咖啡酸葡糖苷酸标准品

锁阳咖啡中咖啡因含量的测定锁阳咖啡以天然锁阳为基础，配以速溶咖啡，是近几年涌现出的一种新型的固体饮料。锁阳主产于甘肃、青海、内蒙，其中以甘肃嘉酒地区的锁阳产量最大、质地最优。锁阳可调节生理机能、均衡营养、促进血液循环、滋肝健肾。锁阳咖啡是锁阳和咖啡的有机结合，越来越受到消费者的青睐。但是人们在饮用锁阳咖啡的同时却容易忽略咖啡的品质，咖啡因是咖啡中的一种重要成分,也是衡量其质量的一项重要指标,作为一种中枢兴奋剂,能兴奋大脑皮层,但易上瘾,因而国家对其制定了相应的标准。本实验用SN/T 1391-2004 《进出口速溶咖啡检验规程》中速溶咖啡中咖啡因的测定方法测定锁阳咖啡中咖啡因的含量。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307291536_454526_2764104_3.jpg1.方法提要样品用水溶解过滤后，用配有紫外检测器的高效液相色谱(HPLC)测定咖啡因，外标法定量。2.试剂和材料所有试剂除特殊注明外,均为分析纯,水为超纯水。2.1 乙睛:色谱纯;2.2 咖啡因标准品:纯度≥99%;2.3 标准储备液(100m g/L),准确称取 。0.0100 g 咖啡因标准品于100m L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，作为标准储备液。根据需要再用水将标准储备液稀释成适当浓度的标准工作液。3.仪器和设备3.1高效液相色谱仪配紫外检测器。3.2超声波振荡器。4.测定步骤4.1 提取称 取 0.1g(准确至 0.0001 g )均匀试样于 100m L容量瓶中，加人 80m L水，置超声波振荡器中超声20 min，冷却后用水定容至刻度并混匀，过0.45滤膜后，供HPLC测定。4.2 测定4 .2 .1 色谱条件a) 液 相色谱仪，配紫外检测器，检测波长273n m;b) 色 谱柱:C,。柱(25cm×4.6m mID,5um)柱或相当柱;c) 流 动相:乙睛一水一乙酸(16+83十1);d) 流 速 0.5 m L/min;e) 进 样 量 5uL4.2.2 色谱测定根据样液中咖啡因的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中的咖啡因的响应值均应在仪器的检测线性范围内对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，咖啡因的保留时间约为9min。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307291536_454528_2764104_3.jpg 标准溶液色谱图 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307291537_454529_2764104_3.jpg 标准曲线 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307291537_454530_2764104_3.jpg 样品色谱图 4.2.3[/size

今天和同事收到了订购的咖啡，处于好奇，对两种咖啡的添加剂做了一下对比。一种是麦斯威尔的，一种是雀巢的。麦斯威尔的配料，还看明白几个，但是雀巢的就不懂了。说啥也没看的直观，发上来给大家看看。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/04/201204061114_359433_2471340_3.jpg两种咖啡的全景图（都是原味咖啡）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/04/201204061114_359435_2471340_3.jpg雀巢的配料（白砂糖、植脂末（葡萄糖浆，氢化植物油，稳定剂（340ii、331ii、452i），酪蛋白（含牛奶蛋白），乳化剂（471、472e），食用香精，抗结剂（551）），速溶咖啡）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/04/201204061121_359440_2471340_3.jpg麦斯威尔的配料（植脂末、白砂糖、速溶咖啡，食品添加剂）植脂末是做什么用的？麦斯威尔的植脂末中，有许多都是食品添加剂，比如二氧化硅，单硬脂酸甘油酯、干嘛还要和食品添加剂区分出来呢？

[b]1、引言[/b] 糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜是常用的甜味剂，苯甲酸钠、山梨酸钾、脱氢乙酸钠是常用的防腐剂。按GB 2760-2014，上述6种添加剂在诸多种类食品中都可使用。咖啡因也是一种常见的食品添加剂，并且在含茶、咖啡、可可的饮料和糕点中广泛存在。在实际生产实践中，对上述7种添加剂的测定属于常规需求，实施较为频繁。 按GB 5009系列标准，上述项目均有标准方法，但较为分散。整理如下表[img=,690,753]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008291644476781_2922_2204387_3.png!w690x753.jpg[/img] 上述7个项目隶属于5个不同的方法，需要分别测定，这就带来了诸多不便。考虑到五个标准方法由较多的相似性，只要确定了合适的色谱分离条件，上述7个项目完全可以整合到一个方法中进行测定。虽然有文献报道了相关的尝试（[color=#33ccff]见：卫星华,李荣,董曼曼,艾芸,张亚锋,高安成.高效液相法同时测定饮品中8种食品添加剂[J].食品研究与开发,2017,38(24):137-140.[/color]），但是开发的方法需要梯度洗脱，单次分析需要40分钟以上，且每次进样之后需重新平衡。其他学者也进行了类似的研究，同样存在梯度洗脱时间长的问题（[color=#33ccff]例如：姚浔平,李小平,姚珊珊,金米聪.高效液相色谱法同时测定食品中10种添加剂[J].中国卫生检验杂志,2009,19(01):9-11.[/color]）。使用超高效液相色谱法可以显著提高分析速度（[color=#33ccff]见：高敬铭,刘莹,姬建生,符锋.超高效液相色谱法同时测定食品中5种添加剂[J].理化检验(化学分册),2016,52(01):29-32.[/color]），但是仪器要求提高，目前尚不普及。 本文的主要目的是通过简便的等度洗脱方法实现上述7个目标物的快速分离，从而实现这7个项目同时测的，提高工作效率。.[b]2、实验方法[/b][align=left][b][font='Times New Roman']2.1 [/font][font=宋体]材料与试剂[/font][/b][/align][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、咖啡因、阿斯巴甜标准品纯度均不低于[/font][font='Times New Roman']99.5% [/font][font=宋体]上海阿拉丁公司；甲醇（色谱纯）、磷酸二氢铵（分析纯）、氨水（分析纯）[/font][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]上海国药试剂公司；实验用水为二次蒸馏水。[/font][align=left][b][font='Times New Roman']2.2 [/font][font=宋体]仪器与设备[/font][/b][/align][font='Times New Roman'] iChrom 5100[/font][font=宋体]色谱系统，配[/font][font='Times New Roman']D5115[/font][font=宋体]二极管阵列检测器（[/font][font='Times New Roman']DAD[/font][font=宋体]）[/font][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]大连依利特公司；[/font][font='Times New Roman'] S210-B pH[/font][font=宋体]计、[/font][font='Times New Roman']XP6[/font][font=宋体]微量天平[/font][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]瑞士梅特勒公司；[/font][font='Times New Roman'] L400[/font][font=宋体]离心机[/font][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]湖南长沙湘仪公司。[/font][b][font='Times New Roman']2.3 [/font][font=宋体]方法[/font][font='Times New Roman']2.3.1 [/font][font=宋体]样品处理[/font][/b][font='Times New Roman'] [b]液体样品（饮料类）[/b]：[/font][font=宋体]准确称取试样[/font][font='Times New Roman']1.000 g[/font][font=宋体]置于[/font][font='Times New Roman']15 mL[/font][font=宋体]离心管中，加入[/font][font='Times New Roman']0.1 mol/L[/font][font=宋体]硫酸锌溶液[/font][font='Times New Roman']5 mL[/font][font=宋体]、[/font][font='Times New Roman']0.2 mol/L[/font][font=宋体]氨水[/font][font='Times New Roman']5 mL[/font][font=宋体]，先机械振荡混匀，然后超声[/font][font='Times New Roman']5 min[/font][font=宋体]，[/font][font='Times New Roman']4000 r/min[/font][font=宋体]离心[/font][font='Times New Roman']5 min[/font][font=宋体]。将上清液过滤到[/font][font='Times New Roman']25 mL[/font][font=宋体]容量瓶中，沉淀加色谱流动相（见[/font][font='Times New Roman']2.3.2[/font][font=宋体]）洗涤[/font][font='Times New Roman']2[/font][font=宋体]次、每次[/font][font='Times New Roman']8mL[/font][font=宋体]，洗涤液也滤到同一容量瓶中，用流动相定容。[/font] [b]固体样品（糕点类）[/b]：称取食品试样20~50g（精确至0.01g） ，加水100~200g（精确至0.1g） ，用高速匀浆机充分破碎混匀。然后按液体样品同样方法处理。 [b]含油脂较多的样品[/b]：先按固体试样相同方法进行匀浆。称取匀浆后的样品1.0~2.0g（精确至0.001g）置于15 mL离心管中，加氨水（0.2mol/L）5mL、乙醇0.5mL，混匀后再加正己烷5mL，加盖后剧烈震荡5min，然后4000 r/min离心5 min使样品分层。用吸管吸出大部分正己烷弃去，然后再加正己烷5mL重复萃取一次 。弃去正己烷相，水相用氮气吹扫使残余的正己烷挥发，然后加入硫酸锌溶液（0.1 mol/L）5 mL，混匀并剧烈振荡5 min。4000 r/min离心5 min分离沉淀，将上清液过滤到25 mL容量瓶中，沉淀加色谱流动相洗涤2次、每次8mL，洗涤液也滤到同一容量瓶中，用流动相定容，待色谱测定。[font='Times New Roman'][b]2.3.2 色谱条件[/b][/font][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]色谱柱：[/font][font='Times New Roman']Thermo Hypersil C18 (4.6 mm × 200 mm, 5 μm)[/font][font=宋体]；流动相：甲醇[/font][font='Times New Roman']/[/font][font=宋体]磷酸盐缓冲液体积比为[/font][font='Times New Roman']20/80[/font][font=宋体]，其中磷酸盐缓冲液为[/font][font='Times New Roman']0.1 mol/L[/font][font=宋体]磷酸二氢铵溶液用氨水调节至[/font][font='Times New Roman']pH = 5.5[/font][font=宋体]；等度洗脱，流速为[/font][font='Times New Roman']1.000 mL/min[/font][font=宋体]；柱温为[/font][font='Times New Roman']30.0 ℃[/font][font=宋体]；进样体积为[/font][font='Times New Roman']10.00 μL[/font][font=宋体]。使用[/font][font='Times New Roman']DAD[/font][font=宋体]检测器，检测波长分别为：安赛蜜[/font][font='Times New Roman']225 nm[/font][font=宋体]，糖精钠[/font][font='Times New Roman']210 nm[/font][font=宋体]，苯甲酸[/font][font='Times New Roman']222 nm[/font][font=宋体]，山梨酸[/font][font='Times New Roman']250 nm[/font][font=宋体]，脱氢乙酸[/font][font='Times New Roman']228 nm[/font][font=宋体]，咖啡因[/font][font='Times New Roman']272 nm[/font][font=宋体]，阿斯巴甜[/font][font='Times New Roman']210 nm[/font][font=宋体]。[/font][b][font='Times New Roman']2.3.3 [/font][font=宋体]定性与定量方法[/font][/b][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]分别精确称量各标准品[/font][font='Times New Roman']10.00 mg[/font][font=宋体]，定容至[/font][font='Times New Roman']10 mL[/font][font=宋体]，制得浓度分别为[/font][font='Times New Roman']1.000 g/L[/font][font=宋体]的单标储备液，其中安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜的溶剂为纯水，其余的溶剂为甲醇。[/font] 依次准确吸取一定体积的单标储备液混合并用流动相（见1.3.2）稀释至1.00 ~ 50.0 mg/L的浓度范围，得到标准溶液系列。将标准溶液系列按相同色谱条件进行测定，以保留时间和DAD光谱匹配进行定性，以峰面积外标法建立工作曲线进行定量。.[b]3、问题讨论3.1 色谱流动相选择[/b] 原有方法测定7种目标物均采用反相色谱模式、C-18柱，本方法仍然选用C-18柱进行分离，因此实现分离的关键在于流动相的选择。 首先进行了改变有机相比例的实验，但这方面对分离效果的优化并不明显。提高有机相比例时，各目标物的保留时间均减小，分离度也随之减小。降低有机相比例时分离度增加，但各目标物的保留时间都显著延长，总体分析时间太长，不实用。 pH是影响这7种目标物分离的最重要因素。其中[font=宋体]安赛蜜、糖精钠均为强酸盐、苯甲酸钠、山梨酸钾、脱氢乙酸钠均为弱酸盐，咖啡因是弱碱，阿斯巴甜属于两性物质，随着流动相pH的变化，其存在形式会有显著不同，保留能力也随之变化明显。有不少文献也考查了pH的分离的影响（[color=#33ccff]例如：方晓丽.超高效液相色谱同时测定饮料中5种食品添加剂[J].食品工业,2018,39(12):314-318.| 汪辉,曹小彦,陈利国,黄秀明.高效液相色谱法同时测定蜜饯中5种常见食品添加剂[J].分析试验室,2007(11):119-122.| 尤妍,潘辉国,陈盼盼,董琴芳,章萍萍.高效液相色谱法同时测定饮料中5种添加剂[J].食品研究与开发,2016,37(04):164-166.| 姚浔平,李小平,姚珊珊,金米聪.高效液相色谱法同时测定食品中10种添加剂[J].中国卫生检验杂志,2009,19(01):9-11.[/color]），但是数据较为零散，并没有揭示出有用的变化规律，因此缺乏指导意义，实验结果也不易重复。本研究在较宽的范围内考查了各目标物保留时间的变化趋势，并对各目标峰的相对位置进行了对比，结果如下图：[/font][font=宋体].[/font][align=center][font=宋体][color=#ff0000][img=,690,540]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008291807280222_7045_2204387_3.png!w690x540.jpg[/img][/color][/font][/align][align=center][color=#ff0000]流动相pH对7种目标物保留时间的影响（流动相为甲醇/缓冲液=20/80）[/color][/align][align=left].[/align][align=left] 糖精钠和安赛蜜都是强酸盐，相当于非常弱的碱，咖啡因本身就是极弱的碱，因此他们在弱酸性范围内存在形式不会有显著变化。只有在pH小于2之后，其保留时间才会水pH显著变化，但是通常色谱柱不能承受强酸，因此对pH小于2的情况不予考虑。阿斯巴甜是两性物质，在等电点附近呈分子内电离的形态，是保留最弱的。当pH增大或者减小时，其电离程度都是减小，保留时间都会表现为增大，但pH大于8是通常色谱柱不能承受的，因此也不予考虑。苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸都是羧酸，pKa均在5左右，因此其存在形式在pH从4到6变化时会显著不同，其保留时间在这个pH范围内也是变化最为显著的。pH减小时，羧酸形式存在占主导，因此其保留时间变大；pH增大时，盐形式存在的比例变多，因此保留时间减小；并且对于酸性强度不同的物质，其变化幅度和变化发生的pH范围也是显著不同的。相关理论在众多色谱专著中均有讨论（[color=#33ccff]参见：Lloyd R.Snyder，Joseph J.Kirkland ，John W.Dolan，（译者：陈小明 唐雅妍[font=arial, &][/font]），现代液相色谱技术导论，人民卫生出版社，2012.[/color]）。[/align][align=left] 上述讨论也说明，对于酸类物质的色谱分析，一定要精确控制流动相的pH。有些标准中对流动相pH未作明确的说明，这是极为不妥的，试剂的微小差异就会导致分析结果显著不同。例如GB 5009.28-2016中只规定了流动相加入乙酸铵，但实际购买的乙酸铵试剂pH可在6.5~7.5范围内变化，有时候就会导致苯甲酸与糖精钠的峰位置前后互换。[/align][align=left] 在明确了上述变化规律之后，流动相pH选择的问题也迎刃而解：显然在pH=5.5附近对于分离是最为有利的，不仅各目标物分离度较高，而且总的分析时间不太长，只需约15分钟。需要指出的是，由于pH计往往存在误差，实际配置缓冲液时并不一定按图中数值，而需要根据实际情况进行微调。若实测中发现脱氢乙酸与咖啡因分离度较低，说明配置的缓冲液pH略有偏低，应适当调高pH（通常调高0.1单位即可改善）；若实测中发现脱氢乙酸与山梨酸分离度较低，说明配置的缓冲液pH略有偏高，应适当调低pH（通常调低0.1单位即可改善）。[/align][align=left] 在上述讨论的最佳流动相条件下，标样和实际样品的分离效果都很好，见下图：[/align][align=center][img=,690,719]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008291903133024_5403_2204387_3.png!w690x719.jpg[/img][/align][align=center][color=#ff0000]标样和实际样品的色谱图（流动相为甲醇/缓冲液=20/80，缓冲液为0.1M磷酸二氢铵溶液用氨水调节至pH5.5）[/color][/align][align=center][color=#ff0000].[/color][/align][align=left] 另外要补充说明的是，虽然标准方法中使用的缓存盐常常是乙酸或者甲酸体系，但实际上并不是最佳选择。因为有机酸本身会产生一定的背景吸收，在低波长下尤其明显。而磷酸盐体系的背景吸收要小得多，这对减小背景干扰和基线漂移是有利的。[/align][align=left][b]3.2 检测波长选择[/b][/align][align=left] 7种目标物的的吸收波长各不相同，用DAD检测器可较好解决问题，并且有助于通过吸收光谱图定性。若没有配备DAD检测器，可用一般可变波长紫外检测器的“波长时间程序”功能。[/align][align=left] 通过较高浓度标样测得7种目标物的色谱-光谱图如下，其紫外吸收谱图和最大吸收波长可供参考。[/align][align=left][img=,690,1127]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008291912345152_2614_2204387_3.png!w690x1127.jpg[/img][/align][align=left] 需要说明的是，糖精钠和阿斯巴甜的最大吸收波长都在较低波段，易受到背景吸收和样品基体的干扰，因此实际选用的是210nm进行检测，灵敏度虽然有所降低，但干扰也明显减轻。实际应用中发现，少数情况下，糖精钠仍然会受到基质干扰，此时可进一步将其检测波长降低到215~220nm，基质干扰基本上就减小到可忽略的程度了。[/align][align=left] 另外，不同文献中报道的各种目标物的最大吸收波长有一些出入，这一方面与不同仪器的波长误差有关，更重要的是因为目标物的离解程度随pH变化，不同pH下测得的最大吸收波长会有明显差异。[/align][align=left][b]3.3 样品前处理[/b][/align][align=left] 本方法参考现有方法，采用了锌盐沉淀的吸附和絮凝作用来净化除杂，但是未使用亚铁氰化钾和乙酸锌，也未采用三氯乙酸沉淀蛋白。因为这几种物质都有末端吸收，在接近210nm处产生的紫外吸收较为明显，而其色谱流出的时间又都与安赛蜜、糖精钠等物质接近（例如，三氯乙酸的流出时间与糖精钠几乎相同）。本方法采用氨水和硫酸锌生成氢氧化锌絮状沉淀，其吸附与絮凝效果与亚铁氰化钾-乙酸锌体系较为接近，同时不引入干扰离子。[/align][align=left] 对于含油脂较多的试样，本方法仍采用正己烷萃取除脂，与常规方法基本一致。[/align][align=left][b]3.4 方法验证[/b][/align][align=left] 对方法的重现性、线性范围、加标回收率进行了验证，详细数据较多，这里从略，主要结果如下：[/align][align=left] （1）标样7次重复测定的重现性很好，RSD均小于1%。但样品处理的重现性略差，同一样品匀浆后分别进行7次净化和测定，RSD在1%~3%。[/align][align=left] （2）7种目标物在1~50mg/L范围内线性相关系数均大于0.999，以取样1.0g计，测定范围相当于0.025~1.25g/Kg。考虑到添加剂的实际使用情况，未对更高含量水平进行验证。[/align][align=left] （3）按三倍信噪比估算，检出限均低于0.1mg/L，远低于常规检测范围，故未进一步对验证检出限。[/align][align=left] （4）进行了1g/Kg和0.1g/Kg两个水平的加标实验，阿斯巴甜的回收率略低，分别为94.1%和95.7%，其余目标物的回收率均在98%~101%之间。推测可能是阿斯巴甜容易被氢氧化锌沉淀吸附，导致回收率略低。[/align][align=left].[/align][align=left][b]4、结论[/b][/align][align=left] （1）使用C-18色谱柱，使用甲醇与pH=5.5的磷酸盐缓冲液按20/80比例作为流动相，可以在等度洗脱条件下实现[font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、咖啡因、阿斯巴甜等[/font]7种物质的完全分离，分析时间约15分钟。[/align][align=left] （2）基于上述色谱分离方法，可以实现7种常见食品添加剂的同时测定，结果较为准确，可以用于生产实践。[/align]

http://www.cheminlife.com/zb_users/upload/2013/4/2013040680891057.jpg 作为世界三大饮料之一的咖啡，其香浓醇厚的口感赢得了全世界人民的深深喜爱，更微妙的是，咖啡还具有提神的功效。随着生活节奏的日益加快，高强度的工作压力要求上班族们必须时刻保持清醒、精力充沛。如今，咖啡已成不少白领们每日不可少的饮品，由于既可使消费者方便购买到口味正宗的咖啡，也能让他们在品尝时拥有一个环境优雅的谈话、休憩场所，星巴克、上岛等连锁咖啡品牌日渐炙手可热。 环球时报讯：研究发现，过度饮用咖啡导致幻听。如果你总是幻听，可能是因为咖啡喝太多。研究人员称，一天5杯咖啡就能让你的耳朵不灵便。咖啡营养成分有哪些？为什么可以提神？又为什么会有苦味？ 每100克咖啡豆中含水分2.2克、蛋白质12.6克、脂肪 16克、糖类46.7克、纤维素9克、灰分4.2克、钙120毫克、磷170毫克、铁42毫克、钠3毫克、维生素B2 0.12克、烟酸3.5毫克、咖啡因1.3 克、单宁 8 克。 咖啡所有成份中最为引人注目的是咖啡因，它属于植物黄质的一种，也叫三甲基黄嘌呤、咖啡碱、甲基可可碱，分子式为C8H10N4O2 。性质和可可内含的可可碱、绿茶内含的茶碱相同。适量的咖啡因能够刺激大脑皮层，促进感觉判断、记忆、感情活动，让心肌机能变得较活泼，血管扩张血液循环增强，并提高新陈代谢机能，咖啡因也可减轻肌肉疲劳，促进消化液分泌。咖啡中的苦味也是来源于咖啡因，烘焙过程对咖啡因破坏极小，约2个小时左右即可被排泄掉，不会聚积在体内。下图是使用Diamonsil C18(2)检测咖啡因的代谢物的谱图色谱柱：Diamonsil C18(2), 150 × 4.6 mm 5 μm 流动相：甲醇: 0.1%甲酸水溶液=10: 90流速：1.0 mL/min柱温：室温检测器：UV 254 nm样品： 1. 黄嘌呤(Xanthine) 2. 7-甲基黄嘌呤(7-Methylxanthine) 3. 1-甲基尿酸(1-Methyluric acid) 4. 3-甲基黄嘌呤(3-Methylxanthine) 5. 1, 3-二甲基尿酸(1, 3-Dimethyluric acid) 6. 可可碱(Theobromine) 7. 1, 7-二甲基黄嘌呤(1, 7-Dimethylxanthine) 8. 茶碱(Theophylline)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/01/201501141546_532264_1610895_3.jpg咖啡可以作为早餐么？咖啡也会上瘾？每天喝多少咖啡可算作过量饮用？后果如何？ 早餐中加一杯咖啡可以提神醒脑、精力充沛，但空腹饮用咖啡往往会引起胃酸、胃痛，原因是咖啡因能使胃酸增多，持续的高剂量摄入会导致消化性溃疡，糜烂性食道炎和胃食管反流病。故胃肠功能不好者不适宜常饮咖啡，尤其是有胃溃疡的人更应谨慎。 通常所说的适量摄取咖啡，是维持在一天不超过2杯的水平上。但不少的青少年由于过量饮用咖啡，已经有“成瘾”的反应，每天都必须饮下大剂量的咖啡，不饮则会失眠、焦虑。在长期摄取的情况下，大剂量的咖啡因是一种毒品，能够导致“咖啡因中毒”。咖啡因中毒包括上瘾和一系列的身体与心理的不良反应，一旦停用会出现比如神经过敏、易怒、焦虑、震颤、肌肉抽搐（反射亢进）、失眠心悸、精神萎顿、浑身困乏疲软等各种戒断症状。虽然其成瘾性较弱，戒断症状也不十分严重，但由于药物的耐受性而导致用药量不断增加时，咖啡因就不仅作用于大脑皮层，还能直接兴奋延髓，引起阵发性惊厥和骨骼震颤，损害肝、胃、肾等重要内脏器官，诱发呼吸道炎症、妇女乳腺瘤等疾病。

咖啡的主要成分是咖啡因，可以作用于神经细胞中一种叫做腺嘌呤核苷的化学物质，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力。 不过，咖啡对有些人是有好处的，但是对某些人却产生负面影响，这主要是与咖啡因的在不同人的代谢能力有关的。 咖啡因在肝脏中被分解产生三个初级代谢产物副黄嘌呤，可可碱，茶碱。咖啡因在摄取后45分钟内被胃和小肠完全吸收。吸收后它会分布于身体的所有器官之中，转化过程符合化学动力学一级反应，这些化合物进一步代谢，最终通过尿液排泄。 如果某些人的这个酶的代谢比较快，摄入的咖啡因很快就会被清除出体外，因此咖啡因起作用的效果就很有限，不能令人产生特别明显的兴奋感。而对于另一些人，他们这个酶代谢速度慢，咖啡因在体内的清除速度很慢，起作用时间也就较长，这样的人往往一杯咖啡就会令他们夜不能寐，有的还会影响食欲，呕吐和痉挛，也可能出现胃炎或心脏病等不良反应。 所以这也解释了一般人普遍担心的咖啡会影响睡眠问题，其实和你对咖啡因的代谢力有很大的关系。由于每个人对咖啡因代谢的能力不同，平均来说，咖啡因在体内的运作，大约能维持3～4个小时，所以即使在晚餐后饮用，也不至于造成太大的困扰。但有些人的代谢力较差，可能会持续作用8～12个小时；或者体质对咖啡因比较敏感，就得特别注意喝咖啡的时间，避免影响作息，因为不论是多喝开水或是增加运动，都无法有效的促使咖啡因快速代谢。*********************************** 以上对咖啡因的代谢方面做了简单的科普，可如何对咖啡因代谢物进行检测呢?由于咖啡因代谢物从化学结构上来看，这一类化合物具有相似的母体结构，不同之处在于甲基的位置，属于位置异构体。（见下图）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601071109_581149_2452211_3.png 对于分离这些代谢物来说，对色谱柱的分离能力要求比较高，下面我们看看使用迪马Spursil色谱柱分离9种咖啡因代谢物的分离效果情况色谱柱：Spursil C18规格：150 x 4.6 mm, 5 μm流动相：甲醇/ 水+1% 乙酸=10/90流速：1.0 mL/min柱温：室温检测器：UV 254 nm样品：1. 尿酸2. 黄嘌呤3. 7- 甲基黄嘌呤4. 1- 甲基尿酸5. 3- 甲基黄嘌呤6. 1,3- 二甲基尿酸7. 可可碱8. 1,7- 二甲基黄嘌呤9. 茶碱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601071110_581151_2452211_3.png总结：Spursil 色谱柱能够在13分钟之内将它们全部分开且达到基线分离～棒棒哒http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif