的生长和繁殖，但含亚硝酸盐的食物有致癌的危险，故世界各地对其用量都有严格的限制、并有禁止使用的趋势。添加Nisin到香肠中可降低亚硝酸盐的用量，又能有效地延长香肠的保质期[font='times new roman'][size=16px][8][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.3在西式切片火腿中的应用[/size][/font][/align]火腿切片，先熟化后再切片包装。为防止二次污染,研究人员在切片中添加Nisin研究在无菌化包装条件下,延长火腿切片的保质期。试验结果可以看出，对照组不加Nisin,仅加发色剂亚硝酸盐0.016g/ e,在4℃下贮存，保质期为14天，试验组单独添加0.042 g/kg Nisin，并将亚硝酸盐用量减少一半，保质期为28天，比对照组提高1倍。另一试验组，添加0.042 g/kg Nisin和 20glkg乳酸钠，再加亚硝酸盐0.008g/kg，4 ℃ 下贮存，保质期则延长到70天，较好地解决了西式火腿切片保质期短的问题[font='times new roman'][size=16px][8][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在即食腊肉制品中的应用[/size][/font][/align][align=left]即食腊肉含水量较高，要保持其独特的耐嚼感，杀菌强度就不能过高。添加Nisin能很好地解决这一问题，Nisin能增加一些细菌对热的敏感性，且在小范围内也有辅助杀菌作用，可降低灭菌温度、缩短灭菌时间，同时能保持很好的色泽和风味。3.2.5在扒鸡中的应用[/align]扒鸡又名五香脱骨鸡，有近百年的历史，是山东的特色名吃，因肉质软烂，骨肉可以分离而得名。软包装扒鸡，是选健康童子鸡为原料，宰杀后经蜜水浇灌，素油烹炸，再以豆蔻、砂仁、丁香等10多种名贵中药调味增香、精工扒制而成，但与手工制作的散装扒鸡比较，有肉质过于软烂， 咀嚼性差等缺陷，为提高软包装扒鸡的质量，在扒鸡加工过程中添加Nisin，以降低其灭菌强度，改善扒鸡的食用品质。除杀菌温度由121℃降为105℃外，其它工艺条件不变，保质期可以达到半年以上，且口感也得到改善。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在泡凤爪制品中的应用[/size][/font][/align][align=left]泡凤爪属于动物性泡菜，是将发酵工艺成功用于肉制品生产的新食品。虽然其生产历史较短，由于其独特的风味，低脂高蛋白质，胶原蛋白含量丰富， 口感细腻，深受广大消费者的喜爱。但由于水份活性高，胶原蛋白含量丰富，限制了其进行热力杀菌，因此极易腐败添加30g/100kg的Nisin对泡凤爪的贮存、保鲜具有较好、较显著的作用。3.2.7在烤肉中的应用[/align]烤肉常采用优质黄牛后腿肉，经过若干工序制作而成的低温肉制品。产品表层粘有辣椒或咖喱粉，外表干爽，口感鲜嫩，风味独特，深受消费者喜爱。由于未经高温灭菌，因此在常温下不能长期保存。加入Nisin后能有效地抑制细菌生长繁殖，28℃下产品保质期从4～5天延长到了20天。[font='times new roman'][size=16px]3.3 Nisin在罐藏食品中的应用[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.3.1在罐头食品中的应用[/size][/font][/align]罐头食品中经常污染一些极为耐热的细菌芽孢，如嗜热脂肪芽孢杆菌和热解糖梭菌的芽孢，一旦条件适宜，它们就会生长，引起产气、产酸腐败. 0.1g/kg的乳酸链球菌素添加于罐头食品中，可以使罐头食品在炎热的条件下保存2年。并能减少热处理强度1/2 ，节省能源，使罐头食品保持良好营养价值、外观、风味、色泽，保持产品品质、延长食品保质期，其效果优于山梨酸钾。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.3.2在低盐酱菜中的应用[/size][/font][/align]传统酱菜的制作主要是利用高浓度盐的高渗作用，起到防腐保鲜的作用，但是我国居民膳食指南提倡每人每日食盐摄入量应该少于6g,而对于高血压患者,每天的食盐摄人量应该在4g左右，因此，我国酱菜的研究方向应该朝着低盐的方向发展，但是盐浓度过低，微生物会大量繁殖，致使食品的货架期变短，而且Nisin的半数致死量与食盐相同，所以使用天然防腐剂Nisin成为酱菜行业中的选择。易建华等[font='times new roman'][size=16px][9][/size][/font]采用乳酸链球菌素、纳他霉素进行酱菜的保藏实验研究，单一使用二者时，300g/kg乳酸链球菌素和150 mg/kg纳他霉素效果最好，最优复合配方为300 g/kg乳酸链球菌素+150 mg/kg纳他销素；乳酸链球菌素与纳他霉素复合防腐剂对酱菜总酸度影响较小，同时,在保藏3个月内，乳酸链球菌素与纳他霉素复合防腐剂可以改善酱菜的感官品质。[font='times new roman'][size=16px]3.4 Nisin在啤酒酿造中的应用[/size][/font]由于乳酸链球菌素不能抑制酵母菌，因而可用于啤酒、果酒及其它酒类产品来防止乳酸菌引起的腐败。洗涤酵母：乳酸链球菌素可代替传统的酸洗法清除酵母菌中污染的乳酸菌，保持酵母原有的生命力、发酵力和凝聚力。添加1g/kg—1.5g/kg的乳酸链球菌素于酵母浆中混合均匀后放置4-6小时即可。减少巴氏灭菌时间：在巴氏灭菌后，加入0.01g/kg—0.05g/kg乳酸链球菌素到成品中。抑制细菌：发酵前加入0.025g/kg—0.1g/kg的乳酸链球菌素，成品酒中残留0.01g/kg—0.05g/kg即可。在葡萄酒的主发酵和后发酵中，加入0.1g/kg的乳酸链球菌素，可防止发酵过程中短乳杆菌、葡萄明串珠菌、干酪乳杆菌引起的污染。[font='times new roman'][size=16px]3.5 Nisin在焙烤食品中的应用[/size][/font]在发面烤饼、甜面包和煎饼等中添加Nisin，对引起产品腐败的耐热蜡状芽孢杆菌有很强的抑制作用，可延长制品的保质期。添加0.2g/Kg的乳酸链球菌素于产品中即可达到抑菌要求。[font='times new roman'][size=16px]3.6 Nisin在果汁饮料中的应用[/size][/font]酸土芽孢杆菌（Alicyclobacillus acidoterrestris）是一种耐酸且耐热的产孢子 菌，最适于在25~60℃ ，pH为5.0~6.0的环境下生长、繁殖、据资料报道,在果园、森林土壤以及生产饮料用水中均有酸土芽孢杆菌的生长。因此，酸土芽孢杆菌很容易被带人果汁及果汁类饮料的生产加工过程中,引起果汁及果汁类产品的酸败，如美、英、德 等国，都曾报道过由于该菌的污染而引起果汁类产品酸败的质量事故。为防止果汁饮料的酸败, Komitopoulou 等人试验了Nisin对市售纯果汁中酸土芽孢杆菌孢子的抑制作用，结果显示：在25℃ 温度下贮存的苹果汁、桔子汁和葡萄柚汁中, Nisin的添加量仪需5 IU/mL,即可抑制酸土芽孢杆菌孢子的生长。在44℃温度下贮存的纯果汁,只有葡萄柚汁有相同的抑菌效果，而桔子汁和苹果 汁中，酸土芽孢杆菌孢子对Nisin的敏感性降低了，在Nisin添加量为100 1U/mL的试样中，酸土芽孢杆菌才被完全抑制。显然, 在不同果汁中, Nisin的最低抑菌浓度是不相同的，这可能与果汁自身pH值的不同有关。Nisin有较高的热稳定性,因此,对果汁及果汁类产品在巴氏灭菌前添加适量的 Nisin，不仅可以降低热加工强度,提高Nisin 的残留量，而且，可以阻止存活的酸士芽孢杆菌孢子的生长,防止果汁及果汁类产品的酸败[font='times new roman'][size=16px][10][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]3.7 Nisin在方便食品中的应用[/size][/font]方便食品中存在的主要问题是菌落总数，大肠菌群超标等，本品能有效防止微生物的生长，提高产品品质，延长产品保持期。添加少量的Nisin于色拉酱、冷盘、面点和汤类等方便食品中,能有效抑制酵母菌、细菌的生长繁 殖,效果可以和山梨酸盐等化学防腐剂媲美,且能使 盐浓度下降为7%～9%。在小包装休闲方便面中，如鸡腿、鸡爪、肉干等禽肉制品中可正常使用，蔬菜类的方便食品，如低盐榨菜、金瓜丝等也都在生产中正常使用。[font='times new roman'][size=16px]3.8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] Nisin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在热处理密封包装食品中的应用[/size][/font]许多经热处理密闭包装的食品，在加工过程中，高强度的杀菌会影响食品的品质，而低温热处理又不能杀灭耐热孢子，达不到保质的要求。如在该类食品中添加0.05g/kg— 0.2g/kg 的乳酸链球菌素，就可以解决上述问题。[font='times new roman'][size=16px]3.9 Nisin在植物蛋白食品中的应用[/size][/font]在豆奶、花生牛奶等中添加乳酸链球菌素0.1g/kg—0.15g/kg，保质期延长3倍以上。 内酯豆腐中添加 0.1g/kg 的乳酸链球菌素，能使保质期延长5倍以上。豆干中添加0.1g/kg的乳酸链球菌素、复合少量其它防腐剂，经合适的灭菌，保质期可达6个月。盒装内酯豆腐，在炎热的夏季，保质期不到12h。超过12 h，产品就会脱水、变酸、变质。添加Nisin，保质期可以延长到24 h。 1 d的保质期，安全可以满足这种即食产品在市场上流通的需要。如对保质期还有更高的要求，根据北京农大王绍林老师的研究，添加Nisin再配合微波杀菌，在室温18℃下，保质期可以达到3d[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]3.10 Nisin在鱼贝类等海产制品中的应用[/size][/font]鱼、鲜虾等海鲜制品以其美味及高营养价值深受人们喜爱，且多冷食，因易腐败变质，易遭受李斯特菌和E-肉毒杆菌的污染，对人体造成危害。控制半成品、成品中的细菌数就显得十分重要。添加100 mg/L-150 mg/L Nisin可抑制李斯特菌，延长保存期和新鲜度，使用方法与肉制品相同。以生虾肉为主料，加工的虾肉糜，一般只有2d的保质期，加入Nisin后可使保质期达到60~70天。[font='times new roman'][size=16px]3.11 Nisin 在酱类制品中的应用[/size][/font]添加Nisin于沙拉酱和调味用酱汁中,可有效抑制乳酸菌和孢子的生长,使低脂低盐产品的腐败性降低,可延长保存期达4倍之多，建议使用量为50 mg/L200 mgl[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.12 其他[/size][/font][/align]有用Nisin和纳他霉素复合，代替化学防腐剂用于高档酿造酱油以供出口。也有在酱制品如辣椒酱中使用取得成功。除食品行业以外,有用Nisin代替化学防腐剂应用于化妆品的制造。0.05g/kg—0.1g/kg 乳酸链球菌素添加到蛋制品中，可有效抑制引起产品腐败的耐热性孢子，将原来保存期 7 天的蛋制品的保质期延长到1个月以上。0.05g/kg—0.2g/kg 的乳酸链球菌素加入到沙拉酱等中，可有效抑制乳酸菌和孢子的生长，使低脂低盐产品的腐败性降低，延长保存期 3 倍以上。在香基香料加工中，Nisin可降低灭菌温度，减少灭菌时间，能有效杀死或抑制产品中各种有害微生物，如对细菌、大肠杆菌、革兰氏阴性菌、李斯特氏菌等都有较强的抑制作用，延长产品保质期，提高产品品质。 在膏状香精中添加0.2g/Kg的乳酸链球菌素、0.1g/Kg的纳他霉素和山梨酸钾可抑制其中的各种有害微生物的生长。[align=center][font='times new roman'][size=16px]第4章 结论[/size][/font][/align]综上，乳酸链球菌素作为一种新型天然对人体无毒害的食品防腐剂，应用前景十分广阔，它是一种天然、高效、安全的天然食品添加剂，符合未来食品防腐剂的要求，它能有效地抑制引起食品腐败的革兰氏阳性菌，特别对耐热芽孢杆菌、肉毒梭菌及李斯特氏菌有强烈的抑制作用，可降低食品灭菌温度、缩短灭菌时间、改善食品风味、外观和提高食品营养价值、延长保藏时间，符合国家农业行业标准NY/392-2000绿色食品食品添加剂使用准则。天然食品防腐剂取代化学合成防腐剂是一种必然趋势，乳酸链球菌素的开发和利用将对促进我国绿色食品的发展和保障人民身体健康具有重要的意义。[align=center][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]参考文献[/size][/font][/align][align=left][size=13px][1]田文利,吴琼,吕红线,王锦.乳酸链球菌素(Nisin)的研究进展[J].食品工业,2000:26-28.[/size][/align][align=left][size=13px][2]Allison G E and Fremaux C and Klaenhammer T R. Expansion of bacteriocin activity and h[/size][size=13px]ost range upon complementation of two peptides encoded within the lactacin F operon.[J]. Journal of bacteriology, 1994, 176(8) : 2235-41.[/size][/align][align=left][size=13px][3]郭本恒. Nisin的物理化学性质[J]. 农牧产品开发, 2001(02):3-5.[/size][/align][align=left][size=13px][4]张红印, 吴祖兴, 张一鸣,等. 天然防腐剂及其在食品加工中的应用[J]. 冷饮与速冻食品工业, 2001, 007(003):20-21.[/size][/align][align=left][size=13px][5]孙来华,张志强.乳酸链球菌素的特性及其在食品中的应用[J].食品研究与开发,2008(10):119-123.[/size][/align][align=left][size=13px][6][/size][size=13px]Hurst A[/size][size=13px]. Nisin [[/size][size=13px]J[/size][size=13px]].Advanse in Applied Microb biology,1981.27:85-123.[/size][/align][align=left][size=13px][7]王广萍, 郝奎, 付忠梅. Nisin在乳和乳制品保藏中的应用[J]. 中国乳业, 2006, 000(004):39-42.[/size][/align][align=left][size=13px][8]赵剑飞. Nisin的性能及在肉制品中的应用[C]// 中国肉类科技大会. 中国畜产品加工研究会, 2005.[/size][/align][align=left][size=13px][9][/size][size=13px]刘筠筠，杨嘉玮. 美国食品添加剂的安全监管及其启示[/size][size=13px][J].[/size][size=13px] 食品安全质量检测学报，2014，5[/size][size=13px](1):154-159.[/size][/align][align=left][size=13px][10]夏云梯, 潘利华, 等. 乳酸链球菌素在食品工业中的应用(三)[J]. 中国食品添加剂, 2000, 000(004):63-65.[/size][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align]

鉴于目前恒天然奶粉出肉毒杆菌一事，一起学习一下肉毒杆菌和肉毒素。肉毒杆菌的全名叫肉毒梭状杆菌（也叫肉毒梭菌Clostridium botulinum），是一种革兰氏阳性厌氧杆菌，其生长繁殖及产毒的最适温度为18～30℃。肉毒杆菌广泛分布于土壤、淤泥及动物粪便中，其中土壤是重要污染源，它可借助食品、农作物、水果、海产品、昆虫、禽类等传播到各处。肉毒杆菌家族一共兄弟7个，本身其实没有毒性，但其中有4个能在厌氧环境下（比如肠道、密闭发酵食品）产生肉毒毒素。食品在加工、贮藏过程中被肉毒杆菌污染，食前对带有毒素的食品又未加热或未充分加热，就易引起中毒。在我国的新疆、青海等少数民族地区几乎每年都会出现自制发酵肉制品导致的肉毒中毒、甚至死亡。肉毒毒素（botulinum toxin，AX）是肉毒杆菌产生的含有高分子蛋白的神经毒素，是目前已知在天然毒素和合成毒剂中毒性最强烈的生物毒素，它主要抑制神经末梢释放乙酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼吸肌麻痹是致死的主要原因。肉毒毒素真正被大众了解，是因为一些明星注射肉毒来除皱。虽然这个毒素的毒性比较大，一点点就能毒死人，但它本身对热不稳定，煮开几分钟就破坏掉了，真正难解决的是它的芽孢。肉毒杆菌在感觉不舒服的时候就像作茧一样用一些蛋白和糖类物质把自己包起来，然后就能“刀枪不入”，一般的加工手段都杀不死它。等它重新进入合适的环境，比如人的肠道，它又能苏醒过来继续干坏事。成人由于肠道里面的菌群早已站稳了脚跟，少量的肉毒杆菌是斗不过这些“地头蛇”的，因此对成人的危险性相对较小。但婴儿尤其是1岁以下的小宝宝，正常菌群还处于建设阶段，这个时候肉毒杆菌来捣乱的话，有可能对宝宝造成较大影响。　　我国乃至全世界都没有乳粉中肉毒杆菌的限量标准，因为肉毒杆菌在乳品中并不是常见的污染物，而标准的管理是要考虑成本的，正因如此，各国都不把它写入标准。但这并不意味着根本不管，比如这次恒天然是在企业的质量控制中发现的问题。用标准管理有限的问题，用过程的控制实现更全面的安全保障，这才是科学的食品安全管理理念。对于负责任的大企业，其质控项目数量和质控要求都是远远高于国家标准要求的。

国标上说该菌在MYP上呈粉红色菌落，周围有沉淀环，产生卵磷脂酶。我们按照SN标准做了试验，肉汤中培养48h有浑浊，但MYP上培养48h是黄色菌落培养基也成了黄色，没有典型的粉红色菌落，也没有沉淀环。可是室温放置一段时间后，（已超过了规定的培养时间）又出现了粉红色菌落，周围有沉淀环，我们又进一步做了生化试验，生化结果很可疑，也基本符合蜡样芽孢杆菌的特征，请问各位大侠，结果怎么报呀？ 是阴性还是报阳性？

做乳酸菌总数的时候，一般我都做乳杆菌和嗜热，突然要多做双歧，但是我不知道最后的计算结果的时候，双歧要不要一起计算进去？求助各位大佬们了！

老师们，我看国标里MRS好像更适用于测乳杆菌，想知道未改良的MRS培养基对于嗜热链球菌和双歧杆菌也可以有检测效果吗？实验室如果要检测乳酸菌活菌数的话是否需要另外购买莫匹罗星锂盐、半胱氨酸盐酸盐以及MC培养基呢？有没有这方面有经验的老师可以解答一下

旧国标中阪崎肠杆菌检验的第二步是10ml增菌培养液+90mlEE肉汤培养---做的是十倍稀释培养；而新国标中的第二步是1ml的培养液+10ml的mlst-vt做的不是十倍培养，对这些有些迷惑，请前辈们指点谢谢。

EP中，控制菌检查大肠埃希菌用到的麦康凯肉汤，培养温度是42-44摄氏度，这样的温度有什么原理？为什么不选择平时细菌的一般温度？谢谢

鼠李糖乳杆菌培养不出来，琼脂培养基都没有菌长成，叶酸实验用的，容易在哪里出现问题？望老师不吝赐教

乳酸菌广告效果乃商家随意而为 专家:酸奶更为有益中广网北京11月22日消息（记者吴善阳 实习记者陈彬）据中国之声《央广新闻》报道，近年来，乳酸菌饮品花样百出，商家打出的"乳酸菌"概念广告也是五花八门。但乳酸菌饮品真的"能够帮助肠胃做运动",其功能真如商家宣传的那么玄乎吗？专家指出，乳酸菌广告往往是商家随意而为，并没有统一的规范标准。要使行业健康有序发展，就必须尽早出台行业标准。 每天中午，记者发现多数在写字楼上班的白领都会饭后买一瓶乳酸菌饮品，仿佛真能让它"帮助肠胃做运动".食用乳酸菌饮品实质上是为我们补充乳酸菌，使人体菌群达到平衡，从而有益健康。上海交通大学病原生物学教研室主任、上海市食品学会乳酸菌专业委员会副主任委员郭晓奎表示广告效果都是厂家随意而为，没有机构认证。 郭晓奎：那些厂家在做广告上都是自己随意而为的，并没有哪个权威机关或者学术机构来验定，咱们国家从来就没有一个机构出这个认证。 继味全、达能之后，光明、伊利、蒙牛先后推出了自己的乳酸菌产品。商家各出奇招，时而请美女明星代言，时而请某医学博士，貌似权威。此外，商家总喜欢用一些不为人知的专业菌名做噱头，A+B益生菌、B益畅TM菌等。有的商家还推出"植物乳杆菌",用"自然"的名义抬高价格。其实，"植物乳杆菌"只是因为最初是在植物上发现的而得名，并不是在植物上独有的。 专家建议，传统固性酸奶更为有益。乳酸菌饮品主要配料为水，脱脂奶粉和食用香料，其含奶量甚少，千万不能将乳酸菌与酸奶等同看待。同济大学医学院营养与保健食品专家张欣文教授表示还是酸奶营养价值高。 张欣文：乳酸菌饮料里面放了比较多样的食品添加剂，所以它的营养价值来说就没有酸奶那么高。 记者发现，在国家食品药品监督管理局的数据中，只有6种乳酸菌饮品获得了国家批准文号。其中，杭州顶津食品有限公司是用"味全R活性乳酸菌饮品"的名字申请批准文号，并属于国产保健食品类，而市场上销售的"味全活性乳酸菌饮品"中，却将R去掉，以普通食品出售。其他诸如光明、伊利、蒙牛等品牌虽大推活性乳酸菌的保健功能，但并不属于国家批准的保健食品行列。郭晓奎表示大多企业所用菌种都是未经严格实验的。 郭晓奎：咱们国内大多数企业用的菌种都是没有经过严格的随机、对照、多中心等多种测试的。它可能委托两家企业做一下或者两家医院做一下实验，但是这个实验从严格意义上来说恐怕都存在一些问题。这是一个很乱的，但有前景的，管理上跟不上或者说学术支持也跟不上的一个行业。

求助高手帮忙一样品中含有鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，其中鼠李糖乳杆菌占优势，比例较大，如用什么样的培养基较合适

益生菌被正式定义为：口服益生菌是指通过一定数量的消化可以发挥超出基础固有营养素的有益健康功效的活的微生物。更普遍的定义为：益生菌为通过改善肠菌落平衡而对寄主产生有益作用作为添加补充剂的活的微生物。 益生菌的名字来源于希腊文字“生命前”在过去的十年中被以很多不同方式命。但总的来说他被指定为对寄主健康有益的细菌类产品。用于定义三个主要方面 :活微生物（依然有生命） 细菌为口服 为了能够作用于肠菌落平衡，细菌必须有能力存活到抵达肠系统。这就意味着，这些益生菌必须可以抵抗酸（胃），胆汁，在厌氧环境下生长和无毒性。这些标准限制了一下这些细菌的株类和种类：乳酸杆菌，链球菌和双歧杆菌。尽管一些其他菌种可以在有些情况下被使用（如动物营养中的酵母与杆菌属）。上述三种菌都属于乳酸菌的一部分，它们自然的存在与动物肠组织和发酵的乳制品中。术语益生菌为株决定性，但并不为种决定性。株为细菌种的一类，如以下例子：菌群 = 德国汽车 = 乳酸菌菌属 = 大众汽车 = 乳酸杆菌菌种 = 高尔夫大众汽车 = 嗜酸性乳酸杆菌菌株 = 高尔夫大众 1.4D = 嗜酸性乳酸杆菌 LC1

http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308050854_456024_2762510_3.bmp新西兰初级产业部3日宣布，新西兰乳制品巨头恒天然集团旗下部分产品可能含有肉毒杆菌毒素。可能受污染的产品被用于婴儿配方奶粉和运动饮料的生产。 国家质检总局对此高度重视，立即与新西兰驻华使馆取得联系，要求新方立即采取措施，防止问题产品影响中国消费者健康，同时要求进口商立即召回可能受污染产品。 综合新华社 现代快报记者 吴怡　　恒天然集团声明　　38吨浓缩乳清蛋白受污染　　涉事产品或达900吨，已提醒8家客户　　恒天然集团3日举行新闻发布会，恒天然集团新西兰奶制品公司执行董事加里·罗马诺说，有3批浓缩乳清蛋白出现质量问题，这些产品是去年5月在新西兰本地一家工厂生产的，涉嫌被污染的产品总量为38吨。污染源是该公司在北岛怀卡托地区豪塔普工厂的一根受污染的管道。　　据悉，这些可能造成服食者中毒的受污染浓缩乳清蛋白粉被提供给8家制造商，用作生产婴儿奶粉、儿童成长奶粉和运动饮料的原料，涉事产品估计达到900吨。　　恒天然集团表示，检测结果显示，这些浓缩乳清蛋白可能含有肉毒杆菌的菌株，有可能造成食用者中毒。据介绍，这种浓缩乳清蛋白被广泛用于婴儿奶粉、儿童成长奶粉和运动饮料中。但一般的乳制品如鲜奶、奶酪、酸奶和经过超高温消毒的牛奶产品，则不会受到影响。目前，还没有收到问题产品引发的健康问题报告。2日，恒天然集团已将情况向包含3个中国客户在内的8家客户进行了通报。目前，这些客户已紧急展开调查。如有必要，将召回产品。该集团发言人表示，目前不能透露这8家公司和相关产品的名称，也不能透露这些产品销往哪些国家。但新西兰初级产业部表示，受影响国家包括澳大利亚、中国、马来西亚、泰国、越南和沙特阿拉伯。　　恒天然集团全球首席执行官西奥·史毕根斯定于3日从欧洲前往中国，向相关机构和客户通报最新情况。史毕根斯表示，集团将尽全力协助这8家客户进行检查，确保受污染的产品从市场收回，同时让公众知情，如果已经卖出就退货。　　今年1月被查出含微量双氰氨　　今年1月，新西兰初级产业部宣布，恒天然集团生产的奶粉中曾被检测出含有微量双氰氨。　　新西兰政府建议　　暂停向宝宝喂食可瑞康2段奶粉　　新西兰初级产业部3日发表声明，建议新西兰父母暂停为6个月以上宝宝喂食“可瑞康”牌2段婴儿配方奶粉，因为这种奶粉可能使用含有肉毒杆菌的浓缩乳清蛋白粉。　　新西兰初级产业部负责食品安全事务的代理局长斯科特·加拉赫当天表示，目前已经确定5个批次“可瑞康”牌2段婴儿配方奶粉使用含有肉毒杆菌的浓缩乳清蛋白粉。其中3个批次在奥克兰仓库中，1个批次在货轮上，另1个批次在澳大利亚。这些“问题奶粉”不会被投放到市场销售。　　反应　　国家质检总局要求立即召回　　针对新西兰企业在浓缩乳清蛋白粉中检出肉毒杆菌一事，国家质检总局对此高度重视，立即与新西兰驻华使馆取得联系，要求新方立即采取措施，防止问题产品影响中国消费者健康。　　国家质检总局要求进口商立即召回可能受污染产品，并要求各地检验检疫机构进一步加强新西兰输华乳制品的检验监管。　　调查　　网购平台仍在销售据了解，新西兰恒天然集团是全球最大的乳品出口企业，也是世界上第6大乳品生产商。目前，恒天然在中国的上海、北京、广州设有分公司。昨天，记者来到位于新街口和进香河的几家大型超市，在进口乳制品货架上，并没有见到这款蛋白粉及恒天然旗下的乳制品品牌。“我们这里的进口乳制品主要来自美国、法国等地，而进口的乳清蛋白粉只有来自美国的一个牌子。”一位售货员告诉记者。　　虽然在部分超市里未见到被爆出的这款恒天然浓缩乳清蛋白粉，但在网购平台上搜索，这款蛋白粉在多家网店都有销售。在产品描述信息中，都写着“奶源世界第一，零污染”的口号。现代快报记者联系上其中一家店主，询问查出肉毒杆菌的消息，店主表示并未听说。【多美滋问题乳粉流入市场400多吨 上海卖场开始下架】由新西兰恒天然受肉毒杆菌污染乳粉制成的多美滋奶粉流入市场达420吨。目前，上海质监部门已经全部封存多美滋公司现场涉及问题乳粉的原料及成品，并要求公司立即启动召回程序。4日下午起上海多家超市已开始下架多美滋涉事产品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308050900_456025_2762510_3.bmp

2 乳酸科技名词定义中文名称：乳酸 英文名称：lactic acid 其他名称：α羟基丙酸 定义：无氧糖酵解的终产物。是由乳酸脱氢酶的作用使丙酮酸还原而生成的。 所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；新陈代谢（二级学科） 百科名片乳酸纯品为无色液体，工业品为无色到浅黄色液体。无气味，具有吸湿性。相对密度1.2060(25/4℃)。熔点18℃。沸点122℃（2kPa)。折射率nD(20℃)1.4392。能与水、乙醇、甘油混溶，不溶于氯仿、二硫化碳和石油醚。在常压下加热分解，浓缩至50%时，部分变成乳酸酐，因此产品中常含有10%-15%的乳酸酐。生物学　　在发酵过程中乳酸脱氢酶将丙酮酸转换为左旋乳酸。在一般的 　　 乳酸新陈代谢和运动中乳酸不断被产生，但是其浓度一般不会上升。只有在乳酸产生过程加快，乳酸无法被及时运走时其浓度才会提高。乳酸运输速度由一系列因素影响，其中包括单羧基转运体、乳酸脱氢酶的浓度和异构体形式、组织的氧化能力。一般来说血液中的乳酸浓度在不运动时为1-2mmol/L，在强烈运动时可以上升到20mmol/L。 　　一般来说当组织的能量无法通过有氧呼吸得以满足，组织无法获得足够的氧或者无法足够快地处理氧的情况下乳酸的浓度会上升。在这种情况下丙酮酸脱氢酶无法及时将丙酮酸转换为乙酰辅酶A，丙酮酸开始堆积。在这种情况下假如乳酸脱氢酶不将丙酮酸还原为乳酸的话糖酵解过程和三磷酸腺苷的生产会获得抑制。产生乳酸的过程为：丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD 　　这个过程的意义在于重建糖酵解所需要的烟酰腺嘌呤二核苷酸（NAD+）来保持三磷酸腺苷的生产。在氧气充足的肌肉细胞中乳酸可以被氧化为丙酮酸，然后直接用来作为三羧酸循环的燃料。它也可以在肝脏内糖异生的过程中通过科里循环转化为葡萄糖。乳杆菌属的细菌也可以进行乳酸发酵。这些细菌可以生活在口内，它们产生的乳酸是导致龋齿的原因。在医学里乳酸常被用在乳酸林格氏液中。这是一种与人的血液等张的氯化钠、氯化钾和乳酸在蒸馏水中的溶液。在损伤、手术或烧伤失血后常使用乳酸林格氏液来补充失血。 编辑本段基本信息　　名称：乳酸 乳酸英文名：Lactic acid；2-Hydroxy propionic acid 　　别名：2-羟基丙酸；α-羟基丙酸；丙醇酸 　　分子式：　C3H6O3 　　结构简式：