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沙氏葡萄糖琼脂培养基

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  • 微生物培养基使用中常出现的问题及解答!
    微生物培养基使用中常出现的问题及解答!百欧博伟生物:工作中发现,有部分检验员对培养基的使用存在障碍,借此机会和大家分享讨论一下大家常见的对培养基存在的一些疑问。一、培养基煮沸溶解后再高压灭菌,还是直接高压灭菌存在疑惑。拿麦康凯琼脂举个例子,溶解后灭菌,平板上没有不溶的结晶紫,没有紫色的斑点;相对比未溶解灭菌的,平板上有结晶紫和紫色的斑点。所以正确的做法是先煮沸溶解后再高压灭菌。二、培养基PH值为什么不在标准范围内?其实出现这个情况的问题有很多种,大致我分为这么6大点:1、质量不好(生产厂家出厂时pH就不正确);2、灭菌问题(高压灭菌温度过高或灭菌时间过长,导致葡萄糖类焦化从而pH降低);3、保存时间(超过保质期或结块);4、水质出现问题(可以用去离子水、纯化水、蒸馏水不能用矿泉水、自来水);5、保存温度(保存温度过高);6、光线直射总结本人认为以上6点都可能导致培养基pH出现偏差,如果出现此类问题,建议逐一排查,直到问题解决。三、培养基高压灭菌时为什么会焦化?不少检验人员在实验时,发现经过灭菌的培养基有焦化现象,我认为引起此现象的主要原因有以下4点:1、可能你灭菌的时候温度超过了121℃(正常115-116℃20min即可);2、灭菌时间过长;3、培养基在容器中装的太多(不要超过容器容量的80%);4、灭完菌的培养基在高温环境中保存的时间过长,这些都会导致培养基发生焦化现象。四、培养基PH怎么测定?通常分两种情况:1、对于无需高压灭菌的培养基,先煮沸溶解后再冷却至25℃时,测定其pH值(固体培养基至少测2个点,取其平均值);2、对于需要高压灭菌的培养基,高压灭菌后,冷却至25℃测其pH(固体培养基至少测2个点,取其平均值)。五、含琼脂培养基在倒平板为什么有时候不凝固或凝固不好?针对以上情况,我做了分析:1、针对需要高压灭菌的培养基,倒平板时候要先摇匀(因为琼脂分子量比较大,在冷却过程中容易沉淀到底部,导致琼脂分散不均匀);2、针对无需高压灭菌的培养基,一次煮沸溶解后不能直接倒平板,应重复煮沸溶解3-5次(因为一次不能确保琼脂完全溶解)。六、为什么同一品牌的不同批号,粉末颜色有差别?分析可能有3个原因:1、此培养基成分含有染料或指示剂;2、不同批次粉末培养基含水量不同,一般要求≤6%,含水量越高,颜色越深;3、加工时球磨时间越长颜色越深。北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!
  • 默克培养基促销,库存有限,售完即止!
    货号 品名 清仓价格 应用 1.02239.0500 Peptone from casein 236 酪蛋白胨,基础原料 1.07212.0500 Peptone from soya bean 236 大豆蛋白胨,基础原料 1.10493.0500 Brain heart broth 273 脑心浸液,苛养菌培养 1.07228.5000 Peptone water 1050 通用增菌液 1.00466.0500 DRBC 琼脂 945 玫瑰红钠培养基添加绿霉素,酵母霉菌计数 1.05978.0500 OGYZ AGAR 336 奶制品中的酵母霉菌 1.05448.0500 WORT AGAR 546 真菌,酵母菌 1.10866.0500 WL nutrient agar 525 啤酒当中的酵母、细菌 1.01347.0500 EMB agar 578 伊红美兰琼脂,肠道菌、大肠杆菌 1.01406.5000 VRB-AGAR 3675 肠道菌,大肠杆菌 1.04030.0500 VRB Agar 525 肠道菌,大肠杆菌 1.04044.0500 ENDO agar 483 肠道菌,大肠杆菌 1.07237.0500 Brilliant green agar 315 肠道菌 1.05470.0500 SIM medium 945 肠道菌 1.07500.0002 RAMBACH-AGAR 578 肠道菌,大肠杆菌显色培养 1.10765.0500 EC broth for microbiology 420 肠道菌,大肠杆菌 1.14582.0500 m-EC-broth with Novobioci 1050 新生霉素添加剂,肠道菌 1.10426.0500 COLIFORM Agar 1575 水质肠道菌 1.05222.0500 Kanamycin esculin 525 肠球菌 1.10859.0500 Tryptone water 420 生化鉴定试验,吲哚反应 1.05405.0500 VOGEL JOHNSON agar 840 金黄色葡萄球菌 1.07004.0500 Oxford listeria 945 奶制品单增李斯特菌 1.10398.0500 FRASER Listeria Selective 315 李斯特菌 1.10399.0001 FRASER Listeria Selective 420 李斯特菌 1.10549.0500 LISTERIA ENRICHMENT BROTH 383 李斯特增菌液 1.10661.0500 MRS-broth lactobacillus 378 乳酸菌检查 1.10988.0500 Pseudomonas agar 1155 水质假单胞菌 1.10989.0500 Pseudomonas agar 1155 水质假单胞菌 1.00888.0001 Fluorocukt TSC Agar 483 梭菌显色培养基 1.11972.0500 TSC agar 473 梭菌,厌氧菌 1.10259.0500 DCA AGAR 630 梭菌,厌氧菌 1.13825.0500 Brain heart agar 735 苛养菌生长 1.00445.0500 Universal Beer Agar 630 啤酒腐败菌 1.07667.0500 SS agar 840 沙门氏,志贺氏菌
  • 运动发酵单胞菌运动亚种的特点与优势及培养方法!
    运动发酵单胞菌运动亚种的特点与优势及培养方法! 运动发酵单胞菌运动亚种是Zymomonas属的微生物,原产地为美国。G-,细胞具有圆端的短杆状,丛生鞭毛运动,单个或成对排列。主要用途为研究,具体用途为用于细菌发酵酒精的研究。 一、菌种简介平台编号:Bio-66722提供形式:冻干物拉丁属名:Zymomonas Mobilis Subsp. Mobilis中文名称:运动发酵单胞菌运动亚种属名:Zymomonas种名加词:mobilis subsp. mobilis其它中心编号:ATCC 31821来源历史:←北京工商大学化工学院(31821)收藏时间:2008.10.31原始编号:WAY资源归类编码:15131139101模式菌株:非模式菌株主要用途:研究具体用途:用于细菌发酵酒精的研究特征特性:G-,细胞具有圆端的短杆状,丛生鞭毛运动,单个或成对排列。利用葡萄糖、蔗糖或果糖产乙醇和CO2,利用山梨醇,不发酵麦芽糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖。不还原硝酸盐,不液化明胶,接触酶阳性。 生物危害程度:四类致病对象:无培养基:葡萄糖 100.0g,酵母膏 5.0g,(NH4)2SO4 1.0g,KH2PO4 1.0g,MgSO4?7H2O 0.5g,琼脂 20.0g,蒸馏水 1.0L, pH7.0。培养温度:30℃资源保藏类型:培养物保存方法:真空冷冻干燥法实物状态:有实物共享方式:公益性共享;资源纯交易性共享;合作研究共享;资源交换性共享用途:研究;用于细菌发酵酒精的研究注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用 2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压 3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境 4、复活迅速,可在短期内成为优势种群 5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境 6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!
  • 变异链球菌的菌落特征与使用范围及培养方法!
    变异链球菌的菌落特征与使用范围及培养方法! 变异链球菌属于甲型溶血性链球菌类,菌体较小,呈圆形或卵圆形,常成双或以短链状排列,革兰染色呈阳性。它在胰蛋白胨培养基中和含有95%氮气及5%二氧化碳混合气体的环境下生长良好。 一、菌种简介平台编号:Bio-53150规格:冻干物拉丁属名:Streptococcus Mutans菌株名称:变异链球菌其他编号:ATCC700610培养基编号:116或114,5% CO2 or 厌氧培养温度:37培养时间:48 小时用途:对红霉素、利福平、利福霉素AMP、壮观霉素、链霉素敏感。血清型C。注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)保藏条件:斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。甘油请置于-80°C。 二、培养基TSA+5%脱纤维蛋白羊血(血琼脂平板) 三、菌落特征变异链球菌在血平板培养基上呈旺溶血,菌落较小,呈灰白色、圆形,表面突起,菌落质地较硬,有嵌入培养基内生长的趋势。 四、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过 2 支平板);2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根需要转接培养;如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;二次接种量要多,固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显,液体培养要静止培养;3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为2-25 年;6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系;7)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到菌钟后 2 个月内联系,逾期不予受理;8)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛;9)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作;10)甘油管使用:使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!
  • 动物细胞培养基如何选择?这里有答案
    1、细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史,细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。1.1 平衡盐溶液(balanced salt solution,BSS)BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank' s与Hank' s的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank' s常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份,参与细胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液,前者缓冲能力较弱,适合于密闭培养;后者缓冲能力较强,适合于5% CO2的培养条件。表1-1 几种常用的BSS配方(g/L)名称PBS(无Ca2+、Mg2+)PBS(含Ca2+、Mg2+)Earle’sHank’sD-Hank’sKrebs-RingerNaCl8.008.006.808.008.007.00KCl0.200.200.400.400.400.34CaCl2--0.200.14-MgCl2• 6H2O-0.10---MgSO4• 7H2O--0.20.2-Na2HPO41.151.15-0.0480.0480.10Na2HPO4• 2H2O--0.14--0.207KH2PO40.200.20-0.060.06NaHCO3--2.200.350.35-葡萄糖--1.001.00-1.80酚红--0.010.010.01-目前用于细胞培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。此外,血清含一些对细胞产生毒性的物质,如多胺氧化酶,能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长,甚至造成细胞死亡。目前,血清多作为一种添加成分与合成培养基混合使用,使用浓度一般为5~20 %,最常用是10 %。1.2 合成细胞培养基合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。最早开发的基础培养基(minimal essential medium, MEM),其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上,DMEM、IMDM、HAM F12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍,其特性及应用的范围见下表:哺乳动物细胞培养基:培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后,可广泛用于多种细胞培养,并用于病毒学、疫苗生产等MEM细胞培养基MEM(Minimal Essential Medium)培养基有含Earle' s平衡盐的类型,也有含Hanks' 平衡盐的类型;有高压灭菌型的,也有过滤除菌型的;还有含非必需氨基酸的类型。是最基本、适用范围最广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM(Dulbecco’s modified Minimal Essential Medium)是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM(Iscove’s modified DMEM )是由Iscove在DMEM基础上改良,增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交瘤细胞培养,以及无血清培养的基础细胞培养基。GMEM细胞培养基Glasgow’s MEM培养基是MEM的改进型,用于支持BHK-21细胞的生长。原配方以BME为基础, 加入10%磷酸胰蛋白(月示)肉汤,氨基酸和维生素浓度加倍。RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计,含有BSS、21种氨基酸、维生素等,广泛适于多种正常细胞和肿瘤细胞的培养,也用做悬浮细胞培养。HamF12细胞培养基含微量元素,可在血清含量低时用,适用于克隆化培养。F12适用于CHO细胞,也是无血清细胞培养基中常用的基础细胞培养基。DMEM/F12细胞培养基将DMEM和F12按照1:1比例混合,混合后营养成份丰富,血清使用量也减少,常作为开发无血清细胞培养基时的基础细胞培养基。McCoy' s5AMcCoy' s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计,可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)原代细胞的生长,除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。William' s Medium E适用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。神经元基础培养基可为神经元生长提供基础营养物质。昆虫细胞培养基:培养基名称特性及应用范围Grace' s昆虫培养基Grace昆虫培养基(Grace' s Insect Medium)最初设计为支持澳大利亚白星橙天蚕蛾 (Antherea eucalypti) 细胞 的生长,是对Wyatt培养基的改良,以更接近 Antherea 血淋巴。Grace用这种培养基建立了第一个连续细胞系。适当补充添加剂后,该基本培养基已用于培养各种昆虫细胞,包括多种鳞翅类以及一些双翅类昆虫。Grace昆虫细胞培养基主要作为 培养基基础,用于培养Sf9 和Sf21细胞系,也用于其它鳞翅类昆虫细胞系的生长和维持。Grace' s培养基(Grace’s Insect Cell Culture Medium) 是无血清培养基,使用时需要补充血清,从而为细胞提供必要的营养因子。添加5 -20%胎牛血清后,Grace昆虫细胞培养基可以用于培养多种昆虫细胞。IPL-41 昆虫培养基 IPL-41昆虫培养基(IPL-41 Insect Medium)旨在用于大规模扩增草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞系,也常用于通过杆状病毒表达系统(BEVS)进行蛋白表达。 IPL-41培养基是对原始IPL配方的改良,由美国农业部昆虫病理实验室Weiss等人开发,用于大规模扩增草地贪夜蛾衍生细胞系。Weiss向基础培养基中加入了胎牛血清和TPB培养基(Tryptose Phosphate Broth),成功地实现了IPL-21 AE (III)细胞系的大规模连续培养。该培养基主要用于培养和维护鳞翅类衍生细胞系和扩增这些细胞系的病毒。IPL-41培养基基础也以用于无血清夜蛾细胞的杆状病毒重组蛋白表达。Shield' s & Sang Insect向Sheilds-Sang M3昆虫培养基中添加10%胎牛血清后广泛用于培养各种果蝇细胞系。Sheilds-Sang M3昆虫培养基(Sheilds and Sang M3 Insect medium) 基于D22培养基。该培养基支持黑腹果蝇衍生细胞的生长。Sheilds和Sang将原配方中的氯化物除去,用谷氨酸盐提供钠和钾离子,并用游离氨基酸替代乳白蛋白水解物。Bis-Tris作为缓冲剂放置pH变动。Schneider' s 果蝇培养基 很多昆虫组织培养基的配方是模拟特定昆虫体液的主要物理化学性质。针对相同物种的不同培养基成分的相似度可能比针对不同物种的培养基之间更低。有多种培养基用于果蝇细胞和组织的体外培养。应用最多的是Schneider 培养基、D-22 培养基。果蝇细胞用于研究各种生物化学过程,包括遗传学、内分泌学、生理学和细胞生物学等方面,以及重组蛋白的表达。加入5-20% 胎牛血清后Schneider培养基能够支持黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)原代细胞和建立的细胞系的快速生长。该培养基用于培养和维护果蝇胚胎衍生的细胞系以及其它双翅目昆虫细胞培养物细胞培养基常用几种重要的添加成分及使用过程中应注意的问题酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。一般情况下,可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值,但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同,不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值,建议使用pH计进行测定。酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响,也可通过纯化技术去除,但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统,此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量,是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系(株)不同,同一株细胞适应环境也可能不同(细胞耐受性不同等),且存在的地域性水质差异等,在实际生产过程中也可稍作改动,但使用者需做相应的检测(理化及细胞生产试验等)。HEPES是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 ~7.4范围内具有较好的缓冲能力,在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34 g /L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10~25 mmol/L。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是在没有葡萄糖的条件下,细胞也可以代谢丙酮酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4 ℃下放置1周可分解50 %,使用中最好单独配制,置-20 ℃冰箱中保存,使用前加入细胞培养液中。赖氨酸(L-lysine):分子量大于70,000的多聚赖氨酸可以用于促进细胞贴壁生长,也可以用于组织学(Histology)分析时的粘片剂。Poly-L-lysine和Poly-D-lysine都可以用于促进细胞的贴壁生长。Poly-L-lysine可以被某些细胞所消化并吸收,摄入过多的Poly-L-lysine会产生一定的细胞毒性。如果遇到Poly-L-lysine有细胞毒性的情况,可以考虑选用Poly-D-lysine,因为右旋的聚赖氨酸是不会被生物吸收利用的,所以毒性更低。远慕生物致力于生物技术和生命科学等行业领域,专注于植物生物学技术研究,以满足全球不断增长的食品,能源、医药日益增长的需求和发展。目前远慕生物制造和提供的产品主要有动物细胞培养产品(包括细胞培养基、FBS、缓冲溶液、抗菌剂和其他试剂)和植物生物学产品(包括植物组织培养基、凝胶系列产品、植物生长调节剂、抗生素&抗菌剂、生化试剂以及植物组培容器和耗材)。
  • 岛津细胞上清液质谱分析平台,助力国产培养基研发与质控
    细胞培养基是生物制药的重要原料,影响生物药的产量和质量,更是规模化生产成本控制的重要环节。 长期以来,国内无血清培养基主要依赖进口,易受国际形势和贸易政策的影响,尤其是2020年以来新冠疫情爆发,国内各单位和企业都在加速推进疫苗和生物药生产的进度,因此对培养基的需求也日益增大,为了保证培养基安全和持续供应,国产培养基迅速发展。 但要与占主导地位的进口培养基竞争,需要优越的产品性能和良好的批次间质量稳定性作为保证。因此,对细胞培养基中糖类、氨基酸、维生素、核苷酸、脂类、代谢物等有机组分,以及钠、镁、钾、钙等无机元素组分进行监测和质控至关重要。 但是目前常用的细胞培养基和培养上清液的检测技术存在以下问题:▷ 检测指标少,仅分析葡萄糖、谷氨酰胺和乳酸等少数化合物;▷ 无同时分析方案,一种培养基需要多种仪器多种方法完成检测;▷ 耗时费力,一种培养基大致需3天的时间才能完成检测。 为解决上述问题,岛津开发了细胞培养上清液多组分同时分析技术,可快速检测细胞培养上清液中有机组分和无机元素的含量。 岛津自首次在业内推出细胞培养上清液分析技术以来,紧贴用户需求,深入研究,目前已形成以下解决方案: ★ 有机组分分析解决方案,包括细胞培养上清液LC-MS/MS分析方法包,可以分析糖类、氨基酸、维生素、核苷酸和细胞代谢物等125种有机组分;以及脂质介质LC-MS/MS分析方法包,可以分析196种脂类及其代谢物;★ 无机元素分析解决方案,可以同时分析多种无机元素。 以上解决方案,助您揭开细胞培养上清液组分及其在培养过程中变化趋势的神秘面纱。 该技术真的如此神奇吗?接下来为您细细道来。 1有机组分分析解决方案 大家已知晓细胞培养上清液分析方法包的大致轮廓,接下来让我们认识它丰富的内涵: ★ 岛津专利技术(申请号:201610888146.3,申请日:2016.10.11);★17分钟内,同时分析125种培养基组分及代谢物;★专属数据处理软件,快速绘制化合物含量变化 趋势图;★ 内置液相分离条件、质谱参数和前处理方法,即装即用,无需优化;★ 化合物种类全,包括糖类、核苷酸、氨基酸、有机酸、抗生素等,支持自行扩展。 该方法包不仅囊括了您所关注的各类组分,而且分析时间短、分析参数无需优化… … 就连前处理也是简单到没朋友呢!只需要简单蛋白沉淀和离心,即可上机分析。 下面给大家分享两个细胞培养上清液分析方法包的应用案例: 抗体药物生产用三种不同培养基组分含量差异对比 部分分析结果展示如下: 上图中纵坐标为目标物和内标物的峰面积比,横坐标代表三种不同的培养基。结果显示1#和2#培养基各组分的含量相近,而3#培养基各组分的含量与1#和2#培养基相差较大。 由此可见,该技术既可用于培养基组分检测,也可用于不同品牌和不同批次培养基组分含量差异检测,更好地进行培养基质量控制。 融合蛋白药物补料工艺优化 该药物生产过程中需要在第3、5和8天添加补料。每天取样后添加补料,含量变化在补料后一天体现。连续14天取样,采用本方法进行分析,并绘制含量变化趋势图。部分结果如下所示。 三个代表化合物的含量均在第4、6和9天有明显提升,与补料工艺相符。通过添加补料,葡萄糖含量在整个培养过程中较为稳定。胱氨酸含量需酌情增加。天冬氨酸含量可酌情减少。可见,该技术可以指导补料工艺优化,也可以用于培养基配方优化,助力药物表达量的提高,同时更好地进行培养基成本控制。 除上述“细胞培养上清液分析方法包”包含的糖类、氨基酸、核苷酸和维生素等物质外,脂类物质也是细胞培养基常见添加物质。 对细胞培养来说,脂类化合物是一类水不溶性的、与生物合成相关的脂肪酸及其衍生物的总称。这类化合物可作为能量储存,也可作为细胞膜的结构组分,还可以在运输和信号系统中起作用。 因此,越来越多的客户开始关注细胞培养上清液中脂类化合物的分析。《岛津脂质介质LC-MS/MS分析方法包》,包含花生四烯酸、DHA、EPA、乙酰醇胺和其他脂肪酸及它们的代谢物,共196种脂质介质化合物,可用于细胞培养上清液中脂类物质的分析,揭示其在培养过程中的含量变化趋势,从而助力培养工艺优化。 2无机组分分析解决方案 细胞培养液中除了含有糖类、氨基酸、维生素等有机营养成分,还含有微量和痕量的无机元素,它们对细胞培养又有什么作用呢? ▷钠、钾、镁、钙、铁等微量元素,可以维持细胞渗透压平衡;▷钴、铜、铅、镉等痕量元素,影响代谢途径、某些酶和信号分子的活性;▷ 额外补充的Zn2+、Cu2+、Mn2+等,还可以提高产率和改善蛋白质量。 可以说这些微量和痕量元素,对细胞培养可是少而精,万万不可缺少的呢! 岛津公司作为细胞培养上清液分析领域的领军者,率先推出了元素分析解决方案,开发了ICPMS-2030 测定细胞培养液中多种元素含量的分析方法。 应用该技术测定了市售某细胞培养液中钠、镁、钾、钙等多种元素含量。样品平行处理6份,测定结果的RSD3%,加标回收率在94%~109%之间。 本方法操作快速简便,样品前处理简单,可以满足细胞培养液中多元素含量的测定要求。 基于岛津LC-MS/MS和ICPMS开发的细胞培养上清液分析平台,可以用于细胞培养基组分含量测定,也可以用于培养基配方优化,还可以用于培养基批间质量稳定性监控。该技术可以实现多组分同时检测,方法简单、快速、易上手。助力国产培养基研发和质控,迈上新台阶,迎来新发展,创造新奇迹!
  • 【瑞士步琦】白酒酿造,酒醅中可溶性淀粉转化葡萄糖有多少?
    酒醅中可溶性淀粉转化葡萄糖有多少?酒曲生产需要一定的发酵周期,发酵过程不便调控,因此酒曲的化学成分分析对于制曲生产起着相当重要的作用。衡量大曲质量的优劣主要是根据大曲的水分、酸度、淀粉、发酵力、酯化力、糖化力等理化指标的大小,再辅以感官来进行综合评判。其中大曲糖化力是一个重要指标,是表征大曲将酒醅中可溶性淀粉转化为葡萄糖的能力。检测大曲糖化力的传统方法为斐林试剂法,存在耗时长、样品前处理过程繁琐等不足,因此建立一种快速、高效的大曲糖化力检测方法具有重要意义。本实验采用步琦的近红外光谱仪 NIRMaster 对大曲糖化力的快速检测。近红外光谱技术结合偏最小二乘法检测大曲糖化力 1仪器设备瑞士 Buchi 公司的 NIRMaster 傅里叶变换近红外光谱仪。光谱谱区范围为 4000~10000 cm-1,光谱分辨率为 8 cm-1,扫描次数为 48 次,测量序列个数为 3。 2样品酒厂酿酒周期的现用大曲 200 个 3实验方法3.1大曲糖化力化学方法测定大曲糖化力的化学测定法采用斐林试剂法。大曲中的糖化酶能将淀粉水解为还原糖,还原糖可以将斐林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子,反应终点由次甲基蓝指示。根据还原一定量的斐林试剂所需的还原糖量,可计算大曲样品的糖化酶活力,即 1g 大曲在 35 ℃、pH4.6 条件下,反应 1h,将可溶性淀粉分解为葡萄糖的能力。每个样品的检测均取 2 个平行样。3.2大曲样品的近红外光谱测量方法将大曲样品平铺于培氏培养皿样品杯底部,样品量约占样品杯 2/3,并用样品勺压紧,避免出现缝隙,然后将样品杯放置于测量池上进行测量。 4结果实验数据处理方法采集的光谱数据用 NIRCal 化学计量学分析软件处理和计算。▲ 大曲糖化力化学值与预测值的散点图上图可直观的看出模型的光谱预测值与原始值的相关性较好。其中,建模集的相关系数为 r 为 0.9613,验证集的相关系数 r 为0.9528;建模集标准偏差 SEC 与验证集标准偏差 SEP 的比值为 29.6099/29.7088=0.9967,模型稳定性较好,具有很好的预测能力。▲ 未知样品含量预测值与化学值的比较模型的验证结果可以看出,大曲糖化力近红外模型预测值的平均相对误差为 5.27 %,说明该近红外模型有较好的预测能力。为考察两种方法检测结果之间的差异性,采用 SPSS 软件对 50 组大曲样品进行差异显著性分析。结果见下表。从分析结果可以看出,在 0.05 水平上,两种方法差值的显著性结果为 0.830,大于 0.05,说明两种方法的检测结果的差异性并不显著,均可以反映大曲糖化酶活力大小,该模型可以用于大曲糖化力的预测。 5讨论本试验采用近红外光谱技术结合偏最小二乘法建立了预测大曲糖化力的定量模型。通过对模型的预测结果与传统方法检测结果的对比分析可以看出,该模型的准确度可以满足实际生产中大曲糖化力的预测。近红外光谱分析具有以下特点:操作简单分析速度较快,适合大批量重复测试测试过程中无需使用化学试剂、无污染样品可以重复使用可用于生产线等在线检测6参考文献王军凯,王卫东,蒋明,韩瑶,等. 近红外光谱技术结合偏最小二乘法检测大曲糖化力[J].酿酒,2018(3):116-118.
  • 泰林培养基自动分装系统震撼上市!
    中国首台智能互联培养基自动分装系统震撼上市,泰林HTY培养基自动分装系统是标准化大批量制备微生物检测平板的新一代智能化专业设备。该产品使用全新智能控制系统,操作更人性化,控制更精准。仪器启动后无需管理,自动进行培养基的精准分装及平皿堆叠,可大幅度减少操作人员工作量。除标准模式外,该仪器还可自定义操作细节,设置简单,定量精确,污染风险低,是微生物检测的最佳选择。 减少制备培养基成本HTY培养基分装系统内置了"琼脂铺展功能",它能保证培养基分配均匀,甚至恰好铺展一个琼脂面。它能使在平皿中琼脂的加量水平最小化,因此能减少培养基的成本。独特的云端控制功能,远程监控HTY培养基自动分装系统可通过互联网云服务平台,与电脑、手机等直接连接,实现云端控制,进行远程监控,对制备程序监测和记录。 产品特点:+ 超大彩色触摸屏,人性化UI界面设计,操作简单直观+ 内置多种分装程序,并支持自定义参数的设置和储存+ 高精度蠕动泵,微流控制,定量精准,分装快速+ 配备多种培养皿支架,适用多种规格培养皿需要+ 独特设计培养皿支架拆卸方式,更换清洁方便+ 预置自动化混合功能,培养基表面更平整,分布更均匀+ 超静音设计,运行平稳、可靠性高+ 内置紫外灯,分装区域独立消毒,污染风险低+ 全程电子记录,实时打印,记录管理更规范+ 表面光滑平整,无清洁死角,使用维护更方便+ 自主设定培养皿数量,智能计数,启动后无需管理+ 多重自动保护,异常现象实时报警,无需人员值守+ 云端控制,可和手机、电脑联网对接,远程监控产品参数: www.tailingood.com 0571-86589008
  • 我国科学家实现二氧化碳到葡萄糖和油脂的人工合成
    此前,我国科学家在国际上首次实现了二氧化碳到淀粉的从头合成。那么,二氧化碳除了可以“变”淀粉,还能“变”其他东西吗? 答案是肯定的! 4月28日,《自然催化》以封面文章的形式发表了一项最新研究成果。经过一年半的努力,我国科研人员通过电催化结合生物合成的方式,将二氧化碳高效还原合成高浓度乙酸,并进一步利用微生物合成葡萄糖和脂肪酸(油脂)。 这一成果由电子科技大学夏川课题组、中国科学院深圳先进技术研究院于涛课题组与中国科学技术大学曾杰课题组共同完成。 先把二氧化碳变成“食醋” 或许有人会问,人造的葡萄糖和油脂可以直接吃吗?好吃吗? 对此,曾杰回应:“经过后续纯化处理,可以食用。” 那么,二氧化碳究竟是如何变成葡萄糖和油脂的? “首先,我们需要把二氧化碳转化为可供微生物利用的原料,方便微生物发酵。”曾杰说,在常温常压条件下,清洁、高效的电催化技术是实现这个过程的理想选择,他们就此已经发展了成熟的电催化剂体系。 至于要转化为哪种原料,研究人员将目光瞄准了乙酸。因为它不仅是食醋的主要成分,也是一种优秀的生物合成碳源,可以转化为葡萄糖等其他生物物质。 “二氧化碳直接电解可以得到乙酸,但效率不高,所以我们采取‘两步走’策略——先高效得到一氧化碳,再从一氧化碳到乙酸。”曾杰说。 研究人员发现,一氧化碳通过脉冲电化学还原工艺形成的晶界铜催化合成乙酸的效率可高达52%。 不过,常规电催化装置生产出的乙酸混合着很多电解质盐,无法直接用于生物发酵。 所以,为了“喂饱”微生物,不仅要提升转化效率,保证“食物”的数量,还要得到不含电解质盐的纯乙酸,保证“食物”的质量。 “我们利用新型固态电解质反应装置,使用固态电解质代替传统电催化技术中的电解质盐溶液,直接得到了无需进一步分离的纯乙酸水溶液。”夏川介绍。 微生物“吃醋”产葡萄糖 得到乙酸后,研究人员尝试利用酿酒酵母这一微生物来合成葡萄糖。 “酿酒酵母主要用于奶酪、馒头、酿酒等发酵行业,同时也因其优秀的工业属性,常被用作微生物制造与细胞生物学研究的模式生物。”于涛说,利用酿酒酵母通过乙酸来合成葡萄糖的过程,就像是微生物在“吃醋”,酿酒酵母通过不断地“吃醋”来合成葡萄糖。 “然而,在这过程中,酿酒酵母本身也会代谢掉一部分葡萄糖,所以产量并不高。”于涛表示。 对此,研究团队通过敲除酿酒酵母中代谢葡萄糖的三个关键酶元件,废除了酿酒酵母代谢葡萄糖的能力。之后,实验中的工程酵母菌株在摇瓶发酵的条件下,合成的葡萄糖产量达到1.7g/L。 “我们利用这种生物酿酒酵母‘从无到有’地在克级水平合成了葡萄糖,这代表了该策略较高的生产水平与发展潜力。”于涛说,为进一步提升合成葡萄糖的产量,不仅要废除酿酒酵母的能力,还要加强它本身积累葡萄糖的能力。 于是,研究人员又敲除了两个疑似具备代谢葡萄糖能力的酶元件,同时插入来自泛菌属和大肠杆菌的葡萄糖磷酸酶元件。 于涛表示,泛菌属和大肠杆菌的葡萄糖磷酸酶元件可以“另辟蹊径”,将酵母体内其他通路中的磷酸分子转化为葡萄糖,增加了酵母菌积累葡萄糖的能力。经过改造后的工程酵母菌株的葡萄糖产量达到2.2g/L,产量提高了30%。 新型催化方式有坚实根基 更重要的是,近年来,随着新能源发电的迅速崛起,电力成本下降,二氧化碳电还原技术已经具备与依赖化石能源的传统化工工艺竞争的潜力。 同时,微生物作为活细胞工厂,其优点是产物多样性很高,能够合成许多无法通过人工生产或人工生产效率很低的化合物,是非常丰富的“物质合成工具箱”。比如,在人们常见的白酒、馒头、抗生素等食品药品的加工中,微生物就发挥着重要作用。 “这样,合成葡萄糖和油脂所需要的电力和微生物就有了保障,通过电催化结合生物合成的新型催化方式就有了坚实的根基。”夏川说。 对此,中国科学院院士、中国催化专业委员会主任李灿研究员评价,这项工作耦合了人工电合成与生物合成,发展了一条由水和二氧化碳到含能化学小分子乙酸,然后经工程改造的酵母微生物催化合成葡萄糖和游离的脂肪酸等高附加值产物的新途径,为人工和半人工合成“粮食”提供了新的技术。 “该工作开辟了电化学结合活细胞催化制备葡萄糖等粮食产物的新策略,为进一步发展基于电力驱动的新型农业与生物制造业提供了新范例,是二氧化碳利用方面的重要发展方向。”中国科学院院士、上海交通大学教授邓子新说道。 同时,曾杰也强调,这项成果尚处于实验室的基础研究阶段,如果要推向实用,还需要进一步提高能量效率和产率,降低生产成本。 曾杰表示,接下来,研究团队将进一步研究电催化与生物发酵这两个平台的同配性和兼容性。未来,如果要合成淀粉、制造色素、生产药物等,只需保持电催化设施不改变,更换发酵使用的微生物就能实现。
  • 97.8万!南宁市疾病预防控制中心实验室试剂耗材、标准物质采购
    项目概况南宁市疾病预防控制中心实验室试剂耗材、标准物质采购(第二批) 采购项目的潜在供应商应在政采云平台(https://www.zcygov.cn/)获取(下载)获取采购文件,并于2021年12月22日 09点30分(北京时间)前提交响应文件。一、项目基本情况项目编号:NNZC2021-J1-991969-YZLZ(采购计划文号:NNZC[2021]7871号-003......具体内容详见附件招标公告项目名称:南宁市疾病预防控制中心实验室试剂耗材、标准物质采购(第二批)采购方式:竞争性谈判预算金额:97.7921000 万元(人民币)采购需求:预算金额:合计97.7921万元。A 分标 53.3652万元; B 分标 28.9772万元;C 分标15.4497万元;采购需求:A分标:项号采购标的单位数量简要技术需求或者货物要求1单通道病毒核酸检测类试剂盒(国产)(肠道病毒等)盒9具体详见采购文件《第二章 采购需求》2双通道病毒核酸检测类试剂盒(国产)(包括流感病毒、肠道病毒等)盒343新型冠状病毒2019-nCOV核酸定值质控品支354病毒DNA/RNA提取试剂盒(预封装)盒1085无RNase10µl带滤芯长吸头盒106无RNase250µl长吸头(带滤芯)箱870.1ml八连排定量管(带盖)箱28封口袋(透明)包1009封口袋(透明)包10010G1型消毒剂浓度试纸盒101196孔透明PCR板(适用于ABI)箱41296孔PCR板封口膜箱313N95防护口罩只120014VITEK细菌鉴定卡(ANC)盒115VITEK细菌鉴定卡(BCL)盒316API生化鉴定条(链球菌)盒117弯曲菌培养检测试剂(双孔滤膜法)盒418Karmali选择性平板盒419甘露醇卵黄多粘菌素琼脂平板瓶1020Baird-Parker琼脂平板瓶1021PALCAM琼脂基础瓶622PALCAM琼脂冻干配套试剂盒2023CIN-1培养基基础瓶224CIN-1培养基配套试剂盒825改良Y琼脂瓶226含铁牛奶琼脂瓶227甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础MYP瓶428查氏琼脂培养基瓶129改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤基础(MLST)瓶430万古霉素(改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤配套试剂)盒431改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(mLST-Vm肉汤)盒232脑心浸萃琼脂培养基瓶133脑-心浸萃液态培养基(BHI)瓶234改良克氏双糖铁琼脂瓶235KF链球菌琼脂培养基瓶236胆汁液态培养基瓶237改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基(mPDA)瓶238PCFA培养基基础瓶239PCFA培养基配套试剂盒440改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基配套试剂盒441葡萄糖肉浸液肉汤瓶142尿素盒343氰化钾对照管(KCN)盒244改良CCD琼脂基础(mCCD)瓶245改良CCD琼脂添加剂盒1046改良Skirrow氏琼脂基础瓶247改良Skirrow琼脂添加剂盒1048L-shaped Cell Spreader(一次性L棒)盒1049152唐菖蒲伯克霍尔德氏菌核酸快速检测试剂盒盒1氯化镁孔雀绿肉汤(MM)瓶609带盖离心管
  • 微生物检测培养基质量控制问答
    微生物检测培养基质量控制问答1、培养基灭菌后成份会有所蒸发减少,如何处理这个问题?答:正常情况下蒸发量较少,可忽略不计。2、培养基融化后出现浑浊是有哪些方面的原因引起的?应如何避免?答:可能的情况有:1. 培养基配置用水不符合规定;2. 灭菌过程温度升温慢或降温慢;3. 培养基储存不当;4. 融化时沸腾时间较长等。3、准备好的培养基有效期如何验证?答:定期取出培养基验证其无菌性,促生长能力等方面。4、培养基配制好灭菌后,在高压容器中保温降至50℃左右,可不可行?答:建议最-好不要,避免过度受热。5、脱水培养基对湿度是否有要求?多少适宜?答:按要求室温干燥环境储存即可。6、培养基pH值测定温度在25℃,这个温度应怎么控制?答:可水浴控制培养基温度。7、配制培养基过程中,按说明书称定量,加规定的纯化水,煮沸溶解,为了避免煮沸过程总减少水分,是否要在配制过程适当增加水?答:可适量增加,自己掌握。8、商品培养基一定要当天配当天用吗?可否在一周内用完?答:不是即配即用的培养基的话,储存的当,可以使用。9、称量培养基时,注意不要吸入粉末,这粉末是指何物?答:就是你所称量的干粉培养基 ,因为培养基的粉末对呼吸道有刺激作用,而且培养基中的某些成分,如亚硒-酸盐、叠氮-化钠、乙酰胺等,长期吸入并在体内累积到一定量会对人体健康有危害。所以培养基配制称量需做好个人防护,且最-好选择少粉尘环保型颗粒培养基。10、煮培养基,用不锈钢锅在电磁炉上煮可行?硫乙醇培养基是否要煮沸?如何煮沸?用不锈钢锅在电磁炉上煮沸可行吗?可不可以水浴煮沸呢?答:硫乙醇应煮沸,量大时,我实验室用不锈钢锅在电磁炉上煮沸。不建议水浴煮沸,因为水浴煮沸琼脂粉很难溶,导致琼脂分装不均匀,前段分装的琼脂含量少,后段分装的琼脂含量高,导致有的管或瓶中的FT凝固。11、如培养基在高压灭菌器中温度需自然下降20度才开盖吗?答:高温灭菌器有安全阀,温度下降到安全阀可打开时将培养基取出室温冷却,各型号灭菌器安全开盖温度不尽相同。12、平板涂布和平板划线培养基表面水分过多,菌落蔓延如何解决?答:对于采用表面接种形式培养的固体培养基,应先对琼脂表面进行干燥:揭开平皿盖,将平板倒扣于烘箱或培养箱中(温度设为25℃~50℃);或放在有对流的无菌净化台中,直到培养基表面的水滴消失为止。注意不要过度干燥。商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。
  • 高压灭菌器做九管法时如何避免气泡残留在培养基
    大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方,人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一。而检测食品中大肠菌群的方法中,国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准,国家标准的三步九管法,即乳糖发酵试验、分离培养、证实试验。 由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,即:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。1.乳糖发酵试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h,观察是否产气。2.分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,36±1℃培养18-24h,观察菌落形态。3.证实试验:挑取平板上的可疑菌落,进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h,观察产气情况。 在乳糖发酵试验工作中,经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡(有时比小米粒还小),有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明大肠菌群的产气量,多者可以使发酵倒管全部充满气体,少者可以产生比小米粒还小的气泡。 在试验过程中,会用到高压灭菌器来进行灭菌,九管法灭菌时,大肠菌在高温下会产生气泡,如果用的是ALP高压力灭菌锅,可以通过进入工程师菜单,调整在升温过程中的排气时间,可以有效的排走残留在培养基中的气泡。初始界面灭菌中灭菌结束 培养基中有气泡 目前市面上,高压灭菌器品种繁多,有进口的有国产的高压灭菌器,高压灭菌器产品质量参差不齐。在业内质量口碑最好的当属东南科仪总代理的日本ALP高压灭菌器,日本ALP高压灭菌器具备《进口压力容器生产许可证》、《进出口锅炉压力容器安全性能检验证书》以及高压灭菌器上的压力表和减压阀,送当地计量部门计量后取得计量证书。 ALP高压灭菌器开关轻松简便,电子锁仅在通电时才可开启,避免因断电或关机时意外泄漏未灭菌物质。高压灭菌器可清晰显示所处的状态,如温度、压力、程序及操作过程中的其它相关信息。高压灭菌器脉冲空气净化反复进行,直至压力高于对应温度而产生过饱和蒸汽压保证灭菌效果。ALP高压灭菌器可根据被灭菌物质的情况调整蒸汽排放情况,ALP高压灭菌器具备快速冷却功能可使灭菌后快速降温到80℃以下的安全温度。ALP高压灭菌器通过真空泵及经0.2um的滤膜过滤后的热空气快速干燥样品,使其快速可用。高压灭菌器标配物温探头安装孔,选配物温探头,方便进行内部灭菌效果的验证。ALP高压灭菌器三重脉冲,预真空设备配置强大的真空泵强行排空腔内留存的空气,使饱和蒸汽良好的渗透入灭菌物品中,从而确保充分有效的灭菌效果。 更多详细参数可关注ALP高压灭菌器中国总代理:东南科仪!
  • 不同细胞培养工艺生物反应器产率和培养基成本比较
    p    strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 简介 /span /strong /p p   用于重组蛋白和单克隆抗体(mAb)生产的细胞培养工艺有不同的方式。补料分批(Feb-Batch)工艺由于操作简单,且较易规模放大,被临床和商业化生产广泛采用,目前的技术发展已可在18天内获得20-30x10^6cells/mL的细胞密度,同时获得& gt 10g/L的滴度水平。 /p p   灌流工艺以往更多用于生产不稳定的产品,如血液凝集因子和酶类产品,但也有用于生产 mAb产品,如Remicade(英利昔单抗)。在灌流培养中,通过培养基置换,降低产物在反应器内的滞留时间,而灌流速率取决于特异性的产物和/或工艺需求。 /p p   近几年,在上游工艺中,基于灌流的工艺强化获得了极大的发展,驱动力主要来自于对降低成本和占地的需求,以及提高设备灵活性。随着细胞系、培养基和细胞截留设备的发展,现在的灌流工艺已可获得较高的细胞密度和产量,使其成为一个非常有吸引力的选择,包括mAb的生产。例如,在mAb生产中,结合2vvd的培养基置换速率,通常可达到50-60x10^6cells/mL的稳态细胞密度,以及高达4g/L/day的生物反应器产率。此外,浓缩补料分批(CFB)也可以通过培养基置换,维持高细胞密度,而将产物截留在生物反应器内。 /p p   灌流和CFB的差异在于所用的中空纤维膜的孔径。对于抗体,使用Per.C6细胞系,可在12-13天内,达到21.4g/L的终产物滴度(峰细胞密度& gt 150x10^6cells/mL),而使用CHO细胞系时,可在16天内达到25.3g/L的滴度,峰细胞密度& gt 180x10^6cells/mL。随着生物反应器产率的提高,可使用占地更小、成本更低的一次性设备,来替代大规模的不锈钢设备(10,000-25,000L),通过增加设备轮转或连续工艺,生产等量的产物。 /p p   尽管灌流工艺可使用基于过滤的细胞截留设备,如TFF和ATF,在生物反应器内获得并维持高细胞密度,但通常会要求使用较高的培养基置换速率,以将高密度细胞的活性维持在可接受的水平。与不同工艺相关的培养基成本是评估其生产等量产物时经济性的关键因素。而即使单位培养基成本适当,较高的培养基置换速率也会显著影响生产产品成本(CoG),亦即,上游操作成本与培养基成本紧密相关。 /p p   生产单位产品的总生产CoG和上/下游成本的比重会随产物滴度和设备尺寸的变化而变化。在分析CoG的所有输入值中,一旦工艺确定,培养基用量及其成本是固定的,不管设备、设施等是否发生改变。细胞培养工程师的一个主要目标是降低培养基成本,同时获得高产量。本文使用相同的基础(basal)和补料(feed)培养基,稍作优化,开发了具有高生物反应器产率的不同细胞培养工艺(补料分批、灌流和CFB),并比较了不同操作模式的生物反应器产率及其相关的培养基成本。 /p p    strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 实验 /span /strong /p p   实验使用生产单克隆抗体的重组CHO细胞系,不同工艺使用相同的3L生物反应器,培养基使用专利的基础(basal)和补液(feed)培养基,后者又分为两种补液-A和补液-B,均富含葡萄糖、氨基酸、维他命等。详细细胞系和种子扩增、生物反应器操作信息请参看原文。 /p p   对于补料分批培养,反应器起始工作体积1.5L,接种密度为0.5或2x10^6cells/mL,后者通过3天的N-1灌流来达到目标密度。生物反应器补液以每日葡萄糖水平为基础进行。 /p p   对于CFB工艺,使用50kD PS中空纤维过滤器的灌流设备,对于灌流,使用0.2μm PES中空纤维过滤器的灌流设备。接种密度1x10^6cells/mL,工作体积1.3L,一般第2天开始培养基置换,最大置换速率1vvd。灌流培养在第8天开始进行细胞废弃(cell bleeding),以维持所需细胞密度和活性。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/b370cbae-a09d-4aad-901e-9998bacb5c16.jpg" title=" 1_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center "    strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 不同细胞培养模式图解(xu et al, 2017) /span /strong /p p   细胞培养每日取样分析,详细分析内容和方法,请参考原文。 /p p    strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 讨论 /span /strong /p p   不同操作模式的细胞培养性能 /p p   实验测试操作模式包括:补料分批、灌流和CFB,使用相同的3L生物反应器规格以及基础和补料培养基组合,以便比较细胞/生物反应器产率和培养基成本。 /p p   补料分批模式 对于补料分批模式,接种密度为0.5或2x10^6cells/mL,后者通过N-1灌流,可使对数生长期降低2天,所以8天就可达到峰密度,而前者需要10天。两种条件达到的峰细胞密度范围均为20.2-26.2x10^6cells/mL。两种接种密度在第14天分别达到5.4± 0.1g/L和6.8± 0.2g/L的滴度。生物反应器单位体积产率(VPR)按最终生物反应器滴度除以培养周期计算。2x10^6cells/mL接种密度条件,相比0.5x10^6cells/mL,可获得更高的VPR(0.49± 0.01g/L/day vs. 0.39± 0.01g/L/day),主要是由于前者降低了起始生长阶段的时间,延长了生产期。 /p p   灌流模式 在灌流培养中,使用了2种不同的培养基组成:1种只使用基础培养基,另一种为基础加补液-A。在培养过程中,通过合适的cell bleeding,维持较高的活性& gt 85%。只使用基础培养基时,平均细胞密度为44± 4.1x10^6cells/mL,从第8天至32天的日产量为0.7± 0.04g/L/day。在基础+补液条件中,随细胞密度的增加,补液-A作为培养基置换的一部分,逐渐引入,而总培养基置换率保持为1vvd,平均细胞密度增加至73.9± 5.4x10^6cells/mL,日产量增加至2.29± 0.28g/L/day。细胞特异性产率从16.0± 1.2pg/cell/day增加至30.1± 2.3pg/cell/day,从而使反应器产量增加~230%。 /p p   浓缩补料分批模式(CFB) 与灌流相似,评估了只使用基础培养基和使用基础+补液培养基的条件。与灌流工艺相比,CFB不需要进行cellbleeding,细胞质累积至更高的水平。当只使用基础培养基时,在第18天达到峰细胞密度72.0± 9.6x10^6cells/mL,上清液滴度为12.2± 0.6g/L。使用基础+6%补液-A+2%补液-B时,峰细胞密度为117.4x10^6cells/mL,第18天上清液滴度为21.4g/L,使用基础+8% 补液-A +8% Feed-B时,峰细胞密度为83.4x10^6cells/mL,第18天上清液滴度为36.7g/L。可见,增加补液-A和补液-B的量,可显著提高细胞特异性产率至45.1pg/cell/day。 /p p   细胞特异性产率、生物反应器产率和产物质量 /p p   当只使用基础培养基时,批次、灌流和CFB工艺可达到相似的qP,范围为14.7-17.1pg/cell/day。在此条件下,累积的细胞数量会直接影响产物滴度和单位体积产率。正如预期,批次培养的VPR显著较低,仅为0.08g/L/day,而灌流和CFB工艺由于可维持更高的细胞密度,可获得相当的VPR,0.68-0.70g/L/day。 /p p   浓缩补液培养基通常用于补料分批工艺,以提高细胞生长和细胞特异性产率。在此研究中,补加补液培养基,可显著提高qP和VPR。对于补料分批培养,qP提高至29.4-32.0pg/cell/day,VPR达到0.39g/L/day(接种密度0.5x10^6cells/mL)或0.49g/L/day(接种密度2x10^6cells/mL)。N-1灌流获得的更高的接种密度可提高VPR,因为缩短了生长期的时间,延长了生产期,提高产量。但是,即使与只使用基础培养基的灌流和CFB相比,补料分批培养的VPR仍较低,因为细胞密度差别显著。 /p p   相比补料分批工艺,只使用基础培养基以1vvd的速率进行培养基置换时,可轻松地将细胞密度提高2-3倍。而与只使用基础培养基的条件相比,在灌流培养中补充10%补液-A可使VPR提高~230%,qP提高~90%。相似的,在CFB工艺中,补充不同比例的补液-A和补液-B可将VPR提高至1.19-2.04g/L/day。 /p p   最近有报道显示,长寿命的人浆细胞可在体外维持120pg/cell/day的IgG分泌率,对于基因工程哺乳动物细胞,最高生产速率估计为~100pg/cell/day。qP的提高将来自于细胞系和培养基的优化。所以,理论上,在灌流工艺中,如稳态细胞密度维持为100x10^6cells/mL时,每日产量可高达10g/L/day。 /p p   实验同时评估了不同操作模式的产物质量特征,结果显示,CFB会形成更高水平的HMW和稍高的酸性异构体,主要是由于产物所暴露的细胞培养环境。在补料分批和浓缩补料分批中,产物滞留时间为整个培养周期。此外,在仅使用基础培养基的CFB工艺中,HMW最高,说明培养基组成可能在HMW形成中扮演了重要的角色。但是,产生的HMW仍低于5%,且大部分可在纯化步骤中去除。另一方面,即使是相同的高细胞密度环境和相似的培养基组成,灌流培养的酸性异构体和HMW更低,可能是由于产物在罐内更低的滞留时间。 /p p   培养基成本分析 /p p   由于细胞系或培养基组成的变化会显著影响产物滴度/产率,所以对不同操作模式的比较需使用相同的细胞系和培养基条件才有意义。本文使用从小规模生物反应器获得的细胞培养性能,来比较不同操作模式的培养基成本,并假定在规模放大时,不同工艺没有显著的产率下降。需要指出的是,实验中的灌流速率没有在对数生长期,以细胞特异性为基础,进行良好的优化。相反,在整个培养周期中,将灌流速率固定为1vvd。在不同的培养阶段,对细胞特异性灌流速率进行精细调节,应可进一步降低培养基用量和成本。 /p p   当只使用基础培养基时,生产每克抗体的培养基成本在批量和灌流工艺中都很高。加入适量的补料培养基,可降低每克mAb的培养基成本,且即使补料培养基相对较贵,细胞密度和qP的增加相比培养基成本的增加更加显著。 /p p   使用N-1灌流的补料分批的培养基成本比常规补料分批工艺低,N-1灌流需要3x基础培养基置换,但因接种密度的提高,继而获得的滴度的增加,抵消了培养基用量的增加。N-1灌流的补料分批和灌流的培养基成本相当,~$10/g mAb。这说明,虽然往常认为由于较高的灌流速率,灌流的培养基用量更高,继而培养基成本更高,但只需要生物反应器产率达到一定的阈值,从培养基成本上来看,还是相当有竞争力的。 /p p   CFB工艺的培养基成本与其它操作模式的趋势不同。在只使用基础培养基的条件中,成本与批量和灌流工艺相当,但CFB培养基成本会随补料培养基的使用而增加,其相对较高的培养基成本(& gt $17/g)可能是因为需要较长的细胞生长时间,在培养中,直到第10天,细胞密度达到峰水平,才开始出现显著的产物滴度增加。降低CFB培养基成本的一种方法是优化细胞寿命,延长批次时间,但更长的罐内滞留时间,可能会影响产物质量属性,或是进一步优化培养基,如替换昂贵的成分和优化其滴度。 /p p   总生产COG /p p   除了培养基成本的不同,使用诸如灌流和CFB之类的工艺,结合一次性设备,在小规模上进行生物制品生产,可显著降低成本投入,从而获得更加灵活的生产策略,当产品需求增加时,可以快速地进行规模扩展(scale out),而不是规模放大(ScaleuP)。与传统不锈钢设备相关的固定成本,可以转变为“可变”的成本结构。基于此处的案例,灌流工艺的培养基成本实际上低于补料分批工艺。 /p p   进行总成本分析时,如下游均以批量模式进行,且认为不同工艺的劳动力成本相当,则本文建模分析结果显示,N-1灌流的补料分批和灌流工艺的下游CoG/g相当,分别为$63/g和$59/g,而标准补料分批和CFB工艺的下游CoG/g稍高,分别为$71/g和$81/g。对于mAb和不稳定的产品,基于灌流的连续工艺都可以提供显著的经济优势。 /p p    strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 总结 /span /strong /p p   在本研究中,比较了不同操作模式下,生物反应器的产率,包括补料分批、灌流和CFB工艺。对于研究的细胞系,qP高度取决于所用的培养基,不管采用哪种操作模式,这使得累积细胞密度成为决定产物滴度和生物反应器产率的主要因素。结果显示,补料分批培养生物反应器产率最低(0.39-0.49g/L/day),而基于灌流的培养方式,由于可维持更高的细胞密度,产率相对较高,灌流为2.29g/L/day,CFB为1.19-2.04g/L/day。灌流的一个显著优势是可以达到并维持极高的细胞密度,用于产物形成。 /p p   灌流工艺一个经常观察到的缺点是培养基用量较高,因为需要进行连续的培养基置换,以维持所需的高活细胞密度。这里的研究显示,高产率灌流培养的培养基成本实际上低于补料分批工艺。CFB工艺的培养基成本最高,虽然在18天内达到了36.7g/L的极高滴度,为降低CFB工艺的培养基成本,建议可以精调培养基置换率,以在起始的生长阶段获得更好的培养基利用,或通过培养基优化,提高细胞特异性产率。 /p p    i 小编出于交流目的编译此文,由于水平有限,不当之处,敬请谅解,详细内容,请参看原文。 /i /p p i   原文:S.Xu, J.Gavin, R. Jiang, et al., Bioreactor Productivity and Media Cost Comparison for Different Intensified Cell Culture Processes. Biotechnol. Prog., 2017, Vol. 00, No.00. /i /p p br/ /p
  • 生物试剂的分类
    ELISA试剂盒生物试剂涉及到化学试剂分类。我国的试剂规格基本上按纯度(杂质含量的多少)划分,共有高纯、光谱纯、基准、分光纯、优级纯、分析和化学纯等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要优级纯、分级纯和化学纯3种。 (1)优级纯(GR:Guaranteed reagent),又称一级品或保证试剂,99.8%,这种试剂纯度最高,杂质含量最低,适合于重要精密的分析工作和科学研究工作,使用绿色瓶签。(2)分析纯(AR),又称二级试剂,纯度很高,99.7%,略次于优级纯,适合于重要分析及一般研究工作,使用红色瓶签。(3)化学纯(CP),又称三级试剂,≥ 99.5%,纯度与分析纯相差较大,适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色(深蓝色)标签。ELISA试剂盒(4)实验试剂(LR:Laboratory reagent),又称四级试剂。 除了上述四个级别外,ELISA试剂盒目前市场上尚有:基准试剂(PT:Primary Reagent):专门作为基准物用,可直接配制标准溶液。光谱纯试剂(SP:Spectrum pure):表示光谱纯净。但由于有机物在光谱上显示不出,所以有时主成分达不到99.9%以上,使用时必须注意,特别是作基准物时,必须进行标定。纯度远高于优级纯的试剂叫做高纯试剂(≥ 99.99%)。玉米粉琼脂 Corn Meat Medium 250 用于真菌培养沙氏琼脂培养基 Sabouraud’s Agar 250 用于真菌检测(GB标准)沙氏BHI琼脂 Sabouraud BHI Agar 250 用于真菌检测(Acumedia 方法)沙门氏菌显色培养基 Salmonella Chromogenic Medium 1000ml 用于沙门氏菌的显色培养三糖铁琼脂(TSI) Triple Sugar Iron Agar 250 生化培养基,用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选(GB、SN标准)噻孢霉素 A 1.25μg/支*5 添加于100ml HB0121中乳糖肉汤 Lactose Broth 250 用于食品中沙门氏菌检验前增菌乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂 LMG Agar 250 用于滤膜MUG法检测食品中大肠菌群数(SN/T1059.2)乳糖复发酵培养基 Lactose Broth 250 用于大肠菌群,粪大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB标准)乳糖蛋白胨培养液 Lactose Peptone Broth 250 用于饮用水,水源水中总大肠菌群的测定(GB标准)乳糖胆盐发酵培养基 Lactose Bile Broth 250 用于大肠菌群,粪大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB标准)去氧胆酸盐琼脂 Desoxycholate Lactose Agar 250 用于大肠杆菌固体平板测定,肠道菌选择性分离庆大霉素琼脂 Gentamycin Agar 250 用于霍乱弧菌选择性分离培养茜素-β-半乳糖苷琼脂 Aliz-gal Agar 250 用于食品、饮料和饮用水中大肠菌群快速检测和计数(GB/T)普通肉汤培养基 Broth Medium 250 用于金黄色葡萄球菌的增菌培养(SN标准)葡萄糖胰蛋白胨琼脂 Glucose Tryptone Agar 250 用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢)分离培养(SN标准)葡萄糖琼脂 Dextrose Agar 250 用于细菌的综合生化试验葡萄糖半固体培养基 Dextrose Semisolid Medium 250 用于志贺氏菌的复合生化试验(GB标准)葡萄糖铵培养基  Ammonium Dextrose Medium 250 用于志贺氏菌的葡萄糖铵试验(GB标准)葡萄球菌增菌肉汤 Staphylococcus Enrichment Broth 250 用于凝固酶阳性葡萄球菌的选择性增菌葡萄球菌选择性琼脂110(CHAPMAN 琼脂) Staphylococcus Selective AgarNO.110 250 用于金黄色葡萄球菌的分离培养
  • 关于《GB 4789.28 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》等34项食品安全国家标准(征求意见稿)意见的函
    本次发布的34项标准中,包含微生物检验方法与规程、理化检验方法、生产经营规范和食品相关产品四个大类。具体信息如下:食品相关产品生产经营规范微生物检验方法与规程理化检验方法与规程1食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定理化检验方法与规程2食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定理化检验方法与规程3食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定理化检验方法与规程4食品安全国家标准 食品中膳食纤维的测定理化检验方法与规程5食品安全国家标准 食品中维生素A和E的测定理化检验方法与规程6食品安全国家标准 食品中维生素D的测定理化检验方法与规程7食品安全国家标准 化学分析方法验证通则理化检验方法与规程8食品安全国家标准 食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求微生物检验方法与规程9食品安全国家标准 食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定理化检验方法与规程10食品安全国家标准 食品中氯酸盐和高氯酸盐的测定理化检验方法与规程10食品安全国家标准 食品中N-亚硝胺类化合物的测定理化检验方法与规程12食品安全国家标准 食品中钼的测定理化检验方法与规程13食品安全国家标准 食品中铬的测定理化检验方法与规程14食品安全国家标准 食品中镉的测定理化检验方法与规程15食品安全国家标准 食品接触材料及制品 邻苯二甲酸酯的测定和迁移量的测定理化检验方法与规程16食品安全国家标准 食品中过氧化值的测定理化检验方法与规程17食品安全国家标准 酒和食用酒精中乙醇浓度的测定理化检验方法与规程18食品安全国家标准 食品接触材料及制品 多元素的测定和多元素迁移量的测定理化检验方法与规程19食品安全国家标准 食品接触材料及制品 9种抗氧化剂迁移量的测定理化检验方法与规程20食品安全国家标准 食品中淀粉的测定理化检验方法与规程21食品安全国家标准 食品接触材料及制品 纸、纸板及纸制品中荧光性物质的测定理化检验方法与规程22食品安全国家标准 食品接触材料及制品 异噻唑啉酮类化合物迁移量的测定理化检验方法与规程23食品安全国家标准 食品接触材料及制品方法验证通则理化检验方法与规程24食品安全国家标准 食品中酪蛋白磷酸肽的测定理化检验方法与规程下面,与大家一起对《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》征求意见稿编制说明进行梳理分析:本标准于2018年立项(项目编号spaq-2018-061),项目承担单位为中国食品药品检定研究院和厦门海关技术中心中心。2018年12月正式启动,2019年2月28日召开食品安全国家标准项目启动会,2019年7月12日至2020年10月19日在广泛调查研究和讨论的基础上,起草了本标准,并邀请10家以上专业技术机构进行方法标准实验室间验证工作,2020年11月30日形成草案,2020年12月1日至2020年12月25日进行行业内征求意见,期间未收到重大分歧意见,2021年2月22日形成《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》草稿。2021年6月24日经第二届食品安全国家标准审评委员会微生物检验方法与规程专业委员会第六次会议审查通过。具体修订情况如下:1.检验方法的整合: 现行国家标准 GB 4789.28-2013 存在两套验证的方法,一套方法针对生产商及实验室自制的培养基和试剂(附录 D),一套方法针对实验室使用商品化培养基和试剂(附录 E)。经研讨,确定该标准应作为实验室验收培养基的质控标准,明确了标准的使用对象。附录E 的划线半定量方法,操作上有很大的人为因素影响评价结果,同时由于附录D 包含的培养基评价方法更为全面,经研讨,删除了附录E,保留附录D 评价方法。即该标准为实验室使用商品化培养基和试剂评价标准,检验方法参照附录D。 2.新增了参比培养基的质控要求GB 4789.28-2013 规定用参比培养基为标尺对待测培养基的质量进行评价,但在标准未见参比培养基的质控方法和评价标准。经过咨询行业和专家意见,目前检验机构和生产企业随机选用培养基作为参比培养基进行培养基验证,没有质控标准可供执行。工作组在本次标准修订中,通过征求专家意见,结合培养 基的检验范围增加了参比培养基的质控菌株和评价方法。 3.增加了国内菌株:GB 4789.28-2013 中包含 21 株国外菌株,菌株购买时间长花费多,且随着生物制品的限制,国外菌株购买难度加剧。本次修订针对以上问题,选择国内CMCC和CICC菌种库 169 株菌和国外 21 株菌株进行 比对验证,经过13家验证机构验证筛选出21株国内菌株替代国外菌株。本次修订为确保实验室菌种替换 过渡,同时保留了ATCC菌种,原有菌种可以继续使用,但当两种菌种检测出现两种不同结果时,以国内2 菌株结果为最终判定依据。4.新增28套培养基评价方法针对 GB4789.28-2013 版未涵盖所有GB4789系列标准检验用培养基的情况,新增了28套培养基的评价方法。
  • 离子色谱-积分脉冲安培法检测黄酒中的阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖、核糖、乳糖
    目的:建立了离子色谱-积分脉冲安培法同时检测黄酒中的阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖、核糖、乳糖,并对这几种糖的含量进行探讨。方法:色谱分离选用CarboPacTM10(250 mm×4 mm)分析柱,以氢氧化钠和无水乙酸钠为淋洗液进行梯度洗脱,流速为 1.0 mLmin-1,柱温为30℃的色谱条件,在20 min内实现6种糖的分离,利用建立的方法对26个黄酒样品中的单糖含量进行了测定。结果:该方法的重现性(RSD)≤3.70%,相关系数R2≥0.9990,加标回收率为91.6%~109.1%,最低检出限为2.99×10-3 ~1.38×10-3 μgmL-1。结论:黄酒中主要存在的单糖是葡萄糖,阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、核糖和乳糖的含量较低;半甜型黄酒中单糖的含量高于加饭酒,其含量的差异可能与酿造工艺有关。 离子色谱_积分脉冲安培法检测黄酒_省略_乳糖_甘露糖_葡萄糖_核糖_乳糖_徐诺.pdf
  • 全国工具酶标准化工作组发布国家标准《葡萄糖氧化酶活性检测方法》征求意见稿
    国家标准计划《葡萄糖氧化酶活性检测方法》由 SWG11(全国工具酶标准化工作组)归口 ,主管部门为国家标准化管理委员会。 拟实施日期:发布即实施。主要起草单位 福建南生科技有限公司 、夏禾(杭州)生物技术有限公司 、夏禾(深圳)生物技术有限公司 、宁夏夏盛实业集团有限公司 、厦门银祥集团有限公司 、深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 、武汉新华扬生物股份有限公司 、廊坊诺道中科医学检验实验室有限公司 、天津博菲德科技有限公司 、广州市进德生物科技有限公司 、山西大禹生物工程股份有限公司 、河北省微生物研究所有限公司 、武汉瀚海新酶生物科技有限公司 、深圳市海拓华擎生物科技有限公司 。主要起草人 黄发灿 、郑登忠 、郑恬烨 、沈涛 、张志刚 。附件:国家标准《葡萄糖氧化酶活性检测方法》征求意见稿.pdf国家标准《葡萄糖氧化酶活性检测方法》编制说明.pdf
  • 葡萄糖中钠、钾元素对人体的作用
    什么是钠、钾元素?钠是细胞外液中带正电的主要离子,参与水的代谢,保证体内水的平衡,调节体内水分与渗透压;维持体内酸和碱的平衡;钠对ATP的生产和利用,肌肉运动,心血管功能,能量代谢都有关系,此外糖代谢,氧的利用也需要钠的参与;同时钠可以维持血压正常,增强神经肌肉兴奋性。与钠相对,人体中的钾主要(95%以上)在细胞内部,是细胞液中主要的正离子。钾参与糖类、蛋白质的正常代谢。葡萄糖和氨基酸经过葡萄细胞膜进入细胞合成糖原和蛋白质是必须有适量的钾离子参与;维持细胞内正常渗透压,由于钾主要存在于细胞内,因此钾在细胞内渗透压的维持中起着主要作用;维持细胞内外正常的酸碱平衡,钾代谢紊乱时,可影响细胞内外酸碱平衡。钾和钠一起作用,维持体内水分的平衡和心律的正常(钾在细胞内起作用,钠在细胞外起作用);钾和钠平衡失调时会损害神经和肌肉的机能。 实验 本实验根据中国药典2020年版四部通则0406来进行,采用日立ZA3000原子吸收分光光度计进行测试。实验过程:1.复方乳酸钠葡萄糖注射液中钠元素测定配置0μg/ml,2μg/ml,2.5μg/ml,3μg/ml,3.5μg/ml,4μg/ml浓度的标准溶液,同时提取注射液样品中的钠元素,标准溶液及样品液制备完成后,上机进行测试。喷入空气-乙炔火焰,在高温火焰中形成的钠基态原子对钠特征谱线进行吸收,在一定吸光值范围内,其吸光度值和钠的浓度成正比。测试结果: 2.葡萄糖氯化钠钾注射液中钠元素测定配置0μg/ml,0.9μg/ml,1.35μg/ml,1.8μg/ml,2.25μg/ml,2.7μg/ml浓度的标准溶液,同时提取注射液样品中的钠元素,标准溶液及样品液制备完成后,上机进行测试。喷入空气-乙炔火焰,在高温火焰中形成的钠基态原子对钠特征谱线进行吸收,在一定吸光值范围内,其吸光度值和钠的浓度成正比。测试结果: 3.复方葡萄糖电解质MG3注射液中钾元素测定配置 0μg/ml,1.5μg/ml,2.25μg/ml,3μg/ml,3.75μg/ml,4.5μg/ml浓度的标准溶液,同时提取注射液样品中的钾元素,标准溶液及样品液制备完成后,上机进行测试。 喷入空气-乙炔火焰,在高温火焰中形成的钾基态原子对钾特征谱线进行吸收,在一定吸光值范围内,其吸光度值和钾的浓度成正比。 测试结果:结论本次实验对注射液中提取的钠、钾元素进行测试。结果表明,日立ZA3000可以对特征波长589nm的钠元素和766.5nm的钾元素进行准确稳定的分析,测试结果不受注射液中其它共存物质的背景影响,方法稳定可靠。公司介绍:日立科学仪器(北京)有限公司是世界500强日立集团旗下日立高新技术有限公司在北京设立的全资子公司。本公司秉承日立集团的使命、价值观和愿景,始终追寻“简化客户的高科技工艺”的企业理念,通过与客户的协同创新,积极为教育、科研、工业等领域的客户需求提供专业和优质的解决方案。 我们的主要产品包括:各类电子显微镜、原子力显微镜等表面科学仪器和前处理设备,以及各类色谱、光谱、电化学等分析仪器。为了更好地服务于中国广大的日立客户,公司目前在北京、上海、广州、西安、成都、武汉、沈阳等十几个主要城市设立有分公司、办事处或联络处等分支机构,直接为客户提供快速便捷的、专业优质的各类相关技术咨询、应用支持和售后技术服务,从而协助我们的客户实现其目标,共创美好未来。
  • 欧盟发布氢化葡萄糖浆作为食品添加剂的科学意见
    近日,应欧盟委员会的要求,欧盟食品安全局食品添加剂和营养源科学专家组(ANS Panel)发布氢化葡萄糖浆作为食品添加剂的安全性评估意见。   氢化葡萄糖浆属于氢化淀粉水解产物,主要由麦芽糖醇、山梨糖醇和更高分子量的多羟基化合物组成。对所有年龄段的人来说,早餐的谷物食品、饼干和糕点是氢化葡萄糖浆最重要的潜在来源。对此,专家组进行了一系列的小鼠饲喂试验和人体学试验研究。以个人体重级别来分类,专家组评估了来源于所有推荐的食物中氢化葡萄糖浆的每日最高暴露量。其中,成人对氢化葡萄糖浆的暴露最少。   专家组指出,氢化葡萄糖浆饮食暴露的最高水平小于13周小鼠试验得到的无害作用剂量,其所评估的暴露水平是基于氢化葡萄糖浆应用于所有食物中后存在的假设。专家组认为,从推荐的食物用法和用量水平的角度来说,人体试验中服用的剂量和案例中报道的剂量的暴露水平已经接近于肠胃紊乱的剂量。因此,应该考虑添加其他允许使用的多羟基化合物类食品添加剂来起到通便作用。另外,氢化葡萄糖浆现有的毒理学数据不足以建立其每日允许摄入量(ADI),但是基于现有的资料,可以断定氢化葡萄糖浆目前所推荐的用法和用量不存在安全方面的担忧。
  • 酵母实现葡萄糖变鸦片 我们如何应对?
    每年,世界著名的合成生物学竞赛iGEM( International Genetically Engineered Machine)都会吸引数以千计来自全球各地的学生,就&ldquo 组装生命系统&rdquo 的创意与技术一较高下。 Jerome Sessini/Magnum 为了探讨合成生物学给社会安全和人类健康带来的潜在风险,2014年11月,FBI特工爱德华· 尤(Edward You)假设了这样一个场景:如果经过遗传改造的酵母能将糖&ldquo 加工&rdquo 成鸦片,我们该怎么办? 曾经的假想现在已经成真。就在2014年iGEM大赛结束一周后,两位专门研究如何用酵母制造鸦片的科学家找到了我们。那时他们还没有发表论文,希望听听我们作为生物技术政策研究人员的意见。他们想知道,如何能在论文中将研究的益处最大化,并且缓和由此带来的风险的尖锐性。如今,加利福尼亚大学伯克利分校的约翰· (John Dueber)、肯高迪亚大学的文森特· 马丁(Vincent Martin)和同事已经将这篇论文公诸于众。经他们改造的酵母具有将葡萄糖转换成吗啡的完整生化反应通路(见&ldquo &lsquo 酿造&rsquo 鸦片的酵母&rdquo );而卡尔加里大学的研究人员更是给这架&ldquo 鸦片机器&rdquo 添上了最后一块零件。 我们现有的吗啡都提取自罂粟(Papaver somniferum)。而通过改造酵母,寻找更简单、更可控的生物合成途径,可以帮助我们获得更便宜、成瘾性更低、更安全,以及更有效的镇痛药物。酵母可以自我复制、容易生长、貌不显眼,还能轻易地播撒四方。因此,这一研究还会为鸦片制品的违禁交易提供便利。鸦片制品可以由此实现分散化、本地化生产,普通人可以轻而易举地得到它们。 这些年来,合成生物学家利用改造过的酵母、细菌和真核植物,制造了许多&ldquo 友好&rdquo 的物质,例如抗疟疾药物、香氛、调味料、工业化学品和燃料。制造吗啡的酵母菌株,是我们研究出的第一种可以合成管制镇痛药的生物系统;然而,它肯定不会是最后一种可能&ldquo 惹麻烦&rdquo 的生物合成系统。 合成生物学界应该和监管者合作,积极评估这类具有&ldquo 两面性&rdquo 的技术的风险与收益。本文列出了一些最需要优先讨论的问题,它们不仅关乎公共卫生与安全,也与合成生物学的前景密切相关。这些问题包括:只允许持有相关执照的机构、获得授权的研究人员和技术人员使用能够合成鸦片制品的酵母菌株;减小这种酵母菌株对鸦片违禁交易市场的吸引力;贯彻灵活、灵敏的监管措施,以应对我们对这一技术在认识上的转变,以及技术本身的变化。 &ldquo 酿&rdquo 鸦片的酵母 葡萄糖需要经过若干个生物化学反应才能变成吗啡,研究人员花费了7年时间才赋予了酵母合成吗啡的能力。参与这一研究的3个团队分别将罂粟、甜菜根,以及土壤中一种细菌的遗传物质转移到酵母中,使其获得发生其中一个或几个反应的能力。第4个团队则为这条反应链接上了最后一环,在酵母中实现了(S)-网状番荔枝碱[ (S)-reticuline] 到(R)-网状番荔枝碱的转化:一种能够实现&ldquo 葡萄糖&rarr 吗啡&rdquo 全转化的酵母由此诞生。 理论上,只要懂得一些基本的发酵操作,任何人都能使用家用的啤酒发酵工具养殖这种酵母。如果你用发酵罐&ldquo 酿&rdquo 出了10g吗啡,只需喝下1~2ml发酵液,你就能摄入一个标准的处方剂量。现有的工程酵母菌株并没有这么高的产能,然而,其他一些相关的商业化发酵产物,已经达到了此种产出率,有些物质的产出率甚至比这还高10倍以上。 尽管研究人员的初衷是制造合法的镇痛药,这一新技术还是带来了不少麻烦。生物合成的吗啡要么比现有吗啡具有更高的费-效比(即在成本相等的情况下效果更好)、更为监管者所接受,要么成瘾性更小、更安全。然而,现有的吗啡在制造、管理,以及运输环节上,成本都不高。 2001到2007年间,高产罂粟的成功培育使得罂粟制品(又叫&ldquo 罂粟杆浓缩物&rdquo ,一般以大批量形式销售)的成本降低了20%(约为每公斤300~500美元)。合成生物学家、神经科学学家、药物化学家等不同领域从业人员必须通力合作,并且进行旷日持久、所费不赀的临床试验,才能设计出更具商业价值的鸦片类镇痛药。此外,为了防止更多人对鸦片上瘾,全球鸦片制品的供需都处于严格的管控之下。 法律保障 为了防止罂粟制品流向非法市场,国际社会、各个国家均制定了多种条约与法律。鸦片制造国往往会采用有安保措施的大型设施生产鸦片制品。为了加强安全性,澳大利亚甚至专门选种了一种含有大量二甲氢吗啡的罂粟品种。二甲氢吗啡很难转变成吗啡,直接口服还会导致中毒。我们很难预测全球最大的麻醉品管制机构&mdash &mdash 国际麻醉品管制局(International Narcotics Control Board,INCB))&mdash &mdash 会对这种新型吗啡合成系统作何反应。INCB不大可能因此削减目前鸦片类镇痛药的生产定额,也不大可能对目前合法的鸦片交易模式进行调整。这就阻碍了酵母菌株进入鸦片制造市场。 这种新型酵母菌株很可能对鸦片的违禁交易市场产生巨大影响。如今,鸦片有两个主要的非法交易渠道。首先是药物处方。非法交易者会窃取氧可酮(oxycodone)或氢可酮(hydrocodone)等镇痛药处方、开具不合理处方,或将合法处方非法销售出去。其次是毒品犯罪网络。阿富汗、缅甸、老挝、墨西哥等国家非法种植的罂粟制成的海洛因会通过犯罪网络流入市场,并以几十上百倍于成本的价格出售。 新型菌株为毒品犯罪网络(特别是对毒品有高需求的北美和欧洲)提供了一个新&ldquo 选项&rdquo 。使用酵母制毒极易掩人耳目。酵母生长迅速、运输方便,不论犯罪组织还是执法机构都很难对这种酵母的流向进行控制。总之,由此带来的&ldquo 分散化&rdquo 与&ldquo 本地化&rdquo 生产,必然会降低非法鸦片制品的生产成本,增加其易得性,对全球的鸦片问题起到持续的恶化作用。目前,全世界有超过1 600万人正在非法使用鸦片制品。 理论上讲,有了这种酵母,你只需家用的啤酒酿造工具,就能制造吗啡。(How Hwee Young/EPA/Corbis) 四点建议 若要对这一研究进行灵活、合理的监管,我们需要克服两个主要障碍。首先,目前我们对&ldquo 工程微生物&rdquo 的监管,主要集中在病原微生物(例如炭疽杆菌和天花病毒)上;酵母本不在监管的范畴中。其次,要实现有效监管,各国与国际的药物监管部门、执法机构需要通力合作,然而他们的行为规范与准则各不相同。 公共卫生专家、科学家、监管者和执法机构必须加强沟通与协调。INCB,以及其他研究生物安全与生物安保监管的专业组织,就可以担负起组织这类国际对话的责任。 以下四点,是为四个亟待解决的问题敲响警钟。 技术层面 我们在设计酵母菌株时,应该尽可能降低它们对犯罪分子的&ldquo 吸引力&rdquo 。例如,我们可以用它制造对毒贩无甚价值的麻醉药(比如二甲氢吗啡);另外,我们可以弱化工程菌株,使其只能在既定的实验室环境内发挥作用,这样一来,一般人就很难利用它在其他地方生产和收集鸦片制品;最后,我们还可以设计需要特殊的营养成分,才能正常生长的酵母菌株。我们已经将以上&ldquo 生物遏制手段&rdquo (methods of biocontainment)应用在了大肠杆菌(Escherichia coli)上。我们也可以给这种菌株打上DNA水标记(DNA watermark)之类的&ldquo 烙印&rdquo ,方便执法机构对其进行识别。 加强审查 鉴于犯罪组织可能利用公开的DNA序列制造自己的菌株(尽管这种可能性不大),那些专门提供DNA片段定制服务的公司,也需要提高警惕。制造此种酵母菌株的基因序列必须被列入DNA片段供应商的审查列表。目前,这一审查列表由两个自发性组织&mdash &mdash 国际合成生物学学会(International Association of Synthetic Biology)与国际基因合成联合会(International Gene Synthesis Consortium)&mdash &mdash 负责监管, 而审查的对象仅限于病原体的基因片段。 健全安保 我们应该对此种酵母的使用环境进行严格管控,只有经监管者许可、受到控制的场所,才能利用它生产麻醉剂。上锁、安警报、实验室与实验原料监控系统等物理性质的生物安保措施可以防止酵母被盗。实验室的工作人员需要通过安保审查,方能上岗。同样,研究人员要承担相应的权责,不能向未经合法授权的单位或个体提供酵母菌种。 法律监管 监管麻醉剂的现有法律,例如《美国管制药物法案》(US Controlled Substance Act)以及其他国家的类似法律,应该将监管触角延伸至此类酵母,保证其产物在生产与销售上的合法性。生物技术的发展日新月异,如果我们能够对这种具有两面性的技术采取有力、有效的监管,就能给以后的类似情况树立榜样。事实上,参与此项研究的生物学家,已经在最关键问题上做出了表率:他们愿意,也正在为他们的&ldquo 造物&rdquo 担负责任。然而,这篇文章的写作对象并不是他们。 其他基因组工程师也在沿着这条道路前进。参与研发基因组编辑工具CRISPR/Cas9的科学家已经对学术界和监管机构发出呼吁,对CRISPR/Cas9进行积极的风险评估;而在此之前,我们不能利用这一工具编辑野生动植物基因,或修改人生殖细胞基因组。合成生物学已经日臻成熟,这要求我们必须拿出负责的态度,做出负责的行动。(撰文:肯尼思· A· 奥耶(Kenneth A. Oye) J· 查普尔· H· 劳森 (J. Chappell H. Lawson) 塔尼亚· 布贝拉(Tania Bubela)。
  • 多个类器官串联共培养在疾病模型研究中的意义
    多个类器官串联共培养在疾病模型研究中的意义翻译整理:北京佰司特贸易有限责任公司,2023-07-04人类系统性疾病的发生过程都是通过破坏两个或多个器官的自我平衡和相互交流。研究疾病和药物治疗就需要复杂的多器官平台作为体外生理模型的工具,以确定新的药物靶点和治疗方法。2型糖尿病(T2DM)的发病率正在不断上升,并与多器官并发症相关联。由于胰岛素抵抗,胰岛通过增加分泌和增大胰岛体积来满足胰岛素不断增加的需求量。当胰岛无法适应机体要求时,血糖水平就会升高,并出现明显的2型糖尿病。由于胰岛素是肝脏代谢的关键调节因子,可以将生产葡萄糖的平衡转变为有利于葡萄糖的储存,因此胰岛素抵抗会导致糖稳态受损,从而导致2型糖尿病。过去已经报道了多种表征T2DM特征的动物模型,但是,从动物实验进行的研究往临床上转化的效果不佳。更重要的是,目前使用的药物,虽然能缓解糖尿病症状,但对疾病进一步发展的治疗效果有限。在此,我们以胰腺和肝脏在芯片上的串联共培养为例(参考文献:Functional coupling of human pancreatic islets and liver spheroids on-a-chip: Towards a novel human ex vivo type 2 diabetes model,2017, Nature Scientific Reports)来说明一下。胰腺和肝脏是参与维持葡萄糖稳态的两个关键器官,为了模拟T2DM,阿斯利康(AstraZeneca)的科学家利用TissUse GmbH公司的微流控多器官芯片(MOC)平台,通过微流控通道相互连接,建立一个双器官串联芯片(2-OC)模型,实现芯片上胰腺和肝脏类器官的串联共培养,在体外模拟了胰腺和肝脏之间的交流通讯。建立串联共培养类器官(胰岛+肝脏)和单独培养类器官(仅胰岛或肝脏),在培养基中连续培养15天,串联共培养显示出稳定、重复、循环的胰岛素水平。而胰岛单独培养的胰岛素水平不稳定,从第3天到第15天,降低了49%。胰岛与肝球体串联共培养中,胰岛可长期维持葡萄糖水平,刺激胰岛素分泌,而单独培养的胰岛,胰岛素分泌显著减少。胰岛分泌的胰岛素促进了肝球体对葡萄糖的利用,显示了串联共培养中类器官之间的功能性交流。在单独培养中的肝球体中,15天内循环葡萄糖浓度稳定维持在~11 mM。而与胰岛共培养时,肝球体的循环葡萄糖在48小时内降低到相当于人正常餐后的水平度,表明胰岛类器官分泌的胰岛素刺激了肝球体摄取葡萄糖。T2DM是一种多器官疾病,疾病表型和对药物的反应依赖于具有完全代谢功能的器官和它们之间的相互作用。这篇文章提出了一个胰岛和肝球体之间的类器官串联共培养的模型。与单一培养相比,在GTT(葡萄糖耐量测验)第一天内,串联共培养中的血糖水平从高浓度降至正常范围,随后保持平衡。在没有胰岛素刺激时,单独培养类器官(仅胰岛或肝脏)中的葡萄糖水平一直保持在高浓度。通过测量胰岛在葡萄糖负荷下释放到培养基中的胰岛素水平来评估肝脏和胰岛的串联共培养的作用。胰岛素促进了肝球状体对葡萄糖的利用,在共培养中葡萄糖维持在正常水平,而单独培养中葡萄糖水平一直偏高。因为,串联共培养中,分泌到循环中的胰岛素刺激了肝球体对葡萄糖的摄取,随着葡萄糖浓度的降低,胰岛素分泌会随之减少,这就表明肝脏和胰岛之间存在一个功能反馈回路。长期暴露于高糖水平下,缺乏肝球体的胰岛释放胰岛素的能力会降低,提示了长期高血糖损害胰岛功能。另外,与单层HepaRG细胞相比,受刺激和未受刺激的AKT磷酸化比例在肝球体中明显更高,这表明3D培养环境更利于模拟人体内的生理反应。这些结果鼓励我们建立2-OC模型来模拟T2DM的特征,通过胰岛-肝脏串联共培养揭示与T2DM疾病相关的机制,包括β细胞衰竭、胰岛素抵抗、脂肪变性、脂肪性肝炎和肝硬化。多器官芯片(MOC)的发展目标是建立各种不同的器官组合模型,用于药物有效性和安全性评估以及药动学/药效学(PK/PD)测试。
  • IVIS 视角 | 使用生物发光成像实时监测体内葡萄糖摄取
    在活体成像技术中,一些新的光学探针及光调控技术的出现,拓展了该技术的应用领域。上期给大家分享了检测活性氧的探针,能够在活体水平监测局部炎症中活性氧自由基(ROS)的释放,以及基于肿瘤微环境中高ROS水平介导的自发光动力效应,实现肿瘤诊疗一体化。今天给大家分享一篇2019年发表在《Nature Methods》杂志上的文章。作者设计了一种生物发光的探针BiGluc,利用该探针即可在体内、体外实时、无创的长期监测葡萄糖的摄取。葡萄糖是大多数生物体能量的主要来源,其异常摄取与许多病理条件有关,如肿瘤、糖尿病、神經退行性疾病、非酒精性脂肪性肝炎等。到目前为止,基于18FDG的正电子发射断层成像(PET)仍然是测量葡萄糖摄取的金标准。还没有光学成像技术能够很好的检测该指标。文章中作者设计了一种可以可视化和定量葡萄糖吸收的光学探针。该探针是基于结合笼状萤光素技术与生物正交‘点击’反应,即可激活的笼状萤光素三芳基膦酯(CLP)与全氟苯基叠氮基修饰的葡萄糖(GAz4)分子之间产生的生物正交点击反应,该反应导致游离萤光素的释放,此时在萤光素酶的存在下,即可产生可量化的生物发光信号,其信号强度与葡萄糖的代谢水平相关。在活体成像中,首先是表达萤光素酶的动物注射CLP, 24小时后注射GAz4,注射后即可使用IVIS 小动物活体成像系统进行成像,如下图所示。图1. BiGluc.探针的设计策略点击查看视频:https://v.qq.com/x/page/y0897ftpwnc.html为了研究BiGluc探针在活体水平的应用,文中使用基因工程鼠FVB-luc+/+【该小鼠通过β-actin启动子广泛的表达萤光素酶】来进行评价。在三组FVB-luc+/+小鼠中,首先尾静脉注射CLP溶液,24h后分别灌胃GAz4(BiGluc组)、GAz4+d-葡萄糖(BiGluc+d-葡萄糖组)或PBS(背景组)。结果显示,d-葡萄糖(1:300 ratio with the GAz4 probe)的竞争能够对BiGluc信号进行抑制,使得信号值下降至背景值。从而成功证明BiGluc探针与天然底物存在竞争(下图a-c)。为了进一步研究BiGluc和d-葡萄糖的在体内的选择性,作者进行了胰岛素耐受性试验。高水平的胰岛素会导致GLUT4易位到细胞膜,随后组织对d-葡萄糖摄取的增加。因此实验中FVB-luc+/+小鼠静脉注射CLP,24h后注射GAz4 结合 PBS溶液(对照组)或者胰岛素,随后进行生物发光成像,结果显示胰岛素处理组小鼠的信号增加了三倍(下图d)。图2. 转基因小鼠(FVB-luc+/+)中d-葡萄糖摄取的成像和定量这些实验结果表明,BiGluc探针可以可靠地用于可视化研究活体水平d-葡萄糖的摄取,并且可以进行定量,从而也提示该探针可用于糖尿病等代谢疾病的研究。同样,该探针可用于肿瘤葡糖糖摄取的研究。葡萄糖转运蛋白,特别是GLUT1,在多种类型肿瘤发展中起着至关重要的作用。实验中使用裸鼠接种4T1-luc或4 T1-luc-GLUT1?/?细胞,肿瘤生长至体积65mm3,所有的动物注射等量的萤光素,以确保肿瘤的大小和萤光素酶的表达量相同。如前所示,进行BiGluc探针成像实验。实验结果表明,与对照组相比,4T1-luc-GLUT1?/?发光强度降低38%。同样文中还研究了BiGluc信号是否可以通过化学抑制GLUT1转运体来调节。众所周知,WZB-117是一种小分子的GLUT1可逆抑制剂,能够在不同的癌症中有效地阻止葡萄糖的摄取。结果显示WZB-117处理组,葡萄糖摄取信号减少50%(下图c,d)。同样文中比较了BiGluc 探针和18F-FDG-PET在肿瘤移植体中的应用效果。结果显示 4T1-luc-GLUT1?/-细胞对葡萄糖的摄取量降低,与BiGluc探针成像结果一致(下图e,f)。图3. 使用BiGluc和18F-FDG探针对肿瘤异种移植模型中d-葡萄糖的摄取进行成像和定量这些结果都证明了BiGluc探针在研究机体葡萄糖摄取中强大的功能。相信这项技术可以广泛应用于药物研发以及监测与葡萄糖摄取异常相关疾病的发生和进展,如癌症、糖尿病和肥胖等。此外,BiGluc技术扩大了生物发光成像技术可检测的生物分子的范围。在未来,利用新的红移萤光素-萤光素酶组合技术可以进一步提高BiGluc探针灵敏度,将进一步扩大其应用范围。文章来源https://www.nature.com/articles/s41592-019-0421-z关于珀金埃尔默:珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案,助力科学家、研究人员和临床医生解决最棘手的科学和医疗难题。凭借深厚的市场了解和技术专长,我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在全球,我们拥有12500名专业技术人员,服务于150多个国家,时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭,改善人类生活质量。2018年,珀金埃尔默年营收达到约28亿美元,为标准普尔500指数中的一员,纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。了解更多有关珀金埃尔默的信息,请访问www.perkinelmer.com.cn
  • 138万!庆市疾病预防控制中心实验室试剂耗材采购项目
    项目编号:[230601]QC[TP]20220039项目名称:实验室试剂耗材采购采购方式:竞争性谈判预算金额:1,386,119.00元采购需求:合同包1(实验室试剂耗材采购):合同包预算金额:1,386,119.00元品目号品目名称采购标的数量(单位)技术规格、参数及要求品目预算(元)最高限价(元)1-1化学试剂和助剂结核菌熟练度测试培养基22(套)详见采购文件5,698.00-1-2化学试剂和助剂PBS缓冲液5(瓶)详见采购文件1,170.00-1-3化学试剂和助剂荧光染色液1(套)详见采购文件420.00-1-4化学试剂和助剂高压灭菌器指示条1(盒)详见采购文件37.00-1-5化学试剂和助剂镊子5(把)详见采购文件100.00-1-6化学试剂和助剂罗氏活力型血糖检测试纸+配套采血针(慢病科使用)10(套)详见采购文件2,400.00-1-7化学试剂和助剂强生稳豪信优型血糖检测试纸+配套采血针(慢病科使用)10(套)详见采购文件2,880.00-1-8化学试剂和助剂225mL营养肉汤2(盒)详见采购文件342.00-1-9化学试剂和助剂结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂培养基(VRBGA)1(瓶)详见采购文件215.00-1-10化学试剂和助剂重组胰蛋白酶4(瓶)详见采购文件792.00-1-11化学试剂和助剂麻疹病毒IgM抗体检测试剂盒4(盒)详见采购文件1,728.00-1-12化学试剂和助剂风疹病毒IgM抗体检测试剂盒4(盒)详见采购文件1,080.00-1-13化学试剂和助剂汉坦病毒酶免检测试剂盒4(盒)详见采购文件2,880.00-1-14化学试剂和助剂甲型、乙型流感、新冠PCR试剂盒8(盒)详见采购文件54,000.00-1-15化学试剂和助剂EB病毒PCR试剂盒2(盒)详见采购文件6,300.00-1-16化学试剂和助剂甲型流感试剂6(盒)详见采购文件37,800.00-1-17化学试剂和助剂甲型、乙型通用流感试剂10(盒)详见采购文件63,000.00-1-18化学试剂和助剂乙型流感分型试剂8(盒)详见采购文件50,400.00-1-19化学试剂和助剂流感甲-1 PCR试剂盒6(盒)详见采购文件18,900.00-1-20化学试剂和助剂流感甲-3 PCR试剂盒6(盒)详见采购文件18,900.00-1-21化学试剂和助剂流感甲-5 PCR试剂盒4(盒)详见采购文件12,600.00-1-22化学试剂和助剂流感甲- 7 PCR试剂盒4(盒)详见采购文件12,600.00-1-23化学试剂和助剂流感甲-9 PCR试剂盒4(盒)详见采购文件12,600.00-1-24化学试剂和助剂诺如病毒PCR试剂盒16(盒)详见采购文件100,800.00-1-25化学试剂和助剂轮状病毒PCR试剂盒(A群)2(盒)详见采购文件6,300.00-1-26化学试剂和助剂轮状病毒PCR试剂盒(B群)2(盒)详见采购文件6,300.00-1-27化学试剂和助剂轮状病毒PCR试剂盒(C群)2(盒)详见采购文件6,300.00-1-28化学试剂和助剂大肠菌群纸片1(盒)详见采购文件324.00-1-29化学试剂和助剂手足口核酸检测试剂盒CV-A166(盒)详见采购文件18,900.00-1-30化学试剂和助剂手足口核酸检测试剂盒CV-A62(盒)详见采购文件6,300.00-1-31化学试剂和助剂手足口核酸检测试剂盒CV-A102(盒)详见采购文件6,300.00-1-32化学试剂和助剂HIV质控血清10(支)详见采购文件1,440.00-1-33化学试剂和助剂DPBS30(瓶)详见采购文件3,870.00-1-34化学试剂和助剂两性霉素2(瓶)详见采购文件1,886.00-1-35化学试剂和助剂阿氏液4(瓶)详见采购文件520.00-1-36化学试剂和助剂病毒培养液20(瓶)详见采购文件16,240.00-1-37化学试剂和助剂TPCK胰酶3(盒)详见采购文件2,052.00-1-38化学试剂和助剂胎牛血清1(瓶)详见采购文件3,825.00-1-39化学试剂和助剂0.25%胰蛋白酶-EDTA1(盒)详见采购文件270.00-1-40化学试剂和助剂0.05%胰蛋白酶-EDTA1(盒)详见采购文件340.00-1-41化学试剂和助剂MDCK细胞无血清培养基20(瓶)详见采购文件16,240.00-1-42化学试剂和助剂PALCAM琼脂干粉1(瓶)详见采购文件763.00-1-43化学试剂和助剂PBS30(瓶)详见采购文件1,230.00-1-44化学试剂和助剂手足口核酸检测试剂盒(通用)14(盒)详见采购文件44,100.00-1-45化学试剂和助剂手足口核酸检测试剂盒EV714(盒)详见采购文件12,600.00-1-46化学试剂和助剂一次性无菌液体石蜡2(盒)详见采购文件1,744.00-1-47化学试剂和助剂一次性无菌厌氧袋5(袋)详见采购文件4,050.00-1-48化学试剂和助剂营养琼脂斜面6(盒)详见采购文件1,428.00-1-49化学试剂和助剂营养琼脂平板50(盒)详见采购文件7,850.00-1-50化学试剂和助剂BPW增菌液30(盒)详见采购文件5,940.00-1-51化学试剂和助剂3% NaCl APW增菌液20(盒)详见采购文件4,340.00-1-52化学试剂和助剂弧菌显色平板20(盒)详见采购文件12,600.00-1-53化学试剂和助剂志贺显色平板20(盒)详见采购文件13,820.00-1-54化学试剂和助剂TSA平板2(盒)详见采购文件314.00-1-55化学试剂和助剂四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液30(盒)详见采购文件6,570.00-1-56化学试剂和助剂亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)15(盒)详见采购文件3,495.00-1-57化学试剂和助剂沙门显色平板40(盒)详见采购文件22,080.00-1-58化学试剂和助剂沙门氏菌/金黄色葡萄球菌/大肠埃希氏菌O157/单核细胞增生性李斯特菌核酸四重实时荧光PCR检测试剂盒3(盒)详见采购文件45,360.00-1-59化学试剂和助剂5种致泻性大肠埃希氏菌多重实时荧光PCR检测试剂盒12(盒)详见采购文件226,800.00-1-60化学试剂和助剂食源性致病菌核酸多重实时荧光PCR检测试剂盒1(盒)详见采购文件22,680.00-1-61化学试剂和助剂志贺氏菌增菌(肉汤)不含抗生素10(盒)详见采购文件2,740.00-1-62化学试剂和助剂沙门氏菌属诊断血清套装1(套)详见采购文件32,400.00-1-63化学试剂和助剂XLD平板2(盒)详见采购文件476.00-1-64化学试剂和助剂弯曲菌培养检测试剂盒2(盒)详见采购文件4,050.00-1-65化学试剂和助剂225mL LB1增菌液5(盒)详见采购文件3,060.00-1-66化学试剂和助剂10mL生理盐水管(含中和剂)10(盒)详见采购文件6,390.00-1-67化学试剂和助剂EC肉汤1(瓶)详见采购文件194.00-1-68化学试剂和助剂硫代硫酸钠1(瓶)详见采购文件15.00-1-69化学试剂和助剂平板计数琼脂1(瓶)详见采购文件238.00-1-70化学试剂和助剂乳糖胆盐发酵培养基1(瓶)详见采购文件150.00-1-71化学试剂和助剂一次性采水袋2(箱)详见采购文件1,340.00-1-72化学试剂和助剂10mL生理盐水管6(盒)详见采购文件3,834.00-1-73化学试剂和助剂营养琼脂培养基干粉1(瓶)详见采购文件199.00-1-74化学试剂和助剂四硫磺酸钠煌绿增菌液基础(TTB)干粉1(瓶)详见采购文件239.00-1-75化学试剂和助剂亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 干粉1(瓶)详见采购文件367.00-1-76化学试剂和助剂血琼脂基础 干粉1(瓶)详见采购文件239.00-1-77化学试剂和助剂Baird-Parker琼脂基础 干粉1(瓶)详见采购文件456.00-1-78化学试剂和助剂无菌培养容器封口膜12cm*12cm5(包)详见采购文件250.00-1-79化学试剂和助剂无菌培养容器封口膜16cm*16cm10(包)详见采购文件550.00-1-80化学试剂和助剂营养肉汤20(盒)详见采购文件3,420.00-1-81化学试剂和助剂肠道增菌肉汤20(盒)详见采购文件4,500.00-1-82化学试剂和助剂肠道增菌肉汤10(盒)详见采购文件2,150.00-1-83化学试剂和助剂金属浴干式恒温器1(个)详见采购文件3,240.00-1-84化学试剂和助剂拍打式无菌均质机2(个)详见采购文件14,400.00-1-85化学试剂和助剂10mL LB2增菌液5(盒)详见采购文件1,285.00-1-86化学试剂和助剂李斯特氏菌显色平板5(盒)详见采购文件3,555.00-1-87化学试剂和助剂PALCAM琼脂平板5(盒)详见采购文件1,480.00-1-88化学试剂和助剂225mL PBS(磷酸盐缓冲液)10(盒)详见采购文件1,320.00-1-89化学试剂和助剂Baird-Parke 平板10(盒)详见采购文件2,270.00-1-90化学试剂和助剂金黄色葡萄球菌显色平板10(盒)详见采购文件6,650.00-1-91化学试剂和助剂腊样芽孢杆菌显色平板5(盒)详见采购文件3,325.00-1-92化学试剂和助剂大肠杆菌显色平板25(盒)详见采购文件17,275.00-1-93化学试剂和助剂国标法水碘检测试剂盒1(盒)详见采购文件1,300.00-1-94化学试剂和助剂尿碘试剂盒(WS/T107-2016)1(盒)详见采购文件1,300.00-1-95化学试剂和助剂实验室专用洗液2(桶)详见采购文件936.00-1-96化学试剂和助剂大肠菌群/大肠杆菌测试片10(包)详见采购文件7,300.00-1-97化学试剂和助剂50ml塑料离心管200(支)详见采购文件600.00-1-98化学试剂和助剂15ml塑料离心管1(箱)详见采购文件1,306.00-1-99化学试剂和助剂塑料容量瓶100(个)详见采购文件16,200.00-1-100化学试剂和助剂一次性塑料移液管1ml200(支)详见采购文件300.00-1-101化学试剂和助剂一次性塑料移液管2ml200(支)详见采购文件340.00-1-102化学试剂和助剂一次性塑料移液管5ml200(支)详见采购文件480.00-1-103化学试剂和助剂一次性塑料移液管10ml200(支)详见采购文件520.00-1-104化学试剂和助剂电加样排枪枪头3(箱)详见采购文件18,240.00-1-105化学试剂和助剂无菌冻存管1,000(管)详见采购文件3,000.00-1-106化学试剂和助剂50ml无菌离心管(尖底,带架子)1(20包/箱)详见采购文件1,470.00-1-107化学试剂和助剂15ml无菌离心管(尖底)1(10包/箱)详见采购文件1,306.00-1-108化学试剂和助剂Realtime-PCR八连管(带盖)(不透光)30(盒)详见采购文件52,920.00-1-109化学试剂和助剂GenBox厌氧产气包6(盒)详见采购文件3,120.00-1-110化学试剂和助剂2.5L密封厌氧盒6(个)详见采购文件5,760.00-1-111化学试剂和助剂50mL塑料离心管500(支)详见采购文件1,400.00-1-112化学试剂和助剂15mL一次性刻度塑料离心管500(支)详见采购文件1,300.00-1-113化学试剂和助剂研磨机2(台)详见采购文件47,146.00-1-114化学试剂和助剂研磨杯200(个)详见采购文件19,000.00-1-115化学试剂和助剂七氟丁酰基咪唑(HFBI)5(瓶)详见采购文件9,000.00-1-116化学试剂和助剂高效脱水剂5(盒)详见采购文件5,220.00-1-117化学试剂和助剂硅藻土基质固相分散萃取柱专用硅藻土填料5(盒)详见采购文件6,120.00-1-118化学试剂和助剂硅藻土基质固相分散萃取柱5(支)详见采购文件18,540.00-1-119化学试剂和助剂3-氯-1.2丙二醇棕榈酸二酯标准物质3(瓶)详见采购文件4,461.00-1-120化学试剂和助剂2-氯-1.3丙二醇硬脂酸二酯标准物质3(瓶)详见采购文件4,461.00-1-121化学试剂和助剂缩水甘油棕榈酸酯标准物质3(瓶)详见采购文件3,780.00-1-122化学试剂和助剂3-氯-1.2丙二醇棕榈酸二酯标准物质3(瓶)详见采购文件4,461.00-1-123化学试剂和助剂2-氯-1.3丙二醇硬脂酸二酯标准物质3(瓶)详见采购文件4,461.00-1-124化学试剂和助剂缩水甘油棕榈酸酯标准物质3(瓶)详见采购文件3,780.00-1-125化学试剂和助剂氘代同位素d5-3-氯-1.2-丙二醇棕榈酸二酯标准物质3(瓶)详见采购文件6,912.00-1-126化学试剂和助剂氘代同位素d5-2-氯-1.3-丙二醇硬脂酸酯标准物质3(瓶)详见采购文件6,912.00-1-127化学试剂和助剂d5-缩水甘油棕榈酸酯3(瓶)详见采购文件6,912.00-1-128化学试剂和助剂3-氯-1.2丙二醇二七氟丁酸酯(3-氯-1.3丙二醇七氟丁酰基衍生物)1(瓶)详见采购文件2,484.00-1-129化学试剂和助剂2-氯-1.3-丙二醇二七氟丁酸酯(2-氯-1.3丙二醇七氟丁酰基衍生物)1(瓶)详见采购文件2,484.00-1-130化学试剂和助剂3-溴-1.2丙二醇二七氟丁酸酯(3-氯-1.3丙二醇七氟丁酰基衍生物)1(瓶)详见采购文件2,484.00-1-131化学试剂和助剂d5-3-氯 -1.2-丙二醇七氟丁酰基衍生物1(瓶)详见采购文件2,484.00-1-132化学试剂和助剂d5-2-氯-1.3-丙二醇七氟丁酰基衍生物1(瓶)详见采购文件2,484.00-1-133化学试剂和助剂d5-3-溴-1.2丙二醇二七氟丁酸酯(3-氯-1.3丙二醇七氟丁酰基衍生物)1(瓶)详见采购文件2,484.00-1-134化学试剂和助剂3-溴-1.2丙二醇标准物1(瓶)详见采购文件1,487.00-1-135化学试剂和助剂3-氯-1.2丙二醇(3-MCPD) 标准品1(支)详见采购文件1,487.00-1-136化学试剂和助剂2-氯-1.3丙二醇(2-MCPD)标准品1(支)详见采购文件1,487.00-1-137化学试剂和助剂d5-3-氯-1.2丙二醇(d5-3-MCDP)标准品1(支)详见采购文件2,304.00-1-138化学试剂和助剂d5-2-氯-1.3丙二醇(d5-2-MCPD)标准品1(支)详见采购文件2,304.00-1-139化学试剂和助剂d5-3-溴-1.2丙二醇(d5-3-MBPD)标准品1(支)详见采购文件2,304.00-1-140化学试剂和助剂FAPAS植物油质控质样(含3mcpd,缩水甘油酯,2mcpd)1(瓶)详见采购文件2,268.00-1-141化学试剂和助剂质控用植物油样(未精炼的毛油或不含氯丙醇酯和缩水甘油酯的食用植物油)1(瓶)详见采购文件2,610.001,512.00-本合同包不接受联合体投标合同履行期限:2022年9月1日前
  • 宁夏疾控中心采购大批食品安全监测耗材
    2013年1月31日,中国政府采购网公布了宁夏回族自治区疾病预防控制中心2013年食品安全风险监测试剂耗材采购项目招标公告,此次采购包括微生物培养基、化学试剂及玻璃器皿、生化诊断试剂、仪器配件及专用耗材等,详情如下所示:   一、委托编号:2013NCZ0037 招标编号:HSZB-2013ZC004   二、采购方式:公开招标   三、采 购 人:宁夏回族自治区疾病预防控制中心   联 系 人:李 银 联系电话:0951-4085393   四、招标代理机构:宁夏恒盛招标有限公司   联 系 人:李 慧   电 话:0951- 5031788 传 真:0951-5058301   电子邮箱: nx.hs@163.com   地 址:银川市国际贸易中心C栋12楼008室   户 名:宁夏恒盛招标有限公司   开 户 行:银川市农行开发区支行   账 号:140001040016999   五、评标办法:最低评标价法   六、采购内容简述:   一标段: 微生物培养基 序号 名称 规格 总数 单位 1 平板计数琼脂 250g/瓶 5 瓶 2 LST肉汤 250g/瓶 4 瓶 3 BGLB肉汤 250g/瓶 2 瓶 4 EC肉汤 250g/瓶 2 瓶 5 EMB琼脂 250g/瓶 3 瓶 6 致病性大肠埃希氏菌诊断血清 18瓶/套 2 套 7 产肠毒性大肠埃希氏菌诊断血清 10瓶/盒 2 盒 8 肠侵袭性大肠埃希氏菌诊断血清 11瓶/盒 2 盒 9 出血性大肠杆菌O157诊断血清 1mL/瓶 2 瓶 10 出血性大肠杆菌O157:H7诊断血清 1mL/瓶 2 瓶 11 CN琼脂 250g/瓶 3 瓶 12 CN琼脂配套试剂 10支/盒 3 盒 13 金氏B培养基 250g/瓶 2 瓶 14 乙酰胺肉汤 100g/瓶 2 瓶 15 钠氏试剂 5mL/支×2 2 盒 16 Api 20NE生化条(带配套盐水及试剂) 25条/盒 5 盒 17 BPW 250g/瓶 3 瓶 18 SC增菌液 100g/瓶 2 瓶 19 TTB培养基基础 250g/瓶 2 瓶 20 碘液 20支/盒 3 盒 21 0.1%煌绿 20支/盒 3 盒 22 沙门氏菌显色培养基 1000mL/瓶 5 瓶 23 TSI琼脂 250g/瓶 1 瓶 24 MIU培养基 20支/盒 6 盒 25 靛基质试剂 10mL/瓶 3 瓶 26 软琼脂 250g/瓶 2 瓶 27 Api 20E生化条(带盐水) 25条/盒 15 盒 28 Api 20E配套试剂 7支/套 2 套 29 氧化酶 瓶 2 瓶 30 矿物油 125mL/瓶 2 瓶 31 沙门氏菌A-F多价诊断血清 1mL/瓶 3 瓶 32 沙门氏菌诊断学清 60种/套 2 套 33 志贺氏菌增菌肉汤 250g/瓶 4 瓶 34 志贺氏菌增菌肉汤配套试剂 10支/盒 6 盒 35 志贺氏菌显色琼脂 1000mL/瓶 5 瓶 36 XLD琼脂 250g/瓶 1 瓶 37 克氏双糖琼脂 250g/瓶 3 瓶 38 志贺氏菌属四种多价血清 1mL/支 3 支 39 志贺氏菌属福氏多价血清 1mL/支 3 支 40 志贺氏菌属诊断血清 50种/套 2 套 41 7.5%氯化钠肉汤 250g/瓶 5 瓶 42 Baird-parker基础 500g/瓶 2 瓶 43 脑心浸液500g/瓶 1 瓶 44 冻干血浆 12瓶/盒 3 盒 45 金葡显色培养基 500mL/瓶 3 瓶 46 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 250g/瓶 6 瓶 47 Baird-parker基础 250g/瓶 1 瓶 48 亚蹄酸盐卵黄增菌液 100mL×6瓶/盒 2 盒 49 胰酪胨大豆多粘菌素B肉汤 250g/瓶 4 瓶 50 胰酪胨大豆多粘菌素B肉汤配套试剂 10000IU×10支/盒 3 盒51 MYP琼脂基础 250g/瓶 2 瓶 52 MYP琼脂配套试剂 10支/盒 3 盒 53 50%卵黄乳液 5mL/支×10 6 盒 54 蜡样芽胞杆菌显色琼脂 1000mL/瓶 3 瓶 55 酪蛋白琼脂 100g/瓶 2 瓶 56 蜡样芽胞杆菌生化鉴定盒 10次/盒 6 盒 57 Api CHB生化条(带培养基及配套试剂)(进口) 10条/盒 6 盒 58 磷酸盐缓冲液 250g/瓶 1 瓶 59 大肠杆菌IMVC生化鉴定盒 10次/盒 3 盒 60 BPW 250g/瓶 3 瓶 61 mLST-Vm基础 250g/瓶 2 瓶 62 mLST-Vm配套试剂 5支/盒 3 盒 63 阪崎显色培养基 1000mL/瓶 3 瓶 64 LB基础 250g/瓶 2 瓶 65 LB1配套试剂 10支/盒 5 盒 66 LB2配套试剂 10支/盒 2 盒 67 单增李斯特菌显色平板 20块/盒 6 盒 68 SIM琼脂 250g/瓶 2 瓶 69 半固体琼脂 250g/瓶 2 瓶 70 Api Listeria生化条(进口) 10条/盒 10 盒 71 木糖生化管 20支/盒 3 盒 72 鼠李糖生化管 20支/盒 3 盒 73 Phoenix阳性鉴定板(进口) 25块/盒 4 盒 74 Phoenix阴性鉴定板(进口) 25块/盒 4 盒 75 Phoenix鉴定培养液(进口) 100支/盒 2 盒 76 一次性血平板 20块/盒 10 盒 77 百日咳诊断血清 1mL/瓶 1 瓶 78 脑膜炎奈瑟氏菌诊断血清 11瓶/套 1 套 79 脑膜炎奈瑟氏菌乳胶凝剂试剂盒 25人份/盒 1 盒 80 DR585链球菌分型试剂盒 盒 1 盒 81 亚碲酸钾培养基 500g/瓶 1 瓶 82 3.5%亚碲酸钾溶液 10瓶/盒 1 盒 83 裂解马血 10瓶/盒 1 盒 84 炭琼脂 500g/瓶 1 瓶 85 炭琼脂培养基添加剂 10瓶/盒 1 盒 86 Api NH生化鉴定条(带配套盐水及试剂)(进口) 10条/盒 1 盒 87 Api Staph(带配套试剂)(进口) 25条/盒 1 盒 88 Api 20 Strep(带配套试剂)(进口) 25条/盒 1 盒 89 Api Coryne生化鉴定试剂条(带配套试剂)(进口) 12条/盒 1 盒 90 O157胶体金测试条 10条/包 3 包 91 国产霍乱弧菌O1群胶体金快速检测试剂盒 10条/包 3 包 92 国产霍乱弧菌O139群胶体金快速检测试剂盒 10条/包 3 包 93 肉毒毒素诊断血清 7支/盒 4 盒 94 A型肠毒素快速检测试剂 10条/包 5 包 95 B型肠毒素快速检测试剂 10条/包 5 包 96 C型肠毒素快速检测试剂 10条/包 5 包 97 沙门氏菌抗原快速检测试剂 10条/包 5 包 98 革兰氏染液 套 2 套 99 细菌双向血培养瓶 12瓶/箱 8 箱 100 大肠杆菌 8099 2 株 101 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 2 株 102 铜绿假单胞菌 ATCC 15442 2 株 103 白色念珠菌 ATCC 10231 2 株 104 枯草杆菌黑色变种芽孢 ATCC 9372 2 株 105 藤黄微球菌 CMCC(B)28001 1 株 106 生孢梭菌 CMCC(B)64941 1 株 107 白色念珠菌 CMCC(F)98001 1 株 108 药敏检测试剂盒 12种/盒 50 盒 109 药敏板 套 150 套   第二标段: 化学试剂及玻璃器皿 序号 名称 规格/型号 数量 单位 1 丙酮 500ml/瓶 10 瓶 2 三氯甲烷 500ml/瓶 15 瓶 3 无水乙醇 500ml/瓶 20 瓶 4 三氯醋酸 500g 2 瓶 5 蒽酮 25g 1 瓶 6 硫脲 500g 1 瓶 7 CuSO4 25g 1 瓶 8 NaF 500g 1 瓶 9 钨酸钠 500g 1 瓶 10 对羟基联苯 100g 1 瓶 11 乳酸锂 5g 1 瓶 12 乳酸钙 500g 1 瓶 13 硝酸 500mL 20 瓶 14 硝酸 2500mL 8 瓶 15 抗坏血酸 100g 10 瓶 16 硝酸镁,六水 50g 2 瓶 17 氧化镧 500g 1 瓶 18 甲醇 4L 10 瓶 19 乙腈 4L/瓶 8 瓶 20 正己烷 4L 6 瓶 21 氯化钠 500g 20 瓶 22 无水硫酸钠 500g 20 瓶 23 乙酸乙酯 4L 4 瓶 24 丙酮 4L 4 瓶 25 二氯甲烷 4L 2 瓶 26 磷酸 500mL/瓶 3 瓶 27 硫酸铈铵 25g/瓶 10 瓶 28 次氯酸钠 500mL/瓶 5 瓶 29 环己烷 500mL/瓶 5 瓶 30 三氟乙酸 500mL/瓶 2 瓶 31 Hydrolysis Reagent C47TM CB130(氧化剂) 4×950mL/包 3 包 32 o-Phthalaldehyde DiluentCB910(OPA稀释剂) 4×951mL/包 3 包 33 巯基乙醇 10g 1 瓶 34 邻苯二甲醛OPA 5g 1 瓶 35 2-硝基苯甲醛2-Nitrobenzaldehyde 25g/瓶 1 瓶 36 二甲基亚砜 500ml/瓶 1 瓶 37 甲酸Formic acid 100mL/瓶 1 瓶 38 β-葡萄糖醛酸苷肽酶/芳基磺酸酯酶β-Glucuronidase/sulfatase 5ml,100000单位/mg 3 瓶 39 蛋白酶 100mg 1 瓶 40 高氏淀粉酶 500g 1 瓶 41 β-葡萄糖苷酶/硫酸酯酶 2mL 3 瓶 42 正丙醇 500mL/瓶 1 瓶 43 盐酸羟胺 100g/瓶 2 瓶 44 对甲苯磺酸 101g/瓶 2 瓶 45 乙酸铵 500g 2 瓶 46 石油醚 500ml/瓶 5 瓶 47 乙二胺 500ml/瓶 2 瓶 48 氢氧化钾 500g 4 瓶 49 冰醋酸 500ml/瓶 10 瓶 50 无水乙醇 500mL/瓶 12 瓶51 95%乙醇 500mL/瓶 10 瓶 52 甲基叔丁基醚 500ml/瓶 5 瓶 53 对氨基苯磺酰胺 50g 2 瓶 54 盐酸N-(1-萘)-乙二胺 25g 2 瓶 55 二苯碳酰二肼 25g 2 瓶 56 异烟酸 25g 2 瓶 57 砒唑酮 25g 2 瓶 58 N-二甲基甲酰胺 25g 2 瓶 59 氯胺T 25g 2 瓶 60 安替比林 50g 2 瓶 61 4-氨基安替比林 50g 2 瓶 62 碘化钾晶体 50g 1 瓶 63 次氯酸钠 500ml 2 瓶 64 36%过氧化氢 500ml 2 瓶 65 冰醋酸 500m110 瓶 66 碘化钾 250g 1 瓶 67 无水磷酸氢二钠 500g 1 瓶 68 无水磷酸氢二钾 500g 1 瓶 69 乙二胺四乙酸二钠 250g 1 瓶 70 盐酸N,N-二乙基对苯二胺 100g 1 瓶 71 硫酸N,N-二乙基对苯二胺 100g 1 瓶 72 无氯纯水 1000ml 1 瓶 73 亚砷酸钾 1 瓶 74 硫代乙酰铵 250g 1 瓶 75 氯胺T 500g 1 瓶 76 吡啶 500ml 1 瓶 77 巴比妥酸 250g 2 瓶 78 一水磷酸二氢钠 500g 1 瓶 79 二水磷酸二氢钠 500g 1 瓶 80 二乙酰一肟 25g 2 瓶 81 二硫化碳 500mL 1 瓶 82 氯化钾 250g 1 瓶 83 20-30目沙子 500g 2 瓶 84 盐酸 500m1 2 瓶 85 三氧化铬 100g 2 瓶 86 对氨基苯磺酸 100g 2 瓶 87 硫酸 500m1 2 瓶 88 氯化汞 500g 3 瓶 89 碘化钾 500g 2 瓶 90 氢氧化钠 500g 3 瓶 91 磷酸 500m1 2 瓶 92 甲醛 501ml 2 瓶 93 环已二胺四乙酸 100g 2 瓶 94 氨基磺酸 100g 2 瓶 95 盐酸副玫瑰苯胺 100g 2 瓶 96 邻苯二甲酸氢钾 500g 2 瓶 97 亚砷酸钠 500g 2 瓶 98 可溶性淀粉 500g 2 瓶 99 硝酸银 250g 2 瓶 100 碳酸铵 500g 2 瓶 101 丙酮 500m1 4 瓶 102 乙酸 500m1 2 瓶103 磷酸二氢钾 500g 2 瓶 104 磷酸氢二钠 500g 2 瓶 105 异烟酸 100g 2 瓶 106 硫氰酸汞 500g 2 瓶 107 乙醇 500m1 2 瓶 108 硫酸铁铵 100g 2 瓶 109 氨水 500m1 2 瓶 110 丙三醇 500m1 2 瓶 111 溴甲酚绿 100g 2 瓶 112 柠檬酸三钠 500g 2 瓶 113 氯化钠 500g 2 瓶 1 比色管 100ml 100 只 2 比色管 25mL 50 只 3 容量瓶 10mL 30 支 4 具塞锥形瓶 250ml 60 支 5分液漏斗 1L 5 支 6 分液漏斗 250mL 30 支 7 玻璃吸管glass pasteur pipettes 230mm,250支/盒 1 盒 8 容量瓶 100mL,5个/盒 4 盒 9 具塞玻璃刻度试管 10mL 300 个 10 具塞玻璃刻度离心管 25mL 200 个 11 玻璃吸管(尖头)glass pasteur pipettes 150mm,250支/盒 5 盒 12 玻璃吸管(尖头)glass pasteur pipettes 230mm,250支/盒 4 盒 13 棕色磨口具塞试剂瓶 500mL 200 个 14 量筒 100mL 5 个 15 棕色容量瓶 100ml 20 个 16 250mL具塞锥形瓶 250mL 30 个 17 圆底烧瓶 100mL 30 个 18 10mL具塞玻璃刻度试管试管架   5 个 19 25mL具塞玻璃刻度离心管试管架   5 个 20 石油醚 500mL 2 瓶 21 定量滤纸 内径12.5 20 盒 22 定量滤纸 内径15 20 盒 23 定量滤纸 内径18 20 盒 24 定性滤纸 内径12.5 20 盒 25 定性滤纸 内径15 20 盒 26 定性滤纸 内径6cm 10 盒 27 定性滤纸 内径18 20盒 28 橡胶手套 中 10 双 29 橡皮塞子 1号-10号 各10 只 30 多孔玻板吸收管 棕色 10 个 31 多孔玻板吸收管 白色 10 个 32 大炮吸收管 白色 30 个 33 具塞比色管 10m1 30 个 34 量筒 20ml 5 个 35 量筒 50ml 3 个 36 量筒 250mL 3 个 37 量筒 500mL 3 个 38 量筒 1000mL 5 个 39 烧杯 25mL 20 个 40 烧杯 50mL 20 个 41 烧杯 100mL 20 个 42 烧杯 100mL 20 个 43 烧杯 1000mL 15 个 44 烧杯 3000ml 20 个 45 烧杯 2000ml 20 个 46 吸管 1mL 20 个 47 吸管 2mL 20 个 48 吸管 5mL 20 个 49 吸管 10mL 20 个 50 移液管 1mL 20 个 51 移液管 2mL 20 个 52 移液管 5mL 20 个 53 移液管 10mL 20 个 54 温度计 360° 10 个 55 大口瓶 2500mL 10 个 56 比色管(具塞) 10ml 20 个 57 棕色容量瓶 50ml 20 个 58 塑料量筒 250ml 2 个 59 标本缸(圆筒型) 高20cmX直径25cm 10 个 60 标本缸 10 个   第三标段: 生化诊断试剂 序号 名称 规格/型号 数量 单位 1 流行性出血热IgG抗体检测试剂盒 96人份/盒 8 盒 2 流行性出血热抗体检测试剂盒(胶体金法) 20人份/盒 2 盒 3 出血热荧光抗体(直接法) 15 ml 4 流行性出血热IgM抗体检测试剂盒 96人份/盒 2 盒 5 登革热IgM抗体检测试剂盒(进口) 96人份/盒 1 盒 6 狂犬病毒荧光PCR检测试剂盒 20人份/盒 4 盒 7 乙脑IgM抗体检测试剂盒 48人份/盒 2 盒 8 呼吸道病毒15联RT-PCR检测试剂盒(进口) 50人份/盒 1 盒 9 BED新发感染检测试剂盒(进口) 192人份/盒 4 盒 10 丙肝病毒抗体检测试剂盒(酶免法) 48人份/盒 1 盒 11 梅毒螺旋体抗体试剂盒(ELISA) 48人份/盒 1 盒 12 梅毒螺旋体抗体试剂盒(TPPA) 100T/盒 1 盒 13 乙肝表面抗原检测试剂盒(酶免法) 48人份/盒 1 盒 14 风疹IgM抗体检测试剂盒 48人份/盒 20 盒 15 麻疹IgM抗体检测试剂盒 48人份/盒 20 盒 16 麻疹IgM抗体检测试剂盒 96人份/盒 2 盒 17 乙肝DNA检测试剂盒 20人份/盒 1 盒 18 布病IgM ELISA检测试剂盒(进口) 96人份/盒 3 盒 19 布病IgG ELISA检测试剂盒(进口) 96人份/盒 3 盒 20 甲肝病毒IgM抗体检测试剂盒(酶免法) 96人份/盒 200 盒 21 戊肝病毒IgM抗体检测试剂盒(酶免法) 96人份/盒 200 盒 22 麻疹荧光PCR检测试剂盒 规格:48T/盒 9 盒 23 风疹荧光PCR检测试剂盒 规格:48T/盒 5 盒   第四标段: 仪器配件及专用耗材 序号 名称 规格/型号 数量 单位 1 25mL EPA样品瓶 140×27.5mm,100个/包 1 包 2 色谱柱ACQUITY UPLC HSS T3(进口) 1.8um 2.1mm*50mm 1 根 3 水相针式滤器 100只/包 4 包 4 水相针式滤器 100只/包 4 包 5 有机相针式滤器 100只/包 4 包 6 有机相针式滤器 100只/包 8 包 7 样品瓶存放盒   2 只 8 Ag-H离子交换树脂柱(进口) 2.5cc,48个/包 2 包 9 玻璃纤维滤纸GF/C 47mm,1.2µ m,100张/盒 5 盒 10 玻璃纤维滤纸GF/C 110mm,1.5µ m,100张/盒 3 盒 11 PriboFast玉米赤霉烯酮免疫亲和柱(进口) 25/包 5 包 12 黄曲霉毒素B1B2G1G2M1免疫亲和柱(进口) 25/包 6 包   黄曲霉毒素M1免疫亲和柱 25/包 8 包 13 固相萃取小柱(中性氧化铝) 30/包 1g/6mL 10 包 14 Oasis MAX固相萃取柱(进口) 6cc/150mg,30/包 5 包 15 Oasis HLB固相萃取柱(进口) 200mg/6cc, 30/盒 5 盒 16 Oasis MCX固相萃取柱(进口) 150mg/6cc,30/盒 5 盒 17 Oasis MCX固相萃取柱(进口) 60mg/3cc, 100/盒 5 盒 18 Oasis WCX固相萃取柱(进口) 150mg/6cc, 30/盒 5 盒 19 Oasis WAX固相萃取柱(进口) 150mg/6cc, 30/盒 5 盒 20 塑料巴斯德吸管 2ml 1000/盒 3 盒 21 MycoSep 230-雪腐镰刀菌烯醇多功能净化柱(进口) 25支/pk 每支小柱5ml 5 盒 22 PriboFast 226-玉米赤霉烯酮多功能净化柱(进口) 25支/pk 每支小柱5ml 5 盒 23 PriboFast 200-玉米赤霉烯酮多功能净化柱(进口) 25支/pk 每支小柱5ml 5 盒 24 DONStar R呕吐毒素免疫亲和柱(进口) 25支/pk 每支小柱3ml 5 盒 25 ZearaStar玉米赤霉烯酮免疫亲和柱(进口) 25支/pk 每支小柱3ml 5 盒 26 SupelMIP® 固相萃取 — 氯霉素 25 mg/10 mL , (LRC), pk of 50 4 盒 27 SILICA/PSA混合玻璃固相萃取柱 1.0g/6mL,10个/盒 30 盒 28 Florisil玻璃固相萃取柱 1.0g/6mL,10个/盒 30 盒 29 PSA玻璃固相萃取柱 1.0g/6mL,30个/盒 30盒 30 LC-Si固相萃取柱 200mg,3mL,30个/包 3 包 31 LiChrolut EN固相萃取柱 200mg,3mL,30个/包 3 包 32 50uL微量进样针 50μL 4 支 33 封口膜   2 卷 34 PTFE针头过滤器 0.22um,13mm,100/pk 10 包 35 BEH-C18色谱柱(进口) 150mm*d2.1mm,1.7um 2 根 36 R95口罩 (20个/盒)防酸碱 4 盒 37 R95口罩 (20个/盒)防有机 4 盒 38 sunfire-C18色谱柱(进口) 150mm*2.1mm,5um 2 根 39 氨基甲酸酯分析柱(进口) 150mm*3.9mm 1 根 40 氨基甲酸酯Sentry保护柱芯(进口) 2个/包 1 包 41 Sentry保护柱套(进口)   1 个 42 PAH C18 分析柱(进口) 250mm*4.6mm,5um 1 根 43 PROTEIN-Pak sp阳离子交换色谱柱(进口) 10mm*100mm,8um 1 根 44 无尘抽纸 200抽/盒 20 盒 45 塑料容量瓶 25mL, 5个/盒 36 盒 46 塑料容量瓶 50mL, 5个/盒 36 盒 47 塑料容量瓶 100mL, 5个/盒 36 盒 48 塑料刻度吸管 2mL 60 支 49 塑料刻度吸管 5mL 60 支 50 塑料刻度吸管 10mL 60 支 51 O型环(进口) 10/包 3 包 52 分流用玻璃衬管(进口) 5个/包 3 包 53 毛细管用压环 (进口) 10/包 3 包 54 惰性处理石英棉(进口) 3g/包 1 包 55 进样针(进口) 10uL 3 支 56 氟离子选择电极   2 支 57 甘汞电极   2 支 58 硅胶管(溶剂解吸型) 6*120mm 5 支 59 硅胶管(溶剂解吸型)
  • 标准解读 | GB 5009.8-2023 《食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》
    近日,国家卫生健康委员会、国家市场监管总局联合发布了2023年第6号文件,关于85项食品安全国家标准和3项修改单的公告,其中包括了GB 5009.8-2023《食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》(以下称新标准)。新标准将替代GB 5009.8-2016 《食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》和GB 5413.5-2010 《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中乳糖、蔗糖、乳糖的测定》,并于2024年3月6日正式实施。那么,新标准与GB 5009.8-2016、GB 5413.5-2010比较,有哪些变化呢?增加方法数量新标准在GB 5009.8-2016高效液相法和酸水解-莱茵-埃农氏法的基础上,增加了离子色谱法和莱茵-埃农氏法,即新标准共有4种测定方法。扩大方法适用范围新标准第一法高效液相色谱法保留了饮料类,新增了糖果样品中5种糖的测定,且将GB 5009.8-2016中的谷物类、乳制品、果蔬制品、蜂蜜、糖浆等扩大至粮食及粮食制品、乳及乳制品、果蔬及果熟制品、甜味料范畴。新增的第二法离子色谱法则适用于食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。离子色谱法利用糖类物质在碱性溶液总中呈离子状态的原理,在糖类检测中的应用越来越多。其中,离子色谱-脉冲安培法检测糖类具有灵敏度高、样品无需衍生处理等优点。仪器参考条件:新标准中第三法酸水解-莱茵-埃农氏法与GB 5009.8-2016中第二法适用范围一致,适用于食品中蔗糖的测定。新增的第四法莱茵-埃农氏法与GB 5413.5-2010 第二法适用范围一致,但是新标准仅保留了婴幼儿食品和乳品中乳糖的测定。试样经除去蛋白质后,在加热条件下,以次甲基蓝为指示剂,直接滴定已标定过的费林氏液,根据样液消耗的体积,计算乳糖含量。果糖、葡萄糖、麦芽糖和低聚半乳糖等会对乳糖的测定产生干扰。由此可见,新标准的适用范围更广。修改高效液相色谱法的标液储存时间和浓度新标准将混合标准储备液的保存时间由GB 5009.8-2016的4℃密封储存一个月延长至0℃~4℃密封条件下储存三个月。同时,新标准增加了更低浓度点的(0.200 mg/mL)混合标准工作液,且规定可根据待测液浓度适当调整混合标准工作液浓度。这条内容的修改,使得糖含量的测定更加灵活便捷。完善高效液相色谱法和酸水解-莱茵-埃农氏法试样制备和提取过程新标准取消了GB 5009.8-2016中关于固体、半固体和液体试样要取代表性样品200 g(mL)的要求,新增了对于冷冻饮品、巧克力、胶基糖果等难溶解试样的制备和提取条件,填补了GB 5009.8-2016中此类样品前处理过程的空缺。检出限、定量限修改GB 5009.8-2016高效液相色谱法仅对于检出限作出规定,新标准在此基础上,增加了定量限。因此,在测定低糖含量的样品时,应注意该要求。此外,GB 5413.5-2010和GB 5009.8-2016的滴定法规定了检出限、定量限,而新标准的滴定法删除了检出限和定量限的要求。修改滴定原理新标准第三法酸水解-莱茵-埃农氏法为食品中蔗糖的测定方法。该方法原理特别指出,棉子糖、水苏糖、低聚半乳糖、果聚糖、聚葡萄糖和抗性糊精等会对蔗糖的测定产生干扰。新标准第四法莱茵-埃农氏法为婴幼儿食品和乳品中乳糖的测定方法,该方法原理也特别指出,果糖、葡萄糖、麦芽糖、低聚半乳糖等会对乳糖的测定产生干扰。因此,在使用第三法和第四法进行测定时,要特别注意样品中是否含有上述种类的糖,注意方法适用性。点击获取更多食品新标准解读
  • 食品中霉菌检测及微生物检测会遇到哪些问题?又该如何解决?
    实验室霉菌检测中常见问题霉菌: 不是分类学上的名词,而是一些丝状真菌的通称,属真菌的一部分;其对人类具有双重性,有利的方面是它可以用来酿造、工业发酵、抗生素和酶制剂的生产等,不利方面是它能引起农副产品、食品、原料及器材的腐烂,也感染并引起人类和动、植物的多种疾病,少数种类,如黄曲霉,能产生黄曲霉毒素,黄曲霉毒素是一种致癌物质,危害人、畜的健康和生命。因此,霉菌的检测对于食品的安全性很重要。食品中常见的霉菌:毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属等。检测中的注意事项: 1、取样的代表性。 2、取样工具的无菌。空气中霉菌的孢子含量很高,所以,取样的工具、容器等要经过严格的高压灭菌。 3、检样的方法。 (1)由于霉菌易被携带,所以,检样时操作人员应尽量避免自身携带的可能。 (2)样品的均质及充分振摇。因为有些孢子是连成串的,故均质和振摇能使其充分散开,同时,在各梯度连续稀释时,也要用灭菌吸管反复吹吸几次,使孢子充分散开。 4、培养温度和时间。培养温度25-28℃培养,3天后观察,需培养观察一周。 霉菌检验中常用的培养基:孟加拉红琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、察氏琼脂、高盐察氏琼脂等。 5、检样中常见的问题。 (1)不同稀释度计数结果相同;(2)不生长或生长很好连成片无法计数;原因:①稀释时未经反复振摇,吹吸,导致孢子未充分散开,影响了计数的结果。②由于培养基不适宜,pH值低等,致使生长较慢。③观察时间的掌握。真菌生长较慢,故需5d后才能观察出结果。每天都要观察结果。微生物操作中常见问题的讨论与分析1、划不出单个菌落的原因: (1)平板上有过多的水分;(2)划线时接种环未经反复灼烧; (3)多区划线,三区或四区划线。2、涂布和倾注的区别:涂布利于观察,但由于涂布棒上会带有少量的菌液,可能影响计数的准确性;倾注更为准确,但不利于观察菌落的状态。Beuchat和Matsuda等人分别对这两种方法作了大量比较试验后发现,对霉菌计数来说,涂抹法有以下几方面优越于倾注法:①培养出的霉菌菌落数较多;②培养所需的时间较短;③霉菌孢子、菌落形态特征发育完全,便于鉴定。这是因为绝大多数霉菌是好氧的,在培养基表面生长快,发育好,而混在培养基中发育就受影响,而且在培养基倾注时霉菌孢子易受热损伤。3、培养基的选择:培养基的选择应根据实验材料和检验目的来确定。目前国标方法中使用的培养基有:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO),其中PDA和RBC适合于一般的霉菌和酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。在日常检测中我们发现,有些常见的耐高渗性霉菌,如局限曲霉、谢瓦曲霉、赤曲霉、Wallemia等在PDA、RBC上生长非常缓慢或不长,而这些菌在高渗培养基如M40Y、DG18(M40Y琼脂配方:蔗糖400g,麦芽提取汁20g,酵母提取汁5g,琼脂20g,氯霉素50mg,蒸馏水1000ml;DG18琼脂配方:葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO41g,MgSO47H2O 0.5g,氯霉素0.1g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH6.5)上则正常生长。孢子、形态特征发育良好,而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生长,因此,若能同时采用PDA和M40Y(或DG18)分离培养各类样品中的霉菌,将能更全面地反映出污染霉菌的菌相。特别是对干燥食品、高糖食品、淹渍食品等,更有必要同时采用M40Y或DG18。由于霉菌中很多种类不会产生有毒的霉菌毒素,危害较小,而有的菌株即使污染数量不多,但其产生的霉菌毒素却危害较大,因此仅作霉菌计数并不能全面反映其危害程度,重要的是要知道污染菌的菌相,才能更好地判断被污染食品的安全程度。为此,国外有些研究者设计出各类选择性培养基,可以识别产毒的霉菌。如AFPA培养基(配方:酵母提取汁20g,蛋白胨10g,柠檬酸铁铵0.5g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH5.6)用于分离黄曲霉毒素产生菌高污染率的食品。产黄曲霉毒素的菌株黄曲霉和寄生曲霉在AFPA上30℃培养2~3天就形成背面有亮橙黄色的特征性菌落,非常容易识别。有人利用该培养基分离黄曲霉高污染食品花生、玉米等,取得了满意的结果。因此,针对不同样品,有目的地设计出相应的选择性培养基,以筛选污染菌中的危险菌群,将是一个值得探索的方向。4、 培养基配制时应注意的问题:(1)灭菌温度要严格控制,按照要求灭菌,尤其含糖量较高的培养基温度不应太高,过高会导致糖分焦化,影响质量;(2)琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分;(3)培养基不能反复灭菌,反复灭菌也会导致营养成分的破坏;(4)含琼脂的培养基灭菌后,要摇匀。5、 平板的保存:大多数平板如 VRBA、DC、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。
  • 如何优雅的完成噬菌体的扩增和定量实验?实验汪必备! | 小奥课堂
    开学季又到了实验汪又要去“搬砖”了如何优雅的搬砖还不用求助师兄师姐当然是关注“小奥课堂”栏目啦今天小奥为各位介绍的 是一篇干货满满的 噬菌体展示方法实践手册 “噬菌体的扩增与定量” 这是一份难得的学霸笔记 请收好(收藏)! Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术,其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术,在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用,极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用,还能和传统的动物免疫技术相结合,与纳米抗体、全人源转基因小鼠发现平台进行有效对接,能够广泛用于抗体、抗体偶联药物和CAR-T/TCR-T等领域。本文将针对噬菌体展示技术的噬菌体增殖和扩增实验细节进行探讨、分享具体实验过程的经验,以其原理为根本来指导实验过程,以精益求精的实验过程,增加噬菌体展示技术在抗体发现过程中的成功率。Part 2 ——噬菌体文库 扩增及展示的基本原理 | 现在普遍应用的噬菌体展示抗体片段的体系称之为“3+3体系”(3为噬菌体的p3衣壳蛋白);3+3代表着p3衣壳蛋白有两个来源:噬菌粒(phagemid)M13KO7辅助噬菌体(Helper Phage)菌粒(phagemid)上的p3蛋白融合了抗体片段的基因,是文库多样性的关键;辅助噬菌体(Helper Phage)上的p3蛋白为噬菌体天然的p3蛋白。*噬菌粒是一种比较小的质粒载体,在大肠杆菌感受态中有较高的转化效率,并且能够在大肠杆菌中扩增。 含有噬菌粒的大肠杆菌被辅助噬菌体(Helper Phage)感染后,会利用大肠杆菌的酶系统、原料和能量进行扩增,最终包含噬菌粒的噬菌体从大肠杆菌释放出来,该子代噬菌体的p3衣壳蛋白会展示抗体片段。Part 3 ——在噬菌体扩增过程中 遇到的难题和对应的解决方案 | 噬菌体的建库过程实际上是抗体片段基因多样性的传递过程: 从血样中抗体基因的多样性传递到噬菌粒的过程,是噬菌粒文库构建的内容; 从噬菌粒的多样性传递到含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性,是噬菌粒质粒电转大肠杆菌的内容; 从含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性传递到噬菌体的多样性则是噬菌体扩增的内容,也是本文实验经验关注的问题。噬菌体的扩增最终目的是将噬菌粒中单一拷贝的抗体片段基因通过噬菌体的扩增过程变成10-100个拷贝,且这些拷贝基因能够在噬菌体表面的p3蛋白上展示出抗体蛋白片段。在噬菌体的扩增过程要使得文库的多样性得以保持和传递,需根据文库的初始大小确定在扩增过程中含有噬菌粒的大肠杆菌的数目和体积,对应加入的辅助噬菌体的多少进行有效感染,以及扩增后加入多少含有噬菌粒的噬菌体进行淘选等需要一一计算评估的问题,不同文库大小的噬菌体库在扩增过程中需要的扩增体积是不一样的。一份固化的实验方案很有可能会导致文库多样性的丢失。 要弄清楚这些问题,首先要具备以下几点基础的前置知识:(??以下内容全部划重点!!!)1. TG1大肠杆菌在OD600的读数:1OD代表的菌浓度为1e9个/ml。2. 噬菌体/辅助噬菌体在TG1处于对数生长期时有比较好的感染效率,TG1处于对数生长期的OD600值在0.4-0.8。3. TG1在对数生长期的生长速度是20分钟一代,需要密切关注TG1的生长,及时取菌进行实验。4. 辅助噬菌体和TG1的比值MOI在20:1时能够保证所有TG1被感染上。5. 含有噬菌粒的噬菌体能够感染正常的TG1大肠杆菌,并将噬菌粒留在TG1中并随着TG1的扩增进行扩增,在无辅助噬菌体的情况下无噬菌体的扩增。6. 噬菌粒质粒含有青霉素抗性,辅助噬菌体含有卡那霉素抗性。7. 含有噬菌粒的噬菌体可以通过感染正常的TG1,梯度稀释涂青霉素抗性的琼脂板进行滴度测定。8. 3+3模式下含有噬菌粒的噬菌体展示出p3融合抗体片段蛋白的效率比较低,只有5%-10%,在进行淘选时,加入的噬菌体的滴度应是文库多样性的100倍以上。 还有一个比较关键的问题是噬菌体作为一种病毒,很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境,从而感染F因子阳性的大肠杆菌。 (心疼一下生物汪,冒着生命危险搬砖啊!) 在噬菌体展示的相关实验需要在相对封闭的实验室进行以避免噬菌体对于大肠杆菌的污染,特别是在培养正常的TG1大肠杆菌时。噬菌体的灭活方式通常是紫外照射半小时以上。(合格的生物汪,是个莫得感情的病毒杀手!) Part 4 ——噬菌体扩增和定量 具体实验过程的分享 | 以下是以一个文库大小为1E9的噬菌体文库进行扩增的实验方案。*如果文库过大或者过小,可依比例增减扩增体积。 Day 1(搬砖秃头的第一天)1. 取含有噬菌粒的TG1菌种1ml (菌数目为1E10)加入含有100ml 2xYT-GA培养基250ml摇瓶中,使用奥豪斯摇床37度220rpm摇菌摇床至OD600为约0.5。2. 取OD600为约0.5的菌液20ml (菌数目为1E10),按照MOI为20:1加入pfu为2E11的辅助噬菌体M13 K07,37度220rpm振荡半小时进行感染。3. 取感染后菌液到50ml离心管使用奥豪斯离心机5816R 3200g离心10分钟,去除培养基,以除去培养基中的葡萄糖对噬菌粒中p3蛋白融合了抗体片段蛋白表达的抑制。4. 用2xYT-AK培养基重悬菌团,将培养基加至400ml,用1L摇瓶在30度220rpm过夜摇菌。 Day 2(搬砖秃头的第二天)5. 将400ml菌液均分至大的离心瓶中,使用奥豪斯离心机5816R 10000g离心10分钟,取上清,10000g再次离心10分钟,去除残留的菌体碎片。6. 取90ml PEG溶液加入400ml上清液中,在4℃孵育1小时并伴随着柔和的振荡,然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃10000g离心1小时。7. 去上清,用10mlPBS重悬噬菌体后,加入2.5ml PEG溶液再次沉淀.8. 冰上孵育20分钟,然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃ 10000g离心半小时。9. 去上清液,用吸水纸吸干残留的PEG溶液,加入1-2ml的PBS重悬噬菌体,进行滴度测定。滴度测定:1. 在分隔的实验室,取正常的TG1大肠杆菌加入2xYT的培养基中,使用奥豪斯摇床摇菌至OD600值为0.5,如未能及时使用,可放入4℃ 2小时以备用。2. 将步骤9中扩增噬菌体原液用PBS稀释1E5-1E7倍。3. 取10ul噬菌体稀释液加入490ul OD600为0.5的TG1大肠杆菌中,使用奥豪斯摇床 37℃ 220rpm振荡半小时进行感染。4. 取感染液50ul均匀涂抹在含有2xYT-GA的琼脂板中,晾干后放入37℃培养箱过夜。并将未感染TG1大肠杆菌涂抹琼脂板作为阴性对照。 Day 3(搬砖秃头的第三天)5. 数2xYT-GA的琼脂板中的克隆数,根据稀释倍数计算扩增噬菌体的滴度 噬菌体滴度(pfu/ml)=(克隆数*10*50/10ul)*稀释倍数6. 取1E11-1E12的噬菌体用于淘选。试剂配方:2xYT培养基:Yeast Extract 10.0 g/L+Tryptone 16.0 g/L+NaCl 5.0 g/L2xYT-GA培养基: 2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+ 1% (W/V)葡萄糖2xYT-AK培养基:2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+50 μg/ml卡那霉素PEG溶液:20% (w/v) PEG 6000, 2.5 M NaCl Part 5仪器推荐:(做科研民工的每一天都不孤单,因为有小奥陪伴)噬菌体作为一种病毒,很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境,需要封闭的实验室,实验室所有的仪器需单独使用。奥豪斯恒温轻负载培养摇床转速范围为100-12—rpm,体积集约,功能强大,可为您的样品提供优异的摇荡效果:此外,噬菌体展示实验的过程中会有不同体积、不同转速和需要4℃条件的离心步骤,如果以多 台离心机满足实验的需求会造成实验设备资产的空置,造成极大的浪费!!!奥豪斯5816R多功能离心机和可选转子为噬菌体相关实验提供便利,一台离心机满足所有实验需求!接下来,小奥带你乘坐“帮你省科研经费”这辆车教你正确薅奥豪斯的羊毛 德国原装进口功能强大、离心效果优异的奥豪斯Frontier™ 离心机家族 推出“买一赠一”促销活动促销型号如下微量高速离心机FC5515R(冷冻型号)微量高速离心机FC5515(非冷冻型号)全新紧凑型微量离心机FC5513现在上车,还来得及哦!详情请联系奥豪斯哦! 想了解更多关于奥豪斯Starter™ 系列产品信息?请进入「阅读全文」留下信息,我们的专业工程师将火速赶来,为您服务! ▼
  • 生物量监测在微生物(细胞)培养条件优化的应用
    上一篇推文,介绍了WIGGENS的CGQ生物量在线监测系统,在微生物(细胞)效能评价/菌种筛选的应用。 本期介绍生物量监测在微生物(细胞)培养条件优化中的应用。培养基为微生物(细胞)的生长提供环境条件以及碳源,氮源,生长因子等。培养基具有通用性,但每种培养物都有特殊性。在通用培养基的基础上针对培养物的特性做适当的调整或成分添加,对目的产物的高效产出,具有重要正作用。 下图是德国法兰克福歌德大学,使用CGQ生物量监测系统对Saccharomyces cerevisiae (一种酿酒酵母)在不同碳源组分中的生长曲线。 三种碳源Glc(葡萄糖)、Gal(半乳糖)、Mal(酰胺)不同浓度对酿酒酵母的生长有着明显的影响,对迟缓期和对数期的影响显著。碳源各组分浓度不同,对酿酒酵母进入平台期的时间甚至有超过6小时的差距影响。这对注重效率的工业发酵来说,减少迟缓期的时间段,有着重要的参考意义。 下图是,在M9培养基中,通过加入不同浓度的甘油,Escherichia coli (大肠杆菌)的生长曲线 从上图大肠杆菌的生长曲线可以看出,在M9培养基中,甘油浓度是对大肠杆菌最终生长量的最大影响因素。0.4%的甘油浓度对比0.1%的甘油浓度,对数生长期有明显提升,最终得到的生物量也是低浓度甘油的4倍以上。 下图是通过培养过程的摇瓶补液,CGQ进行的实时生物量监测。 在大肠杆菌培养中,通过LIS摇瓶补液系统,在摇瓶培养过程中进行在线补入缓冲液,缓冲液对pH值进行了调节。在使用LB培养基培养大肠杆菌的过程中,对生物量的限制的最大因素不是培养基组分,而是pH值,持续的进行pH调节,可以有效的增加生物量,提高培养基的利用率。更多的CGQ生物量监测应用,请参考如下文献:[1]Tripp et al (2017):Establishing a yeast-based screening system for discovery of human GLUT5inhibitors and activators (Nature – Scientific Reports)[2]Bruder, S. &Boles, E. (2017): Improvement of the yeast based (R)-phenylacetylcarbinol productionprocess via reduction of by-product formation (Biochemical EngineeringJournal).[3]Gottardi et al. (2017):De novo biosynthesis of trans-cinnamicacidderivatives in Saccharomycescerevisiae (AppliedMicrobiology and Biotechnology).[4]Bracharz et al. (2017):The effects of TORC signal interference on lipogenesis in theoleaginous yeast Trichosporonoleaginosus (BMCBiotechnology). [5]Bruder et al. (2016):Parallelised onlinebiomass monitoring in shake flasks enables efficient strain and carbon sourcedependent growth characterisation of Saccharomycescerevisia (MicrobialCell Factories).
  • CFDA发布《持续葡萄糖监测系统注册技术审查指导原则》
    p style=" text-indent: 2em " 3月21日,国家食品药品监督管理总局(CFDA)发布了《持续葡萄糖监测系统注册技术审查指导原则》(2018年第56号),旨在加强医疗器械产品注册工作的监督和指导,进一步提高注册审查质量。 /p p style=" text-indent: 2em " 附件: a href=" http://img1.17img.cn/17img/files/201803/ueattachment/4780f084-c8b6-4137-ad80-3a57e443a08d.doc" 持续葡萄糖监测系统注册技术审查指导原则.doc /a /p
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