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反式氨基脯氨酸标准品

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反式氨基脯氨酸标准品相关的论坛

  • 分离氨基酸-脯氨酸和异亮氨酸重叠的峰

    我用GC MS 测20种氨基酸，MSTFA衍生，不加溶剂，HP 5-MS柱，70度，1min到5度/min，300度，得到的脯氨酸和异亮氨酸是一个峰，降低浓度也分不开，做SIM也分不开，请问谁遇到过这种情况？如何解决？

  • 【求助】关于国标测羟脯氨酸的问题

    请问大家：按照国标对羟脯氨酸进行测定，但是好像感觉氯胺T与羟脯氨酸标准品不反应，加入高氯酸后总是产生白色沉淀，而且水浴过后也没有生成红色化合物，请问这是怎么回事，忘大哥指点一下

  • L-羟脯氨酸

    L-羟脯氨酸的α-氨基是在环中的仲氨基，是否不能与甲醛反应从而使得氨基酸的碱性消失

  • 非水滴定L-羟脯氨酸的影响因素

    最近在用高氯酸非水滴定，测定L-羟脯氨酸含量，但L-羟脯氨酸同时带有羟基和氨基，会不会对结果有影响？因为不太理解高氯酸非水滴定氨基酸的化学过程，所以比较疑惑。请大家赐教。如果不会影响，那是什么原因？

  • 【求助】询问羟脯氨酸的检测方法

    最近公司要检测羟脯氨酸，在文献上看到有用异硫氰酸苯酯作为衍生剂的，上网看了下贵公司有氨基酸的方法包，但是没有看到羟脯氨酸的检测，不知道这个能不能检测，能不能将它与别的氨基酸的峰分开，因为要检测的峰还是有点多。

  • 【求助】羟脯氨酸含量测定

    请问各位在国家标准GB/T9695.23-2008/ISO3496：1994测定肉与肉制品中羟脯氨酸的含量测定中在水解步骤中有一步是用圆形滤纸趁热将水解产物过滤，我在做这步时不知为何滤纸漏了，不知道用什么办法可以解决或是我操作中出现了什么错误，请各位高手给予指点。

  • 关于“乳制品中L-羟脯氨酸的测定”

    最近做乳制品中的L-羟脯氨酸的测定。所用的方法是下列附件的方法，该方法与国标9695.23—2008有一点不一样的地方，想向各位高手请教一下。1.该方法用酸性氯化亚锡进行水解，将氯化亚锡溶于浓盐酸中。国标是用浓硫酸进行水解，这两者有什么不同？2.国标明确规定样品中加30ml的浓硫酸，在105℃的干燥箱内恒温16h；附件中的标准没明确规定温度，就说样品中加100ml酸性氯化亚锡溶液，然后放入几粒沸石，恒温水浴回流16h。那么问题出来了，究竟应该水浴多少度？如果也是100℃左右的话，那16h过夜很不现实；如果需要100℃左右，能不能不水浴回流，而是放入恒温箱内，这样可以吗？3.我做了三次该实验，效果都不理想，主要表现在：1.标准曲线走的非常不好，出现过一次空白管比前2个标准系列的吸光度值还要高。2.没有生成红色的化合物，加完显色剂之后，颜色是浅褐色，不知道这样对不对总之，该实验做的非常不理想，现在非常着急，而且我表述的可能会不太明确，想找做过该实验的高手们指导一下，如果谁看见这条信息，并且正好可以给哦指导一下，请加我QQ：414827197.验证的时候就写“羟脯氨酸”。本人非常非常着急，希望尽快得到大家的帮助！

  • 【求助】羟脯氨酸含量测定

    请问各位在国家标准GB/T9695.23-2008/ISO3496：1994测定肉与肉制品中羟脯氨酸的含量测定中在水解步骤中有一步是用圆形滤纸趁热将水解产物过滤，我在做这步时不知为何滤纸漏了，不知道用什么办法可以解决或是我操作中出现了什么错误，请各位高手给予指点。

  • 【资料】9695.23-2008肉与肉制品 羟脯氨酸含量测定

    资料在以下连接中可查到,不过我由于下的太多了点数不够了,不能下.大家可以申请注册,注册后就给50点,可以下10个标准.一点都有不麻烦.[url=http://www.17bzw.cn/FyLinkin.asp?TypeB=1&ChannelID=1002&UrlID=65451&ID=33329]GBT?9695.23-2008?肉与肉制品??羟脯氨酸含量测定?（单行本完整清晰扫描版）.pdf[/url]

  • 【求助】DL-脯氨酸的价格

    昨天老大叫我找一点DL-脯氨酸回来做个小试验。我找了一家问价格1G分析纯的DL-脯氨酸竟然要160块钱http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09501.gif不知道哪位朋友有用过这种试剂为什么那么贵啊

  • 脯氨酸的化学位移

    脯氨酸的化学位移proline有cis和trans两种形式，请问大概化学位移有什么不同啊。比如α氢等等。

  • L-羟脯氨酸的含量

    L-羟脯氨酸的含量，6N的盐酸（5%苯酚）6毫升110度水解24小时，挥干，怎么挥干，多长时间

  • 【求助】乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定

    请问哪位前辈有下表中的乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。这个文本啊！附件1食品中可能违法添加的乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。非食用物质名单（第二批） 序号名称主要成分可能添加的主要食品类别可能的主要作用检测方法1皮革水解物皮革水解蛋白乳与乳制品含乳饮料增加蛋白质含量乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。联系方式： Wkzhong@21cn.com）2溴酸钾溴酸钾小麦粉增筋GB/T 20188-2006 小麦粉中溴酸盐的测定 离子色谱法3β－内酰胺酶（金玉兰酶制剂）β－内酰胺酶乳与乳制品掩蔽抗生素液相色谱法（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。联系方式： Wkzhong@21cn.com）4富马酸二甲酯富马酸二甲酯糕点防腐防虫气相色谱法（检测方法由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所提供）

  • 【原创大赛】一种微波消解采用液质联用仪检测L-羟脯氨酸含量的测定方法

    【原创大赛】一种微波消解采用液质联用仪检测L-羟脯氨酸含量的测定方法

    [align=left][b]1试剂[/b][/align][align=left][color=#333333] [/color][color=#333333]除特殊说明，所用试剂均为分析纯。[/color][color=#333333]1.1 [/color][color=#333333]乙酸铵(色谱纯），盐酸，苯酚，甲酸(色谱纯），乙腈(色谱纯），乙酸(色谱纯)[/color][color=#333333]1.2 [/color][color=#333333]对照品：L-羟脯氨酸（供含量测定用）[/color][b][/b][/align][align=left][b]2分析方法[/b][/align][color=#333333]2.1 [/color][color=#333333]色谱柱：以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂（柱长10cm，内径4.6mm，粒径2.7μm ）或同等性能的色谱柱[/color][color=#333333]2.2 [/color][color=#333333]柱温：40℃[/color][color=#333333]2.3 [/color][color=#333333]流速：0.4mL/min[/color][color=#333333]2.4 [/color][color=#333333]流动相：精密称取0.386g乙酸铵，加水500ml溶解，加入500ml乙腈，混合，用乙酸调pH=3.5，过滤，即得。[/color][color=#333333]2.5 [/color][color=#333333]质谱条件：ESI+ 模式，L-羟脯氨酸参数如下：[/color][color=#333333]ESI+ [/color][color=#333333]模式[/color][table][tr][td][color=#333333]Q1[/color][/td][td][color=#333333]Q3[/color][/td][td][color=#333333]Time(msec)[/color][/td][td][color=#333333]DP[/color][/td][td][color=#333333]EP[/color][/td][td][color=#333333]CE[/color][/td][td][color=#333333]CXP[/color][/td][/tr][tr][td][color=#333333]132.071[/color][/td][td][color=#333333]86.1[/color][/td][td][color=#333333]150[/color][/td][td][color=#333333]36[/color][/td][td][color=#333333]6[/color][/td][td][color=#333333]23[/color][/td][td][color=#333333]4[/color][/td][/tr][tr][td][color=#333333]132.071[/color][/td][td][color=#333333]68.0[/color][/td][td][color=#333333]150[/color][/td][td][color=#333333]36[/color][/td][td][color=#333333]6[/color][/td][td][color=#333333]29[/color][/td][td][color=#333333]14[/color][/td][/tr][/table][color=#333333]132.071[/color][color=#333333]为母离子碎片，86.1为定量离子碎片，68.0为定性离子碎片。[/color][table][tr][td][color=#333333]CUR[/color][/td][td][color=#333333]CAD[/color][/td][td][color=#333333]IS[/color][/td][td][color=#333333]TEM[/color][/td][td][color=#333333]GS1[/color][/td][td][color=#333333]GS2[/color][/td][/tr][tr][td][color=#333333]20[/color][/td][td][color=#333333]6[/color][/td][td][color=#333333]5500[/color][/td][td][color=#333333]600[/color][/td][td][color=#333333]50[/color][/td][td][color=#333333]50[/color][/td][/tr][/table][color=#333333]时间： 6.0min[/color][color=#333333]2.6 [/color][color=#333333]溶液制备[/color][color=#333333]2.6.1[/color][color=#333333]对照品溶液的制备：[/color][color=#333333]精密称取L-羟脯氨酸对照品50mg，置于25ml容量瓶中，加入适量0.1%甲酸溶液溶解，定容，摇匀，作储备液，备用。精密量取L-羟脯氨酸储备液,用0.1%甲酸溶液配成浓度约10μg/mL的对照品溶液。[/color][color=#333333]2.6.2 [/color][color=#333333]标准工作曲线绘制：[/color][color=#333333]分别精密吸取对照品溶液2μL、4μL、6μL、8μL、10μL及供试品溶液2μL，注入高效液相色谱仪，建立标准曲线方程。供试品色谱中应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰定量。[/color][color=#333333]2.6.3 [/color][color=#333333]供试品溶液的制备：[/color][color=#333333]取试样适量，精密称取样品0.1g，置于50mL消解管内，加入浓盐酸10mL，加入2滴苯酚，[/color][color=#333333]于80℃石墨消解炉内消解10min，取出冷却，转移至微波消解仪上消解60min，取出冷却，将水解液全部转移至50mL容量瓶中，用一级水定容至刻度，摇匀，过滤，精密吸取1mL于10mL容量瓶中，置于真空干燥箱内，于50℃减压干燥（真空干燥箱内放入五氧化二磷作为干燥剂），干燥后残留物用0.1%甲酸溶液定容至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。[/color][color=#333333]微波消解程序：[/color][table][tr][td][align=center][color=#333333]步骤[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]爬升时间/min[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]保持时间/min[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]温度/℃[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]功率[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]1[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]10[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]50[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]150[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]1800[/color][/align][/td][/tr][/table][color=#333333]2.7 [/color][color=#333333]结果计算[/color][color=#333333]X=V[/color][color=#333333]×C×K/M[/color][color=#333333]式中： X—试样中L-羟脯氨酸的含量，g/100g；[/color][color=#333333]C[/color][color=#333333]—试样溶液中L-羟脯氨酸的浓度，μg/mL；[/color][color=#333333]M[/color][color=#333333]—试样的质量，g； [/color][color=#333333]V[/color][color=#333333]—试样稀释的体积，mL。[/color][color=#333333]K-[/color][color=#333333]单位转换系数，0.0001。[/color][b]3 方法学验证（产品：胶原蛋白大豆肽粉）3.1 方法空白实验[/b][color=#333333]3.1.1 [/color][color=#333333]试验方法：[/color][color=#333333]不称取样品，按2.6.3试样制备方法处理空白溶液，按5.1色谱条件测定空白溶液，与L-羟脯氨酸对照品溶液的出峰时间对比。[/color][color=#333333]3.1.2[/color][color=#333333]试验结果：[/color][img=,604,386]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141110_01_2419377_3.png[/img][img=,576,398]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141110_02_2419377_3.png[/img][img]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][color=#333333][color=#333333]试验结论：空白溶液在L-羟脯氨酸的出峰时间处均无吸收峰，表明空白对测定结果基本无干扰。[/color][b]3.2 线性范围确认[/b][color=#333333]3.2.1[/color][color=#333333]试验数据：（色谱图见附图）[/color][/color][table][tr][td][align=center][color=#333333]组分[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]标准序号[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]浓度/（μg/mL）[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]峰面积/A[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,7][align=center][color=#333333]L-[/color][color=#333333]羟脯氨酸[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]1[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]10.32372[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4.79e+006[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]2[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]20.64744[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]8.04e+006[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]3[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]30.97116[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]1.13e+007[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]4[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]41.29488[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]1.42e+007[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]5[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]51.61860[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]1.71e+007[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]线性方程[/color][/align][/td][td=2,1][align=center][color=#333333]y =3E+06x + 2E+06[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]相关系数[/color][/align][/td][td=2,1][align=center][color=#333333]0.9995[/color][/align][/td][/tr][/table][color=#333333]3.2.2[/color][color=#333333]标准工作曲线图：[/color][color=#333333]以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线如下图所示：[/color][img=,378,202]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141114_01_2419377_3.png[/img][img]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][color=#333333]线性试验结论：[/color][color=#333333]L-羟脯氨酸的相关系R为0.9995，所以用该方法测定L-羟脯氨酸在浓度10.32372μg/mL至51.61860μg/mL之间，呈现良好的线性。[/color][b]3.3 检出限和定量限[/b][color=#333333]当信噪比（S/N）为3时，L-羟脯氨酸检出限为0.000412949μg/mL，得到方法的L-羟脯氨酸检出限为[/color]2.06474[color=#333333]μ[/color]g/g[color=#333333]。[/color][color=#333333]当信噪比（S/N）为10时，L-羟脯氨酸定量限为0.001238846μg/mL，得到方法的L-羟脯氨酸定量限为[/color]6.1942[color=#333333]μ[/color]g/g[color=#333333]。[/color][b]3.4 精密度试验[/b][color=#333333]3.4.1 [/color][color=#333333]试验方法：[/color][color=#333333]将L-羟脯氨酸的对照品溶液按5.1色谱条件重复测定6次，计算其峰面积RSD(%)。[/color][color=#333333]3.4.2[/color][color=#333333]试验数据：[/color][table][tr][td][align=center][color=#333333]序号组分[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]1[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]2[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]3[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]5[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]6[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]RSD/%[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]L-[/color][color=#333333]羟脯氨酸[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4740000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4640000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4710000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4790000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4740000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4690000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]1.1[/color][/align][/td][/tr][/table][color=#333333]试验结论：[/color][color=#333333]L-[/color][color=#333333]羟脯氨酸重复测定6次峰面积的RSD（%）为1.1%，表明该方法有较好的精密度。[/color][b]3.5 稳定性试验[/b][color=#333333]3.5.1 [/color][color=#333333]试验方法：[/color][color=#333333]将L-羟脯氨酸对照品溶液分别在室温下放置0h、2h、4h、6h、8h、10h后，按5.1色谱条件测定峰面积，计算其RSD(%)。[/color][color=#333333]3.5.2 [/color][color=#333333]试验数据： [/color][table][tr][td][align=center][color=#333333]时间/h组分[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]0[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]2[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]6[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]8[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]10[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]RSD/%[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]L-[/color][color=#333333]羟脯氨酸[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4770000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4810000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4810000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4860000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4840000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]4840000[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]0.8[/color][/align][/td][/tr][/table][color=#333333]试验结论：[/color][color=#333333]L-[/color][color=#333333]羟脯氨酸对照品溶液分别在室温下放置0h、2h、4h、6h、8h、10h后，RSD（%）为0.8%，表明L-羟脯氨酸对照品溶液在室温下10小时内的稳定性良好。[/color][b]3.6回收率试验[/b][color=#333333]3.6.1[/color][color=#333333]试验方法：[/color][color=#333333]加标：精密称取约0.1g样品9份（已知L-羟脯氨酸）含量为：6.5g/100g），置于50mL消解管中，分成3组，每组3份，各组分别精密加入L-羟脯氨酸标准液（浓度为2.0647[/color][color=#333333]mg/mL[/color][color=#333333]）2.60mL、3.30mL、4.00mL。按5.2试样制备方法处理样品。[/color][color=#333333][color=#333333]3.6.2 试验数据：[/color][/color][table][tr][td][align=center][color=#333333]组分[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]序号[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]称样量/mg[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]体积/mL[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]浓度/[/color][color=#333333]μ[/color][color=#333333]g/mL[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]测得加入量/g/100g[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]加标量/g/100g[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]回收率%[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]平均回收率%[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]RSD%[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,9][align=center][color=#333333]L-[/color][color=#333333]羟脯氨酸[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.11234[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]500[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]25.4[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]0.539790[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.536822[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]100.55[/color][/align][/td][td=1,9][align=center][color=#333333]99.0[/color][/align][/td][td=1,9][align=center][color=#333333]1.6[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.11295[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]500[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]25.6[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]0.545825[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.536822[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]101.67[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]3[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.10933[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]500[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]24.9[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]0.534355[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.536822[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]99.54[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]4[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.10493[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]500[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]26.9[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.662955[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.681351[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]97.30[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.10878[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]500[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]27.8[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.682930[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.681351[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]100.23[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]6[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.10502[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]500[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]27.1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.672370[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.681351[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]98.68[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]7[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.10384[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]500[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]29.6[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]0.805040[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.825880[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]97.47[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]8[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.10335[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]500[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]29.7[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]0.813225[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.825880[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]98.46[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#333333]9[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.10401[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]500[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]29.7[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]0.808935[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.825880[/color][/align][/td][td][align=center][color=#333333]97.94[/color][/align][/td][/tr][/table][color=#333333]测得加入量=加标样品测得量-样品测得量[/color][color=#333333]回收率(%)=测得加入量/理论加入量[/color][color=#333333]试验结论：L-羟脯氨酸平均回收率为：99.0%，相对标准偏差（RSD）为1.6%。[/color][color=black] [/color]

  • L-羟脯氨酸

    最近在用SN/T 3929-2014做L-羟脯氨酸，有老师做过吗？想请教一下。谢谢[font=宋体]奶粉、蛋白粉[/font][font=宋体]称取[/font]0.5g[font=宋体]±[/font]0.05g[font=宋体]试样于[/font]30mL[font=宋体]水解管中，依次加入[/font]40[font=宋体]μ[/font]L[font=宋体]内标溶液，[/font]10mL6mol/L[font=宋体]盐酸溶液（[/font]50mL[font=宋体]盐酸，用水定容至[/font]100mL[font=宋体]），涡旋混合[/font]2min[font=宋体]后，充入氮气密封，于[/font]105[font=宋体]℃下过夜水解。冷却至室温后，滤纸过滤，滤液定容至[/font]10mL[font=宋体]，分取[/font]2.5mL[font=宋体]，用水稀释至[/font]25mL[font=宋体]，[/font]-80[font=宋体]℃冷冻干燥[/font]2h[font=宋体]以上。冻干物依次加入[/font]1mL[font=宋体]水、[/font]50 mg[font=宋体]石墨化碳和[/font]10mL[font=宋体]乙腈溶解，涡旋[/font]1min[font=宋体]，超声[/font]5min[font=宋体]后，滤纸过滤，再用[/font]10[font=宋体]乙腈重复提取[/font]2[font=宋体]次，合并滤液。滤液于[/font]40[font=宋体]℃减压浓缩至干，用[/font]1mL[font=宋体]乙腈[/font]-[font=宋体]水（[/font]9+1[font=宋体]）溶解，待净化。[/font][font=宋体]液态奶、奶饮料、酸奶、奶油[/font][font=宋体]称取[/font]1.0g[font=宋体]±[/font]0.05g[font=宋体]试样于[/font]30mL[font=宋体]水解管中，余下操作同上。[/font][font=宋体]黄油、奶酪、巧克力[/font][font=宋体]称取[/font]1.0g[font=宋体]±[/font]0.05g[font=宋体]试样于研钵中，加入试样质量[/font]4-6[font=宋体]倍的海砂研磨成干粉状，转移至[/font]30mL[font=宋体]水解管中，余下操作同上[/font][b][font=宋体]净化[/font][/b][font=宋体]将待净化液用[/font][font='Times New Roman','serif']5mL[/font][font=宋体]乙腈饱和正己烷（[/font][font='Times New Roman','serif']100mL[/font][font=宋体]正己烷，加入[/font][font='Times New Roman','serif']50mL[/font][font=宋体]乙腈，振摇混匀后，静置分层，取上层液备用）液液分配脱脂，下层液体用[/font][font='Times New Roman','serif']0.22[/font][font=宋体]μ[/font][font='Times New Roman','serif']m[/font][font=宋体]微孔滤膜，待测定。[/font][font=宋体][/font][font=宋体]上面是标准方法的前处理。[font=宋体]分取[/font][b]2.5mL[/b][font=宋体]，用水稀释至[/font][b]25mL[/b][font=宋体]，[/font][b]-80[/b][font=宋体]℃冷冻干燥[/font][b]2h[/b][font=宋体]以上。冻干物依次加入[/font][b]1mL[/b][font=宋体][b]水，[/b] 我没找到-80的冷冻干燥设备，用了-40的设备，动了大概三天才冻干，当然可能跟我没用培养皿有关，因为我看到后面还要涡旋超声，我就用的三角瓶。 这冷冻干燥花的时间太长，想问下 [/font][/font][font=宋体][font=宋体]1、分取2.5mL后能不能不用水稀释，直接冷冻干燥，或者80度电热板蒸干。在这里加那么多水稀释后再冷冻干燥是为啥呢？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]2、还有我看别的标准或文献酸水解时都加了苯酚，本标准方法没有加苯酚，有没有影响呢[/font][/font][font=宋体][font=宋体]3、标准方法用的hilic柱，流动相加了甲酸铵和甲酸。能不能只加甲酸，不加甲酸铵？加了甲酸铵响应会高很多吗？不太乐意加铵盐[/font][/font]

  • 【原创】保健品中16种氨基酸的液质联用法测定

    氨基酸是氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物。无色晶体，熔点极高，一般在200℃以上。不同的氨基酸其味不同，有的无味，有的味甜，有的味苦。各种氨基酸在水中的溶解度差别很大，并能溶解于稀酸或稀碱中，但不能溶于有机溶剂。近年来，随着技术的发展，检测氨基酸的种类及含量的方法很多，目前测定氨基酸的方法主要有氨基酸分析仪法、高效液相色谱法、毛细管电泳法及液相色谱-质谱联用法等。本文主要是通过高效液相串联质谱法来对16种氨基酸的含量进行测定，方法简单，快速，不用柱前衍生，节省试剂和成本，为保健品中氨基酸的含量测定提供了新方法。1实验部分1.1 仪器和试剂 16种氨基酸的混合标准品，（包括丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸）安捷伦；乙腈（色谱纯）CNW；乙酸铵（色谱纯）；乙酸（色谱纯）。超声波清洗器（EQ-500）；DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司）；BPZ-6090Lc型真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；高效液相色谱仪（安捷伦1260）；色谱柱：安捷伦poroshell 120 EC-C18柱（4.6mm×50mm,2.7μm）；质谱（API3200）美国AB公司。1.2 色谱条件色谱柱：以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂（柱长15cm，内径4.6mm，粒径2.7μm ）或同等性能的色谱柱；柱温：40℃；流速：0.5 ml/min；进样量：5μL ；流动相：流动相A：称取0.386g乙酸铵，加水500mL溶解，用乙酸调pH至3.5；流动相B：乙腈，梯度洗脱：时间（分钟）流动相A(%)流动相B(%)0.0090100.00-5.0090→8010→205.00-9.0080→9020→101.3质谱条件1.3.1以电喷雾电离源（ESI）阳离子模式，气帘气20psi，碰撞气6，喷雾电压5500V,离子源温度600°C，雾化气是50 psi，辅助气是50 psi，时间9min。1.3.2 16种氨基酸的质谱参数,见表1。表1 16氨基酸的质谱参数氨基酸Q1Q3TIMEDPEPCECXP丙氨酸90.144.2353510153精氨酸175.2116353010153天冬氨酸134.474354110153胱氨酸241.174.11002610153谷氨酸148.2102353010153组氨酸156.1110353510163亮氨酸132.386.1352610113异亮氨酸132.286352610113赖氨酸147.3130353010153蛋氨酸150.1104352510103苯丙氨酸166.4120352510143脯氨酸116.270353510143苏氨酸120.174.3354110153酪氨酸182.3136353510153缬氨酸118.272354110153丝氨酸106.160.23530101331.4 标准品溶液的配制量取16种氨基酸的混合标准品1ml，置于50ml容量瓶，加0.1%甲酸水定容，摇匀即得标准品贮备液。1.5 供试品溶液的制备 精密称取样品约0.1g，置于25ml磨口的具塞比色管内，加6mol/L盐酸15ml，加入0.2g苯酚，用旋转混合仪和超声仪使样品充分分散并溶解，充氮气，盖紧塞子，置于110℃±1℃的恒温干燥箱内，水解22小时，取出冷却，过滤，用纯化水冲洗比色管，将水解液全部转移至50mL容量瓶中，用纯化水定容至刻度，摇匀，精密吸取1mL于10mL容量瓶中，置于真空干燥箱内，于40℃～50℃减压干燥（真空干燥箱内放入五氧化二磷作为干燥剂），干燥后残留物用0.1%甲酸水定容至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。1.6 线性实验将标准品贮备液稀释成0.004nmol/μl，0.008nmol/μl，0.012nmol/μl，0.016nmol/μl，0.020nmol/μl浓度梯度，每个浓度以5μL注入色谱系统。1.7 精密度实验将标准品贮备液稀释至一定的浓度，按色谱、质谱条件进行测定，连续进样6次。1.8 加样回收率实验精密称取五分的供试品，每份加入0.020nmol/μl标准品溶液5ml,定容。以5μL注入色谱系统。1.9供试品的测定 把1.5制备好的供试品溶液，以5μL注入色谱系统。以标准液的峰面积和浓度，通过外标法做曲线算出样品的浓度。2 结果与讨论2.1 色谱行为由于保健品中的氨基酸，用高效液相荧光法要进行柱前衍生，成本很高而采用液质联用法，不需要衍生，可大大节约成本，用流动相（0.35g乙酸铵加水0.5L溶解，然后加入0.5L乙腈，混合，用乙酸调pH=3.5）时，5min就能把16种氨基酸全部流出。采用液质联用法，通过MRM模式进行母离子及相应的子离子进行检测，能达到准确的分离和定量，见图1 。 从左到右，分别为丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸。图1 16种氨基酸标准品的碎片离子色谱峰2.2 质谱行为在ESI(+)阳离子检测方式下，16种氨基酸的质谱定量分析，在质谱条件下，失去NH3形成+ 峰，或失去HCOOH重排生成+ 峰，从而进行色谱分离。2.3 线性回归方程和最低检测限以标准品的5个梯度浓度与其峰面积进行线性回归，拟合线性回归方程为Y=aX + b，相关系数r2 及最低检测限（S/N(信噪比)=3时，可测得标准品的最低检测限）见表2。表2 16种氨基酸线性回归方程、相关系数、最低检测限氨基酸Y=aX + b相关系数（r2）最低检测限（nmol/μl）丙氨酸Y=3.09e+006X + 6.95e+0030.99810.0013精氨酸Y=2.31e+007X + 1180.99990.0005天冬氨酸Y=3.45e+006X + 1.07e+0040.99760.0008胱氨酸Y=8.44e+005X + 1.72e+0030.99660.0006谷氨酸Y=7.6e+006X + 1.46e+0040.99840.0006组氨酸Y=7.58e+007X + 5.98e+0030.99990.0004亮氨酸Y=6.06e+007X + 5.24e+0040.99880.0001异亮氨酸Y=8.15e+007X + 6.26e+0040.99960.0001赖氨酸Y=1.24e+007X + 2.67e+0040.99780.0003蛋氨酸Y=1.34e+007X + 5.14e+0030.99890.0001苯丙氨酸Y=7.42e+007X + 4.08e+0040.99910.0001脯氨酸Y=7.9e+007X + 5.57e+0040.99970.0003苏氨酸Y=9.67e+006X + 2.49e+0040.99770.0003酪氨酸Y=1.76e+007X + 2.89e+0040.99920.0003缬氨酸Y=2.41e+007X + 3.31e+0040.99740.0003丝氨酸Y=1.06e+007X + 2.63e+0040.99810.00132.4 方法的精密度和重复性 取浓度0.012nmol/μl的16种氨基酸混合标准品连续进样6次。计算峰面积和保留时间的RSD值。结果见表3。表3 16种氨基酸峰面积和保留时间的相对标准偏差氨基酸峰面积RSD(%)保留时间RSD(%)丙氨酸4.480.57精氨酸4.670.34天冬氨酸4.570.44胱氨酸3.780.56谷氨酸3.360.24组氨酸3.330.13亮氨酸2.750.1异亮氨酸2.930.23赖氨酸4.790.43蛋氨酸3.920.09苯丙氨酸2.170.11脯氨酸4.540.28苏氨酸4.110.37酪氨酸3.610.13缬氨酸2.350.23丝氨酸3.280.162.5加样回收率实验，见表4。表4 16种氨基酸峰的回收率实验结果氨基酸平均回收率（%）RSD(%)丙氨酸94.114.05精氨酸82.912.73天冬氨酸82.694.66胱氨酸83.153.95谷氨酸98.234.1组氨酸78.671.61亮氨酸98.284.99异亮氨酸102.713.03赖氨酸98.584.49蛋氨酸95.983.34

  • 迪马AAA氨基酸柱 这样测半胱氨酸 可以吗？？

    迪马AAA氨基酸柱 这样测半胱氨酸 可以吗？？

    先简单 介绍——————做氨基酸 检测想了解详细资料，请自己到迪马科技官网自行下载http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09510.gifPITC柱前衍生法18种天然氨基酸分析(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)——序列号: D0241 适用范围 该方法适用于氨基酸注射液、动植物性食品和饲料中 Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、 Lys(赖氨酸)等 18种天然氨基酸的检测http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203131711_354396_2019107_3.jpg2 溶液配制 氨基酸储备液： 称取一定量氨基酸标准品，用 0.1 mol/L HCl水溶液溶解，胱氨酸为0.01 mol/L，酪氨酸为0.02 mol/L，其他氨基酸为 0.05 mol/L 氨基酸使用液： 将储备液用0.1 mol/L HCl水溶液稀释，得到浓度为 0.002 mol/L 的氨基酸单标和混标 内标液： 以正亮氨酸作为内标物。称取一定量正亮氨酸，溶于 0.1 mol/L HCl水溶液，得到 0.02 mol/L 的正亮氨酸内标液 异硫氰酸苯酯溶液： 将 250 μl 异硫氰酸苯酯用乙腈乙腈定容至 10 ml，得到0.2 mol/L 异硫氰酸苯酯溶液 三乙胺溶液： 将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至 10 ml，得到1.0 mol/L 三乙胺溶液 标准溶液衍生化 量取 200 µl氨基酸混合标准溶液(每种组分浓度均为 0.002 mol/L)，置于 1.5 ml塑料离心管中，准确加入20 μl正亮氨酸内标溶液、100 µl 1 mol/L三乙胺乙腈溶液和100 µl 0.2 mol/L 异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，室温反应 1 小时，然后加入正己烷 400 µl，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取 200 µl下层溶液与 800 µl水混合，0.22 µm 针式过滤器过滤，待分析。注： 通过控制原始样品质量或稀释等方法，使样品溶液中的氨基酸总量不超过0.04 mol/L 或3.0 g/L(两者中取最小值) 只有采用内标法分析时，才需要加入正亮氨酸作为内标物 衍生得到的样品溶液中含有50%的乙腈，这与流动相溶剂体系存在较大差距，因而需要加水稀释，否则会引起峰前沿或分叉迪马科技AAA氨基酸柱子 洗脱条件 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_646181_2019107_3.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104221943_290383_2019107_3.gif

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