有没有污水方面会做沙门氏菌和志贺菌的大神联系我一下,公司突然安排做沙门和志贺,但是我没有师傅,全靠一个人摸索,我很多不明白的地方,又找不到人求教,所以想请大家帮帮忙
饲料检测中的志贺氏菌和沙门氏菌。。。金黄。。如果按国标的来大家都会做到哪一个步骤啊?其实也是按的食品GB/T4789来了有没人做血清啊等生化的后续实验啊? 还有检测这些致病菌,公司是否需要什么认证啊?怎样判定公司实验室有检测这些菌的能力?
沙门氏菌检测中,ttb和sc划线到bs琼脂都是这种黑色,这个需要进行生化鉴定吗[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708251750_01_1503784_3.png[/img]
致病菌(沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌)的单位,有的标准有/25g;而有的标准又没有单位,这两者之间有区别吗?为什么有的要,有的不要呢,这次我们给企业写了一个水果制品(蜜饯制品)的标准,卫生部回复说这个致病菌有单位“/25g"不对,就是说要没有单位了。。。。。
请问在沙门氏菌的检测中如果BS琼脂平板上只培养了30小时会不会有影响?比如说沙门没长起来这种情况?
1.求助一份近年的沙门氏菌方法验证报告2.公司有一个无菌室里面有两个超净台主要做细菌总数和大肠,,再买一个生物安全柜可以也放在无菌室里吗,主要做沙门3购入生物安全柜需要做什么额外的标识或者管理吗
干燥灭菌箱都是灭什么的,能不能用高压蒸汽灭菌器代替,主要做医疗废水沙门氏菌和志贺氏菌
我公司计划项扩项至食品、水质检测,需要上微生物检测项目,建立一个微生物实验室的投资大约是多少,主要就是食品检测中的菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌等项目,想知道能够满足基本检测要求的话,建立一个实验室需要投资多少,洁净度什么的有要求吗
沙门氏菌检验培养基和试剂 缓冲蛋白胨水(BPW ) 四硫磺酸钠煌绿(TTB )增菌液 亚硒酸盐胱氨酸(SC )增菌液 亚硫酸秘(Bs)琼脂 HE(Hoktoen Entoric)琼脂。 木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂 沙门氏菌属显色培养基 三糖铁(TsI)琼脂 蛋白陈水、靛基质试剂 尿素琼脂(pH7.2 )。 氰化钾(KCN )培养基 赖氨酸脱羧酶试验培养基 糖发酵管 邻硝基酚份B-D半乳糖苷(ONPG)培养基 半固体琼脂 丙二酸钠培养基 沙门氏菌O和H 诊断血清。 API 20E 生化鉴定试剂盒或VITEK GN 生化鉴定卡
已做出大肠杆菌O157、金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、福氏志贺菌、副溶血弧菌、单核细胞增生性李斯特菌共6种菌单抗的细胞株,效价高,无交叉反应
对387份食品致病菌检验的结果分析【生活中的仪器分析】食品安全——“菜”米油盐酱醋茶大检测 食品中致病菌是指可以引起食物中毒或以食品为传播媒介的致病性细菌。致病性细菌直接或间接污染食品及水源,人经口感染可导致肠道传染病的发生及食物中毒以及畜禽传染病的流行。食源性致病菌是导致食品安全问题的中药来源。现将387份食品中致病菌的检验结果报告如下。1.采样类别及数量(见表1)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312172056_482714_1751239_3.jpg2.设备和试剂2.1设备全自动微生物分析系统(VITEKⅡ)、拍击式均质器、10ml吸管、100ul-1000ul加样枪、A2级生物安全柜、电子秤2.2试剂2.2.1标准菌株购买于上海宝录生物科技有限公司.2.2.2缓冲蛋白胨水(BPW)、志贺氏菌增菌肉汤、7.5%NaCl肉汤、李氏增菌肉汤LB增菌液、鉴定平板、鉴定琼脂及生化鉴定VITEK卡购买于青岛高科园海博生物技术有限公司、郑州博赛生物技术股份有限公司、北京路桥技术有限责任公司、北京威泰克生物技术有限公司。2.2.3沙门氏菌(59种血清型)诊断血清购买于宁波天润生物药业有限公司(多家血清)生产。3.实验程序3.1沙门氏菌检验程序25g(ml)样品加入225ml BPW,拍击式均质器拍打2分钟,36℃培养14小时,轻轻摇动培养过的样品混合物,取1ml加入10ml四硫磺酸钠煌绿增菌液,42℃培养24小时。另取1ml加入10ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液36℃培养24小时。分别用接种环取增菌液1环,划线接种于沙门氏菌属显色培养基平板,于36℃培养24小时。挑取沙门氏菌属显色平板的紫色菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺;接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,于36℃培养24小时。从营养琼脂平板上挑取菌落,用生理盐水配制成浊度为0.5-0.6的菌悬液,使用VITEKⅡ进行鉴定。然后用A-F多价O血清、8种多价H血清做玻片凝集实验,同时用生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙型菌株,不能分型。综合以上生化试验和血清学鉴定的结果,报告25g(ml)样品中检出或未检出沙门氏菌。3.2志贺氏菌检验程序25g(ml)样品加入225ml 志贺氏菌增菌肉汤,拍击式均质器拍打2分钟,于42℃厌氧培养20小时,取增菌后的志贺氏增菌液划线接种志贺氏菌显色培养基平板,于36℃培养48小时,,取志贺氏菌显色培养基平板上的紫色菌落,接种三糖铁琼脂,半固体和营养琼脂斜面各一管,置36℃培养24小时。凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸、不产气(福氏志贺氏菌
环境检测医疗机构污水中沙门氏菌,志贺氏菌,毒霍乱弧菌,埃氏大肠杆菌,肠道球菌需要几级微生物实验室?一级微生物实验室里面加上生物安全柜是不是不符合要求
干燥灭菌箱都是灭什么的,能不能用高压蒸汽灭菌器代替,主要做医疗废水沙门氏菌和志贺氏菌
作沙门氏菌检验时,欲进行血清玻片凝集试验,应接种()斜面作为集凝试验用的抗原。 A、2%琼脂 B、1.5%琼脂 C、1.2%琼脂 D、1%琼脂
[align=center][b]食品微生物志贺氏菌方法验证[/b][/align][align=left]近期在做食品中志贺氏菌的方法验证,与大家分享一下试验过程及结果。[/align][b]1[/b]、[b]目的:[/b]本实验是通过从人员能力、仪器设备、标准菌株及试剂、方法、环境五个方面对食品微生物志贺氏菌检验进行验证。[b]2、人员能力验证情况[/b]目前实验室人员经培训、考核,具备测定食品微生物学检验志贺氏菌测定的能力,人员能力验证合格。[b]3、仪器设备验证情况[/b]3.1方法对测试设备的要求恒温培养箱 :36℃±1℃、41.5℃±1℃3.2目前配备的设备情况:生化培养箱 上海龙跃LBI-150:36℃±1℃,生化培养箱 上海龙跃LBI-150:41.5℃±1℃;设备经过校准并确认合格。[b]4、标准菌株及试剂验证情况[/b]4.1方法对标准菌株、试剂的要求标准菌株:福氏志贺氏菌 ATCC12022培养基:志贺氏菌增菌肉汤、XLD培养基、麦康凯琼脂(MAC)、志贺氏菌显色培养基、三糖铁(TSI)琼脂、志贺氏菌干制生化鉴定试剂盒、志贺氏菌属四种多价诊断血清、福氏志贺氏菌TR-204、鲍氏诊断血清TR-205试剂:0.85%灭菌生理盐水4.2配备情况福氏志贺氏菌 ATCC12022:美国菌种保藏中心,有效期至2020.8.31志贺氏菌增菌肉汤:青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,批号20180919麦康凯琼脂(MAC):青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,批号20181227XLD培养基:青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,批号20190305三糖铁(TSI)琼脂:青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,批号20180828志贺氏菌显色培养基:北京陆桥生物技术有限公司,批号180518志贺氏菌干制生化鉴定试剂盒:北京陆桥生物技术有限公司,批号190122志贺氏菌属四种多价诊断血清:宁波天润生物药业有限公司,批号190101福氏志贺氏菌TR-204:宁波天润生物药业有限公司,批号20190101鲍氏诊断血清TR-205:宁波天润生物药业有限公司,批号20180101无菌生理盐水(氯化钠):AR 国药集团化学试剂有限公司,批号201811204.3验收情况:已验收合格[b]5、检测方法[/b]食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌GB 4789.5-2012,适用于食品中志贺氏菌的检验;方法现行有效,已受控。[b]6、环境条件验证情况[/b]6.1方法对测试环境的要求在环境温度为18℃~26℃,环境湿度为30%~70%,试验区域为百级洁净度进行。6.2目前对环境的设施和监控情况环境控制设备:空调 环境监控设备:温湿度表,已检定合格,在有效期内6.3环境验证情况定期进行沉降菌监测,验证洁净度,合格。[b]7、方法验证情况[/b]7.1验证方式:向样品中加入标准菌株。7.1.1合格标准:供试品+目标菌组生长良好。7.1.2样品:香肠[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271322285776_2548_3949637_3.jpg!w690x920.jpg[/img]7.2验证内容7.2.1菌液制备:取福氏志贺氏菌 ATCC12022的工作菌斜面,用5mL生理盐水洗脱;将上述洗脱液用0.85%生理盐水稀释至菌浓度约为10~100CFU/mL的菌悬液备用。7.2.2培养基制备:按 GB 4789.5-2012 要求配制。7.2.3样品前处理:按 GB 4789.5-2016、GB /T4789.17-20037.2.4供试品+目标菌组7.2.4.1增菌:以无菌操作称取25g样品,放入盛有225mL的生理盐水无菌均质袋内;向此均质袋中加入每毫升含菌量约为10~100CFU/mL的福氏志贺氏菌 ATCC12022菌悬液1mL,混匀后作为试验组。于41.5℃±1 ℃,厌氧培养16h~20h。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271323545716_9092_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.2分离:取增菌后的志贺氏菌增菌液分别划线于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上,于36℃±1℃培养20h~24h,观察各个平板上生长的菌落形态。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见下表。[table][tr][td][align=center]选择性琼脂平板[/align][/td][td][align=center]志贺氏菌的菌落特征[/align][/td][/tr][tr][td]MAC琼脂[/td][td]无色至浅粉红色,半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐[/td][/tr][tr][td]XLD琼脂[/td][td]粉红色至无色,半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐[/td][/tr][tr][td]志贺氏菌显色培养基[/td][td]表面白色,周围紫红色菌落(在陆桥志贺氏菌显色培养基)[/td][/tr][/table][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271324513903_7521_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271324505666_7879_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271324525123_1111_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.4生化试验:将6.2.4.2中选择性平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落,分别接种三糖铁和营养琼脂斜面、半固体各一管,置36℃±1℃培养20h~24h,分别观察结果。凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸、不产气、不产硫化氢的菌株,进行生化试验和血清学试验。将可疑菌落制成0.5麦氏浊度的菌悬液分别接种生化试剂盒内,每孔接种0.2mL,置于36℃±1℃培养18h~24h。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271325394036_2347_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271325396586_4193_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271325414073_5644_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.5血清鉴定:多价O菌体抗原,挑取菌胎于载玻片上两个区域,其中一个区域加生理盐水,一个区域滴多价O血清,将菌胎研磨成乳状。将玻片摇动混合1min,如果抗血清中出现凝结成块的颗粒,而且生理盐水中没有发生自凝现象,凝集反应为阳性。判定检出志贺氏菌/25g样品中。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271326275466_3029_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.4同时做样品空白,样品均无菌生长。[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271329172668_5569_3949637_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271329162206_1964_3949637_3.jpg!w690x920.jpg[/img]7.2.5以上试验验证结果如下:[table][tr][td][align=center][b]样品信息[/b][/align][/td][td][align=center][b]检测结果/25g[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]香肠+福氏志贺氏菌[/align][/td][td][align=center]检出[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]香肠[/align][/td][td][align=center]未检出[/align][/td][/tr][/table]7.3验证结果:供试品+目标菌组生长良好。8、试验结论:本实验室在人员能力、仪器设备、标准物质、试剂、检验方法、环境条件等方面均具备了测定食品微生物志贺氏菌的能力;方法验证方面,综上所述本实验室通过样品加标与样品空白检验均达到食品微生物学检验 志贺氏菌GB 4789.5-2012 的要求,综合考虑,本实验室可以开展此项目。
最近公司在做霉菌和酵母菌的计数分离,用的是添加了氯霉素的虎红琼脂,请问标准酵母菌在该琼脂平板上是什么形态,最好能有图片。 沙门氏菌经过BS和DHL选择性分离后,用法国科玛嘉显色培养基培养,同时使用环凯的生化鉴定盒鉴定(10只一套那种),有时候显色培养基不显紫色可是生化鉴定却是阳性,请问如何判断,请教各位有没有标准沙门氏菌属在该生化鉴定套装中反应的图片,十分感谢!!
沙门氏菌属(solmonell) 沙门氏菌属是一群寄生于人和动物肠道内的元芽孢直杆菌,革兰氏阴性,生化特性和抗原结构相似,兼性厌氧。除极少数外,通常都以周生鞭毛运动。绝大多数发酵葡萄糖产酸产气,也偶尔有不产气的。在三糖铁琼脂上常产生H2S。一般利用拘椽酸盐。能使赖氨酸和鸟氨酸脱羧基,但对苯丙氨酸和色氨酸均不脱氨基。除亚利桑那沙门氏菌外,大部分沙门氏菌都不发酵乳糖。运常不利用杨苷、肌醇、蔗糖、侧金盏花醇和棉子糖,也不产生a甲基葡萄糖苷。不产吲哚,不免解尿素,甲基红试验阳性,但VP试验阴性。DNA中G十Cmol%为50~53。 绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性,能引起人和动物的多种不同临床表现的沙门氏菌病,并为人类食物中毒的主要病原之一,在医学、兽医和公共卫生上均十分重要。 根据新近的沙门氏菌的分类方案,本属菌现可分为:肠道沙门氏菌和邦戈尔沙门氏菌两个种,肠道沙门氏菌又分为6个亚种:肠道亚种、萨拉姆亚种、亚利桑那亚种、双相亚利桑那沙门氏菌、豪顿沙门氏菌以及因迪卡沙门氏菌。这些种和亚种均属于对应的DNA同源群。长期以来沙门氏菌根据其血清型分类,目前已有2500种以上,其中只有10个以内的罕见血清型属于邦戈尔沙门氏菌,其余均属于肠道沙门氏菌,几乎包括了所有对人和温血动物致病的各种血清型菌株,并具有属的典型生化特性。 虽然对沙门氏菌已规定新的命名法,但通常仍惯用简单的通用命名,即以该菌所致疾病、或最初分离地名、或抗原式三种方式来命名。目前,对沙门氏菌或各亚种成员的鉴定主要根据生化试验,而血清型分型可作为一项亚种水平以上的鉴定内容。 形态及染色特性 沙门氏菌的形态和染色特性与同科的大多数其他菌属相似,呈直杆状,0.7~1.5umx2.0~5.0um,革兰氏阴性。除雏沙门氏菌和鸡沙门氏菌无鞭毛不运动外,其余名菌均以周生鞭毛运动,且绝大多数具有Ⅰ型菌毛。 培养及生化特性 本属大多数细菌的培养特性与埃希氏菌属相似。只有鸡白痢、鸡伤寒羊流产和甲型副伤寒等沙门氏菌在肉汤琼脂上生长贫瘩,形成较小的菌落。在肠道杆菌鉴别或选择性培养基上,大多数菌株因不发酵乳糖而形成无色菌落。本菌属在培养基上也有S-R变异。file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/ksohtml/wps_clip_image-16167.pngfile:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/ksohtml/wps_clip_image-13473.png 培养基中加入硫代硫酸钠、胱氨酸、血清、葡萄糖、脑心浸液和甘油等均有助于本菌生长。本菌属与其他主要菌属的生化鉴别见表16-1。与肠道亚种相比,其余各亚种的生化反应虽然不太典型,但同一亚种各菌间的生化特性相当一致。有时极个别分离菌株在某一特性上可能有所不同,如发酵蔗糖或产生吲哚等,只要它们仍具有本菌属典型的O和H抗原,就不应将其排除在本菌属外。[fo
2014年食源性致病菌志贺氏菌风险监测分析志贺氏菌属是一类革兰氏阴性杆菌。该属的细菌(统称痢疾杆菌),是细菌性痢疾的病原菌。志贺氏菌属包括4个种群。人类对痢疾杆菌有很高的易感性,在幼儿可引起急性中毒性菌痢,死亡率甚高。它不但可以通过食物和水传播,而且可以经过人与人的接触传播。所以在食品中检测志贺氏菌也是有一定的社会意义的。笔者就此情况将2014年食品中志贺氏菌的检测情况汇总如下。1 材料与方法1.1试剂和仪器 使用的培养基有志贺氏菌增菌肉汤、麦康凯(MAC)琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐(XLD)琼脂、三糖铁(TSI)琼脂购买于北京路桥公司,志贺氏菌显色培养基购买于郑州博赛公司,志贺氏菌诊断血清购买于宁波天润生物药业有限公司。主要仪器包括均质器,电子天平:感量0.1g,厌氧培养装置:41.5 ℃±1 ℃,VITEK-2Compact 全自动微生物鉴定系统。1.2依据和方法 根据国家食品安全风险评估中心制定的“食源性致病菌监测工作手册”要求进行增菌、分离、鉴定、菌种保存及送上级实验室复核。试验程序见图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412051004_525975_2433088_3.jpg
微生物实验室做致病菌(霍乱弧菌,沙门氏菌,志贺氏菌等),还有普通细菌,大肠杆菌等,实验室装修,老板想买净化板自己装,通风系统想买美的家庭装修新风系统,行吗?能达到要求吗?[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211250238157347_9849_5632371_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211250238157347_9849_5632371_3.png[/img]
在三糖琼脂斜面上的培养物,下述哪种情况()可疑为志贺氏菌。 A、乳糖-/葡糖+H2S+ B、乳糖-/葡糖+H2S- C、乳糖-/葡糖产气 H2S - D、乳糖-/葡糖产气 H2S +
我在传代志贺氏菌的时候被沙门氏菌污染了,有没有办法纯化沙门氏菌啊
第三方环境检测微生物实验室做医疗用水志贺氏菌,沙门氏菌检测,就是普通实验室加个生物安全柜就行吗?实验室普通装修没有压力差啥的,也没有灭菌间这样危险程度啥样
糕点、月饼中沙门氏菌的检验最近检验了一批糕点和月饼中的沙门氏菌。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301625_461000_2764104_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301626_461004_2764104_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301626_461005_2764104_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301622_460996_2764104_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301624_460999_2764104_3.jpg阳性沙门氏菌在BS琼脂上的长势很好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301622_460994_2764104_3.jpg阳性沙门氏菌在XLD琼脂上的长势也不错。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301624_460998_2764104_3.jpg样品在BS和XLD琼脂上均无目标菌长出,只有一个XLD琼脂碟子长出一杂菌,假设它是疑似菌落,我们进行下一步。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301625_461003_2764104_3.jpg给阳性菌和上述疑似菌做了靛基质和TSI试验。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301625_461001_2764104_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301625_461002_2764104_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308301632_461006_2764104_3.jpg可能我传的图片太多了,系统好像限制了,还有一个TSI的图传不上了。阳性菌的验证试验靛基质试验是出现典型的红色环,TSI出现产酸,并产气。假设的疑似目标菌靛基质试验蛋白胨水无变化,TSI无变化。实验结论:这次检验的月饼及糕点共15个样品沙门氏菌均未检出。
请教各位老师,沙门氏菌检测,从选择性平板挑去2个以上菌落做三糖铁接种,是每一个菌落接种一管三糖铁,还是一管里挑取两个以上菌落?还有用接种棒穿刺后接着化营养琼脂平板,怎么化?接种棒不好化呀!
沙门氏菌比对实验【摘要】食品是人类感染沙门氏菌的主要途径。采用传统的平板分离培养方法,进行沙门氏菌能力比对实验,并对实验结果进行分析。【关键词】 食品 沙门氏菌 能力比对食品是人类感染沙门氏菌的主要途径。污染源主要是人和家畜的粪便,沙门氏菌常存在于动物中,特别是禽类和猪。沙门氏菌属于肠杆菌科,其分布广,菌型多,检验及鉴定方法较为繁杂。本次比对实验依据的方法标准是:GB 4789.4-2010,只检测到沙门氏菌属。2011年5月6日~11日参加了某组织的食品微生物检测实际操作培训班。培训结束后,申请参加了其组织提供的沙门氏菌能力比对实验。1 试验1.1 材料1.1.1 样品1份样品(编号:3,塑料离心管带管盖,用封口膜密封严实,不漏液)。食品伙伴网提供。1.1.2 设备及器皿冰箱(2~5℃);电热恒温培养箱(36℃±1℃、42 ℃±1 ℃);显微镜;电子天平(感量0.01 g);无菌锥形瓶(300mL);无菌吸管(lmL、10mL);无菌培养皿;无菌试管(3 mm×50 mm、10 mm×75 mm)、接种环(针)。1.1.3 培养基和试剂缓冲蛋白胨水(BPW);四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液;亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液;亚硫酸铋(BS)琼脂;沙门氏菌科玛嘉显色培养基;三糖铁(TSI)琼脂;生化鉴定试剂盒;沙门氏菌O 和H 诊断血清。所试验用的培养基和试剂均经本所沙门氏菌标准菌株(鼠伤寒沙门氏菌:ATCC14028,第3代)验证合格,在有效期内使用。
我们 按2010版中国药典做沙门菌检查时,阳性实验做到胆盐硫乳琼脂和麦康凯琼脂上划线,怎么做都没法检出有菌落生长。 后来为了查出原因,我们分别作了几个操作: 1.按药典步骤一步一步进行,先是肉汤,接种了沙门后培养24h后在胆盐硫乳上划线,同时也取肉汤培养物1ml接种至四硫磺酸钠亮绿培养基中,培养24h后在胆盐硫乳和麦康凯琼脂上划线。此实验的结果是,肉汤至胆盐硫乳上划线长出了菌落中心带黑色有的全部黑色的菌落,而由四硫磺酸钠亮绿培养基划线,什么菌落都没长。估计是四硫磺酸钠亮绿培养基出了问题,但是我们不知道问题所在,于是又往下做。 2.按药典现在肉汤中培养后转至四硫磺酸钠亮绿培养基,我们将四硫磺酸钠亮绿培养基的成分一一分开(四硫磺酸钠亮绿培养基是由四硫磺酸钠培养基中添加碘试液和亮绿试液所得,都按药典操作的),也就是,只用四硫磺酸钠培养基、添加了碘试液而未添加亮绿试液的四硫磺酸钠培养基、添加了亮绿而未添加碘试液的四硫磺酸钠培养基以及四硫磺酸钠亮绿培养基,培养24h后在胆盐硫乳和麦康凯上划线,发现四硫磺酸钠培养基和添加了碘试液而未添加亮绿试液的四硫磺酸钠培养基都长出了具有沙门菌特征的菌落,而添加了亮绿而未添加碘试液的四硫磺酸钠培养基和四硫磺酸钠亮绿培养基中未长出任何菌落。 结果显示的是只要培养基中添加了亮绿就没法检出,不知道是不是亮绿出了问题。但是,所有步骤都是按药典中进行的,亮绿试液和碘试液的配制都是的,相当的让人想不通。 究竟药典中设四硫磺酸钠亮绿培养基的意图只是增菌作用,还是也有选择作用,那后便胆盐硫乳和麦康凯不一样能鉴别么,四硫磺酸钠亮绿培养基这一步究竟有多大作用呢,可是药典出来了,又不可能不按其操作,毕竟客户都不明白其中的因果额。 唉~~,所以啊,又得麻烦大家了,有什么见解都给分析一下哈,多多益善,谢谢大家了^^
沙氏琼脂培养基(SDA)用途:用于医药工业洁净室(区)沉降菌的测试(GB/T 16294—2010)用法:取上述成分除琼脂,混合,微热溶解,调节ph值使灭菌后为5.6 ±0.2,假如琼脂,加热融化后,分装,灭菌,冷却至约60℃,在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿(¢90mm3 )中。加盖后在室温放至凝固。平皿培养及保存:制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃保存,一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。采用适宜方法在平皿上做好培养基的名称、制备日期记录的标记。
沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一,其病原沙门氏菌属肠道细菌科,包括那些引起食物中毒,导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外,还可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈无症状带菌状态,也可表现为有临床症状的致死疾病,它可能加重病态或死亡率,或者降低动物的繁殖生产力。 蛋、家禽和肉类产品是沙门氏菌病的主要传播媒介,感染主要取决于沙门氏菌的血清型和食用者的身体状况,受威胁最大的是小孩、老年人及免疫缺陷个体。根据国际惯例,要求对易受沙门氏菌污染的食品进行分类管理,以使大多数食物不含沙门氏菌,从而有效预防沙门氏菌病。为此,人们在探索沙门氏菌检测方法的过程中,作出了不懈的努力,现将有关进展报告如下,并介绍两种快速检测沙门氏菌的试剂盒。 自19世纪后期,沙门氏菌首次被鉴定为人类的一种病原以来,检测方法学都是建立在采取感染病人的粪便或血液作为临床病料的基础上。此后的60年间,用于从食品中分离沙门氏菌的方法实质上与那些用于临床病料的方法是相同的。但至少有三个因素限制了用于临床病料的方法应用在食品分析上。第一,通常,沙门氏菌的含量水平在污染食品中比有感染病人的病料中要低很多;第二,食品本身的性质会干扰病原的检测,例如,某些食品中固有菌群可能处在一个很高的水平,从而影响特定细菌的选择性分离和鉴定;第三,与临床病料不同的是,经过加工的食品,由于加热、干燥、高含盐量、酸和冷冻等因素的作用,其中的沙门氏菌受到了尚不致命的损伤或称“致伤”。这就形成了一个具有不同生长特性的细菌群。这种现象对那些希望从食物样品中分离出沙门氏菌的食品分析家来说有很大影响,因为在选择培养基上直接培养“致伤”的沙门氏菌通常是以细菌死亡和试验失败而告终。为克服这些困难,人们建立了一种简单的微生物增殖步骤,专门针对以食品为传播载体的病原。虽然这些方法本身证明是可靠的,但却很费力、耗时,需要4~7天才能完成。因此,在需要及时、快速评价食品中微生物的安全性时,通常不被采用。随着DNA和抗体技术的发展,近10~15年间发展了无数改进的方法,其中许多可以在48h内检出沙门氏菌,这些方法通称为快速检测。 1 传统的培养方法 用于沙门氏菌分析的传统方法是食物样品分步增菌,以增加病原的可检出率,这种培养方法总体可分4个不同阶段或步骤。第一步(预增菌),将样品加到一种高营养、无选择性的培养基中,温度37℃,使那些“致伤”的细菌复苏及使所有微生物生长。虽然缓冲胨水被建议常规使用(由于其可保持溶液pH值稳定),但对培养基的选择仍存有争论。第二,是选择性增菌步骤,它使沙门氏菌生长而使肉汤中同时存在的微生物数量减少,与预增菌培养基相似,对选择性培养基的选择,也存在许多不同的观点。目前应用的主要有如下3种类型:连四硫基盐肉汤 (Tetrathionate broth)、硒酸盐胱氨酸肉汤(Selenite cystine broth)和RV(Rappaport- Vassiliadis)培养基。由于没有任何一种培养基可以全面地保持所有食品基质或各种沙门氏菌血清型,所以,较适当的做法就是使用两种培养基平行地进行试验。第三步是分离步骤,即选择性培养物在含一种或多种抑制非沙门氏菌生长制剂的琼脂平板上划线培养,然后对平板上肉眼可见的特征性菌落进行确认,并对该菌落分离物进行一系列生化和血清学检测,以作出鉴定。传统沙门氏菌检测法全过程需时至少4~7天,才能得出明确的诊断结果。
菌落培养平板计数琼脂灭菌后,为什么是深红色,跟以前不一样颜色?琼脂也没有过期,灭菌是121℃,20分钟。问题出在哪里,这样的琼脂还能用吗?
三糖铁琼脂培养基( l )成分 蛋白胨 20g 硫酸亚铁 0.2g 牛肉浸出粉 5g 硫代硫酸钠 0.2g 乳糖 10g 002%酚磺酞指示液 12.5ml 蔗糖 10g 琼脂 12~15g 葡萄糖 1g 水 1000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外,取上述成分,混合,加热使溶解,调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ,加入琼脂,加热溶胀后,再加入其余成分,摇匀,分装,121 ℃ 灭菌15 分钟,制成高底层(2 ~3cm ) 短斜面。( 3 )用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。 方法和结果观察:取可疑菌落或斜面培养物,做高层穿刺和斜面划线接种,置35 ℃ 培养24~ 48 小时,观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性,斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性;底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。