羧基荧光素羟基琥珀酰

有人问到 NHS化的染料蛋白标记我有跟帖简单回答 为了更清楚说明 并让更多人了解 NHS活化的荧光探针标记反应鉴于 荧光分析于毛细管电泳联用的广阔 前景单独发个主题帖 这大都是我的经验和理解 本人不是有机专业 有关合成方面 说错的地方还请拍砖 NHS化的荧光染料 是指 N-羟基琥珀酰亚胺 酯化的荧光染料标记 即N上的羟基与荧光探针上的羧基酯化反应[IMG]http://www.sigmaaldrich.com/structureimages/16/mfcd00005516.gif[/IMG]这些荧光探针与蛋白或者小分子胺偶联的原理很简单 都是 羧基与胺基反应生成酰胺键但是 一般的羧酸更倾向于 与胺基形成 铵盐因此引入个较好的离去基团就可以使羧基活化 促进羧基与胺基的共价键形成那么琥珀酰就是个很好的离去基团将荧光探针 用NHS进行酯化后 既可以相对稳定的保存，也可以直接用于与胺基分子的偶联，降低反应动力学壁垒与蛋白分子 或是 小分子胺 的偶联，原理相同 都是最终NHS基团离去，剩下的活化羧基与蛋白的胺基反应。在了解了原理的基础上，在进行NHS酯化的荧光探针标记策略上，应当着重注意以下几点：不用过多考虑蛋白的等电点，但需记住 胺基作为亲核基团的这个反应一般在 弱碱条件（pH=8~9）下进行 [B]！[/B]考虑到蛋白的特殊性 配制缓冲液注意需要避免 1）极端pH （2）重金属污染 和（3）过大的离子强度 导致的蛋白变性 [B] ！[/B]考虑到NHS酯化物的活泼程度，NHS化的荧光染料需要现配现加，不宜配制后静置过久。 [B] ！[/B]考虑到 反应原理 ，选择缓冲液和反应容器 需要严格避免胺基或者氨基污染，避免与蛋白分子竞争反应掉荧光染料。 e.g. 常用缓冲液 有 borate buffer，NaHCO3，磷酸盐等等此外，还需注意： A.一般 的protocol都是针对 抗体的，抗体是比较 坚强的蛋白 B.虽说暴露在蛋白表面所有的侧链胺基都有可能跟羧基反应 但是 反应动力学最大的还是 Lys的那个长侧链上的e-伯胺基，因此富含lys的蛋白偶联有福啦。 C.一般来说，反应活性 伯胺＞仲胺 D.别忘了 缓冲液选择也要考虑荧光探针自身特性，如果荧光探针自己带一个 很兴奋的胺基，那么由于自体的二聚反应，这个探针用于标记可能会效率很低当然NHS酯化的商品荧光探针有限，也可以用直接用 带油羧基的荧光探针偶联 蛋白，这时一般考虑使用 NHS EDC活化体系其原理就是 EDC先与 羧基形成个 不稳定的活化中间体然后 NHS接力 替代EDC形成 较稳定的 羧基活化体接下来的 就和上述原理一样了至于 标记上的蛋白 和未标记探针的蛋白 相互分离 每家公司各有法宝 我用过 BD公司的葡聚糖柱洗脱回收 也用CZE分离过小分子胺的标记产物其他更先进的方法就要看 论坛各位大神们的功夫啦附件上传的是 Pierce的NHS化荧光素的protocol 以及 Dynal beads羧基化表面偶联抗体的protocol 本文的 参考资料 有：http://en.wikipedia.org/wiki/N-hydroxysuccinimide[~185396~][~185397~]

【序号】：1【作者】： 张雅伦【题名】：聚乙二醇的N-羟基琥珀酰亚胺琥珀酸酯的合成工艺、苏氨酸负载及催化应用【期刊】：兰州大学【年、卷、期、起止页码】：2017【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C475KOm_zrgu4lQARvep2SAkOTSE1G1uB0_um8HHdEYmZhkBIZJEK02VaOdneXeYijuWwpOfpIhlJTd0mjIpAyz7&uniplatform=NZKPT

我现在在用荧光法测羟基自由基，捕获剂是对苯二甲酸，但是不知道怎么测羟基自由基的绝对含量，希望大家告诉我。谢谢！

[color=#333333]求助各位高手帮帮忙，最近在做醋酸纤维素琥珀酸酯乙酸的检测，按照[/color][color=#333333]2015[/color][color=#333333]版药典方法检测，出峰的时候发现琥珀酸有两个峰出现，不知道是什么原因，琥珀酸的对照买的是麦克林公司的试剂，纯度也都在[/color][color=#333333]99.5%[/color]

【序号】：1【作者】：刘梦珍1陈杰烽2邓燧煵【题名】：同时测定羧甲基甲壳素的羧基取代度和脱乙酰度的方法【期刊】：造纸科学与技术 . 【年、卷、期、起止页码】：2019 ,38 (02)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=hyVvMdIOuYCFe8L4Dgbxk8fUuwT_l0OtQ6U_0KMdPmE6rT-BSIcYRyc_5vOCID3lPuHacnfKnD3Q6xBtnskhO9PjXhWPkcmb95mMcfvdX7fwFjeKPoGsO6U6-INmaHqUOsVhpl25nzdsUwMqXPJ7mrABDjv9x5-KIsAJAk8l0fPHQVcObbqQvzo0w8Dt9dA2Va_DLRL89Ok=&uniplatform=NZKPT&language=CHS

[color=#333333]求助各位高手帮帮忙，最近在做醋酸纤维素琥珀酸酯乙酸的检测，按照2015版药典方法检测，出峰的时候发现琥珀酸有两个峰出现，不知道是什么原因，琥珀酸的对照买的是麦克林公司的试剂，纯度也都在99.5%。[/color][color=#333333][/color]

最近做了一张水杨酸的氢谱（邻羟基苯甲酸）。在10.3ppm处出现一个很尖锐的峰，在约11ppm的位置有一个很宽的薄，应该是羧基上的氢没错，那10.3ppm处的峰是不是酚羟基的氢峰呢？如果是的话，为什么活泼氢的峰会那么尖锐呢？是因为氢键吗？附：谱图上6ppm以下是没有峰的。

我想用荧光法测溶液中羟基自由基的浓度，但是不知道该选择哪种捕捉剂

有机合成中羧基保护方法简介保护羧基的方法主要是酯化法,但在某些情况下,也可以用形成酰胺或酰肼等方法来进行保护.1.酯化法保护羧基:甲酯和乙酯 甲酯和乙酯作为羧酸的保护基对一系列合成操作十分适用。例如,以酯的形式进行的烷基化反应和各种缩合反应,随后酯基在酸或碱的催化下水解除去,偶尔酯基也可用热解反应消去。但简单的烷基酯作为羧酸的保护基在有些情况下并不适用,其原因往往是由于最后需用皂化反应来除去酯基。因此,实际上在合成中常甲基和乙基的衍生物取而代之。甲基的衍生物主要是苄基类型,可用温和条件下的酸处理或氢解脱除。乙基衍生物主要是β,β,β2三氯乙基等2.酯化法保护羧基:叔丁酯 叔丁酯不能氢解,在常规条件下也不被氨解及碱催化水解,但叔丁基在温和的酸性条件下可以异丁烯的形式裂去。此性质使叔丁基在那些不能进行碱皂化的情况下特别吸引人,例如:用于酮、β2酮酯、α,β不饱和酮和对碱敏感的α2酮醇以及肽的合成。在青霉素的合成中,可选择性地裂开叔丁酯以便形成β2内酰胺 在菌霉素的合成中和在容易还原的酮的制备中,都可用叔丁基来保护羧基。四氢吡喃酸具有和叔丁酯相似的对酸的不稳定性,这一保护基也类似地用于丙二酸酯类型的酮和酮酯的合成中。3.　酯化法保护羧基:苄基、取代苄基及二苯甲基酯类 这类酯保护基的特点在于它们能很快地被氢解除去。在青霉素合成中,苄酯不被温和的酯水解条件破坏,最后需由氢解除去苄酯 在谷酰胺和天门冬酰胺的合成中,以及在L2谷氨酸和L2天门冬氨酸酯的制备中,苄酯的性质都能典型地显示出来。Bowman 和Ames 将苄基酯用在活性酯(有α2活泼氢) 的烷基化或酰基化中,此法曾出色地完成脂肪酸、酮、二酮和α2醇酮的合成。芳环上或次甲基上有取代基的苄基在用酸性试剂脱去时,其敏感性可有大幅度的改变。Stewevr 在酯肽类合成中利用了亚甲苄酯易于催化脱去的优点,用其代替叔丁酯。苄酯和对硝基苄酯也可作为羧基的保护基,一个典型的例子就是其在氨基的酰化衍生物合成中的应用。在苯酯和缩酚酸的合成中,二苯甲酯具有相似的作用,但二苯甲酯在酸存在条件下的溶剂化分解太快,因此在酸性条件下不易作羧基保护基。总之,这类酯是一种有价值的保护基,其制备可用经典的方法及前述的反应制备。4.用酰胺和酰肼来保护羧基 在有限的范围内人们采用酰胺和酰肼的形式保护羧基,从其解脱方式的角度补充了酯类保护作用的不足。酰胺和酰肼对解脱酯类的温和碱性水解条件稳定,但酯类对能有效脱解酰胺的亚硝酯和用于裂解酰肼的氧化剂又均稳定,二者可以互补。制备酰胺和酰肼的经典方法是以酯或酰氯分别与胺或肼作用制备,也可直接从酸制得。酰肼已被用于抗菌素和肽的合成,在肽的合成中它们可被亚硝酸转化为叠氮化物,使得缩合反应容易发生。5.　酯的保护 酯和内酯的保护可视为羧基的间接保护,而且酯须有α2活泼氢,否则反应很复杂。酯在引进保护基后,可在很多条件下保持稳定,如HOAc/ H2O/ THF(25 ℃,1 h) ,KOH/MeOH(25 ℃,12 h) ,LiAlH4/ Et2O(25 ℃,3 h) ,CH3Li/Et2O(25 ℃,2 h) 等。可用汞盐或三氟化硼脱去脂保护基 综上所述,保护羧基的方法虽然不多,但作为保护基的酯的种类却不少,且各有特色。近年来有关羧基保护的研究主要在肽、氨基酸、抗菌素等的合成方面,且应用日见广泛。

下载地址http://www.instrument.com.cn/download/shtml/022524.shtml用邻羧基苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定定影液中微量银用三溴偶氮胂直接光度法测定锌合金中痕量铝用5'-硝基水杨基荧光酮光度法石灰石、石英砂、石膏中微量铝用邻氯苯基荧光酮光度法测定钢铁、石灰石、石英砂样品中微量的铝用二硫代二安替比林甲烷光度法测定大苏打及洗硫废水中微量砷用对溴苯酚偶氮若丹宁光度法测定废水中金用1-(2-羟基-3-甲氧基苯甲醛缩氨基)-8-羟基-3,6-萘二磺酸光度法测定氧化镁中微量硼二溴对磺酸基偶氮胂光度法测定硅钡孕育剂中痕量钡用二溴对甲基偶氮甲磺光度法测定陶瓷电容钛酸钡烧结物中微量钡用二溴对甲基偶氮溴羧光度法测定钛酸钡烧结物中微量钡用对氯偶氮氯膦光度法测定锡基、铅基合金和紫铜中痕量的铋用二溴对甲基偶氮羧胂光度法测定铜合金中痕量铋二溴对氯偶氮羧胂光度法药物中微量铋的测定用三溴偶氮氯膦光度法测定粗铅和人发中痕量铋用2-(3,5-二溴-2-吡淀偶氮)-5-二乙氨基酚光度法测定电解铜、纯镍和纯铝等金属材料中微量铋用二溴苯基荧光酮光度法测定铜合金中微量铋2,3,4-三羟基-4'-碘-偶氮苯光度法测定铜合金中铋用三羟基-4'-磺基偶氮苯光度法测定铜合金、含铜试样及铜矿样品中微量铋二溴对磺酸基偶氮胂光度法测定锰矿中痕量钙间羧基偶氮羧光度法测定钨酸钠中痕量钙用间氯偶氮安替比林光度法测定水中钙间氯偶氮安替比林光度法测定岩石矿物中微量钙间氯偶氮安替比林光度法测定烧结矿、铁矿石中钙间氯偶氮安替比林光度法测定水泥生料中钙用间氯偶氮安替比林测定血清中钙用邻羧基苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定废水中微量镉用1-(5-羧基-1,3,4-三氮唑基)-3-硝基苯基偶氮)苯基]重氮氨基偶氮苯光度法测定环境水样及工业废水中微量镉用4-氯-2-磺酸基苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定废水中微量镉用3,5-二溴-2-吡啶重氮氨基偶氮苯光度法测定废水中微量镉用2-羟基-3-羧基-5-磺酸基苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定人发中微量镉用2-羟基-5-磺酸基苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定锌合金中微量镉用4-甲基-2-磺酸基苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定废水中微量镉用邻羟基苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定电镀废水中微量镉用苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定岩石试样中痕量镉用二溴对甲偶氮氯磺光度法测定钢铁样品中铈组稀土用二溴对甲基偶氮溴磺光度法测定钢铁中铈组稀土总量用二溴对氯偶氮甲磺光度法测定钢铢中铈组稀土总量对硝基偶氮氯膦光度法测定镍基合金中铈组稀土对硝基偶氮氯膦光度法测定矿石中铈组稀土对硝基偶氮氯膦光度法测定铜基合金中微量铈及铈组稀土用间磺酸基偶氮氯膦光度法测定钨铈合金中铈对乙酰偶氮氯膦光度法测定钢铁中稀土总量用二溴对磺酸基偶氮氯膦光度法测定合金钢中稀土总量用二溴对甲基偶氮羧胂光度法测定钨铈合金中铈二溴对氯偶氮羧胂光度法测定生物样中微量的铈用二溴对硝基偶氮氯膦光度法测定镍基合金中铈组稀土用二溴对硝基偶氮氯膦光度法测定钼钛锆铈合金中的铈二溴羧基偶氮胂光度法测定钢铁中铈组稀土二溴羧基偶氮胂光度法测定土壤中铈组稀土元素PMBP-石油醚萃取分离二溴硝基偶氮氯膦光度法测定显色管玻璃中铈二溴硝基偶氮氯膦光度法测定钼钛锆铈合金中的铈间硝基偶氮氯膦应用此法测定了废水、铁基、镍基合金],铝合金和独居石中的铈组稀土二溴对甲基偶氮磺光度法测定钢铁中铈组稀土总量二安替比林苯乙烯基甲烷光度法测定氧化钇中痕量铈二安替比林苯乙烯基甲烷光度法测定镁合金中痕量铈Co 苦胺酸偶氮变色酸光度法测定钢铁中微量钴用5-Br-PADAP光度法测定地质样品及钢铁中微量钴用meso-四（4-甲基-3-磺酸基苯）卟啉光度法测定合成氨触媒、冶煤炼厂工业水中微量钴二溴对氯偶氮氯膦光度法测定铝合金中微量铜用三溴偶氮胂直接光度法测定铝合金中痕量铜用间磺酸基偶氮安替比林光度法测定废水中微量铜间氯偶氮安替比林光度法测定铝合金中微量铜间氯偶氮安替比林光度法测定废水中微量铜 用3,5-diCI-PADMA光度法测定铝合金中微量铜用Meso-四(4-甲氧基苯基)卟啉光度法测定测定地下水中微量铜用Meso-四(4-甲基-3-磺酸基苯)卟啉光度法测定铝合金、人发、面粉及水样中痕量铜二安替比林苯乙烯基甲烷光度法测定电镀废水中的铬(VI)和总铬量用二溴对氯偶氮氯膦光度法测定铝合金中微量铁用3,5-diCI-PADMA光度法测定铝及铝合金中微量铁用5-Br-PADAP光度法测定菱镁矿中的铁和汔油中的环烷酸铁用二溴苯基荧光酮光度法测定矿石中微量镓用水杨基荧光酮光度法测定铜锌矿、铅锌矿中微量锗用邻硝基苯基荧光酮光度法测定铝合金和阳极泥中的微量锗三甲氧基苯基荧光酮光度法测定食品中微量锗用邻甲氧基苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定工业废水中痕量汞用苯基重氮氨基偶氮苯光度法测定废氢化汞触媒浸取液、河水及茶叶中微量汞用5-Br-PADAP光度法测定硝酸钠和氯酸钾中微量IO3-用邻氯苯基荧光酮光度法测定锡箔和铅挖样中微量铟用5-(5-硝基-2-吡啶偶氮)-2,4-二氨基甲苯光度法测定催化剂中微量铱二溴对氯偶氮胂光度法测定铝合金中痕量镁用Meso-四(4-甲氧基苯基)卟啉光度法测定自来水中微量锰二安替比林苯乙烯基甲烷光度法测定碳钢及低合金钢中锰用氯磺酚S光度法测定钢铁中的钼用邻硝基苯基荧光酮光度法测定合金钢中微量钼二溴羟基苯基荧光酮光度法测定钢中痕量钼用二溴邻硝基苯基荧光酮光度法测定低合金钢中微量钼三羟基-4'-磺基偶氮苯光度法测定低合金钢或合金铸铁中微量钼对羧基苯基荧光酮光度法测定钢铁中微量钼对羧基苯基荧光酮光度法测定食品中微量钼用2-(3,5-二溴-2-吡淀偶氮)-5-二乙氨基酚光度法测定环境水中微量NO2-用间乙酰基氯磺酚光度法测定钢中铌

[size=15px][font=&][font=宋体]对乙酰氨基酚（[/font][font=&]APAP[/font][font=宋体]）过量是药物性肝损伤的主要原因。[/font][font=&]Sirtuins 5[/font][font=宋体]（[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]）与各种肝脏疾病的发展有关。然而，其在[/font][font=&] APAP [/font][font=宋体]诱发的急性肝损伤（[/font][font=&]AILI[/font][font=宋体]）中的作用仍不清楚。[/font]SIRT5[/font][font=宋体]在[/font][font=&]AILI[/font][font=宋体]中显著下调，并且[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]耗竭加剧了体内和体外的线粒体氧化应激。从机制上讲，[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]在对乙醛脱氢酶[/font][font=&]2[/font][font=宋体]（[/font][font=&]ALDH2[/font][font=宋体]）的[/font][font=&]K385[/font][font=宋体]位点进行去琥珀酰化，从而保持[/font][font=&]ALDH2[/font][font=宋体]的酶活性，进而抑制炎症和线粒体氧化应激。此外，[/font][/size][font=宋体][size=15px]研究发现葛根素（[/size][/font][font=&][size=15px]puerarin[/size][/font][font=宋体][size=15px]）可促[/size][/font][size=15px][font=宋体]进[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]去琥珀酰化酶活性并缓解[/font][font=&]AILI[/font][font=宋体]。 [size=15px][b]1、AILI 中肝细胞SIRT5表达显著下调[/b][/size] [size=15px]作者首先通过RNA测序发现APAP[/size][font=宋体]处理[/font][size=15px]后，肝脏组织中 SIRT5 表达显著下调。进一步验证SIRT5参与AILI，发现APAP处理的小鼠血清ALT和AST水平均不同程度升高，且q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]、Western blott和免疫组化检测显示APAP处理后肝脏中SIRT5下调，表明SIRT5是AILI发展的关键介质 [/size][/font][/size][b][font=&][color=#0070c0]2[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]SIRT5 [/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]改善[/color][/font][font=&][color=#0070c0]APAP[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]诱导的肝毒性[/color][/font][/b][size=15px][font=宋体][size=15px] [/size] [size=15px]作者构建了SIRT5-KO小鼠和AAV介导的肝脏特异性SIRT5过表达小鼠，以进一步研究SIRT5在AILI中的作用。结果显示APAP处理后WT小鼠血清ALT和AST水平显著升高，且SIRT5-KO小鼠的血清ALT和AST水平升高更为明显，肝脏坏死显著加重，肝细胞死亡率更高，而SIRT5过表达显著改善APAP引起的肝脏损伤，肝细胞死亡率显著降低，结果表明 SIRT5 可减轻 APAP 诱导的肝毒性 [/size] [size=15px][b]3、SIRT5抑制APAP诱导的肝脏炎症[/b][/size] [size=15px]多项研究表明APAP 引起的肝毒性与炎症密切相关。作者发现接受APAP处理的SIRT5-KO小鼠CD11b和Ly6g阳性炎症细胞数量显著增加，肝脏中炎症细胞因子的水平显著升高，且NF-κB 信号的激活增加，而肝脏特异性SIRT5过表达小鼠则相反，这些结果表明SIRT5可抑制APAP诱导的AILI肝脏炎症 [/size] [size=15px][b]4、SIRT5 抑制AILI 中APAP诱导的线粒体氧化应激[/b][/size] [size=15px]在AILI过程中，细胞色素P450酶产生过量的毒性反应代谢物NAPQI，消耗GSH并与线粒体蛋白共价结合形成APAP加合物，导致线粒体功能障碍、ROS产生和线粒体细胞死亡因子的释放，最终导致肝细胞死亡。作者研究了SIRT5 KO或过表达对APAP诱导的线粒体氧化应激的影响，体内和体外实验结果表明SIRT5抑制了AILI期间的线粒体氧化应激 [/size] [size=15px][b]5、SIRT5缺乏导致AILI中蛋白质琥珀酰化全面增加[/b][/size] [size=15px]鉴于SIRT5在去琥珀酰化中的作用明确，作者采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS分析了APAP处理的WT和SIRT5-KO小鼠肝脏中的琥珀酰化。结果显示共有465种蛋白质中的953个位点表现出差异琥珀酰化，其中359种蛋白质中的802个位点显示琥珀酰化水平增加，而106种蛋白质中的151个位点显示琥珀酰化水平降低，结果表明SIRT5缺陷导致AILI中蛋白质琥珀酰化整体增加，这在体内和体外得到了进一步的验证 [/size] [size=15px][b]6、SIRT5在K385残基处使ALDH2去琥珀酰化[/b][/size] [size=15px]SIRT5缺乏导致参与线粒体氧化应激的关键酶ALDH2的琥珀酰化显著上调。进一步探索SIRT5调控ALDH2琥珀酰化的具体分子机制，免疫荧光发现SIRT5与ALDH2共定位，免疫共沉淀实验表明SIRT5与ALDH2互作，且SIRT5敲除显著上调了体内和体外ALDH2的琥珀酰化水平，但对ALDH2的总蛋白浓度没有影响，相反SIRT5过表达显著降低ALDH2的琥珀酰化水平。进一步检测发现SIRT5缺乏会抑制ALDH2的酶活性，而SIRT5过表达会增加ALDH2的活性。[/size] [size=15px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS显示ALDH2中三个位点（K370、K377、K385）琥珀酰化显著增加，其中K370和K385在不同物种中高度保守，作者通过将赖氨酸（K）突变为谷氨酸（E）模拟琥珀酰化，将K突变为精氨酸（R）模拟去琥珀酰化，发现K385是ALDH2上的关键琥珀酰化位点，且K385而非K370的琥珀酰化影响ALDH2的酶活性。此外，SIRT5主要通过对ALDH2在K385残基上的去琥珀酰化来减轻AILI [/size] [size=15px][b]7、ALDH2在K385残基处的去琥珀酰化可保护小鼠免受 AILI的侵害[/b][/size] [size=15px]为了研究ALDH2-K385去琥珀酰化在AILI中的作用，作者建立了AAV-GFP、AAV-ALDH2-WT和AAV-ALDH2-385K-E过表达转染小鼠，并对其进行APAP处理。结果显示APAP 给药增加ALDH2的琥珀酰化，而ALDH2-385K-E小鼠肝脏中ALDH2的琥珀酰化程度低于ALDH2-WT小鼠。此外，在APAP给药后，ALDH2-385K-E小鼠的转氨酶水平、肝坏死面积和肝细胞死亡增加，线粒体氧化应激和炎症加重。数据表明ALDH2在K385的去琥珀酰化可保护小鼠免受AILI的侵害 [/size] [size=15px][b]8、[/b][/size][size=15px][b]K385 [/b][/size][size=15px][b]位点ALDH2去琥珀酰化介导SIRT5对AILI的保护作用[/b][/size] [size=15px]为了研究SIRT5对ALDH2去琥珀酰化在体内AILI中的作用，作者通过尾静脉注射表达 AAV-GFP、AAV-ALDH2-WT或AAV-ALDH2-385K-E的相关AAV，在SIRT5-KO小鼠中过表达各种形式的ALDH2，这些小鼠随后接受APAP治疗。结果显示SIRT5缺乏显著升高血清转氨酶水平，在APAP处理后引起坏死和肝细胞死亡，而 ALDH2-WT的过表达显著改善了肝损伤。此外，ALDH2-WT小鼠的肝脏氧化和炎症明显减少，但ALDH2-385KE小鼠的肝脏氧化和炎症没有减少，数据表明ALDH2在K385处的去琥珀酰化介导了SIRT5对AILI的保护作用 [/size][size=15px][b]9、葛根素促进SIRT5减轻AILI[/b][/size] [size=15px]为探究SIRT5激动剂对AILI的治疗作用，作者通过虚拟筛选寻找能与SIRT5结合的天然化合物。根据对接结果筛选出10个亲和能最低的化合物，进一步考察其对SIRT5去琥珀酰化酶活性的影响，其中葛根素对SIRT5去琥珀酰化酶活性的提高最为显著。分子对接分析显示SIRT5能与葛根素结合，分子动力学模拟在原子水平上证实了SIRT5-葛根素复合物的结合稳定性和动力学。接着在体内验证了葛根素对APAP诱导的肝损伤的影响，发现葛根素组在APAP刺激后血清AST和ALT水平降低，肝脏坏死和肝细胞死亡减少，APAP 诱导的氧化应激和炎症明显被抑制。结果表明葛根素通过药理学激活SIRT5减轻AILI，提示葛根素是临床治疗AILI的一种有前途的药物[/size][/font][/size]

需要购买原儿茶醛 红花苷 Crocin 红花素 羟基红花黄色素C 羟基红花黄色素K 丹酚酸B 10羟基-a-葵烯酸，请问哪里有卖？

荧光素是具有光致荧光特性的染料，荧光染料种类很多目前常用于标记抗体的荧光素有以下几种。 [size=4][b]1．异硫氰酸荧光素[/b][/size]　　(fluorescein isothiocyanate, FITC) FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。有两种异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。 [size=4][b]2．四乙基罗丹明[/b][/size]　　(rhodamine, RB200) RB200为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为 570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈现橘红色荧光。 [size=4][b]3．四甲基异硫氰酸罗丹明[/b][/size]　　(tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC) TRITC为罗丹明的衍生物，呈紫红色粉末，较稳定。最大吸收光波长为 550nm，最大发射光波长为620nm，呈现橙红色荧光，与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。 [size=4][b]4．酶作用后产生荧光的物质[/b][/size]　　某些化合物本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如，4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮，后者可发出荧光，激发光波长为360nm，发射光波长为450nm。其他如碱性磷酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基苯乙酸等。 5．镧系螯合物 某些3价稀土镧系元素如铕 (Eu3+)、铽 (Tb3+) 等的螯合物可发射特征性的荧光，而且激发光波长范围宽、发射光波长范围窄、荧光衰变时间长，最适合于时间分辨荧光免疫测定。

食品安全国家标准 食品营养强化剂 维生素E琥珀酸钙

[color=#444444]本人最近按2015版药典做了一个药用辅料-醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯的的游离乙酸的含量测定实验。实验过程如下：[/color][color=#444444] 游离乙酸、琥珀酸 取本品0.102g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入磷酸盐溶液（取0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至7.5）4.0ml，搅拌2小时，加磷酸溶液（取1.25mol/L磷酸1ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀）4.0ml，强力振摇，离心，上清液作为供试品溶液；精密称取琥珀酸0.13g，置100ml量瓶中，加水适量，振摇使完全溶解，加水至刻度，摇匀，作为琥珀酸贮备液；取加有水20ml的100ml量瓶，称重，精密加入冰乙酸2ml，再称重，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取6ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为乙酸贮备溶液；精密量取乙酸贮备液和琥珀酸贮备液各4.0ml，置同一25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512)试验。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.02moI/L磷酸二氢钾溶液（用6mol/L磷酸溶液调pH值至2.8）为流动相，流速每分钟1ml，检测波长为215nm。取对照溶液10μl， 注入液相色谱仪，按琥珀酸峰计算，理论板数不得少于8000。取供试品溶液与对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，按干燥品计算,游离乙酸和琥珀酸总量不得过1.0%。[/color][color=#444444]计算公式： 游离乙酸含量=0.0768（WA/(W(1-干燥失重))）（γUA/γSA）[/color][color=#444444] 式中 WA为乙酸贮备溶液中冰乙酸量，mg；[/color][color=#444444] W为供试品的取样量，mg；[/color][color=#444444] γUA、γSA为供试品溶液、对照溶液中乙酸的峰面积。[/color][color=#444444] 游离琥珀酸含量=1.28（WS/(WUS(1-干燥失重))）（γUS/γSS）[/color][color=#444444] 式中 WS为琥珀酸贮备液中琥珀酸量，mg；[/color][color=#444444] WUS为供试品取样量，mg；[/color][color=#444444] γUS、γSS为供试品溶液、对照溶液琥珀酸的峰面积。[/color][color=#444444]我的问题是，根据“干燥品计算,游离乙酸和琥珀酸总量不得过1.0%”这句话，游离乙酸含量的最后计算的结果要不要乘以100%，比如我最后计算结果是0.0139，如果这个结果再乘以100%，就变为1.39%，从而超过限度，那么就需要重新做实验复核一遍。[/color]

请问有没有哪位高人做过羟基喜树碱盐型和酯型的荧光检测啊，想参考下液相图谱，查文献查不到，最好能告知色谱条件，万分感谢

塑料羟基值测定方法

[font=&][color=#333333]湖泊是自然界中的重要水域，对于维护生态平衡、提供水资源、净化空气等方面具有重要意义。然而，随着人类活动的加剧，湖泊水质问题日益严重，其中BOD(生化需氧量)含量的异常增高是一个关键指标。那么，如何检测湖泊BOD呢？本文将为您介绍几种科学的检测方法。[/color][/font][font=&][color=#333333]一、化学需氧量法(CDO法)[/color][/font][font=&][color=#333333]化学需氧量法是一种广泛应用于水质监测的方法，它可以准确测量水中有机物的总量。CDO法的基本原理是通过氧化剂的作用，将水中的有机物转化为无机物，再通过化学反应计算出需氧量。这种方法操作简便，测定结果较为准确，但需要注意的是，某些有机污染物可能存在生物降解过程，导致测定结果偏低或偏高。[/color][/font][font=&][color=#333333]二、生物需氧量法(BDO法)[/color][/font][font=&][color=#333333]生物需氧量法是另一种常用的水质监测方法，它主要针对微生物活动进行测定。BDO法的基本原理是，在一定条件下，微生物可以将有机物分解为无机物和二氧化碳、水等产物，其中产生的BDO气体可以用来表示微生物对有机物的消耗速率。通过对比不同时间点BDO的变化，可以推算出湖泊中有机物的含量以及微生物的活动情况。然而，BDO法也存在一定的局限性，如对温度、pH等环境条件的敏感性较高，且难以区分不同类型的有机污染物。[/color][/font][font=&][color=#333333]三、电化学法(EC法)[/color][/font][font=&][color=#333333]电化学法是一种利用电化学传感器检测水中污染物的方法。EC法的基本原理是，将传感器浸入待测水中，当水中存在有机物时，会引发电极表面的电位变化。通过对这种电位变化进行分析，可以计算出水中有机物的含量。EC法具有灵敏度高、响应速度快的优点，但需要选择合适的电极材料和适当的参比溶液才能获得准确的结果。[/color][/font][font=&][color=#333333]四、荧光法(DFM法)[/color][/font][font=&][color=#333333]荧光法是一种基于荧光指示剂与有机物相互作用进行检测的方法。DFM法的基本原理是，将荧光指示剂与待测水中的有机物混合后，在特定波长的紫外线照射下产生荧光信号。通过测量荧光信号强度的变化，可以推算出有机物的浓度。荧光法具有选择性好、重现性高等优点，适用于多种类型的有机污染物的检测。但需要注意的是，荧光信号受到光强度、光源类型等因素的影响，因此需要优化实验条件以提高检测准确性。[/color][/font][font=&][color=#333333]检测湖泊BOD的方法有很多种，如化学需氧量法、生物需氧量法、电化学法和荧光法等。不同的方法具有各自的优缺点，需要根据实际情况选择合适的检测手段。同时，为了保护湖泊生态环境，我们还应该加强对污染物排放的监管和治理，减少对湖泊水质的影响。[/color][/font][font=&][color=#333333][/color][/font]

请问有谁做过天然江河水或湖泊水的金属元素分析吗？能不能说一下里面一般会有哪些金属元素，它们的浓度会是一个什么样的范围情况？我知道这个肯定没标准答案，希望哪位大牛做过的讲一下你的分析结果（包括特定的地点和样品来源）~~ 先谢过了~~

3、 取血蓝蛋白(lemocyanin) 25mg, 溶于10mmol/L PBS （pH8.0）液中（III液） 4、 将II液与III液混合，在磁力搅拌下逐滴加入I液（余下0.5ml） 5、 室温下避光搅拌1小时，逐滴加入余下的I液 6、 4度搅拌12小时 ;7、 静置10小时（4度） 8、 有蒸馏水使之充分透析（约48小时），得免疫原。 3、孕酮与与β-半乳糖苷酶偶联的N-羟琥珀酰亚胺酯法 1、 用二垩烷(dioxane)溶解孕酮-11-半琥珀酸酯，配成浓度为100m mol/L的溶液。 2、 加羟琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide) 100 m mol/L 和 DCC（二环已基碳化二亚胺），200 m mol/L, 4度反应16小时。 3、 用簿层扫描方法纯化(氯仿：水=9：1) 4、 按孕酮/酶摩尔浓度比约为10的比例，将上述溶液加入到酶液（用pH7.4，浓度50 m mol/L的磷酸缓冲液溶解）中。 5、 （二）含有氨基或可还原硝基半抗原的偶联 1、芳香胺类半抗原与蛋白质重氮化偶联的操作步骤 6g1、 用0.1 mol/L HCl溶液配制 4 m mol/L浓度的半抗原。 2、 滴加1％NaNO2(过量)，4度持续搅拌。NaNO2的加入量可用淀粉-碘化物试纸或在白色磁砖上加1％淀粉和50m mol/L KI进行监控。游离亚硝酸可将氧化物氧化成碘，碘再与淀粉反应变成蓝黑色。 3、 溶液变成蓝黑色后，继续反应15分钟。4、 用pH9.0、浓度为200m mol/L的硼酸或碳酸缓冲液溶解蛋白。 5、 边搅拌，边加入重氮化的半抗原（防止局部发生酸过量现象），调节pH到9.5。 6、 冰箱中搅拌反应2小时，不断调节pH到9.0。 7、 用PBS透析2天 8、 -20度保存（浓度为20mg/mL） 双功能的酰亚胺酯(imidate esters)可以氨基反应，形成脒。例如：用二甲基已二酰亚胺酯(dimethyladipimide)将去甲基三正喋呤(desmethylmortriptyline)与β-半乳糖苷酶偶联。2、、应用双功能酰亚胺酯（imidate esters）制备去甲基三正喋呤-与β-半乳糖苷酶标记特的操作步骤1、 用含5％（W/V）N-乙基吗啉的无水甲醇0.4ml,在室温下溶解570ug去甲基三正喋呤和488ug 二甲基已二酰亚胺酯(dimethyladipimide)(A液) 2、 取与β-半乳糖苷酶 100 ug, 溶于pH9.9的100 m mol/L碳酸缓冲液（含MgCl2 10m mol/L,2-巯基乙醇 10 m mol/L 0.1ml(B液)3、 将A液倒入B液。4、 20度反应90分钟后，加含NaCl 100 m mol/L, MgCl2 10 m mol/L和2-巯基乙醇 10 m mol/L、pH7.5的Tris-醋酸缓冲液(50m mol/L) 1ml, 终止反应。 5、 过sephadex G-25, 去除小分子物质，得酶标记物（约75％的酶与半抗原结合，但用三正喋呤代替去甲三正喋呤(demethylmortriptyline )进行偶联，则只有15％的酶与之结合。 （三）含巯基半抗原的偶联 可用马来酰亚胺方法与蛋白偶联。此外，将载体蛋白用溴乙酰胺(bromoacetamide)激活。或将载体蛋白与半抗原在pH4.0的醋酸缓冲液中，通过过氧化氢的作用形成二硫键，也可以将半抗原连接到蛋白质分子上。 （四）含羟基的半抗原偶联 醇类羟基通过形成半琥珀酸酯转化为羧基的操作步骤 1、 15g 2,2,2-三氯乙醇（2,2,2-trichloroethanol）,12g 琥珀酸酐(succinic anhydride)和8.7ml 三乙基胺(triethylamime)用100 ml乙酰乙酯溶解。 2、 加热回流1小时。 3、 减压蒸馏去溶剂，,残余物用5% NaHCO3水溶液溶解。4、 用乙醚洗涤两次，然后用H2SO4进行s酸化（pH到2.0）. 5、 用水洗涤固形物（为三氯乙基半琥珀酸酯）两次，用氯仿-已烷使其结晶（产量约75％，熔点88-89度） 6、 取2.5g 半琥珀酸酯溶于6.5ml 亚硫酰氯(thionyl chloride)中，65度加热30分钟。 7、 减压蒸发，干燥1小时（高度真空条件下）。 8、 将上述产生（2，2，2-三氯忆基琥珀酰氯）溶于15ml N,N-二甲基-乙酸乙酰胺(N,N-dimethylethylacetamide)中，室温搅拌反应2小时。 9、 65度真空蒸发后，用异丙醇使结晶析出来（得盐酸化的结晶---5`-酯约84％，熔点160度）。 10、用溶于二甲基甲酰胺中的锌和醋酸解离三氯乙酯，得f半抗原-半琥珀酸酯，这样引和的羧基可与蛋白质偶联（如用碳化二亚胺化）。 半抗原用NaIO4氧化其中的糖苷醇后再与蛋白质偶联的操作步骤 1、 20mg 腺苷溶于1ml 100m mol/L NaIO4溶液中，4度避光反应30分钟。2、 加1滴乙二醇(得A液) 3、 将A液加入到β-半乳糖苷酶液（20mg/ml,用150m mol/L NaCl,10m mol/L MgCl2水溶液溶解，用3％K2CO3调节pH至9.0）中 4、 4度反应2小时，期间不断调节pH9.0 5、 加入临时配制的50 mg/ml NaBO4溶液，用量为反应体积的1/10。 4度反应过夜。 6、 用含有MgCl2 10m mol/L,2-巯基乙醇 10 m mol/L、 NaCl 100 m mol/L的50 m mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)透析(更换透析液数次) （五）含酮基或酮基半抗原的偶联是将酮基经羟胺类化合物处理变成肟类化合物，再进一步将肟类化合物中的羟基，衍变成羧基化合物，再进一步进行含羧基半抗原的偶联操作。这类羟胺类化合物主要有：氨氧乙酸aminoxy acetic acid 或羧甲氧胺carboxymethoxyl amine 或者盐酸羟胺酮基的类固醇分子中引入羧基的操作步骤 1、 在200ml 乙醇中，加入O-(羧甲基)羟胺 （O-(carboxyl)hydroxylamine）和酮基半抗原，使其浓度分别为10m mol/L 和4m mol/L H 2、 加热回流90分钟 3、 旋转蒸发，减少容积，然后加水至40ml，用乙醚抽提 4、 用水洗涤乙醚抽提物，用Na2SO4干燥成白色粉末。（六）、其他半抗原的偶联 虽含有游离基团，但因这些基团对于维其生物活性十分重要，因些不能直接用来与载体蛋白 偶联8制备雌二醇-6-肟的操作步骤 a、 雌二醇二醋酸盐的制备 1、 1g雌二醇溶于14ml 吡啶及3.5ml 醋酐中2、 加热回流1小时，冷却后倾入冰水中。 3、 收集白色晶体，得产物约1.1g（熔点126到127度）b、 雌二醇-6-酮-二醋酸盐的制备 4、雌二醇二醋酸盐1.1g，滴加冰醋酸3.8ml 溶解后加含0.93g CrO3的含水冰醋酸6.35ml (H2O:Hac=0.75:5.6) 5、室温搅拌1小时，静置24小时 6、用水稀释，用乙醚提取4次 7、用蒸馏水洗2次8、减压蒸馏，得结晶油状渣物。 9、用90度烘干20分钟，得粗制品约500mg 10、用11ml 无水乙醇溶解粗制品，再加1.1ml 冰醋酸及1.5g吉纳你特T试剂(Girad T)，回流1小时。 11、冷却后，用冰致冷的蒸馏水稀释，用2.5mol/LNaOH调节pH至6.0-6.2. 12、用乙醚抽提3次，弃去乙醚。 13、水层用浓盐酸酸化15、用乙醚抽提3次。16、合并乙醚抽提液，用0.125mol/L碳酸钠溶液洗1次，用蒸馏水洗3次。

现在在纳米金上修饰了一个羧基，要活化这个羧基，怎样活化？请求高手或大侠能指点一下，小弟感激不尽！

【序号】：1【作者】： 郭睿郭煜宋博【题名】：琥珀酰壳聚糖的合成及絮凝性能【期刊】：精细化工. 【年、卷、期、起止页码】：2018,35(03)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKibYlV5Vjs7i0-kJR0HYBJ80QN9L51zrPz2PxjQGTi1wlHwWVkG98D8NkSNi3aOvJmFcLpq2360q&uniplatform=NZKPT

亿年前琥珀展现蜘蛛捕食http://www.people.com.cn/mediafile/pic/20121009/21/2961742037002524505.jpg这只年轻的蜘蛛正准备享受它的美食——一只寄生蜂　　科学家发现了一具惊人的琥珀化石，这是恐龙时代的一只蜘蛛正准备捕食一只蜜蜂，琥珀的历史至少可以追溯到1亿年前。这块化石形成于早期白垩纪的缅甸胡康河谷，科学家们认为恐龙在这一地区曾经极为盛行。虽然这只蜘蛛非常有耐心的等待它的猎物，但无论是捕食者还是那只小蜜蜂，都遭遇不幸，它们被永远保存在了琥珀中。　　据悉，这是人类首次发现蜘蛛捕食瞬间的琥珀化石，科学家们认为蜘蛛最早产生于2亿年前，但是现在发现的最古老的蜘蛛化石距今约1亿3000万年。

一化合物结构确定了，（样品量不是很大），但是羧基的碳却没有做出来 求助这种情况见得多么？有没有文献支持啊求解啊

羟基磷灰石用785激光器，测出的拉曼图在2000波数以上有一个大包，是荧光的影响。请问有什么办法减弱？

文献题目如下：铜、碳钢表面自组装含羧基席夫碱缓蚀膜的实验与理论评价作 者： 陈世亮来 源： 桂林理工大学 2012年摘 要： 羧基芳香醛类席夫碱因其含有羧基和甲亚氨基结构，具有孤对电子的O和N原子极易向金属的空轨道提供电子而形成稳定化学键，因此在金属表面形成自组装膜，能有效抑制金属的腐蚀。 本文利用2-吡啶甲酰肼、2-噻吩甲酰肼、水杨甲酰肼、对氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸、对氨基苯磺酸、对羧基苯甲醛、邻氧乙酸苯甲醛设计合成了一系列新的席夫碱缓蚀剂，用X-射线单晶衍射、紫外-可见光谱。。。。。。。。。

现在在纳米金上修饰了一个羧基，要活化这个羧基，怎样活化？请求高手或大侠能指点一下，小弟感激不尽！