蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性[~119829~][~119828~]
蝮蛇【英文名】Pallsas Pit Viper【别名】虺、土虺蛇、土锦、灰地匾、地扁蛇、土球子【来源】药材基源:为蝰科动物蝮蛇除去内脏的全体。拉丁植物动物矿物名:Agkistrodon halys (Pallas)采收和储藏:春夏间捕捉。捕得后剖腹除去内脏,盘成圆盘形,烘干。亦可鲜用。【原形态】蝮蛇,全长60cm左右。头略呈三角形,与颈区分明显,背面浅褐色到红褐色,正脊有两行深棕色圆斑,彼此交错排列略并列,背鳞外侧及腹鳞间有1行黑褐色不规则粗点,略呈星状;腹面灰白,密布棕褐色或黑褐色细点。鼻间鳞宽短,排成⊥形;眶前鳞2,眶后鳞2(3),眶璨来新月形,颞鳞2+4(3);上唇鳞2-1-4(2-1-3、3-1-4)式。背鳞21(23)-21-17(15)行,中段最外行平滑或均具棱;腹鳞137-173,肛鳞完整;尾下鳞29-54对,少数为单行。【生境分布】生态环境:生活于平原、丘陵及山地,活动于稻田、耕作区、草地以及住宅附近。以鱼、蛙、鸟、鼠等为食。资源分布:广泛分布于我国各地。【性状】性状鉴别,本品呈圆盘状,盘径6-8cm,头居中体背黑灰色,有的个体有圆形黑斑,背鳞起棱,多脱落。腹面可见剖除内及的沟槽,脱落的腹鳞长条形,半透明。尾部较短,长6-8cm。质坚韧,不易折断。气腥。骨骼特征:鼻骨前端较突出,躯干椎的棘突较低矮,基本不后倾,椎体不突尖端较平截,多数成长短不等的竖刀状,尾椎脉突侧面观亦成短竖刀状。显微鉴别(1)鳞片;呈长椭圆形,长径3.2-3.5mm,短很能够1.2-1.3mm,有背棱,端突2个,长径178-196μm,短径107-221μm。乳突长三角形、长条形或多角形。(2)扫描电镜观察:背鳞表面无突起,却有纵向树枝交错排列的纹理,其表面具网格状纹饰,端窝2个,其表面有网状纹饰,有背棱。【化学成份】蝮蛇全体含胆甾醇(cholesterol),牛磺酸(taurine),脂肪,脂质,挥发油等。其中脂肪酸类分以油酸(oleic acid),亚油酸(linoleic acid),花生四烯酸(arachidonic acid)等不饱和脂肪酸含一多,另见微量的奇数(碳)脂肪酸。脂质类成分以磷脂(phospholipid)和胆甾醇居多,内脏中以三酰甘油(triglyceride)和胆固醇居多。同时在蛇体及内脏中也发现有磷酸乙醇胺(phosphorylethanolamine),磷酸胆碱(choline phosphate),磷酸丝氨酸(phosphoserine),磷酸肌醇(phosphoinositide),神经鞘磷脂(sphingomyelin)等种种磷脂。蝮蛇肛门腺分泌物有胆甾醇,癸酸(decanoic acid),二十一(烷)酸(heneicosanoic acid),二十(烷)酸(eicosanoic acid),十八(烷)酸(octadecanoic acid),顺-9-十八烯酸(cis-9-octadecenoic acid),十七(烷)酸(heptadecanoic acid),十八(烷)酸(hexadecanoic acid)等。【药理作用】毒性:粗制蛇毒成分复杂,作用亦很复杂。一般认为,蝮蛇毒是以血循毒为主的血循、神经混合毒。被咬伤的病人除局部出现肿胀、疼痛外;由于神经毒,常发生畏寒、目糊、眼睑下垂、颈项牵引感,当然更重要的是引起呼吸困难如双吸气、屏气、点头状或鱼口样呼吸等。呼吸麻痹是早期死亡的主要原因。动物试验也证明蝮蛇毒具有明显的神经毒的作用。另一方面,蝮蛇毒具有显着的血循毒,单纯的人工呼吸并不能延长动物的生存时间。临床病人也常出现面色苍白、多汗、心率加速、四肢厥冷、血压下降等严重中毒性休克症状。虽然有人认为江苏蝮蛇毒主要也是神经毒(据他们观察呼吸麻痹是主要症状及致死原因),但一般仍认为血循毒是主要的。它能大量释放血管活性物质如组织胺、5-羟色胺及缓动素(Bradykinin)等,破坏红细胞,增加毛细血管通透性,使血浆及体液大量丧失,血容量不足。更加严重的是对心脏的直接损害,被咬伤的病人心电图有窦性心律不整、异位节律、P波变尖、R彼低电压、传导阻滞、S-T段下降、T波扁平或倒置等变化,联系到实验动物中毒死亡后的尸解情况--心肌出血、心肌纤维浊肿断裂,可以认为蝮蛇毒对心脏的毒性是循环衰竭引起死亡的主要原因。由于休克、溶血及对各脏器的直接损害(如肾等),可发生酸中毒、急性肾功能衰竭等。严重咬伤病人常出现酱油色尿以及尿中蛋白、管型、隐血均呈阳性等。防治感染也是非常重要的问题。竹叶青、龟花蛇毒亦为以血循毒为主的混合毒。一般局部症状较重,而全身症状较轻,如能及时正确抢救,死亡率较低。【炮制】蝮蛇霜:取蝮蛇煅烧存性,研成粉末。【性味】味甘;性温;有毒【归经】脾;肝经【功能主治】祛风;通络;止痛;解毒。主风湿痹痛;麻风;瘰疬;疮疖;疥癣;痔疾;肿瘤【用法用量】内服:浸酒,每条蝮蛇用60度白酒1000ml浸3个月,每次饮5-10ml,日饮1-2次;或烧存性研成细粉,每次0.5-1.5g,日服2次。外用:适量,油浸、酒渍或烧存性研末调敷。【注意】阴虚血亏都慎服,孕妇禁服。
老树发新枝——血凝抑制试验原始记录改版记为评估家禽免疫效果,基层(市级、县级)兽医实验室每年需要对大量的家禽血清样品开展禽流感和新城疫免疫抗体监测,经常开展的项目有禽流感H5Re-6、H5Re-7、H7N9、ND等,一般县级实验室每年检测量为3000+份次,市级实验室每年检测量更是高达20000+份次。如何填写血凝抑制试验原始记录成为一个非常头痛的问题。一、实验过程简介http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015093020101837_01_1627156_3.jpg从整个检测过程看,只需要80min即可完成实验。但由于样品量大,一般每次检测120份样品×4个项目=480项次,加样、稀释、振荡等耗时较多,一般早上开始实验,判定结果均需要到下午4时以后。二、原来的表格格式及存在的问题原来的原始记录格式如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015093020103893_01_1627156_3.jpg该原始记录表信息较全面,但存在以下几个问题:一是不能真实反映实验结果,记录的是经实验人员观察并进行判断后的凝集程度,而且容易篡改;二是数据记录量非常大,每个检测需要记录12孔的反应程度,每个孔填写“-”、“+”、“++”、“+++”或“++++”。按照每孔填写4划计算,每个检测需50划才能完成填写,全年3000+份次检测量,需填写15W+划以上;三是大量原始记录事后誊写而非实时记录。每次实验一般检测120份样品(即480个检测),实验结束已经接近下午下班。如果如实在原始记录上填写,加班3小时也无法完成记录工作。于是经常出现不规范的操作:或者只记录一个结果,每个孔的凝集程度事后估摸着填写;或者非常潦草地在草稿上记录,然后誊写到原始记录上。种种做法均不符合资质认定及考核的要求;四是检测过程中部分信息仍然不全,如抗原的实际用量。三、原始记录格式的改进针对上述问题,对原始记录格式及记录方法作了较大改动,具体内容如下:1.将常用的4个检测项目放在一张原始记录表上;2.增加检测过程的记录,尽量达到“通过原始记录可以复原实验”的目的;3.删除原先工作量最大的每个样品12孔的凝集程度的记录;4.事先能确定的信息,通过电脑打印;事先不能确定的信息,通过手写记录;5.增加拍照环节,在进行判定结果的同时,对反应板进行拍照,并将照片作为原始记录的一部分。通过上述改动,判定结果时只需记录一个结果,外加拍一张照片即可,基本可以做到实时记录。忙时可以两人同时操作,一个记录一个拍照,绝对搞定。改版后的原始记录如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509302012_568857_1627156_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509302012_568858_1627156_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509302012_568859_1627156_3.jpg虽然根据有关要求对原始记录进行了改进,但肯定还存在着很多不妥之处,希望各位批评指正!
请问,关于血凝仪目前哪种性价比好些,包括试剂用量,仪器性能,维护,价格,操作方便等方面。谢谢!
[align=center][/align][align=left][b] 摘要:目的 [/b]确立不同稀释液对凝血因子效价检测的影响,研究因子效价检测的稀释方法,从而完善因子类血液制品效价检测的方法。 [b]方法 [/b]对同一批和连续生产的10批人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物样品进行全自动血凝仪法的效价检测,分别选用全自动血凝仪稀释液和含1%人血白蛋白稀释液进行检测,统计10次以上的检测结果以确定不同稀释液之间的差别。 [b]结果 [/b]本实验确定了在人凝血因子Ⅷ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ的样品进行稀释,无论是对同一批质控品的测定还是对连续批次样品的测定,检测结果之间存在较大的差别。而在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ的样品进行稀释,同一批质控品和连续批次样品检测结果之间差别较小。[b]结论 [/b]因子类血液制品效价检测时,同一样品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别,应对血凝仪是否可用于因子类血液制品进行评估,并应建立起正确的检测操作规程。[/align][b] 关键词: [/b]凝血因子; 稀释液; 效价测定 目前国内血液制品的生产是以健康人血浆为原料,经过分离纯化和病毒灭活制成,主要分为三大类,人血白蛋白、人免疫球蛋白类产品、人凝血因子类产品。国内已上市或在研的人凝血因子类产品主要有人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人纤维蛋白原、人纤维蛋白粘合剂、人凝血因子Ⅸ、人抗凝血酶Ⅲ等。人凝血因子Ⅷ主要用于防治甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状病人的手术治疗。人凝血酶原复合物主要有效成分为人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ,主要用于治疗主要用于乙型血友病、 维生素K依赖的凝血因子缺乏症等病症的治疗。 人凝血因子Ⅸ主要用于防治乙型血友病和获得性凝血因子Ⅸ缺乏而致的出血症状病人的手术治疗。因子类血液制品是血液中凝血因子的高纯度浓缩物,在进行效价测定时需要对样品进行稀释,而稀释液中蛋白含量的不同对其检测结果有着影响。因子效价测定方法有一期法、二期法和发色底物法。一期法是目前应用最广泛的检测方法,系用人凝血因子缺乏血浆为基质,在APTT试剂和氯化钙的参与下,根据凝血因子国家标准品和供试品的凝集时间来计算供试品中的人凝血因子效价,实际检测过程中将基于一期法原理的人凝血因子效价测定法分为三种方法,即手工法、半自动血凝仪法、全自动血凝仪法。全自动血凝仪只是对一期法中各反应试剂的加入顺序进行了修订以便实现仪器的自动操作。相对于手工法检测,消除了很多主观因素。在日常工作中,当使用不同种类的稀释剂而采用相同的检测原理和方法进行效价测定应不会对测定结果产生影响,但实际工作中发现使用不同种类的稀释剂对效价测定结果有一定的影响。在人凝血因子Ⅷ效价检测过程中,采用手工法、半自动血凝仪法、全自动血凝仪法进行人凝血因子Ⅷ效价的比对试验,发现手工法、半自动血凝仪法检测结果一致,这两种方法比全自动血凝仪法的检测结果高20%以上。血液制品的原料来源于人血浆,受原料限制,一直较为稀缺,尤其是当前人凝血因子Ⅷ的生产量远远无法满足血友病患者的需求[sup][[/sup][sup]1-5[/sup][sup]][/sup],不同检测方法间20%以上的检测差别可能影响20%的产品收率,所以建立起因子类产品效价准确的检测至关重要。[b][b]1 实验仪器与试剂1.1 仪器[/b][/b]Stago-compact全自动血凝仪(法国Diagnostica Stago公司),漩涡振荡器(美国Thermo Scientific公司)。[b][b]1.2 试剂[/b][/b]人凝血因子Ⅷ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅸ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),APTT试剂(法国Diagnostica Stago公司),Owren-Koller(稀释液)(法国Diagnostica Stago公司),0.025 mol/L氯化钙溶液(法国Diagnostica Stago公司),Desorb U(清洗液)(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅷ国家标准品(批号20100101),人凝血酶原复合物国家标准品(批号20130306),生理氯化钠溶液(石家庄四药有限公司),咪唑(天津市巴斯夫化工有限公司),氯化钠(天津市巴斯夫化工有限公司),枸橼酸钠(台山新宁制药有限公司),人血白蛋白(公司自产)。[b][b]2 方法2.1 人凝血因子Ⅷ不同稀释液稀释效价测定2.1.1 人凝血因子Ⅷ供试品Owren-Koller(稀释液)稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.1.2 人凝血因子Ⅷ供试品药典稀释液稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标同2.1.1人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ不同稀释液稀释效价测定2.2.1 人凝血酶原复合物供试品Owren-Koller(稀释液)稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《STAGO Compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2.2 人凝血酶原复合物供试品药典稀释液稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标同2.1.1。人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]3 结果3.1 人凝血因子Ⅷ不同稀释液稀释效价测定结果[/b][/b] 2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ为泰邦公司人凝血因子Ⅷ产品的质控品,取自正常生产的产品,用国家标准品标定后用作工作质控品。在进行人凝血因子Ⅷ效价测定时,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ进行再稀释。检验结果见表1,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表1 FⅧ质控品两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,586,268]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141920_02_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图1:[align=center][img=,488,300]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141921_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图1 FⅧ质控品两种稀释液检测结果对比[/align] 选取泰邦公司生产的连续10个批次的人凝血因子Ⅷ产品,进行人凝血因子Ⅷ效价测定,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ进行再稀释。检验结果见表2,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表2 连续10批FⅧ两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,580,273]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141921_03_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图2:[align=center][img=,499,310]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141922_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图 2 连续10批FⅧ两种稀释液检测结果对比[/align][b][b]3.2 人凝血酶原复合物不同稀释液稀释效价测定结果[/b][/b] 2015ZK0901批人凝血酶原复合物为泰邦公司人凝血酶原复合物产品的质控品,取自正常生产的产品,用国家标准品标定后用作工作质控品。在进行人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定时,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ进行再稀释。检验结果见表3,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表3 PCC质控品两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,580,269]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141923_01_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图3:[align=center][img=,548,288]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141923_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图3 PCC质控品两种稀释液检测结果对比[/align] 选取泰邦公司生产的连续10个批次的人凝血酶原复合物产品,进行人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ进行再稀释。检验结果见表4,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表4 连续10批PCC两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,573,259]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141947_01_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图4:[align=center][img=,548,327]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141947_03_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图4 连续10批PCC两种稀释液检测结果对比[/align][b][b]4 讨论[/b][/b] 本实验确定了在人凝血因子Ⅷ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ的样品进行稀释,无论是对同一批质控品的测定还是对连续批次样品的测定,检测结果之间存在较大的差别,另外对FⅧ质控品两种稀释液检测结果运用软件SPSS17.0进行均值单因素ANOVA比较,计算P值,P<0.05表明两种方法的结果有显著性差异,含有蛋白的稀释液的检测结果明显高于不含蛋白的稀释液。而在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ的样品进行稀释,同一批质控品和连续批次样品检测结果之间差别较小,另外对PCC质控品两种稀释液检测结果运用软件SPSS17.0进行均值单因素ANOVA比较,计算P值,P>0.05表明两种方法的结果无显著性差异。在使用全自动血凝仪进行人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物等因子类血液制品效价检测时,一般按照仪器的使用说明书和配套试剂进行稀释检测,但是忽视了血凝仪的开发目的是用于临床血浆样品的检测,而血浆与高纯度的血液制品浓缩物是不同的,用检测血浆样品的方法进行因子类血液制品的效价检测可能影响检测结果。因子类血液制品效价检测时,同一样品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别,应对血凝仪是否可用于因子类血液制品进行评估,并应建立起正确的检测操作规程。因子类血液制品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别可能跟产品本身的性质有关,因子类血液制品经过分离、纯化,去除了众多的杂质蛋白,为高纯度的浓缩物,活性较高,但蛋白质含量较低,人凝血因子Ⅷ的蛋白质含量约为0.1%,人凝血酶原复合物的蛋白质含量约为2.3%,而临床血浆样本的蛋白质含量约为5%,, 人凝血因子Ⅷ加入含1%人血白蛋白的稀释液后对FⅧ效价测定影响较大,PCC中加入含1%人血白蛋白的稀释液后对FⅨ效价测定影响较小,可能是人凝血因子Ⅷ的蛋白质含量远小于血凝仪设计用于检测的血浆样本的蛋白含量,故建立不同蛋白质浓度梯度的稀释液对因子效价进行测定,从而确认蛋白质浓度对因效价测定的影响。[b]参考文献:[/b]Cheng E, Jinzenji D, Lorthiois AP, et al. Purification of coagulation factorⅧ using chromatographic methods. Direct chromatography of plasma in anion exchange resins . Biotechnol Lett, 2010, 32(9):1207-1214.李策生, 周志军, 胡勇, 等. 人凝血因子Ⅷ中试纯化工艺的质量控制 .中国生物制品学杂志, 2013, 26(10):1508-1512.冉曙光, 刘文芳, 赵辉. 凝血因子Ⅷ浓缩物的制备及安全性和有效性 .中国输血杂志, 2008, 21(2):156-159.倪道明, 朱威. 血液制品 . 北京: 人民卫生出版社, 2013:21.王卓, 赵雄, 吕茂民, 等. 血液制品的现状与展望 . 生物工程学报, 2011, 27(5):730-746.[b] [/b]
今天做了一个感冒灵颗粒的鉴别,样品点能与对照品扑尔敏点对上,但是就是与对照品对己酰氨基酚难对上,药典要求是15ul,我把对照品的量减少了,样品的量加大了一倍,也不是很容易找到,请问这是什么原因?
我发这个贴会不会被删?http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif不知道大家怕不怕蛇,前几天在路上遇到一条小青蛇,然后各种吃货流口水,我觉得这种生物还是不要吃为妙~不过百度一下,蛇的全身价值还蛮高。一、蛇泡酒蛇酒最大的功效是祛风活血、舒经通络,不少人易患老寒腿和关节炎等症,可以适当用蛇酒。在泡酒时还能添加一些同类补肝肾,强筋骨的药材,如枸杞、杜仲、伸筋草等。专家提醒,蛇酒不是所有人都适合饮用,有心血管疾病、高血压患者和孕妇要慎用或禁用。二、蛇胆专家建议市民不要生吞蛇胆。他就遇到过吃了蛇胆后不久就全身过敏起疙瘩的人,幸亏后来救治及时,如果晚了有可能有生命危险。因为鲜蛇胆含许多生物酶等活性成分,会引起过敏反应,另外蛇胆中还可能有多种寄生虫。确认该蛇无毒、安全的情况下,可将蛇胆弄破,用少许酒冲泡一下喝进去,因为酒燥热不仅能消毒,还可减轻一些蛇胆的寒性蛇胆性苦寒,具有祛风化痰,清肝明目的功效,按中医观点,感冒按病因可分为风寒型、风热型和暑热型三种,在用药上也有区别。而蛇胆川贝枇杷膏,适用于风热型感冒咳嗽,其表现为咳嗽咽痛,痰粘稠而且是黄色,化痰效果不错。而很多人咳痰是质稀白色泡沫,却跑去用蛇胆枇杷膏,这不仅不能止咳,还会加重病情。三、蛇油防瘙痒、蛇毒治中风冬眠前的蛇,体内贮存脂肪较多,经煎熬加工可制成蛇油。专家介绍,古人已使用蛇油来调理干燥、粗糙的皮肤,是一种传统的天然护肤佳品。此外,蛇油含有丰富的天然活性物质和抑菌成分,具有超强渗透力,可抑制皮肤表面有害细菌和螨虫生长,增强皮肤免疫调节功能。多用于治疗冻伤、烫伤,还能治疗一些皮肤病,预防皮肤瘙痒等。而蛇毒一方面能致人死亡,但另一方面却能抗凝血,能降低血压和治疗中风及各类因血栓导致的心脑血管疾病的功效。蛇皮质轻坚韧,花纹美观,常用来制作乐器的琴膜和鼓皮。四、蛇肉补肝肾武汉三镇,吃蛇的地方可不少,涮蛇肉、姜辣蛇、烤蛇、蛇羹等,老饕们都不放过。“其实蛇肉药性偏平,一年四季都能吃。”专家解释,蛇肉含人体必需的多种氨基酸,其中有增强脑细胞活力的谷氨酸,还有能够解除人体疲劳的天门冬氨酸等营养成分,是脑力劳动者的良好食物。蛇肉具有强壮神经、延年益寿之功效。其蛋白质中含人体必需的八种氨基酸,而胆固醇含量很低,对防治血管硬化有一定的作用,同时有滋肤养颜、调节人体新陈代谢的功能。烹饪方法不同,效果也不同。例如姜辣蛇,性质会偏热,冬天吃了全身暖和。春夏则可点清淡的蛇汤等。你吃过蛇吗?说着都毛骨悚然了。。。。
【序号】:1【作者】:赵慧【题名】:注射用尖吻蝮蛇血凝酶致过敏性休克1例【期刊】:中国药物警戒【年、卷、期、】2012年 第5期【全文链接】http://www.cqvip.com/qk/88279x/201205/41893434.html【序号】:2【作者】:刘恒 林文盛【题名】:临床药师对脑血管病住院患者健康教育的工作模式探讨【期刊】:中国药物警戒【年、卷、期、】2012年 第8期【全文链接】http://www.cqvip.com/qk/88279x/201208/42735918.html【序号】:3【作者】:孙旌文【题名】:注射用头孢曲松钠皮试致死亡1例【期刊】:中国药物警戒【年、卷、期、】2009年 第7期【全文链接】http://www.cqvip.com/qk/88279x/200907/31023673.html
102%(对照为奥美拉唑钠),后来领导指示我们用奥美拉唑对照再来用液相检测奥美拉唑钠,含量又和奥美拉唑钠对照算出来的结果差很多(奥美拉唑钠和奥美拉唑的转换系数考虑在内了),大家帮忙分析一下是什么原因啊
序号:1作者:石光;文章名:尖吻蝮蛇血凝酶药效评价及其作用机制的研究期刊:南方医科大学, 药理学, 2011, 硕士全文链接:http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=19&CurRec=10&recid=&filename=1012408259.nh&dbname=CMFDLAST2012&dbcode=CMFD&pr=&urlid=&yx=&v=MjQ0ODRITGU0RnRQSnBwRWJQSVI4ZVgxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkxtZllPUm9GeXZrVjd2UFZGMjY=序号:2作者:张汉湘; 郭曲练;文章名:血凝酶、去氨加压素对凝血功能的影响及两者的比较期刊:实用预防医学全文链接:http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=19&CurRec=13&recid=&filename=SYYY200802024&dbname=CJFD0608&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjM2NDZHNEh0bk1yWTlIWUlSOGVYMUx1eFlTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVJMbWZZT1JvRnl2a1ZML0pOalRTZDc=序号:3作者:张发明;文章名:应用奥美拉唑联合血凝酶治疗上消化道出血的临床疗效观察期刊:求医问药全文链接:http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=19&CurRec=1&recid=&filename=QYWA201302189&dbname=CJFDLAST2013&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=Mjc3NTZyV00xRnJDVVJMbWZZT1JvRnl2a1ZyclBORFRjYjdHNEg5TE1yWTVOYllSOGVYMUx1eFlTN0RoMVQzcVQ=序号:4作者:黄仲义;文章名:白眉蛇毒血凝酶与血凝酶的对比期刊:中国新药与临床杂志全文链接:http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=19&CurRec=2&recid=&filename=XYYL200507027&dbname=CJFD0305&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MDQzMTN5dmtWcnJMUFRUU1lyRzRIdFRNcUk5SFk0UjhlWDFMdXhZUzdEaDFUM3FUcldNMUZyQ1VSTG1mWU9Sb0Y=序号:5作者:郑颖; [url=searc
做一个甾体皂苷的含量测定,已经做第4次了,问题始终没解决,遂请教。具体要求如下:色谱条件要求:C8的柱子;流动相是乙腈-水(30:70);检测波长210nm。样品处理:取一定量,加75%乙醇超声10分钟,放冷,补足减失重量,滤过,即可。 对照品也是用75%乙醇溶解。测试经过如下:有同一厂家同一品种不同批号两批样品,用C8的柱子做,计算了下,含量合格,但峰实在太难看。怕峰形太差影响结果的准确性,但只有一根这C8的柱子,只好换根C18的柱子,调整流动相试试;峰形很好,进了一针其中一批的样品,计算了也合格,就编个序列继续做下去了。第四天才发现另一批不合格,只好第五天返工。第二次,问题出现了。返工时,同样的仪器,色谱柱,色谱条件,用原来配的对照品溶液,重新处理样品,不合格的那一批还是不合格,结果比上次测的还低一点,合格的那批也不合格了。又另配了对照品溶液,与之前配的浓度相差不大,但峰面积小多了。但是之前配的对照品峰面积反而变大了,估计是因为流动相微调,把之前没分开的小峰分开了,不至于斜着积分的原因吧。怀疑过对照品峰面积小,是不是冷冻(对照品要求冷冻保存哈)后没放至室温,直接称,导致称不准。样品怀疑过的原因 A:是不是不合格那一批取样量大了,浓度高了,导致过饱和,未全溶 B:样品是不是未混匀,取样代表性不够 C:超声时间,功率是不是有问题,是不是超声发热导致样品降解(对照品要冷冻保存嘛)E:是不是第二次配的溶样溶剂有问题第三次做,更蹊跷了。之前怀疑的样品的原因都排除了。减少,增加取样量;混匀样品;超声不同时间,用不同超声设备(不同功率);超声中换水,防止温度升高,水浴上回流处理样品;重配75%乙醇几次,用无水乙醇配也试了,还换用甲醇,样品溶液居然都没有目标峰。但之前两次配的对照品溶液峰高变化不大,高的还是高,低的还是低。第四次,就是今天。又重配了对照品溶液,换甲醇(色谱纯)溶解,居然对照品也没峰了,用75%乙醇溶解也是。之前配的对照品峰高还是老样子。将第一次配的对照品溶液跟这次提取的测不到目标峰的样品溶液混合,也能出目标峰。这根柱子换走另一个对照品测试,峰好得很。再换另一根柱,走样品和对照品,还是老样子,之前能出的还出,出不了的还是还是出不了。总结:一共配了三次对照品,浓度差异不大,但峰面积在变小,第三次就没了。样品也是,第一次合格的,第二次提取也不合格了,以后干脆目标峰也不出了。 分析:应该不是目标物不稳定的原因,因为第一次配的对照品,隔了一周,峰高依然变化不大,更何况新配的对照品溶液。 几次都是我操作,对照品溶液都超声助溶过,应该也是溶了的。而且用紫外扫过,稀释后吸收值会降低,虽然最大吸收波长在约205nm。其实用甲醇比用75%乙醇溶解要好些,几乎振摇就能溶,用75%乙醇必须稍超声一下。[/fo
本人现在用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]测硬脂酸镁,为什么对照品溶液中有很多杂峰,我用的正庚烷是色谱纯级别的,还有到最后计算是用不到对照品的浓度,那为什么还要进对照品?请各位老师指点
关于批准显齿蛇葡萄叶等3种新食品原料的公告2013年 第10号 根据《中华人民共和国食品安全法》和《新食品原料安全性审查管理办法》有关规定,现批准显齿蛇葡萄叶、磷虾油、马克斯克鲁维酵母为新食品原料。生产经营上述食品应当符合有关法律、法规、标准规定。 特此公告。 国家卫生计生委 2013年12月24日 显齿蛇葡萄叶等3种新食品原料 一、显齿蛇葡萄叶 中文名称显齿蛇葡萄叶基本信息来源:葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄(拉丁学名Ampelopsis grossedentata)食用部位:叶其他需要说明的情况1.食用方式:冲泡。2.卫生安全指标应当符合我国相关标准。 二、磷虾油 中文名称磷虾油英文名称Krill Oil 基本信息来源:磷虾科磷虾属南极大磷虾(Euphausia superba Dana)生产工艺简述以磷虾为原料,经水洗、破碎、提取、浓缩、过滤等步骤制得。食用量≤3克/天质量要求性状暗红色或红褐色透明油状液体总磷脂(g/100g)≥38DHA(g/100g)≥3EPA( g/100g)≥6其他需要说明的情况1.婴幼儿、孕妇、哺乳期妇女及海鲜过敏者不宜食用,标签、说明书中应当标注不适宜人群。2.卫生
一种新型防辐射化妆品 一种草莓防辐射化妆品在2008年通过国家发明专利申请,这一成果填补了我国防辐射领域没有日用化妆品的空白。据介绍,该专利是萃取了生长期在40-50天基本成型但还未成熟的绿色草莓中的莓多酚因子(ASPF)。采用“冻干技术”提炼并应用到化妆品基质当中的物理型全遮盖防辐射制剂。 据该专利发明人雅顿中国首席工程师胡水应教授日前在接受记者采访时表示:继美国太空辐射实验室的科学家们惊奇的发现常年执行任务的宇航员们平常饮食的草莓尽能帮助宇航员免遭宇宙射线的辐射后,为了攻克这一科技性的难题,胡教授结合自身多年在防辐领域的潜心研究,经过无数次的临床试验后发现,草莓中提取的多酚类抗氧化物质及维生素E群是抵御高强度的辐射,减缓紫外线辐射的关键所在。更震惊的研究发现,生长期在40-50天基本成型但还未成熟的草莓中的莓多酚因子(ASPF)含量竟是成熟上市草莓的11.67倍。其中的钾、镁以及维生素C含量是成熟草莓含量的15倍,是苹果、葡萄等水果的20倍之多。绿色草莓中富含的大量脂溶性维生素E群(包括有α、β、γ、δ四种生育醇),对辐射线中的αβγ三种射线有良好的中和作用,能有效隔离99.7%的电磁波辐射及危害。 据了解,莓多酚因子(ASPF)是一种生物类活性物质,具有较好的稳定性和安全性,添加到护肤品中能迅速渗透肌肤表面形成保护层,有效阻隔电脑、电视、手机及其他电子设备的辐射伤害。具有高效补水、滋润保湿、平衡油脂、收细毛孔、抗皮肤衰老等多种功效。 该负责人还表示,为了将该项发明尽快转化市场,国际一线品牌美国“雅顿”公司已经在中国成立了全球第五间合资研究与生产中心,特别针对亚洲人的肤质定向研制,预计2006年8月中旬由此批量生产的“雅顿”草霉防辐系列产品将在中国正式上市。他表示,一旦用草霉萃取物莓多酚因子(ASPF)研制成的防辐射化妆品大批量地进入市场,我国将是第一个实现利用化妆品防辐射的国家,而且也将是世界上率先采用植物萃取模式进行化妆品开发的少数国家之一。
因化学加工、人为添加及环境污染所导入食品中的有毒化合物容易被认识和预防,而许多以食品的天然成分形式存在的天然毒素,由于毒性大,且与食品混为一体,不容易被认识和确定,从而对健康威胁更大。笔者将它们分为内因毒素和外因毒素,那些由食品原料自身产生并带进最终食品中的为天然内因毒素;由食品原料以外其它天然方式产生的且污染食品的或被食品蓄积的为天然外因毒素。天然内因毒素食用的少数动、植物在生长过程中,某个器官或部位会产生一些对人体有害的物质,它们可随着生长期而被破坏或逐渐蓄积。这些有害物质概括起来有以下几类:有毒蛋白类目前所发现的有毒蛋白质主要来自植物性食品,包括血凝素和酶抑制剂。血凝素是某些豆科、大戟科等蔬菜中的有毒蛋白质。这类毒素现在已发现10多种,包括蓖麻毒素、巴豆毒素、相思子毒素、大豆凝集素、菜豆毒素等。凝集素含量最高的农作物是红肾豆,生的红肾豆含有20000—70000凝集素单位,煮熟后仍有200—400单位。虽然菜豆等白肾豆中凝集素含量相对较低一般是红肾豆的1/3,但不良的饮食方式也能导致中毒。一般对食品进行有效的热处理能破坏凝集素,但加热到80℃时,显示毒性更大是生食物的5倍,许多爆发性凝集素食物中毒都是食物加工不当所引起的。酶抑制剂主要是胰蛋白酶抑制剂和淀粉酶抑制剂,能引起水化不良和过敏反应,有人称其为过敏原。人们食用的黄豆中已发现至少有16种蛋白质能引起过敏反应,其中主要的过敏原是胰蛋白酶抑制剂。尤其在一种转基因大豆中,这些过敏原含量高达26.7%;作为蛋白质,这类毒素受热后变性,可破坏一些毒素,所以食用豆制品前的彻底热处理是非常重要的。有毒氨基酸主要指有毒的非蛋白氨基酸。在发现的400多种非蛋:白氨基酸中,有20多种具有积蓄中毒作用,且大都存在于毒蕈和豆科植物中;它们作为一种“伪神经递质”取代正常的氨基酸,而产生神经毒性。另外,还有一些含硫、氰的非蛋白氨基酸可在体内分解为有毒的氰化物、硫化物而间接发生毒性作用;重要的毒性非蛋白氨基酸是刀豆氨酸、香碗豆氨酸等。值得注意的色氨酸是蛋白氨基酸,现已发现它的某些衍生物对中枢神经有毒害作用。生物碱类生物碱类是存在于毛茛科、芸香科、豆科等许多植物根、果中的有毒生物碱,成分极其复杂。依其化学结构可细分为非杂环氮类、吡咯烷类、砒啶哌啶类、异喹啉类,吲哚类和萜类等。根据生物源特点可分为原生物碱、真生物碱和伪生物碱;典型的生物碱是吡咯烷生物碱。它们能引起摄食者轻微的肝损伤,但中毒的第一反应是恶心、腹痛、腹泻甚至腹水,连续食用生物碱食品2周甚至2年才有可能出现死亡,一般中毒者都可康复。由于生物碱大都具有苦涩性,容易使动物产生拒食,所以引起人体生物碱中毒的主要食物源是:1农作物被含生物碱的杂草污染,进入面粉及相关食品中;2食用含生物碱植物的动物所产的奶和蜂蜜等食品;3特殊食疗食品、个别调味料和特殊提取物饲料等。
头一段时间配置的对照品,现在再用,峰面积和以前产别很大,是以前的1/3左右(连进几针,平行样挺好)。换台仪器上做时,就没有差别,所以排除对照品降解问题,基本确定仪器问题,灯的能量是低了,但噪音不是很大(不知对峰面积影响如何),压力平稳,所以排除漏液问题,如果进样有问题的话,那那每针的平行能好吗?大家帮分析一下还有什么问题会造成这种现象啊?
最近做了一个中药材中的油酸含量测定,用的是衍生后上气相的方法测定。采购先是从成都的一个卖参照品和中检所对照品的中介购买了一瓶油酸参照品(纯度有99%)。谁知......按药典方法做下去,这个参照品除了试剂峰竟然没有主峰出来,但样品是出峰正常的啊。后来我又找来了玉米油作参照,玉米油的棕榈酸油酸亚油酸硬酯酸4个大主峰都是有出峰的啊。通知采购联系卖家,卖家后来补寄了一瓶标示中检所出品的油酸对照品。很可惜的是,同时的制备操作,样品是出峰,那个中介补寄的标示中检所的油酸对照品一样是没主峰出来。这时,虽然我有10多年实验室经验,但主任一样http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409271814_515972_1621232_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409271815_515973_1621232_3.jpg开始怀疑是我操作的问题,在没证据情况下,警告我,你说中检所的产品都有问题,我宁信中检所也不信自己手下了。不得已,我申请买了一瓶CP级的油酸甲酯作参照(因CP级的才30元,就算实验失败化费也不贵),这个CP级油酸甲酯很挺争气,真的出峰了。这时,主任消除了对我的怀疑,相信这个中介卖假货。下图是中检所油酸对照品和玉米油参照的色谱图。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409291648_516385_1621232_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409291648_516386_1621232_3.jpg大家都说说,你们买对照品是否也贪便宜,从中介那里拿货,其实,从中介那买对照品,也就是打个折扣而以,9折.....95折什么的。通过这次交易,明白了,不是中检所购买,很可能会买到山寨对照品.........
好吧,这贴暴露了我做索氏提取法的样品少的事实。这次是在做土壤中的有机氯农药。方法是取20克土,加4克硅藻土,放在滤筒里,加100mL的丙酮-石油醚混合溶液来提取。那么问题来了。是我现在正在用的话葫芦形的冷凝管好使,还是蛇形的好使?我以前用过一次蛇形的,后来发现蒸着整着就裂缝了。回流的时候,冷凝管顶部的孔要不要盖一下?总觉得不盖的话总难免有溶剂飞出去。另外就是同时用的4套索氏提取器,其中一套,溶剂总是在中间层满满的不往下流?会不会是因为漏导致液面达不到虹吸管的上层?再买新的索氏提取器的时候该怎么验收?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/03/201703101029_01_2206495_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/03/201703101029_02_2206495_3.jpg
尽管蛇的毒液足以夺走人的性命,但越来越多的研究人员开始研究如何用毒液治病。 一名科学家从一条马来亚蝮蛇中提取毒液。 http://www.wokeji.com/shouye/guoji/201312/W020131209567615696587.jpg图片来源: VOLKER STEGER 几年前,巴西圣保罗市布坦坦研究所爬虫学部门负责人Kathleen Grego被巴西窝面蝰蛇(一种有毒的蝮蛇)咬伤,蛇的尖牙穿过她的手指甲,将致命毒液释放到Grego体内。Grego被送往医院并立即接受了抗蛇毒血清注射,但她的指甲仍留下一条垂直伤疤,其拇指顶端看起来向一边凹陷,这是由于毒素侵入了她的肌肉和其他组织。 巴西窝面蝰蛇毒液中的缩氨酸和蛋白质能侵袭调节血压和起凝固作用的分子,引发心血管系统的崩溃甚至死亡。其他蛇类产生的毒素则会严重破坏神经系统的细胞机制,使受害人瘫痪。 尽管蛇的毒液足以夺走人的性命,但越来越多的研究人员开始研究如何用毒液治病。蛇毒腺分泌的复杂混合物中包含一系列氨基酸,这种氨基酸具有止痛、降低血压等医疗价值。这些有待发现的缩氨酸或能预防心脏病或治愈癌症。新加坡国立大学(NUS)研究员Kini Manjunatha说:“人们已经逐渐意识到,蛇毒液中存在大量特异性蛋白质。我相信,它是具有医药用途的。” 近年来,毒液治病研究已取得长足进展,通过结合两项新技术——质谱分析法和新一代测序技术,科学家可以迅速识别毒液中的未知缩氨酸。研究人员不仅对蛇感兴趣,他们还将目光投向了其他动物。法国学者Pierre Escoubas说,在自然界中,有毒动物的数量超过17万种;即使保守估计,毒液平均含有250个缩氨酸,那么这样“一个巨大的自然图书馆”有超过4000万种化合物值得探索。Escoubas创办了一家毒液科技公司,该公司旨在利用毒液研发药物。 发展历史 研究如何用毒液治病的工作始于20世纪60年代,当时巴西研究人员在研究矛头蝮蛇毒液的作用时发现,其中包含一些被称作BPFs的缩氨酸,BPFs能起到显著降低血压的作用。化学家Bristol-Myers Squibb研发出一种模仿缩氨酸作用原理的小分子——甲巯丙脯酸,它是首个血管紧张素转换酶抑制剂,并一直沿用至今。 1998年,美国食品药品监督管理局批准了一种名为埃替非巴肽的血液稀释剂,其以响尾蛇的缩氨酸为原型。一年后,一种类似的药物替罗非班上市。其他一些基于蛇毒的药物,包括具有强大效力的止痛药,正在进行临床试验。 有时,研究人员已经知道努力的方向,但得出令人满意的结果却总是大费周折。布坦坦研究所的Yara Cury在阅读20世纪初的报道时获知,南美响尾蛇的毒液有镇痛效果,20世纪90年代,Cury通过动物研究证实其具有减轻疼痛的效果,然而识别真正发挥作用的缩氨酸却花费了数年时间。澳大利亚布里斯班市昆士兰大学的Glenn King说:“毒液可能包含数百上千种缩氨酸。一个接一个地研究它们将耗费你一辈子的时间。” 用途广泛 目前,蛇毒研究是最热门的领域之一,部分原因是毒蛇比其他动物产生的毒液要多。但是,有毒的蜘蛛、蝎子、锥形蜗牛及蜈蚣与蛇一样引人关注,甚至更甚于蛇。Escoubas说:“有毒蛇类只有1500种,而有毒蜘蛛却有5万种。”此外,蜘蛛每一滴毒液内蕴涵的毒素更多,这可能由于它们的猎食对象是昆虫。昆虫的种类极为繁多,因而需要更丰富的毒素种类。除了蛇之外的有毒生物也都已有相应的医用药物问世。例如,从一种有毒蜥蜴身上提取的艾塞那肽能极为有效地应对II型糖尿病。 Escoubas说,是时候用更系统的方法探索毒素这一巨大宝库了。他领导着一个合伙企业,该企业于2011年从欧盟获得了600万欧元资金,用于VENOMICS项目的研究。该项目将历时4年,旨在建立一个毒液缩氨酸库,这有助于筛查它们潜在的治疗价值。Escoubas说,该小组计划研究200种不同的有毒生物,将发现约5万种缩氨酸,相对于过去50年发现的3000~4000种毒液缩氨酸,这是一大进步。 在发现的5万种缩氨酸中,该小组计划在实验室内生产出1万种。到目前为止,它们已经分析了70种动物的毒液,其中有毒蛇、蜘蛛及一种蜈蚣,这些动物是从塔系提岛和法属圭亚那等地收集的。 毒液专家表示,疼痛治疗是一个十分有前途的研究领域。2006年,研究者发现,在一条名为Nav1.7的蛋白质通道内发生的突变,可以导致钠流入人体细胞中,使人对所有类型的疼痛反应迟钝。这个发现使药理学家十分兴奋,他们希望在未来通过扰乱Nav1.7通道来应对疼痛。但是,想要利用小分子堵塞Nav1.7通道,便不可避免地会影响另外8条类似的蛋白质通道。 曲折前进 从毒液中提取有医用潜力的合成物仅是漫漫长路的开始。默克公司的缩氨酸工程师Bj?觟rn Hock说,作为一种药物,缩氨酸相对于小分子的优势在于具有更多选择性,因此副作用较小。但它也有劣势:生产成本高昂,有时会引发免疫反应。此外,最大的劣势或许在于它们会在胃中分解,因此通常采用注射的方式而非口服。 德国法兰克福大学医院的Johannes Eble认为,这便是为什么大多数基于蛇毒的未来药物,例如甲巯丙脯酸,采用小分子的形式,为的是模仿缩氨酸的作用原理。Eble主要研究蛇毒对细胞黏附分子的影响。但Escoubas相信缩氨酸的弊端能够被克服。缩氨酸化学已获得了长足发展,其合成成本更低。 此外,一些毒液缩氨酸可能足够稳定,可以口服。许多毒液缩氨酸含有多重二硫键,它是在氨基酸半胱氨酸中连接硫原子的桥梁,能使得缩氨酸非常稳定,足以对抗肠胃液中酶的降解作用。目前,一种从锥形蜗牛体内提取的用于治疗神经性疼痛的毒素已被证明能够以口服的形式发挥药效。与此同时,Manjunatha发现,扁颈眼镜蛇毒液中所含的缩氨酸具有止痛效果,且效力是吗啡的20~200倍。 已经获得几十种蛇缩氨酸专利的Manjunatha出生并成长于印度一个被树林环绕的小村庄。他说:“因为被蛇咬伤,很多人失去了四肢甚至死亡。”当他成为一名研究人员后,便想弄清是什么使得毒素如此危险,“为什么人类蛋白质是有益的,而蛇毒中的蛋白质是有害的?”现在,Manjunatha表示,他发现了一个更有趣的问题:在这些致命的缩氨酸中,哪一个对人类的帮助最大?(段歆涔)来源:中国科学报 作者:段歆涔 2013年12月09日
[size=20px][color=#93c6bc][b]鉴别[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]|[/color][/size] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体]聚合酶链式反应法。[/font] [b][font=宋体]模板DNA提取[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]取本品0.5g,置乳钵中,加液氮适量,充分研磨使成粉末,取50mg,置2.0ml离心管中,加入提取缓冲液200μl(含1%聚乙烯吡咯烷酮-40和1%曲拉通 X-100的0.5mol/L氢氧化钠溶液),充分混匀;加入0.1mol/L Tris-盐酸溶液(pH 8.0)800μl,混匀,离心(转速为每分钟12000转)5分钟;将上清液500μl转移至另一离心管中,加入0.1mol/L Tris-盐酸溶液(pH 8.0)500μl,混匀,离心(转速为每分钟12000转)5分钟;将上清液50μl转移至另一离心管中,加入无菌双蒸水450μ1,混匀,作为供试品溶液,置一20℃保存备用。另取金钱白花蛇对照药材0.5g,同法制成对照药材模板DNA溶液。[/font] [b][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]反应[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]鉴别引物:[/font][font=宋体]5[/font][font=宋体]’[/font][font=宋体]GAAATTTCGGCTCTATGCTTATAACCTGTCTTT3[/font][font=宋体]’和[/font][font=宋体]5[/font][font=宋体]’[/font][font=宋体]GGAATCTTATCGATATCTGAATTAGTA3[/font][font=宋体]’。[/font][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]反应体系:在200μl离心管中进行,反应总体积为25μl,反应体系包括10×[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]缓冲液2.5μl,[color=var(--weui-LINK)]dNTP[i][/i][/color](1Ommol/L)1μl,鉴别引物(10μmol/L)各0.2μl,Taq DNA聚合酶(5U/μl)0.2μl,模板DNA 1μl,25%聚乙烯吡咯烷酮-40溶液1μl,10mg/ml牛血清蛋白0.5μl,无菌双蒸水18.4μ1。将离心管置[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应参数:95℃[color=var(--weui-LINK)]预变性[i][/i][/color]5分钟,循环反应30次(95℃30秒,60℃45秒),延伸(72℃)5分钟。[/font] [b][font=宋体]电泳检测 [/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]照琼脂糖凝胶电泳法(通则0541),胶浓度为1.5%,每100ml胶中加入10000×核酸凝胶染色剂GelRed 5μl;供试品与对照药材[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应溶液的上样最分别为5μl,以DL2000(DNA条带从小到大分别为100bp,250bp,500bp,750bp,1000bp和2000bp)作为DNA分子量标记,进行凝胶电泳检测。电泳结束后,取凝胶片在[color=var(--weui-LINK)]凝胶成像仪[i][/i][/color]上或紫外透射仪上检视。供试品凝胶电泳图谱中,在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上,在500~750bp之间应有单一DNA条带,空白对照无条带。[/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [size=20px][color=#93c6bc][b]浸出物[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]|[/color][/size] [font=宋体][/font] [b][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font][/b] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font][font=宋体] 照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定,用稀乙醇作溶剂,不得少于15.0%。[/font]
一、 凝胶渗透色谱的概述 1. 凝胶渗透色谱的简单回顾凝胶渗透色谱[GPC(Gel Permeation Chromatography)][也称作体积排斥色谱(Size Exclusion Chromatography)]是三十年前才发展起来的一种新型液相色谱,是色谱中较新的分离技术之一。利用多孔性物质按分子体积大小进行分离,在六十年前就已有报道。Mc Bain用人造沸石成功地分离了气体和低分子量的有机化合物,1953年Wheaton和Bauman用离子交换树脂按分子量大小分离了苷、多元醇和其它非离子物质。1959年Porath和Flodin用交联的缩聚葡糖制成凝胶来分离水溶液中不同分子量的样品。而对于有机溶剂体系的凝胶渗透色谱来说,首先需要解决的是制备出适用于有机溶剂的凝胶。二十世纪60年代J.C.Moore在总结了前人经验的基础上,结合大网状结构离子交换树脂制备的经验,将高交联度聚苯乙烯凝胶用作柱填料,同时配以连续式高灵敏度的示差折光仪,制成了快速且自动化的高聚物分子量及分子量分布的测定仪,从而创立了液相色谱中的凝胶渗透色谱技术。2. 凝胶渗透色谱的应用三十多年来,凝胶渗透色谱的理论、实验技术和仪器的性能等方面有了突飞猛进的发展。尤其是随着新型柱填料的诞生、高效填充柱的出现(目前其理论塔板数已超过10000/米)以及计算机的普及,凝胶渗透色谱在工业、农业、医药、卫生、国防、宇航以及日常生活的各个领域得到了广泛的应用。特别是近年来,随着各种高分子材料的问世,人们对高分子科学的不断探索,高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要,成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如:常见的聚苯乙烯塑料制品,其分子量为十几万,如果聚苯乙烯的分子量低至几千,就不能成型;相反,当分子量大到几百万,甚至几千万,它又难以加工,失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D(D=Mw/Mn)、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。另外,除了快速测定分子量及其分布以外,凝胶渗透色谱还广泛用于研究高聚物的支化度,共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器(如:LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等),凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。凝胶渗透色谱作为一门新兴的科学,随着各种新型检测器的出现(如UV、FT-IR、LS、Viscometer等),它的应用范围也逐步从生物化学、高分子化学、无机化学等向其它领域渗透,成为化学领域内必不可少的分析手段。
序号:1文章名:注射用尖吻蝮蛇凝血酶临床应用研究作者:周俊杰;期刊:南方医科大学全文链接:http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?dbcode=CMFD&QueryID=3&CurRec=11&dbname=CMFDTEMP&filename=2007223310.nh&urlid=&yx=&v=MDEwMTh2TFYxMjdHYkc2SGRMTnI1RWJQSVI4ZVgxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkxtZllPUm9GeUhsVWI=序号:2文章名:尖吻蝮蛇凝血酶对手术切口止血有效性及安全性的临床研究作者:欧光武;期刊:汕头大学, 普通外科学, 2010, 硕士全文链接:http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?dbcode=CMFD&QueryID=3&CurRec=20&dbname=CMFD0911&filename=2010269859.nh&urlid=&yx=&v=MDc3MTExVDNxVHJXTTFGckNVUkxtZllPUm9GeUhsVWJySlYxMjZIckcrRjluSnBwRWJQSVI4ZVgxTHV4WVM3RGg=序号:3文章名:蛇毒血凝酶的比较作者:郑颖; 沈居仁; 范泉水;期刊:成都军区疾病预防控制中心军事医学研究所;全文链接:http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=4&CurRec=110&recid=&filename=SZZZ200803030&dbname=CJFD0608&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjYxNzNJOUdaSVI4ZVgxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkxtZllPUm9GeTdnVnI3QU5qZlJkTEc0SHRuTXI=序号:4文章名:血凝酶的临床应用进展作者:韦帆; 廖阳;期刊:上海新波生物技术有限公司; 广西壮族自治区宾阳县宾阳中医院药剂科;全文链接:http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=4&CurRec=108&recid=&filename=PLHY200919100&dbname=CJFD0910&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MTU4OTBSb0Z5N2dVTHpLTlNIRGQ3RzRIdGpOcG81RlpJUjhlWDFMdXhZUzdEaDFUM3FUcldNMUZyQ1VSTG1mWU8=序号:5文章名:注射用血凝酶及其止血作用机制作者:金有豫;期刊:首都医科大学;全文链接:http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=4&CurRec=95&recid=&filename=YYPF201206006&dbname=CJFD1112&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MDc2MDVMbWZZT1JvRnk3bVZyek9QRFRiYUxHNEg5UE1xWTlGWW9SOGVYMUx1eFlTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVI=
[color=#333333]完全不出峰是啥情况,对照品跟样品都不出峰[/color][color=#333333]一直没东西出来[/color][color=#333333] [/color]
真是白的美到極點!還白裡透紅呢!雖然是很漂亮,但是腦海裡想著觸摸它的話就覺得geli白蛇傳你聽多了,真正白蛇你看過嗎?[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904171508_144879_1876116_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904171508_144880_1876116_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904171508_144881_1876116_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904171508_144882_1876116_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904171508_144883_1876116_3.jpg[/img]
4月21日,国务院召开全国严厉打击非法添加和滥用食品添加剂专项工作电视电话会议,并下发相关通知。国务院副总理、国务院食品安全委员会主任李克强在会上表示,要以“坚决的态度、过硬的举措、更大的力度”,重典治乱,加大惩处力度。 重典治乱,先得理清头绪,才能有的放矢。这次整顿部署,矛头直指保健品食品非法添加行为,抓住了一系列食品安全问题背后的共性症结。
[b]中文摘要:目的[/b] 确立因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果的影响,从而完善因子类血液制品效价检测的方法。[b]方法 [/b]选取不同蛋白质浓度梯度的稀释液对同一供试品进行稀释来确定蛋白质影响的规律。 [b]结果 [/b]建立起人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物的全自动血凝仪因子效价检测方法,根据效价检测反应体系中蛋白浓度对检测结果的影响,建立因子类血液制品效价全自动血凝仪检测的方法。[b]结论 [/b]建立的两种稀释方法均消除了样品中蛋白质含量的不同对检测结果的影响,提高了检测的准确性,不但可以适用于现在产品的效价检测,而且适用于随着生产工艺的提升生产的更高纯度、低蛋白含量的FⅧ和PCC,同时也是对中国药典标准的补充。[b]关键词[/b]:人凝血因子Ⅷ;人凝血酶原复合物;效价;蛋白含量 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人凝血因子Ⅸ等因子类血液制品,是以健康人血浆为原料,经分离纯化和病毒灭活制成,在临床上主要用于各种凝血因子缺乏的治疗,这些因子类血液制品的凝血因子效价是药品有效性的指标,凝血因子效价的测定也是药品质量检测中的关键检测项目。血液制品生产企业及各级检测机构一般采用全自动血凝仪并按照仪器使用说明来进行因子效价的检测,然而在不同检测方法结果比对中,发现全自动血凝仪检测结果与中国药典中一期法的检测结果在部分因子效价检测中存在检测差异,差异可能是样品稀释中使用的稀释液的蛋白含量不同引起的,故本课题主要研究因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果影响。通过蛋白含量对因子效价检测影响的研究建立起的全自动血凝仪因子效价检测方法,消除了产品本身性质的影响,可以准确进行因子效价的测定,方法的建立不但可以准确控制因子类血液制品的质量,保证生产企业持续稳定生产出质量均一的药品,而且可以减少因子类产品在临床使用中的风险。[b]1 实验仪器与试剂[b]1.1 仪器[/b][/b]Stago-compact全自动血凝仪(法国Diagnostica Stago公司),漩涡振荡器(美国Thermo Scientific公司)。[b][b]1.2 试剂[/b][/b]人凝血因子Ⅷ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅸ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),APTT试剂(法国Diagnostica Stago公司),Owren-Koller(稀释液)(法国Diagnostica Stago公司),0.025 mol/L氯化钙溶液(法国Diagnostica Stago公司),Desorb U(清洗液)(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅷ国家标准品(批号20100101),人凝血酶原复合物国家标准品(批号20130306),生理氯化钠溶液(石家庄四药有限公司),咪唑(天津市巴斯夫化工有限公司),氯化钠(天津市巴斯夫化工有限公司),枸橼酸钠(台山新宁制药有限公司),人血白蛋白(公司自产)。[b][b]2 方法2.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备:选取全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液分别定义为稀释液1、稀释液2、稀释液3。向3种稀释液中分别加入人血白蛋白,使其中人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b] [/b]人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.3 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备同2.1。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]2.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]3 结果3.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表1、2、3,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表1 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][img=,590,266]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142017_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表2 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果 [/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表3 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果 [/align][align=center][img=,585,261]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_02_1626619_3.png[/img][/align]人凝血因子Ⅷ质控品2015ZK0801批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释效价检测结果平均值用折线图表示,如图1:[align=center]图1 FⅧ质控品不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,548,295]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_03_1626619_3.png[/img][/align] 选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果见表4、5,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表4 658668A批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,585,99]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142020_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表5 A3B1814批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,577,97]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142021_01_1626619_3.png[/img][/align]FⅧ效价检测结果用折线图表示,如图2、3:[align=center][img=,563,299]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142029_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图2 658668A批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,567,287]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142030_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图3 A3B1814批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][b][b]3.2 人凝血酶原复合物不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了不同蛋白质浓度梯度稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、2%、3%、4%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表6、7、8,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表6 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][img=,583,269]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表7 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果[/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表8 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果[/align][align=center][img=,593,263]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142043_01_1626619_3.png[/img][/align]人凝血酶原复合物质控品2015ZK0901批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释FⅨ效价检测结果平均值用折线图表示,如图4:[align=center][img=,556,300]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图4 PCC质控品不同蛋白质浓度FⅨ检测结果对比[/align][b][b]3.3 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定,共测定10次。效价检测结果见表9,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表9 FⅧ质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,579,74]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_02_1626619_3.png[/img][/align]选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定。效价检测结果见表10,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表10 国外产品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,578,77]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142036_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]3.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,共测定10次。效价检测结果见表11,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表11 PCC质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,582,89]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142047_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]4 讨论[/b][/b] 本实验中对人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物分别用不同蛋白浓度梯度的稀释液进行了效价测定,另外用人凝血因子缺乏血浆稀释后进行了效价测定。因子效价测定中,稀释液1、稀释液2、稀释液3中加入相同浓度的人血白蛋白后,得到的因子效价检测结果没有差异,说明全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液作为稀释液时没有区别。 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物不同蛋白浓度梯度效价测定时,随着稀释液中蛋白质含量的增高,效价检测结果也不断升高,但在人凝血因子Ⅷ效价测定中,采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别,在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定中,采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别。另外,人凝血因子Ⅷ进行人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定效价检测结果与采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液得到的检测结果也无显著差异,人凝血酶原复合物人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价检测结果与采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液得到的检测结果也无显著差异。另外,国外生产的人凝血因子Ⅷ和VWF的混合制剂FⅧ效价的检测结果及血浆、稀释液的影响同泰邦公司产品一致。[b]参考文献[/b][align=left] 邬杨斌, 余蓉. 凝血因子Ⅸ复合物的研制 . 华西药学杂志, 2000, 15(3):177-179. Pabinger I, Brenner B, Kalina U, et al. Prothrombin complex concentrate(Beriplexw P/N)for emergency anticoagulation reversal: A prospective multinational clinical trial . J Thromb Haemost, 2008, 6(4):622-631. Kiman E, Elela AA, Ramsis N, et al. Evaluation of the coagulation factors activity of Cryosupernatant . Suez Canal Univ Med J, 2003, 6(2):247-258.Tullis JL, Melin M, Jurigian P. Clinical use of human Prothrombin complexes . N Engl J Med, 1965, 73(13):667-674.马莉, 孙盼, 李长清, 等. 去冷沉淀血浆的质量分析 . 中国生物制品学杂志, 2013, 26(1):81-83.魏舒, 时凯, 刘国荣, 等. 冻干人凝血酶原复合物的生产工艺研究 . 中国输血杂志, 2008, 21(10):282-284.Samama CM. Prothrombin complex concentrates: a brief review . Eur J Anaesthesiol, 2008, 25(10):784-789.焦丽华, 代旭兰, 刘文芳. 凝血酶原复合物的制备及其临床应用进展 .中国输血杂志, 2008, 21(9):737-741.[/align][b] [/b]
[b]中文摘要:目的[/b] 确立因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果的影响,从而完善因子类血液制品效价检测的方法。[b]方法 [/b]选取不同蛋白质浓度梯度的稀释液对同一供试品进行稀释来确定蛋白质影响的规律。 [b]结果 [/b]建立起人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物的全自动血凝仪因子效价检测方法,根据效价检测反应体系中蛋白浓度对检测结果的影响,建立因子类血液制品效价全自动血凝仪检测的方法。[b]结论 [/b]建立的两种稀释方法均消除了样品中蛋白质含量的不同对检测结果的影响,提高了检测的准确性,不但可以适用于现在产品的效价检测,而且适用于随着生产工艺的提升生产的更高纯度、低蛋白含量的FⅧ和PCC,同时也是对中国药典标准的补充。[b]关键词[/b]:人凝血因子Ⅷ;人凝血酶原复合物;效价;蛋白含量 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人凝血因子Ⅸ等因子类血液制品,是以健康人血浆为原料,经分离纯化和病毒灭活制成,在临床上主要用于各种凝血因子缺乏的治疗,这些因子类血液制品的凝血因子效价是药品有效性的指标,凝血因子效价的测定也是药品质量检测中的关键检测项目。血液制品生产企业及各级检测机构一般采用全自动血凝仪并按照仪器使用说明来进行因子效价的检测,然而在不同检测方法结果比对中,发现全自动血凝仪检测结果与中国药典中一期法的检测结果在部分因子效价检测中存在检测差异,差异可能是样品稀释中使用的稀释液的蛋白含量不同引起的,故本课题主要研究因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果影响。通过蛋白含量对因子效价检测影响的研究建立起的全自动血凝仪因子效价检测方法,消除了产品本身性质的影响,可以准确进行因子效价的测定,方法的建立不但可以准确控制因子类血液制品的质量,保证生产企业持续稳定生产出质量均一的药品,而且可以减少因子类产品在临床使用中的风险。[b]1 实验仪器与试剂[b]1.1 仪器[/b][/b]Stago-compact全自动血凝仪(法国Diagnostica Stago公司),漩涡振荡器(美国Thermo Scientific公司)。[b][b]1.2 试剂[/b][/b]人凝血因子Ⅷ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅸ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),APTT试剂(法国Diagnostica Stago公司),Owren-Koller(稀释液)(法国Diagnostica Stago公司),0.025 mol/L氯化钙溶液(法国Diagnostica Stago公司),Desorb U(清洗液)(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅷ国家标准品(批号20100101),人凝血酶原复合物国家标准品(批号20130306),生理氯化钠溶液(石家庄四药有限公司),咪唑(天津市巴斯夫化工有限公司),氯化钠(天津市巴斯夫化工有限公司),枸橼酸钠(台山新宁制药有限公司),人血白蛋白(公司自产)。[b][b]2 方法 2.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备:选取全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液分别定义为稀释液1、稀释液2、稀释液3。向3种稀释液中分别加入人血白蛋白,使其中人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b] [/b]人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.3 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备同2.1。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]2.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]3 结果3.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表1、2、3,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表1 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][/align][align=center][img=,590,266]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142017_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表2 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果 [/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表3 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果 [/align][align=center][img=,585,261]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_02_1626619_3.png[/img][/align]人凝血因子Ⅷ质控品2015ZK0801批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释效价检测结果平均值用折线图表示,如图1:[align=center]图1 FⅧ质控品不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,548,295]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_03_1626619_3.png[/img][/align] 选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果见表4、5,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表4 658668A批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,585,99]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142020_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表5 A3B1814批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,577,97]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142021_01_1626619_3.png[/img][/align]FⅧ效价检测结果用折线图表示,如图2、3:[align=center][img=,563,299]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142029_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图2 658668A批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,567,287]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142030_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center][/align][align=center]图3 A3B1814批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][b][b]3.2 人凝血酶原复合物不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了不同蛋白质浓度梯度稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、2%、3%、4%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表6、7、8,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表6 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][img=,583,269]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表7 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果[/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表8 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果[/align][align=center][img=,593,263]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142043_01_1626619_3.png[/img][/align]人凝血酶原复合物质控品2015ZK0901批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释FⅨ效价检测结果平均值用折线图表示,如图4:[align=center][img=,556,300]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图4 PCC质控品不同蛋白质浓度FⅨ检测结果对比[/align][b][b]3.3 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定,共测定10次。效价检测结果见表9,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表9 FⅧ质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,579,74]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_02_1626619_3.png[/img][/align]选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定。效价检测结果见表10,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表10 国外产品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,578,77]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142036_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]3.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,共测定10次。效价检测结果见表11,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表11 PCC质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,582,89]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142047_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]4 讨论[/b][/b] 本实验中对人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物分别用不同蛋白浓度梯度的稀释液进行了效价测定,另外用人凝血因子缺乏血浆稀释后进行了效价测定。因子效价测定中,稀释液1、稀释液2、稀释液3中加入相同浓度的人血白蛋白后,得到的因子效价检测结果没有差异,说明全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液作为稀释液时没有区别。 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物不同蛋白浓度梯度效价测定时,随着稀释液中蛋白质含量的增高,效价检测结果也不断升高,但在人凝血因子Ⅷ效价测定中,采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别,在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定中,采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别。另外,人凝血因子Ⅷ进行人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定效价检测结果与采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液得到的检测结果也无显著差异,人凝血酶原复合物人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价检测结果与采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液得到的检测结果也无显著差异。另外,国外生产的人凝血因子Ⅷ和VWF的混合制剂FⅧ效价的检测结果及血浆、稀释液的影响同泰邦公司产品一致。[b]参考文献[/b][align=left] 邬杨斌, 余蓉. 凝血因子Ⅸ复合物的研制 . 华西药学杂志, 2000, 15(3):177-179. Pabinger I, Brenner B, Kalina U, et al. Prothrombin complex concentrate(Beriplexw P/N)for emergency anticoagulation reversal: A prospective multinational clinical trial . J Thromb Haemost, 2008, 6(4):622-631. Kiman E, Elela AA, Ramsis N, et al. Evaluation of the coagulation factors activity of Cryosupernatant . Suez Canal Univ Med J, 2003, 6(2):247-258.Tullis JL, Melin M, Jurigian P. Clinical use of human Prothrombin complexes . N Engl J Med, 1965, 73(13):667-674.马莉, 孙盼, 李长清, 等. 去冷沉淀血浆的质量分析 . 中国生物制品学杂志, 2013, 26(1):81-83.魏舒, 时凯, 刘国荣, 等. 冻干人凝血酶原复合物的生产工艺研究 . 中国输血杂志, 2008, 21(10):282-284.Samama CM. Prothrombin complex concentrates: a brief review . Eur J Anaesthesiol, 2008, 25(10):784-789.焦丽华, 代旭兰, 刘文芳. 凝血酶原复合物的制备及其临床应用进展 .中国输血杂志, 2008, 21(9):737-741.[/align][b] [/b]
http://www.greenherbs.com.cn/bbs/dispbbs.asp?boardid=2&Id=7661700512 色氨酸杂质A Tryptophan Related Compound A 对照品/标准品1700501 L- 色氨酸 L-Tryptophan 对照品/标准品1700002 结晶胰蛋白酶 Trypsin Crystallized 对照品/标准品1699005 托吡卡胺 Tropicamide 对照品/标准品1698002 氨丁三醇 Tromethamine 对照品/标准品1697000 醋竹桃霉素 Troleandomycin 对照品/标准品1696958 三乙醇胺 Trolamine 对照品/标准品1696200 三水杨酸 Trisalicylic Acid 对照品/标准品1696109 盐酸曲普利啶 Z- 异构体 Triprolidine Hydrochloride Z-Isomer 对照品/标准品1696007 盐酸曲普利啶 Triprolidine Hydrochloride 对照品/标准品1695004 盐酸曲吡那敏 Tripelennamine Hydrochloride 对照品/标准品1693009 三甲沙林 Trioxsalen 对照品/标准品1692710 三甲丙咪嗪杂质A Trimipramine Related Compound A 对照品/标准品1692709 三甲丙咪嗪马来酸盐 Trimipramine Maleate 对照品/标准品1692527 甲氧苄啶杂质B Trimethoprim Related Compound B 对照品/标准品1692516 甲氧苄啶杂质A Trimethoprim Related Compound A 对照品/标准品1692505 甲氧苄啶 Trimethoprim 对照品/标准品1692006 盐酸曲美苄胺 Trimethobenzamide Hydrochloride 对照品/标准品1690000 三甲双酮 Trimethadione 对照品/标准品1689001 酒石酸阿利马嗪 Trimeprazine Tartrate 对照品/标准品1687006 盐酸苯海索 Trihexyphenidyl Hydrochloride 对照品/标准品1686310 曲氟尿苷杂质A Trifluridine Related Compound A 对照品/标准品1686309 曲氟尿苷 Trifluridine 对照品/标准品1686003 盐酸三氟丙嗪 Triflupromazine Hydrochloride 对照品/标准品1685500 2--chlorobenzophenone 对照品/标准品1685000 盐酸三氟拉嗪 Trifluoperazine Hydrochloride 对照品/标准品1683606 枸橼酸三乙酯 Triethyl Citrate 对照品/标准品1683504 盐酸曲恩汀 Trientine Hydrochloride 对照品/标准品1683005 曲地氯铵 Tridihexethyl Chloride 对照品/标准品1682217 三氯生杂质混合物A Triclosan Related Compounds Mixture A 对照品/标准品1682206 三氯生 Triclosan 对照品/标准品1681000 三氯噻嗪 Trichlormethiazide 对照品/标准品1680801 美曲膦酯 Trichlorfon 对照品/标准品1680685 三丁基氧化磷 Tributyl Phosphine Oxide 对照品/标准品1680608 枸橼酸三丁酯 Tributyl Citrate 对照品/标准品1680506 三唑仑CIV Triazolam CIV 对照品/标准品1680030 氨苯蝶啶杂质C Triamterene Related Compound C 对照品/标准品1680029 氨苯蝶啶杂质B Triamterene Related Compound B 对照品/标准品1680018 氨苯蝶啶杂质A Triamterene Related Compound A 对照品/标准品1680007 氨苯蝶啶 Triamterene 对照品/标准品1679008 己曲安奈德 Triamcinolone Hexacetonide 对照品/标准品1678005 醋酸曲安西龙 Triamcinolone Diacetate 对照品/标准品1677002 曲安奈德 Triamcinolone Acetonide 对照品/标准品1676000 曲安西龙 Triamcinolone 对照品/标准品1675007 三醋汀 Triacetin 对照品/标准品1674004 维 A 酸 Tretinoin 对照品/标准品1673839 醋酸群勃龙系统适用性实验用混合物 CIII Trenbolone Acetate System Suitability Mixture CIII 对照品/标准品1673828 醋酸群勃龙 CIII Trenbolone Acetate CIII 对照品/标准品1673806 群勃龙CIII Trenbolone CIII 对照品/标准品1673715 海藻糖 Trehalose 对照品/标准品1673500 盐酸曲唑酮 Trazodone Hydrochloride 对照品/标准品1673012 曲沃前列素杂质A Travoprost Related Compound A 对照品/标准品1673001 曲沃前列素 Travoprost 对照品/标准品1672916 苯环丙胺杂质A Tranylcypromine Related Compound A 对照品/标准品1672905 硫酸苯环丙胺 Tranylcypromine Sulfate 对照品/标准品1672803 反铂 Transplatin 对照品/标准品1672756 氨甲环酸杂质C Tranexamic Acid Related Compound C 对照品/标准品1672745 氨甲环酸 Tranexamic Acid 对照品/标准品1672712 群多普利杂质D Trandolapril Related Compound D 对照品/标准品1672701 群多普利杂质C Trandolapril Related Compound C 对照品/标准品1672687 群多普利 Trandolapril 对照品/标准品1672621 曲马多杂质B Tramadol Related Compound B 对照品/标准品1672610 曲马多杂质A Tramadol Related Compound A 对照品/标准品1672600 盐酸曲马多 Tramadol Hydrochloride 对照品/标准品1672337 托拉塞米杂质C Torsemide Related Compound C 对照品/标准品1672326 托拉塞米杂质B Torsemide Related Compound B 对照品/标准品1672315 托拉塞米杂质A Torsemide Related Compound A 对照品/标准品1672304 托拉塞米 Torsemide 对照品/标准品1672210 托吡酯杂质A Topiramate Related Compound A 对照品/标准品1672206 托吡酯;托佩马特 Topiramate 对照品/标准品1672100 含番茄红素的番茄提取物 Tomato Extract Containing Lycopene 对照品/标准品1672020 对甲苯磺酰胺 p-Toluenesulfonamide 对照品/标准品1672010 邻甲苯磺酰胺 o-Toluenesulfonamide 对照品/标准品1671006 托萘酯 Tolnaftate 对照品/标准品1670502 托美丁钠 Tolmetin Sodium 对照品/标准品1670229 托卡朋杂质 B Tolcapone Related Compound B 对照品/标准品1670218 托卡朋杂质 A Tolcapone Related Compound A 对照品/标准品1670207 托卡朋 Tolcapone 对照品/标准品1670003 甲苯磺丁脲 Tolbutamide 对照品/标准品1669004 盐酸妥拉唑林 Tolazoline Hydrochloride 对照品/标准品1668001 妥拉磺脲 Tolazamide 对照品/标准品1667938 替扎尼定杂质C Tizanidine Related Compound C 对照品/标准品1667924 替扎尼定杂质B Tizanidine Related Compound B 对照品/标准品1667916 替扎尼定杂质A Tizanidine
大家好!我正在用氨基柱分离单糖,之前都好好的,就是分离度较叉。昨天突然发现所有对照品的峰都有了分叉。开始我以为是因为我进的样品针是酸性的缘故,于是我用10倍柱体积的乙腈-0.5%的氨水(50-50)洗了柱子,然后用正常流动相洗了柱子。今天进对照品时发现还是老样子,没有改善。有人说是柱头塌陷了,有这么严重么?还有没有其它原因啊?请有心人帮帮忙啊!一个新手碰到了这样的问题真的很急很担心啊!请帮帮忙!谢谢!!!!
大家经常做气相需要测对照品溶液,有时对照品溶液的出峰面积在不同时期可能差异较大,大家遇到过这样的问题吗?问题:取甲醇、乙酸乙酯、甲苯适量,精密称定,用DMF溶解稀释定容制成每1ml中约含甲醇60ug、乙酸乙酯100ug、甲苯20ug的混合溶液。那么我们实际称取的对照质量应该在什么范围内是可以接受的?因为称量的差异会导致对照品出峰面积的差异。问题:如何能用天平称准对照试剂的量?(有机溶剂甲醇、乙腈、二氯甲烷等)换算成体积量取还是直接称取?