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含志贺氏菌増菌肉汤均

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  • 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素的用途

    本品是一种最基本的非选择性培养基,含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖。因含有动、植物两种蛋白质,苛养菌也可利用其中的营养进行增殖。 【用途】: 用于志贺氏菌的增菌培养 【贮藏条件】: 2~8℃,避光储存,拆封后及时放入冰箱冷藏; 【保质期】:6个月;【注意事项】 1、检查平板内是否干裂或染菌,如长菌请勿使用; 2、请在洁净的环境下操作,避免杂菌干扰; 3、经过预培养的培养基严禁使用; 4、在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水,请在洁净的环境下将水倒出,然后在培养箱放置10-30Min,待其表面干燥后再接种;或在使用前,提前一到两周放置室温即可; 5、弃物处理:使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理,也可按专业技术人员指示方法处理。 有需要志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素的请私聊我。

  • 【原创大赛】2014年食源性致病菌志贺氏菌风险监测分析

    【原创大赛】2014年食源性致病菌志贺氏菌风险监测分析

    2014年食源性致病菌志贺氏菌风险监测分析志贺氏菌属是一类革兰氏阴性杆菌。该属的细菌(统称痢疾杆菌),是细菌性痢疾的病原菌。志贺氏菌属包括4个种群。人类对痢疾杆菌有很高的易感性,在幼儿可引起急性中毒性菌痢,死亡率甚高。它不但可以通过食物和水传播,而且可以经过人与人的接触传播。所以在食品中检测志贺氏菌也是有一定的社会意义的。笔者就此情况将2014年食品中志贺氏菌的检测情况汇总如下。1 材料与方法1.1试剂和仪器 使用的培养基有志贺氏菌增菌肉汤、麦康凯(MAC)琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐(XLD)琼脂、三糖铁(TSI)琼脂购买于北京路桥公司,志贺氏菌显色培养基购买于郑州博赛公司,志贺氏菌诊断血清购买于宁波天润生物药业有限公司。主要仪器包括均质器,电子天平:感量0.1g,厌氧培养装置:41.5 ℃±1 ℃,VITEK-2Compact 全自动微生物鉴定系统。1.2依据和方法 根据国家食品安全风险评估中心制定的“食源性致病菌监测工作手册”要求进行增菌、分离、鉴定、菌种保存及送上级实验室复核。试验程序见图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412051004_525975_2433088_3.jpg

  • 食品微生物志贺氏菌方法验证

    食品微生物志贺氏菌方法验证

    [align=center][b]食品微生物志贺氏菌方法验证[/b][/align][align=left]近期在做食品中志贺氏菌的方法验证,与大家分享一下试验过程及结果。[/align][b]1[/b]、[b]目的:[/b]本实验是通过从人员能力、仪器设备、标准菌株及试剂、方法、环境五个方面对食品微生物志贺氏菌检验进行验证。[b]2、人员能力验证情况[/b]目前实验室人员经培训、考核,具备测定食品微生物学检验志贺氏菌测定的能力,人员能力验证合格。[b]3、仪器设备验证情况[/b]3.1方法对测试设备的要求恒温培养箱 :36℃±1℃、41.5℃±1℃3.2目前配备的设备情况:生化培养箱 上海龙跃LBI-150:36℃±1℃,生化培养箱 上海龙跃LBI-150:41.5℃±1℃;设备经过校准并确认合格。[b]4、标准菌株及试剂验证情况[/b]4.1方法对标准菌株、试剂的要求标准菌株:福氏志贺氏菌 ATCC12022培养基:志贺氏菌增菌肉汤、XLD培养基、麦康凯琼脂(MAC)、志贺氏菌显色培养基、三糖铁(TSI)琼脂、志贺氏菌干制生化鉴定试剂盒、志贺氏菌属四种多价诊断血清、福氏志贺氏菌TR-204、鲍氏诊断血清TR-205试剂:0.85%灭菌生理盐水4.2配备情况福氏志贺氏菌 ATCC12022:美国菌种保藏中心,有效期至2020.8.31志贺氏菌增菌肉汤:青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,批号20180919麦康凯琼脂(MAC):青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,批号20181227XLD培养基:青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,批号20190305三糖铁(TSI)琼脂:青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,批号20180828志贺氏菌显色培养基:北京陆桥生物技术有限公司,批号180518志贺氏菌干制生化鉴定试剂盒:北京陆桥生物技术有限公司,批号190122志贺氏菌属四种多价诊断血清:宁波天润生物药业有限公司,批号190101福氏志贺氏菌TR-204:宁波天润生物药业有限公司,批号20190101鲍氏诊断血清TR-205:宁波天润生物药业有限公司,批号20180101无菌生理盐水(氯化钠):AR 国药集团化学试剂有限公司,批号201811204.3验收情况:已验收合格[b]5、检测方法[/b]食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌GB 4789.5-2012,适用于食品中志贺氏菌的检验;方法现行有效,已受控。[b]6、环境条件验证情况[/b]6.1方法对测试环境的要求在环境温度为18℃~26℃,环境湿度为30%~70%,试验区域为百级洁净度进行。6.2目前对环境的设施和监控情况环境控制设备:空调 环境监控设备:温湿度表,已检定合格,在有效期内6.3环境验证情况定期进行沉降菌监测,验证洁净度,合格。[b]7、方法验证情况[/b]7.1验证方式:向样品中加入标准菌株。7.1.1合格标准:供试品+目标菌组生长良好。7.1.2样品:香肠[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271322285776_2548_3949637_3.jpg!w690x920.jpg[/img]7.2验证内容7.2.1菌液制备:取福氏志贺氏菌 ATCC12022的工作菌斜面,用5mL生理盐水洗脱;将上述洗脱液用0.85%生理盐水稀释至菌浓度约为10~100CFU/mL的菌悬液备用。7.2.2培养基制备:按 GB 4789.5-2012 要求配制。7.2.3样品前处理:按 GB 4789.5-2016、GB /T4789.17-20037.2.4供试品+目标菌组7.2.4.1增菌:以无菌操作称取25g样品,放入盛有225mL的生理盐水无菌均质袋内;向此均质袋中加入每毫升含菌量约为10~100CFU/mL的福氏志贺氏菌 ATCC12022菌悬液1mL,混匀后作为试验组。于41.5℃±1 ℃,厌氧培养16h~20h。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271323545716_9092_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.2分离:取增菌后的志贺氏菌增菌液分别划线于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上,于36℃±1℃培养20h~24h,观察各个平板上生长的菌落形态。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见下表。[table][tr][td][align=center]选择性琼脂平板[/align][/td][td][align=center]志贺氏菌的菌落特征[/align][/td][/tr][tr][td]MAC琼脂[/td][td]无色至浅粉红色,半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐[/td][/tr][tr][td]XLD琼脂[/td][td]粉红色至无色,半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐[/td][/tr][tr][td]志贺氏菌显色培养基[/td][td]表面白色,周围紫红色菌落(在陆桥志贺氏菌显色培养基)[/td][/tr][/table][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271324513903_7521_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271324505666_7879_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271324525123_1111_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.4生化试验:将6.2.4.2中选择性平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落,分别接种三糖铁和营养琼脂斜面、半固体各一管,置36℃±1℃培养20h~24h,分别观察结果。凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸、不产气、不产硫化氢的菌株,进行生化试验和血清学试验。将可疑菌落制成0.5麦氏浊度的菌悬液分别接种生化试剂盒内,每孔接种0.2mL,置于36℃±1℃培养18h~24h。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271325394036_2347_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271325396586_4193_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271325414073_5644_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.5血清鉴定:多价O菌体抗原,挑取菌胎于载玻片上两个区域,其中一个区域加生理盐水,一个区域滴多价O血清,将菌胎研磨成乳状。将玻片摇动混合1min,如果抗血清中出现凝结成块的颗粒,而且生理盐水中没有发生自凝现象,凝集反应为阳性。判定检出志贺氏菌/25g样品中。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271326275466_3029_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.4同时做样品空白,样品均无菌生长。[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271329172668_5569_3949637_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271329162206_1964_3949637_3.jpg!w690x920.jpg[/img]7.2.5以上试验验证结果如下:[table][tr][td][align=center][b]样品信息[/b][/align][/td][td][align=center][b]检测结果/25g[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]香肠+福氏志贺氏菌[/align][/td][td][align=center]检出[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]香肠[/align][/td][td][align=center]未检出[/align][/td][/tr][/table]7.3验证结果:供试品+目标菌组生长良好。8、试验结论:本实验室在人员能力、仪器设备、标准物质、试剂、检验方法、环境条件等方面均具备了测定食品微生物志贺氏菌的能力;方法验证方面,综上所述本实验室通过样品加标与样品空白检验均达到食品微生物学检验 志贺氏菌GB 4789.5-2012 的要求,综合考虑,本实验室可以开展此项目。

  • 【分享】常量肉汤稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)

    1.抗菌药物贮存液制备   抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如:需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液,所用抗生素为粉剂,其药物的有效力为750μg/mg。用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。根据公式计算所需稀释剂用量为:(182.6 mg×750μg/ml)/1280μg/ml=107.0ml,然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境,保存期不超过6个月。2.药敏试验用抗菌药物浓度范围   根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准,药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值,特殊情况例外。3. 培养基   NCCLS推荐使用Mueller-Hinton(MH)肉汤,pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时,应在肉汤中加入2%(W/V)氯化钠,按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤,肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。4.接种物的制备   有2种方法配制接种物,一是细菌生长方法,用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个,接种于4-5ml的水解酪蛋白(MH)肉汤中,35℃孵育2-6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准,约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法,对某些苛养菌,如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株,推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物,并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养,以检查接种物纯度。5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种   取无菌试管(13×100mm)13支,排成一排,除第1管加入1.6mlMH肉汤外,其余每管加入MH肉汤1ml,在第1管加入抗菌药物原液(如1280μg/ml) 0.4ml混匀,然后吸取1ml至第2管,混匀后再吸取1ml至第3管,如此连续倍比稀释至第11管,并从第11管中吸取1ml弃去,第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml,使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。6.孵育   将接种好的稀释管塞好塞子,置35℃普通空气孵箱中孵育16~20h;嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h;对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h。7.结果判断与解释   在读取和报告所测试菌株的MIC前,应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好,同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染,质控菌株的MIC值是否处于质控范围。以肉眼观察,药物最低浓度管无细菌生长者,即为受试菌的MIC。甲氧苄胺嘧啶或磺胺药物的肉汤稀释法终点判断,与阳性生长对照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC。根据NCCLS推荐的分界点值标准,判断耐药(resistant, R)、敏感(susceptible, S)或中介(intermediate, I)。S表示被测菌株所引起的感染可以用该抗菌药物的常用剂量治疗有效,禁忌症除外。R指该菌不能被抗菌药物的常用剂量在组织液内或血液中所达到的浓度所抑制,或属于具有特定耐药机理(如β-内酰胺酶),所以临床治疗效果不佳。I是指MIC接近药物的血液或组织液浓度,疗效低于敏感菌。还表示被测菌株可以通过提高剂量(如β-内酰胺类药物)被抑制,或在药物生理性浓集的部位(如尿液)被抑制。另外,中介还作为“缓冲域”,以防止由微小的技术因素失控,所导致较大的错误解释。

  • 【转帖】志贺氏菌的流行病学

    人和灵长类是志贺氏菌的适宜宿主,营养不良的幼儿、老人及免疫缺陷者更为易感。   据FDA统计,An estimated 300,000 cases of shigellosis occur annually in the U.S. [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/07/200707161249_58202_1631012_3.gif[/img]  志贺氏菌病常为食物爆发型或经水传播。   和志贺氏菌病相关的食品包括色拉(土豆、金枪鱼、虾、通心粉、鸡),生的蔬菜,奶和奶制品,禽,水果,面包制品,汉堡包,和有鳍鱼类。   志贺氏菌在拥挤和不卫生条件下能迅速传播,经常发现于人员大量集中的地方如餐厅、食堂。   食源性志贺氏菌流行的最主要原因是从事食品加工行业人员患菌痢或带菌者污染食品,食品接触人员个人卫生差,存放已污染的食品温度不适当等。

  • 志贺氏菌检验新国标厌氧增菌装备适用性分析

    志贺氏菌检验新国标厌氧增菌装备适用性分析

    常见的厌氧培养方法1. 厌氧袋培养法:塑料袋透明而不透气,内装气体发生管(有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口。先折断气体发生管,后折断美兰指示剂管,使袋内在半小时内造成无氧环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态,于生化培养箱中培养。厌氧袋对于志贺氏菌厌氧增菌的缺陷:1、很难实现GB4789.5-2012中所需的大量250ml或500ml三角烧瓶的厌氧培养2、无法实现操作过程的厌氧环境,明显降低厌氧菌的检出率3、操作繁琐,易引起实验失败4、培养灵活性较差5、一次性耗材成本高2.厌氧罐培养法:塑料或不锈钢密封罐,内置钯颗粒催化剂,将培养皿、厌氧指示袋(条)以及开封后的厌氧产气袋一同置于罐内,罐盖封闭后抽真空,30分钟后达到厌氧状态,观察厌氧指示袋(条)如无颜色产生,则将厌氧罐于生化培养箱中培养。厌氧罐对于志贺氏菌厌氧增菌的缺陷:1、很难实现GB4789.5-2012中所需的大量250ml或500ml三角烧瓶的厌氧培养2、无法实现操作过程的厌氧环境,明显降低厌氧菌的检出率3、操作繁琐,易引起实验失败4、培养灵活性较差5、一次性耗材成本高3. 传统厌氧培养箱培养法:样品置于传输舱内,抽真空/充氮气3次循环(约26分钟),打开内门进入厌氧操作室。厌氧环境下进行接种等操作后,再转移至培养室内培养。箱内厌氧是在钯催化剂的作用下箱内剩余的O2与混合气中的H2生成水,再通过干燥剂去除多余水分,形成厌氧培养环境。传统厌氧培养箱对于志贺氏菌厌氧增菌的缺陷:1、样品转移所需的抽真空/充氮操作复杂,耗时过多2、无强制对流循环系统,箱内环境很难达到均一稳定,厌氧恢复速度很慢3、无厌氧状态指示,无泄漏报警4、不支持UV紫外消毒,密封材料易老化而产生泄漏5、无生物脱毒能力4. 厌氧增菌培养设备选择建议1、兼具培养与操作功能的厌氧工作站能为增菌所需的三角烧瓶提供宽敞的培养空间;2、内腔强制对流系统,确保箱内环境均一稳定,厌氧氛围快速恢复;3、无抽真空/充氮繁琐操作,有效提高操作效率并节省气体消耗;4、支持UV紫外消毒,抗密封材料而避免泄漏;5、具有生物脱毒能力,保证内腔气体洁净;6、标配厌氧状态指示系统,能随时让用户了解内腔厌氧状态。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207162327_378019_1821047_3.jpg

  • 志贺氏菌检测

    在三糖琼脂斜面上的培养物,下述哪种情况()可疑为志贺氏菌。 A、乳糖-/葡糖+H2S+ B、乳糖-/葡糖+H2S- C、乳糖-/葡糖产气 H2S - D、乳糖-/葡糖产气 H2S +

  • 【原创大赛】对387份食品致病菌检验的结果分析

    【原创大赛】对387份食品致病菌检验的结果分析

    对387份食品致病菌检验的结果分析【生活中的仪器分析】食品安全——“菜”米油盐酱醋茶大检测 食品中致病菌是指可以引起食物中毒或以食品为传播媒介的致病性细菌。致病性细菌直接或间接污染食品及水源,人经口感染可导致肠道传染病的发生及食物中毒以及畜禽传染病的流行。食源性致病菌是导致食品安全问题的中药来源。现将387份食品中致病菌的检验结果报告如下。1.采样类别及数量(见表1)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312172056_482714_1751239_3.jpg2.设备和试剂2.1设备全自动微生物分析系统(VITEKⅡ)、拍击式均质器、10ml吸管、100ul-1000ul加样枪、A2级生物安全柜、电子秤2.2试剂2.2.1标准菌株购买于上海宝录生物科技有限公司.2.2.2缓冲蛋白胨水(BPW)、志贺氏菌增菌肉汤、7.5%NaCl肉汤、李氏增菌肉汤LB增菌液、鉴定平板、鉴定琼脂及生化鉴定VITEK卡购买于青岛高科园海博生物技术有限公司、郑州博赛生物技术股份有限公司、北京路桥技术有限责任公司、北京威泰克生物技术有限公司。2.2.3沙门氏菌(59种血清型)诊断血清购买于宁波天润生物药业有限公司(多家血清)生产。3.实验程序3.1沙门氏菌检验程序25g(ml)样品加入225ml BPW,拍击式均质器拍打2分钟,36℃培养14小时,轻轻摇动培养过的样品混合物,取1ml加入10ml四硫磺酸钠煌绿增菌液,42℃培养24小时。另取1ml加入10ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液36℃培养24小时。分别用接种环取增菌液1环,划线接种于沙门氏菌属显色培养基平板,于36℃培养24小时。挑取沙门氏菌属显色平板的紫色菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺;接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,于36℃培养24小时。从营养琼脂平板上挑取菌落,用生理盐水配制成浊度为0.5-0.6的菌悬液,使用VITEKⅡ进行鉴定。然后用A-F多价O血清、8种多价H血清做玻片凝集实验,同时用生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙型菌株,不能分型。综合以上生化试验和血清学鉴定的结果,报告25g(ml)样品中检出或未检出沙门氏菌。3.2志贺氏菌检验程序25g(ml)样品加入225ml 志贺氏菌增菌肉汤,拍击式均质器拍打2分钟,于42℃厌氧培养20小时,取增菌后的志贺氏增菌液划线接种志贺氏菌显色培养基平板,于36℃培养48小时,,取志贺氏菌显色培养基平板上的紫色菌落,接种三糖铁琼脂,半固体和营养琼脂斜面各一管,置36℃培养24小时。凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸、不产气(福氏志贺氏菌

  • GB4789.5-2012志贺氏菌的检验

    这次专家来评审我们的食品实验 室,专家开出了这样的不符合项:实验室的标准菌种仅配备福氏志贺氏菌,没有配备标准要求的痢疾志贺氏菌,鲍氏志贺氏菌和宋内氏志贺氏菌

  • 解读产志贺毒素大肠杆菌O26

    一、背景信息  近日,据美国食品安全新闻网消息,由美国墨西哥风味连锁餐厅Chipotle食物中毒引发的产志贺毒素大肠杆菌O26疫情在美国蔓延,导致20人住院。美国疾病预防和控制中心(CDC)称,近两年来由产志贺毒素大肠杆菌O26引发的食物中毒事件明显增多,在未来可能引发更多的疫情,尤其是引发溶血性尿毒综合症的病例数量可能会远超过产志贺毒素大肠杆菌O157。二、专家解读  (一)产志贺毒素大肠杆菌是全球最重要的新发高致病性食源性病原菌。  产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,简称STEC)是一类携带了前噬菌体编码一种或两种志贺毒素基因的新发高致病性食源性病原菌,包括大肠杆菌O26,以及O157、O45、O103、O104、O111、O121、O145等150多种其它血清型的大肠杆菌。该菌为革兰氏阴性杆菌,无芽胞,有鞭毛。可以在10—65℃生长,最适生长温度为33—42℃,具有较强的耐酸性(pH 2.5—3.0),可以抵抗胃酸的消化作用。  据不完全统计,美国1983—2002年发生的非O157的STEC感染者中,70%是由O26、O45、O103、O121、O111 和O145血清型所致;2011年9月,美国农业部食品安全检验局曾发布通告,强调大肠杆菌O26是美国最常见的非O157 STEC。爱尔兰对肉和乳制品中非O157 STEC的分布特征研究发现,血清型O26也是引起人类食源性疾病最主要的非O157血清型。STEC O26已逐渐成为美国、日本及部分欧盟发达国家引起暴发事件的主要病原菌。  (二)肉制品是引发食源性STEC感染的主要高危食品。  牛、羊等经济型动物是STEC的天然宿主,国际相关研究发现牛和羊中STEC携带率可高达71%甚至以上。美国农业部(USDA)和欧盟食品安全局(EFSA)也证实养殖场中存在高风险污染的STEC,并且可以通过环境、粪便、野生动物、土壤等在一定范围内循环存在,最终造成肉制品等污染。1982—2006年多个国家STEC暴发事件的归因分析表明,最主要原因是肉制品污染(42.2%),其次是乳制品(12.2%)。除此之外,生鲜果蔬及其制品等也可能是STEC O26重要的传播介质。通过对美国1992—2002年期间24起STEC暴发事件统计发现,67%的疫情是由牛肉制品导致的,其中O26是最主要致病血清型。  (三)国际组织及部分国家和地区已对肉制品中STEC污染给予高度重视。  1999年第32届食品卫生法典委员会(CCFH)会议上,各国政府对食品中的微生物风险应按“食品—病原”组合进行风险管理达成共识,其中就包括“牛肉中大肠杆菌O157”。联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)食品微生物风险评估联合专家组(JEMRA)于2011年发布了风险评估会议报告(Enterohaemorrhagic Escherichia coli in raw beef and beef products: approaches for the provision of scientific advice),为如何控制生牛肉及牛肉制品中的出血性大肠杆菌提供了科学建议。但是,迄今CCFH尚未对如何应用食品卫生通则控制牛肉中的出血性大肠杆菌制定相关科学导则,也未制定相关产品的限量标准。  2012年3月,USDA宣布强制执行在初加工的牛肉制品中不得检出六大类非O157 STEC(O26、O45、O103、O121、O111 和O145)。2011年德国发生STEC O104暴发事件后,欧盟也加强了对STEC的监测和评估工作,已连续5年对食品和病人中的STEC进行监测。

  • 致病菌(沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌)的单位问题

    致病菌(沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌)的单位,有的标准有/25g;而有的标准又没有单位,这两者之间有区别吗?为什么有的要,有的不要呢,这次我们给企业写了一个水果制品(蜜饯制品)的标准,卫生部回复说这个致病菌有单位“/25g"不对,就是说要没有单位了。。。。。

  • 志贺氏菌的判断

    请大家帮看下这是志贺氏菌吗?麦康凯培养基上,望老师不吝赐教[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107030746448026_7117_3324084_3.png[/img]

  • 饲料检测中的志贺氏菌和沙门氏菌

    饲料检测中的志贺氏菌和沙门氏菌。。。金黄。。如果按国标的来大家都会做到哪一个步骤啊?其实也是按的食品GB/T4789来了有没人做血清啊等生化的后续实验啊? 还有检测这些致病菌,公司是否需要什么认证啊?怎样判定公司实验室有检测这些菌的能力?

  • 请问羊肉汤使用增白剂属于滥用食品添加剂吗?

    请问羊肉汤使用增白剂属于滥用食品添加剂吗?新闻链接:成都将开展为期1个月的专项监督检查,依法查处滥用食品添加剂行为   日前,成都市食品药品监督管理局接到举报,反映个别餐饮服务单位销售的羊肉汤添加“羊肉香精”、“增白剂”等添加剂,可能对人体健康造成危害。11月23日,成都市食品药品稽查总队联合青羊区食药监局对市区小关庙的8家羊肉汤锅店进行了突击监督检查,现场尚未发现“羊肉香精”和“增白剂”等。   据介绍,市民举报的增白剂含有的二氧化钛属于食品添加剂,只能在果酱、凉果、可可制品等食品中使用,如果加在羊肉及汤中属于滥用食品添加剂。餐饮服务单位可以按标准使用复配食品添加剂,由于在当天现场检查中未发现“羊肉香精”,食药监部门暂无法认定其是否为复配食品添加剂,成都市食药监局将在全市排查过程中根据实物具体认定。   冬季来临,成都进入羊肉消费旺季。成都市食品药品监督管理局23日下发通知,要求各区(市)县局对经营羊肉汤、羊肉火锅的餐饮服务单位开展为期1个月的专项监督检查,重点检查各餐饮服务单位在羊肉汤锅中使用食品添加剂的情况,以及是否存在非法添加非食用物质的行为。自制火锅底料、自制调味料的餐饮服务单位要向监管部门备案所使用的食品添加剂名称,并在店堂醒目位置或菜单上予以公示。对滥用食品添加剂行为,将坚决依法查处

  • 单增李斯特菌检测

    单核细胞增生李斯特氏菌及检验单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜李氏菌的疾病,感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中,食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险,该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖,是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一,因此,在食品卫生微生物检验中,必须加以重视。一、生物学特性1、形态与染色该菌为革兰氏阳性短杆菌,大小约为0.5μmх1.0-2.0μm,直或稍弯,两端钝圆,常呈V字型排列,偶有球状、双球状,兼性厌氧、无芽胞,一般不形成荚膜,但在营养丰富的环境中可形成荚膜,在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性,该菌有4根周毛和1根端毛,但周毛易脱落。2、培养特性该菌营养要求不高,在20--25℃培养有动力,穿刺培养2--5天可见倒立伞状生长,肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。该菌的生长范围为2--42℃(也有报道在0℃能缓慢生长),最适培养温度为35--37℃,在pH中性至弱碱性(pH9.6)、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好,在pH3.8--4.4能缓慢生长,在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。在固体培养基上,菌落初始很小,透明,边缘整齐,呈露滴状,但随着菌落的增大,变得不透明。在5-7%的血平板上,菌落通常也不大,灰白色,刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上,用45°角入射光照射菌落,通过解剖镜垂直观察,菌落呈兰色、灰色或兰灰色。3、生化反应该菌触酶阳性,氧化酶阴性,能发酵多种糖类,产酸不产气,如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖(迟发酵)、山梨醇、海藻糖、果糖,不发酵木糖、甘露醇、肌醇、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖,不利用枸橼酸盐,40%胆汁不溶解,吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性,VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。4、血清型根据菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原,将单增李氏菌分成13个血清型,分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和“7”13 个血清型。致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。5、抵抗力该菌对理化因素抵抗力较强,在土壤、粪便、青储饲料和干草内能长期存活,对碱和盐抵抗力强,60-70℃经5-20min可杀死,70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min 可杀死此菌。该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺均敏感。二、流行病学单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中,不易被冻融,能耐受较高的渗透压,在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在,所以动物很容易食入该菌,并通过口腔-粪便的途径进行传播。据报道,健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌,4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染,约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染,孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于子宫颈的该菌也引起感染,性接触也是本病传播的可能途径,且有上升趋势。三、致病性单增李氏菌进入人体后是否发病,与菌的毒力和宿主的年龄、免疫状态有关,因为该菌是一种细胞内寄生菌,宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能。因此,易感者为新生儿、孕妇及40岁以上的成人,此外,酗酒者、免疫系统损伤或缺陷者、接受免疫抑制剂和皮质激素治疗的患者及器官移植者也易被该菌感染。该病的临床表现,健康成人个体出现轻微类似流感症状,新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。单增李氏菌的抗原结构与毒力无关,它的致病性与毒力机理如下:1、寄生物介导的细胞内增生,使它附着及进入肠细胞与巨噬细胞;2、抗活化的巨噬细胞,单增李氏菌有细菌性过氧化物歧化酶,使它能抗活化巨噬细胞内的过氧物(为杀菌的毒性游离基团)分解;3、溶血素,即李氏杆菌素O,可以从培养物上清液中获得,为活化的细胞溶素,有α和β两种,为毒力因子。四、检验1、增菌培养取回的样品应在4℃下处理、存放和运送,如果是冷冻样品,则在检验前要保持冷冻状态。取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤(EB)的均质杯中进行均质,然后转入三角瓶中,30℃培养4h,加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸,继续培养20h和44h.。2、分离共培养24h和48h后,取EB培养物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3+LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培养24-48h,LPM平板在30℃培养24-48h。然后,把LPM平板放于解剖镜载物台上,以45°角入射光从平板下面照射平板,通过目镜垂直向下观察寻找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对照。加入七叶苷和Fe3+的LPM平板不用斜射光系统,选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同。在OXA平板上李斯特氏菌菌落周围有一个黑色环,其它菌也可形成黑色环,但形成时间要在两天以上。李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相似。在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落,分别划线于TSAYE平板上以得到更纯、更典型的单个菌落。食品检验中在TSAYE平板上纯化是必须的,因为在PALCAM和OXA或LPM平板上分离菌落时可能沾有不可见的受抑微生物。挑取5个典型菌落的原因是一个样品中可能分离到一种以上的李斯特氏菌。30℃TSAYE平板培养24-48h,如果不用于动力观察,也可在35℃培养。3、鉴定步骤(1)观察TSAYE平板通过斜射光观察,寻找呈兰灰至兰色菌落。在TSAYE上用已知菌作对照。(2)、从30℃或更低温度下培养的TSAYE平板上挑取典型菌落做成湿玻片在油镜下观察。湿玻片用0.85%生理盐水菌悬液制成。如果菌量太少,菌体黏附于载玻片上而呈现非运动性。李斯特氏菌是细短杆菌,可见轻微的旋转及翻滚。与已知的李斯特氏菌的对照相比,球形、大的杆状且快速泳动的都不是李斯特氏菌。(3)挑取典型菌落进行过氧化氢酶实验,李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。(4)取16-24h的培养物进行革兰氏染色,李斯特氏菌呈革兰氏阳性杆菌。但是陈旧培养物革兰氏染色会发生变化,而且菌体可成球形。在染色过重的玻片上菌体有呈栅状排列的趋势,易误认为白喉菌而错判。(5)挑取典型菌落接种于TSBYE肉汤管中,35℃培养24h用做糖类发酵和其它生化项目实验。TSBYE肉汤管在4℃下可存放几天,也可反复接种。(6)在TSAYE平板上挑取典型菌落刺种到5%的绵羊血或马血琼脂平板上,刺种时避免触到平板底部和使琼脂破裂,同时设阳性对照(单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌)和阴性对照(英诺克李斯特氏菌),35℃培养48h。单核细胞增生李斯特氏菌呈窄小的β-溶血环。(7)在明亮的光照下,观察经穿刺的血琼脂平板,单核细胞增生李斯特氏菌和西尔李斯特氏菌围绕穿刺点产生较清晰的β-溶血环,英诺克李斯特氏菌不产生溶血现象,而绵羊李斯特氏菌产生界限明显的较大溶血环,在此不要试图进行种间的区分,但要记录下溶血反应的特征,CAMP试验可区分它们间的溶血反应。(8)硝酸盐还原试验(选做)。用TSBYE肉汤培养物接种于硝酸盐肉汤中,35℃培养5天后,加入0.2mL试剂A,再加入0.2mL试剂B,混合,出现紫红色为阳性反应,表明硝酸盐已被还原,如无颜色出现,在试管内再加入少量锌粉,放置1h,如出现紫红色,表明硝酸盐仍存在,未被细菌还原。只有默氏李斯特氏菌还原硝酸盐,因此,从格氏李斯特氏菌中区分出默氏李斯特氏菌就必须进行这唯一的试验。本试验还有一等效试验,即加入0.2mL试剂A后,再加入0.2mL试剂C,出现橙色表明硝酸盐已被还原。如未出现颜色反应,也加入少量锌粉,若出现橙色表明硝酸盐未被还原。(9)将TSBYE培养物穿刺到SIM和MTM试管中,室温培养7天,每日观察,李斯特氏菌呈典型伞状生长。在MTM中伞状生长更典型。同时,30℃的TSBYE培养物在油镜下可见细菌作翻转运动。(10 )将TSAYE肉汤培养物分别接种于0.5%(W/V)葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内(可选用倒立发酵管),35℃培养7天,呈阳性反应的李斯特氏菌产酸不产气,李斯特氏菌发酵鼠李糖和木糖的情况见下表。所有李斯特氏菌对葡萄糖、七叶苷、麦芽糖均能发酵,除格氏李斯特氏菌均不能发酵甘露醇。如果在OXA、PALCAM或加七叶苷/Fe3+的LPM分离平板上菌落色素很明显,则七叶苷试验可免做。

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