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生物活性测定阳性对照

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  • 生物活性分子在种植体骨结合中的研究进展!
    生物活性分子在种植体骨结合中的研究进展!百欧博伟生物 良好的骨结合是人工种植体成功的关键,钛或钛合金人工种植体由于其较为理想的生物相容性和机械性能植入体内后与骨组织形成良好的骨结合而成为目前临床上应用最广的人工种植体。但钛类材料表面生物惰性的缺点不利于种植体骨结合的进一步提高,尤其对一些伴有系统性疾病如骨质疏松、糖尿病的缺牙患者,这些全身代谢性疾病使种植体周骨愈合能力下降,使种植体骨结合产生时间上的延迟或质量上的下降,导致种植体骨结合率下降。 因此,提高种植体骨结合率和初期稳定性进而提高种植体长期成功率仍是需要进一步研究的课题。其中种植体表面生物化学改性提高种植体骨结合率成为该领域近年来的研究的重要方向,方法是将生物活性分子如具有生物活性的蛋白、小分子多肽等采用一定的方式固定于种植体表面,通过其成骨诱导作用促进种植体周骨形成,提高种植体骨结合。本文就近年来应用于钛类人工种植体表面的生物化学改性方法以及几类主要生物活性分子对种植体骨结合作用及其机理的研究进展进行综述。 一、生物化学改性方法 1、物理吸附 物理吸附是在对种植体表面进行一定的粗糙处理后,将种植体浸入生物活性物质与磷酸缓冲盐溶液混合后的溶液中一段时间,使生物活性物质吸附在种植体表面。此法操作简单,对设备要求较低,但是吸附形成的作用力为静电力、范德华力或氢键,较难牢固结合在种植体表面,并且较难控制生物活性物质在种植体表面的均匀分布。 2、共价结合 生物活性物质可通过接枝分子共价结合在种植材料表面,接枝分子在种植材料表面形成自组装单分子层再与生物活性物质的某些基团共价连接,使生物活性物质稳定连接在种植材料表面。常见的接枝分子包括聚乙二醇、硅烷偶联剂、聚多巴胺、磷酸自组装单分子层等。此外,近些年人们通过噬菌体展示技术发现一些可以直接与金属钛共价结合的短肽(ATWVSPY、RKLPDAPGMHTW等)可以将某些生物活性物质(如层粘连蛋白衍生肽)连接在金属钛表面,从而对钛种植体进行表面改性。共价结合可以将生物活性分子稳定的结合在种植体表面,避免了初始爆发释放,但生物活性分子可能在共价结合的过程中发生构象的改变。 3、聚电解质多层 聚电解质多层由层层自组装技术将带相反电荷的聚电解质顺序吸附到带电表面制备而成。这种方法的特点是改变电解质沉积数量可以调控聚电解质多层的厚度,逐层组件可以将生长因子、蛋白质、遗传物质、抗体等直接集成到层中,或者可以用聚电解质预先络合各组分,然后组装成复合物。分子量大于10kDa的生物活性物质可以永久固定在聚电解质层中,随着聚电解质逐层的降解实现药物的逐渐释放。 二、钛种植体表面生物化学改性主要生物活性蛋白 1、胶原蛋白 胶原蛋白是骨组织细胞外基质中的主要成分,也是骨组织的钙化中心,可促进间充质干细胞中成骨相关基因的表达,进而诱导间充质干细胞向成骨方向分化,同时可以提高成骨细胞对骨基质的黏附。在钛片表面沉积磷酸钙和Ⅰ型胶原制备的矿化胶原涂层利于细胞伸展以及伪足的生长,可以有效促进成骨细胞的黏附及增殖。 此外,吸附有Ⅰ型胶原的钛片也更有利于促进小鼠前成骨细胞株MC3T3-E1黏附斑蛋白与护骨素基因的表达。将Ⅰ型胶原修饰的钛种植体植入SD大鼠胫骨内,HE染色发现4周后种植体周围形成的新生骨的密度要优于对照组。Ⅰ型胶原还可以参与携带药物,从而调控种植体骨结合过程。Li等通过层层自主装技术将Ⅰ型胶原和透明质酸修饰在钛纳米管表面,使管内的依诺沙星缓慢释放,抑制破骨细胞活性的同时还促进了种植体表面新生骨的形成。 2、非胶原蛋白 结合在胶原表面特定位点的非胶原蛋白,包括纤连蛋白(fibronectin)和层粘连蛋白(laminin)等在启动羟基磷灰石晶体成核、生长及调控无机相相变的过程以及促进细胞黏附、迁移和分化等过程中都发挥了至关重要的作用。越来越多的研究显示,将非胶原蛋白结合在种植体表面能够有效提高骨结合的效果。纤连蛋白能够增强对成骨细胞的粘附,进一步提升种植体表面微槽对细胞的粘附作用,加快成骨细胞的成熟,使种植体表面接触的间充质干细胞细胞呈现出成骨细胞自然成熟的多边形态。 Chang等将纤连蛋白吸附在钛种植体表面,发现其在诱导成骨细胞分化、增加骨形成量以及提升种植体初期稳定性方面较无纤连蛋白组有一定的提高。纤连蛋白上存在增强细胞活性的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(arginine-glycine-asparticacid,RGD)序列和RGD协同序列(PHSRN)以及其中间一段有20个氨基酸的序列F20(PHSRNSITGTNLTPGYTITVYAVTGRGD)。 有学者推测是纤连蛋白中间的这一段活性序列在发挥促进骨结合的作用。将F20和纤连蛋白分别吸附到钛片上,发现二者对基质细胞系ST2粘附、增殖和分化能力的提升效果相似,此外还发现F20对成骨作用的促进可能与Erk信号通路有关。层粘连蛋白作为细胞与基质黏着的介质,参与调节细胞的黏附、生长和分化。 Bougas等将层粘连蛋白浸泡吸附在钛种植体表面后植入兔的股骨中,4周后发现种植体周围的骨结合程度得到明显提高。在一项层粘连蛋白对种植体骨结合作用的回顾性研究中,91%的研究都表明层粘连蛋白可以促进相关成骨相关标记物的表达和(或)种植体周围新骨形成。 3、生长因子 骨形态发生蛋白(Bone morphogenic proteins,BMP)是一组信号分子,是转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β超家族的成员,可以促进间充质干细胞向成骨细胞分化,促进骨缺损区新骨的形成。BMP-2修饰的脱蛋白牛无机骨块在犬牙槽嵴进行垂直覆盖提升术并同期植入种植体的第3个月时比未使用BMP-2的骨块显示出更高的骨矿化水平和更多的新骨形成量。 BMP-2缓慢均匀释放似乎有利于促进骨结合。Seo等发现在水凝胶环境中BMP-2的持续释放显著促进了钛种植体周围垂直骨的再生。Yang等利用肝素连接BMP-2与生长分化因子5(growth and differentiation factor-5,GDF-5)结合在钛片形成Ti-BMP-2-GDF-5涂层,肝素延长了BMP-2和GDF-5的半衰期,并且使其持续均匀释放30天,将MC3T3-E1细胞放置含有该涂层的表面,细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性显著增加,骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原蛋白的表达也明显升高。兔体内实验显示植入兔股骨内的表面修饰有BMP-2和GDF-5的钛棒也表现出骨与种植体界面处新骨形成明显的增加。 但种植体表面的BMP-2剂量对种植体骨结合有一定的影响,高剂量的BMP-2会导致局部、暂时的骨损伤。在一项高剂量BMP-2(150μg/mL)治疗大鼠的临界大小的股骨缺损实验中,2周后观察到炎症和异常骨形成。Guillot等也发现当大剂量BMP-2(9.3μg)附着于种植体表面时,第4和第8周BMP-2修饰的种植体骨结合率都低于无BMP-2组。 TGF-β2和TGF-β3是TGF-β超家族的两个亚型,调节细胞的增殖和分化以及参与骨改建过程。在新西兰兔拔牙窝内即刻植入种植体,种植体周围增加TGF-β2以及牙髓干细胞,术后第4、8周骨涎蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原表达水平明显提高,种植体骨结合率以及种植体周围骨小梁宽度明显增加。Kim等通过电喷涂技术将聚乳酸丙交酯(PLGA)/重组人类TGFβ2颗粒喷涂在阳极氧化钛种植体表面,种植体植入兔的胫骨第3周骨形态计量学分析发现实验组的种植体骨接触率(Bone-To-Implant Contact,BIC)和骨面积百分比明显高于未喷涂重组人TGFβ2的对照组。 血管内皮生长因子(Vascularendothelial growth factor,VEGF)可诱导成骨细胞和内皮细胞增殖,促进局部血管生成并且增加ALP的活性。Guang等将大鼠重组VEGF吸附于钛片表面,发现其可以明显促进大鼠成骨细胞的增殖,将大鼠重组VEGF修饰的钛种植体植入大鼠膝内,在第2周和第4周免疫组织化学检测发现CD31阳性和骨钙素阳性细胞的比例明显增多。 VEGF对放疗患者种植体骨结合也有一定的促进作用。将钛种植体植入经过15Gy射线辐射的兔胫骨中,在种植体中心的孔隙注射高表达BMP-2/VEGF165的慢病毒载体,第2周和第8周通过PCR分析发现Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,Runx2)、骨钙素、ALP和CD31表达水平增加,Micro-CT显示新骨形成量明显增加。 神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经营养因子家族的成员,对交感和感觉神经元以及神经元嵴细胞有很强的促进作用。近年来研究发现,NGF还参与骨改建过程,对骨再生有一定的促进。将含NGF的明胶海绵应用于犬前磨牙缺损模型可以有效刺激骨的形成。在小鼠腿骨植入钛种植体区局部注射外源性NGF,可以促进小鼠股骨钛种植体植入早期的骨再生,加速早期骨胶原以及骨小梁的成熟,缩短种植体骨结合时间。但由于NGF半衰期较短,NGF多被用于种植体局部注射,用于种植体表面改性的研究还较少。 骨的改建由多种生长因子共同参与,BMP、VEGF、TGF、NGF等在促进骨生成方面有积极作用,控制生长因子在种植体表面的缓慢持续释放,增加其作用时间可以进一步促进成骨,并且多种生长因子的联合使用似乎可以取到更好的促进效果。 三、生物活性肽 生物活性蛋白因其固有的生物活性为种植体表面的生物功能化提供了选择,但是蛋白质分子存在免疫原性且缺乏良好稳定性,动物提取的蛋白也具有病原体传播和变异的风险。相比较而言,仅包含细胞结合序列的短肽可以发挥生物活性作用并能规避这些风险,具有良好应用潜能。它们易合成、纯化和存储消毒,与大分子蛋白相比具有成本效益,并且其活性不依赖于其三级结构。 下面着重于介绍4种具有促进细胞粘附、增殖和分化功能多肽或寡肽,如RGD,P-15,成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)以及胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors-1,IGF-1)。RGD序列存在于纤连蛋白的细胞结合域,是细胞粘附所需要的最小序列,可以促进细胞的扩散粘附和增殖。 贻贝来源蛋白(mussel derived peptide,MP)是一种包含L-3,4二羟基苯丙氨酸(DOPA)结构的蛋白,可以作为接枝分子把RGD和肝素结合蛋白(heparin binding protein,HBP)固定在钛片上。Pagel等将人类骨肉瘤细胞(sarcomaosteogenic,SaOS-2)置于附着MP-RGD的钛片上培养,发现其可以促进SaOS-2黏附、生存和增殖,MP-RGD-HBP的促进作用则进一步增强。 将抗菌肽和RGD肽共同结合在钛种植体表面,不仅可以促进SaOS-2细胞的附着和扩散,同时阻止了细菌的生长。此外肽的结构也对骨结合过程也有一定影响,研究发现环状RGD相比线性RGD会引起垂直方向骨量的更明显增加,并且发现环状RGD可能是通过激活成骨细胞的黏着斑激酶(FAK),上调MARK信号通路c-fos转录阈值水平,进而促进成骨细胞的增殖。 P-15是模拟Ⅰ型胶原蛋白结合域合成的短肽(GTPGPQGIAGAGQRGVV),具有促进成骨细胞分化、增强细胞黏附、迁移和存活的功能。Fu等通过表面引发的原子转移自由基聚合(surface-initiated atom transfer radical polymerization,SI-ATRP)原位生长含酮聚合物,并通过肟化反应将P-15共价连接在钛表面。结果显示聚合物接枝P-15的实验组相比未含P-15的对照组在第6h展现出更高的细胞存活率,细胞核染色法检测24h细胞数显示共价接枝P-15的钛片吸附有更多细胞,21d茜素红S染色也显示P-15的存在增加了钙沉积。 Lutz等将P-15吸附修饰在钛棒表面并植入猪股骨中,组织形态计量学分析发现30d时相比未修饰的种植体展现出更高的BIC值。同样,将磷酸钙和P-15沉积吸附修饰的钛种植体植入成年比格犬的双侧胫骨中,1周时也呈现出比其它对照组更高的BIC值,提示P-15能够有效诱导种植体周围的骨形成。然而植入部位以及个体异质性对生物活性物质的作用可能会有一定的影响。Schmitt等对植入比格犬颌骨内的种植体中部、顶部以及顶部两侧进行骨形态计量学分析后,发现在第2d和7d,P-15修饰的钛种植体与对照组种植体周围的BIC无统计学差异,因此P-15以及其它生物活性物质在人体内对骨结合的促进作用仍需进一步验证。 成骨生长肽是由14个氨基酸组成的多肽(ALKRQGRTLYGFGG),能增强ALP活性,加速基质矿化、促进骨再生。沉淀吸附有成骨生长肽的钛片可以促进大鼠间充质干细胞的附着、增殖和成骨分化。当纤连蛋白与成骨生长肽共同附着于钛片时,成骨分化作用进一步加强。Lai等通过聚多巴胺将成骨生长肽共价连接在有钛纳米管的钛片上,在其上接种大鼠颅骨成骨细胞,相比未修饰成骨生长肽的钛片,ALP的水平明显提高,成骨相关基因表达增加。 IGF-1是一种与胰岛素结构相似的小分子肽,可作为骨骼生长的调节剂,具有促进细胞粘附的作用。Xing等将大鼠骨髓间充质干细胞接种在加载有IGF-1的明胶/壳聚糖聚电解质多层的钛种植体表面,检测发现ALP、Runx2、Ⅰ型胶原和骨钙素的mRNA的表达水平提高,细胞增殖以及基质矿化水平增加。 将IGF-1修饰的种植体植入骨质疏松模型大鼠股骨中,8周后通过亚甲蓝/品红和micro-CT观察,相比对照组,实验组新骨厚度和连续性明显增加,当IGF-1为100ng/mL时促进作用最强,为骨质疏松症患者的种植修复提供了新的策略。肽类生物活性物质克服了生物活性蛋白的诸多缺陷,降低了在体内被内源性酶降解的风险,在促进细胞的粘附,增殖和分化以及促进新骨形成增加种植体初期稳定性方面具有良好的效果,在种植体表面改性方面具有良好的应用潜力。但这些肽类生物活性物质发挥促进骨结合效果最恰当的浓度还有待进一步确定,如何使肽类活性物质在种植体表面更稳定的释放也有待进一步研究。 四、小结 生物活性分子在种植体表面的应用有助于提高种植体骨结合。这通过其促进成骨相关标记物表达,促进间充质干细胞向成骨细胞分化,增加细胞的粘附和增殖等方式证实,而且动物体内研究也表明种植体表面的生物活性分子增加了种植体周围新骨的形成,促进种植体骨结合,展示了良好的临床应用前景。目前聚电解质多层、水凝胶、纳米粒子以及微球等缓释系统的研究为生物活性物质更加稳定持久释放提供了更广阔的前景,但缓释系统在种植表面对生物活性物质的缓释效果仍需在进一步验证。 目前研究大多数都是体外或动物体内实验,由于体内影响因素较多,缺乏对其确切效果的临床证据,尚未转化为可供临床应用的产品。而且,这些生物活性分子用于种植体表面的制备方法、对种植体储存和消毒带来的难题以及体内吸收、降解等对骨形成的影响体等一系列问题尚需更多、更深入的研究来解决,尤其是大量的、严谨科学设计的体内研究有助于揭示其临床应用价值。欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!
  • 中国技术经济学会批准发布《生物活性肽的鉴别和细胞活性测定》团体标准
    各相关单位:根据《中国技术经济学会团体标准管理办法》的有关规定,中国技术经济学会批准《生物活性肽的鉴别和细胞活性测定》团体标准。现予以发布,详细信息见下表:序号标准编号标准名称实施日期1T/CSTE 0379-2023生物活性肽的鉴别和细胞活性测定2023-09-01 中国技术经济学会2023年8月15日2023(53号文)关于批准发布《生物活性肽的鉴别和细胞活性测定》团体标准的公告.pdf
  • 荧光定量PCR,你做对照了吗?
    前言吾日三省吾身,定量实验做对照了吗?在荧光定量PCR实验中遇到没有曲线、曲线异常等情况,我们总是会在第一时间去看阳性对照和阴性对照的扩增情况来分析原因。由此可见,实验中做对照的重要性不言而喻。在荧光定量PCR实验中,我们通常会按照如下的流程进行实验:样品采集,运输,样品处理,核酸提取,反转录(RNA 病毒),扩增 ,结果读取。为了提高实验结果的精准度,我们通常会通过设置对照的方式对检测的各个环节进行监控。阴性对照荧光定量PCR的灵敏度较高,对实验室的污染也非常敏感,阴性对照可以用来监控和发现污染的发生。常用的阴性对照包括以下几种:无模板对照(No Template Control, NTC)使用水代替荧光定量 PCR反应中的核酸,其它试剂按比例正常加入,用于监控扩增反应体系中的污染。正常情况下,NTC孔不会有扩增;当NTC出现扩增,则预示体系中有污染。在SYBR Green实验中,引物二聚体的形成也可能导致NTC出现扩增。阴性样本对照(Negative Sample Control)阴性样本对照指不含有目的基因或者靶序列的样本,也可以是样本保存液。和含有目的基因的样本一起进行核酸提取等过程。如果出现扩增,则说明实验过程中存在污染,结合NTC结果进行判断。无逆转录酶对照(No Reverse-Transcriptase Control, No RT)当进行RNA定量实验时,如果引物和探针设计在同一个外显子上,扩增有可能来源于未去除干净的DNA,此时可以设置无逆转录酶对照。无逆转录酶对照中不加逆转录酶。由于没有cDNA,DNA聚合酶无法扩增mRNA,则不应发生扩增。如果检测到扩增,则样本中可能含有未去除干净的DNA。阳性对照阳性对照必然是阳性的结果,用于排除假阴性。如果检测出来了这个样本不是阳性,则说明实验有问题,不可靠。阳性样本对照(Positive Sample Control)阳性内对照虽然可以在一定程度上反应核酸提取效率,但是却很难反馈提取流程中对核酸释放的效率。为了能更好的反映提取效率,可以选择已知阳性的样本或者保存在相似基质中已知浓度的病原体,作为单独的样本进行提取和后续的RT-PCR,通过Ct值评断实验流程。内参基因(Endogenous Control)内参基因可以用于反应样本本身的质量,比如拭子是否刮取到样本、RNA在运输和保存过程中是否有严重的降解等问题。内参基因一般选择在取样组织或细胞中均有足量表达的基因,且其表达量不受环境、实验处理条件和取样时间等因素影响,常用内参基因如表1所示。没有某个内参基因是万能的,内参基因需要根据样本类型和实验处理方式进行评估和选择。实验中通过内参基因的Ct值来判断取样和样本降解情况。在相对定量实验中,内参基因亦可用于对取样量进行均一化。▲ 表1: 已报道的部分物种qPCR内参基因扩增对照(Amplification Control)可使用含有扩增片段的质粒、假病毒或者基因组DNA/cDNA作为扩增阳性对照,监控荧光定量PCR的体系是否正常。当扩增对照没有扩增,或者Ct值大于预期,则说明定量PCR体系存在问题。内部阳性对照(Internal Positive Control, IPC)如果想监控每一份样本的整个实验过程,可以在提取之前在每个样本中加入一段外源DNA或RNA(不含目的片段),并在定量PCR时进行单管多重PCR,同时检测目的基因和这段序列。在每个样本中加入特定拷贝数的IPC,进而从该段序列的Ct值判断对应样品孔中的核酸富集和扩增效率。
  • 邵峰院士:生物学研究需要批判思维
    p   从20世纪七八十年代起,生物学研究进入了分子生物学的时代。现代生物学的研究核心是什么?研究生物学应该秉承怎样的思维逻辑?5月4日,中国科学院院士邵峰走进华东理工大学“通海讲堂”,深入浅出地为同学们解析现代生物学研究的基本概念、途径和思维逻辑。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/73841826-5f19-4f9a-8ea5-acb444645ab4.jpg" title=" 3.jpg" / /p p    strong 现代生物学研究的三大核心 /strong /p p   自现代生物学研究进入了分子生物学的时代,生物化学、遗传学、细胞生物学成为其研究的三大核心和支柱。 /p p   生物化学以各种生理和病理生物学过程中生物大分子作用机制和结构基础为研究对象,遗传学主要研究生物学表征和性状的遗传以及表观遗传的物质机制(群体、个体和细胞水平),而细胞生物学则在细胞水平(体内或体外)研究各种细胞的各种生物学过程。 /p p   在研究手段上,生物化学基于生物和生化活性的纯化,基于生化和结构特征信息的探索和假说验证,建立生物学过程的重组体系,研究结构生物学、化学生物学等 遗传学以改变DNA序列看性状变化、突变分析和筛选(正向和反向遗传学分析)、化学遗传学等为研究对象 细胞生物学研究对象为各种细胞活性和功能的测量和测定,各种光学显微成像技术和电子显微成像技术等。 /p p   三者在思维方式上亦有不同,如生物化学追求和看重是否能人为的重组和再现所在生物学过程,追求微观和精细的分子机制,苛求逻辑严密性 遗传学强调符合遗传规律,注重Loss of function是否表型,不追求直接和精确的分子机制 细胞生物学则强调“看得见的才可以相信”,注重现象的直接观察和记录,看重和过分依赖个体事件。 /p p    strong 现代生物学研究模式 /strong /p p   常见的生物学研究有科学假说驱动和无科学假说驱动。前者有助于解决科学问题,有利于科学思维和能力的训练,成果原创性相对低,也容易有先入为主的偏见 后者有助于发现科学问题,为提出科学假说提供基础,创新性可能高,但不容易阐明机制,相对来说不太利于科学训练。 /p p   生物学研究的两种入手模式有追踪特定现象(表型)和追踪某生物大分子。前者的研究不一定容易入手,也不一定有生理意义 后者无特定科学问题,容易走向各种生物学领域。生物学实验的对照有阳性对照和阴性对照。严格意义上来说,对照完整的实验是不可能的,阳性结果一定需要阴性对照,而阴性结果一定需要阳性对照,但最具原创性的实验往往没有对照实验。 /p p    strong 科学研究需要批判性思维 /strong /p p   几乎所有的生物学研究都不同程度上是在“盲人摸象”,科学家不可能做到在不同层次(分辨率),实时、动态和实地观察研究对象特别是生物大分子的活动。 /p p   生物学研究既是科学也是艺术,生物学既需要理性但有时又不能太过理性,同时也需要严密逻辑的分析型思维。生物学的研究特别需要批判性思维——即科学的本质就是怀疑。在生物学研究过程中要避免几大误区,比如——目标科学问题没有意义且可能的发现没有新意 研究体系不合适,不成熟或错误 途径和路线错误 切勿先入为主 逻辑不够严谨 数据解释不完整等。 /p p   希望有志于从事科学研究的学生能够坚持做自己想做的科学问题,坚持自己的选择,不随波逐流,更不要被外界环境所扰。在科学问题的研究中,不怕被边缘化,要抓住机会,致力于做原创的科研,做能够“影响他人、养活他人”的科研。 /p p & nbsp & nbsp & nbsp strong 附:邵峰简介 /strong /p p   邵峰,中国科学院院士,2003年在美国密西根大学生物化学系获得博士学位。自2005年回国后,邵峰以通讯作者的身份在《自然》《科学》《细胞》三大杂志上发表研究论文 11篇,2015年当选为中科院院士和EMBO的外籍成员,2016年当选为美国微生物学院院士。他长期研究病原细菌和宿主相互作用机理,在致病菌毒力机制以及抗细菌天然免疫方向均取得系列重要原创性发现,为败血症药物和细菌疫苗的研发提供了新的理论基础,曾获得多项国际和国内重要奖项,包括周光召杰出青年基础科学奖、HHMI国际青年科学家奖、国际蛋白质学会鄂文西格青年科学家奖、吴阶平-保罗杨森基础医学奖以及何梁何利基金科学与技术奖等。 /p
  • 对照品如何保存,又应该如何使用?
    对照品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质,包括杂质对照品,不包括色谱用的内标物质。在药品检验工作中我们常会用到一种用来检查药品质量的特殊参照物——药品标准物质(对照品)。它在药品检验中具有十分重要的地位。随着仪器分析的广泛使用,必将越来越多地使用药品标准物质。下面远慕生物就来介绍一下如何对对照品进行保存和使用:  (1)对照品应按说明书规定的条件妥善保存,一般置干燥阴凉处保存,某些对照品如维生素E等需避光低温保存。要注意对照品的使用期限,过期、变质的对照品不宜再使用。开瓶后建议短期内用完,避免开瓶后长期不用,同时,在重复使用过程中应尽量避免对照品的分解、污染或吸潮。  (2)使用中检所对照品时,应严格按说明书执行。一般情况下,供鉴别、检查用的对照品不能用于含量测定。红外鉴别用的对照品使用时应注意与样品在晶型上的差异,必要时可采用相同的方法对样品和对照品重结晶。例如氨苄西林钠具有多种不同的晶型,可用丙酮对样品和对照品重结晶后测定,以确保二者晶型和红外光谱图的一致。  (3)由中国药品生物制品检定所提供的对照品或国际对照品为法定对照品,以法定对照品作对照标化的原料可称为二级对照品或工作对照品。药品生产单位为节约成本,可使用工作对照品进行日常检验,但药品检验所必须使用法定的对照品,出具的检验报告书才具有法律效力。  (4)除另有规定外,对照品使用时应采用适宜的方法测定其水分的含量,按干燥品(或无水物)进行计算后使用,否则会造成含量测定结果偏高。对热稳定的对照品可直接干燥后使用;对热不稳定的对照品可同时另取一份作干燥失重,扣除水分后使用。此外,对照品若含有结晶水或盐基,使用时应注意其换算。  远慕生物提供以下服务:  1.中药提取物的定制研发和生产,中药提取物代加工相关服务。  2.中药高含量提取物的工业化高效分离及分离纯化生产  3.天然产物原料药和中间体的生产,定制(包括合成,半合成)
  • 全自动农药残留检测仪需要做空白对照吗
    全自动农药残留检测仪需要做空白对照吗,全自动农药残留检测仪需要做空白对照。空白对照是指不给予任何处理的对照,这在动物实验以及实验室方法研究中常采用,以评定测量方法的准确度以及观察实验是否处于正常状态等。全自动农药残留检测仪在检测食品中农药残留量时,为确保检测结果的准确性和可靠性,通常需要进行空白对照。具体来说,空白对照在全自动农药残留检测仪中的作用可能包括:评估仪器性能:通过空白对照,可以评估仪器在无任何农药残留的情况下,其测量值是否稳定,是否符合预期,从而判断仪器是否处于正常的工作状态。校正误差:在检测过程中,可能会存在各种误差,如仪器误差、试剂误差、操作误差等。通过空白对照,可以及时发现并校正这些误差,提高检测结果的准确性。设定阈值:空白对照的结果可以作为设定阳性阈值的参考。阳性阈值是指判断食品中农药残留是否超标的临界值。通过空白对照,可以确定在无任何农药残留的情况下,仪器的测量值范围,从而设定合理的阳性阈值。此外,一些全自动农药残留检测仪具有空白对照自动检测功能,可以自动进行空白对照操作,并将结果保存于系统中,方便后续分析和查询。这种设计可以进一步提高检测效率和准确性。综上所述,全自动农药残留检测仪需要做空白对照,以确保检测结果的准确性和可靠性。
  • 化学药品研发中对照品(标准品)有关技术要求
    药物的质量研究与质量标准的制订是药物研发的主要内容之一,药品标准物质也是质量标准和质量研究中不可分割的一部分,是药品质量标准的物质基础。药品标准物质在新药研究中与产品定性、杂质控制及量值溯源密切相关,标准物质的运用贯穿于质量研究与质量标准的制订工作中。一、概述标准品、对照品系指用于药品鉴别、检查、含量测定的标准物质,即药品标准中使用的具有确定的特性或量值,用于对供试药品赋值、定性、评价测定方法或校准仪器设备的物质,其中标准品系指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质。《药品注册管理办法》规定“中国药品生物制品检定所负责标定和管理国家标准物质”,“申请人在申请新药生产时,应当向中国药品生物制品检定所提供制备该药品标准物质的原材料,并报送有关标准物质的研究资料”。但在新药研究中,普遍存在对照品(标准品)的应用超前于中检所制备和标定的情况,鉴于新药研究的连续性以及标准物质在新药研究中涉及量值溯源、产品定性、杂质控制及其在药品质量控制中的重要性,标准物质的制备和标定与药品的质量研究、稳定性研究乃至药理毒理学研究中剂量的确定等临床前基础研究间存在密切关系,因此,药品对照品(标准品)的研究(制备与标定)也是药品审评的一项重要内容。二、对照品来源1、所用对照品(标准品)中检所已经发放提供,且使用方法相同时,应使用中检所提供的现行批号对照品(标准品),并提供其标签和使用说明书,说明其批号,不应使用其他来源者;如使用方法与说明书使用方法不同(如定性对照品用作定量用、效价测定用标准品用作理化测定法定量、UV法或容量法对照品用作色谱法定量等),应采用适当方法重新标定,并提供标定方法和数据;若色谱法含量测定用对照品用作UV法或容量法,定量用对照品用作定性等,则可直接应用,不必重新标定。2、申报临床研究时,如中检所尚无供应,为不影响注册进度,可先期与中检所接洽制备和标定,申报时提供标定报告、标签(应标明效价或含量、批号、使用效期)和使用说明书;也可与省所合作标定,申报时提供标准品或对照品研究资料,“说明其来源、理化常数、纯度、含量及其测定方法和数据”;标定有困难时,可使用国外药品管理当局或药典委员会发放的对照品(标准品)或国外制药企业的工作对照品(标准品),进行标准制订和其他基础性研究,但应提供其标签(应标明其含量)和使用说明书,能保证其量值溯源性;也可使用国外试剂公司(如sigma公司等)提供的对照品(标准品),但应提供试剂公司该批对照品(标准品)的检测报告(用作含量测定时,应有确定的含量数据),如为高纯度试剂,提供了国外试剂公司检测报告(用作含量测定时,应有确定的含量数据)时,也可使用,并应能保证其量值溯源性,但申请人应及时与中检所接洽对照品(标准品)的标定事宜,临床研究期间完成此工作。3、直接申报生产品种,如中检所尚无供应,可参照2中要求进行,并提供相应研究资料,但申请人在标准试行期间应与中检所接洽并完成的标定事宜。三、对照品(标准品)标定的技术要求1、创新药物应说明对照品(标准品)原料的制备路线、精制方法、质检报告,提供理化常数和纯度的测定数据及分析结果(包括相关图谱),提供标定方法的研究和验证资料(如与原料药质量研究项下相同,可不再提供)、含量测定数据及经统计分析得到的对照品(标准品)含量结果,并说明进行临床前药学研究、药理毒理学研究所用样品的含量是否用该批对照品(标准品)确定或可用该批对照品(标准品)进行量值溯源。纯度测定方法应选用色谱法,并采用两种以上不同分离机理或不同色谱条件并经验证的色谱方法相互验证比较,同时采用二极管阵列检测器或其它适宜方法检测HPLC法的色谱峰纯度,而后根据测定结果经统计分析确定对照品(标准品)原料的纯度。对于组份单一、纯度较高的药物,对照品(标准品)标定方法宜首选可进行等当量换算、精密度高、操作简便快速的容量法。可根据药物分子中所具有的官能团及其化学性质,选用不同的容量分析方法,但应符合如下条件:(1)反应按一个方向进行完全;(2)反应迅速,必要时可通过加热或加入催化剂等方法提高反应速度;(3)共存物不得干扰主药反应,或能用适当方法消除;(4)确定等当点的方法要简单、灵敏;(5)标化滴定液所用基准物质易得,并符合纯度高、组成恒定且与化学式符合、性质稳定(标定时不发生副反应)等要求。标定方法的选择要关注如下事项:(1)供试品的取用量应满足滴定精度的要求(消耗滴定液约20ml);(2)滴定终点的判断要明确,提供滴定曲线。如选用指示剂法,应考虑其变色敏锐,并用电位法校准其终点颜色;(3)为排除因加入其它试剂而混入杂质对测定结果的影响,或便于剩余滴定法的计算,可采用“将滴定的结果用空白试验校正”的办法;(4)要给出滴定度(采用四位有效数字)的推导过程。标定结果要根据3个以上实验室各不少于15组测定结果经统计分析,去除离群值和可疑值后的结果,并报告可信限。如该药物没有可进行等当量换算并符合要求的容量法时,可采用反复纯化的原料,色谱法确定纯度后扣除有关物质、炽灼残渣、水分和挥发溶剂等后的理论含量确定为标准品含量,以此为基准进行对照品(标准品)的换代和量值传递。用于抗生素微生物检定法的第一代基准标准品可参照上述方法标定,如为多组份抗生素,其组份比例应与拟上市产品组份比例一致或接近,或以其中某一组份纯品为基准标准品,但要注意标准品换代时量值传递的恒定。仅用于鉴别定性的化学对照品,注重其结构确证的研究资料,纯度和含量的要求一般可适当降低。杂质对照品,用作限度要求时,应提供其来源(合成路线)、结构确证的研究资料,应具备较高的纯度和含量,并提供纯度和含量的的测定结果,提供质量控制标准。2、其他类别药物用于抗生素微生物检定法的标准品须用上市国的国家标准品或原发厂的工作标准品为基准标准品进行标定。标定时采用的原料药应符合相应要求,并提供原料的制备路线、精制方法、质检报告,提供理化常数和纯度的测定数据及分析结果(包括相关图谱)。标定须用现行版中国药典附录收载的“抗生素微生物检定法”-三剂量法,并提供详细的方法学研究,包括检定菌和培养基的选择、剂量和剂距选择、缓冲液选择(如与质量研究项下相同,可不再提供)。每次标定结果均应照“生物检定统计法-量反应平行线测定法(3.3)”法进行可靠性测验及效价计算。对照品是质量标准的重要组成部分,从日常工作中发现,研发单位在对照品的制备、研究、标定、使用及保存过程中,仍存在部分问题。作为对照品,其研究工作的质量以及质量标准的高低直接影响新药研究的质量,对其提出技术要求是为了保证药品的质量控制与新药研究的结果准确有效,需重视起来。
  • 药品研发中杂质与杂质对照品研究监控、新理念新技术研讨会召开
    p   由天津市滨海新区科学技术协会和中国蛋白药物质量联盟主办,北京医恒健康科技有限公司和天津市滨海新区蛋白药物质量和产业技术创新研究会承办的“药品研发中杂质与杂质对照品研究监控、新理念新技术研讨会”于12月10日在天津巨川百合酒店胜利召开。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/bc2519d0-e110-45f9-a4b9-a587227c56be.jpg" title=" 培训现场.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 培训现场 /span /strong /p p   本次研讨会来自全国各地的医药企事业单位及科研院所的药品研发人员、注册申报人员、质量控制人员、项目负责人等有关人员参加了本次研讨会。10日上午,研讨会开幕式由中国蛋白药物质量联盟秘书长史晋海博士主持,介绍了出席此次会议开幕式的嘉宾,包括天津市滨海新区科学技术协会学会处侯立群处长,三位演讲专家余立老师、周立春老师,山广志老师。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/3ed2bb10-7c99-43a4-a149-f4b53818d3c8.jpg" title=" 史晋海博士主持.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 史晋海博士主持 /span /strong /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " /span /strong /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/d08b2e76-4772-4265-a184-7061d03658ea.jpg" title=" 余立老师2 .jpg" / br/ /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 余立老师 /span /strong /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/b04550f4-a0d4-4b49-96d8-975893232c64.jpg" style=" " title=" 周立春老师.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 周立春老师 /span /strong /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " /span /strong /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/94d80e5c-6b2f-49ab-8f61-a6f64f658cb3.jpg" title=" 山广志老师.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 山广志老师 /span /strong /p p   无论是创新药研发还是仿制药一致性评价,无论是原料药还是制剂产品,无论是药品临床前开发还是上市后质量监控,杂质的研究无疑都是重头戏。也是药品申报资料中出现问题最多的模块。由于药品中杂质含量的水平比较活性成分而言大多都是百分之几、千分之几、甚至更低数量级的,一种药品中含有几种、十几种、乃至几十种杂质,所以药品杂质的定性定量都远比活性成分难度要大的多。余立老师就杂质研究与控制思路为与会人员进行的讲解。 br/ /p p   杂质定向控制越来越细,质量标准中特定杂质越规定越多,定位,定量,测定响应因子,哪个也少不了杂质对照品。类杂质对照品的制备、纯化、结构确证,特别是赋值方法都有哪些要求,还有杂质对照品分装、保存时的注意事项的相关细节,山广志老师就在这次研讨会中介绍了这方面的常见问题与案例分析。 /p p   微信群中常有问杂质研究与杂质检测方法学验证方面的的问题。但微信交流信息局限大,讨论不方便也不具有系统性,解决一两个问题其他问题还是不明白。周立春老师用她30多年的一线审评与实验室工作经验为与会人员讲解了杂质研究与杂质检测的方法学验证。 /p p   会后问答环节讨论热烈。与会者意犹未尽,期待更多交流机会。 /p p   生物医药产业是天津市八大优势支柱产业之一,更是滨海新区重点发展产业。本次研讨会将创造机会,促进天津市滨海新区与顶级生物制药企业和专业人才的合作,极大地推动相关领域健康快速发展。此次会议搭建了具有国内影响力的生物医药专业交流平台,既利于增强新区医药企业实施创新发展及国际化战略的信心,又扩大新区医药企业在生物医药领域中的影响力,大力促进新区医药产业的健康发展。 /p p   /p
  • 重磅上市|土壤呼吸测定仪评估土壤健康与活性
    型号推荐:重磅上市|土壤呼吸测定仪评估土壤健康与活性 ,土壤呼吸作为土壤生态系统中的关键过程,直接反映了土壤的健康状况、微生物活性及碳循环动态。土壤呼吸测定仪作为现代土壤科学研究的得力工具,其在农业、生态及环境科学领域发挥着不可替代的作用。本文将详细阐述土壤呼吸测定仪的四大作用。 一、评估土壤健康与活性 土壤呼吸测定仪通过精确测量土壤释放的二氧化碳量,直接反映了土壤中微生物的呼吸作用强度和土壤有机质的分解速率。这一 数据是评估土壤健康状态和生物活性的重要指标,为土壤管理和改良提供了科学依据。 二、指导农业生产与施肥 土壤呼吸与土壤肥力及作物生长密切相关。通过土壤呼吸测定仪的监测,农民可以了解土壤中有机物质的分解速率和养分供应情况,从而制定科学的种植计划和施肥方案。这有助于提高农业生产效率,减少化肥的过量使用,降低环境污染。 三、监测生态系统碳循环 土壤是全球碳循环的重要环节,土壤呼吸作用的变化直接影响大气中二氧化碳的含量。土壤呼吸测定仪的应用,使得科研人员能够深入探究土壤碳排放规律,为理解全球气候变化、制定碳减排政策提供重要数据支持。 四、评估生态修复效果 在生态修复项目中,土壤呼吸测定仪可用于监测修复后土壤生态系统的恢复情况。通过对比修复前后的土壤呼吸速率,可以评估修复措施的有效性,为优化修复方案提供数据支持。 五、仪器特点 1、Android安卓操作系统,更便捷的人机交互操作 2、7寸高清触摸屏,操作简单、界面清晰 3、气体流量可通过仪器设定,可以进行不同流量下土壤呼吸强度的试验 4、专用动态分析软件,可在安卓显示屏上实时显示实验过程,省去往电脑端拷贝数据,整理分析; 5、支持wifi、4G联网;数据可无线上传至云平台 6、存储空间16G,可存储100000+条数据 7、数据可直接通过USB接口导出到U盘 8、检测完成可直接打印并上传检测数据结果 9、支持GPS定位; 土壤呼吸测定仪在评估土壤健康、指导农业生产、监测碳循环及评估生态修复效果等方面发挥着重要作用。随着科学技术的不断进步,土壤呼吸测定仪的精度和智能化程度将不断提高,为土壤科学研究和生态环境保护贡献更大力量。
  • 快递外包装检出阳性 是否能传染给人?
    11月15日,据媒体报道,北京中关村街道接到海淀疾控中心通报,科源社区居民一件内蒙古自治区锡林郭勒盟发出的快递物品外包装检测结果为阳性。  事情详情是这样的。10月31日,该居民收到一快递,内包装为无纺布袋,拆封后即将外包装丢弃。11月13日晚上,其接到内蒙古锡林郭勒警方电话,称当地陆续检测出快递包裹有阳性。逐级上报后,海淀区疾控中心去其家中采集3件咽拭子和10件外环境,无纺布袋检测结果为阳性,其余均为阴性。  事实上,在北京检出快递外包装阳性之前,内蒙古、黑龙江、辽宁等地最近也发现类似案例。  一时间,舆论哗然,半个月前收到的快递居然呈阳性。病毒到底是活的还是死的,能在快递表面生存多久,还会传染人吗?  “来自疫区的快递包装外表面大概率会带有新冠病毒,毕竟新冠病毒感染者会通过多种途径外排病毒。但经过远距离和长时间运输,存在死病毒的可能性较大,活病毒的几率很小。”16日,南方医科大学生物安全研究中心主任赵卫教授在接受科技日报记者采访时说。  赵卫表示,即使是死病毒,但它依然有核酸,所以核酸检测时会呈阳性。但因为是死病毒,没有活性,一般来讲不具备传染性,公众对此大可不必过度恐慌。  海淀区疾控中心方面称,检测出包裹内包装的无纺布袋新冠病毒基因片段阳性,只能证明这个包裹曾经被新冠病毒污染过,包裹上的病毒究竟是否有活性、是否有传染性,无法凭基因片段检测得出结论。  至于新冠病毒在环境中存活时间到底有多长?赵卫解释,新冠病毒对高温和干燥敏感,一般来讲,在印刷品和薄纸表面,3小时后即检测不到有活性的病毒了。而在衣物表面,病毒可以存活2天,在不锈钢表面,可以存活7天。在外科口罩表面,7天之后仍然可以检测到较多的有活性的新冠病毒。  “研究表明,新冠病毒在4℃最稳定,14天之后大部分病毒依旧存活。22℃下7天后仍然可以检测到存活的病毒,但是14天之后就完全检测不到了。”赵卫强调。  “因此,来自疫区的快递在经过长距离运输后,存在活病毒的可能性较小。”赵卫说。  在他看来,更值得注意的是来自冷链运输的物品。三文鱼上附着的新冠病毒在4℃存活时间至少10天,25℃时存活2天,两种温度条件下病毒滴度随着时间延长均不断下降。此外,自由悬浮在细胞培养液中的新冠病毒在4℃和25℃条件下存活时间至少8天,但病毒滴度在4℃下变化不明显,25℃下滴度下降明显。  赵卫建议,公众尽量不要购买来自疫区进口的冷链食品,尽可能减少生吃冷链食品,加热处理过的食品基本上是安全的。收快递者可以在室外环境中拆下外包装弃于垃圾箱中,有条件尽量戴口罩和一次性手套操作,弃置后应及时洗手。
  • 现代中药对照品与标品资源库落户中山
    全国规模最大的现代中药及天然产物活性物质对照品与标准品资源库,将落户中山健康科技产业基地。   全国标准样品技术委员会天然产物标样专业工作组常务副组长张天佑在接受记者采访时说,我国个别中药药品近年来相继出现的问题,正是标准缺失所致。从现代中药及天然产物活性物质中提取有效成分制作对照品与标准品,使之成为溯源性的根据、分析检测仪器的校准标准物质和质量控制的标准,可为中药新药研发、生产提供标准,“这是中药走向国际市场,突破国际技术壁垒的途径。”   国家药监局原副局长任德权称,选择在中山建立这个资源库,不仅因为中山国家健康科技产业基地已经具备承载这个项目的成熟条件,而且由于中山毗邻港澳,可联合粤、港、澳的资源共同打造一个国家级的标准平台,为中国争取在国际标准化中的话语权。   “这样,中药出口就拿到了‘国际通行证’。”中山国家健康科技产业基地公司总经理梁兆华形象地比喻。   该项目由中山健康科技产业基地、全国标准样品技术委员会、中山大学药学院和广东新龙和药业有限公司合作,项目运营后,3至5年内可以建成拥有几千种对照品与标准品的资源库。该项目有望在今年“328”招商经贸洽谈会上签约。
  • 液相二极管阵列检测器,让假阳性峰无处可藏——测定食品中的胭脂虫红色素
    胭脂虫红色素是以醌类色素胭脂红酸为主要成分的红色染料,从胭脂虫(原产于中南美洲的昆虫)中提炼而得,目前广泛应用于食品、药品、化妆品等众多领域。 我国国家标准《GB2760-2007食品添加剂使用卫生标准》中规定了食品中胭脂虫红的限量值,其中:果冻中胭脂虫红(以胭脂红酸计)的最大添加量为0.05g/kg,饮料中最大添加量为0.6g/kg。 目前对食品中胭脂虫红酸的检测方法主要有:高效液相色谱法(HPLC)、分光光度法、毛细管电泳法和薄层色谱法(TLC)。日本卫生试验法中规定胭脂虫红色素的试验方法为TLC法,但是作为参考方法,也介绍了使用HPLC的测定例。 本文使用日立HPLC-二极管阵列检测器(DAD)对食品中的胭脂红酸进行了测定,除了峰的保留时间外,还根据紫外吸收光谱对胭脂红酸的定性进行了确认。图为.胭脂红酸标准样品的测定图为.果冻中胭脂红酸的测定图为.清凉饮料中胭脂红酸的测定 通过使用DAD检测器可以对标准样品和食品样品中检出的峰进行紫外吸收光谱的比较,结果发现果冻中两者的光谱一致,而清凉饮料中光谱形状则不同。由此可以认为,在清凉饮料中检出的峰除胭脂红酸外,还混合了其他成分。进一步使用DAD检测器的纯度检测功能检测这个峰的纯度,结果发现其纯度很低,认定是假阳性峰。综上认为,通过使用DAD检测器可以增强定性能力,排除假阳性峰。关于该应用的详细信息,请参考:http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102446/down_250484.htm关于日立高效液相色谱仪Chromaster,请参考:http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102446/C137940.htm关于日立高新技术公司:日立高新技术公司,于2013年1月,融合了X射线和热分析等核心技术,成立了日立高新技术科学。以“光”“电子线”“X射线”“热”分析为核心技术,精工电子将本公司的全部股份转让给了株式会社日立高新,因此公司变为日立高新的子公司,同时公司名称变更为株式会社日立高新技术科学,扩大了科学计测仪器领域的解决方案。日立高新技术集团产品涵盖半导体制造、生命科学、电子零配件、液晶制造及工业电子材料,产品线更丰富的日立高新技术集团,将继续引领科学领域的核心技术。更多信息敬请关注:http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102446/
  • 北京包装饮用水行业协会立项《活性氢水》和《活性氢水抗氧化性测定 ABTS法》两项团体标准
    各有关单位:根据《北京包装饮用水行业协会团体标准管理办法》的相关规定,协会于 2023 年5月5日组织专家对《活性氢水》和《活性氢水抗氧化性测定 ABTS法》两项团体标准进行了立项评审。该标准由青春永驻(北京)生物科技有限公司提出,经专家评估,所申报的团体标准符合立项条件,现批准立项。请各团体标准编制单位、企业按照专家评审意见和《北京包装饮用水行业协会团体标准管理办法》的工作要求,抓紧组织实施,积极推进团体标准编制工作,按计划完成编制工作。负责人:高志芳联系电话: 13520400567邮箱:gaozfang@163.com北京包装饮用水行业协会2023年5月6日
  • 中国标准化研究院征集《宠物食品中β-烟酰胺单核苷酸(NMN)含量测定 高效液相色谱法》和《生物活性物质生物利用度体内评价指南》2项团体标准起草单位和起草专家
    各有关单位及专家:近日由中国标准化研究院牵头提出并制定的《宠物食品中β-烟酰胺单核苷酸(NMN)含量测定 高效液相色谱法》和《生物活性物质生物利用度体内评价指南》团体标准项目由中国产学研合作促进会立项。为广泛吸纳各相关方参与,充分依托各方资源开展生物活性物质研究与应用标准化工作,现面向社会公开征集以上标准起草单位以及起草专家,有关事项通知如下:一、团体标准项目介绍标准1名称:《宠物食品中β-烟酰胺单核苷酸(NMN)含量测定 高效液相色谱法》;标准2名称:《生物活性物质生物利用度体内评价指南》。二、报名要求1. 参与单位应为标准的修订提供技术支持,所推荐的人员应具备较强的专业工作能力,以及丰富的生物活性物质研发或实践经验,能保障其充分参与团体标准起草过程;2. 参与人员应熟悉标准化知识,掌握标准化文件起草规则,按时参加标准起草工作会议,积极提出建设性意见,并能完成所承担的工作任务。三、其他要求请有意向报名参加上述团体标准起草的单位结合自身优势,积极参与标准起草工作,按要求填写团体标准起草工作组申请表(附件1),加盖公章后于2024年9月30日前以电子邮件或邮寄方式寄至中国标准化研究院。四、联系方式联系人:兰韬 吴琦电 话:18810608738、13811392773010-58811108、58811653邮 箱:lantao@cnis.ac.cnwuqi@cnis.ac.cn 地 址:北京市海淀区知春路4号附件1:团体标准起草工作组申请表中国标准化研究院2024年8月5日 附件:附件1:团体标准起草工作组申请表.docx
  • 中药复杂体系活性成分系统分析方法及其在质量标准中的应用研究获2012国家自然科学二等奖
    1月18日,中共中央、国务院在北京人民大会堂举行2012年度国家科学技术奖励大会。上海药物所“中药复杂体系活性成分系统分析方法及其在质量标准中的应用研究”获得2012年度国家自然科学二等奖,主要完成人为果德安、叶敏(北京大学)、吴婉莹、关树宏、刘璇。   该项目综合应用中药化学、分析化学、中药药理学及现代生物学等多学科的技术和方法,创新性地构建了“化学分析-体内代谢-生物机制”中药复杂体系活性成分的系统分析方法学体系,并在此基础上建立了中药现代质量控制标准模式并成功用于中国药典和美国药典标准中,取得了系列具有国际影响的研究成果。该项目在化学成分分析方面,在国内外率先开展中药指纹图谱研究并将LC/MS技术应用于中药复杂体系的分析,提出了化学指纹图谱分析结合多指标成分定量的中药质量控制新模式,深入研究一个对照品测定多个成分含量的“一测多评”方法 在体内代谢分析方面,率先开展中药复杂体系的体内代谢及药代动力学分析研究,提出并建立了生物转化作为中药体内代谢研究的体外研究模型,为中药的体内代谢研究增加了新的研究手段 在中药复杂体系作用的生物学机制的系统研究方面,建立了以蛋白质组为主的系统生物学方法运用于中药生物学作用研究的新模式 本项目对“化学分析-体内代谢-生物机制”的中药现代化研究方法体系进行了10多年的研究与实践,提出了“深入研究,浅出标准”构建现代中药质量标准的基本理念。该项目发表SCI论文89篇,20篇核心论文累积SCI他引605次。完成的8个中药标准收载入2010年版《中国药典》,中药丹参药材和粉末2个标准被《美国药典》采纳,是第一个由我国学者完成被《美国药典》接受的中药标准,并被美国药典会认定为今后中药标准收入美国药典的典范和模板,也充分说明了该项目的国际影响力。
  • 快速检测技术终极版
    1. 食品加工中危害分为哪三个方面,每一方面包括哪些因素?   ⑴生物性危害:细菌性危害、真菌性危害、病毒性危害、寄生虫危害、虫鼠害   ⑵化学性危害:天然毒素及过敏原、农药残留、兽药残留、激素残留、重金属超标、添加剂滥用和非法使用、包装材料、容器与设备带来危害   ⑶物理性危害:非正常外来杂质(如玻璃、石头、金属、塑料等)。   2. 简述快速检测定义?   在短时间内,如几分钟、十几分钟,采用不同方式方法检测出被检物质是否处于正常状态,检测得到的结果是否符合标准规定值,被检物质本身是不是有毒有害物质,由此而发生的操作行为称之为快速检测。   3. 简述食品安全快速检测意义?   ①快速检测是食品安全监管人员的有利工具:在日常卫生监督过程中,除感官检测外,采用现场快速检测方法,及时发现可疑问题,迅速采取相应措施,这对提高监督工作效率和力度,保障食品安全有着重要的意义。②快速检测是实验室常规检测的有益补充: 采用快速检测,可使食品安全预警前移,可以扩大食品安全控制范围。对有问题的样品必要时送实验室进一步检测,既提高了监督监测效率,又能提出有针对性的检测项目,达到现场检测与实验室检测的有益互补。③快速检测是大型活动卫生保障与应急事件处理的有效措施:在大型活动卫生保障中,为了防止发生群发性食物中毒④快速检测是中国国情的一种需要:中国在提高食品安全整体水平方面仍有很长的路要走,快速检测将会在其中起到积极有效的作用。   4. 现场快速检测方法形式有哪些?   试纸法:用试纸直接显色来定性并作为限量指示、用试纸层析显色或层析后胶体金显色来定性或作为限量指示、用试纸显色的深浅来半定量。试管法:用速测管显色来定性、用速测管显色的深浅半定量。滴瓶法:将标准溶液放在滴瓶中,根据消耗的滴数来判定被检物质的含量。便携式仪器法   5. 快速检测结果表述形式有哪些?   ①定性检测:即快速地得出被检样品中是否含有有毒有害物质,或其本身就是有毒有害物质。通常以阴性或阳性表述。阴性表示用本方法未检出要检测的物质。阳性表示检出了有毒有害物质。②限量检测:即快速地得出被检样品中有毒有害物质是否超出标准规定值或有效物质是否达到标准规定值。通常以合格或不合格表述。③半定量检测:能够快速地得出所测物质的大概含量,通常以合格或不合格表述,也可标示出具体数值。④定量检测:如温度、湿度、消毒间紫外线辅照强度、纯净水电导率等物理指标的检测。通常以具体数值表述。   6. 简述快速检测注意事项及采样的注意事项?   检测注意事项:①对于阳性结果以及不合格结果的样品:应重复测试,排除偶然误差。重要样品,如含急性中毒物质或可能会对后期处理带来较大社会影响或较大经济损失的样品,应注意留样,并将样品送实验室进一步确证。②对于阴性与阳性、合格与不合格之间不易判定的样品:应重复测试,以多次重复相同的结果报告之。   采样注意事项:①为了监测总体样品的安全卫生状况,应注意采样的代表性原则。均衡地,不加选择地从全部批次的各部分随机性采样。②为了检验样品掺假、投毒或怀疑中毒的食物等,应注意采样的典型性原则。根据已掌握的情况有针对性地采样。如怀疑某种食物可能是食物中毒的原因食品,或者感官上已初步判定出该食品存在卫生质量问题,而进行有针对性的选择采样。③当检出阳性样品或不合格样品时,应考虑采样方法是否正确。必要时送实验室进一步检测。   7. 简述利用农药速测卡快速检测有机磷农药的基本原理,并简述基于农药速测卡采用表面测定法快速检测蔬菜中有机磷农药的方法过程?   原理:利用对有机磷和氨基甲酸脂类农药高敏感的胆碱酯酶和显色剂做成的试纸。胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯(红色)水解为乙酸与靛酚(蓝色),有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用,使催化、水解、变色的过程发生改变,由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。   方法过程:擦去蔬菜表面泥土,滴2~3滴浸提液在蔬菜表面,用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。取一片速测卡,将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。放置10min进行预反应,将速测卡对折后,用手捏3min时,打开与空白对照实验卡比较判定。白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果,白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同为阴性结果。   8. 简述利用试剂盒法测定毒鼠强的原理并简述此方法检测固体样品的过程?   试剂盒法检测原理:毒鼠强可与二羟基萘二磺酸发生反应变为淡紫色,本方法检出限为1ug,最低检出浓度为2ug/ml,浓度高时可变为深红色。   检测固体样品过程:取2mL或2g样品放入比色管中,加入5mL乙酸乙酯,充分振摇,静置,取上清液2mL于试管中或表面皿上,在 85℃左右水浴中加热,待乙酸乙酯剩余1mL以下时,提高水浴温度挥干余液,放至室温后,加入1mL的纯净水充分溶解残渣,加入3滴毒鼠强显色剂,轻轻摇匀,加入 5mL毒鼠强试液,轻轻摇动后,将试管放入90℃以上水浴中,加热5min后取出,观察颜色变化。溶液颜色变为淡紫红色为毒鼠强阳性反应,随着毒鼠强浓度增加,紫色加深。   9. 简述利用异羟肟酸铁快速检验氟乙酰胺的原理,简述此方法检测固体样品的过程?   检测原理:氟乙酰胺与羟胺在碱性条件下,生成异羟肟酸,与三价铁离子作用生成色异羟肟酸络合物。检出限50&mu g/ml。   方法:取待检液1ml左右于试管中(同时取一份同等量的蒸馏水或纯净水于另一试管中做阴性对照实验),各加盐酸羟胺溶液5滴,加氢氧化钠溶液10滴,置沸水中水浴10分钟以上,取出放冷后,加盐酸溶液调整溶液pH值到3~4之间,加三氯化铁溶液3~4滴,观察溶液颜色变化情况,阳性结果为粉红或紫红色。   固体过程:取2g~5g捣碎后的样品,加3倍于样品重的纯净水,充分振摇,静置或过滤得到1mL左右的澄清液。测定:取待检液1mL左右于试管中,加氢氧化钠溶液10滴,加盐酸羟胺溶液5滴,置沸水中水浴10min,取出放冷,加盐酸溶液调pH值3~5后,加三氯化铁溶液3~10滴,阳性结果为粉红或紫红色,阴性结果为浅黄或黄色。   10. 叙述砷的快速检测原理方法以及过程?   原理:氯化金与砷相遇产生反应,可使氯化金硅胶柱变成紫红或灰紫色,在装有氯化金硅胶的柱中砷含量与变色的长度成正比,以此可达到半定量的目的。   方法过程:取粉碎后的固体样品1g于反应瓶中,加入20mL蒸馏水或纯净水,固体样品需要振摇后浸泡10min,加入两平勺酒石酸,摇匀,加10滴消泡剂,摇匀。取检砷管一支,将空端较长的一端头朝下,在台面上轻敲几下后,剪去两端封头,将空端较长的这头插入带孔的胶塞中。向反应瓶中加入一片产气片, 立即将带有检砷管的胶塞插入反应瓶口中,待产气停止,观察并测量检砷管中氯化金硅胶柱变成紫红或灰紫色的长度。   11. 亚硝酸盐的快速检测方法并简述基本原理和检测固体样品的过程?   亚硝酸盐(速测管快速测定法)原理:亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在偏酸性条件下发生重氮化形成重氮盐,重氮盐与盐酸萘乙二胺发生偶合反应而呈现酒红色。   检测固体样品过程:取粉碎均匀的样品1.0g或1.0ml至10ml比色管中,加蒸馏水或去离子水(纯净水)至刻度,充分震摇后放置,取上清液(或过滤或离心得到的上清液)1.0ml加入到检测管中,盖上盖,将试剂摇溶,10分钟后与标准色板对比,该色板上的数值乘上10即为样品中亚硝酸盐的含量mg/ kg,L(以NaNO2计)。如果测试结果超出色板上的最高值,可定量稀释后测定,并在计算结果时乘上稀释倍数。   12. 液体样品甲醇的快速检测方法及基本原理?   方法:速测盒测定法。(用滴管取酒样6滴于离心管中,加入5滴A试剂氧化剂,放置5min,加入4滴B试剂还原剂,盖盖后上下振摇20次以上使溶液充分混匀,打开盖子,等溶液完全退色,加入2滴C试剂显色剂后,再加入15 滴D试剂,观察管内颜色变化,3min后与对照图谱对比判断酒样中甲醇含量。)   原理:首先向样品中加入酸性高锰酸钾溶液,甲醇很容易氧化成甲醛,而其他醇类则不易氧化成相应之醛类。再与亚硫酸氢钠反应,将未反应的紫色高锰酸钾转变为无色,再加人0.01 g的变色酸二钠盐和1mL的浓硫酸,此指示剂只和甲醛起反应,变色酸二钠盐与甲醛反应的最终产物显紫色,与标准比色卡对照显示样品中甲醇含量。   13. 叙述胶体金免疫层析检验技术的基本原理并叙述结果判断方法以及举例说明在食品安全检测中的应用?   基本原理:样品加入样品吸收垫,样品中的液体首先溶解胶体金垫中含有的胶体金标记的鼠源性单克隆抗体。其次样品中待测抗原与胶体金颗粒标记的鼠源性单克隆抗体结合,形成抗原-抗体-胶体金复合物,并靠毛细作用向检测线移动。在硝酸纤维薄膜的检测线上固定有另一鼠源性单克隆二抗。当样品层析至检测线时,可以进一步形成抗体-抗原-抗体-胶体金双抗体夹心复合物,并在检测线上聚积显现出一条可见的显色反应。无显色反应则表示样品中无抗原存在。而胶体金的量反应了待测抗原的量。从加样垫中泳动过来的过量胶体金标记的单克隆抗体是鼠源性的,无论携带抗原与否,均可被固定于标准的羊抗鼠抗体所捕获,形成显色反应,这种显色反应,既代表了整个反应体系是正确的,同时C区的显色反应的深浅,与检测区中被测抗原的量呈对应关系。   结果判断:将制备好的样品滴加到加样孔中,在指定时间内判定结果。如果检测线上出现红色条带,说明样品呈阳性,如果检测线上没出现红色条带,说明样品呈阴性。如果质控线无条带,说明试纸条无效。   应用:可用于快速检测乳品&mdash 饲料中三聚氰胺的快速检测(造假、非法添加物类)。   14. 酶联免疫检测法检测原理以及本方法的优点?   原理:酶联免疫吸附试验法的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。   优点:具有很高的特异性 另一方面由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性 ELISA法还具有简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点,且适用于大批量标本的检测。   15. 说明黄曲霉毒素试剂盒主要包括哪些组分并采用图示的方式说明双抗体夹心法测抗原的方法?   组分:已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂) 酶标记的抗原或抗体(结合物) 酶的底物 阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中) 结合物及标本的稀释液 洗涤液 酶反应终止液。   过程:1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。   2) 加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。   3) 加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。   4) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。   16. 目前针对苏丹红油溶性非食用色素现场快速检测方法原理及过程?   检测原理:层析法利用混合物中各组分物理化学性质的差异(如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等),使各组分在两相(一相为固定的,称为固定相 另一相流过固定相,称为流动相)中的分布程度不同,从而使各组分以不同的速度移动而达到分离鉴定的目的。   过程:①样品处理:取约1克样品于容器中,加入2~4 ml乙酸乙酯,充分混匀,提取1分钟,静置3分钟以上。②样品点样:在层析纸端底向上约1cm处、平行相隔约1cm,分别用毛细管沾取样品点出5个直径在0.5cm左右的圆点,用毛细管分别沾取苏丹红1、2、3、4号对照液少许点在1、2、3、4号样品点上。③样品展开:取一个250ml以上的烧杯,加入约5ml展开剂,将层析纸(样品端朝下)插入展开剂中靠在杯壁上,待展开剂延层析纸向上平行展开至层析纸顶端约1厘米处时取出层析纸,观察结果。④结果判断:如果样品在展开轨迹中出现斑点,其斑点展开(向上跑)的距离与某一对照液展开后的斑点距离相等、颜色相同或颜色虽浅却相近时,即可判断样品中含有这一色素。   17.目前针对水发水产品中甲醛的快速检测方法及原理?   ①间苯三酚显色法:在碱性条件下,甲醛与间苯三酚反应后使溶液出现橙红色。由于此方法的灵敏度较低,水产品本底存在的甲醛很难参与反应。当人为加入甲醛时,本方法可迅速检测出来。(方法:将水发水产品的浸泡液或水产品上残存的浸泡液滴加到检测管中,加入2滴试剂。当甲醛含量10mg/L时,在试剂与样品接触的局部会出现橙红色,并很快退色。 40mg/L时,试剂与样品接触的局部颜色会较深,整体样品溶液都变为橙红色,显色的时间可达30min。甲醛含量越高,颜色越深,显色的时间较长。空白对照管为试剂本色或淡紫色。)   ②AHMT试剂显色法:甲醛与AHMT试剂在碱性条件下缩合,经高碘酸钾氧化成紫色化合物,然后与比色板比对得出甲醛含量。此方法的灵敏度较高,检出限可达0.25mg/kg。(方法:取1ml澄清液体至试管中,加入4滴1号试剂,再加入4滴2号试剂,盖盖后混匀,1分钟后,加2滴3号试剂,摇匀,5~10分钟内与标准色板比对,找出相同或相近的色阶,色阶上标示的含量即为样品中甲醛的含量mg/kg。)   18. 简述利用平板培养法检测微生物的方法以及ATP荧光法检测餐具表面洁净度的方法?   ATP荧光检测法:ATP是三磷酸腺苷的英文缩写,是生物能量转化产物,存在于所有活的细胞体中。当ATP接触到荧光素酶后,就会发生反应产生出光,物体表面残留的食物和微生物越多,ATP也就越多,发出的荧光也就越强,采用荧光光度计,可将这种光的强度加以记录。在被检物体表面10cm× 10cm的区域内,用拭搽拭抹采样,按仪器使用说明书操作记录测试结果。
  • 《木质活性炭试验方法 表观密度的测定》等2214项国家标准复审结论进行公示
    各有关单位:按照《国家标准化管理委员会关于开展推荐性国家标准复审工作的通知》(国标委发【2022】10号)要求,标准委已完成相关国家标准复审工作。现将《木质活性炭试验方法表观密度的测定》等2214项复审结论为修订或整合修订的项目进行公示。如对复审结论有不同意见,请于2023年4月9日前,登录征求意见公示网页https://std.samr.gov.cn/gb/search/withdrawnReviewDetail?id=6233CB31322EB499374C40DE7FE1C039,通过意见反馈功能,将意见反馈至标准委。国家标准化管理委员会2023年3月10日相关标准如下:序号标准号标准名称归口单位复审结论备注1GB/T12496.1-1999木质活性炭试验方法表观密度的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-20172GB/T12496.10-1999木质活性炭试验方法亚甲基蓝吸附值的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-20173GB/T12496.11-1999木质活性炭试验方法硫酸奎宁吸附值的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-20174GB/T12496.12-1999木质活性炭试验方法苯酚吸附值的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-20175GB/T12496.13-1999木质活性炭试验方法未炭化物的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-20176GB/T12496.14-1999木质活性炭试验方法氰化物的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-20177GB/T12496.15-1999木质活性炭试验方法硫化物的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-20178GB/T12496.16-1999木质活性炭试验方法氯化物的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-20179GB/T12496.17-1999木质活性炭试验方法硫酸盐的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201710GB/T12496.18-1999木质活性炭试验方法酸溶物的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201711GB/T12496.19-2015木质活性炭试验方法铁含量的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201712GB/T12496.2-1999木质活性炭试验方法粒度的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201713GB/T12496.20-1999木质活性炭试验方法锌含量的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201714GB/T12496.21-1999木质活性炭试验方法钙镁含量的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201715GB/T12496.22-1999木质活性炭试验方法重金属的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201716GB/T12496.3-1999木质活性炭试验方法灰分含量的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201717GB/T12496.4-1999木质活性炭试验方法水分含量的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201718GB/T12496.5-1999木质活性炭试验方法四氯化碳吸附率(活性)的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201719GB/T12496.6-1999木质活性炭试验方法强度的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201720GB/T12496.7-1999木质活性炭试验方法pH值的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201721GB/T12496.8-2015木质活性炭试验方法碘吸附值的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201722GB/T12496.9-2015木质活性炭试验方法焦糖脱色率的测定国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201723GB/T12901-2006脂松节油国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12901-2006,GB/T31756-201524GB/T12902-2006松节油分析方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12902-2006,GB/T33029-201625GB/T13803.1-1999木质味精精制用颗粒活性炭国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T13803.1-1999,GB/T13803.3-199926GB/T13803.2-1999木质净水用活性炭国家林业和草原局修订27GB/T13803.3-1999糖液脱色用活性炭国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T13803.1-1999,GB/T13803.3-199928GB/T13803.4-1999针剂用活性炭国家林业和草原局修订29GB/T13803.5-1999乙酸乙烯合成触媒载体活性炭国家林业和草原局修订30GB/T14020-2006氢化松香国家林业和草原局修订31GB/T14021-2009马来松香国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T14021-2009,GB/T14020-200632GB/T14022.1-2009工业糠醇国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T14022.1-2009,GB/T14022.2-200933GB/T14022.2-2009工业糠醇试验方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T14022.1-2009,GB/T14022.2-200934GB/T17664-1999木炭和木炭试验方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:20220535-T-43235GB/T17666-1999黑荆树栲胶单宁快速测定方法国家林业和草原局修订36GB/T18247.1-2000主要花卉产品等级第1部分:鲜切花国家林业和草原局修订37GB/T18247.2-2000主要花卉产品等级第2部分:盆花国家林业和草原局修订38GB/T18247.3-2000主要花卉产品等级第3部分:盆栽观叶植物国家林业和草原局修订39GB/T18247.4-2000主要花卉产品等级第4部分:花卉种子国家林业和草原局修订40GB/T18247.5-2000主要花卉产品等级第5部分:花卉种苗国家林业和草原局修订41GB/T18247.6-2000主要花卉产品等级第6部分:花卉种球国家林业和草原局修订42GB/T1926.1-2009工业糠醛国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T1926.1-2009,GB/T1926.2-198843GB/T1926.2-1988工业糠醛试验方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T1926.1-2009,GB/T1926.2-198844GB/T20399-2006自然保护区总体规划技术规程国家林业和草原局修订45GB/T20416-2006自然保护区生态旅游规划技术规程国家林业和草原局修订46GB/T20449-2006活性炭丁烷工作容量测试方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201747GB/T20450-2006活性炭着火点测试方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201748GB/T20451-2006活性炭球盘法强度测试方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12496.1~22,GB/T20449-2006,GB/T20450-2006,GB/T20451-2006,GB/T35815-2018,GB/T35565-201749GB/T22347-20084号系列紫胶片国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T22347-2008,GB/T22348-2008,GB/T8137-2009,GB/T8138-2009,GB/T8139-2009,GB/T8140-2009,GB/T8141-2009,GB/T8143-2008,GB/T35805-201850GB/T22348-20084号紫胶虫种胶国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T22347-2008,GB/T22348-2008,GB/T8137-2009,GB/T8138-2009,GB/T8139-2009,GB/T8140-2009,GB/T8141-2009,GB/T8143-2008,GB/T35805-201851GB/T26424-2010森林资源规划设计调查技术规程国家林业和草原局修订52GB/T31756-2015重松节油国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12901-2006,GB/T31756-201553GB/T33024-2016柳编制品国家林业和草原局修订54GB/T33029-2016松节油及相关萜烯产品组成毛细管气相色谱分析方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T12902-2006,GB/T33029-201655GB/T8137-2009颗粒紫胶国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T22347-2008,GB/T22348-2008,GB/T8137-2009,GB/T8138-2009,GB/T8139-2009,GB/T8140-2009,GB/T8141-2009,GB/T8143-2008,GB/T35805-201856GB/T8138-2009紫胶片国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T22347-2008,GB/T22348-2008,GB/T8137-2009,GB/T8138-2009,GB/T8139-2009,GB/T8140-2009,GB/T8141-2009,GB/T8143-2008,GB/T35805-201857GB/T8139-2009脱蜡紫胶片、脱色紫胶片和脱色脱蜡紫胶片国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T22347-2008,GB/T22348-2008,GB/T8137-2009,GB/T8138-2009,GB/T8139-2009,GB/T8140-2009,GB/T8141-2009,GB/T8143-2008,GB/T35805-201858GB/T8140-2009漂白紫胶国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T22347-2008,GB/T22348-2008,GB/T8137-2009,GB/T8138-2009,GB/T8139-2009,GB/T8140-2009,GB/T8141-2009,GB/T8143-2008,GB/T35805-201859GB/T8141-2009军用紫胶片国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T22347-2008,GB/T22348-2008,GB/T8137-2009,GB/T8138-2009,GB/T8139-2009,GB/T8140-2009,GB/T8141-2009,GB/T8143-2008,GB/T35805-201860GB/T8142-2008紫胶产品取样方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T22347-2008,GB/T22348-2008,GB/T8137-2009,GB/T8138-2009,GB/T8139-2009,GB/T8140-2009,GB/T8141-2009,GB/T8143-2008,GB/T35805-201861GB/T8143-2008紫胶产品检验方法国家林业和草原局整合修订整合修订标准号:GB/T22347-2008,GB/T22348-2008,GB/T8137-2009,GB/T8138-2009,GB/T8139-2009,GB/T8140-2009,GB/T8141-2009,GB/T8143-2008,GB/T35805-201862GB/T15691-2008香辛料调味品通用技术条件中华全国供销合作总社修订63GB/T18525.6-2001桂园干辐照杀虫防霉工艺中华全国供销合作总社整合修订整合修订标准号:GB/18525.3-2001,GB/18525.4-2001,GB/18525.5-2001,GB/18525.6-200164GB/T20573-2006密蜂产品术语中华全国供销合作总社修订65GB/T21488-2008脐橙中华全国供销合作总社修订66GB/T21528-2008蜜蜂产品生产管理规范中华全国供销合作总社修订67GB/T21532-2008蜂王浆冻干粉中华全国供销合作总社修订68GB/T22299-2008辣椒粉天然着色物质总含量的测定中华全国供销合作总社修订69GB/T22300-2008丁香中华全国供销合作总社修订70GB/T22303-2008芹菜籽中华全国供销合作总社修订71GB/T22306-2008胡荽中华全国供销合作总社修订72GB/T17924-2008地理标志产品标准通用要求全国知识管理标准化技术委员会修订73GB/T20402-2006超市鲜、冻畜禽产品准入技术要求中国商业联合会修订74GB/T8935-2006工业用猪油中国商业联合会修订75GB/T12309-1990工业玉米淀粉中国轻工业联合会修订76GB/T4548-1995玻璃容器内表面耐水侵蚀性能测试方法及分级中国轻工业联合会修订77GB/T11186.1-1989涂膜颜色的测量方法第一部分:原理全国涂料和颜料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T11186.1-1989,GB/T11186.2-1989,GB/T11186.3-198978GB/T11186.2-1989涂膜颜色的测量方法第二部分:颜色测量全国涂料和颜料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T11186.1-1989,GB/T11186.2-1989,GB/T11186.3-198979GB/T11186.3-1989涂膜颜色的测量方法第三部分:色差计算全国涂料和颜料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T11186.1-1989,GB/T11186.2-1989,GB/T11186.3-198980GB/T13491-1992涂料产品包装通则全国涂料和颜料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T9750-1998,GB/T13491-199281GB/T13492-1992各色汽车用面漆全国涂料和颜料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T13492-1992,GB/T13493-199282GB/T13493-1992汽车用底漆全国涂料和颜料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T13492-1992,GB/T13493-199283GB/T1710-2008同类着色颜料耐光性比较全国涂料和颜料标准化技术委员会修订84GB/T1749-1979厚漆、腻子稠度测定法全国涂料和颜料标准化技术委员会修订85GB/T20623-2006建筑涂料用乳液全国涂料和颜料标准化技术委员会修订86GB/T21866-2008抗菌涂料(漆膜)抗菌性测定法和抗菌效果全国涂料和颜料标准化技术委员会修订87GB/T5208-2008闪点的测定快速平衡闭杯法全国涂料和颜料标准化技术委员会修订88GB/T6753.4-1998色漆和清漆用流出杯测定流出时间全国涂料和颜料标准化技术委员会修订89GB/T9750-1998涂料产品包装标志全国涂料和颜料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T9750-1998,GB/T13491-199290GB/T9754-2007色漆和清漆不含金属颜料的色漆漆膜的20°、60°和85°镜面光泽的测定全国涂料和颜料标准化技术委员会修订91GB/T19629-2005医用电气设备X射线诊断影像中使用的电离室和(或)半导体探测器剂量计全国医用电器标准化技术委员会修订92GB/T20013.1-2005核医学仪器例行试验第1部分:辐射计数系统全国医用电器标准化技术委员会修订93GB/T20013.2-2005核医学仪器例行试验第2部分:闪烁照相机和单光子发射计算机断层成像装置全国医用电器标准化技术委员会修订94GB/T20013.3-2015核医学仪器例行试验第3部分:正电子发射断层成像装置全国医用电器标准化技术委员会修订95GB/T19042.2-2005医用成像部门的评价及例行试验第3-2部分:乳腺摄影X射线设备成像性能验收试验全国医用电器标准化技术委员会修订96GB/T16867-1997聚苯乙烯和丙烯腈-丁二烯-苯乙烯树脂中残留苯乙烯单体的测定气相色谱法全国塑料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T16867-1997,GB/T38271-201997GB/T30924.1-2016塑料乙烯-乙酸乙烯酯(EVAC)模塑和挤出材料第1部分:命名系统和分类基础全国塑料标准化技术委员会修订98GB/T32679-2016超高分子量聚乙烯(PE-UHMW)树脂全国塑料标准化技术委员会修订99GB/T32682-2016塑料聚乙烯环境应力开裂(ESC)的测定全缺口蠕变试验(FNCT)全国塑料标准化技术委员会修订100GB/T33319-2016塑料聚乙烯(PE)透气膜专用料全国塑料标准化技术委员会修订101GB/T1040.3-2006塑料拉伸性能的测定第3部分:薄膜和薄片的试验条件全国塑料标准化技术委员会修订102GB/T1040.4-2006塑料拉伸性能的测定第4部分:各向同性和正交各向异性纤维增强复合材料的试验条件全国塑料标准化技术委员会修订103GB/T12002-1989塑料门窗用密封条全国塑料标准化技术委员会修订104GB/T12005.1-1989聚丙烯酰胺特性粘数测定方法全国塑料标准化技术委员会修订105GB/T12005.10-1992聚丙烯酰胺分子量测定粘度法全国塑料标准化技术委员会修订106GB/T12005.2-1989聚丙烯酰胺固含量测定方法全国塑料标准化技术委员会修订107GB/T12005.6-1989部分水解聚丙烯酰胺水解度测定方法全国塑料标准化技术委员会修订108GB/T12005.7-1989粉状聚丙烯酰胺粒度测定方法全国塑料标准化技术委员会修订109GB/T12005.8-1989粉状聚丙烯酰胺溶解速度测定方法全国塑料标准化技术委员会修订110GB/T13940-1992聚丙烯酰胺全国塑料标准化技术委员会修订111GB/T1633-2000热塑性塑料维卡软化温度(VST)的测定全国塑料标准化技术委员会修订112GB/T1634.3-2004塑料负荷变形温度的测定第3部分:高强度热固性层压材料全国塑料标准化技术委员会修订113GB/T19466.1-2004塑料差示扫描量热法(DSC)第1部分:通则全国塑料标准化技术委员会修订114GB/T19466.2-2004塑料差示扫描量热法(DSC)第2部分:玻璃化转变温度的测定全国塑料标准化技术委员会修订115GB/T19466.3-2004塑料差示扫描量热法(DSC)第3部分:熔融和结晶温度及热焓的测定全国塑料标准化技术委员会修订116GB/T19466.4-2016塑料差示扫描量热法(DSC)第4部分:比热容的测定全国塑料标准化技术委员会修订117GB/T19467.1-2004塑料可比单点数据的获得和表示第1部分:模塑材料全国塑料标准化技术委员会修订118GB/T19467.2-2004塑料可比单点数据的获得和表示第2部分:长纤维增强材料全国塑料标准化技术委员会修订119GB/T2913-1982塑料白度试验方法全国塑料标准化技术委员会修订120GB/T33047.1-2016塑料聚合物热重法(TG)第1部分:通则全国塑料标准化技术委员会修订121GB/T33061.1-2016塑料动态力学性能的测定第1部分:通则全国塑料标准化技术委员会修订122GB/T33061.10-2016塑料动态力学性能的测定第10部分:使用平行平板振荡流变仪测定复数剪切黏度全国塑料标准化技术委员会修订123GB/T5759-2000氢氧型阴离子交换树脂含水量测定方法全国塑料标准化技术委员会修订124GB/T5760-2000氢氧型阴离子交换树脂交换容量测定方法全国塑料标准化技术委员会修订125GB/T7131-1986裂解气相色谱法鉴定聚合物全国塑料标准化技术委员会修订126GB/T8325-1987聚合物和共聚物水分散体pH值测定方法全国塑料标准化技术委员会修订127GB/T7142-2002塑料长期热暴露后时间-温度极限的测定全国塑料标准化技术委员会修订128GB/T9347-1988氯乙烯-乙酸乙烯酯共聚物中乙酸乙烯酯的测定方法全国塑料标准化技术委员会修订129GB/T12006.4-1989聚酰胺均聚物沸腾甲醇可提取物测定方法全国塑料标准化技术委员会修订130GB/T12007.2-1989环氧树脂钠离子测定方法全国塑料标准化技术委员会修订131GB/T12007.3-1989环氧树脂总氯含量测定方法全国塑料标准化技术委员会修订132GB/T12007.7-1989环氧树脂凝胶时间测定方法全国塑料标准化技术委员会修订133GB/T14520-1993气相色谱分析法测定不饱和聚酯树脂增强塑料中的残留苯乙烯单体含量全国塑料标准化技术委员会修订134GB/T32684-2016塑料酚醛树脂游离甲醛含量的测定全国塑料标准化技术委员会修订135GB/T33069-2016工业用聚N-乙烯基吡咯烷酮检测方法全国塑料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T33069-2016,GB/T33070-2016136GB/T33070-2016工业用聚N-乙烯基吡咯烷酮全国塑料标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T33069-2016,GB/T33070-2016137GB/T33317-2016塑料酚醛树脂六次甲基四胺含量的测定凯氏定氮法、高氯酸法和盐酸法全国塑料标准化技术委员会修订138GB/T12135-2016气瓶检验机构技术条件全国气瓶标准化技术委员会修订139GB/T12137-2015气瓶气密性试验方法全国气瓶标准化技术委员会修订140GB/T13077-2004铝合金无缝气瓶定期检验与评定全国气瓶标准化技术委员会修订141GB/T13591-2009溶解乙炔气瓶充装规定全国气瓶标准化技术委员会修订142GB/T14193-2009液化气体气瓶充装规定全国气瓶标准化技术委员会修订143GB/T33215-2016气瓶安全泄压装置全国气瓶标准化技术委员会修订144GB/T17315-2011玉米种子生产技术操作规程全国农作物种子标准化技术委员会修订145GB/T17318-2011大豆原种生产技术操作规程全国农作物种子标准化技术委员会修订146GB/T3242-2012棉花原种生产技术操作规程全国农作物种子标准化技术委员会修订147GB/T8059-2016家用和类似用途制冷器具全国家用电器标准化技术委员会修订148GB/T15470-2002家用直接作用式房间电加热器性能测试方法全国家用电器标准化技术委员会修订149GB/T21097.1-2007家用和类似用途电器的安全使用年限和再生利用通则全国家用电器标准化技术委员会修订150GB/T12811-1991硬质泡沫塑料平均泡孔尺寸试验方法全国塑料制品标准化技术委员会修订151GB/T10009-1988丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)塑料挤出板材全国塑料制品标准化技术委员会修订152GB/T11548-1989硬质塑料板材耐冲击性能试验方法(落锤法)全国塑料制品标准化技术委员会修订153GB/T13525-1992塑料拉伸冲击性能试验方法全国塑料制品标准化技术委员会修订154GB/T14153-1993硬质塑料落锤冲击试验方法通则全国塑料制品标准化技术委员会修订155GB/T14154-1993塑料门垂直荷载试验方法全国塑料制品标准化技术委员会修订156GB/T15047-1994塑料扭转刚性试验方法全国塑料制品标准化技术委员会修订157GB/T17689-2008土工合成材料塑料土工格栅全国塑料制品标准化技术委员会修订158GB/T17690-1999土工合成材料塑料扁丝编织土工布全国塑料制品标准化技术委员会修订159GB/T18475-2001热塑性塑料压力管材和管件用材料分级和命名总体使用(设计)系数全国塑料制品标准化技术委员会修订160GB/T18992.1-2003冷热水用交联聚乙烯(PE-X)管道系统第1部分:总则全国塑料制品标准化技术委员会修订161GB/T18992.2-2003冷热水用交联聚乙烯(PE-X)管道系统第2部分:管材全国塑料制品标准化技术委员会修订162GB/T19274-2003土工合成材料塑料土工格室全国塑料制品标准化技术委员会修订163GB/T19275-2003材料在特定微生物作用下潜在生物分解和崩解能力的评价全国塑料制品标准化技术委员会修订164GB/T19276.1-2003水性培养液中材料最终需氧生物分解能力的测定采用测定密闭呼吸计中需氧量的方法全国塑料制品标准化技术委员会修订165GB/T19276.2-2003水性培养液中材料最终需氧生物分解能力的测定采用测定释放的二氧化碳的方法全国塑料制品标准化技术委员会修订166GB/T19811-2005在定义堆肥化中试条件下塑料材料崩解程度的测定全国塑料制品标准化技术委员会修订167GB/T19993-2005冷热水用热塑性塑料管道系统管材管件组合系统热循环试验方法全国塑料制品标准化技术委员会修订168GB/T21302-2007包装用复合膜、袋通则全国塑料制品标准化技术委员会修订169GB/T21332-2008硬质泡沫塑料水蒸气透过性能的测定全国塑料制品标准化技术委员会修订170GB/T21558-2008建筑绝热用硬质聚氨酯泡沫塑料全国塑料制品标准化技术委员会修订171GB/T8804.1-2003热塑性塑料管材拉伸性能测定第1部分:试验方法总则全国塑料制品标准化技术委员会修订172GB/T8804.2-2003热塑性塑料管材拉伸性能测定第2部分:硬聚氯乙烯(PVC-U)、氯化聚氯乙烯(PVC-C)和高抗冲聚氯乙烯(PVC-HI)管材全国塑料制品标准化技术委员会修订173GB/T8804.3-2003热塑性塑料管材拉伸性能测定第3部分:聚烯烃管材全国塑料制品标准化技术委员会修订174GB/T8807-1988塑料镜面光泽试验方法全国塑料制品标准化技术委员会修订175GB/T8808-1988软质复合塑料材料剥离试验方法全国塑料制品标准化技术委员会修订176GB/T9641-1988硬质泡沫塑料拉伸性能试验方法全国塑料制品标准化技术委员会修订177GB/T10454-2000集装袋全国包装标准化技术委员会修订178GB/T10819-2005木制底盘全国包装标准化技术委员会修订179GB/T13201-1997圆柱体运输包装尺寸系列全国包装标准化技术委员会修订180GB/T14188-2008气相防锈包装材料选用通则全国包装标准化技术委员会修订181GB/T14447-1993塑料薄膜静电性测试方法半衰期法全国包装标准化技术委员会修订182GB/T15170-2007包装容器工业用薄钢板圆罐全国包装标准化技术委员会修订183GB/T15171-1994软包装件密封性能试验方法全国包装标准化技术委员会修订184GB/T15233-2008包装单元货物尺寸全国包装标准化技术委员会修订185GB/T16265-2008包装材料试验方法相容性全国包装标准化技术委员会修订186GB/T16267-2008包装材料试验方法气相缓蚀能力全国包装标准化技术委员会修订187GB/T16929-1997包装材料试验方法透油性全国包装标准化技术委员会修订188GB/T17344-1998包装包装容器气密试验方法全国包装标准化技术委员会修订189GB/T17449-1998包装玻璃容器螺纹瓶口尺寸全国包装标准化技术委员会修订190GB/T18706-2008液体食品保鲜包装用纸基复合材料全国包装标准化技术委员会修订191GB/T18927-2002包装容器金属辅件全国包装标准化技术委员会修订192GB/T191-2008包装储运图示标志全国包装标准化技术委员会修订193GB/T19787-2005包装材料聚烯烃热收缩薄膜全国包装标准化技术委员会修订194GB/T6543-2008运输包装用单瓦楞纸箱和双瓦楞纸箱全国包装标准化技术委员会修订195GB/T30921.5-2016工业用精对苯二甲酸(PTA)试验方法第5部分:酸值的测定全国化学标准化技术委员会修订196GB/T30921.6-2016工业用精对苯二甲酸(PTA)试验方法第6部分:粒度分布的测定全国化学标准化技术委员会修订197GB/T1587-2016工业碳酸钾全国化学标准化技术委员会修订198GB/T10649-2008微量元素预混合饲料混合均匀度的测定全国饲料工业标准化技术委员会修订199GB/T13090-2006饲料中六六六、滴滴涕的测定全国饲料工业标准化技术委员会修订200GB/T13092-2006饲料中霉菌总数的测定全国饲料工业标准化技术委员会修订201GB/T17243-1998饲料用螺旋藻粉全国饲料工业标准化技术委员会修订202GB/T17481-2008预混料中氯化胆碱的测定全国饲料工业标准化技术委员会修订203GB/T17778-2005预混合饲料中d-生物素的测定全国饲料工业标准化技术委员会修订204GB/T17811-2008动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定过滤法全国饲料工业标准化技术委员会修订205GB/T17816-1999饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法全国饲料工业标准化技术委员会修订206GB/T19371.2-2007饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定高效液相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会修订207GB/T19539-2004饲料中赭曲霉毒素A的测定全国饲料工业标准化技术委员会修订208GB/T19540-2004饲料中玉米赤霉烯酮的测定全国饲料工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19540-2004,GB/T28716-2012209GB/T19542-2007饲料中磺胺类药物的测定高效液相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T8381.10-2005,GB/T19542-2007210GB/T19684-2005饲料中金霉素的测定高效液相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会修订211GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T20189-2006,GB/T22147-2008212GB/T20190-2006饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应(PCR)法全国饲料工业标准化技术委员会修订213GB/T20191-2006饲料中嗜酸乳杆菌的微生物学检验全国饲料工业标准化技术委员会修订214GB/T20193-2006饲料用骨粉及肉骨粉全国饲料工业标准化技术委员会修订215GB/T20363-2006饲料中苯巴比妥的测定全国饲料工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T20363-2006,GB/T23741-2009216GB/T20804-2006奶牛复合微量元素维生素预混合饲料全国饲料工业标准化技术委员会修订217GB/T20805-2006饲料中酸性洗涤木质素(ADL)的测定全国饲料工业标准化技术委员会修订218GB/T20807-2006绵羊用精饲料全国饲料工业标准化技术委员会修订219GB/T21033-2007饲料中免疫球蛋白IgG的测定高效液相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会修订220GB/T21035-2007饲料安全性评价喂养致畸试验全国饲料工业标准化技术委员会修订221GB/T21101-2007动物源性饲料中猪源性成分定性检测方法PCR方法全国饲料工业标准化技术委员会修订222GB/T21107-2007动物源性饲料中马、驴源性成分定性检测方法PCR方法全国饲料工业标准化技术委员会修订223GB/T21108-2007饲料中氯霉素的测定高效液相色谱串联质谱法全国饲料工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T8381.9-2005,GB/T21108-2007224GB/T21542-2008饲料中恩拉霉素的测定微生物学法全国饲料工业标准化技术委员会修订225GB/T21696-2008饲料添加剂碱式氯化铜全国饲料工业标准化技术委员会修订226GB/T21996-2008饲料添加剂甘氨酸铁络合物全国饲料工业标准化技术委员会修订227GB/T22144-2008天然矿物质饲料通则全国饲料工业标准化技术委员会修订228GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法全国饲料工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T20189-2006,GB/T22147-2008229GB/T22259-2008饲料中土霉素的测定高效液相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会修订230GB/T22261-2008饲料中维吉尼亚霉素的测定高效液相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会修订231GB/T22262-2008饲料中氯羟吡啶的测定高效液相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会修订232GB/T6438-2007饲料中粗灰分的测定全国饲料工业标准化技术委员会修订233GB/T8381.10-2005饲料中磺胺喹恶啉的测定-高效液相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T8381.10-2005,GB/T19542-2007234GB/T8381.9-2005饲料中氯霉素的测定气相色谱法全国饲料工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T8381.9-2005,GB/T21108-2007235GB/T20538.1-2006基于XML的电子商务业务数据和过程第1部分:核心构件目录全国电子业务标准化技术委员会修订236GB/T26839-2011电子商务仓单交易模式规范全国电子业务标准化技术委员会修订237GB/T26840-2011电子商务药品核心元数据全国电子业务标准化技术委员会修订238GB/T28158-2011国际贸易业务的职业分类与资质管理全国电子业务标准化技术委员会修订239GB/T29191-2012共性服务信息描述规范全国电子业务标准化技术委员会修订240GB/T29192-2012城市交通流信息采集与存储全国电子业务标准化技术委员会修订241GB/T29855-2013社区信息化术语全国电子业务标准化技术委员会修订242GB/T30539-2014国际贸易业务人员商务外语能力标识规范全国电子业务标准化技术委员会修订243GB/T30698-2014电子商务供应商评价准则优质制造商全国电子业务标准化技术委员会修订244GB/T31232.2-2014电子商务统计指标体系第2部分:在线营销全国电子业务标准化技术委员会修订245GB/T31526-2015电子商务平台服务质量评价与等级划分全国电子业务标准化技术委员会修订246GB/T32873-2016电子商务主体基本信息规范全国电子业务标准化技术委员会修订247GB/T10895-2004离心机分离机机械振动测试方法全国分离机械标准化技术委员会修订248GB/T33804-2017农业用腐殖酸钾全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会修订249GB/T32741-2016肥料和土壤调理剂分类全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会修订250GB/T6274-2016肥料和土壤调理剂术语全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会修订251GB/T21001.1-2015制冷陈列柜第1部分:术语全国制冷标准化技术委员会修订252GB/T21001.2-2015制冷陈列柜第2部分:分类、要求和试验条件全国制冷标准化技术委员会修订253GB/T21001.3-2015制冷陈列柜第3部分:试验评定全国制冷标准化技术委员会修订254GB/T21278-2007血液冷藏箱全国制冷标准化技术委员会修订255GB/T22732-2008食品速冻装置流态化速冻装置全国制冷标准化技术委员会修订256GB/T22733-2008食品速冻装置螺旋式速冻装置全国制冷标准化技术委员会修订257GB/T23680-2009制冷剂用干燥剂的试验方法全国制冷标准化技术委员会修订258GB/T23682-2009制冷系统和热泵软管件、隔震管和膨胀接头要求、设计与安装全国制冷标准化技术委员会修订259GB/T26194-2010蓄冷系统性能测试方法全国制冷标准化技术委员会修订260GB/T26205-2010制冷空调设备和系统减少卤代制冷剂排放规范全国制冷标准化技术委员会修订261GB/T28493-2012瓶装、罐装和其它封装饮料自动售货机性能试验方法全国制冷标准化技术委员会修订262GB/T30134-2013冷库管理规范全国制冷标准化技术委员会修订263GB/T15969.8-2007可编程序控制器第8部分:编程语言的应用和实现导则全国工业过程测量控制和自动化标准化技术委员会修订264GB/T11605-2005湿度测量方法全国工业过程测量控制和自动化标准化技术委员会修订265GB/T21109.3-2007过程工业领域安全仪表系统的功能安全第3部分:确定要求的安全完整性等级的指南全国工业过程测量控制和自动化标准化技术委员会修订266GB/T32857-2016保护层分析(LOPA)应用指南全国工业过程测量控制和自动化标准化技术委员会修订267GB/Z37085-2018工业通信网络行规第3-8部分:CC-link系列功能安全通信行规全国工业过程测量控制和自动化标准化技术委员会修订268GB/T6315-2008游标、带表和数显万能角度尺全国量具量仪标准化技术委员会修订269GB/T1602-2001农药熔点测定方法全国农药标准化技术委员会修订270GB/T1603-2001农药乳液稳定性测定方法全国农药标准化技术委员会修订271GB/T1604-1995商品农药验收规则全国农药标准化技术委员会修订272GB/T16150-1995农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法全国农药标准化技术委员会修订273GB/T22177-2008二甲戊灵原药全国农药标准化技术委员会修订274GB/T22602-2008戊唑醇原药全国农药标准化技术委员会修订275GB/T22603-2008戊唑醇可湿性粉剂全国农药标准化技术委员会修订276GB/T22604-2008戊唑醇水乳剂全国农药标准化技术委员会修订277GB/T22605-2008戊唑醇乳油全国农药标准化技术委员会修订278GB/T33031-2016农药水分散粒剂耐磨性测定方法全国农药标准化技术委员会修订279GB/T33808-2017草铵膦原药全国农药标准化技术委员会修订280GB/T6694-1998氰戊菊酯原药全国农药标准化技术委员会修订281GB/T6695-199820%氰戊菊酯乳油全国农药标准化技术委员会修订282GB/T21415-2008体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会修订283GB/T10916-2003农业轮式拖拉机前置装置第1部分:动力输出轴和三点悬挂装置全国拖拉机标准化技术委员会修订284GB/T19407-2003农业拖拉机操纵装置最大操纵力全国拖拉机标准化技术委员会修订285GB/T20948-2007农林拖拉机后视镜技术要求全国拖拉机标准化技术委员会修订286GB/T3871.15-2006农业拖拉机 试验规程 第15部分:质心全国拖拉机标准化技术委员会修订287GB/T3871.3-2006农业拖拉机 试验规程 第3部分:动力输出轴功率试验全国拖拉机标准化技术委员会修订288GB/T3871.4-2006农业拖拉机 试验规程 第4部分:后置三点悬挂装置提升能力全国拖拉机标准化技术委员会修订289GB/T3871.7-2006农业拖拉机 试验规程 第7部分:驾驶员的视野全国拖拉机标准化技术委员会修订290GB/T3871.9-2006农业拖拉机 试验规程 第9部分:牵引功率试验全国拖拉机标准化技术委员会修订291GB/T6238-2004农业拖拉机驾驶室门道、紧急出口与驾驶员的工作位置尺寸全国拖拉机标准化技术委员会修订292GB/T6960.1-2007拖拉机术语第1部分:整机全国拖拉机标准化技术委员会修订293GB/T6960.2-2007拖拉机术语第2部分:传动系全国拖拉机标准化技术委员会修订294GB/T10342-2002纸张的包装和标志全国造纸工业标准化技术委员会修订295GB/T10740-2002纸浆尘埃和纤维束的测定全国造纸工业标准化技术委员会修订296GB/T13023-2008瓦楞芯(原)纸全国造纸工业标准化技术委员会修订297GB/T13505-2007高纯度绝缘木浆全国造纸工业标准化技术委员会修订298GB/T148-1997印刷、书写和绘图纸幅面尺寸全国造纸工业标准化技术委员会修订299GB/T1539-2007纸板耐破度的测定全国造纸工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T1539-2007,GB/T6545—1998300GB/T1543-2005纸和纸板不透明度(纸背衬)的测定(漫反射法)全国造纸工业标准化技术委员会修订301GB/T21245-2007纸和纸板颜色的测定(C/2°漫反射法)全国造纸工业标准化技术委员会修订302GB/T2677.9-1994造纸原料多戊糖含量的测定全国造纸工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T745-2003,GB/T2677.9-1994303GB/T2678.1-1993纸浆筛分测定方法全国造纸工业标准化技术委员会修订304GB/T2678.3-1995纸浆氯耗量(脱木素程度)的测定全国造纸工业标准化技术委员会修订305GB/T2678.4-1994纸浆和纸零距抗张强度测定法全国造纸工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T2678.4-1994,GB/T26460-2011306GB/T2679.14-1996过滤纸和纸板最大孔径的测定全国造纸工业标准化技术委员会修订307GB/T2679.17-1997瓦楞纸板边压强度的测定(边缘补强法)全国造纸工业标准化技术委员会修订308GB/T2679.6-1996瓦楞原纸平压强度的测定全国造纸工业标准化技术委员会修订309GB/T33280-2016纸尿裤规格与尺寸全国造纸工业标准化技术委员会修订310GB/T451.3-2002纸和纸板厚度的测定全国造纸工业标准化技术委员会修订311GB/T455-2002纸和纸板撕裂度的测定全国造纸工业标准化技术委员会修订312GB/T459-2002纸和纸板伸缩性的测定全国造纸工业标准化技术委员会修订313GB/T4687-2007纸、纸板、纸浆及相关术语全国造纸工业标准化技术委员会修订314GB/T6544-2008瓦楞纸板全国造纸工业标准化技术委员会修订315GB/T6545-1998瓦楞纸板耐破强度的测定法全国造纸工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T1539-2007,GB/T6545—1998316GB/T6547-1998瓦楞纸板厚度的测定法全国造纸工业标准化技术委员会修订317GB/T745-2003纸浆多戊糖的测定全国造纸工业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T745-2003,GB/T2677.9-1994318GB/T7977-2007纸、纸板和纸浆水抽提液电导率的测定全国造纸工业标准化技术委员会修订319GB/T7978-2005纸浆酸不溶灰分的测定全国造纸工业标准化技术委员会修订320GB/T12213-1990技术制图玻璃器具表示法全国技术产品文件标准化技术委员会修订321GB/T14691-1993技术制图字体全国技术产品文件标准化技术委员会修订322GB/T15751-1995技术产品文件计算机辅助设计与制图词汇全国技术产品文件标准化技术委员会修订323GB/T16948-1997技术产品文件词汇投影法术语全国技术产品文件标准化技术委员会修订324GB/T17450-1998技术制图图线全国技术产品文件标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18686-2002,GB/T17450-1998,GB/T4457.2-2003,GB/T4457.4-2002325GB/T17453-2005技术制图图样画法剖面区域的表示法全国技术产品文件标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T4458.1-2002,GB/T4458.6-2002,GB/T17453-2005326GB/T18617.1-2002技术产品文件CAD图层的组织和命名第1部分:概述与原则全国技术产品文件标准化技术委员会修订327GB/T18686-2002技术制图CAD系统用图线的表示全国技术产品文件标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18686-2002,GB/T17450-1998,GB/T4457.2-2003,GB/T4457.4-2002328GB/T19096-2003技术制图图样画法未定义形状边的术语和注法全国技术产品文件标准化技术委员会修订329GB/T19827-2005技术产品文件限制使用的文件和产品的保护注释全国技术产品文件标准化技术委员会修订330GB/T20063.1-2006简图用图形符号第1部分:通用信息与索引全国技术产品文件标准化技术委员会修订331GB/T4457.2-2003技术制图图样画法指引线和基准线的基本规定全国技术产品文件标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18686-2002,GB/T17450-1998,GB/T4457.2-2003,GB/T4457.4-2002332GB/T4457.4-2002机械制图图样画法图线全国技术产品文件标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18686-2002,GB/T17450-1998,GB/T4457.2-2003,GB/T4457.4-2002333GB/T4458.1-2002机械制图图样画法视图全国技术产品文件标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T4458.1-2002,GB/T4458.6-2002,GB/T17453-2005334GB/T4458.6-2002机械制图图样画法剖视图和断面图全国技术产品文件标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T4458.1-2002,GB/T4458.6-2002,GB/T17453-2005335GB/T4459.3-2000机械制图花键表示法全国技术产品文件标准化技术委员会修订336GB/T10030-2006团头鲂鱼苗、鱼种全国水产标准化技术委员会修订337GB/T11776-2006草鱼鱼苗、鱼种全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T5055-2008,GB/T9956-2011,GB/T11776-2006,GB/T11777-2006,GB/T11778-2006338GB/T11777-2006鲢鱼苗、鱼种全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T5055-2008,GB/T9956-2011,GB/T11776-2006,GB/T11777-2006,GB/T11778-2006339GB/T11778-2006鳙鱼苗、鱼种全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T5055-2008,GB/T9956-2011,GB/T11776-2006,GB/T11777-2006,GB/T11778-2006340GB/T18654.1-2008养殖鱼类种质检验第1部分:检验规则全国水产标准化技术委员会修订341GB/T18654.10-2008养殖鱼类种质检验第10部分:肌肉营养成分的测定全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18654.10-2008,GB/T18654.11-2008342GB/T18654.11-2008养殖鱼类种质检验第11部分:肌肉中主要氨基酸含量的测定全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18654.10-2008,GB/T18654.11-2008343GB/T18654.12-2008养殖鱼类种质检验第12部分:染色体组型分析全国水产标准化技术委员会修订344GB/T18654.13-2008养殖鱼类种质检验第13部分:同工酶电泳分析全国水产标准化技术委员会修订345GB/T18654.14-2008养殖鱼类种质检验第14部分:DNA含量的测定全国水产标准化技术委员会修订346GB/T18654.2-2008养殖鱼类种质检验第2部分:抽样方法全国水产标准化技术委员会修订347GB/T18654.3-2008养殖鱼类种质检验第3部分:性状测定全国水产标准化技术委员会修订348GB/T18654.4-2008养殖鱼类种质检验第4部分:年龄与生长的测定全国水产标准化技术委员会修订349GB/T18654.5-2008养殖鱼类种质检验第5部分:食性分析全国水产标准化技术委员会修订350GB/T18654.6-2008养殖鱼类种质检验第6部分:繁殖性能的测定全国水产标准化技术委员会修订351GB/T18654.7-2008养殖鱼类种质检验第7部分:生态特性分析全国水产标准化技术委员会修订352GB/T18654.8-2008养殖鱼类种质检验第8部分:耗氧率与临界窒息点的测定全国水产标准化技术委员会修订353GB/T22213-2008水产养殖术语全国水产标准化技术委员会修订354GB/T5055-2008青鱼、草鱼、鲢、鳙亲鱼全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T5055-2008,GB/T9956-2011,GB/T11776-2006,GB/T11777-2006,GB/T11778-2006355GB/T9956-2011青鱼鱼苗、鱼种全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T5055-2008,GB/T9956-2011,GB/T11776-2006,GB/T11777-2006,GB/T11778-2006356GB/T15101.1-2008中国对虾亲虾全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T15101.1-2008,GB/T15101.2-2008357GB/T15101.2-2008中国对虾苗种全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T15101.1-2008,GB/T15101.2-2008358GB/T15807-2008海带养殖夏苗苗种全国水产标准化技术委员会修订359GB/T16871-2008梭鱼亲鱼和鱼种全国水产标准化技术委员会修订360GB/T16872-2008栉孔扇贝苗种全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T16872-2008,GB/T21438-2008361GB/T20556-2006三疣梭子蟹全国水产标准化技术委员会修订362GB/T21047-2007眼斑拟石首鱼全国水产标准化技术委员会修订363GB/T21326-2007黑鲷亲鱼和苗种全国水产标准化技术委员会修订364GB/T21438-2008栉孔扇贝亲贝全国水产标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T16872-2008,GB/T21438-2008365GB/T21673-2008海水虾类育苗水质要求全国水产标准化技术委员会修订366GB/T32755-2016大黄鱼全国水产标准化技术委员会修订367GB/T19599.1-2004合成纤维渔网片试验方法网片重量全国水产标准化技术委员会修订368GB/T19599.2-2004合成纤维渔网片试验方法网片尺寸全国水产标准化技术委员会修订369GB/T21032-2007聚酰胺单丝全国水产标准化技术委员会修订370GB/T3939.3-2004主要渔具材料命名与标记绳索全国水产标准化技术委员会修订371GB/T3939.4-2004主要渔具材料命名与标记浮子全国水产标准化技术委员会修订372GB/T3939.5-2004主要渔具材料命名与标记沉子全国水产标准化技术委员会修订373GB/T4925-2008渔网合成纤维网片强力与断裂伸长率试验方法全国水产标准化技术委员会修订374GB/T5147-2003渔具分类、命名及代号全国水产标准化技术委员会修订375GB/T6965-2004渔具材料试验基本条件预加张力全国水产标准化技术委员会修订376GB/T8834-2016纤维绳索有关物理和机械性能的测定全国水产标准化技术委员会修订377GB/T21291-2007鱼糜加工机械安全卫生技术条件全国水产标准化技术委员会修订378GB/T15805.1-2008鱼类检疫方法第1部分:传染性胰脏坏死病毒(IPNV)全国水产标准化技术委员会修订379GB/T15805.6-2008鱼类检疫方法第6部分:杀鲑气单胞菌全国水产标准化技术委员会修订380GB/T33733-2017厨卫五金产品术语与分类全国五金制品标准化技术委员会修订381GB/T35763-2017不锈钢水龙头全国五金制品标准化技术委员会修订382GB/T8375-1987水嘴分类、型号命名方法全国五金制品标准化技术委员会修订383GB/T16568-2006奶牛场卫生规范全国动物卫生标准化技术委员会修订384GB/T18088-2000出入境动物检疫采样全国动物卫生标准化技术委员会修订385GB/T18635-2002动物防疫基本术语全国动物卫生标准化技术委员会修订386GB/T18651-2002牛无浆体病快速凝集检测方法全国动物卫生标准化技术委员会修订387GB/T18652-2002致病性嗜水气单胞菌检验方法全国动物卫生标准化技术委员会修订388GB/T18653-2002胎儿弯曲杆菌的分离鉴定方法全国动物卫生标准化技术委员会修订389GB/T19168-2003蜜蜂病虫害综合防治规范全国动物卫生标准化技术委员会修订390GB/T19200-2003猪水泡病诊断技术全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T22917-2008,GB/T19200-2003391GB/T19526-2004羊寄生虫病防治技术规范全国动物卫生标准化技术委员会修订392GB/T19915.1-2005猪链球菌2型平板和试管凝集试验操作规程全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19915.1-2005,GB/T19915.2-2005,GB/T19915.3-2005,GB/T19915.4-2005,GB/T19915.5-2005,GB/T19915.6-2005,GB/T19915.7-2005,GB/T19915.8-2005,GB/T19915.9-2005393GB/T19915.2-2005猪链球菌2型分离鉴定操作规程全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19915.1-2005,GB/T19915.2-2005,GB/T19915.3-2005,GB/T19915.4-2005,GB/T19915.5-2005,GB/T19915.6-2005,GB/T19915.7-2005,GB/T19915.8-2005,GB/T19915.9-2005394GB/T19915.3-2005猪链球菌2型PCR定型检测技术全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19915.1-2005,GB/T19915.2-2005,GB/T19915.3-2005,GB/T19915.4-2005,GB/T19915.5-2005,GB/T19915.6-2005,GB/T19915.7-2005,GB/T19915.8-2005,GB/T19915.9-2005395GB/T19915.4-2005猪链球菌2型三重PCR检测方法全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19915.1-2005,GB/T19915.2-2005,GB/T19915.3-2005,GB/T19915.4-2005,GB/T19915.5-2005,GB/T19915.6-2005,GB/T19915.7-2005,GB/T19915.8-2005,GB/T19915.9-2005396GB/T19915.5-2005猪链球菌2型多重PCR检测方法全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19915.1-2005,GB/T19915.2-2005,GB/T19915.3-2005,GB/T19915.4-2005,GB/T19915.5-2005,GB/T19915.6-2005,GB/T19915.7-2005,GB/T19915.8-2005,GB/T19915.9-2005397GB/T19915.6-2005猪源链球菌通用荧光PCR检测方法全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19915.1-2005,GB/T19915.2-2005,GB/T19915.3-2005,GB/T19915.4-2005,GB/T19915.5-2005,GB/T19915.6-2005,GB/T19915.7-2005,GB/T19915.8-2005,GB/T19915.9-2005398GB/T19915.7-2005猪链球菌2型荧光PCR检测方法全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19915.1-2005,GB/T19915.2-2005,GB/T19915.3-2005,GB/T19915.4-2005,GB/T19915.5-2005,GB/T19915.6-2005,GB/T19915.7-2005,GB/T19915.8-2005,GB/T19915.9-2005399GB/T19915.8-2005猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19915.1-2005,GB/T19915.2-2005,GB/T19915.3-2005,GB/T19915.4-2005,GB/T19915.5-2005,GB/T19915.6-2005,GB/T19915.7-2005,GB/T19915.8-2005,GB/T19915.9-2005400GB/T19915.9-2005猪链球菌2型溶血素基因PCR检测方法全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T19915.1-2005,GB/T19915.2-2005,GB/T19915.3-2005,GB/T19915.4-2005,GB/T19915.5-2005,GB/T19915.6-2005,GB/T19915.7-2005,GB/T19915.8-2005,GB/T19915.9-2005401GB/T21674-2008猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法全国动物卫生标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T21674-2008,GB/T35910-2018,GB/T34745-2017402GB/T22330.1-2008无规定动物疫病区标准第1部分:通则全国动物卫生标准化技术委员会修订403GB/T22330.10-2008无规定动物疫病区标准第10部分:无蓝舌病区全国动物卫生标准化技术委员会修订404GB/T22330.11-2008无规定动物疫病区标准第11部分:无小反刍兽疫区全国动物卫生标准化技术委员会修订405GB/T22330.13-2008无规定动物疫病区标准第13部分:无高致病性禽流感区全国动物卫生标准化技术委员会修订406GB/T22330.14-2008无规定动物疫病区标准第14部分:无新城疫区全国动物卫生标准化技术委员会修订407GB/T22330.2-2008无规定动物疫病区标准第2部分:无口蹄疫区全国动物卫生标准化技术委员会修订408GB/T22330.3-2008无规定动物疫病区标准第3部分:无猪水泡病区全国动物卫生标准化技术委员会修订409GB/T22330.4-2008无规定动物疫病区标准第4部分:无古典猪瘟(猪瘟)区全国动物卫生标准化技术委员会修订410GB/T22330.5-2008无规定动物疫病区标准第5部分:无非洲猪瘟区全国动物卫生标准化技术委员会修订411GB/T22330.8-2008无规定动物疫病区标准第8部分:无牛传染性胸膜肺炎区全国动物卫生标准化技术委员会修订412GB/T22330.9-2008无规定动物疫病区标准第9部分:无牛海绵状脑病区全国动物卫生标准化技术委员会修订413GB/T22332-2008鸭病毒性肠炎诊断技术全国动物卫生标准化技术委员会修订414GB/T15903-1995压敏胶粘带耐燃性试验方法悬挂法全国胶粘剂标准化技术委员会修订415GB/T7752-1987绝缘胶粘带工频击穿强度试验方法全国胶粘剂标准化技术委员会修订416GB/T13354-1992液态胶粘剂密度的测定方法重量杯法全国胶粘剂标准化技术委员会修订417GB/T16997-1997胶粘剂主要破坏类型的表示法全国胶粘剂标准化技术委员会修订418GB/T21526-2008结构胶粘剂粘接前金属和塑料表面处理导则全国胶粘剂标准化技术委员会修订419GB/T2793-1995胶粘剂不挥发物含量的测定全国胶粘剂标准化技术委员会修订420GB/T2943-2008胶粘剂术语全国胶粘剂标准化技术委员会修订421GB/T7122-1996高强度胶粘剂剥离强度的测定浮辊法全国胶粘剂标准化技术委员会修订422GB/T10178-2006工业通风机现场性能试验全国风机标准化技术委员会修订423GB/T17774-1999工业通风机尺寸全国风机标准化技术委员会修订424GB/T19075-2003工业通风机词汇及种类定义全国风机标准化技术委员会修订425GB/T21151-2007煤矿用轴流主通风机技术条件全国风机标准化技术委员会修订426GB/T18775-2009电梯、自动扶梯和自动人行道维修规范全国电梯标准化技术委员会修订427GB/T21739-2008家用电梯制造与安装规范全国电梯标准化技术委员会修订428GB/T24477-2009适用于残障人员的电梯附加要求全国电梯标准化技术委员会修订429GB/T30692-2014提高在用自动扶梯和自动人行道安全性的规范全国电梯标准化技术委员会修订430GB/T7024-2008电梯、自动扶梯、自动人行道术语全国电梯标准化技术委员会修订431GB/T19209.1-2003拖拉机修理质量检验通则第1部分:轮式拖拉机全国农业机械标准化技术委员会修订432GB/T19209.2-2003拖拉机修理质量检验通则第2部分:履带拖拉机全国农业机械标准化技术委员会修订433GB/T21963-2008农业机械维修术语全国农业机械标准化技术委员会修订434GB/T21964-2008农业机械修理安全规范全国农业机械标准化技术委员会修订435GB/T22129-2008农机修理通用技术规范全国农业机械标准化技术委员会修订436GB/T18692-2002农业灌溉设备直动式压力调节器全国农业机械标准化技术委员会修订437GB/T19792-2012农业灌溉设备水动化肥-农药注入泵全国农业机械标准化技术委员会修订438GB/T19796-2005农业灌溉设备聚乙烯承压管用塑料鞍座全国农业机械标准化技术委员会修订439GB/T21402-2008农业灌溉设备水头控制器全国农业机械标准化技术委员会修订440GB/T25409-2010小型潜水电泵全国农业机械标准化技术委员会修订441GB/T25410-2010以拖拉机为动力的移动式泵站全国农业机械标准化技术委员会修订442GB/T10394.1-2002饲料收获机第1部分:术语全国农业机械标准化技术委员会修订443GB/T10394.2-2002饲料收获机第2部分:技术特征和性能全国农业机械标准化技术委员会修订444GB/T10394.3-2002饲料收获机第3部分:试验方法全国农业机械标准化技术委员会修订445GB/T16714-2007连续式粮食干燥机全国农业机械标准化技术委员会修订446GB/T17127.3-1998农业轮式拖拉机和机具三点悬挂挂接器第3部分:连杆式挂接器全国农业机械标准化技术委员会修订447GB/T20344-2006农业拖拉机和机械电力传输联接器全国农业机械标准化技术委员会修订448GB/T21158-2007种子加工成套设备全国农业机械标准化技术委员会修订449GB/T21398-2008农林机械电磁兼容性试验方法和验收规则全国农业机械标准化技术委员会修订450GB/T4330-2003农用挂车全国农业机械标准化技术委员会修订451GB/T4331-2003农用挂车试验方法全国农业机械标准化技术委员会修订452GB/T6970-2007粮食干燥机试验方法全国农业机械标准化技术委员会修订453GB/T6979.1-2005收获机械联合收割机及功能部件第1部分:词汇全国农业机械标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T6979.1-2005,GB/T6979.2-2005,GB/T8097-2008454GB/T6979.2-2005收获机械联合收割机及功能部件第2部分:在词汇中定义的性能和特征评价全国农业机械标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T6979.1-2005,GB/T6979.2-2005,GB/T8097-2008455GB/T9480-2001农林拖拉机和机械、草坪和园艺动力机械使用说明书编写规则全国农业机械标准化技术委员会修订456GB/T12022-2014工业六氟化硫全国气体标准化技术委员会修订457GB/T14599-2008纯氧、高纯氧和超纯氧全国气体标准化技术委员会修订458GB/T17873-2014纯氖和高纯氖全国气体标准化技术委员会修订459GB/T28123-2011工业氦全国气体标准化技术委员会修订460GB/T28124-2011惰性气体中微量氢、氧、甲烷、一氧化碳的测定气相色谱法全国气体标准化技术委员会修订461GB/T28125.1-2011空分工艺中危险物质的测定第1部分:碳氢化合物的测定全国气体标准化技术委员会修订462GB/T28726-2012气体分析氦离子化气相色谱法全国气体标准化技术委员会修订463GB/T28727-2012气体分析硫化物的测定火焰光度气相色谱法全国气体标准化技术委员会修订464GB/T28729-2012氧化亚氮全国气体标准化技术委员会修订465GB/T33102-2016纯甲烷和高纯甲烷全国气体标准化技术委员会修订466GB/T3634.1-2006氢气第1部分:工业氢全国气体标准化技术委员会修订467GB/T3634.2-2011氢气第2部分:纯氢、高纯氢和超纯氢全国气体标准化技术委员会修订468GB/T3863-2008工业氧全国气体标准化技术委员会修订469GB/T3864-2008工业氮全国气体标准化技术委员会修订470GB/T4844-2011纯氦、高纯氦和超纯氦全国气体标准化技术委员会修订471GB/T5275.1-2014气体分析动态体积法制备校准用混合气体第1部分:校准方法全国气体标准化技术委员会修订472GB/T5275.2-2014气体分析动态体积法制备校准用混合气体第2部分:容积泵全国气体标准化技术委员会修订473GB/T5275.6-2014气体分析动态体积法制备校准用混合气体第6部分:临界锐孔全国气体标准化技术委员会修订474GB/T5275.7-2014气体分析动态体积法制备校准用混合气体第7部分:热式质量流量控制器全国气体标准化技术委员会修订475GB/T5828-2006氙气全国气体标准化技术委员会修订476GB/T5829-2006氪气全国气体标准化技术委员会修订477GB/T5832.3-2011气体中微量水分的测定第3部分:光腔衰荡光谱法全国气体标准化技术委员会修订478GB/T6052-2011工业液体二氧化碳全国气体标准化技术委员会修订479GB/T8979-2008纯氮、高纯氮和超纯氮全国气体标准化技术委员会修订480GB/T8982-2009医用及航空呼吸用氧全国气体标准化技术委员会修订481GB/T8984-2008气体中一氧化碳、二氧化碳和碳氢化合物的测定气相色谱法全国气体标准化技术委员会修订482GB/T17001.1-2011防伪油墨第1部分:紫外激发荧光防伪油墨全国防伪标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T17001.1-2011,GB/T18754-2002483GB/T17002-1997防伪印刷产品生产管理规范全国防伪标准化技术委员会修订484GB/T17004-1997防伪技术术语全国防伪标准化技术委员会修订485GB/T18733-2002防伪全息纸全国防伪标准化技术委员会修订486GB/T18734-2002防伪全息烫印箔全国防伪标准化技术委员会修订487GB/T18751-2002磁性防伪油墨全国防伪标准化技术委员会修订488GB/T18752-2002热敏变色防伪油墨全国防伪标准化技术委员会修订489GB/T18753-2002日光激发变色防伪油墨全国防伪标准化技术委员会修订490GB/T18754-2002凹版印刷紫外激发荧光防伪油墨全国防伪标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T17001.1-2011,GB/T18754-2002491GB/T18758-2002防伪核技术产品通用技术条件全国防伪标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18758-2002,GB/T20205-2006492GB/T19425-2003防伪技术产品通用技术条件全国防伪标准化技术委员会修订493GB/T19626-2005DNA防伪技术产品通用技术要求全国防伪标准化技术委员会修订494GB/T20205-2006重离子微孔防伪标识全国防伪标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18758-2002,GB/T20205-2006495GB/T20206-2006银行业印鉴核验系统技术规范全国防伪标准化技术委员会修订496GB/T20222-2006防复印技术产品通用技术条件全国防伪标准化技术委员会修订497GB/T20863.2-2016起重机分级第2部分:流动式起重机全国起重机械标准化技术委员会修订498GB/T31051.1-2014起重机工作和非工作状态下的锚定装置第1部分:总则全国起重机械标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T31051.1-2014,GB/T31051.4-2016499GB/T31051.4-2016起重机工作和非工作状态下的锚定装置第4部分:臂架起重机全国起重机械标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T31051.1-2014,GB/T31051.4-2016500GB/T6974.4-2016起重机术语第4部分:臂架起重机全国起重机械标准化技术委员会修订501GB/T10891-1989空气处理机组安全要求全国冷冻空调设备标准化技术委员会修订502GB/T18430.2-2016蒸气压缩循环冷水(热泵)机组第2部分:户用及类似用途的冷水(热泵)机组全国冷冻空调设备标准化技术委员会修订503GB/T18835-2002谷物冷却机全国冷冻空调设备标准化技术委员会修订504GB/T19411-2003除湿机全国冷冻空调设备标准化技术委员会修订505GB/T19412-2003蓄冷空调系统的测试和评价方法全国冷冻空调设备标准化技术委员会修订506GB/T19569-2004洁净手术室用空气调节机组全国冷冻空调设备标准化技术委员会修订507GB/T19842-2005轨道车辆空调机组全国冷冻空调设备标准化技术委员会修订508GB/T20109-2006全新风除湿机全国冷冻空调设备标准化技术委员会修订509GB/T9068-1988采暖通风与空气调节设备噪声声功率级的测定工程法全国冷冻空调设备标准化技术委员会修订510GB/T21605-2008化学品急性吸入毒性试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订511GB/T21606-2008化学品急性经皮毒性试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订512GB/T21608-2008化学品皮肤致敏试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订513GB/T21609-2008化学品急性眼刺激性/腐蚀性试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订514GB/T21610-2008化学品啮齿类动物显性致死试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订515GB/T21750-2008化学品毒物代谢动力学试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订516GB/T21751-2008化学品哺乳动物精原细胞染色体畸变试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订517GB/T21754-2008化学品28天/14天重复剂量吸入毒性试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订518GB/T21759-2008化学品慢性毒性试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订519GB/T21763-2008化学品啮齿类动物亚慢性经口毒性试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订520GB/T21765-2008化学品亚慢性吸入毒性试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订521GB/T21766-2008化学品生殖/发育毒性筛选试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订522GB/T21769-2008化学品体外3T3中性红摄取光毒性试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订523GB/T21771-2008化学品重复剂量毒性合并生殖/发育毒性筛选试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订524GB/T21772-2008化学品哺乳动物骨髓染色体畸变试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订525GB/T21773-2008化学品体内哺乳动物红细胞微核试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订526GB/T21786-2008化学品细菌回复突变试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订527GB/T21788-2008化学品慢性毒性与致癌性联合试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订528GB/T21793-2008化学品体外哺乳动物细胞基因突变试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订529GB/T21794-2008化学品体外哺乳动物细胞染色体畸变试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订530GB/T21805-2008化学品藻类生长抑制试验全国危险化学品管理标准化技术委员会修订531GB/T21818-2008化学品固有生物降解性改进的MITI试验(II)全国危险化学品管理标准化技术委员会修订532GB/T21826-2008化学品急性经口毒性试验方法上下增减剂量法(UDP)全国危险化学品管理标准化技术委员会修订533GB/T21827-2008化学品皮肤变态反应试验局部淋巴结方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订534GB/T21828-2008化学品大型溞繁殖试验全国危险化学品管理标准化技术委员会修订535GB/T21852-2008化学品分配系数(正辛醇-水)高效液相色谱法试验全国危险化学品管理标准化技术委员会修订536GB/T21854-2008化学品鱼类早期生活阶段毒性试验全国危险化学品管理标准化技术委员会修订537GB/T21858-2008化学品生物富集半静态式鱼类试验全国危险化学品管理标准化技术委员会修订538GB/T21177-2007涂料危险货物危险特性检验安全规范全国危险化学品管理标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB19521.2-2004539GB/T21596-2008危险品便携式罐体压力试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T21598-2008540GB/T21598-2008危险品便携式罐体液压试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T21596-2008541GB/T21618-2008危险品易燃固体燃烧速率试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订542GB/T21779-2008金属粉末和相关化合物粒度分布的光散射试验方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订543GB/T21782.1-2008粉末涂料第1部分:筛分法测定粒度分布全国危险化学品管理标准化技术委员会修订544GB/T21782.10-2008粉末涂料第10部分:沉积效率的测定全国危险化学品管理标准化技术委员会修订545GB/T21782.2-2008粉末涂料第2部分:气体比较比重仪法测定密度(仲裁法)全国危险化学品管理标准化技术委员会修订546GB/T21782.3-2008粉末涂料第3部分:液体置换比重瓶法测定密度全国危险化学品管理标准化技术委员会修订547GB/T21782.4-2008粉末涂料第4部分:爆炸下限的计算全国危险化学品管理标准化技术委员会修订548GB/T21782.8-2008粉末涂料第8部分:热固性粉末贮存稳定性的评定全国危险化学品管理标准化技术委员会修订549GB/T21789-2008石油产品和其他液体闪点的测定阿贝尔闭口杯法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订550GB/T21790-2008闪燃和非闪燃测定快速平衡闭杯法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订551GB/T21792-2008闪燃和非闪燃测定闭杯平衡法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订552GB/T21851-2008化学品批平衡法检测吸附/解吸附试验全国危险化学品管理标准化技术委员会修订553GB/T21859-2008气体和蒸气点燃温度的测定方法全国危险化学品管理标准化技术委员会修订554GB/T21863-2008凝胶渗透色谱法(GPC)用四氢呋喃做淋洗液全国危险化学品管理标准化技术委员会修订555GB/T22236-2008塑料的检验检验用塑料制品的粉碎全国危险化学品管理标准化技术委员会修订556GB/T22788-2016玩具及儿童用品材料中总铅含量的测定全国玩具标准化技术委员会修订557GB/T32441-2015电动童车通用技术条件全国玩具标准化技术委员会修订558GB/T9832-2007毛绒、布制玩具全国玩具标准化技术委员会修订559GB/T11762-2006油菜籽全国粮油标准化技术委员会修订560GB/T14490-2008粮油检验谷物及淀粉糊化特性测定粘度仪法全国粮油标准化技术委员会修订561GB/T14614.4-2005小麦粉面团流变特性测定吹泡仪法全国粮油标准化技术委员会修订562GB/T18415-2001小麦粉中过氧化苯甲酰的测定方法全国粮油标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18415-2001,GB/T22325-2008563GB/T19878-2005电容法和电阻法粮食水分测定仪通用技术条件全国粮油标准化技术委员会修订564GB/T20188-2006小麦粉中溴酸盐的测定离子色谱法全国粮油标准化技术委员会修订565GB/T20795-2006植物油脂烟点测定全国粮油标准化技术委员会修订566GB/T21118-2007小麦粉馒头全国粮油标准化技术委员会修订567GB/T21119-2007小麦沉降指数测定法Zeleny试验全国粮油标准化技术委员会修订568GB/T21122-2007营养强化小麦粉全国粮油标准化技术委员会修订569GB/T21123-2007营养强化维生素A食用油全国粮油标准化技术委员会修订570GB/T21126-2007小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定全国粮油标准化技术委员会修订571GB/T21494-2008低温食用豆粕全国粮油标准化技术委员会修订572GB/T21496-2008动植物油脂油脂沉淀物含量的测定离心法全国粮油标准化技术委员会修订573GB/T21719-2008稻谷整精米率检验法全国粮油标准化技术委员会修订574GB/T21924-2008谷朊粉全国粮油标准化技术委员会修订575GB/T22182-2008油菜籽叶绿素含量测定分光光度计法全国粮油标准化技术委员会修订576GB/T22184-2008谷物和豆类散存粮食温度测定指南全国粮油标准化技术委员会修订577GB/T22325-2008小麦粉中过氧化苯甲酰的测定 高效液相色谱法全国粮油标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T18415-2001,GB/T22325-2008578GB/T22326-2008糯玉米全国粮油标准化技术委员会修订579GB/T24893-2010动植物油脂多环芳烃的测定全国粮油标准化技术委员会修订580GB/T26626-2011动植物油脂水分含量测定卡尔费休法(无吡啶)全国粮油标准化技术委员会修订581GB/T5496-1985粮食、油料检验黄粒米及裂纹粒检验法全国粮油标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T5496-1985,GB/T35881-2018582GB/T5499-2008粮油检验带壳油料纯仁率检验法全国粮油标准化技术委员会修订583GB/T5525-2008植物油脂透明度、气味、滋味鉴定法全国粮油标准化技术委员会修订584GB/T5536-1985植物油脂检验熔点测定法全国粮油标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T5536-1985,GB/T12766-2008,GB/T24892-2010585GB/T18084-2000植物检疫地中海实蝇检疫鉴定方法全国植物检疫标准化技术委员会修订586GB/T18085-2000植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法全国植物检疫标准化技术委员会修订587GB/T18087-2000植物检疫谷斑皮蠹检疫鉴定方法全国植物检疫标准化技术委员会修订588GB/T20476-2006松材线虫病发生区松木包装材料处理和管理全国植物检疫标准化技术委员会修订589GB/T21760-2008植物检疫证书准则全国植物检疫标准化技术委员会修订590GB/T33117-2016小麦基腐病菌检疫鉴定方法全国植物检疫标准化技术委员会修订591GB/T33123-2016斜纹卷蛾检疫鉴定方法全国植物检疫标准化技术委员会修订592GB/T33128-2016螺旋粉虱检疫鉴定方法全国植物检疫标准化技术委员会修订593GB/T17824.2-2008规模猪场生产技术规程全国畜牧业标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T17824.2-2008,GB/T32149-2015,GB/T25883-2010594GB/T17824.3-2008规模猪场环境参数及环境管理全国畜牧业标准化技术委员会修订595GB/T2033-2008滩羊全国畜牧业标准化技术委员会修订596GB/T21439-2008草原健康状况评价全国畜牧业标准化技术委员会修订597GB/T2415-2008南阳牛全国畜牧业标准化技术委员会修订598GB/T2930.11-2008草种子检验规程检验报告全国畜牧业标准化技术委员会修订599GB/T32759-2016瘦肉型猪活体质量评定全国畜牧业标准化技术委员会修订600GB/T32765-2016渤海黑牛全国畜牧业标准化技术委员会修订601GB/T3822-2008乌珠穆沁羊全国畜牧业标准化技术委员会修订602GB/T6940-2008关中驴全国畜牧业标准化技术委员会修订603GB/T7223-2008荣昌猪全国畜牧业标准化技术委员会修订604GB/T14924.11-2001实验动物配合饲料维生素的测定全国实验动物标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T14924.11-2001,GB/T14924.12-2001605GB/T14924.12-2001实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定全国实验动物标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T14924.11-2001,GB/T14924.12-2001606GB/T14926.1-2001实验动物沙门菌检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订607GB/T14926.19-2001实验动物汉坦病毒检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订608GB/T14926.20-2001实验动物鼠痘病毒检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订609GB/T14926.22-2001实验动物小鼠肝炎病毒检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订610GB/T14926.23-2001实验动物仙台病毒检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订611GB/T14926.24-2001实验动物小鼠肺炎病毒检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订612GB/T14926.25-2001实验动物呼肠孤病毒Ⅲ型检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订613GB/T14926.26-2001实验动物小鼠脑脊髓炎病毒检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订614GB/T14926.28-2001实验动物小鼠细小病毒检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订615GB/T14926.4-2001实验动物皮肤病原真菌检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订616GB/T14926.45-2001实验动物布鲁杆菌检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订617GB/T14926.62-2001实验动物猴免疫缺陷病毒检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订618GB/T14926.8-2001实验动物支原体检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订619GB/T18448.4-2001实验动物卡氏肺孢子虫检测方法全国实验动物标准化技术委员会修订620GB/T16733-1997国家标准制定程序的阶段划分及代码全国标准化原理与方法标准化技术委员会修订621GB/T20000.10-2016标准化工作指南第10部分:国家标准的英文译本翻译通则全国标准化原理与方法标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T20000.10-2016,GB/T20000.11-2016622GB/T20000.11-2016标准化工作指南第11部分:国家标准的英文译本通用表述全国标准化原理与方法标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T20000.10-2016,GB/T20000.11-2016623GB/T20000.3-2014标准化工作指南第3部分:引用文件全国标准化原理与方法标准化技术委员会修订624GB/T20002.1-2008标准中特定内容的起草第1部分:儿童安全全国标准化原理与方法标准化技术委员会修订625GB/T33719-2017标准中融入可持续性的指南全国标准化原理与方法标准化技术委员会修订626GB/T32374-2015化学品危险信息短语与代码全国安全生产标准化技术委员会修订627GB/T33000-2016企业安全生产标准化基本规范全国安全生产标准化技术委员会修订628GB/T33555-2017洁净室及相关受控环境静电控制技术指南全国洁净室及相关受控环境标准化技术委员会修订629GB/T33556.1-2017医院洁净室及相关受控环境应用规范第1部分:总则全国洁净室及相关受控环境标准化技术委员会修订630GB/T28619-2012再制造术语全国绿色制造技术标准化技术委员会修订631GB/T28612-2012机械产品绿色制造术语全国绿色制造技术标准化技术委员会修订632GB/T28616-2012绿色制造属性机械产品全国绿色制造技术标准化技术委员会修订633GB/T28617-2012绿色制造通用技术导则铸造全国绿色制造技术标准化技术委员会修订634GB/T10586-2006湿热试验箱技术条件全国实验室仪器及设备标准化技术委员会修订635GB/T12416.2-1990玻璃颗粒在121℃耐水性的试验方法和分级全国日用玻璃标准化技术委员会修订636GB/T32366-2015生物降解聚对苯二甲酸-己二酸丁二酯(PBAT)全国生物基材料及降解制品标准化技术委员会修订637GB/T33796-2017热塑性淀粉通用技术要求全国生物基材料及降解制品标准化技术委员会修订638GB/T33798-2017生物聚酯连卷袋全国生物基材料及降解制品标准化技术委员会修订639GB/T15783-1995主要造林树种林地化学除草技术规程全国营造林标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T31755-2015,GB/T15783-1995640GB/T33411-2016酶联免疫分析试剂盒通则全国生化检测标准化技术委员会修订641GB/T33682-2017基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则全国生化检测标准化技术委员会修订642GB/T32728-2016刺柏果全国辛香料标准化技术委员会修订643GB/T32729-2016干鼠尾草全国辛香料标准化技术委员会修订644GB/T32732-2016香草试验方法全国辛香料标准化技术委员会修订645GB/T32733-2016香草全国辛香料标准化技术委员会修订646GB/T32734-2016葫芦巴全国辛香料标准化技术委员会修订647GB/T32735-2016干百里香全国辛香料标准化技术委员会修订648GB/T32736-2016干薄荷全国辛香料标准化技术委员会修订649GB/T7652-2016八角全国辛香料标准化技术委员会修订650GB/T33761-2017绿色产品评价通则国家绿色产品评价标准化总体组修订651GB/T29375-2012马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程全国蔬菜标准化技术委员会修订652GB/T29376-2012马铃薯脱毒原原种繁育技术规程全国蔬菜标准化技术委员会修订653GB/T29377-2012马铃薯脱毒种薯级别与检验规程全国蔬菜标准化技术委员会修订654GB/T29378-2012马铃薯脱毒种薯生产技术规程全国蔬菜标准化技术委员会修订655GB/T31753-2015马铃薯商品薯生产技术规程全国蔬菜标准化技术委员会修订656GB/T31784-2015马铃薯商品薯分级与检验规程全国蔬菜标准化技术委员会修订657GB/T30443-2013保健服务通用要求全国保健服务标准化技术委员会修订658GB/T30444-2013保健服务业分类全国保健服务标准化技术委员会修订659GB/T33354-2016保健按摩器具售后服务规范全国保健服务标准化技术委员会修订660GB/T33355-2016保健按摩器具安全使用规范全国保健服务标准化技术委员会修订661GB/T33855-2017母婴保健服务场所通用要求全国保健服务标准化技术委员会修订662GB/T26148-2010高压水射流清洗作业安全规范全国喷射设备标准化技术委员会修订663GB/T31735-2015龙眼全国果品标准化技术委员会修订664GB/T32714-2016冬枣全国果品标准化技术委员会修订665GB/T28803-2012消费品安全风险管理导则全国消费品安全标准化技术委员会修订666GB/T29289-2012消费品安全设计通则全国消费品安全标准化技术委员会修订667GB/T20923-2007道路货物运输评价指标全国道路运输标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T20923-2007,GB/T20924-2007668GB/T20924-2007道路货物运输服务质量评定全国道路运输标准化技术委员会整合修订整合修订标准号:GB/T20923-2007,GB/T20924-2007669GB/T33045-2016巢蜜全国蜂产品标准化工作组修订670GB/T33170.1-2016大型活动安全要求第1部分:安全评估公安部修订671GB/T33170.2-2016大型活动安全要求第2部分:人员管控公安部修订672GB/T33170.3-2016大型活动安全要求第3部分:场地布局和安全导向标识公安部修订673GB/T33170.4-2016大型活动安全要求第4部分:临建设施指南公安部修订674GB/T33170.5-2016大型活动安全要求第5部分:安保资源配置公安部修订675GB/T21721-2008农副产品销售现场危害管理规范商务部修订676GB/T10220-2012感官分析方法学总论农业农村部修订677GB/T12310-2012感官分析方法成对比较检验农业农村部修订678GB/T12311-2012感官分析方法三点检验农业农村部修订679GB/T12312-2012感官分析味觉敏感度的测定方法农业农村部修订680GB/T12766-2008动物油脂熔点测定农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T5536-1985,GB/T12766-2008,GB/T24892-2010681GB/T13867-1992鲜枇杷果农业农村部修订682GB/T13917.1-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第1部分:喷射剂农业农村部修订683GB/T13917.10-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第10部分:模拟现场农业农村部修订684GB/T13917.2-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第2部分:气雾剂农业农村部修订685GB/T13917.3-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第3部分:烟剂及烟片农业农村部修订686GB/T13917.4-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第4部分:蚊香农业农村部修订687GB/T13917.5-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第5部分:电热蚊香片农业农村部修订688GB/T13917.6-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第6部分:电热蚊香液农业农村部修订689GB/T13917.7-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第7部分:饵剂农业农村部修订690GB/T13917.8-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第8部分:粉剂、笔剂农业农村部修订691GB/T13917.9-2009农药登记用卫生杀虫剂室内药效试验及评价第9部分:驱避剂农业农村部修订692GB/T14550-2003土壤中六六六和滴滴涕测定的气相色谱法农业农村部修订693GB/T14552-2003水、土中有机磷农药测定的气相色谱法农业农村部修订694GB/T15029-2009剑麻白棕绳农业农村部修订695GB/T15031-2009剑麻纤维农业农村部修订696GB/T15034-2009芒果贮藏导则农业农村部修订697GB/T15405-2006被动式太阳房热工技术条件和测试方法农业农村部修订698GB/T15791-2011稻纹枯病测报技术规范农业农村部修订699GB/T15793-2011稻纵卷叶螟测报技术规范农业农村部修订700GB/T15795-2011小麦条锈病测报技术规范农业农村部修订701GB/T15796-2011小麦赤霉病测报技术规范农业农村部修订702GB/T15799-2011棉蚜测报技术规范农业农村部修订703GB/T15800-2009棉铃虫测报调查规范农业农村部修订704GB/T15801-2011棉红铃虫测报技术规范农业农村部修订705GB/T15802-2011棉花叶螨测报技术规范农业农村部修订706GB/T15803-2007东亚飞蝗测报技术规范农业农村部修订707GB/T16291.1-2012感官分析选拔、培训与管理评价员一般导则第1部分:优选评价员农业农村部修订708GB/T17237-2008畜类屠宰加工通用技术条件农业农村部修订709GB/T17320-2013小麦品种品质分类农业农村部修订710GB/T17321-2012感官分析方法二-三点检验农业农村部修订711GB/T17980.1-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治水稻鳞翅目钻蛀性害虫农业农村部修订712GB/T17980.10-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治梨木虱农业农村部修订713GB/T17980.11-2000农药田间药效试验准则(一)杀螨剂防治桔全爪螨农业农村部修订714GB/T17980.12-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治柑桔介壳虫农业农村部修订715GB/T17980.13-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治十字花科蔬菜的鳞翅目幼虫农业农村部修订716GB/T17980.14-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治菜螟农业农村部修订717GB/T17980.15-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治马铃薯等作物蚜虫农业农村部修订718GB/T17980.16-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治温室白粉虱农业农村部修订719GB/T17980.17-2000农药田间药效试验准则(一)杀螨剂防治豆类、蔬菜叶螨农业农村部修订720GB/T17980.18-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治十子花科蔬菜黄条跳甲农业农村部修订721GB/T17980.19-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治水稻叶部病害农业农村部修订722GB/T17980.2-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治稻纵卷叶螟农业农村部修订723GB/T17980.20-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治水稻纹枯病农业农村部修订724GB/T17980.21-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治禾谷类种传病害农业农村部修订725GB/T17980.22-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治禾谷类白粉病农业农村部修订726GB/T17980.23-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治禾谷类锈病(叶锈、条锈、秆锈)农业农村部修订727GB/T17980.24-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治梨黑星病农业农村部修订728GB/T17980.25-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治苹果树梭疤病农业农村部修订729GB/T17980.26-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治黄瓜霜霉病农业农村部修订730GB/T17980.27-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治蔬菜叶斑病农业农村部修订731GB/T17980.28-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治蔬菜灰霉病农业农村部修订732GB/T17980.29-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治蔬菜锈病农业农村部修订733GB/T17980.3-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治水稻叶蝉农业农村部修订734GB/T17980.30-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治黄瓜白粉病农业农村部修订735GB/T17980.31-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治番茄早疫病和晚疫病农业农村部修订736GB/T17980.32-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治辣椒疫病农业农村部修订737GB/T17980.33-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治辣椒炭疽病农业农村部修订738GB/T17980.34-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治马铃薯晚疫病农业农村部修订739GB/T17980.35-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治油菜菌核病农业农村部修订740GB/T17980.36-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂种子处理防治苗期病害农业农村部修订741GB/T17980.37-2000农药田间药效试验准则(一)杀线虫剂防治胞囊线虫病农业农村部修订742GB/T17980.38-2000农药田间药效试验准则(一)杀线虫剂防治根部线虫病农业农村部修订743GB/T17980.39-2000农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治柑桔贮藏病害农业农村部修订744GB/T17980.4-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治水稻飞虱农业农村部修订745GB/T17980.40-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治水稻田杂草农业农村部修订746GB/T17980.41-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治麦类作物地杂草农业农村部修订747GB/T17980.42-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治玉米地杂草农业农村部修订748GB/T17980.43-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治叶菜类作物地杂草农业农村部修订749GB/T17980.44-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治果园杂草农业农村部修订750GB/T17980.45-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治油菜类作物杂草农业农村部修订751GB/T17980.46-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治露地果菜类作物地杂草农业农村部修订752GB/T17980.47-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治根菜类蔬菜田杂草农业农村部修订753GB/T17980.48-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治林地杂草农业农村部修订754GB/T17980.49-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治甘蔗田杂草农业农村部修订755GB/T17980.5-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治棉铃虫农业农村部修订756GB/T17980.50-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治甜菜地杂草农业农村部修订757GB/T17980.51-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治非耕地杂草农业农村部修订758GB/T17980.52-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治马铃薯地杂草农业农村部修订759GB/T17980.53-2000农药田间药效试验准则(一)除草剂防治轮作作物间杂草农业农村部修订760GB/T17980.6-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治玉米螟农业农村部修订761GB/T17980.7-2000农药田间药效试验准则(一)杀螨剂防治苹果叶螨农业农村部修订762GB/T17980.8-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治苹果小卷叶蛾农业农村部修订763GB/T17980.9-2000农药田间药效试验准则(一)杀虫剂防治果树蚜虫农业农村部修订764GB/T18010-1999腰果仁规格农业农村部修订765GB/T18525.1-2001豆类辐照杀虫工艺农业农村部修订766GB/T18525.2-2001谷类制品辐照杀虫工艺农业农村部修订767GB/T18525.3-2001红枣辐照杀虫工艺农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/18525.3-2001,GB/18525.4-2001,GB/18525.5-2001,GB/18525.6-2001768GB/T18525.4-2001枸杞干葡萄干辐照杀虫工艺农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/18525.3-2001,GB/18525.4-2001,GB/18525.5-2001,GB/18525.6-2001769GB/T18525.5-2001干香菇辐照杀虫防霉工艺农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/18525.3-2001,GB/18525.4-2001,GB/18525.5-2001,GB/18525.6-2001770GB/T18525.7-2001空心莲辐照杀虫工艺农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T18526.1-2001,GB/T18526.2-2001,GB/T18526.3-2001,GB/T18525.7-2001771GB/T18526.1-2001速溶茶辐照杀菌工艺农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T18526.1-2001,GB/T18526.2-2001,GB/T18526.3-2001,GB/T18525.7-2001772GB/T18526.2-2001花粉辐照杀菌工艺农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T18526.1-2001,GB/T18526.2-2001,GB/T18526.3-2001,GB/T18525.7-2001773GB/T18526.3-2001脱水蔬菜辐照杀菌工艺农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T18526.1-2001,GB/T18526.2-2001,GB/T18526.3-2001,GB/T18525.7-2001774GB/T18526.4-2001香料和调味品辐照杀菌工艺农业农村部修订775GB/T18527.2-2001大蒜辐照抑制发芽工艺农业农村部修订776GB/T19166-2003中国西门塔尔牛农业农村部修订777GB/T19376-2003波尔山羊种羊农业农村部修订778GB/T19524.1-2004肥料中粪大肠菌群的测定农业农村部修订779GB/T19524.2-2004肥料中蛔虫卵死亡率的测定农业农村部修订780GB/T19525.2-2004畜禽场环境质量评价准则农业农村部修订781GB/T19557.1-2004植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则农业农村部修订782GB/T19557.3-2004植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南硬粒小麦农业农村部修订783GB/T19566-2004旱地糖料甘蔗高产栽培技术规程农业农村部修订784GB/T19567.1-2004苏云金芽胞杆菌原粉农业农村部修订785GB/T19567.2-2004苏云金芽胞杆菌悬浮剂农业农村部修订786GB/T19567.3-2004苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂农业农村部修订787GB/T19664-2005商品肉鸡生产技术规程农业农村部修订788GB/T19970-2005无核白葡萄农业农村部修订789GB/T20365-2006硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量的测定液相色谱法农业农村部修订790GB/T21124-2007小麦黑胚粒检验法农业农村部修订791GB/T21125-2007食用菌品种选育技术规范农业农村部修订792GB/T21459.1-2008真菌农药母药产品标准编写规范农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T21459.1-2008,GB/T21459.2-2008,GB/T21459.3-2008,GB/T21459.4-2008,GB/T21459.5-2008793GB/T21459.2-2008真菌农药粉剂产品标准编写规范农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T21459.1-2008,GB/T21459.2-2008,GB/T21459.3-2008,GB/T21459.4-2008,GB/T21459.5-2008794GB/T21459.3-2008真菌农药可湿性粉剂产品标准编写规范农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T21459.1-2008,GB/T21459.2-2008,GB/T21459.3-2008,GB/T21459.4-2008,GB/T21459.5-2008795GB/T21459.4-2008真菌农药油悬浮剂产品标准编写规范农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T21459.1-2008,GB/T21459.2-2008,GB/T21459.3-2008,GB/T21459.4-2008,GB/T21459.5-2008796GB/T21459.5-2008真菌农药饵剂产品标准编写规范农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T21459.1-2008,GB/T21459.2-2008,GB/T21459.3-2008,GB/T21459.4-2008,GB/T21459.5-2008797GB/T22101.1-2008棉花抗病虫性评价技术规范第1部分:棉铃虫农业农村部修订798GB/T22101.2-2009棉花抗病虫性评价技术规范第2部分:蚜虫农业农村部修订799GB/T22101.3-2009棉花抗病虫性评价技术规范第3部分:红铃虫农业农村部修订800GB/T22103-2008城市污水再生回灌农田安全技术规范农业农村部修订801GB/T22105.1-2008土壤质量总汞、总砷、总铅的测定原子荧光法第1部分:土壤中总汞的测定农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T22105.1-2008,GB/T22105.2-2008,GB/T22105.3-2008802GB/T22105.2-2008土壤质量总汞、总砷、总铅的测定原子荧光法第2部分:土壤中总砷的测定农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T22105.1-2008,GB/T22105.2-2008,GB/T22105.3-2008803GB/T22105.3-2008土壤质量总汞、总砷、总铅的测定原子荧光法第3部分:土壤中总铅的测定农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T22105.1-2008,GB/T22105.2-2008,GB/T22105.3-2008804GB/T23391.1-2009玉米大、小斑病和玉米螟防治技术规范第1部分:玉米大斑病农业农村部修订805GB/T23391.2-2009玉米大、小斑病和玉米螟防治技术规范第2部分:玉米小斑病农业农村部修订806GB/T23391.3-2009玉米大、小斑病和玉米螟防治技术规范第3部分:玉米螟农业农村部修订807GB/T23739-2009土壤质量有效态铅和镉的测定原子吸收法农业农村部修订808GB/T23890-2009油菜籽中芥酸及硫苷的测定分光光度法农业农村部修订809GB/T2418-2003内江猪农业农村部修订810GB/T24501.2-2009小麦条锈病、吸浆虫防治技术规范第2部分:小麦吸浆虫农业农村部修订811GB/T26431-2010甜椒农业农村部修订812GB/T27633-2011琯溪蜜柚农业农村部修订813GB/T27659-2011无籽西瓜分等分级农业农村部修订814GB/T28667-2012蕨麻农业农村部修订815GB/T29370-2012柠檬农业农村部修订816GB/T29891-2013荔枝、龙眼干燥设备技术条件农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T29891-2013,GB/T29892-2013817GB/T29892-2013荔枝、龙眼干燥设备试验方法农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T29891-2013,GB/T29892-2013818GB/T30390-2013油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定高效液相色谱法农业农村部修订819GB/T30393-2013制取沼气秸秆预处理复合菌剂农业农村部修订820GB/T31270.1-2014化学农药环境安全评价试验准则第1部分:土壤降解试验农业农村部修订821GB/T31270.10-2014化学农药环境安全评价试验准则第10部分:蜜蜂急性毒性试验农业农村部修订822GB/T31270.11-2014化学农药环境安全评价试验准则第11部分:家蚕急性毒性试验农业农村部修订823GB/T31270.12-2014化学农药环境安全评价试验准则第12部分:鱼类急性毒性试验农业农村部修订824GB/T31270.13-2014化学农药环境安全评价试验准则第13部分:类急性活动抑制试验农业农村部修订825GB/T31270.14-2014化学农药环境安全评价试验准则第14部分:藻类生长抑制试验农业农村部修订826GB/T31270.15-2014化学农药环境安全评价试验准则第15部分:蚯蚓急性毒性试验农业农村部修订827GB/T31270.16-2014化学农药环境安全评价试验准则第16部分:土壤微生物毒性试验农业农村部修订828GB/T31270.17-2014化学农药环境安全评价试验准则第17部分:天敌赤眼蜂急性毒性试验农业农村部修订829GB/T31270.2-2014化学农药环境安全评价试验准则第2部分:水解试验农业农村部修订830GB/T31270.3-2014化学农药环境安全评价试验准则第3部分:光解试验农业农村部修订831GB/T31270.4-2014化学农药环境安全评价试验准则第4部分:土壤吸附/解吸试验农业农村部修订832GB/T31270.5-2014化学农药环境安全评价试验准则第5部分:土壤淋溶试验农业农村部修订833GB/T31270.7-2014化学农药环境安全评价试验准则第7部分:生物富集试验农业农村部修订834GB/T31270.8-2014化学农药环境安全评价试验准则第8部分:水―沉积物系统降解试验农业农村部修订835GB/T31270.9-2014化学农药环境安全评价试验准则第9部分:鸟类急性毒性试验农业农村部修订836GB/T8321.1-2000农药合理使用准则(一)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018837GB/T8321.10-2018农药合理使用准则(十)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018838GB/T8321.2-2000农药合理使用准则(二)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018839GB/T8321.3-2000农药合理使用准则(三)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018840GB/T8321.4-2006农药合理使用准则(四)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018841GB/T8321.5-2006农药合理使用准则(五)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018842GB/T8321.6-2000农药合理使用准则(六)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018843GB/T8321.7-2002农药合理使用准则(七)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018844GB/T8321.8-2007农药合理使用准则(八)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018845GB/T8321.9-2009农药合理使用准则(九)农业农村部整合修订整合修订标准号:GB/T8321.1-2000,GB/T8321.2-2000,GB/T8321.3-2000,GB/T8321.4-2006,GB/T8321.5-2006,GB/T8321.6-2000,GB/T8321.7-2002,GB/T8321.8-2007,GB/T8321.9-2009,GB/T8321.10-2018846GB/T9659-2008柑桔嫁接苗农业农村部修订847GB/T9959.2-2008分割鲜、冻猪瘦肉农业农村部修订848GB/T9961-2008鲜、冻胴体羊肉农业农村部修订849GB/T16126-1995生物监测质量保证规范国家卫生健康委员会修订850GB/T16860-1997感官分析方法质地剖面检验全国感官分析标准化技术委员会修订851GB/T20861-2007废弃产品回收利用术语中国标准化研究院修订852GB/T8223-1987价值工程基本术语和一般工作程序中国标准化研究院修订
  • 基于SPR的中药小分子垂钓方法和技巧——海军军医大学副教授曹岩
    为帮助科研工作者了解前沿分子互作分析技术,向用户传递准确、实用的技术干货和宝贵的实验经验。本期,仪器信息网特别邀请到海军军医大学药学院副教授曹岩博士谈一谈SPR技术在中药小分子垂钓研究领域中的方法和技巧。分子垂钓是一种从复杂样品体系中寻找与已知生物分子相互作用的特定分子(如小分子、蛋白质、或其他生物活性分子)的实验技术,在生物学研究、中药研究、活性药物发现等领域中发挥重要的作用。表面等离子体共振(Surface plasmon resonance,SPR)技术是一种生物传感分析技术,可用于研究活性分子与靶点的相互作用,具有灵敏度高、特异性强、分辨率高、样品消耗少、实时监测等特点。在高通量药物筛选、候选药物亲和力测定、抗原表位鉴定等生物医药领域应用广泛。近年来,基于SPR的分子垂钓技术越来越引起广大科研工作者的兴趣,该技术利用SPR的高灵敏度、高特异性等特点,以及SPR仪器的实时监测、自动化进样和回收流程,并结合高分辨质谱鉴定,不仅能用于从细胞裂解液中垂钓蛋白质等生物大分子,也能用于从中药提取液中垂钓小分子化合物。本文以采用Biacore T200分子互作系统进行中药小分子垂钓为例,介绍SPR垂钓的方法和技巧。一、基本原理和方法基于SPR的中药小分子垂钓的基本原理是将一种已知生物分子(靶蛋白)偶联在传感芯片表面,再将包含潜在活性分子的复杂样品溶液(中药提取液)注入到传感芯片,进行SPR检测和活性分子回收。在进样过程中,复杂样品溶液中的活性分子会和偶联在传感芯片上的生物分子发生结合,这种结合可能是特异性或非特异性,致使芯片表面物质的质量发生变化(图1-1)。进样结束后,继续注入缓冲液使未结合或弱结合的成分离开芯片表面,而强结合的成分留在芯片表面。接下来,为了避免管路中的复杂样品溶液混入后续回收的结合成分中,通过注入洗涤液清洗从样品到芯片表面之间的管路,去除管路中的复杂样品溶液(图1-2)。然后再注入洗脱液并孵育适当时间,使芯片表面上结合的小分子解离下来(图1-3)。最后将液体流向反转,使解离下来的样品原路返回并收集在样品溶解液中(图1-4)。由于一次仅可回收微量样品(2μL),可多次循环上述过程(一般10-20次),回收足够量的样品,合并后浓缩,用于后续质谱鉴定,最终发现复杂样品中的活性分子。图1 基于SPR的分子垂钓的基本流程二、垂钓实验经验和技巧理解基于SPR的分子垂钓的原理是实验成功的第一步,在实际操作中还需要特别关注以下方面,这些将直接影响结果的准确性和可靠性。1.靶蛋白的偶联量为了尽可能多回收活性成分,靶蛋白的高偶联量是至关重要的。一般首选CM5传感芯片通过-COOH与蛋白的-NH2发生反应,偶联效率较高,偶联水平可到达10000-20000 RU。对于不易提取纯化的跨膜蛋白,可选用L1 传感芯片,其表面可捕获囊泡和脂质体。另外还有SA传感芯片,其表面固定了链酶亲和素,可特异性偶联带有生物素标记的蛋白、多肽、核酸等。2.靶蛋白的活性和特异性在垂钓实验前应验证偶联后靶蛋白的活性和特异性,这一验证实验可以通过对特异性抗体/抗原或已知的活性分子进行亲和力测定,以确认传感芯片上靶蛋白的结合活性,有助于提高垂钓结果的准确性和可靠性。3.缓冲液的组成在复杂样品的“进样-回收”过程中,应注意维持适当的缓冲液条件,以提高回收效率。运行缓冲液和样品稀释液一般为PBS或EP;样品回收液一般为弱酸(三氟醋酸、甲酸、乙酸)、弱碱(NaOH)、表面活性剂(吐温20)、高盐溶液(NaCl);样品溶解液一般为质谱兼容的挥发性盐溶液(NH4HCO3)。可采用已知的活性分子模拟筛选流程,以选择最佳的缓冲液条件。4.实验的设计尽量减少假阳性结果,是高质量SPR垂钓实验的成功标志。为此,可通过对照实验和验证实验实现这一目标。对照实验:使用空白的CM5芯片重复垂钓过程,将回收到的样品作为阴性对照品进行质谱检测,在后续的数据分析中作为背景对照扣除。验证实验:鉴定出活性分子后,应获取其单体,采用SPR进行亲和力测定,以判断结合的特异性。如果同时鉴定出多个活性分子,也可以对他们的动力学或热力学参数进行比较分析,从而排除假阳性结果。海军军医大学药学院 曹岩 副教授海军军医大学药学院,副教授,硕士生导师,上海市浦江人才。药物分析专业,博士学位,美国密歇根大学访问学者。以复杂药物和生物体系的分析技术为主要研究方向,从事基于表面等离子共振(SPR)、生物膜干涉(BLI)等生物分子互作技术的药物分析新方法研究。在活性药物的高通量筛选、中药药效物质的高内涵发现、体内药物和生物标志物的高灵敏检测上形成特色。研究成果多次发表在Nature Chemistry、Analytical Chemistry等高水平期刊上,累计发表第一和通讯作者SCI论文30余篇,累计影响因子大于230。主持国家自然科学基金项目、国家重大科学仪器开发项目、上海市基金项目等6项课题。申请国家发明专利8项,授权5项。主编、副主编出版教材专著4部。参考文献[1] Identification of a ligand for tumor necrosis factor receptor from Chinese herbs by combination of surface plasmon resonance biosensor and UPLC-MS. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2016, 408(19): 5359-5367.[2] Biosensor-Based Active Ingredients Recognition System for Screening STAT3 Ligands from Medical Herbs. Analytical Chemistry. 2018, 90(15):8936-8945.[3] A strategy of screening and binding analysis of bioactive components from traditional Chinese medicine based on surface plasmon resonance biosensor. Journal of Pharmaceutical Analysis. 2022, 12(3): 500-508.如有技术干货、科研成果、仪器使用心得、生命科学领域热点事件观点等内容,欢迎投稿,投稿邮箱:zhaoyw@instrument.com.cn,关于征稿内容要求也可邮件咨询或电话联系:13331136682(同微信)。
  • Affinité的P4SPR仪器快速检测抗体活性
    抗体的质量受pH、温度、和细胞培养代谢物等工艺参数的影响[1]。抗体等生物药需要进行质量控制,以确保质量和安全。这些生物药不仅需要通过串联质谱等物理化学方法进行表征,而且还必须研究它们的生物活性。传统方法例如酶联免疫吸附测定(ELISA)[1] [2])被用于活性测定。然而,这些检测不能提供动力学和亲和力数据[1]。另一种方法是表面等离子体共振(SPR)技术。SPR是一种表征蛋白质的强大技术,作为一种无标记技术,利用它可以实时检测蛋白质相互作用,并且样品使用量少[2]。大型SPR系统已被用于蛋白质质量控制[2] [3]。尽管如此,大型SPR设备的使用仍然有限,仪器需专人使用,操作复杂,耗材成本高[4]。另一方面,个人型SPR设备可以让科学家快速的检测样品,轻松获得验证质量所需的有价值的动力学和亲和力数据,而不影响灵敏度和特异性。在本应用中,我们演示了如何使用个人型SPR设备(P4SPR™)轻松确定哪种来源的抗核衣壳抗体与SARS-CoV-2核衣壳重组蛋白具有最佳的结合性能。Djaileb等人在ChemRXiv论文中描述了更详细的实验过程[6]。图1显示了固定SARS-CoV-2核衣壳蛋白检测抗核衣壳抗体的方案。通常,金传感器表面用Afficoat[4]修饰。用EDC / NHS处理,然后用醋酸钠洗涤。将SARS-CoV-2核衣壳重组(rN)蛋白溶液(10μg/ mL)添加到表面并处理20分钟;再次用醋酸钠洗涤。蛋白质修饰的表面被1M乙醇胺封闭10分钟(pH 8.5)以减少非特异性吸附。通过运行缓冲液(RB)对其进行平衡。随后,将来自不同来源的抗体制造商的抗核衣壳抗体溶液(10 μg/mL)(表1)手动注入传感器,并在每个通道(图2,通道A-C)收集SPR响应信号,一次进样获得3次重复试验数据。在引入新的抗体溶液之前,使用运行缓冲液和甘氨酸溶液进行洗涤。使用AntiRBD(受体结合结构域)作为对照(图2,通道D),以校正温度和体折射率的任何波动。SPR偏移的差异根据测量开始到结束的共振单位(RU)差异确定[6]。结果和讨论整个实验测试4种不同来源的抗体抗核衣壳所花费的总时间2.5小时。每次注射的平均时间约为18分钟,注射和再生的平均总时间为25分钟。图3显示了所有3个样品通道中抗核衣壳抗体第一和第二来源的SPR响应。可以清楚地看到抗核衣壳抗体与SARS-CoV-2核衣壳重组蛋白的互作响应。图4显示了所有四次进样的平均信号曲线图。图5显示了各种来源(按进样顺序)的抗核衣壳抗体(即浅蓝色的RU强度)互作强弱。很明显,AB1,批次B(注射#2)表现出最高的SPR响应或活性。此外,值得注意的是,如果使用浓度梯度的抗体或分析物,还可以通过手动进样轻松确定解离平衡常数(KD)。结论很明显,个人型SPR仪器可以快速对抗体进行质控,从而选择哪种抗体更适合于下一步的实验。这样可有效保障研究者的实验进展。同时,P4SPR也为生物制药产品进行质量控制提供了一种快速简便的方案。P4SPR优势Affinité 仪器的 P4SPR™ 是一种用户友好型仪器,可用于对蛋白质进行一般质量控制。无论蛋白质供应来自新供应商还是已经储存了一段时间,P4SPR™都可以轻松区分高活性和低活性蛋白质。此外,抗体样品不需要复杂的样本制备,可以稀释后直接注射样到仪器中。由于其多通道的功能设计,P4SPR 可提供快速、实时的数据和精度。参考文献1. M. Zschatzsch, Paul Ritter, Anja Henseleit,Klaus Wiehler, Sven Malik, Thomas Bley,Thomas Walther, Elke Boschke, "Monitoringbioactive and total antibody concentrationsfor continuous process control by surfaceplasmon resonance spectroscopy," Eng. LifeSci., vol. 19, pp. 681-690, 2019.2. Pranavan Thillaivinayagalingam, JulienGommeaux, Michael McLoughlin, DavidCollins, Anthony R. Newcombe,"Biopharmaceutical production: Applicationsof surface plasmon resonance biosensors," J.Chromatogr. B, vol. 878, pp. 149-153, 2010.3. C. Gassner, F. Lipsmeier, P. Metzger, H. Beck, A.Schnueriger, J.T. Regula, J. Moelleken,"Development and validation of a novel SPRbased assay principle for bispecific molecules,"J. Pharm. Biomed. Anal., vol. 102, pp. 144-149,2015.4. "Affinité Instruments," [Online]. Available:https://affiniteinstruments.com/5. H. Wang, Jing Shi, Youchun Wang, Kun Cai, QinWang, Xiaojun Hou, Wei Guo, Feng Zhang,"Development of biosensor-based SPRtechnology for biological quantification andquality control of pharmaceutical proteins," J.Pharm. Biomed. Anal., vol. 50, pp. 1026-1029,2009.6. Abdelhadi Djaileb, Benjamin Charron, MaryamHojjat Jodaylami, Vincent Thibault, JulienCoutu, Keisean Stevenson, Simon Forest,Ludovic S. Live, Denis Boudreau, Joelle N.Pelletier, Jean-Francois Masson, "A Rapid and Quantitative Serum Test for SARS-CoV-2 Antibodies with Portable Surface Plasmon Resonance Sensing,"http://doi.org/10.26434/chemrxiv.12118914.v1, April 15, 2020.
  • 国标蜂蜜中掺假淀粉糖浆的测定-离子色谱法
    国标GB/T21533-2008蜂蜜中掺假淀粉糖浆的测定-离子色谱法 国标GB/T21533-208检测蜂蜜中普遍掺假而加入的淀粉糖浆。该检测常见糖类的简单方法是配有氨丙基硅与高分子相或键合金属的阳离子交换树脂柱、折光检测器或低波长UV检测器的高效液相色谱,等浓度淋洗分析,但这种方法由于糖从糖醇和有机酸中分离不充分、缺乏 特异检测、灵敏度不足等问题的存在,不能满足某些应用的要求,改进糖的分析方法已受到关注,自从规定食品中总糖的含量必须在标签中注明后,糖类的分析显得尤为重要,DIONEX戴安公司提供了与该国标的一致的一种全新而且成熟的方法,方法为:在高pH条件下,使用配有脉冲安培检测器(HPAE-PAD)和高效阴离子交换柱的离子色谱使上述问题得到了解决。糖类、糖醇及寡糖、聚糖等可以在一次进样后得到高分辨的分离而无需衍生,并且可以定量到P摩尔 (10-12 mol)水平。该技术已广泛应用于常规检测和研究中,且该方法得到国际标准组织及其它官方机构的认同。醇类、二醇及醛类也可以使用该技术检测。糖醇、单糖、双糖、低聚糖和多糖的检测均使用脉冲安培检测器、金工作电极、以四电位波形检测。 戴安公司有关于蜂蜜检测的操作视频,欢迎索取010-64436740(汪小姐/汤先生) 蜂蜜中淀粉糖浆的测定--离子色谱法 1 该国标中规定了蜂蜜中果葡糖浆、麦芽糖浆、异麦芽糖浆、饴糖浆等淀粉糖浆的测定方法。本标准适用于蜂蜜中淀粉糖浆的测定。 本标准检出限:5%淀粉糖浆。 2 检测原理:蜂蜜中不含5糖(DP5)以上的寡糖,而各种淀粉糖浆中均含5糖(DP5)以上的寡糖,使用凝胶 体积排阻法去除样品中果糖、葡萄糖,将寡糖富集后直接经阴离子交换色谱-电化学检测器检测,将 5糖(DP5)以上寡糖的存在作为蜂蜜中淀粉糖浆的判定指标。 3 试剂和材料 3.1 聚丙烯酰胺凝胶微球,粒径45&mu m~90&mu m,分级分离的相对分子质量范围 100~1800,按使用 说明书进行水化和脱气。 注:可使用Bio-Gel® P-2 Gel 型聚丙烯酰胺凝胶或同等性能的凝胶材料。 3.2 凝胶层析柱:将聚丙烯酰胺凝胶(3.1)湿法装入1.5 cm× 15 cm 空柱管中,装入的凝胶高度为10cm,上端保持1cm 以上的水层,避免干涸。 3.3 层析柱架。 3.4 麦芽糖标准储备液:分别称取色谱纯麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦 芽七糖标准物质各10.0mg,用水分别溶解定容至10mL,配制成浓度为1mg/mL 的储备液,于棕色瓶中4℃下储存。 3.5 麦芽糖标准混合使用液:吸取一定量的糖标准储备液(3.4),按表1 用水配制麦芽糖标准混合使用液,在4℃下保存不超过30 天。该溶液用于样品色谱图中寡糖保留时间的定位。 3.6 50%氢氧化钠储备液:符合离子色谱使用纯度。 3.7 无水醋酸钠:符合离子色谱使用纯度。 3.8 0.45&mu m 样品滤膜:水性。 3.9 除非另有说明,所用试剂为分析纯,所用水符合GB/T 6682 规定的一级水。 4 仪器 4.1 离子色谱仪:配电化学检测器。 4.2 分析天平: 0.1mg 。 5 试样制备 5.1 称取混匀的蜂蜜2.0g 作为试样,用水溶解后定容至20mL,用0.45&mu m 水性滤膜过滤,滤液备 用。 5.2 将准备好的聚丙烯酰胺凝胶层析柱(3.2)中的水放尽,至下端无水珠滴下时,将样品滤液(5.1) 2.0 mL 沿柱壁慢慢加入层析柱中,恰好流至凝胶上方无液时,加入3.0mL 水冲洗柱壁,又至凝胶上 方无液时,再加入5.0mL 水冲洗凝胶柱。注意每次在层析柱上方加液(或水)的时机,应是前次加 液(或水)的层析柱体上端液体恰好流尽、下端恰好无液体滴出。弃去上述三次共10.0mL 流出液后, 于层析柱下方接一只2mL 具塞塑料离心管,从柱上方加入2mL 水,收集这2mL 流出液至离心管中, 盖紧离心管塞,摇匀后作为待测样品溶液,24 小时之内测定。层析柱中加入50mL 水冲洗,至全部流出后,该柱直接用于处理下一个样品。 5.3 将纯蜂蜜作为阴性对照品,蜂蜜中掺入5%市售果葡糖浆、蜂蜜中掺入5%市售麦芽糖浆的样品 作为阳性对照品,按照5.1 和5.2 进行操作。 6 测定 6.1 离子色谱条件 6.1.1 色谱柱:CarboPac&trade PA200 3 mm× 250 mm (带CarboPac&trade PA200 3 mm× 50 mm 保护柱) 或相当性能的分离柱,柱温30℃; 6.1.2 流动相:A:100%水;B:200mmol/L 氢氧化钠,200mmol/L 醋酸钠。梯度洗脱条件见表2。 6.1.3 检测器:电化学检测器;Au 工作电极;Ag/AgCl 参比电极。检测池温度30℃。糖检测波形 参见表3。 6.1.4 进样量:20&mu L 6.2 样品测定 依次将麦芽糖标准混合使用液(3.5)、纯蜂蜜阴性对照品(5.3)、含5%果葡糖浆的蜂蜜(5.3)和含5%麦芽糖浆的蜂蜜等阳性对照品(5.3)的寡糖收集液注入离子色谱仪中,观察离子色谱图, 当谱图与附录中参考谱图基本吻合时,方可进行实测样品的测试。 7 结果判定 分析比较纯蜂蜜阴性对照样品和含5%糖浆的蜂蜜阳性对照样品的寡糖谱图,找到两者之间有明 显差异的&ldquo 指纹区&rdquo ,并以此作为纯蜜中掺入淀粉糖浆的判定指标。任一掺入果葡糖浆的蜂蜜样品, 在麦芽五糖~麦芽六糖之间和麦芽六糖~麦芽七糖之间有两个典型的&ldquo 指纹峰&rdquo P1和P2,根据这两个峰的出现可判断蜂蜜中掺入果葡糖浆。任一掺入麦芽糖浆的蜂蜜样品,在麦芽五糖~麦芽六糖之 间、麦芽六糖~麦芽七糖之间以及麦芽七糖之后,有三个典型的&ldquo 指纹峰簇&rdquo P1、P2和P3,根据这三个峰簇的出现可判断蜂蜜中掺入麦芽糖浆(包括高麦芽糖浆、异麦芽糖浆和饴糖糖浆)。除了描述出的基本特点外,不同工艺条件下生产的糖浆还可见到其他出峰位置有其他峰形特征的微量寡糖峰,但不影响&ldquo 指纹区&rdquo 的基本特征和判定。附录A中的图A1为麦芽糖标准混合使用液的定位谱图;图A2为纯洋槐蜜、枣花蜜、椴树蜜、荆条蜜、油菜蜜的寡糖谱图;图A3为不同蜜种掺入5%的不同果葡糖浆时的寡糖谱图、图A4为不同蜜 种掺入5%的不同麦芽糖浆时的寡糖谱图。 附录A (资料性附录) 蜂蜜中淀粉糖浆测定的相关色谱图 DIONEX戴安中国市场部
  • 专家视角丨药物研发过程中的化学对照品探讨
    精准药物分析的工作,离不开稳定的分析系统和可靠的标准物质(标准品/对照品等)。标准物质具有复现、保存和传递量值的基本作用,对实现测量结果的溯源性,保证测量结果在时间与空间上的连续性与可比性,进而确保测量结果的准确可靠、有效与国际互认具有关键作用。 岛津为制药行业客户提供稳定可靠的标准品/对照品制备解决方案:制备液相系统(Prep LC)、质谱引导的制备液相系统(MS-trigger Prep LC),超快速制备纯化液相色谱系统(UFPLC)、制备超临界流体色谱(Prep SFC)。 超快速制备纯化液相色谱系统(UFPLC)可在线完成从分离、浓缩、纯化到回收的制备全过程。 2020年,中国药科大学药物分析系吴春勇博士于新药仿药CMC实操讨论群进行了精彩而全面的主题分享,并发表在“新药仿药CMC实操讨论”公众号,经过“新药仿药CMC实操讨论”的授权,在此分享吴春勇博士的《化学药物研发过程中的对照物探讨》。 概述案例 对于吴春勇博士的《化学药物研发过程中的对照物探讨》,新药仿药CMC实操讨论群也进行了较为热烈的探讨。PPT正文后续延申的讨论内容如下(基本按照时间先后顺序列出)。 沈晓斌博士(前FDA资深审评员,FDA报批咨询顾问):very nice.吴博士论述的非常全面、非常细。我们就说比如说在FDA做review的时候呢,我们个人不会接触那么全面,各种各样的方式,这个标准品的这个去就是抽点它的含量呀,就是拿到他的COA,通常不会把各种方法都是看过一遍的。 就是它这个PPT呢,把所有的东西都给想细细的捋了一遍,个人觉得就是这是一个对知识体系的全面的补充,有些东西,因为你以前没有接触过,你不会考虑那么细,当在FDA的时候你看到的是公司怎么做,然后你来评估他是否合理,是否可以接受,或者跟FDA的现有要求,来评估。 想要就说一点,FDA本身他不去说去该怎么去定量,这个标准品他只是负责审评,就是评审你(的资料),外界可以自己去建议你想要的方式,但是你要有足够多的科学依据,然后他(FDA)来评估是否可以接受,就是完全靠自己来论述清楚。 另外就是说国内看起来,这个我以前对国内这个没有太多的,而且也没有特别去关注,因为我这个工作最早才从FDA报批方面的东西,吴教授这个主题一讲,觉得国内在有些方面其实要求是似乎是比USP、FDA的要求更细更多一些,有一种感觉就是弯道超车已经超了,在有些方面实际上是做的更好。只不过,过去这些年,西方就是设定了这种既定的质量标准,那其他国家,就因为你要照着西方去做仿药嘛,你就必须根据他的规则来走,更多的是这方面的区别。 孙亚洲老师(长沙晶易首席科学家):意见1:研发人员买的非法定对照品,外标法测定杂质含量时,很多人直接采用了COA的赋值,也直接采用相应的测定结果订入了标准,有些不妥。包括批检验,最初的朔源需要是法定对照或者经过标定的对照品。 意见2:在吴博士的ppt中,对于非法定来源的如百灵威,sigma等买到的杂质对照品,拿到后是否需要再行进行研究工作或者分析一下是否存在风险,似乎没有提出来。这个问题建议大家是否深入思考一下。 群主补充:只有经过标化赋值且可溯源(过程,方法,验证)的,风险才是最低的。 群主补充:尽管杂质测定中,如5%的误差是可以接受的(这属于科学性的范畴);但不等同于对照品/标准品可以草率拿来,草率采用他人的赋值,这完全是两个范畴。也许某份杂质对照品中含水量10%,无机成分包括前处理过程带来的硅胶等30%,若草率定量,杂质的真实含量会被低估如40%。 沈晓斌博士:同意以上的观点。 群友1:通过药品杂质的公司购买的对照品,我们就碰到了,欧美的一家知名公司提供的对照品结构出现偏差,我们通过多次比对都无法拿到和代谢产物吻合的结果,多次交涉和讨论之后才发现该公司的产品是另外一个同分异构体。 吴春勇博士(中国药科大学药物分析系副教授):看来概率虽然小,这个问题还是客观存在的。 沈晓斌博士:提供化合物的公司没有责任和义务。使用者必须做该做的来证明给监管机构标准品的使用是合理的。 刘国柱博士(长沙晨辰医药创始人、技术总监):我请教吴博士一个问题,目前国内杂质对照品市场非常混乱,大部分购买的杂质对照品都是经几手倒卖才到厂家手里,对照品塑源存在问题,谱图与赋值真实性也存在问题,请问对此引入的风险有何看法? 群友2:在购买对照品的时候,在COA的同时能否得到该合成方法的信息,这个在技术层面上是有难度的。没有哪个合成公司愿意提供产品合成路线给对方的。 群友3:好多杂质对照品本身不稳定,需要在-20℃保存,有可能在运输过程中就发生了变化,拿到的第一时间应该进行确认,遇到好几次这种情况。 吴春勇博士:在现有的条件下,购买的商业化对照品全部自己赋值,实践上还是存在相当的困难,成本上也没法控制。所以我个人观点:1)尽量选择知名公司;2)自己对风险进行评估,尤其是校正因子与各国药典不同,或者结构上与待测药物的生色团类似,分子量相当,校正因子却有显著不同。 【插话:知名公司依旧有风险或风险大】 是的,分享的那个案例,购买公司是业界相当知名的! 群友4:购买杂质时能同时获得合成信息的可能性非常小,最多提供四大谱(还不带解谱的),那就需要公司内部有比较强大的解谱能力,有碰到过解谱结果和供应商提供的不一致的情况,所以购买“商业化”的杂质对照风险是很大,市场良莠不齐,缺乏有效的管控。 群友5:我们碰到问题的那家公司就是业界知名对照品公司,也有出失误的概率。 刘国柱博士:另请教吴博士及大家一个问题,目前国内许多企业对于杂质对照品的结构确证,很多时候都只做了质谱与NMR氢谱与碳谱,不做二维;而事实上不做二维NMR谱,NMR信号是无法归属的,从而不足以确定杂质结构,有可能确证的结构是错的;请问这个问题大家如何看待? 吴春勇博士:我个人只要做结构确认,一定做二维。 刘国柱博士:那我和您观点一致,强烈呼吁大家做结构确证一定要做二维。 购买的杂质对照品一般只提供质谱与NMR氢谱与碳谱,不做二维与结构解析;在此习惯引导下,国内许多企业自已做杂质结构确证也只做个质谱与NMR氢谱与碳谱,个人观点这是存在风险的做法。 代孔恩(安士研发总监):法规有明确规定必须这么表征,很多标准品量很小,做全应该不容易。【插话:情况多,复杂,没法一刀切】 黄常康博士(南京百泽医药创始人):有些杂质是定向合成的,或者是有文献数据的。我觉得根据实际情况来判断需不需要。不用二维定不了结构的,该做就做,有些简单的杂质,其实氢谱已经足够了,质谱只是多一个证据。 自己做的话,还需要加上做结构确证的杂质的钱,很多时候会差很多。 群友6:对照品的检测分析,既要有普遍性的,也要特殊性的,这个普遍性与特殊性的界点怎么界定,很难有一个文件化的说法。 以上讨论内容来源: 新药仿药CMC实操讨论公众号
  • ELISA试剂盒定性测定的显色可在室温进行
    此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。ELISA试剂盒时间一般不需要严格控制,有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间,及时判断。OPD底物显色一般在室外温或37 ℃反应20-30分钟后即不再加深,再延长反应时间,可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色,显色反应应避光进行,显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用硫酸终止后,显色由橙黄色转向棕黄色。 TMB受光照的影响不大,ELISA试剂盒可在室温中置于操作台上,边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性,宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后,约40分钟显色达顶峰,随即逐渐减弱,至2小时后即可完全消退至无色。TMB的终止液有多种,叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。此外,各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色,此时可用特定的波长(450 nm)测读吸光值。(2)比色 比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体,ELISA试剂盒然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。以软板为载体的试验,需先将板置于标准96孔的座架中,才可进行比色。最好在加底物液显色前,先将软板边缘剪净,这样,此板就可完全平妥坐入座架中。
  • CDE发布11个生物等效性研究技术指导原则(文字整理版)
    生物等效性(bioequivalency , BE )是指在同样试验条件下试验制剂和对照标准制剂在药物的吸收程度和速度的统计学差异。当吸收速度的差别没有临床意义时,某些药物制剂其吸收程度相同而速度不同也可以认为生物等效。生物等效性研究作为保证仿制药与原创药、上市药品变更前后产品有着相同的安全性和有效性的研究方法,在药品研发过程中发挥着非常重要的作用。1月26日,为进一步规范仿制药生物等效性研究,药审中心组织制定了《奥氮平口崩片生物等效性研究技术指导原则》等11个技术指导原则。根据《国家药监局综合司关于印发药品技术指导原则发布程序的通知》(药监综药管〔2020〕9号)要求,经国家药品监督管理局审查同意,自发布之日起施行。1、奥氮平口崩片生物等效性研究技术指导原则一、概述奥氮平口崩片(Olanzapine Orally Disintegrating Tablets)用于精神分裂症的治疗,主要成分为奥氮平。奥氮平在体内消除半衰期较长,年龄、性别及吸烟情况会影响其在体内的消除。奥氮平口崩片人体生物等效性研究应符合本指导原则,还应参照《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》、《生物等效性研究的统计学指导原则》等相关指导原则要求。 二、人体生物等效性研究设计 (一)研究类型采用两制剂、两周期、两序列交叉设计,开展单次给药的空腹及餐后生物等效性研究。 (二)受试人群 健康受试者。(三)给药剂量奥氮平口崩片的规格有 2.5mg、 5mg、 10mg、 15mg、 20mg。基于安全性方面的考虑,建议采用 5mg 规格开展生物等效性试验。(四)给药方法奥氮平口崩片说明书中有两种口服给药方法,一种为:将口崩片放入口中,在唾液中分散并吞咽;另一种为:将口崩片放入一杯水或其他适宜的饮料中(如橘子汁、苹果汁、牛奶或咖啡),待其分散后立即服用。建议采用第一种给药方式开展临床试验, 观察并记录口崩片在口中完全崩解的时间及口感等。(五)血样采集应设计足够长的生物样品采集时间,以覆盖药物通过肠道并被吸收的时间段。(六)检测物质血浆中的奥氮平。(七)生物等效性评价受试制剂相比参比制剂的 Cmax、 AUC0-t和 AUC0-∞的几何均值比 90%CI 在 80.00%~125.00%范围内。也可采用 AUC0-72hr 来代替 AUC0-t和 AUC0-∞评价制剂间吸收程度的差异。三、人体生物等效性研究豁免若同时满足以下条件,可豁免 2.5mg、 10mg、 15mg、 20mg规格生物等效性试验:1)5mg 规格符合生物等效性要求;2)各规格制剂在不同 pH 介质中体外溶出曲线相似;3)各规格制剂的处方比例相似。2、醋酸阿比特龙片生物等效性研究技术指导原则一、概述醋酸阿比特龙片( Abiraterone Acetate Tablets) 主要用于治疗前列腺癌, 主要成分为醋酸阿比特龙。本品与食物同时服用时,阿比特龙全身暴露量升高,本品须在餐前至少1小时和餐后至少2小时空腹服用。醋酸阿比特龙片生物等效性研究应符合本指导原则,还应参照《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》、《生物等效性研究的统计学指导原则》、《高变异药物生物等效性研究技术指导原则》等相关指导原则。二、人体生物等效性研究设计 (一)研究类型可采用两制剂、单次给药、交叉试验设计,进行空腹人体生物等效性研究。 (二)受试人群健康男性受试者。 (三)给药剂量采用申报的最高规格单片服用。 (四)给药方法口服给药。 (五)血样采集建议恰当地设定样品采集时间,使其包含吸收、分布、消除相。 (六) 检测物质血浆中阿比特龙。 (七)生物等效性评价以阿比特龙的 Cmax、 AUC0-t、 AUC0-∞为评价指标, 生物等效性接受标准为受试制剂与参比制剂的 Cmax、AUC0-t、AUC0-∞的几何均值比值的 90%置信区间数值应不低于80.00%,且不超过 125.00%。 (八)其他1. 如采用重复试验设计,建议参考相关指南。2. 需告知受试者因目前尚不明确精液中是否会残留阿比特龙或其代谢物,三个月内应无育儿计划,并在研究过程及结束至少一周内需进行避孕。3. 研究过程中需监测生命体征和血清电解质;在基线和研究结束时,进行 12 导联心电图检查。三、人体生物等效性研究豁免不适用。3、醋酸钙片生物等效性研究技术指导原则一、 概述醋酸钙片( Calcium Acetate Tablets)为磷结合剂,临床用于慢性肾功能衰竭所致的高磷血症,本指导原则适用于高磷血症适应症的醋酸钙制剂研究。醋酸钙通过在消化道与食物中的磷酸盐结合成磷酸钙盐沉淀,减少磷酸盐的吸收,从而降低血中磷酸盐浓度。考虑钙为内源性物质,测定干扰因素多、个体差异大,与本适应症相关性小,因而不适合采用药代动力学研究方法评价其生物等效性。本品仿制药研究建议采用体外磷酸盐结合研究和溶出研究以考察受试制剂与参比制剂磷酸盐结合能力的一致性。二、体外磷酸盐结合研究(一)研究规格667mg(相当于 169mg 钙)。(二) 研究方法应在至少八种不同的磷酸盐浓度下分别针对受试制剂( T)和参比制剂( R)产品采用合理的条件开展研究并描绘出典型的磷酸盐结合曲线。最高磷酸盐浓度应保证磷酸根完全沉淀(即应实现最大磷酸盐结合)以考察磷酸盐结合能力。应在至少 12 个制剂单位( T 和 R)中平行开展磷酸盐结合相关研究,并分别绘制受试制剂和参比制剂的平均磷酸盐结合曲线。计算受试制剂和参比制剂的最大磷酸盐结合量的平均值比( T/R 结合比),并分别计算受试制剂和参比制剂磷酸盐结合曲线以及游离钙浓度变化曲线的相似因子( f2)。(三)检测物质上清溶液中未结合的钙离子和磷酸根离子。应使用经验证的分析方法进行测定。 方法学验证建议参考《中国药典》通则《药品质量标准分析方法验证指导原则》和《生物样品定量分析方法验证指导原则》。(四)评价指标受试制剂和参比制剂最大磷酸盐结合量的均值比( T/R结合比)。(五) 判定标准基于点估计值:T/R 结合比的数值应不低于 90.00%,且不超过 110.00%。三、 溶出研究除质量标准中规定的溶出方法(该方法用于稳定性和质量控制测定)之外,还应开展以下研究:采用桨法、 50 转/分钟,分别在 0.1N 盐酸溶液、 pH 4.5 醋酸盐缓冲液和 pH 6.8硼酸盐缓冲液的溶出介质中,对至少 12 个剂量单位的受试制剂和参比制剂进行溶出曲线相似性比较研究。4、恩替卡韦片生物等效性研究技术指导原则一、 概述恩替卡韦片( Entecavir Tablets)主要用于病毒复制活跃、血清丙氨酸氨基转移酶( ALT)持续升高或肝脏组织学显示有活动性病变的慢性成人乙型肝炎的治疗,主要成分为恩替卡韦。本品迅速吸收, 0.5~1.5 小时达到峰浓度( Cmax),进食标准高脂餐或低脂餐的同时口服 0.5mg 本品会导致药物吸收的轻微延迟(从原来的 0.75 小时变为 1.0~1.5 小时), Cmax降低 44% ~46%,药时曲线下面积( AUC)降低 18% ~20%。因此,本品应空腹服用(餐前或餐后至少 2 小时)。在达到血浆峰浓度后,血药浓度以双指数方式下降,达到终末消除半衰期约需 128~ 149 小时,半衰期较长。恩替卡韦片生物等效性研究应符合本指导原则,还应参照《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》、《生物等效性研究的统计学指导原则》等相关指导原则要求。二、 人体生物等效性试验设计(一)研究类型建议采用两制剂、两周期、两序列交叉设计,进行空腹人体生物等效性研究。也可以采用平行设计。(二)受试人群健康受试者。(三)给药剂量建议采用申报的最高规格单片服用。(四)给药方法口服给药。(五)血样采集应设计足够长的生物样品采集时间,以覆盖药物通过肠道并被吸收的时间段。(六)检测物质血浆中的恩替卡韦。(七) 生物等效性评价受试制剂相比参比制剂的 Cmax、 AUC0-t和 AUC0-∞的几何均值比值的 90% CI 在 80.00%~125.00%范围内,也可采用AUC0-72hr 来代替 AUC0-t 和 AUC0-∞评价制剂间吸收程度的差异。三、 人体生物等效性研究豁免若同时满足以下条件,可豁免 0.5mg 规格制剂的人体生物等效性研究: 1) 1mg 规格制剂符合生物等效性要求; 2)各规格制剂在不同 pH 介质中体外溶出曲线相似; 3) 各规格制剂的处方比例相似。5、甲磺酸伊马替尼片生物等效性研究技术指导原则一、 概述甲磺酸伊马替尼片( Imatinib Mesylate Tablets)用于治疗费城染色体阳性的慢性髓性白血病(Ph+ CML)的慢性期、加速期或急变期;用于治疗不能切除和/或发生转移的恶性胃肠道间质瘤( GIST)的成人患者;联合化疗治疗新诊断的费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病( Ph+ ALL)的儿童患者;用于治疗复发的或难治的费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病( Ph+ ALL)的成人患者, 主要成分为甲磺酸伊马替尼。 为降低胃肠道紊乱风险,甲磺酸伊马替尼片应在进餐时服用。甲磺酸伊马替尼片生物等效性研究应符合本指导原则,还应参照《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》、《生物等效性研究的统计学指导原则》等相关指导原则。二、 人体生物等效性研究设计(一) 研究类型采用两制剂、两周期、两序列交叉设计,进行餐后条件下单次给药的人体生物等效性研究。(二) 受试人群健康受试者。(三) 给药剂量建议采用申报的最高规格单片服用。(四) 给药方法口服给药。(五) 血样采集建议恰当地设定样品采集时间,使其包含吸收、分布、消除相。(六) 检测物质血浆中伊马替尼。(七) 生物等效性评价以伊马替尼的 Cmax、 AUC0-t、 AUC0-∞为评价指标, 生物等效性接受标准为受试制剂与参比制剂的Cmax、 AUC0-t、AUC0-∞的几何均值比值的 90%置信区间数值应不低于80.00%,且不超过 125.00%。三、人体生物等效性研究豁免若同时满足以下条件,100mg 规格的人体生物等效性试验可豁免: 1) 400mg 规格制剂符合生物等效性要求; 2) 各规格制剂在不同 pH 介质中体外溶出曲线相似; 3) 各规格制剂的处方比例相似。6、卡马西平片生物等效性研究技术指导原则一、 概述卡马西平片( Carbamazepine Tablets)用于治疗癫痫和三叉神经痛,主要成分为卡马西平。卡马西平是窄治疗指数药物,其有效浓度与中毒浓度接近;偏离最佳剂量或浓度会导致治疗失败或严重毒性反应;临床应用中需要基于药动学指标进行治疗药物监测;具有中低程度的个体内变异。卡马西平片生物等效性研究应符合本指导原则,还应参照《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》、《生物等效性研究的统计学指导原则》和《窄治疗指数药物生物等效性研究技术指导原则》等相关指导原则。二、 人体生物等效性研究设计( 一) 研究类型建议采用完全重复(两制剂、四周期、两序列) 交叉设计, 进行空腹和餐后人体生物等效性研究。( 二) 受试人群健康受试者。( 三) 给药剂量建议采用申报的最高规格单片服用。( 四) 给药方法口服给药。( 五) 血样采集合理设计样品采集时间,使其包含吸收、分布及消除相。( 六) 检测物质血浆中卡马西平。( 七) 生物等效性评价采用参比制剂标度的平均生物等效性( Reference-scaledaverage bioequivalence,RSABE)方法进行生物等效性评价,等效性判定标准参照《窄治疗指数药物生物等效性研究技术指导原则》。三、人体生物等效性研究豁免若同时满足以下条件,可豁免 100mg 规格制剂的人体生物等效性研究:1) 200mg 规格制剂符合生物等效性要求;2) 各规格制剂在不同 pH 介质中体外溶出曲线相似; 3)各规格制剂的处方比例相似。7、来氟米特片生物等效性研究技术指导原则一、 概述来氟米特片( Leflunomide Tablets) 用于治疗类风湿关节炎、 银屑病关节炎和狼疮性肾炎, 主要成分为来氟米特,活性代谢产物为特立氟胺。 本品具有半衰期长, 潜在的胚胎-胎儿毒性和肝毒性, 停药需加速清除等特点。来氟米特片生物等效性研究应符合本指导原则,还应参照《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》、《生物等效性研究的统计学指导原则》等相关指导原则。二、 人体生物等效性研究设计( 一) 研究类型开展单次给药的空腹及餐后生物等效性研究,可采用两制剂、两周期、两序列交叉试验设计。由于来氟米特的活性代谢产物特立氟胺( 检测物质) 的半衰期较长,也可考虑采用平行试验设计。( 二) 受试人群健康成年男性,同时应排除在研究过程中有生育计划的男性受试者。( 三) 给药剂量建议采用申报的最高规格单片服用。( 四) 给药方法口服给药。( 五) 血样采集因来氟米特的活性代谢产物特立氟胺的消除半衰期较长, 需设计足够长的生物样品采集时间,以覆盖药物通过肠道并被吸收的时间段。若采用平行试验设计,在论证药物分布和消除个体内变异较小的前提下,可用AUC0-72hr代替 AUC0-t或 AUC0-∞, 即采集 0~72 小时的血样。( 六) 检测物质血浆中特立氟胺。( 七) 生物等效性评价生物等效性接受标准为受试制剂相比参比制剂的 Cmax和 AUC 的几何均值比 90%置信区间在 80.00%-125.00%范围内。(八)其他考虑由于特立氟胺的半衰期较长,且存在潜在的胚胎-胎儿毒性和肝毒性,基于受试者安全和伦理保护的考虑, 建议申办者和研究者参考原研说明书相关要求, 采用必要的药物清除程序( 如使用考来烯胺或活性炭等) 消除受试者体内残存的特立氟胺,降低可能的安全风险。三、人体生物等效性研究豁免若同时满足以下条件,可豁免 10mg 规格制剂的人体生物等效性研究: 1) 20mg 规格制剂符合生物等效性要求; 2)各规格制剂在不同 pH 介质中体外溶出曲线相似; 3) 各规格制剂的处方比例相似。8、利伐沙班片生物等效性研究技术指导原则一、 概述利伐沙班片( Rivaroxaban Tablets) 是一种高选择性直接抑制 Xa 因子的口服抗凝药,主要成分利伐沙班在人体内暴露量-效应关系陡峭,其生物利用度随着剂量增高而下降,且饮食状态对不同规格利伐沙班片吸收的影响不同。利伐沙班片人体生物等效性研究应符合本指导原则,还应参照《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》 、《生物等效性研究的统计学指导原则》等相关指导原则要求。二、 人体生物等效性研究设计(一) 研究类型建议采用两序列、两交叉、四周期、 完全重复试验设计,开展单次给药的空腹及餐后人体生物等效性研究。(二)受试人群健康受试者。给药前所有受试者应检测凝血酶原时间( PT)、活化部分凝血活酶时间( aPTT)和肌酐清除率( CrCL), PT 和 aPTT结果应在正常范围内,以防止或避免出血的可能性, CrCL 值应大于 80 mL/min。(三)给药剂量建议采用申报的最高规格单片服用。(四)给药方法口服给药。(五)血样采集建议合理设计样品采集时间,使其包含吸收、分布及消除相。(六)检测物质血浆中的利伐沙班。(七) 生物等效性评价采用平均生物等效性方法, Cmax、 AUC0-t、 AUC0-∞几何均值比值的 90%置信区间应在 80.00%~125.00%范围内;同时,受试制剂与参比制剂个体内标准差比值( σWT/σWR)的双侧 90%置信区间上限应小于等于 2.5, 具体统计方法参照《窄治疗指数药物生物等效性研究技术指导原则》 。三、 人体生物等效性研究豁免若同时满足以下条件,可豁免 10 mg、 15 mg 规格制剂的人体生物等效性研究: 1) 20 mg 规格制剂符合生物等效性要求; 2)各规格制剂在不同 pH 介质中体外溶出曲线相似;3)各规格制剂的处方比例相似。9、沙库巴曲缬沙坦钠片生物等效性研究技术指导原则一、概述沙库巴曲缬沙坦钠片( Sacubitril Valsartan Sodium Tablets)用于射血分数降低的慢性心力衰竭( NYHA Ⅱ -Ⅳ级, LVEF≤40%)成人患者,降低心血管死亡和心力衰竭住院的风险,口服吸收后, 其在体内的主要成分为沙库巴曲和缬沙坦。沙库巴曲缬沙坦钠片生物等效性研究应符合本指导原则,还应参照《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》、《生物等效性研究的统计学指导原则》 、 《高变异药物生物等效性研究技术指导原则》 等相关指导原则要求。二、 人体生物等效性研究设计(一)研究类型可采用两制剂、两周期、两序列交叉试验设计。在试验设计阶段,申请人应基于已有的文献资料、预试验结果等,充分分析参比制剂生物药剂学特征和体内过程,估算沙库巴曲和缬沙坦的主要药动学参数( Cmax、 AUC0-t和 AUC0-∞)的个体内变异系数,并计算所需受试者样本量。为减小受试者样本量,亦可采用部分重复(如两制剂、三周期、三序列)或者完全重复(如两制剂、四周期、两序列)试验设计。进行空腹和餐后人体生物等效性研究。(二)受试人群健康受试者。(三)给药剂量建议采用申报的最高规格单片服用。(四)给药方法口服给药。(五)血样采集合理设计样品采集时间,使其包含吸收、分布及消除相。(六)检测物质血浆中的沙库巴曲和缬沙坦。(七)生物等效性评价对于每种检测成分,分别计算受试者服用受试制剂或参比制剂的主要药动学参数 Cmax、 AUC0-t和 AUC0-∞,作为生物等效性评价指标。若采用了部分重复或完全重复试验设计,还应计算上述药动学参数的参比制剂个体内标准差( SWR)、参比制剂个体内变异系数( CVW%)。本品生物等效性评价基于沙库巴曲和缬沙坦生物等效性评价指标的统计结果。对于适用 ABE 评价方法的生物等效性评价指标,受试制剂与参比制剂的几何均值比 90%CI 应在 80.00%-125.00%范围内。对于适用 RSABE 评价方法的生物等效性评价指标,其(𝑌𝑇 - 𝑌𝑅)2 - 𝜃𝑆𝑊𝑅 2 的单侧 95%置信区间上限应小于等于零;其受试制剂与参比制剂的几何均值比的点估计值应在80.00%-125.00%范围内。三、人体生物等效性研究豁免若同时满足以下条件,可豁免低规格制剂的人体生物等效性研究: ( 1) 申报的最高规格制剂符合生物等效性要求;( 2) 各规格制剂在不同 pH 介质中体外溶出曲线相似; ( 3)各规格制剂的处方比例相似。若申报的多个规格制剂中包含 50 mg 规格制剂,且 50mg 规格制剂与申报的高规格制剂的处方比例不相似,还需在空腹条件下展开 50 mg 规格受试制剂与参比制剂生物等效性研究10、维格列汀片生物等效性研究技术指导原则一、 概述维格列汀片( Vildagliptin Tablets)主要用于治疗 2 型糖尿病,是一种二肽基肽酶 IV( DPP-4)抑制剂,主要成分为维格列汀。维格列汀片生物等效性研究应符合本指导原则,还应参照《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》、《生物等效性研究的统计学指导原则》等相关指导原则。二、 人体生物等效性试验设计(一) 研究类型建议采用单次给药、两制剂、两周期、两序列交叉试验设计,进行空腹和餐后人体生物等效性研究。(二)受试人群健康受试者。(三)给药剂量采用申报的最高规格单片服用。(四)给药方法口服给药。(五)血样采集合理设计样品采集时间,使其包含吸收、分布及消除相。(六)检测物质血浆中的维格列汀。(七) 生物等效性评价建议采用平均生物等效性( average bioequivalence, ABE)方法, 以维格列汀的 Cmax、 AUC0-t、 AUC0-∞为评价指标, 生物等效性接受标准为受试制剂相比参比制剂的 Cmax、 AUC0-t和 AUC0-∞的几何均值比 90%CI 在 80.00%-125.00%范围内。(八) 其他考虑建议评估试验过程中发生低血糖的风险,若有相应的监测或预防措施,应进行详细记录。三、 人体生物等效性研究豁免不适用。11、碳酸镧咀嚼片生物等效性研究技术指导原则《碳酸镧咀嚼片生物等效性研究技术指导原则》.pdf
  • 吃米线也能验出毒品“阳性”,真相细思极恐了!
    导读 近日,四川省某县公安局民警在办理一起治安案件时,对5名违法嫌疑人进行尿检,发现有3名嫌疑人尿检结果呈阳性。得知结果后,3名嫌疑人大呼冤枉,称自己绝对没有吸毒。经过观察与核实,民警发现3名嫌疑人确实没有吸毒史与吸毒的症状。那么问题出在哪里呢? 汤里有“料” 细思极恐嫌疑人表示,3人上午相约去一家羊肉店吃过米线。随后,根据嫌疑人提供的线索,办案民警即刻联合市场监督管理局工作人员,对该羊肉店进行突击检查,在该店厨房弄堂里查获罂粟果若干。工作人员对该餐厅进行抽检,汤料检测结果呈阳性,含有罂粟成分。据店主交代,为了让羊肉汤味道更加鲜美,他向汤内放了罂粟。 非法添加 潜伏隐患罂粟壳在临床上具有止咳防泻的药物作用,是国家允许的中药成分,但是罂粟壳披着中药的外衣,藏身中药材集散地,打着卖药的旗号渗透到食品领域,是食品安全的一个巨大隐患。国家明文禁止在食品中添加罂粟壳。罂粟壳中的生物碱会使人嗜睡和性格改变,引起某种程度的惬意和欣快感,长期食用会造成人注意力、思维和记忆性能的衰退,精神失常,出现幻觉,严重时甚至会导致死亡。 罂粟壳中含有20 多种生物碱,其中以吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁等为主要成分。 我国自2008年陆续发布了五批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》,其中列出了罂粟壳,可能添加的食品品种:火锅底料及小吃类。 无忧应对 罂粟壳生物碱的监测方案罂粟壳检测方法参考全国首个针对火锅食品中罂粟碱等物质的食品安全地方标准《DB 31/2010-2012 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱法》,该标准明确了火锅中可能出现的罂粟碱、吗啡、那可丁等五种致瘾性生物碱的测定方法。 使用岛津液相色谱与三重四极杆联用系统,采用MRM模式,有效排除基质干扰,10min内即可快速确证火锅食品中是否添加罂粟壳。 检测仪器超高效液相色谱仪与三重四极杆质谱仪联用系统。 标准品色谱图 标准样品一级质谱图和产物离子质谱扫描图(部分举例)吗啡的一级质谱图(左图)和产物离子质谱扫描图(CE值为-40V)(右图)罂粟碱的一级质谱图(左图)和产物离子质谱扫描图(CE值为-30V)(右图) 方法检出限按照3倍信噪比作为检出限,五种目标分析物检出限范围在0.3~4.6 μg/kg之间,方法灵敏度优于上海市地方标准《DB 31/2010-2012 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱法》规定的限值。 小结对于罂粟壳等添加剂的检测来说,普通消费者是不便进行操作的。那么在它们流向消费者餐桌前,怎样帮助监管机构从源头严防死守?岛津三重四极杆液质联用仪采用多反应监测模式,能有效的排除基质干扰,具有高效的分离效率,可以准确检测火锅等食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的残留。作为食品安全检测的捍卫者,岛津公司时刻关注国内外食品安全热点问题,及时提供丰富、有效的解决方案。
  • 牛细小病毒(CPV)ELISA检测说明书
    牛细小病毒(CPV)ELISA检测说明书本试剂盒仅供研究使用。 96T使用目的 :本试剂盒用于测定牛血清,血浆及相关液体样本中细小病毒(CPV)表达。实验原理 :本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中牛细小病毒(CPV) 。用纯化的牛细小病毒(CPV)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中细小病毒(CPV)抗原相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的细小病毒(CPV)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值) ,与 CUTOFF 值相比较,从而判定标本中牛细小病毒(CPV)的存在与否。试剂盒组成 :1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1/瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂 B 液 6ml×1 瓶 12 密封袋 1 个标本 要求 :1.标本处理:血清、血浆标本可直接检测2.标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测,可将标本在-20℃保存一个月,但应避免反复冻融。3.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤 :1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照(标准品)50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同 3。8. 洗涤:操作同 5。9. 显色:每孔先加入显色剂 A 50μl,再加入显色剂 B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。结果判定 :试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00 阴性对照平均值≤0.15临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定:样品 OD 值 临界值(CUT OFF)者为细小病毒(CPV)阴性阳性判定:样品 OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为细小病毒(CPV)阳性注意事项1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物请避光保存。6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须注意安全。保存 条件及有效期1.试剂盒保存: ;2-8℃。2.有效期:6 个月
  • 吃橘子会致新冠病毒核酸检测呈阳性?记者实测
    据了解,之所以出现这些说法,是因为有人在家用橘子汁做抗原检测,结果显示“两道杠”。视频中,操作人员直接把橘子汁液挤在新冠抗原试剂检测盒上,随后T区和C区均出现紫红色的横线。这些内容,导致不少人产生恐慌,纷纷询问是真是假,甚至表示不敢吃橘子了。目前正是橘子、橙子等水果大量上市的季节,也有网友表示,最近家里常吃这些水果,自己和家人的核酸检测均无异常。网友在家用橘子汁做抗原检测,结果呈阳性(网络截图)为验证传言的真实性,11月27日晚,央广网记者随机找到一处核酸检测便民服务点,在食用了橘子约2分钟后,且在没有饮水及食用其他食物的情况下,参与了核酸采样。记者吃下橘子后,立刻参与了核酸采样。11月28日早上7点,记者打开北京健康宝进行核酸自查,结果显示:阴性记者本人11月28日的健康码自查询结果吃橘子到底会不会影响抗原检测和核酸检测结果?橘子汁让抗原检测呈现阳性结果是为什么?带着这些问题,央广网记者采访了应急总医院检验科主任许慧。用橘子汁做抗原检测或者核酸检测,结果无意义许慧主任表示,样本检测是个“精细活”,需要进行全流程的质量控制,即在采样前、采样中、采样后确保操作准确,才能确保结果的准确性。首先要明确抗原检测和核酸检测是不一样的。抗原检测病毒的衣壳上的蛋白质,使用的胶体金方法的快速测试卡;而核酸检测病毒衣壳内部的核酸,方法通常为实时荧光定量扩增检测(RT-PCR)。网友用橘子汁作试验检测的是病毒抗原。抗原检测或核酸检测要获得准确的检测结果,规范取样是最关键的一环。新冠病毒抗原试剂盒的适用样本为“人鼻黏膜上皮细胞”,将橘子汁作为样本滴入试剂盒,本身就不符合取样标准。因此,无论呈现出何种结果,都是无意义的。用橘子汁做抗原检测,为什么会出现假阳性?其实2021年就有德国研究人员做过类似的实验,不只是橙子的汁液,研究人员将可口可乐、零度可乐、芬达、红牛、伏特加、威士忌、白兰地、苏打水等多种饮料分别直接滴加在新冠抗原检测孔中,过一段时间,都会出现提示阳性的T线。但对这些饮料进行核酸检测,并没有检测到新冠病毒。“这是因为,抗原检测试剂盒只有在正确的使用方式下,检测结果才有效力。做抗原检测时,需要将拭子取样后放入含有样本处理液的采样管中,洗脱后滴入试剂板条。同样,研究人员把这些饮料与样本处理液混合后再滴加到样本孔中做检测,抗原检测并不会出现T区红线的结果。”秘密就在样本处理液中。新冠抗原检测试剂盒的原理简单来说,就是通过特异抗体捕获特定抗原,但抗原抗体的结合需要维持适当的PH值(酸碱度),样本处理液里含有缓冲体系,可以保证抗原抗体在合适的PH值下结合。”橙汁或者各类饮品直接加到试剂板条上,破坏了适宜的PH环境,造成抗原抗体的非特异性结果,这才产生了假阳性。吃橘子是否会影响抗原检测结果?多虑了据了解,检测过程中,确实会有一些干扰因素影响最终检测结果,出现假阳性等情况。但使用抗原检测试剂无需担心吃橘子这一问题,因为新冠抗原检测试剂盒一般使用取样位置相对较浅、更便于大众操作的鼻拭子作为标本。做抗原检测时,鼻拭子的采样部位位于鼻腔内,吃了哪些食物并不会对检测结果造成影响。专家提示,抗原检测时,应严格按照说明操作。要注意,取样部位为鼻腔黏膜上皮细胞。因此,最好在取样前先擤个鼻涕,清除鼻腔内的“多余”物质。吃橘子是否影响核酸检测结果?不必担心目前,大多数核酸检测点提取的样本都是口咽拭子,许慧主任介绍,核酸检测主要是通过测定致病微生物病毒的核酸来判定结果。提取核酸的过程中要经过洗脱、纯化。因此,其他物质对核酸检测结果的影响微乎其微。专家建议,检测前30分钟受检者最好不要喝水、饮酒或嚼口香糖,采样前2小时应避免进食,以防止咽拭刺激反射性呕吐。核酸检测结果与抗原检测结果不一致怎么办?2022年3月10日印发的《关于印发新冠病毒抗原检测应用方案(试行)的通知》第五部分“核酸检测的确认”中明确指出,核酸检测是新冠病毒感染的确诊依据。在进行核酸检测确认的过程中,如核酸检测阳性,不论抗原检测结果是阳性还是阴性,均按照新冠病毒感染者或新冠肺炎确诊患者采取相应措施;如核酸检测阴性但抗原检测阳性,则视同新冠病毒感染者采取集中隔离等措施,密切观察,连续进行核酸检测。因此,抗原检测可以作为判断是否感染病毒的一个补充手段,不建议作为日常筛查的主要方式。
  • 拉曼光谱解密细胞内结冰如何影响细胞活性
    冷冻保存技术是将细胞长期维持在稳定的状态,从而应用于各种疾病的诊断和治疗。据1970年代以来的研究显示,多种类型细胞冷冻保存后的存活率会随着冷冻速率的不同而不同。大多数种类细胞的存活率与冷冻速率呈倒U形关系:即当超过最佳冷却速率后,细胞存活率随冷冻速率的增加而迅速下降,当低于最佳冷却速率时,细胞存活率随冷冻速率的降低而迅速下降。在快速冷冻速率下,细胞内的冰晶形成(Intracellular ice formation,IIF)会对细胞造成损害,并随着冷冻速率的增加导致细胞活性丧失。然而,IIF的机制仍无定论,目前业内存在的主要有以下三个假设:(1)Mazur假设称细胞外冰晶可以穿过膜孔生长进而诱导细胞内冰晶形成;(2)Asahina则认为冷冻直接破坏细胞膜是导致IIF的原因;(3)Toner等人则提出表面催化形成晶核是造成IIF的原因。  传统低温光学显微镜技术是有限的,高速图像采集和双光子显微镜可以提高观察细胞冷冻的空间和时间分辨率,虽然可以在低温下观察细胞反应,却不能与每个细胞的活性相关联。显微拉曼光谱技术可对细胞进行无标记检测,并可用于细胞内水的热力学状态(即液态水与冰)等化学属性进行识别,因此可作为探究细胞冷冻反应的有力工具。此外,显微拉曼光谱的高空间分辨率和可区分细胞膜、线粒体等亚细胞结构的能力意味着该工具可用于进一步探究IIF及其成因,并通过拉曼光谱能够直接表征IIF对细胞活性的影响进而判别冷冻细胞后的活性。  明尼苏达大学研究团队在Biophysical Journal发表题为“CharacterizingIntracellular Ice Formation of Lymphoblasts Using Low-Temperature RamanSpectroscopy”的研究成果(图1)[1]。研究结果表明显微拉曼光谱技术可用于研究细胞在不同冷冻速率和冷冻液成分下的冷冻反应。通过拉曼光谱发现胞内冰晶形成并不一定会导致细胞死亡,但细胞内冰晶的数量及大小会影响细胞活性。另外研究还发现,细胞内冰晶形成靠近于细胞膜并靠近于细胞外冰晶,而通过增加细胞膜和细胞外冰晶间的距离可以减少IIF;实验使用细胞松弛素D破坏肌动蛋白细胞骨架以改变细胞膜的渗透性来增加胞内冰晶形成量,当存在胞内冰晶时,可以显著的观察到细胞内渗透梯度,这些观察结果揭示了细胞膜与胞外冰晶的相互作用是导致IIF的原因。图1 研究成果(图源:[1])  此项研究选用Jurkat细胞作为淋巴细胞的模型细胞,采用的共聚焦显微拉曼系统Alpha 300R配备:UHTS300光谱仪、600 l/mm光栅以及DV401 CCD检测器。激发光源波长为532 nm,100×物镜(NA=0.9),聚焦在被测物上的光功率为10mW,显微分辨率约为296 nm。将细胞冷冻至-50℃,并在成像前保持20分钟。每幅图像有60×60个像素,每个像素点采集的积分时间为0.2秒,因此,对整个细胞进行成像总共需要12分钟。分别在第20、80和140分钟时对相同细胞进行拉曼光谱成像采集,以排除来自激光照射带来的光损伤/光漂白的热量影响。  单细胞中细胞色素c的分布被作为冷冻状态下细胞活性的衡量标准,其拉曼成像结果与台盼蓝染色结果高度一致。细胞色素c的空间分布使用 Moran' s I量化,并被用作细胞活性的标记。Moran' s I是一种基于信号位置和强度的进行空间相关性度量的方法,其值为-1时表示信号完全分散,+1时表示信号完全相关,0时表示信号随机分布。细胞色素c在750、1127、1314和1585 cm-1处具有强烈的拉曼信号,本实验以1127 cm-1作为标记峰用于生成细胞色素c的拉曼成像,并通过吖啶橙/碘化丙啶(Acridine orange/Propidium iodide,AO/PI)染色验证解冻后细胞的活性。根据常见的细胞内、外物质的特征峰位置(表1,图2),整合每个像素的光谱来组合拉曼成像,表征冰晶的大小、冷冻保护剂的细胞内浓度以及外部冰与细胞膜的接近程度。表1 拉曼光谱的波数分布数据来源:[1]∣制表:生物探索编辑团队图2 不同物质的拉曼光谱(图源:[1])  注:1)海藻糖;2)葡聚糖;3)DMSO;4)=细胞色素c;5)冰;6)冷冻保存在10% DMSO中的Jurkat细胞。根据左边的特定信号渲染出右边图像,并以光学显微镜图像为参考。  结果发现:1  细胞色素c的拉曼光谱可表征细胞复温后活性  解冻后细胞复苏率与冷冻速率的之间的函数绘制曲线呈倒U形,可知“最佳”冷冻速率为1-3℃/min,当冷冻速率高于该曲线时认为是过快的,并会与IIF相关(图3A)。在冷冻细胞的不同焦平面上获得的拉曼成像显示,细胞中间(中心)的细胞色素c图像提供了最强的信号(图3B)。台盼蓝染色阴性细胞(活细胞)的细胞色素c局部拉曼信号强且最低Moran' s I值为0.65,而台盼蓝染色阳性细胞(死细胞)没有可区分的细胞色素c拉曼峰(图3C)。因此,可使用0.65的Moran' s I值作为区分活细胞和死细胞的阈值水平。图3 Jurkat细胞活性的拉曼检测(图源:[1])  注:(A)在10% DMSO中冷冻Jurkat细胞后的复苏率与冷冻速率的函数曲线图。(B)冷冻细胞在三个不同深度焦平面上细胞色素c的拉曼成像。(C)通过拉曼光谱检测冷冻后Jurkat细胞的活性并使用台盼蓝进行验证,对应的细胞色素c的拉曼特征、拉曼成像和计算的Moran' s I值。2  拉曼光谱可分析细胞内冰晶的形成  拉曼光谱测定了细胞在1、10和50℃/min冷冻速率下的细胞活性:以1℃/min冷冻保存后的细胞中有80%是活的,以10℃/min冷冻保存后的有60%的细胞是活的,而以50℃/min冷冻保存后的只有20%的细胞是活的(图4A)。每个细胞内冰的相对量可以根据冰的横截面积与细胞的横截面积的比值(Aic)来估计。Aic与不同冷冻速率相关性函数(图4B),Aic随着冷却速率的增加而增加。统计Aic与Moran' s I值的函数曲线图,结果表明活细胞中的冰晶比死细胞少,但存在群体上的差异(图4C)。图4 不同冷却速率下细胞内细胞色素C和冰晶的分布(图源:[1])3  基于拉曼图像可计算IIF的冰晶尺寸及位置  在不同冷冻速率下,大多数细胞仅存在小冰晶。图5 细胞内冰晶的拉曼成像(图源:[1])4  拉曼图像可表征冰晶、细胞膜和IIF的相互作用  分别将细胞以10℃/min的冷冻速率在10% DMSO或10% DMSO+10%葡聚糖中进行冷冻保存。通过拉曼成像分析IIF和Aic,细胞通常存在于相邻冰晶之间的未冷冻溶液中(图6A)。实验观察指定了两个不同的区域:1)细胞外冰晶靠近细胞膜的区域;2)相邻冰晶之间的区域,其中细胞膜远离细胞外冰晶(图6B)。通过测量细胞和细胞外冰晶之间的未冷冻溶液的厚度来表示细胞膜与细胞外冰晶的接近度(图6C)。图6 在10% DMSO或10% DMSO+10%葡聚糖中冰和Aic的拉曼图像(图源:[1])5  拉曼验证破坏细胞骨架增加了细胞内冰晶的形成量  质膜不是孤立地起作用,而是与细胞中的其他结构相互作用,特别是细胞骨架。为了确定破坏膜结构对IIF的影响,将Jurkat细胞放置于50以及250μM细胞松弛素D(Cytochalasin D,CD)中培养30分钟,然后在10% DMSO中以10℃/分钟的速率进行冷冻。对于存在CD的实验,在10个细胞中有2个中观察到大块冰晶(图7A)。约83%的细胞靠近细胞膜存在比例很高的细胞外冰晶,其中带有大块冰晶的细胞确认死亡,而带有小冰晶的细胞部分死亡部分存活。细胞内冰晶与细胞膜的空间定位确证在细胞外冰晶附近(图7B)。在所有实验条件下,IIF的细胞比例相同(100%),但结果显示Aic会随着CD浓度的增加而显著增加(图7C)。图7 细胞松弛素破坏细胞骨架对IF的影响(图源:[1])此项研究证实了拉曼光谱技术可用于研究细胞在不同冷冻速率、不同冷冻保护剂下的冷冻反应。此外研究还表明了IIF靠近于细胞膜,特别是与细胞外冰晶相邻的位置。随着靠近细胞膜且与胞外冰晶相邻的比例增加,IIF比例也会增加,并且随着细胞膜和胞外冰晶之间的距离减小,IIF比例也会随之增加,这些结果表明细胞膜和细胞外冰晶之间的相互作用是造成IIF的原因。该研究还进一步了解了冷冻保护剂的潜在作用机制,但是,研究中无法通过拉曼技术将细胞骨架与细胞内其他蛋白质成分区分开来,因此也无法明确IIF是否会损害细胞骨架。
  • 科华生物内标定量法丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒正式获批!
    2023年12月22日,科华生物自主最新研制的“丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒(PCR-荧光探针法)”正式获得国家药监局批准上市,注册证编号:国械注准20233401994。你我身边的沉默者—丙型肝炎病毒绝大多数HCV感染者没有临床症状,甚至不知不觉中进展为肝硬化、肝细胞癌。据世界卫生组织估计,2015年全球有7100万慢性HCV感染者[1]。在我国一般人群HCV的感染率约为0.43%,我国约有1000万例慢性HCV感染者[2]。根据国家卫生健康委和国家疾病预防控制中心报告,从2002年开始,我国每年报告的HCV感染者数量逐年上升,至2012年及其后基本保持稳定,维持在每年20~22万例;从2002年至今,报告的总数不到300万例,也就是说仍有70%以上的HCV感染者并没有被发现。数据来源:中国疾病预防控制局全国法定传染病疫情概况2021年,我国九部委印发《消除丙肝公共卫生危害行动方案(2021-2030年)》,要求加大检测力度,提高检测发现率,实施抗体阳性者核酸检测全覆盖策略,不断降低丙肝流行率。医疗机构是目前我国发现HCV感染者和患者的主要场所。目前医疗机构所进行的胃肠镜等侵入性检查、手术以前以及在住院患者中全面开展包括抗-HCV在内的感染4项筛查(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和梅毒抗体),促进了丙型肝炎患者的发现。但是对检出抗-HCV阳性者,后续的丙型肝炎确诊和治疗的咨询和转诊严重不足,丧失了治疗机会。《中国丙型病毒性肝炎院内筛查管理流程》文件的制定可以加强医疗机构对检出抗-HCV阳性就诊者的咨询和转诊,促进慢性丙型肝炎患者的诊断和抗病毒治疗。丙型肝炎筛查、会诊和转诊流程图《丙型肝炎防治指南(2022年版)》建议在我国进行全员成年人抗体筛查,抗体阳性者全覆盖进行核酸检测。HCV RNA阳性患者,均应接受抗病毒治疗,并且在开始抗病毒治疗前、治疗4周、治疗结束时、结束后12周均应检测HCV RNA。抗病毒治疗终点为治疗结束后12周,采用敏感检测方法(检测下限≤15IU/mL)检测不到血清或血浆中的HCV RNA。高敏丙肝核酸检测整体智能解决方案丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒(PCR-荧光探针法)全自动核酸提取仪GeneRotex96全自动核酸工作站PANA9600S全自动医用PCR分析系统Gentier 96E参考文献:[1]World Health Organization. Guidelines for the care and treatment of persons diagnosed with chronic hepatitis C virus infection[EB/OL]. Geneva:World Health Organization, 2018. https://www.who.int/hepatitis/publications/hepatitis-c-guidelines-2018/en/.[2]中华医学会肝病学分会, 中华医学会感染病学分会. 丙型肝炎防治指南(2019版)[J]. 临床肝胆病杂志, 2019, 35(12): 2670-2686. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.12.008.[3]World Health Organization. Global health sector strategy on viral hepatitis 2016-2021[EB/OL]. Geneva: World HealthOrganization, 2016. https://www.who.int/hepatitis/strategy2016-2021/ghss-hep/en/.
  • 文献解读丨生物活性聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折
    研究背景 目前全球骨缺损手术每年约为2000万例,为保持原有骨骼的结构与功能的完整,骨修复就必须依赖于移植材料,因而临床治疗中对于具有支撑作用的骨植入材料需求量巨大。植入材料的特性对于骨修复具有重要影响,是再生医学研究中的关键问题,也是临床骨修复的核心要点。聚甲基丙烯酸甲酯 (PMMA) 骨水泥是临床上出现很早、使用非常广泛的骨水泥制品,其安全性和临床效果已经得到普遍认可。但是过高的弹性模量、相对较低的生物活性都限制了它在临床使用上的进一步应用和发展。骨组织的修复和再生是一个动态过程,始于骨祖细的增殖和迁移,最终分化为成熟骨细胞。虽然骨组织具有较强的再生能力,但是当大段骨组织损伤造成大范围骨缺损时,为保持原有骨骼的结构和功能,骨的修复就必须依赖于移植材料。植入材料的特性对于骨修复具有重要影响,该过程的影响成为再生医学研究中的关键问题,也是临床骨修复的核心要点。骨植入材料主要有自体骨、异体骨(同种异体骨、异种骨)和合成材料等。自体骨一直被认为是骨移植材料的金标准,但来源有限,取骨后容易出现穿孔、伤口感染、脓肿、出血等相关并发症,植入困难、创伤大等,也使其在临床上的应用受到限制。随着组织工程技术的不断发展,人工骨不仅可以实现大批量生产,而且往往具有新的研究不断赋予的生物相容性、成骨诱导性等特点,使得人工骨普遍应用于临床骨修复以及作为骨外科填充材料。 鉴于上述缺点,材料和医学科学家尝试了多种PMMA骨水泥改性策略,通过改变单体、添加生物活性材料或有机材料等策略来优化PMMA骨水泥的生物机械性能和生物学活性。 方法与结果 本研究以PMMA骨水泥作为支持材料,在其中添加具有生物活性的矿化胶原(MC)材料,通过基础实验研究复合骨水泥的材料学表征以及体内外活性,通过将该材料应用于临床,探究临床的实用性以及价值。采用兔骨质疏松模型对复合骨水泥材料MC-PMMA在体内的生物相容性及成骨性能进行评价。 采用岛津InspeXio SMX-225 CT FPD HR对骨水泥进行扫描重建,统计骨水泥的孔隙率。如图1所示,PMMA骨水泥的孔隙率与MC-PMMA骨水泥的孔隙率几乎相同(5.61±0.16%比7.22±0.53%)。与PMMA骨水泥相比,MC-PMMA具有较低的CT值(9.36±0.13对5.46±0.22)。图1 岛津micro-CT扫描材料结果 体内实验中,更重要的评价环节为影像学评价。在4周,8周,12周时处死兔子,选择有材料的椎体,在Micro-CT定位下确定材料的位置,并进行硬组织切片和染色。采用岛津InspeXio SMX-225 CT FPD HR扫描样品,扫描后经三维等值画图软件重建并进行成骨体积分析测定。通过X线透视及CT扫描影像评估样品植入前后的形状、骨密度,并通过成骨体积的测量进行定量分析。 术后各组在各个时间点的典型扫描三维重建结果如图2A所示,骨水泥材料牢固地结合到骨组织上,没有明显的间隙。通过显微CT进行的三维渲染显示了缺损和骨水泥的位置。在图2A中,骨水泥具有以红色和黄色显示的高CT值,而骨是黑色的。随着骨水泥被骨替代,颜色变为绿色,蓝色,最后变为黑色,表明CT值逐渐降低。在4周时,两组标本的骨水泥CT值和体积相似。在8周时,MC-PMMA组的CT值下降,但在PMMA组中几乎相同。在12周时,MC-PMMA组的CT值与以前相似的区域更多。然而,PMMA组的CT值保持不变。骨水泥的界面外观和CT值的差异表明MC-PMMA组中的材料吸收和骨再生比PMMA组更多。在手术后4,8和12周,MC-PMMA骨水泥组的椎体重建三维图像的定量显示比PMMA骨水泥组有更多的骨形成(图2B-E)。手术后4周,MC-PMMA组的骨量百分比和骨小梁厚度较高。然而,骨小梁厚度或骨小梁分离没有差异。手术后8周和12周,与PMMA组相比,MC-PMMA组的骨小梁厚度显着增加,骨量百分比增加,骨小梁数较高,骨小梁分离度较低,表明随着时间的推移MC-PMMA组的骨生长增加。图2 micro-CT三维重建结果和计算结果 总结与讨论 本研究通过向广泛用于PVP和BKP的PMMA骨水泥品牌的粉末中添加矿化胶原来开发基于生物活性PMMA的骨水泥。与PMMA骨水泥相比,MC-PMMA骨水泥的压缩模量显着降低,而处理时间大致相同。MC-PMMA骨水泥促进细胞增殖和分化,并加速骨质疏松兔模型中椎骨的修复和小规模临床试验中患者的OVCF。我们的研究结果表明,MC-PMMA骨水泥有望用于临床转化。 微焦点X射线CT装置inspeXio SMX-225CT FPD HR Plus高分辨率,图像清晰擅长复合材料的拍摄操作简单、试验速度快 文献题目《Bioactive poly (methyl methacrylate) bone cement for the treatment of osteoporotic vertebral compression fractures》 使用仪器岛津inspeXio SMX-225CT FPD HR Plus 第一作者诸进晋,杨淑慧 原文链接:https://doi.org/10.7150/thno.44276
  • 四联培养器——生物制品无菌检查解决方案
    生物制品如何做阳性对照?方法一:使用三联培养器 + 单联培养器方法二:使用两套二联培养器结论:两种方法都无法保证实验的平行性,且工作量翻倍,设备成本也翻倍。推荐方法:泰林生物最新研制出的四联培养器,国内首创,有效解决生物制品无菌检查时如何做阳性对照的问题。1. 适用于现有集菌仪2. 有效解决三个杯体用于培养和一个杯体用于阳性对照的所有需求3. 样品平行性更强,阳性对照更有代表性4. 无需第二套无菌检查系统,更节约成本
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