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巨细胞病毒抗体参考品

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巨细胞病毒抗体参考品相关的论坛

  • 巨细胞病毒感染

    巨细胞病毒感染常见于A皿病人,男性同性恋中CMV感染率高达95%以上。巨细胞病毒感染可能对聊的细胞毒性及Kw复制具有协同作用,被认为是一种协同因子。在临床上可引起中枢神经系统感染以及脉络膜视网膜炎所致失明、慢性肠炎和肺炎。  .念珠菌日食管盗不少艾滋病或艾滋病相关综合征病例出现口腔真菌感染,其中有少数病例出现弥漫性食官央。临床表现为在咽部、食管、直肠及肛门周围皮肤教膜感染.严重者有吞咽团难,肛周糜烂,病原体为念珠茵,常呈反复发作。一般以活检为主要诊断依据,如口腔白色念珠茵感染肉服难以辨别,有必要用钡剂吞咽并经气管镜采集标本进行培养和活检。  .非结核分枝杆菌感染在艾滋病患者中常以局部或播散性感染出现。很容易从患者骨髓、淋巴结、肝活检组织及血液分离出分技杆菌。由于艾滋病不形成典型肉芽肿,甚至没有于酪样坏死性肉芽肿,对活检组织仍要做Nid-NMI删染色检查。  .隐球菌病许多艾滋病患者具有中枢神经系统症状,除了xP本身所致感染外,常与隐球菌感染有关。临床上主要表现为脑膜炎症状。  弓形虫病典型艾滋病患者身上,鼠弓形虫可侵犯思者肺部、脑、骨酷肌及皮肤,侵犯大脑可引起脑脓肿,有占位性神经病变体征。  .单纯疤疹病毒感染许多艾滋病患者常常有单纯疤疹病毒感染史,表现为可在口、食管、肛门等部位引起慢性进行性广泛的溃疡性病变。艾滋病患者伴有这种感染,常常可引起广泛的戳膜溃疡.持续一个月以上,同时出现肺部、胃肠道或其他播散性感染。

  • 图文讲座第233期:实时细胞分析技术在肿瘤研究和病毒抗体疫苗检测中的应用

    图文讲座第233期:实时细胞分析技术在肿瘤研究和病毒抗体疫苗检测中的应用

    【线上讲座233期】实时细胞分析技术在肿瘤研究和病毒抗体疫苗检测中的应用 主讲人:周尧 活动时间:2013年10月9日-10月19日 热烈欢迎 周尧 老师光临生命科学仪器版面进行讲座!http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif引言实时无标记细胞分析技术(RTCA, Real Time cell Analysis)是艾森生物全球独有的专利核心技术,该技术采用特殊工艺,将微电极列阵整合在细胞培养板的每个细胞生长孔底部,用以构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化改变的细胞阻抗检测传感系统。该技术可广泛应用于生物活性因子测定、细胞增殖检测、大规模抗肿瘤药物筛选、细胞毒性检测等研究。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif提要一、 实时细胞分析技术原理 1.传统终点检测与实时无标记动态检测 2. 实时细胞分析技术原理 3. 实时细胞分析技术优势二、 实时细胞分析技术平台产品简介三、 实时细胞分析技术在肿瘤、药物细胞毒性检测领域的应用 1.RTCA实时动态细胞毒性检测 2.肿瘤与微环境之间的相互作用RTCA实时动态检测 四、 实时细胞分析技术在病毒、细胞毒素、中和抗体及疫苗检测与评估领域的应用 1.RTCA实时动态检测病毒Cytopathic Eff ect效应 2.RTCA实时定量检测病毒侵染效力及评估中和抗体效价http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif提问时间:2013年10月09日--10月19日答疑时间: 2013年10月09日--10月19日特邀佳宾:生命科学仪器版面版主、专家以及同行们参与人员:仪器论坛全体注册用户活动细则:1、请大家就ATR技术知识的相关问题进行提问,直接回复本帖子即可,自即日起提问截至日期2013年10月19日2、凡积极参与且有自己的观点或言论的都有积分奖励(1-50分不等),提问的也有奖励在活动期间我们将评选出20名积极参与奖和5名精彩问答奖。3、提问格式:为了规范大家的提问格式,请按下面的规则来提问 :周尧老师您好!我有以下问题想请教,http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif说明:本讲座内容仅用于个人学习,请勿用于商业用途,由此引发的法律纠纷本人概不负责。虽然讲座的内容主要是对知识与经验的讲解、整理和总结,但是也凝聚着笔者大量心血,版权归tianzhen老师和仪器信息网所有。本讲座是根据笔者对资料的理解写的,理解片面、错误之处肯定是有,欢迎大家指正。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif

  • 什么是中和抗体?如何检测假病毒中和抗体?

    [font='calibri'][size=13px]什么是中和抗体?如何检测[/size][/font][font='calibri'][size=13px]假病毒[/size][/font][font='calibri'][size=13px]中和抗体?[/size][/font]什么是中和抗体?中和抗体是一类与病毒结合并使病毒失去传染性的抗体。当病毒侵入人体时,浆细胞会产生病毒特异性抗体,但只有少数是中和抗体。中和机制如下:(1)改变病毒表面的构象;(2)与吸附相关的病毒表位结合,阻断其与宿主细胞受体的相互作用;(3)与病毒形成免疫复合物,易于被巨噬细胞清除;(4)当病毒表面抗原与中和抗体结合时会激活补体,从而导致病毒裂解。S蛋白(spike protein)是SARS-CoV-2病毒的主要包膜蛋白,由S1和S2亚基组成的三聚体跨膜糖蛋白,负责识别宿主细胞受体即血管紧张素转换酶2(ACE2)并介导膜融合。S1亚基上的受体结合域(RBD)直接参与宿主受体识别并介导病毒入侵。S蛋白上的受体结合结构域(RBD),被认为是病毒感染宿主细胞的关键位点和大多数中和抗体的靶标。中和抗体可阻止S1或RBD与ACE2结合,从而防止病毒侵入宿主细胞并最终阻止病毒感染(图1)。因此,S1或RBD的突变可能会导致SARS-CoV-2有较强的传染性。如何检测假病毒中和抗体?中和抗体检测试验包括病毒中和试验、假病毒中和试验和替代病毒中和试验。病毒中和试验中和抗体检测的金标准是病毒中和试验,主要包括空斑减少中和试验和微量中和试验。两种方法都使用定量的活病毒与不同稀释度的等量血清混合,并接种预先准备好的单层细胞。最后,根据空斑形成单位或细胞病变效应来评估中和抗体的效价。由于涉及到活病毒的操作,这些检测只能在生物安全三级实验室进行,极大地限制了空斑减少中和试验和微量中和试验的使用。假病毒中和试验目前,越来越多的实验室使用假病毒中和试验进行中和抗体检测。SARS-CoV-2假病毒以非致病性病毒(如复制缺陷型HIV-1)为载体,将载体病毒的包膜蛋白替换为SARS-CoV-2的S蛋白,并引入检测信号分子,例如GFP和荧光素酶。假病毒利用S蛋白的RBD结构域与ACE2结合,模拟病毒入侵的过程。中和抗体可有效抑制SARS-CoV-2假病毒感染宿主细胞(图2),并通过信号检测评估中和抗体效价。由于假病毒为一次性感染病毒,不具备自我复制能力,无生物安全危险,所以这种方法可以在生物安全二级实验室进行。替代病毒中和试验替代病毒中和试验是基于竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理,利用重组RBD蛋白与重组ACE2蛋白的结合作用来模拟病毒-细胞相互作用。样品中的中和抗体可有效阻断RBD蛋白与ACE2蛋白的结合。与病毒和假病毒中和试验相比,替代病毒中和试验更安全、更容易执行且耗时更少。中和检测服务信息由北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)为您提供,如您想了解更多关于SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒中和检测服务报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。具体详情可点击:https://cn.sinobiological.com/services/pseudovirus-neutralization-assay-service

  • 谱尼医学开展新冠病毒抗体检测

    国家卫健委5月29日通报,全国新冠病毒疫苗接种超过6亿剂次。自3月27日超过1亿剂次以来,每亿剂次所需时间为25天、16天、9天、7天、5天,间隔不断缩短,这就是疫苗接种的中国速度。接种新冠病毒疫苗后,理论上体内会产生IgM、IgG及中和抗体,这些抗体与新冠病毒结合后将使病毒失去感染性。因此新冠病毒疫苗接种后,检测IgM、IgG及中和抗体水平,对于评价疫苗的免疫效果至关重要,同时为常态化新冠疫情防护政策调整提供基础性的数据参考。

  • 医学开展新冠病毒抗体检测

    国家卫健委5月29日通报,全国新冠病毒疫苗接种超过6亿剂次。自3月27日超过1亿剂次以来,每亿剂次所需时间为25天、16天、9天、7天、5天,间隔不断缩短,这就是疫苗接种的中国速度。接种新冠病毒疫苗后,理论上体内会产生IgM、IgG及中和抗体,这些抗体与新冠病毒结合后将使病毒失去感染性。因此新冠病毒疫苗接种后,检测IgM、IgG及中和抗体水平,对于评价疫苗的免疫效果至关重要,同时为常态化新冠疫情防护政策调整提供基础性的数据参考。

  • 含有病毒抗体的血浆真的可以治疗新型肺炎病毒吗?

    近期有媒体报道,在对于新型冠状病毒肺炎疫情的治疗中,在湖北武汉江夏区人民医院采用新冠病人治愈病人特制的含有病毒抗体的血浆对危重病人进行了救治,救治取得了不错的治疗效果,涉及危症病例约10人,经过血浆治疗的重症病患,相关生理指标均有所好转。这是个好消息,但如果因为这样一则消息,就认为可以通过这样使用制作特免血浆治愈新型冠状病毒肺炎,目前还并不那么现实。?先来看下为什么治愈病人的血浆能够对于危重病例起到一定的治疗作用。病毒感染人体以后,人体的免疫系统会产生抗体来对抗病毒感染,这些抗体通常存在于人体的血液中,通过与病毒的某些蛋白质结合,并与身体免疫系统的其他功能相配合,让病毒无法感染人体正常细胞,最终完成病毒的清理杀灭。因此,在新型冠状病毒治愈者的血液中,会存在针对这种新型病毒的抗体,这种抗体能够对病毒起到抵抗作用,这就是用治愈者血浆治疗新型冠状病毒感染患者的基本原理。?这种疗法并不是此次疫情下才发明出来的,实际上科学家早在19世纪初就开始探索这种疗法的可能性了,但后来又有抗生素、抗病毒药物的逐渐涌现,这种研究逐渐被淘汰,而在上世纪70年代,这种疗法重新被提出,并在治疗某些特殊病毒感染问题时,取得了一定的治疗效果,在2003年的SARS疫情下,我国科学家也曾经探索过用治愈者血浆治疗SARS的方式,并取得了一定的成果。听起来好像这个方法很靠谱啊,为什么还说这个方法目前还不能作为常规治疗手段来进行新型冠状病毒肺炎感染者呢?这是因为这种疗法虽然有明确的科学原理,但其应用上,却有很多的局限性,简单说来有以下几个方面——?1. 有治疗作用的血浆需要含有一定的抗体浓度,每个治愈者体内的抗体浓度水平不一样,抗体滴度如果达不到一定水平,这个血浆就无法使用。2. 血浆采集后需要进一步制作,同时还要筛选病原体、确认没有其他引起感染的病原体的前提下才能使用。3. 血浆的成分十分复杂,输注入其他人的身体,可能会引起过敏反应、还有窗口期的HIV病毒、疟疾病毒如果检测不到,同样也会对病人造成感染风险。4. 血浆抗病毒治疗,最佳时间是患者起病2周内,如果起病时间超过2周,身体出现了多种严重的其他并发症的情况下,这时候抗病毒治疗已经不是重点了,输注抗病毒血浆也就没有太大治疗效果了。?因此,由于这些方面的局限性,用抗病毒血浆治疗新型冠状病毒肺炎患者的方式,目前还不能

  • 基于细胞的荧光法:一种新型抗体亲和力检测技术

    [font=宋体]在生物医学研究和治疗领域,[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production][u][font=宋体][color=#0000ff][b][font=宋体]单克隆抗体([/font][font=Calibri]mAbs[/font][font=宋体])[/font][/b][/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]扮演着越来越重要的角色。特别是在癌症和慢性疾病的治疗中,抗体的亲和力[/font][font=宋体]——即其与目标抗原结合的紧密程度[/font][/font][font=宋体],[/font][font=宋体]直接影响[/font][font=宋体]抗体药物的[/font][font=宋体]治疗效果。因此,开发一种既准确又可靠的抗体亲和力测定方法,对于提高治疗效率和开发新型抗体药物至关重要。[/font][b][font=宋体]传统[/font][font=宋体]的亲和力测定[/font][font=宋体]技术[/font][/b][font=宋体]目前存在多种测[/font][font=宋体]定[/font][font=宋体]抗体亲和力的方法,如放射免疫[/font][font=宋体]分析[/font][font=宋体][font=宋体]、表面等离子共振([/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体])、流式细胞术[/font][/font][font=宋体]、酶联免疫吸附分析和动力学排阻分析[/font][font=宋体]等[/font][font=宋体]。作为一种成功的候选治疗药物,[/font][font=宋体][font=Calibri]mAbs[/font][font=宋体]必须能识别目标抗原上的天然表位,因此需要一种更加快速灵敏、直观简便的测定方法。[/font][/font][b][font=宋体]基于细胞的荧光法:一种新的[/font][font=宋体]检测[/font][font=宋体]技术[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]Yu[/font][font=宋体]等人在杜克大学医学中心的研究中,开发了一种基于细胞的荧光[/font][/font][font=宋体]检测[/font][font=宋体]法[/font][font=宋体](如基于细胞的[/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]法[/font][/font][font=宋体])[/font][font=宋体],用于测[/font][font=宋体]定[/font][font=宋体][font=宋体]抗体亲和力。这种方法通过使用荧光标记的抗体,并将其加入到固定在[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔板上的抗原阳性和抗原阴性的细胞系中,通过计算特异性结合和非特异性结合的差值来测量抗体的亲和力。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]研究者通过与传统的流式细胞术和放射性([/font][font=Calibri]I[/font][/font][sup][font=宋体][font=Calibri]125[/font][/font][/sup][font=宋体][font=宋体])[/font][font=Calibri]Scatchard[/font][font=宋体]分析方法进行比较,验证了基于细胞的荧光法的有效性。结果显示,新方法得到的解离常数[/font][font=Calibri]KD[/font][font=宋体]值与传统方法相当,证明了这一新技术的准确性和可靠性。[/font][/font][font=宋体]此外,研究还展示了如何使用这种荧光法进行竞争性结合分析,进一步验证了抗体与抗原的特异性结合。这一功能对于研究抗体的结合表位和选择高亲和力抗体具有重要意义。[/font][b][font=宋体]基于细胞的荧光法的优势[/font][/b][font=宋体]与[/font][font=宋体]流式细胞术和[/font][font=宋体][font=Calibri]I[/font][/font][sup][font=宋体][font=Calibri]125[/font][/font][/sup][font=宋体]比色法等[/font][font=宋体]传统方法相比,基于细胞的荧光法具有多项优势。首先,该方法不使用放射性同位素,减少了实验的安全风险。其次,使用完整的细胞而非纯化的蛋白质,能够更真实地模拟抗体与天然抗原的相互作用。此外,该方法操作简便,成本低廉,适合高通量筛选,且能够在短时间内完成大量样本的分析。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]尽管基于细胞的荧光法具有诸多优势,但也存在一些局限性。例如,对于复杂样品的处理可能会产生非特异性结合,导致结果的误判。然而,随着技术的不断优化和发展,这些问题有望得到解决。[/font][font=宋体]尽管目前还未有人利用[/font][font=宋体]基于细胞的荧光法[/font][font=宋体]来评估抗体亲和力,但是其自身具备的优势[/font][font=宋体][color=#182026]表明[/color][/font][font='Segoe UI'][color=#182026]该方法具有作为抗体亲和力检测方法的潜力[/color][/font][font=宋体],为抗体药物的开发和研究提供强有力的支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][/font][font=宋体]本篇[/font][font=宋体]文章[/font][font=宋体]由[/font][font=宋体]义翘神州[/font][font=宋体]编辑[/font][font=宋体]整理[/font][font=宋体],[/font][font=宋体]同时[/font][font=宋体]义翘[/font][font=宋体]神州[/font][font=宋体]提供[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/spr-bli-assay-services][u][font=宋体][color=#0000ff][b][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]亲和力测定服务[/font][/b][/color][/font][/u][/url][font=宋体],[/font][font=宋体]详情[/font][font=宋体]请[/font][font=宋体]点击[/font][font=宋体]![/font][font=宋体][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]参考文献:[/font][font=宋体][font=Calibri]Yu X, Pegram CN, Bigner DD, Chandramohan V. Development and validation of a cell-based fluorescent method for measuring antibody affinity. J Immunol Methods. 2017 442:49-53. doi:10.1016/j.jim.2016.12.004[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 单个b细胞抗体制备技术工作流程

    [font=宋体]目前有多种方法可用于开发单克隆抗体。杂交瘤技术是经典的抗体开发技术,但效率相对较低,而且容易丢失抗体的多样性。噬菌体展示技术广泛用于单抗开发,但容易丢失抗体的天然配对信息。[/font][font=宋体][font=宋体]一般认为,在抗体开发中,保留[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的天然[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]配对是十分重要的。近年来兴起的单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术保留了轻重链可变区的天然配对,具有简单快捷、所需细胞数量较少、效率高等优势。该技术通过直接扩增单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]编码基因,是一种从人和免疫动物中制备单克隆抗体的有力技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选平台,义翘神州可向全球客户提供单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体制备服务,整个过程涉及单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分离、测序、克隆和单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体筛选等步骤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体发现的工作流程[/font][/b][/font][font=宋体] [font=Calibri]1[/font][font=宋体])单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的分离[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]从外周血或淋巴组织中分离单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞,有随机分离和抗原特异性分离两种方式。随机[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分离,可通过显微操作、激光捕获显微切割和荧光激活细胞分选([/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体])等进行细胞挑选。抗原特异性分离可通过抗原包被磁珠、多参数[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]的荧光素标记抗原、溶血斑块实验和荧光焦点法等方法进行抗原特异性[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的筛选。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]技术,可以根据特定细胞表面标志物的表达模式,明确区分待分选[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的发育和分化阶段,几乎任何阶段的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞都可以分选。为了有效获得特异性抗体,必须评估供体的免疫应答,例如,在单细胞分离之前,使用酶联免疫斑点技术([/font][font=Calibri]ELISPOT[/font][font=宋体])测定外周血中抗体特异性细胞([/font][font=Calibri]ASC[/font][font=宋体])的丰度,从而选择含抗原特异性抗体浓度较高的血样进行后续抗体制备。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=Calibri]2[/font][font=宋体])单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体的测序和克隆[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通常在[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔板上进行单细胞的[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]合成。全长[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]基因转录产物通过巢式或半巢式[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]进行扩增。通常情况下,对抗体重链轻链可变区不同前导序列设计前向引物的混合物,反向引物特异性互补于抗体恒定区。某些情况下,如果分离和扩增不同同种型的抗体,反向引物则是特异性互补于各种同种型抗体恒定区的混合物。表达载体可直接转染至哺乳动物细胞中,用于单克隆抗体的体外表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=Calibri]3[/font][font=宋体])抗体的表达和筛选[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]鉴定抗体或片段的抗原特异性和生物活性之前,需将携带有抗体基因的表达载体在相应系统中表达。最简单和最常见表达系统是原核系统(例如大肠杆菌),而哺乳动物细胞系统(例如[/font][font=Calibri]HEK 293[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞)更有利于抗体的翻译后修饰,主要是瞬时表达或稳定表达。在[/font][font=Calibri]E. coli[/font][font=宋体]中,通常抗体基因表达为抗原结合片段([/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体])的形式,而在哺乳动物细胞中,以完整的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]形式表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]单个[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]细胞抗体服务[/b][/url],包含:流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞服务和基于[/font][font=Calibri]Beacon[/font][font=宋体]平台的单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体开发,更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]文章来源:[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]细胞抗体技术[/b][/url]:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 抗体fc段和Fab段什么意思?抗体的功能有哪些?

    [font='calibri'][size=13px]抗体fc段和Fab段什么意思?抗体的功能有哪些?[/size][/font]抗体(antibody),是一种由浆细胞(效应B细胞)分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征,该外来目标被称为抗原。Fab段:抗原结合片段(fragment of antigen binding,Fab),相当于抗体分子的两个臂,由一个完整的轻链和重链的VH和CH1结构域组成。Fc段:可结晶段(fragment crystallizable,Fc)相当于Ig的CH2和CH3结构域,是Ig与效应分子或者细胞相互作用的部位。由以上信息可以看出:Fab段包含完整的可变区,以及恒定区的CH1区域。Fc段仅指Ig恒定区CH2和CH3的区域,相当于Y字结构下面那一部分。抗体的功能有哪些?(1)特异性结合抗原:抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞,通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤。然而,抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合,直接发挥中和病毒的作用。(2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体。(3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,参与免疫应答。(4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。(5)具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化。(7)通过与细胞Fc受体结合发挥多种生物效应。①调理作用 IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、FcμR结合,增强其吞噬能力,通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理作用 (opsonization)。②发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。义翘神州在重组抗体表达方面具有丰富的经验,除了表达全长抗体外,还可以表达各种形式的抗体片段,如单链抗体 (scFv)、抗原结合片段(Fab)、纳米抗体 (VHH) 和抗体融合蛋白 (antibody-fusion proteins)等。基于优化的哺乳动物蛋白平台,义翘神州可在HEK293或CHO细胞中的表达和生产Fab抗体片段。 利用此技术生产的Fab片段较酶切全长抗体获得的Fab片段具有更好的质量。scFv可以在微生物系统如E. coli中表达, 也可以通过瞬转技术在哺乳动物细胞中表达。义翘神州具备在不同系统中表达不同抗体片段的能力,您可以根据实际需求进行选择。您只需将抗体片段的基因序列发送给我们,义翘神州负责完成从基因合成到最终纯化抗体片段的整个过程。更多抗体片段生产服务可以参看:https://cn.sinobiological.com/services/fab-scfv-antibody-production-service

  • 上海巴斯德所成功获取甲型流感病毒广谱中和性全人单抗

    2009年甲型H1N1流感大流行给人类社会造成了巨大的生命和财产威胁。流感病毒广谱中和性抗体可以对抗多种亚型的流感病毒,在流感治疗和疫苗开发领域占有重要地位,并且日渐成为当前流感研究的热点。 中科院上海巴斯德研究所分子病毒学研究组孙兵研究员指导博士研究生胡伟斌和陈爱中等展开了甲型流感病毒广谱中和性全人抗体的研究:以CD19、IgG和流感病毒血凝素HA蛋白为特异性标志物,从接种2009年甲型H1N1流感病毒裂解疫苗志愿者体内获取了识别HA蛋白的特异性记忆B细胞,使用单细胞RT-PCR技术进行抗体可变区基因克隆,获得全人单克隆抗体。全人单抗不存在鼠源异种蛋白的抗原性,不会被人体免疫系统攻击,可直接可以用于临床医疗,具有出色的安全性。 研究发现,其中7株抗体具有广谱中和不同亚型(H1,H3,H5,H7,H9)甲型流感病毒的活性(图1)。表位分析表明,此7株具有广谱中和活性的抗体识别表位均在HA的杆状区域HA2蛋白上(图2A),包括位于HA2融合肽区域的线性表位以及与HA2整体结构相关的构象表位(图2B)。机制研究表明,这些中和性抗体可以抑制由HA2介导的病毒和细胞膜融合作用,从而抑制病毒进入细胞。本研究对流感治疗性抗体和流感通用疫苗研发具有重要参考价值。 该项成果由上海巴斯德研究所和上海生科院生物化学与细胞生物学研究所抗体研究中心合作完成,近日以Fully human broadly neutralizing monoclonal antibodies against influenza A viruses generated from the memory B cells of a 2009 pandemic H1N1 influenza vaccine recipient为题,在国际学术期刊《病毒学》上在线发表。本研究工作得到了国家自然科学基金、国家科技重大专项、“863”计划以及科技部等部门的经费支持。 http://www.cas.cn/ky/kyjz/201211/W020121116628712880136.jpg图1. 七株全人单克隆抗体对于不同亚型流感病毒具有广谱中和活性http://www.cas.cn/ky/kyjz/201211/W020121116628712897823.jpg图2. (A) 七株全人单克隆抗体都识别HA2区域(B) 三株全人单克隆抗体识别位于HA2融合肽区域的线性表位,其余四株识别构象表位

  • 当病毒逃过抗体,目前疫苗可能无法应对

    厚生劳动省于6日发表消息说,日本已经确诊了秘鲁拉姆达病毒。这种病毒的感染力有可能超过目前流行的印度德尔塔病毒,并且能逃避中和抗体,让目前的各种疫苗无法应对。

  • Nature :美国研究获得17种中和HIV变种新抗体

    最近,美国斯克里普斯研究院、生物技术公司Theraclone科学、Monogram生物科学等多家研究机构组成的一个联合研究小组与国际艾滋病疫苗倡议组织(IAVI)合作,分离出了17种能广泛中和艾滋病病毒(HIV)变种的新抗体,为设计候选疫苗提供了新的标靶。相关研究论文发表在近期出版的《自然》杂志上。中和性抗体是由血液中获得性免疫细胞暴露于病毒后产生的一类可溶性蛋白。在血液中,它们能与病毒结合,阻止其进一步感染人体细胞,并可导致病毒颗粒裂解,引起“中和”反应。由于中和性抗体可以在病毒感染人体细胞之前将其“消灭”,因此,如果此类抗体在人体暴露于HIV之前就存在,将可以预防感染发生。这17种新的强效广谱中和性抗体(bNAbs)是从4名HIV阳性患者血液中分离出来的,它们有些能与HIV表面的不知名分子结构或表位结合,这意味着在设计疫苗时,可供选择的标靶大大增加;而且其中一些抗体阻止HIV感染的效力比以前开发的抗体强10倍到100倍。

  • 河北省血液中心不规则抗体及残余白细胞等试剂耗材采购项目

    [quote][b]项目概况[/b]河北省血液中心不规则抗体及残余白细胞等试剂耗材采购项目 招标项目的潜在投标人应在河北省成套招标有限公司601室获取招标文件,并于2023年02月22日 09点30分(北京时间)前递交投标文件。[/quote][font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号:HBCT-230115项目名称:河北省血液中心不规则抗体及残余白细胞等试剂耗材采购项目预算金额:34.5100000 万元(人民币)采购需求:01包:不规则抗体检测细胞等试剂;02包:残余白细胞试剂耗材;03包ABO血型、RH血型室内质量控品合同履行期限:合同签订后一年本项目( 不接受 )联合体投标。[font=inherit]二、对本次招标提出询问,请按以下方式联系。[/font]1.采购人信息名 称:河北省血液中心地址:石家庄市和平路299号联系方式:袁女士 0311-870443142.采购代理机构信息名 称:河北省成套招标有限公司地 址:石家庄市工农路486号联系方式:常女士 0311-830869303.项目联系方式项目联系人:常女士电 话:  0311-83086930

  • 伟大的发现——中山大学发现杀癌细胞病毒 不损伤正常细胞

    广州中山大学研究发现天然病毒M1可杀灭癌细胞中新网广州10月13日电(许青青 蔡珊珊) 记者13日从广州中山大学获悉,该校中山医学院颜光美教授课题组研究发现天然病毒M1能选择性地感染并杀伤包括肝癌、结直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤在内的多种体外培养的癌细胞,而对正常细胞无毒副作用。全球癌症发病率呈现快速增长态势,现有的治疗手段远远未能满足临床需求。颜光美教授课题组发现,M1病毒是一种从中国海南岛分离得到的天然病毒,能选择性地感染并杀伤包括肝癌、结直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤在内的多种体外培养的癌细胞,而对正常细胞无毒副作用。整体动物实验表明,经尾静脉注射的M1病毒能显著富集在肿瘤组织并抑制肿瘤生长,正常器官则不受影响。除细胞水平及动物实验之外,课题组还使用临床标本离体活组织培养模型进一步证实了上述新型溶瘤病毒的有效性和特异性。据悉,该研究成果对阐明新型天然溶瘤病毒M1选择性杀伤肿瘤细胞的机制和研发新型靶向抗肿瘤药物都具有重要意义。相关资料:癌细胞增殖方式癌细胞是一种变异的细胞,是产生癌症的病源,癌细胞与正常细胞不同,有无限生长、转化和转移三大特点,也因此难以消灭。癌细胞由“叛变”的正常细胞衍生而来,经过很多年才长成肿瘤。“叛变”细胞脱离正轨,自行设定增殖速度,累积到10亿个以上我们才会察觉。癌细胞的增殖速度用倍增时间计算,1个变2个,2个变4个,以此类推。1912年8月13日,法国医生发现癌细胞。

  • 抗体的类型有哪些?不同类型的抗体结构和功能介绍

    [align=left][font='calibri'][size=13px]抗体的类型有哪些?不同类型的抗体结构和功能介绍[/size][/font][/align]抗体的类型有哪些?不同类型的抗体结构和功能有什么不同,[url=https://cn.sinobiological.com/]义翘神州[/url]为您细细讲解:五种不同类型的抗体分别是什么?血清中发现的抗体分子存在五种免疫球蛋白:IgG、IgM、IgA、IgE和IgD,通过重链类型进行区分。IgG抗体结构和功能免疫球蛋白G(IgG)抗体是一种大分子球蛋白,分子量约为150kDa,由四条肽链组成。它包含两条相同的γ(伽马)重链,约50kDa,以及两条相同的轻链,约25kDa,因此属于四聚体结构。IgG提供长效的保护作用,持续存在数月或数年。IgG可阻止细菌、病毒的侵害,中和细菌毒素,触发补体蛋白系统,结合抗原提高吞噬作用的效果。IgM抗体结构和功能免疫球蛋白M(IgM)由五个或六个单体构成(即大多数为五聚体,但也有六聚体),由两条重链(μ-链)和两条轻链构成,通过二硫键和J链结合在一起。IgM与红细胞(RBC)表面的ABO血型抗原有关。IgM通过吞噬作用增强细胞的摄取。IgA抗体结构和功能免疫球蛋白A(IgA)抗体由重链(H)和轻链(L)构成。每条H链由恒定区(Cα1、Cα2、Cα3)、铰链区和可变区(V)构成。轻链由CL和Vκ或Vλ构成。IgA的主要功能是在微生物入侵组织之前将抗原与微生物相结合。它聚集抗原并将其保存在分泌物中,因此当分泌物被排出时,抗原也会被排出。IgA也是黏膜表面(例如肠、鼻和肺)的第一道屏障。IgE抗体结构和功能免疫球蛋白E(IgE)抗体仅存在于哺乳动物体内。IgE由浆细胞合成。IgE单体由两条重链(ε链)和两条轻链构成,ε链包含4种类Ig恒定区(Cε1-Cε4)。IgE与参与免疫应答的肥大细胞和嗜碱性粒细胞相结合。一些科学家认为IgE能够阻止寄生虫的侵入。IgD抗体结构和功能免疫球蛋白D(IgD)抗体可在未成熟的B淋巴细胞的质膜上表达。IgD同样以分泌体形式产生,少量存在于血清中。IgD在诱导抗体产生中起重要作用。更多抗体定制服务尽在:https://cn.sinobiological.com/services/custom-antibody-services

  • 基于阻抗方法实时无标记细胞分析系统--肿瘤免疫治疗以及病毒学研究中的应用

    [font=&][size=16px][color=#343a40] 肿瘤免疫治疗是一种利用人体免疫系统来战胜肿瘤的治疗方案。成功与否的关键就在于免疫系统能否被激活到足够去特异性地杀死肿瘤的程度。在临床实验前,人们需要借助体外实验先行评估治疗方案的效力。 Axion BioSystems公司革命性地推出了使用生物电感应技术的Maestro Z/ZHT平台,完美具备评估体外效力的必要条件。它能在免除标记物影响的同时,在长达几天的时间中,以非侵入的方式对细胞的健康和活动开展监测,并自动且实时地获得多至384个样本的完整实验信息。其秘诀就是通过埋设在微孔板底部的高灵敏度电极来进行生物电阻抗的测试。这种技术能够追踪微小的细胞变化,从而能够揭示出远低于其它技术最低检出限的生物学信息。[/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#343a40][b]--利用Maestro Z/ZHT评估T细胞对胶质母细胞瘤的杀伤效力(car T治疗):[/b][/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#343a40][b]人体免疫系统中的效应T细胞,对肿瘤细胞有着高特异性和与生俱来的细胞毒性,在未来的脑胶质瘤治疗中被人们寄予很高的期望。Maestro Z的阻抗测试有着高灵敏、无标记及无损的特点,能够实时监测肿瘤细胞的增殖和T细胞介导的细胞溶解等过程,在体外评估免疫治疗的效价方面有着突出的优势。美国乔治亚大学的科学家们借助Maestro Z平台,对不同条件活化后的T细胞,开展了恶性胶质母细胞瘤杀伤效力的对比评估。详情点击:[url=http://www.axionbio.cn/page_1.html]CAR-T治疗 (axionbio.cn)[/url][/b][/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#343a40][/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#343a40][b]--利用Maestro Z 评估药物对COVID-19病毒感染力的中和作用:[/b][/color][/size][/font][color=#343a40][b][font=&][size=16px]病毒学研究的重点就在于开发抗病毒药物用于预防和治疗病毒感染。其中的挑战在于筛选到能够选择性抑制病原体复制并对宿主没有损害的化合物。病毒导致的细胞病变效应(CPEs)常常和靶细胞在形态、胞间贴合度、附着力及活力等方面的变化相关联。研究者可在体外联合使用宿主细胞、病原体和药物来模拟三者在体内的互作,借助 Maestro Z 定量CPE引起的阻抗变化。轻松实现在筛选药效的同时,完成安全性的初步评沽。[b]详情点击:[/b][url=http://www.axionbio.cn/page_4.html]page_4 - (axionbio.cn)[/url][/size][/font][/b][/color][font=&][color=#343a40][b][font=&][/font][/b][/color][/font]

  • 嵌合抗体、改型抗体、人源化抗体的区别及应用

    [font=宋体][font=宋体]目前,用细胞工程制备人单抗在技术上和伦理上都存在一些难题,治疗性抗体的开发就集中在具有治疗前景的鼠源单抗上。但是鼠源单抗对人体具有异源性反应,可诱发人抗鼠抗体效应[/font][font=Calibri](Humananti-mouseantibodies,HAMA[/font][font=宋体]反应[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体],使得单抗的治疗效果明显滞后。随着基因重组技术的发展和人们对抗体结构认识的深入,研究者们尝试对鼠源性抗体进行改造,致力于在保留与抗原结合的高亲和力的基础上,减少异源性抗体的免疫原性,推动抗体人源化研发的进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]人源化抗体主要指以用基因克隆及[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术对鼠源单克隆抗体改造,重新表达产生的抗体。其大部分氨基酸序列被人源序列取代,基本保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性,又降低了其异源性,有利应用于人体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据人源化程度不同,单抗又可分为[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody][b]嵌合抗体[/b][/url][/font][font=Calibri](60%-70%[/font][font=宋体]人源化氨基酸序列[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CDR(complementarity-determiningregion)[/font][font=宋体]移植抗体[/font][font=Calibri](90%-95%[/font][font=宋体]人源化氨基酸序列[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体:[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体[/font][font=Calibri](chimericantibody)[/font][font=宋体]:第一代人源化抗体。其是在基因水平上将鼠源单克隆抗体的[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区和人抗体的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区[/font][font=Calibri](variableregion,[/font][font=宋体]可变区[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]连接,在合适的宿主细胞内表达可得到人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体。嵌合抗体用于人体所产生的[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应比鼠源单抗明显减弱[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]另外,人源[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区[/font][font=Calibri](constantregion[/font][font=宋体],恒定区[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]可更有效地介导人体一些免疫反应,如[/font][font=Calibri]CDC(complement-dependentcytotoxicity,CDC,[/font][font=宋体]依赖补体的细胞毒性作用[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]ADCC(antibodydependentcellmediatedcytotoxicity,[/font][font=宋体]抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]嵌合抗体虽然可以部分解决异种蛋白的排斥问题,但由于其还含有鼠源[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区,依然有可能会诱发[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应,干扰抗体疗效,诱发超敏反应,在临床上其应用会受到一定限制。因此人们进一步研究鼠源可变区的改造,研发出了[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植的人源化抗体,即第二代人源化抗体也是现在普遍所说的人源化抗体[/font][font=Calibri](humanizedantibody)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植抗体是研究者们在嵌合抗体的基础上进一步用人源框架区[/font][font=Calibri](Frameworkregion,FR)[/font][font=宋体]替代鼠源框架区[/font][font=Calibri](FR)[/font][font=宋体],仅保留了[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个鼠源性[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体],其他全部为人源结构,人源性可达[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]以上。但对于特定的抗原分子,[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]并不能随意替换。多方面研究均证实,具有支持作用的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]不仅为[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的构象提供了环境,有时还参与抗体结合。因此简单的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植往往明显降低抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体结合的亲和力,甚至是丧失抗原抗体结合的能力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]针对这种状况,目前主要有四种策略:[/font][font=宋体][font=宋体]①同源替换,使用与鼠源对应部分具有较大同源性的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]进行替换[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]②表面重塑,对鼠源[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]表面氨基酸残基进行重塑,以使其类似于人抗体[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的轮廓或者[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]型式[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]③补偿变化,改编关键位置氨基酸残基,以补偿完全的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]④定位保守,人源化单抗以[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]保守序列为模板进行人源化,但保留鼠源单抗可变区的关键氨基酸残基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、全人源抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]为了彻底消除异源性抗体的不良影响,[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代以后,人们将噬菌体展示技术应用到抗体的表达和克隆上,产生了噬菌体抗体库技术。由此,抗体工程技术进入到了一个新的发展阶段,全人源化抗体的生产和应用也逐渐走向成熟。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]全人源化抗体是指将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术,将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中,使动物表达人类抗体,达到抗体全人源化的目的。目前已建立多种方法生产完全人源性抗体,主要有噬菌体展示技术、转基因小鼠技术、核糖体展示技术和[/font][font=Calibri]RNA-[/font][font=宋体]多肽技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]人源化抗体的应用[/b][/font][font=宋体]目前,人源化抗体在肿瘤,器官移植排斥反应,病毒感染,血液性疾病,自身免疫性疾病等方面的治疗和临床诊断中显示出越来越大的应用前景。[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、在肿瘤治疗中的应用[/font][/font][font=宋体]近年来,兴起的分子靶向治疗,是根本意义上的肿瘤特异性治疗手段,是以肿瘤抗原特异性结合的单抗为载体,连接放射性核素,化疗药物等对肿瘤有杀伤作用的负载而成的抗体导向疗法。其靶向性好,毒性小等特点,非常适合肿瘤的内放射治疗。采用该技术用于临床的人源性抗体有治疗转移性乳腺癌的赫赛汀,用于治疗结直肠癌的西妥昔单抗等。[/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、自身免疫性疾病治疗[/font][/font][font=宋体]自身免疫疾病多于自身抗体异常增多有关。很多临床研究发现,一些具有免疫疾病的病毒感染患者,体内病毒水平常伴随某些免疫分子水平的升高而升高,因此很多免疫分子的人源化抗体在此类病毒的治疗中显示出很好的效果。[/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、病毒感染中的应用[/font][/font][font=宋体]病毒感染几乎无特效药,现有的核苷酸类抗病毒药物效果并不理想,且毒副作用大,单抗治疗因其针对性强,和相对比较安全,已越来越多研究者将其应用于抗病毒的治疗中。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化服务[/b][/url],详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service[/font][/font]

  • 广州生物院在腺病毒载体疫苗领域取得新成果

    最近,中科院广州生物医药与健康研究院特聘研究员陈凌博士带领其研究组成员孙彩军博士、冯立强博士等研发了一种可克服体内腺病毒中和抗体的新技术AVIP,并在恒河猴模型中利用腺病毒载体艾滋病疫苗进行了概念验证。相关成果发表于国际病毒学权威期刊《病毒学杂志》(J Virol. 2012,86(20):11031-42.)。 腺病毒(Adenovirus),尤其是人5型腺病毒(Ad5)已被广泛作为重组基因治疗和疫苗载体,最新的数据表明全球约有1/4的基因治疗和疫苗载体的临床试验应用了Ad5载体。然而人群中普遍存在腺病毒中和抗体,例如陈凌研究组在去年发现华南人群中约有77%呈Ad5抗体阳性(发表于国际疫苗学期刊Vaccine,2011,29(22):3837-3841)。即使是Ad5抗体阴性的人在使用过一次Ad5载体产品后也会转变成Ad5抗体阳性。这些腺病毒中和抗体很大程度抑制了腺病毒载体相关产品的重复使用效率。 为了避免体内腺病毒中和抗体的这种负面影响,该研究首先将外周血单核细胞PBMC从腺病毒中和抗体阳性的个体中分离出来,然后用腺病毒载体疫苗在体外感染PBMC细胞,接着将其静脉回输至自体。由于在分离纯化PBMC时已去除了血液中的中和抗体等其他可能影响腺病毒感染效率的因素,此外体内血液中的中和抗体无法识别那些已进入细胞内的腺病毒载体疫苗,因此这些疫苗可在体内更有效地发挥特定的生物学功能。AVIP的特征还在于整个感染过程是发生在体外,这样就可更有好地控制腺病毒载体产品对靶细胞的感染效率。 本研究为提升腺病毒载体的使用效率和使用范围提出了一种新思路。该成果有望被应用于临床研究和实践,对加快艾滋病疫苗、其他疫苗以及基因治疗技术的研发具有重要意义。

  • 单克隆抗体研制最详细步骤!!! [精华]

    鉴于本人还是零蛋一个,特发此贴,虽然得分不是最主要目的,但零分确实很让人难受啊!单克隆抗体的研制一、单克隆抗体的概念抗体是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的,因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇,所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体,仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。因而,常规血清抗体又称多克隆抗体(polyclonal antibody),简称多抗。由于常规抗体的多克隆性质,加之不同批次的抗体制剂质量差异很大,使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。因此,制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供应的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。随着杂交瘤技术的诞生,这一目标得以实现。1975年,Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术,他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤细胞融合,形成B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征,既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死,又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系,即杂交瘤细胞系,它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体,即所谓单克隆抗体(monoclonal antibody),简称单抗。与多抗相比,单抗纯度高,专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。单抗技术的问世,不仅带来了免疫学领域里的一次革命,而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用,促进了众多学科的发展。Kohler和Milstein两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。二、杂交瘤技术(一) 杂交瘤技术的诞生淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面发展的必然结果,抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等,为杂交瘤技术提供了必要理论基础,同时,骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。1975年8月7日,Kohler和Milstein在英国《自然》杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗体的融合细胞的持续培养”(Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity)的著名论文。他们大胆地把以前不同骨髓瘤细胞之间的融合延伸为将丧失合成次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guanosine phosphoribosyl transferase,HGPRT)的骨髓瘤细胞与经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合。融合由仙台病毒介导,杂交细胞通过在含有次黄嘌呤(hypoxanthine,H)、氨基喋呤(aminopterin,A)和胸腺嘧啶核苷(thymidine,T)的培养基(HAT)中生长进行选择。在融合后的细胞群体里,尽管未融合的正常脾细胞和相互融合的脾细胞是HGPRT+,但不能连续培养,只能在培养基中存活几天,而未融合的HGPRT-骨髓瘤细胞和相互融合的HGPRT-骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活,只有骨髓瘤细胞与脾细胞形成的杂交瘤细胞因得到分别来自亲本脾细胞的HGPRT和亲本骨髓瘤细胞的连续继代特性,而在HAT培养基中存活下来。实验的结果完全像起始设计的那样,最终得到了很多分泌抗绵羊红细胞抗体的克隆化杂交瘤细胞系。用这些细胞系注射小鼠后能形成肿瘤,即所谓杂交瘤。生长杂交瘤的小鼠血清和腹水中含有大量同质的抗体,即单克隆抗体。这一技术建立后不久,在融合剂和所用的骨髓瘤细胞系等方面即得到改进。最早仙台病毒被用做融合剂,后来发现聚乙二醇(PEG)的融合效果更好,且避免了病毒的污染问题,从而得到广泛的应用。随后建立的骨髓瘤细胞系如SP2/0-Ag14,X63-Ag8.653和NSO/1都是既不合成轻链又不合成重链的变种,所以由它们产生的杂交瘤细胞系,只分泌一种针对预定的抗原的抗体分子,克服了骨髓瘤细胞MOPC-21等的不足。再后来又建立了大鼠、人和鸡等用于细胞融合的骨髓瘤细胞系,但其基本原理和方法是一样的。(二) 基本程序和方法杂交瘤技术在具体操作上,各实验室使用的程序不尽一致。本节中介绍的方法是作者所在实验室采用的、实践证明成熟的程序,该程序适合国内大多数实验室。在开展杂交瘤技术制备单抗之前,培养骨髓瘤和杂交瘤细胞必须具备下列主要仪器设备:超净工作台、CO2恒温培养箱、超低温冰箱(-70℃)、倒置显微镜、精密天平或电子天平、液氮罐、离心机(水平转子,4000r/min)、37℃水浴箱、纯水装置、滤器、真空泵等。其需要的主要器械包括:100ml、50ml、25ml细胞培养瓶,10ml、1ml刻度吸管,试管,滴管(弯头、直头),平皿,烧杯,500ml、250ml、100ml盐水瓶,青霉素小瓶,10ml、5ml、1ml注射器等,96孔、24孔细胞培养板,融合管(50ml圆底带盖玻璃或塑料离心管),眼科剪刀,眼科镊,血细胞计数板,可调微量加样器(~50ul,~200ul,~1000ul),弯头针头,200目筛网,小鼠固定装置等。此外,杂交瘤细胞的筛选与检测的仪器设备,依据检测单抗的方法不同而各异,请参阅本节有关部分。淋巴细胞杂交瘤技术的主要步骤包括:动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化、冻存、单抗的鉴定等,图6-1概括了淋巴细胞杂交瘤技术研制单抗的主要过程。1、动物免疫(1) 抗原制备 制备单克隆抗体的免疫抗原,从纯度上说虽不要求很高,但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加,同时可以减轻筛选的工作量。因此,免疫抗原是越纯越好,应根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说,抗原的来源有限,或性质不稳定,提纯时易变性,或其免疫原性很强,或所需单抗是用于抗原不同组分的纯化或分析等,免疫用的抗原只需初步提纯甚至不提纯,但抗原中混杂物很多,特别是如果这些混杂物的免疫原性较强时,则必须对抗原进行纯化。检测用抗原可以是与免疫抗原纯度相同,也可是不同的纯度,这主要决定于所用筛检方法的种类及其特异性和敏感性。(2) 免疫动物的选择 根据所用的骨髓瘤细胞可选用小鼠和大鼠作为免疫动物。因为,所有的供杂交瘤技术用的小鼠骨髓瘤细胞系均来源于BALB/c小鼠,所有的大鼠骨髓瘤细胞都来源于LOU/c大鼠,所以一般的杂交瘤生产都是用这两种纯系动物作为免疫动物。但是,有时为了特殊目的而需进行种间杂交,则可免疫其他动物。种间杂交瘤一般分泌抗体的能力不稳定,因为染色体容易丢失。就小鼠而言,初次免疫时以8-12周龄为宜,雌性鼠较便于操作。(3) 免疫程序的确定 免疫是单抗制备过程中的重要环节之一,其目的在于使B淋巴细胞在特异抗原刺激下分化、增殖,以利于细胞融合形成杂交细胞,并增加获得分泌特异性抗体的杂交瘤的机会。因此在设计免疫程序时,应考虑到抗原的性质和纯度、抗原量、免疫途径、免疫次数与间隔时间、佐剂的应用及动物对该抗原的应答能力等。没有一个免疫程序能适用于各种抗原。现用的免疫程序中多数是参照制备常规多克隆抗体的方法。表6-1列举了目前常用的免疫程序。免疫途径常用体内免疫法包括皮下注射、腹腔或静脉注射,也采用足垫、皮内、滴鼻或点眼。最后一次加强免疫多采用腹腔或静脉注射,目前尤其推崇后者,因为可使抗原对脾细胞作用更迅速而充分。在最后一次加强免疫后第3天取脾融合为好,许多实验室的结果表明,初次免疫和再次免疫应答反应中,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,特异性杂交瘤的形成高峰分别为第4天和第22天,在初次免疫应答时获得的杂交瘤主要分泌IgM抗体,再次免疫应答时获得的杂交瘤主要分泌IgG抗体。笔者体会阳性杂交瘤出现的高峰与小鼠血清抗体的滴度并无明显的平行关系,且多在血清抗体高峰之前。因此,为达到最高的杂交瘤形成率需要有尽可能多的浆母细胞,这在最后一次加强免疫后第3天取脾进行融合较适宜。已有人报道采用脾内免疫,可提高小鼠对抗原的免疫反应性,且节省时间,一般免疫3天后即可融合。

  • 抗体与蛋白的区别?抗体蛋白结构解析

    [font=宋体]抗体,作为一类特殊的蛋白质,在免疫系统中发挥着至关重要的作用,它们能够特异性地识别并中和外来病原体,如细菌和病毒。而蛋白质,作为生命活动的基础分子,具有多种多样的功能,从酶催化到结构支撑,无所不包。抗体与蛋白的区别在于,抗体是一类具有特定功能的蛋白质,而蛋白质则是更广泛的一类生物分子。本文将深入探讨抗体与蛋白的具体区别,并详细解析抗体蛋白的结构与功能,为读者提供一个全面而深入的理解。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体与蛋白的区别?[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]定义:[/font][font=宋体][font=宋体]抗体([/font][font=Calibri]antibody[/font][font=宋体])是指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质。它(免疫球蛋白不仅仅只是抗体)是一种由浆细胞(效应[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞)分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征,该外来目标被称为抗原。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗体按其反应形式分为凝集素、沉降素、抗毒素、溶解素、调理素、中和抗体、补体结合抗体等。按抗体产生的来源分为正常抗体(天然抗体),如血型[/font][font=Calibri]ABO[/font][font=宋体]型中的抗[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]和抗[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]的抗体,和免疫抗体如抗微生物的抗体。按反应抗原的来源分为异种抗体,异嗜性抗体,同种抗体和自身抗体。按抗原反应的凝集状态分为完全抗体[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]和不完全抗体[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]等。抗体在医疗实践中应用甚为广泛。如用于疾病的预防、诊断和治疗方面都有一定的作用。临床上用丙种球蛋白预防病毒性肝炎、麻疹、风疹等,国际上用抗[/font][font=Calibri]Rh[/font][font=宋体]免疫球蛋白预防因[/font][font=Calibri]Rh[/font][font=宋体]血型不合引起的溶血症。诊断上如类风湿因子用于类风湿性关节炎,抗核抗体([/font][font=Calibri]ANA[/font][font=宋体])、抗[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]抗体用于系统性红斑狼疮,抗精子抗体用于原发性不孕症的诊断等;治疗上如毒素中毒用抗毒治疗以及免疫缺陷性疾病的治疗等。[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical][b]抗体相关资源[/b][/url][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白:[/font][font=宋体][font=宋体]蛋白质是生命的物质基础,是有机大分子,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的[/font][font=Calibri]16%~20%[/font][font=宋体],即一个[/font][font=Calibri]60kg[/font][font=宋体]重的成年人其体内约有蛋白质[/font][font=Calibri]9.6~12kg[/font][font=宋体]。人体内蛋白质的种类很多,性质、功能各异,但都是由[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]多种氨基酸([/font][font=Calibri]Amino acid[/font][font=宋体])按不同比例组合而成的,并在体内不断进行代谢与更新。点击查看:[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]蛋白相关资源[/b][/url][/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]区别与联系:[/font][/b][font=宋体][font=宋体]蛋白质还是有一定的区别以及关联性的,虽然说抗体是蛋白质,但是蛋白质不一定是抗体。[/font] [font=宋体]主要是因为抗体是通过人体内的浆细胞所产生的,而且还可以喝相应的抗原特异性相互结合,这样在一定程度上就能发挥出蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体[/font][font=宋体]蛋白[/font][font=宋体]结构[/font][font=宋体]解析[/font][font=宋体]:[/font][/b][font=宋体][font=宋体]抗体是一种免疫球蛋白,由[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞产生。抗体的单体是一个[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]形的分子,有[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]条多肽链组成。其中包括两条相同的重链,以及两条相同的轻链,之间由双硫键连接在一起。每条重链[/font][font=Calibri]50kDa[/font][font=宋体],每条轻链[/font][font=Calibri]25kDa[/font][font=宋体],轻重链间存在二硫键链接。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]轻链[/font][font=宋体][font=宋体]轻链包括可变区和恒定区,可变区约占轻链的[/font][font=Calibri]1/2[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]重链[/font][font=宋体][font=宋体]重链包括可变区和恒定区。根据重链的不同,可以将抗体分为不同的种类,例如哺乳动物[/font] [font=Calibri]Ig [/font][font=宋体]的重链有α、δ、ε、γ和 μ 五种[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]相对应可以将哺乳动物[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]分为 [/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgD[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]和 [/font][font=Calibri]IgM [/font][font=宋体]五类。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可变区[/font][font=宋体][font=宋体]抗体分子的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端存在一段氨基酸序列变化较大的区域,该区域称为可变区。可变区中存在可以与抗原特结合的部位,即抗原结合位点。一个抗体有两个抗原结合位点,可以同时结合两个抗原分子。在可变区中有三个区域的序列高度变化,成为高变区([/font][font=Calibri]hypervariable region[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]HVR[/font][font=宋体])又称为抗原互补决定区([/font][font=Calibri]complementarity determining region[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体])。可变区主要通过其[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]CHR[/font][font=宋体]区形成[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个环状结构与抗原特异性结合。可变区中非[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]部分成为骨架区([/font][font=Calibri]framework region[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]),其氨基酸组成和排列变化相对[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]较少。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]恒定区[/font][font=宋体][font=宋体]抗体分子[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端氨基酸序列相对稳定,该区域称为恒定区。同一种抗体的恒定区是相同的。抗体轻链的恒定区由一个[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]结构域构成;重链的恒定区由[/font][font=Calibri]3-4[/font][font=宋体]个串联的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]结构域及一个用于增加灵活性的铰链区构成。[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]有三个结构域([/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH3[/font][font=宋体]),[/font][font=Calibri]IgD[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]有四个结构域([/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH4[/font][font=宋体])。不同种类抗体的铰链区存在一定的差异,[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]的铰链区较短,[/font][font=Calibri]IgD [/font][font=宋体]的铰链区较长,[/font][font=Calibri]IgM [/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgE [/font][font=宋体]无铰链区。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]分子在木瓜蛋白酶的作用下可以被降解为两个[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段及一个[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段由抗体轻链的可变区、轻链的恒定区、重链的可变区及重链恒定区构成。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段包含了所有抗体分子共有的蛋白质序列以及各个类别独有的决定簇。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段有多种生物学活性,具有结合补体、结合[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体、通过胎盘等作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function][b]抗体的结构和功能[/b][/url]详情:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 妊娠早期TORCH筛查助力优生优育

    全面进行孕前、产前检查,对于降低出生缺陷、提高人口素质、确保母婴安全具有重要的意义。为了有效贯彻落实优生优育政策,在孕前进行ToRCH检查具有重要意义。TORCH检查是指在妊娠前的备孕期以及妊娠早期建议检查的病毒项目,包括弓形虫 、风疹病毒 、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、其它病原体:如梅毒螺旋体、带状疱疹病毒、微小病毒B19 等。ToRCH临床诊断筛查的核心是明确孕前免疫状况、孕期母胎是否感染、何时感染、胎儿是否受到损害,以及是否能继续妊娠等,其感染筛查的方式,通常包括检测IgG和IgM抗体。在多数情况下,IgG抗体阳性而IgM抗体阴性,表示感染发生在过去;而IgM抗体阳性而IgG抗体阴性,则表示近期感染。谱尼医学已全面开展针对女性下生殖道传播疾病、B族链球菌(GBS-DNA)定性、淋球菌核酸检测、高危型人乳头瘤病毒DNA检测、性激素检测、耳聋基因检测、新生儿疾病筛查系列、唐氏综合征产前筛查、地中海贫血检查等早筛项目,可满足各级医院、体检机构等对相关项目的检测需求。

  • 慢病毒构建稳转细胞系:原理、步骤与优势解析

    [font=宋体]慢病毒构建稳转细胞系的原理主要是利用慢病毒载体将外源基因导入宿主细胞,并实现外源基因的稳定表达。具体来说,构建稳转细胞系的核心是将慢病毒矢量载体导入宿主细胞中,慢病毒载体通常包含病毒的复制和包装组件,以及外源基因的表达调控序列。当慢病毒载体被导入宿主细胞后,它可以利用细胞的复制和转录机制将外源基因插入宿主细胞的染色体中,从而实现外源基因的稳定表达。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]构建稳定的慢病毒转染细胞系是在细胞中稳定表达外源基因的一种有效方法。下面是一般慢病毒构建稳定转染细胞系的步骤:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、选择慢病毒载体: 选择适当的慢病毒载体,通常是一个包含[/font][font=Calibri]LTR[/font][font=宋体]、包装信号、引导[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]序列和多功能质粒载体的质粒。这个载体应该包含要表达的外源基因。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、转染慢病毒包装细胞: 使用慢病毒包装细胞系,例如[/font][font=Calibri]293T[/font][font=宋体]或其他适合的细胞系。这些细胞通常被选择因为它们能够支持慢病毒复制和包装。将慢病毒载体与包装蛋白的表达质粒一同转染进这些细胞中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、病毒产生和收集: 慢病毒包装细胞会开始产生慢病毒颗粒,这些颗粒包含了慢病毒载体和外源基因。培养一定时间后,收集细胞培养上清液,这是富含病毒的液体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、测定病毒滴度: 对采集的上清液进行病毒滴度的测定,通常可以通过转染一定数量的目标细胞,然后测定这些细胞的感染率来确定病毒的滴度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、转染目标细胞: 将上一步获得的病毒用于转染目标细胞。这些目标细胞可以是要建立稳定转染细胞系的细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、筛选稳定细胞系: 添加适当的筛选物质,例如抗生素,以选择表达了外源基因的细胞。这可以通过在培养基中添加抗生素,使得只有表达了外源基因的细胞能够存活下来。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]、单克隆分离: 对稳定表达细胞群进行单克隆分离,以确保每个克隆都来自单一细胞。这有助于保持表达的一致性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]8[/font][font=宋体]、验证表达: 对所得的单克隆细胞系进行验证,确认外源基因的表达水平和稳定性。这可以通过[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Western blotting[/font][font=宋体]等分子生物学技术来实现。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过这些步骤,可以建立一个稳定表达外源基因的慢病毒转染细胞系,为后续的实验和研究提供了有力的工具。这种方法常用于基因功能研究、药物筛选和基因治疗等领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]慢病毒构建稳转细胞系的优点:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]与常用的转染方法相比,慢病毒构建稳转细胞系有以下几个优点:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①高效性:慢病毒能够将外源基因整合到宿主细胞基因组中,实现稳定的外源基因表达。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②特异性:由于慢病毒的感染和复制比较特异,只会影响一定类型的细胞,因此可以实现对具体细胞的选择性转染。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③安全性:慢病毒的基因转移速度较缓慢,对宿主细胞和人体的损伤较小,因此具有较高的安全性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][b]稳转细胞株构建服务[/b][/url],包含过表达细胞系构建服务和[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]稳定细胞株开发服务,详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service[/font][/font]

  • 抗体和抗原的有什么区别?

    [font=宋体]抗体和抗原是生物学中重要的概念,它们在免疫学、医学和生物学等领域都有广泛的应用。抗体和抗原具有一些显著的区别,这些区别主要体现在化学结构、产生方式、溶解性、特异性和效应功能等方面。本文将对这些差异进行详细的阐述。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]首先,让我们了解一下抗体的化学结构。抗体是一种免疫球蛋白,具有两条相同的抗原结合簇。抗原决定簇是抗体与抗原结合的关键部位,它们在空间结构上呈现出一定的形状和大小,能够与抗原的特定部位精确结合。然而,抗原通常具有多个抗原决定簇,这使得抗原能够与多种抗体结合,从而在免疫反应中发挥重要作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]接下来,让我们了解一下抗原的产生方式。抗原是能够诱发免疫应答的分子,通常是由病原微生物产生的一种外源物质。例如,细菌的细胞壁、病毒的包膜蛋白等都可以作为抗原。与此相反,抗体是由淋巴细胞产生的,特别是浆细胞。在接受抗原的刺激后,浆细胞会分化为能够产生抗体的浆细胞,从而在体内产生大量的抗体,以应对抗原的侵袭。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]此外,抗体和抗原在溶解性上也存在显著差异。抗原的溶解性通常受到[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]和电解质浓度的 影响,而抗体的溶解性则与抗原无关。这一差异在生物学和医学领域具有重要的意义。例如,在疫苗研发中,科学家需要了解抗原的溶解性,以确保疫苗的有效性。而在抗体治疗中,医生需要了解抗体的溶解性,以确保抗体能够有效地发挥作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]另外,抗体和抗原的特异性也存在明显的差异。抗原的特异性取决于抗原决定簇的立体构型和间距,这意味着不同的抗原决定簇可以激发不同的免疫应答。与此相反,抗体的特异性取决于抗体的独特型。独特型是指抗体的抗原结合部位的空间结构,它决定了抗体与抗原的特异性结合。因此,不同的抗体可以与不同的抗原结合,这使得抗体在免疫应答中具有多种不同的作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]最后,抗体和抗原在效应功能上也存在显著的差异。抗原主要是刺激免疫系统产生抗体,从而在体内产生免疫应答。然而,抗体在与抗原结合后,能够激活补体系统,促进吞噬细胞对病原微生物的吞噬,从而发挥效应功能。此外,抗体还可以通过调理作用促进吞噬细胞的吞噬,以及通过[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]作用(抗体依赖的细胞毒性作用)诱导细胞对靶细胞的杀伤作用。这些效应功能使得抗体在免疫防御和免疫治疗中具有广泛的应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]综上所述,抗体和抗原在化学结构、产生方式、溶解性、特异性和效应功能等方面存在显著的区别。这些区别决定了抗体和抗原在免疫应答中的不同作用和应用。在生物学、医学和免疫学等领域中,了解抗体和抗原的区别对于理解免疫应答的机制、疫苗研发、抗体治疗等方面都具有重要的意义。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]随着抗体制备技术的发展,现在已有多种方法可用于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-production][b]抗体制备[/b][/url]。可使用体外杂交瘤细胞制备单克隆抗体。一般在兔体内[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-production][b]制备多克隆抗体[/b][/url]。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]经过多年的工艺开发,义翘神州已成为行业领先的抗体制备公司。我们可提供克级数量的定制抗体生产,交货迅速,价格优惠。从基因序列到纯化抗体([/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]克),只需几周时间,成品产品即可送到您家门口。详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-production[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

  • 什么是重组抗体?重组抗体的优势介绍

    什么是重组抗体?重组抗体的优势介绍

    [font='calibri'][size=13px]什么是重组抗体?重组抗体的优势介绍[/size][/font]与传统抗体相比,重组抗体具有几个关键优势。这些包括良好的批次间一致性,持续供应以及对抗体工程的适应性. 因此,重组抗体在科学研究中的应用日益广泛,特别是作为解决持续存在的可重复性难题的一种手段。什么是重组抗体?传统的多克隆和单克隆抗体是正常 B 细胞发育和基因重组的产物。它们是通过用抗原免疫动物以引发免疫应答而产生的。多克隆抗体由许多不同的 B 细胞克隆分泌并识别多个抗原表位,而单克隆抗体则来自单个 B 细胞克隆,并且仅对单个表位具有特异性。重组抗体是单克隆抗体,但是其生产涉及体外遗传操纵。将抗体基因克隆到表达载体中后,将其转染到合适的宿主细胞系中进行抗体表达。哺乳动物细胞系最常用于重组抗体的生产,然而细菌、酵母或昆虫来源的细胞系也适用。①良好的批次间一致性由于重组抗体的生产涉及对抗体轻链和重链进行测序,因此这是一个高度可控且可靠的过程。相反,用于生产单克隆抗体的基于杂交瘤的系统容易发生遗传漂移和不稳定,从而增加了批次间变异或抗体表达缺失的可能性。重组抗体在批次之间高度一致,从而确保了可重复的实验结果。②可规模化体外生产抗体的方法适合大规模生产,这意味着抗体的可获得性不太可能成为限制因素。此外,由于重组抗体序列是已知的,因此确保了供应的连续性;如需将抗体用于大规模长期研究,这可能就是一个至关重要的因素。③顺应工程化了解抗体的肽序列为工程化提供了许多机会。这些包括同种型转换(也称为类转换)和种属转换,这两种方法都可以通过允许在实验中利用那个同种型或种属特定的二抗来增加多重实验的范围。工程学的进一步应用是使用体外抗体选择系统(例如抗体噬菌体展示)来改善抗体特异性。④无动物源性生产与传统的抗体生产方法不同,重组方法避免了使用动物的需要。多克隆抗体直接从免疫宿主血清中纯化,单克隆抗体从杂交瘤来源的组织培养上清液 (TCS) 或腹水中纯化,而重组抗体是从转染宿主细胞系的 TCS 中纯化。无论抗体是多克隆抗体、单克隆抗体还是重组抗体,在实验使用前都必须在预期应用中对其进行适当验证。在CST,我们遵守抗体验证标志,即在任何特定实验方法中的确定抗体特异性、敏感性和功能性的六个互补策略通过针对每种抗体产品精心定制这些策略,我们保证 CST 抗体适合用于帮助您获得可信赖的结果。[align=center][img=大规模重组抗体生产服务,690,191]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/05/202305241528536465_2058_5907840_3.png!w690x191.jpg[/img][/align]义翘神州已通过ISO9001认证,在规模化生产重组单克隆抗体方面积累了丰富的经验。我们拥有完善的大规模重组抗体表达生产平台,可提供从毫克级到公斤级重组抗体生产服务,满足客户高通量、大规模的生产要求。更多[url=https://cn.sinobiological.com/services/large-scale-antibody-production-service][b]大规模重组抗体生产服务[/b][/url]详情尽在:https://cn.sinobiological.com/services/large-scale-antibody-production-service

  • 抗体选择指南及抗体选择指南

    一 抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素:1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1 分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种分析试验验证,如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域:抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。(2)样本的提取或处理过程:某些抗体要求样本经过某些特殊处理,例如:许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时,应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织,而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织,这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种 应选择物种相同或有交叉反应的抗体,抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高,如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中,并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过,应通过序列比对的方法来预测交叉反应,可应用Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。4 一抗宿主物种的选择一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测,尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。5 二抗的选择 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用, 二抗一般连接荧光素FITC 或发光团。6 双重染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一,二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。

  • 美研究发现姜黄素可阻止病毒在细胞中复制

    美国乔治梅森大学研究人员最近发现,最为流行的香料姜黄不只是充满气味,而且它还有望抵抗破坏性的病毒。相关研究论文发表在《生物化学杂志》上。论文第一作者、乔治梅森大学国家生物防御与传染病中心研究助理教授阿瑟·纳拉亚南说,在姜黄中发现的姜黄素阻止潜在致命性的裂谷热病毒(Rift Valley Fever virus, RVFV)在被它感染的细胞中增殖。蚊子传播的裂谷热病毒(RVFV)是一种急性的导致发热的病毒,能够影响诸如牛、绵羊和山羊之类家畜和人。究其本质而言,姜黄素是一种广谱的阻止一系列病毒感染健康细胞的抑制剂。但是在这篇论文中,研究人员证实姜黄素可能干扰RVFV操纵人细胞从而阻止细胞对感染作出反应。他们发现姜黄素不仅在体外细胞培养物中显著性地抑制RVFV复制,而且也在小鼠模式动物中证实它能够有效地对抗RVFV感染。纳拉亚南正在将这种知识运用到对抗布尼亚病毒、委内瑞拉马脑炎病毒和包括HIV在内的逆转录病毒中。

  • 制备单克隆抗体的基本流程及原理

    [font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production][b]单克隆抗体[/b][/url]([/font][font=Calibri]mAb[/font][font=宋体])源于单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆,具有高度的均一性和特异性,仅针对某一特定抗原表位。在生物医学研究、疾病诊断以及某些疾病治疗(如传染病和癌症)中单克隆抗体发挥着至关重要的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前,制备单克隆抗体的主流技术包括[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体抗体库技术[/b][/url]和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]单个[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]细胞技术[/b][/url]。杂交瘤技术通过融合免疫小鼠的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞,筛选出能够特异性分泌抗体的杂交瘤细胞,进而生产并纯化得到单克隆抗体。噬菌体抗体库技术则利用基因工程技术,将抗体基因与噬菌体基因相连接,使抗体以融合蛋白的形式呈现在噬菌体表面,通过与靶蛋白的结合,筛选出具有特定亲和力的噬菌体展示抗体。而单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术则基于每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞仅含有一对功能性的重链和轻链,每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞仅产生一种特异性抗体的特性,直接从单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞中扩增抗体基因,从而获得单克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]制备单克隆抗体的基本流程:[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体])抗原制备[/font][/font][font=宋体][font=宋体]一般来说,抗原可以是蛋白(天然蛋白或重组蛋白)、多肽、小分子等。依据需求选择和制备合适的免疫原对于抗体开发至关重要。义翘神州在蛋白抗原、多肽抗原制备积累了丰富的经验,可提供专业的抗原制备服务。另外,义翘神州还成功制备出[/font][font=Calibri]6000[/font][font=宋体]多种重组蛋白产品,可作为抗原用于动物免疫和抗体筛选,欢迎订购。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体])动物免疫[/font][/font][font=宋体][font=宋体]通常选用[/font][font=Calibri]Balb/c[/font][font=宋体]小鼠作为免疫动物,根据抗原的特性制定免疫方案,包括免疫抗原纯度、抗原量、免疫方法和途径等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫方法一般有常规免疫法、脾内一次性免疫法、短程免疫法和体外免疫法等,免疫途径主要有皮下注射、腹腔注射和静脉注射。脾内一次性免疫法具有用量少、免疫程序短、不加佐剂且所得单克隆抗体的特异性较高等特点。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常规免疫周期如下:第一次免疫(抗原[/font][font=Calibri]+[/font][font=宋体]弗氏完全佐剂,皮下注射)、第二次免疫(抗原[/font][font=Calibri]+[/font][font=宋体]弗氏不完全佐剂,皮下注射)、第三次免疫(抗原[/font][font=Calibri]+[/font][font=宋体]不加佐剂,皮下或静脉注射)、第四次免疫(抗原[/font][font=Calibri]+[/font][font=宋体]不加佐剂,静脉注射)。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体])细胞融合[/font][/font][font=宋体]细胞融合前准备:[/font][font=宋体][font=宋体]脾淋巴细胞制备:取已经免疫的[/font][font=Calibri]Balb/c[/font][font=宋体]小鼠的脾脏,制备淋巴细胞,通常每只小鼠可得[/font][font=Calibri]1x10^8-2.5x10^8[/font][font=宋体]个脾细胞;同时摘除眼球采血,并分离血清作为抗体检测时的阳性对照血清。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]骨髓瘤细胞制备:骨髓瘤细胞应该和免疫动物属于同一品系,便于细胞融合以及产生大量[/font][font=Calibri]Ab[/font][font=宋体]。融合前骨髓瘤细胞维持的方式,对成功得到杂交瘤非常重要。目的是使骨髓瘤细胞处于对数生长的时间尽可能长,融合前不能少于[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]周;冻存的细胞在复苏后要生长[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]周才能处于适合于融合的状态。[/font][/font][font=宋体]饲养细胞:常用的饲养细胞有胸腺细胞、正常脾细胞和腹腔巨噬细胞。饲养细胞促进杂交瘤细胞增殖的机制可能是释放非种属特异性的生长刺激因子,为杂交瘤细胞提供必要的生长条件;也可能是满足新生杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞融合:细胞融合方法有病毒介导的细胞融合、聚乙二醇([/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体])介导细胞融合、电融合。[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]融合相邻骨髓瘤和[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]或抗体分泌细胞的质膜,形成具有两个或更多核的单细胞。异核体保留这些核,直到核膜在有丝分裂前溶解。电融合通过施加脉冲电场连接相邻细胞的膜。电融合比[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]更加有效,结果具有重现性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体])杂交瘤筛选以及单克隆鉴定[/font][/font][font=宋体][font=宋体]骨髓瘤细胞和脾细胞融合之后,由于细胞融合是随机的,因此要利用[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基筛选杂交瘤细胞。骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶([/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]),对氨蝶呤钠敏感,在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]选择培养液中不能生长;免疫脾细胞虽然有[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体],但不能在体外无限繁殖。因此只有融合的杂交瘤细胞,才能在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]选择培养液中无限繁殖。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]得到融合的杂交瘤细胞后,需要进一步筛选特异性抗体。将融合的细胞进行充分有限稀释,使分配到培养板的每一孔中的细胞数在[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]至数个细胞之间([/font][font=Calibri]30%[/font][font=宋体]的孔为[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]才能保证每个孔中是单个细胞),培养后取上清液用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]法选出抗体高分泌性的细胞,这一过程常被称作克隆化。将这些阳性细胞再进行克隆化,应用特异性抗原包被的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]找出针对目标抗原的抗体阳性细胞株,增殖后进行冻存、体外培养或动物腹水培养。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体])单克隆抗体大量制备[/font][/font][font=宋体]利用杂交瘤细胞大规模制备单克隆抗体主要有两种方式:体外培养法和腹水制备法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]体外培养可以采用单层细胞培养的形式,也可以采用悬浮培养的形式。单层细胞培养法是各个实验室最常用的,是将杂交瘤细胞加入培养瓶中,用完全培养基培养,细胞浓度以[/font][font=Calibri]1.0X10^6~2.0X10^6[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/mL[/font][font=宋体]为宜,然后收集培养上清液。如果想在体外高效率地大量制备单克隆抗体,就必须高密度培养杂交瘤细胞,充分利用培养基的立体空间。单位体积内细胞数量越多,产生的单克隆抗体就越多,浓度就越高,产量就越大。义翘神州提供杂交瘤体外培养抗体生产服务,成功率[/font][font=Calibri]99%[/font][font=宋体],可采用低血清或无血清培养基进行高密度悬浮培养,生产规模从毫克级到克级不等,满足客户的不同需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]腹水制备法是通过将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内,并产生腹水,可得到大量的腹水单抗。这种方式能够在相对短的时间内获得大量高浓度的抗体,而且成本低、操作相对简单以及不需要复杂的培养条件。然而,这种方法也有一些限制,比如腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白(包括[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]),因此在很多情况下要提纯后才能使用,而且还有污染动物病毒的危险。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体技术:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-technology[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]杂交瘤技术:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • EBV衣壳抗原IgG抗体高水平:潜在的健康影响与解读

    [font=宋体][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒衣壳抗原[/font][font=Calibri]IGG[/font][font=宋体]高可能是有过感染史或者现症感染,还需综合其他数据分析。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒是一种很常见的疱疹病毒,多见于不明原因发烧患者,[/font][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒衣壳抗原可刺激人体产生两种抗体,一种是[/font][font=Calibri]IGG[/font][font=宋体],还有一种是[/font][font=Calibri]IGM[/font][font=宋体]。一般如果只是[/font][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒衣壳抗原[/font][font=Calibri]IGG[/font][font=宋体]指标上升,[/font][font=Calibri]IGM[/font][font=宋体]保持在正常范围内,则表示患者有过[/font][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒感染病史,现已康复 ;如[/font][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒衣壳抗原[/font][font=Calibri]IGG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IMG[/font][font=宋体]都处于升高范围,则表示患者近期感染[/font][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒,可能还会伴随有发热、淋巴结肿大、皮疹等症状表现。下面对几个常见概念进行科普:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]阳性[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]阳性并不是[/font][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒检测专有的检测,如单纯疱疹病毒、风疹病毒等多种疾病,都需要进行[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]的检测。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]当病原体等感染机体后,免疫系统会产生[/font][font=Calibri]igM[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]等不同的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]igM[/font][font=宋体]抗体:[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫应答中首先分泌的具有保护性的抗体;一般在机体收到感染时快速产生,经过一段时间[/font][font=Calibri]igM[/font][font=宋体]抗体量逐渐减少而消失;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]所以检测[/font][font=Calibri]igM[/font][font=宋体]抗体阳性,在临床上是提示为目前体内存在感染的情况。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]抗体:[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]当[/font][font=Calibri]igM[/font][font=宋体]抗体出现后,随后会出现[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]抗体;但[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]抗体在机体内持续的时间会比较长;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]所以检测[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]抗体检测阳性,在临床上是提示患者存在既往感染等的情况。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒[/font][font=Calibri](EBV)[/font][font=宋体]是一种嗜人类淋巴细胞的疱疹病毒[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]又称人类疱疹病毒[/font][font=Calibri]4(HHV-4)[/font][font=宋体];主要通过唾液等传染,是传染性单核细胞增多症的病原体;因[/font][font=Calibri]EBV[/font][font=宋体]一旦入侵机体,可能会对[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞进行诱导,使其转化为恶性肿瘤细胞,所以[/font][font=Calibri]EBV[/font][font=宋体]感染与鼻咽癌、胃癌、淋巴瘤等疾病的发生、发展有密切关系。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EBV[/font][font=宋体]编码多种结构抗原,如病毒衣壳抗原([/font][font=Calibri]VCA[/font][font=宋体])、早期抗原([/font][font=Calibri]EA[/font][font=宋体])、膜抗原([/font][font=Calibri]MA[/font][font=宋体])、核抗原([/font][font=Calibri]NA[/font][font=宋体])等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在机体感染[/font][font=Calibri]EBV[/font][font=宋体]后针对不同的抗原会产生相应的抗体,如抗[/font][font=Calibri]VCA[/font][font=宋体]—[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]、抗[/font][font=Calibri]VCA[/font][font=宋体]—[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]、抗 [/font][font=Calibri]EBNA[/font][font=宋体]—[/font][font=Calibri]igG[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过对这些[/font][font=Calibri]EBV[/font][font=宋体]特异性抗体进行检测,可以明确目前机体的情况,如对帮助判断是否是原发性[/font][font=Calibri]EBV[/font][font=宋体]感染、或是既往感染等的情况。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒衣壳抗原[/font][font=Calibri](igG)[/font][font=宋体]、抗[/font][font=Calibri]EBV[/font][font=宋体]核抗原[/font][font=Calibri](EBVNA[/font][font=宋体]一[/font][font=Calibri]igG)[/font][font=宋体]呈阳性,即提示存在既往有[/font][font=Calibri]EB[/font][font=宋体]病毒感染,但要明确目前的身体的情况,需要配合[/font][font=Calibri],igM[/font][font=宋体]等其他的结果分析,以明确后续的方向。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前利用[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]细胞分选平台[/b][/url],义翘神州可向全球客户提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]细胞抗体制备服务[/b][/url],整个过程涉及单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分离、测序、克隆和单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体筛选等步骤。详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 杆状病毒-昆虫细胞表达系统的优势与局限性

    [b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]杆状病毒载体表达系统([/font][font=Calibri]Baculovirus [/font][font=宋体][font=Calibri]e[/font][/font][font=Calibri]xpression [/font][font=宋体][font=Calibri]vector system, BEVS[/font][font=宋体])自[/font][font=Calibri]1983[/font][font=宋体]年问世以来,已广泛应用于疫苗生产、基因治疗等领域。目前已有多种[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]衍生产品获批使用,如[/font][font=Calibri]HPV[/font][font=宋体]疫苗、流感疫苗和几款兽用疫苗等。[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]具有安全性高、操作简单、可以无血清培养等优点,但同时也面临表达不稳定和蛋白质糖基化水平低等挑战。本文总结了[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]的优势和局限性。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]杆状病毒载体表达系统的优势[/font][font=Calibri] [/font][/b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、安全性高:杆状病毒仅感染昆虫细胞,不感染其他脊椎动物,对人类健康没有不良影响。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、高效的蛋白质表达:[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]能够表达复杂或难以表达的蛋白质,例如各种酶类、寄生虫蛋白、糖蛋白等,并且能进行正确的蛋白质折叠和翻译后修饰。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、易于大规模生产:昆虫细胞可以在无血清的培养基中生长,并且易于扩大生产规模。此外,[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]不需要处理活病毒或潜在危险的病原体,降低了生产成本。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、应用广泛:广泛用于功能、晶体学和药物发现研究。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]杆状病毒载体表达系统的局限性:[/font][/b][font=Calibri] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、表达不稳定:由于病毒的细胞毒性作用导致宿主细胞裂解,这可能影响最终的产物产量和蛋白质的稳定性。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、糖基化水平较低:昆虫细胞所产生的异源蛋白质的[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]糖基化图谱与哺乳动物细胞产生的不同,这可能影响蛋白质的稳定性、生物活性或免疫原性。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、潜在的免疫反应:[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]诱导的免疫反应可能产生炎症细胞因子和趋化因子,并激活补体途径,这也可能对蛋白质表达产生负面影响。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、基因组不稳定性:杆状病毒基因组可能存在不稳定性,影响长期表达和生产稳定性。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体][font=宋体]尽管存在一些挑战,但[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]平台近年来已经得到了显著改进,包括病毒载体的优化、病毒基因组的修饰和宿主细胞的广泛应用,这些分子进步有助于增强[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]平台的多样性和应用潜力。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]义翘神州提供[/font][url=https://www.sinobiological.com/services/baculovirus-insect-protein-expression-service][u][font=宋体][color=#0026e5][font=宋体]杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫蛋白表达的一站式服务[/font][/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]。凭借优化的表达载体和更高滴度的病毒包装技术,义翘神州在杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞蛋白表达方面具有丰富的经验,特别是针对序列较长的蛋白、病毒类蛋白、激酶、胞内蛋白以及膜蛋白等。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献:[/font][font=Calibri]Hong M, Li T, Xue W, et al. Genetic engineering of baculovirus-insect cell system to improve protein production. Front Bioeng Biotechnol. 2022 10:994743. Published 2022 Sep 20. doi:10.3389/fbioe.2022.994743[/font][font=Calibri] [/font]

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