化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法1 适用范围 本方法规定了用高效液相色谱法定性检测化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的方法。 本方法适用于化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的定性测定。2 方法提要 样品在经过提取后,经高效液相色谱仪分离,二极管阵列检测器检测,经与平行操作的补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮对照品及补骨脂对照药材比较,以保留时间和紫外光谱图定性,鉴别补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的存在。本方法对补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检出限和取样品0.5 g时的检出浓度见表1。 表1 4种补骨脂特征成分的检出限和检出浓度化合物检出限(ng)检出浓度(μg/g)补骨脂素0.30.6异补骨脂素0.30.6新补骨脂异黄酮0.30.6补骨脂二氢黄酮0.30.63 试剂和材料 除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为实验室用一级水。3.1 乙腈,色谱纯。3.2 补骨脂素,纯度≥99%。3.3 异补骨脂素,纯度≥99%。3.4 新补骨脂异黄酮,纯度≥98%。3.5 补骨脂二氢黄酮,纯度≥99%。3.6 补骨脂,中国食品药品检定研究院,供鉴别用。3.7 补骨脂特征性成分混合标准溶液(=0.1 μg/mL):分别称取补骨脂素(3.2)、异补骨脂素(3.3)、新补骨脂异黄酮(3.4)、补骨脂二氢黄酮(3.5)对照品各5 mg(精确到0.1 mg),置500 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成质量浓度各为10 μg/mL的标准溶液。精密量取各标准溶液0.1 mL置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得0.1 μg/mL的混合标准溶液。3.8 补骨脂标准储备溶液:取补骨脂对照药材0.2 g,置50 mL三角瓶中,加30 mL 70%乙醇回流提取1h,滤过,滤液置100 mL量瓶中,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。4 仪器4.1 高效液相色谱仪:具二极管阵列检测器。4.2 分析天平:感量为0.1 mg。4.3 移液器。4.4 涡旋振荡器。4.5 超声波清洗仪(功率不低于200W)。4.6 高速离心机:转速不小于10000 r/min。
化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法
[color=#3e3e3e]异黄酮的功能与人体自然分泌的雌激素相似,能缓解更年期症状,大豆和豆制品是最佳来源,如豆粉、豆浆、豆豉、豆腐、豆皮等。[/color]
寒冷的冬天,整个人都是懒洋洋的,尽管有很多试验经历、色谱柱使用体会、很多的原创素材,都懒的起笔。2013年马上来临,趁着2012年的第五届原创大赛,赶快记录一篇原创,分享自己更多的使用体会与试验经历给大家探讨。这次检测的是大豆异黄酮,说起这个,估计很少人接触,而我已经跟它已经认识了好几年。异黄酮是一类物质,有苷和苷元之分,可是接触了很久都不知道苷和苷元有什么区别,为什么这个叫苷,另外一个就叫苷元。而且保健品中有很多叫甙,我也搞不清楚甙和苷有什么区别。大豆异黄酮的测定,目前存在的标准方法:GB/T 23788-2009保健食品中大豆异黄酮的测定方法 高效液相色谱法NY/T 1252-2006大豆异黄酮http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281607_416709_1608710_3.jpg实验过程:色谱柱:Topsil 液相色谱柱(C18,5um,4.6*250mm)检测波长:260nm流动相:乙腈+0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱流速:1.0mL/min进样量:20ul先晒晒标准上的图谱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281611_416712_1608710_3.jpg以下是我测定的色谱图,根据出峰顺序依次是大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素。标准色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281614_416716_1608710_3.jpg保健食品样品色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281615_416718_1608710_3.jpg总结:1、总体来说,4个组分的保留时间和色谱峰都能与标准对应重现2、色谱峰的理论塔板数都很好,这根柱子已经用了一段时间,具体测了多少样品就不清楚了3、以前检测测的是大豆素和染料木素,同时测定4个还是第一次,效果还算满意你测试过大豆异黄酮吗?有经验赶快讨论吧
准确称取干燥后至恒重的异黄酮标准品0.0096g溶于95%的乙醇溶液中,定容100 mL,摇匀。再分别取0、2、4、6、8、10、12 mL用95%乙醇定容于100 mL容量瓶中,然后于260nm处分别测定其吸光度值,并绘制标准曲线。1.3提取后样品含量的测定准确量取一定量样品于容量瓶中,加入95%乙醇定容,摇匀。用紫外可见分光光度计测其吸光度。根据标准曲线和稀释倍数计算出样品中总异黄酮的质量我想请问一下!测吸光度的是用光度测定还是定量测定?校零用的是95%的乙醇么?如果我借用别人测的标准曲线,又该如何测,可以直接跳过标准品的测定直接测待测样品的么?
谁知道对异黄酮展开效果好点的展层剂和比较专一的显色剂 请高手指点一下 或者谁有更好的异黄酮定性的方法 请指点一下 最近提取到新的物质 初步怀疑是这个异黄酮 想确定一下 谢谢高手指点
[size=5]超临界流体色谱法测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量[/size] 来源: 作者:陆峰,刘荔荔,李玲,吴玉田摘要目的:建立超临界流体色谱法用于测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量,并研究其影响因素。方法:用改性的超临界C02萃取中药补骨脂,超临界流体色谱法测定其中的香豆素成分(补骨脂素和异补骨脂素)含量。色谱条件:15 cm×1mm×3μm氨基柱,流动相为含5%甲醇的CO2,柱温40℃,柱头压27.6MPa,UV 247 nm检测。结果:在选定固定相条件下.流动相对组分的洗脱和选择性影响最大,柱温、柱压次之。补骨脂素的回收率为96.9%(RSD=1.8%),异补骨脂素的回收率为95.I%(RSD=I.6%)。培论:与超临界流体萃取法联用,本法可用于香豆素类化合物的分离分析。关键词 超临界流体色谱法;补骨脂素;异补骨脂素;超临界流体萃取法材料和方法 药品和试剂:补骨脂药材由上海长海医院提供,并由本院生药教研室李彬鉴定;补骨脂素(psoralen)、异补骨脂索(isopsoralen)对照品购自中国药品生物制品检定所;SFE和SFC所用CO2购自上海BOC气体公司;蒽(内标物)和氯仿为分析纯;甲醇为HPLC级。 仪器:SFX 2-10萃取器,model 100DX/DM 注射泵,泵控制器. MWD检测器(ISCO.USA),eppendof CH.30色谱柱加热器。 SFE条件:萃取溶剂为CO2,加入氯仿0.06 ml作改性剂,压力为38.5 MPa,温度为70℃:,静态萃取1 min,动态萃取7ml,限流管温度80℃,甲醇作吸收溶剂。 SFC条件:用SpheriorbNH2 柱(150mm×lmm×3μm,A1ltech,USA),流动相为含5%甲醇的CO2.柱头压27.6 MPa,柱温4O℃ ,进样量为0.5, 流速为0.10ml/min,采用50cm×15μm石英毛细管作限流管,检测器AUFS 0.05,247 nm检测。结果与讨论1 固定相/流动相对保留的影响 以超临界C02(含少量改性剂)为基本流动相的SFC是正相色谱,一些极性较弱的化合物在C18柱上几乎不保留 本实验中补骨脂素和异补骨脂素很快从Cl8柱上洗脱,几乎没有分离效果,所以未用C18柱而改用正相NH2柱。 改性剂浓度对组分的保留影响很大。在NH2柱上.用纯C02作流动相时,补骨脂素和异补骨脂素在60min内未洗脱;而在高浓度改性剂时,因两者结构较相似,几乎同时洗脱。本实验用5% 甲醇时洗脱效果良好.2 温度、压力对SFC的影响 温度和压力对保留也有影响。本实验在20.7~ 34.5 MPa压力范围和3O~6O℃ 温度范围内考察了这两个因素的影响。保留时问随压力增大而缩短;随温度升高而延长.3 标准曲线 在上述最佳色谱条件下.补骨脂素、异补骨脂素、内标蒽保留时间分别为6.37,5.00和4.00 min。 用甲醇分别配制对照品溶液和内标溶液:补骨脂素0.423mg/ml,异补骨脂素0.17mg/ml,蒽1.343 mg/ml。分别精密吸取对照品溶液25,50.100.200,400和600μl于10m1量瓶中,加入内标溶液5Oμl,定容,进行SFC分析。以对照品峰与内标峰面积之比(Y)对各自浓度(x,μ/m1)回归.得回归方程。 补骨脂素:Y=23.49X+1.37×10-4,r =0.999; 异补骨脂素:Y:20.04X+0.016.r =0.999。4 方法回收率 精密量取补骨脂素、异补骨脂素溶液各150.250和350μl,加入酸洗硅藻土50mg,挥干溶剂.按SFE条件萃取;甲醇吸收液再加入内标溶液50μl,定容、稀释,各进祥3次,按SFC步骤渊定,计算上述3种浓度的回收率,补骨脂素的回收率为96.9%( r=9.RSD=1.8%);异补骨脂素的回收率为95.1% ( r=9,RSD:1.6% )。5 样品测定 分别取3批干燥药材粉碎.过1OO目筛.精密称取粉末50mg按上述条件萃取;在甲醇吸收液中加入适量内标液,稀释后每份溶液进样3次.按上述色谱条件测定,代入标准曲线,得3批药材中的补骨脂素、异补骨脂索含量分别为0.77%.0.70% ;0.86% .0.82% :0.65% ,0.53% 。 以上结果表明:流动相组成是影响分离的最重要因素,加入改性剂可大大改善中等极性化合物的洗脱分离。系统的温度和压力对分离也有影响。与SFE联用,SFC可以较方便地用于某些香豆素类化合物的分离分析。
关于印发化妆品中氢化可的松等禁用物质或限用物质检测方法的通知 国食药监保化13号 2012年01月18日 发布 各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局(药品监督管理局): 为规范化妆品中禁用物质和限用物质检测技术要求,提高化妆品质量安全,化妆品中氢化可的松等禁用物质或限用物质的检测方法已经国家食品药品监督管理局化妆品标准专家委员会审议通过,现予印发。 附件:1.化妆品中氢化可的松等7种禁限用物质的检测方法 2.化妆品中水杨酸的检测方法 3.化妆品中酮麝香的检测方法 4.化妆品中巯基乙酸的检测方法 5.化妆品中8种邻苯二甲酸酯的检测方法 6.化妆品中4-氨基偶氮苯和联苯胺的检测方法 7.化妆品中苯并芘的检测方法 8.化妆品中4-氨基联苯及其盐的检测方法 9.化妆品中间苯二酚的检测方法 10.化妆品中32种禁限用染料成分的检测方法 11.化妆品中苯扎氯铵的检测方法 12.化妆品中羟基喹啉的检测方法 13.化妆品中过氧化氢的检测方法 14.化妆品中苄索氯铵、劳拉氯铵和西他氯铵的检测方法 15.化妆品中颜料橙5等5种禁用着色剂检测方法 16.化妆品中呋喃香豆素类(三甲沙林、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素)和欧前胡内酯的检测方法 17.化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法 国家食品药品监督管理局 二○一二年一月十六日
[align=center][b]HPLC法测定黄芪水提物中的毛蕊异黄酮苷含量[/b][/align][b]黄芪中的主要有效成分除皂苷外就是异黄酮类化合物。异黄酮类成分具有调节免疫、抗肿瘤、抗突变、抗氧化、抗炎、抗突变抗辐射、抗心肌缺血、抗心律失常、抗病毒、抗细胞凋亡、保肝、防止动脉粥样硬化等作用[sup][/sup],其代表成分就是毛蕊异黄酮 7-O-β-D 吡喃葡萄糖苷(即毛蕊异黄酮苷)。2010版药典才开始将毛蕊异黄酮苷收录为黄芪中有效成分含量测定项。本章实验借鉴药典中的测定方法,对不同工艺条件下获得的黄芪水提物中的毛蕊异黄酮苷含量进行考察,以期为优化芪龙胶囊和黄芪配方颗粒中黄芪的提取工艺参数提供科学基础和理论依据。[b]1 材料和仪器1.1 样品 [/b] 收集9组黄芪水提取物样品,黄芪饮片为济南济成堂中药饮片有限公司提供(批号18033101)。[b]1.2 试剂 [/b]毛蕊异黄酮苷对照品(成都瑞芬思生物科技有限公司批号M-020-170926),乙腈为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司);甲酸(天津市科密欧化学试剂有限公司);超纯水。[b]1.3 仪器 [/b]液相色谱系统,包括日本岛津公司LC-20AT型液相色谱仪,LC-20AT岛津输液泵,CTO-20A柱温箱,SIL-20A自动进样器,SPD-20A紫外-可见光检测器;超声波清洗机KS-300E(宁波科生仪器厂);电子天平MS205DU(梅特勒/瑞士)。[b]2 方法学考察2.1 色谱条件及系统适应性试验[/b]DiamonsiL(钻石)C18柱(250*4.6 mm,5 mm)。以乙腈为流动相A,0.2%甲酸溶液为流动相B,梯度洗脱,A相:0→20 min A为20→40%;20→30 min A保持40%;30→40 min A保持20%。检测波长260 nm;流速为1 mL/min;柱温35 ℃进样量为10 μL。毛蕊异黄酮苷对照品溶液以及黄芪水提物样品色谱图见图4-1与图4-2。[/b][align=center][img=,690,365]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908131706005051_4964_3237657_3.png!w690x365.jpg[/img][/align][align=center]图4-1 毛蕊异黄酮苷对照品色谱图[/align][align=center][img=,690,384]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908131706118782_6652_3237657_3.png!w690x384.jpg[/img][/align][align=center]图4-2 黄芪水提物样品色谱图[/align][b]2.2 供试品溶液的制备[/b]精密称定1/50重量的黄芪水提物样品(折合黄芪药材2 g)置于锥形瓶中,精密加入50 mL甲醇,超声30 min,过滤,将滤液放至水浴锅上蒸干,残渣用甲醇溶解,并定容至25 mL,用0.22 μm的微孔滤膜过滤,即得。[b]2.3 对照品储备溶液的制备[/b]精密称取黄芪甲苷标品5.10mg至10 mL容量瓶中,用甲醇溶解后定容,摇匀,即得浓度为0.51 mg/mL的对照品储备溶液。[b]3 结果3.1 线性关系考察[/b]精密吸取 2. 3 项下对照品储备溶液 4,2,1,0.5,0.25 mL至10 mL容量瓶中,用甲醇定容,得到浓度为204.00,102.00,51.00,25.50,12.75 μg/mL的对照品溶液。按“2.3”项下色谱条件分别进样10 μL,利用自动积分功能测定峰面积积分值,并以峰面积积分值与浓度进行线性回归。如图3,得回归方程为:Y =25445X + 44225(r[sup]2[/sup]= 0.9994)提示毛蕊异黄酮苷在12.75~204.00 μg/mL范围内线性关系良好。毛蕊异黄酮苷对照品标准曲线如图4-3所示。[align=center][img=,690,406]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908131706302801_395_3237657_3.png!w690x406.jpg[/img][/align][align=center]图4-3 毛蕊异黄酮苷标准曲线[/align][b]3.2 精密度实验[/b]按2. 2 项下方法制备供试品溶液,精密吸取供试品溶液10 μL,重复进样 6 次,记录色谱图峰面积,测定毛蕊异黄酮苷含量,计算得相对标准偏差RSD为1.6% ,提示该方法精密度良好。[b]3.3 重复性实验[/b]取同一黄芪样品 6份,按“2. 2”项下方法制备供试品溶液,在拟定分析条件下,精密吸取供试品溶液10 μL,测定毛蕊异黄酮苷含量,计算得RSD为1.1%,提示该方法重复性良好。[b]3.4 稳定性实验 [/b]按2. 2 项下方法制备供试品溶液,分别在0 h、3 h、6 h、9 h、24 h、48 h后,准确吸取 10 μL 进样分析,测定毛蕊异黄酮苷含量,计算得 RSD 为 0.6%,提示黄芪供试品溶液在48h内稳定性良好。[b]3.5 加样回收率实验[/b]精密称取 6 份毛蕊异黄酮苷含量已知的黄芪水提物样品,每份折合黄芪药材 0. 5 g,分别准确加入样品中毛蕊异黄酮苷含量的50%,50%,100%,100%,150%,150%重量的毛蕊异黄酮苷标品,按2. 2 项下方法制备供试品溶液,准确吸取 10 μL 进样分析,测定毛蕊异黄酮苷含量,计算回收率,结果见表4-1。方法平均回收率为108.48%,表明该方法具有较好的回收率。[align=center]表4-1 毛蕊异黄酮苷加样回收率测定结果[/align] [table][tr][td] [align=center]样号[/align] [/td][td] [align=center]样品中的量/mg[/align] [/td][td] [align=center]加入量[/align] [align=center]/mg[/align] [/td][td] [align=center]测得量/mg[/align] [/td][td] [align=center]回收率[/align] [align=center]/%[/align] [/td][td] [align=center]平均值/%[/align] [/td][td] [align=center]RSD[/align] [align=center]/%[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]0.52 [/align] [/td][td] [align=center]1.64 [/align] [/td][td] [align=center]111.54 [/align] [/td][td=1,6] [align=center]108.85 [/align] [/td][td=1,6] [align=center]2.9 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]0.52 [/align] [/td][td] [align=center]1.64 [/align] [/td][td] [align=center]112.08 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]2.22 [/align] [/td][td] [align=center]109.20 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]2.24 [/align] [/td][td] [align=center]111.02 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]1.59 [/align] [/td][td] [align=center]2.72 [/align] [/td][td] [align=center]104.57 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]1.59 [/align] [/td][td] [align=center]2.72 [/align] [/td][td] [align=center]104.67 [/align] [/td][/tr][/table][b]3.6 毛蕊异黄酮苷的含量测定结果[/b]取9组黄芪水提物按照“2.2”项下操作,制备供试品溶液,准确吸取 10 μL 进样分析,测定毛蕊异黄酮苷的含量。结果见表2。[align=center]表4-2 9组黄芪水提物中毛蕊异黄酮苷含量测定结果[/align] [table][tr][td] [align=center]批号[/align] [/td][td] [align=center]峰面积[/align] [/td][td] [align=center]含量(mg/g)[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1123989.50 [/align] [/td][td] [align=center]0.53 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2707047.50 [/align] [/td][td] [align=center]1.31 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1947171.50 [/align] [/td][td] [align=center]0.93 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]3573103.75 [/align] [/td][td] [align=center]1.73 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]1824562.00 [/align] [/td][td] [align=center]0.87 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]2767419.00 [/align] [/td][td] [align=center]1.34 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7[/align] [/td][td] [align=center]2077551.50 [/align] [/td][td] [align=center]1.00 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]1677225.50 [/align] [/td][td] [align=center]0.80 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]9[/align] [/td][td] [align=center]1725416.00 [/align] [/td][td] [align=center]0.83 [/align] [/td][/tr][/table][b]3.7 毛蕊异黄酮苷转移率测定正交试验结果[/b]水提的毛蕊异黄酮苷转移率考察正交试验与水提的出膏率考察正交试验设计相同,即以水作为提取溶剂,把影响药材提取效果的用水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)确定为考察因素,以上三个考查因素各分3个水平考察,见表4-3。[align=center]表4-3水提实验因素水平表[/align] [table][tr][td=1,2] [align=center]水平[/align] [/td][td=3,1] [align=center]因素[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]A(用水量/倍)[/align] [/td][td] [align=center]B(提取时间/h)[/align] [/td][td] [align=center]C(提取次数/次)[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][/tr][/table][b] [/b]毛蕊异黄酮苷转移率=各实验组黄芪提取物中毛蕊异黄酮苷含量/原黄芪药材中毛蕊异黄酮苷含量×100%。原药材中毛蕊异黄酮苷的含量按照药典的方法测得的结果为0.1425mg/g。跟据实验数据,得到水提实验中设定的不同工艺条件下的毛蕊异黄酮苷的转移率,其中因素D为误差项,作直观分析表和方差分析表,见表4-4,4-5。[align=center]表4-4 毛蕊异黄酮苷转移率考察L[sub]9[/sub](3[sup]4[/sup])正交试验表[/align] [table][tr][td] [align=center]批号[/align] [/td][td] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]D[/align] [/td][td] [align=center]毛蕊异黄酮苷[/align] [align=center]转移率/%[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]37.21[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]91.77[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]65.58[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]121.62[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]61.36[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]93.85[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]70.08[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]56.28[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]9[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]57.94[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]K1[/align] [/td][td] [align=center]194.56[/align] [/td][td] [align=center]228.91[/align] [/td][td] [align=center]187.34[/align] [/td][td] [align=center]156.51[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]K2[/align] [/td][td] [align=center]276.83[/align] [/td][td] [align=center]209.41[/align] [/td][td] [align=center]271.33[/align] [/td][td] [align=center]255.70[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]K3[/align] [/td][td] [align=center]184.30[/align] [/td][td] [align=center]217.37[/align] [/td][td] [align=center]197.02[/align] [/td][td] [align=center]243.48[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]优水平[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]R[/align] [/td][td] [align=center]92.53[/align] [/td][td] [align=center]19.50[/align] [/td][td] [align=center]83.99[/align] [/td][td] [align=center]99.19[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][/table][b] [/b][align=center]表4-5 毛蕊异黄酮苷转移率考察方差分析表[/align] [table][tr][td] [align=center]方差来源[/align] [/td][td] [align=center]离差平方和[/align] [/td][td] [align=center]自由度[/align] [/td][td] [align=center]F[/align] [/td][td] [align=center]显著性[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center]1715.05[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1.50[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]64.09[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]0.04[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]1407.78[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1.13[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]方差来源[/align] [/td][td] [align=center]离差平方和[/align] [/td][td] [align=center]自由度[/align] [/td][td] [align=center]F[/align] [/td][td] [align=center]显著性[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D [/align] [/td][td] [align=center]1950.20[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][/tr][/table]注:F[sub]0.1[/sub](2,2)=9,F[sub]0.05[/sub](2,2)=19,*为有显著性,-为无显著性。从正交试验结果可知:水提实验中,各因素对毛蕊异黄酮苷转移率的影响大小顺序为:A(用水量)C(提取次数)B(提取时间);每个因素3水平之间的趋势为A[sub]2[/sub]A[sub]1[/sub]A[sub]3[/sub],B[sub]1[/sub]B[sub]3[/sub]B[sub]2[/sub],C[sub]2[/sub]C[sub]3[/sub]C[sub]1[/sub],直观分析得提取工艺为A[sub]2[/sub]B[sub]1[/sub]C[sub]2[/sub],即加水8倍量,提取2次,每次1h。表4-5的方差分析结果表明: A、B、C三因素的对毛蕊异黄酮的转移率影响都无统计学差异(PC(提取次数)B(提取时间);每个因素3水平之间的趋势为A[sub]2[/sub]A[sub]3[/sub]A[sub]1[/sub],B[sub]1[/sub]B[sub]3[/sub]B[sub]2[/sub],C[sub]2[/sub]C[sub]3[/sub]C[sub]1[/sub],直观分析得提取工艺为A[sub]2[/sub]B[sub]1[/sub]C2,即加水8倍量,提取2次,每次1h。表4-7的方差分析结果表明:A、B、C三因素对综合评分的影响都无统计学差异(P0.05)。[b]4 讨论[/b]本章实验借鉴药典中测定黄芪药材中毛蕊异黄酮苷含量的方法,利用紫外-可见光检测器的高效液相色谱仪测定黄芪水提物中毛蕊异黄酮苷的含量。与药典中方法测得的结果相比,本实验测得的结果除色谱峰分离度稍差外,其他方法学考察指标显示良好。从毛蕊异黄酮苷转移率测定正交试验结果来看,第4组实验毛蕊异黄酮苷转移率最高,这也是正交结果分析中最佳提取工艺,即加水8倍量,提取2次,每次1小时。本结果与上一章实验中第四组黄芪水提物中黄芪甲苷的转移率最高结果一致,但其他组别毛蕊异黄酮苷的转移率高低顺序与上一章黄芪甲苷的转移率高低顺序并不一致,这说明毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷对提取工艺的要求并不完全一致。同一种原药材,加工成不同功效的药物,那么发挥药效的物质也有可能不同,因此相应的提取工艺也是需要根据药效物质适时调整的。另外,用水量在设置的三个因素中对毛蕊异黄酮苷的转移率影响最大,但仍无统计学差异(P0.05),说明用水量、提取次数、提取时间三种工艺的改变对黄芪水提物中毛蕊异黄酮苷的含量无显著性影响。从综合评分计算正交试验结果来看,第4组实验综合评分最高,这也是正交结果分析中最佳提取工艺,即加水8倍量,提取2次,每次1小时。用水量在设置的三个因素中对综合评分影响最大,但仍无统计学差异(P0.05),说明用水量、提取次数、提取时间三种工艺的改变对黄芪水提工艺的综合评分无显著性影响。综合出膏率、黄芪甲苷和毛蕊异黄酮苷的含量得出综合评分来优选黄芪水提的最佳提取工艺,能够从化学成分的角度来客观全面地评价和研究黄芪水提的关键环节,这也为芪龙胶囊和黄芪配方颗粒水提环节工艺的优化提供借鉴和指导。[align=center] [/align][align=center]参考文献[/align] 陈建真,吕圭源, 叶磊, 等.黄芪黄酮的化学成分与药理作用研究进展. 医药导报, 2009, 28(10): 1314-1316. 赵四清,周日宝, 陈胜璜, 等.不同的产地加工方法对中药材金樱子质量的影响. 湖南中医学院学报, 2005, 25(3): 21-22.
[align=center][b]超高效液相色谱-串联质谱法测定大豆中大豆异黄酮的含量[/b][/align][align=center]户江涛[/align][align=center](农业农村部豆类产品质量安全风险评估实验室(佳木斯),黑龙江省农垦科学院测试化验中心,黑龙江佳木斯 154007 )[/align]摘要:采用超高效液相色谱-串联质谱法建立了检测大豆中大豆异黄酮含量的分析方法。试样经90%甲醇水提取后,6种大豆异黄酮在C[sub]18[/sub]色谱柱上以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,进行液相色谱分离;质谱检测采用电喷雾正离子化模式和多反应监测模式(MRM)。结果表明,6种大豆异黄酮分别在0.01~0.5 mg/L(D、GL、G)和0.002~0.1 mg/L(De、GLe、Ge)范围内线性关系良好,相关系数(R)为0.9993~0.9998,定量限(LOQ)为0.0001 g/kg。在大豆空白样品添加浓度分别为0.01、0.05、0.2 g/kg(De、GLe、Ge)和0.2、1、2 g/kg(D、GL、G),6种大豆异黄酮的平均回收率为86.6%~96.2%,相对标准偏差(RSD)为1.07%~5.93%(n=6)。本方法简便、灵敏、抗干扰,适用于大豆中大豆异黄酮含量检测。关键词:超高效液相色谱-串联质谱;大豆;大豆异黄酮[align=center]Determination of soybeanisoflavone in soybean by ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry[/align][align=center]HU Jiangtao[/align][align=center]([i]Laboratory of Qualityand Safety Risk Assessment for Soybean products, Ministry of Agriculture andRural Affairs, Testing and Analysis Center of Heilongjiang Academy of LandReclamation Sciences, Jiamusi 154007,China[/i])[/align][b]Abstract:[/b]A methodwasdeveloped for the determination of soybeanisoflavone in soybean by ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS). The samples were extracted by 90% methanol-water, then 6 soybean isoflavones were separated on aWaters BEH C[sub]18[/sub] column with gradient elution with the mobile phase of0.1% formic acid and acetonitrile, and finally detected by positive eletrosprayionization-mass spectrometry(ESI[sup]+[/sup]-MS/MS) in multiple reactionmonitoring(MRM) mode. The results showed the linearities of 6 soybean isoflavones were good in the concentrationrange of 0.01~0.5 mg/L(D、GL、G)and 0.002~0.1 mg/L(De、GLe、Ge), the correlation coefficients were 0.9993~0.9998. The limitof quantification(LOQ) of soybean isoflavone was 0.0001 g/kg. At the spiked levels of 0.01、0.05、0.2 g/kg(De、GLe、Ge)and 0.2、1、2 g/kg(D、GL、G) in the blank soybean samples, the mean recovery of soybeanisoflavone was 86.6%~96.2%, andthe relative standard deviation(RSD) was 1.07%~5.93%(n=6).This method is simple,sensitive, anti-jamming and suitable for simultaneous determination of soybean isoflavone in soybean.[b]Key words: [/b]ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry (UPLC-MS/MS) soybean soybean isoflavone大豆异黄酮(soybean isoflavone)是一族化合物的统称,是大豆植物体内的一种次生代谢产物,是大豆主要活性成分之一,其母核为3-苯并吡喃酮,主要包括大豆苷、大豆黄苷、染料木苷及其相应苷元[sup][/sup]。研究表明,大豆异黄酮除具有天然抗氧化作用外[sup][/sup],还具有降低胆固醇含量、预防多种癌症及改善妇女更年期综合征等多方面生物功效[sup][/sup]。大豆异黄酮主要存在于大豆籽实中,其总含量约为0.4~5 g/kg,其中大豆苷、大豆黄苷和染料木苷这三种含量约占总量的97%~98%,而其对应的苷元含量仅占2%~3%左右[sup][/sup]。目前,大豆异黄酮的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)[sup][/sup]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[sup][/sup]、紫外分光光度法[sup] [/sup]、质谱法(HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[sup][/sup])等。紫外分光光度法[sup] [/sup]只能测定大豆异黄酮总量,且灵敏度不高;[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[sup][/sup]需要对异黄酮进行衍生,前处理复杂;目前,大豆异黄酮检测现有的国家标准GB/T 26625-2011[sup] [/sup]采用的是高效液相色谱法(HPLC),在实际检测过程中发现,由于紫外检测器灵敏度不高,存在个别样品中异黄酮相应苷元检测不到的情况;同时大豆提取液中含有蛋白、脂肪等杂质影响色谱柱柱效,以至于不能满足分离度要求,严重干扰低含量组分峰面积积分定量。而[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法质谱检测器灵敏度高,通过选定大豆异黄酮的特征离子,能有效去除上述杂质干扰,定量更加准确可靠。目前,国内外采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法检测大豆中大豆异黄酮含量的文献很少[sup][/sup]。本文对大豆中大豆异黄酮检测的前处理方法借鉴GB/T 26625-2011[sup][/sup],提取液改用UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS测定。该方法前处理过程简便、灵敏度高、分析时间短、抗干扰能力强,适用于大批量大豆样品中大豆异黄酮含量的检测。[b]1 实验部分[/b]1.1 材料与试剂大豆苷(daidzin,记为D,以下同)、大豆黄苷(glycitin,GL)、染料木苷(genistin, G)、大豆素(daidzein,De)、大豆黄素(glycitein, GLe)、染料木素(genistein,Ge)(纯度≥99%,Dr.Ehrenstorfer公司);甲醇、乙腈、甲酸(色谱纯,Fisher公司);实验用水为Millipore纯水仪制备。1.2 仪器与设备Acquity UPLC型超高效液相色谱仪(Waters公司);XEVO TQ-S三重四级杆质谱仪(Waters公司);KQ-500DE型超声波仪(昆山市超声仪器有限公司);涡旋混合器(IKA公司);CR21GⅢ型高速离心机(HITACHI公司)。1.3 大豆异黄酮标准储备液的配置分别称取适量的D、GL、G、De、GLe、Ge标准品,用甲醇配置成质量浓度为1mg/mL标准储备液,于-18℃冰箱保存(有效期6个月),待用;使用时用10%甲醇水逐级稀释成所需浓度的混合标准工作液,现用现配。1.4 样品前处理提取:称取粉碎均与后的试样1.0g(精确到0.01g)于50mL聚乙烯离心管中,加入10.0 mL90%甲醇水,涡旋混合30 s后置于60℃超声波清洗器中提取30 min,在离心机中以15000 r/min离心5 min,将上清液转移至100 mL容量瓶中,残渣再加入10.0 mL90%甲醇水溶液按上述步骤提取后,合并两次上清液于100 mL容量瓶中,用10%甲醇水溶液定容至刻度,摇匀。a)De、GLe、Ge的测定:取1 mL过0.22um有机系微孔滤膜,供UPLC/MS/MS分析测定;b)D、GL、G的测定:由于D、GL、G含量较高,需要将a)中过完滤膜的待测液用10%甲醇水稀释50倍后,供UPLC/MS/MS分析测定。1.5 液相色谱及质谱条件液相色谱:色谱柱:Waters BEH C[sub]18[/sub](1.7 μm,50mm×2.1mm);柱温:30℃;流速:0.5 mL/min;进样量:1μL;流动相A:乙腈;流动相B:0.1%的甲酸水溶液。梯度洗脱程序:0~0.5min,10% A;0.5~3. 0 min,10%~100% A;3. 0 ~4. 0 min,100%A,4 ~4.1.1min,100% A~10% A,4.1 ~5.0min 10% A。质谱:离子源:电喷雾离子源( ESI [sup]+[/sup] ) ;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测( MRM);毛细管电压:3.2 kv;离子源温度:150℃;去溶剂气温度:500℃;去溶剂气流量:1000 L /h;定性、定量离子对及碰撞能量见表1。[align=center]表1大豆异黄酮的质谱参数[/align][align=center]Table 1 MRM parameters of soybean isoflavone[/align] [table][tr][td] [align=center]Analyte[/align] [/td][td] [align=center]Cone/V[/align] [/td][td] [align=center]Parent ion/(m/z)[/align] [/td][td] [align=center]Daughter ion/(m/z)[/align] [/td][td] [align=center]Collision energy/V[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]417[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]255﹡[/align] 137[/td][td] [align=center]27[/align] [align=center]18[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]G[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]433[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]271﹡[/align] 153[/td][td] [align=center]21[/align] [align=center]50[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]GL[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]447[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]285﹡[/align] 270[/td][td] [align=center]25[/align] [align=center]46[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]De[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]255[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]137﹡[/align] 181[/td][td] [align=center]30[/align] [align=center]26[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]Ge[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]271[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]153﹡[/align] 215[/td][td] [align=center]30[/align] [align=center]25[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]GLe[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]285[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]242﹡[/align] 168[/td][td] [align=center]27[/align] [align=center]35[/align] [/td][/tr][/table]﹡quantitativeion[b]2 结果与讨论[/b]2.1 色谱及质谱条件的优化流动相的选择:对比了酸性体系(0.1%甲酸水溶液)与非酸性体系(纯水、乙酸铵溶液)分别与甲醇、乙腈的流动相体系组合,结果发现目标物在酸性体系中比非酸性体系响应更高、峰形更好;同时大豆提取液中含有蛋白、脂肪等杂质可能会残留在色谱柱上,影响色谱柱的使用寿命,而乙腈比甲醇体系洗脱能力更强,可以有效去这些杂质。综合考虑目标物信号强度、色谱分离效果以及除杂等因素,本研究采用0.1%甲酸水溶液+乙腈流动相体系。质谱的选择:根据6种大豆异黄酮的分子量,用10%甲醇水配置1.0 mg/L 大豆异黄酮标准溶液直接注射到质谱中,在正离子模式下分别对各种组分进行母离子及对应子离子全扫描,最终确定的质谱条件见表1。2.2 质谱法(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS)与色谱法(HPLC)的比较国家标准《GB/T 26625-2011粮油检验大豆异黄酮含量测定高效液相色谱法》[sup][/sup]中规定的大豆异黄酮检测方法为HPLC法。对同一大豆样品分别采用本文UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法(MRM色谱图见图1、2)和GB/T 26625 HPLC法检测,结果表明这两种方法测定的大豆异黄酮总含量值基本一致。由于De、GLe、Ge这三种苷元在大豆中含量很低,用HPLC法检测时,紫外检测器灵敏度不高,存在个别样品中上述三种组分检测缺失的情况;同时在实际大批量样品检测中发现,随着进样次数的增加,色谱柱柱效下降,大豆提取液中存在的蛋白、脂肪等杂质对含量低的目标物峰干扰越来越大,定量困难。研究发现,同浓度的大豆异黄酮在质谱检测器上的响应值要远远超过紫外检测器,同时质谱法可以通过选定大豆异黄酮的特征离子,有效地去除杂质的干扰,其目标物分离度不受色谱柱进样次数增加的影响,定量更加准确可靠。[align=center][img=,690,651]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050912587968_4111_3299836_3.jpg!w690x651.jpg[/img][/align][align=center]图1 大豆异黄酮标准溶液(0.01mg/L)MRM色谱图[/align][align=center]Fig.1 MRM chromatograms of soybean isoflavone standard solution at 0.01 mg/L[/align][align=center][/align][align=center][img=,690,653]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050913342201_5843_3299836_3.jpg!w690x653.jpg[/img][/align][align=center]图2 大豆样品中大豆异黄酮MRM色谱图[/align][align=center]Fig.2 MRM chromatograms of soybean isoflavone in soybean[/align]2.3线性范围和定量限吸取不同体积的大豆异黄酮标准储备液(1.3),用10%甲醇水分别配置0.002、0.005、0.01、0.05、0.1(De、GLe、Ge)和0.01、0.05、0.1、0.2、0.5(D、GL、G)的大豆异黄酮上机混合标准溶液,以各自定量离子的峰面积为Y对应质量浓度X(mg/L)做标准曲线,得到的线性方程和相关系数见表2。结果表明,大豆异黄酮标准溶液在各自浓度范围内线性良好,相关系数R为0.9993~0.9999。以10倍信噪比(S/N)计算,大豆异黄酮上机液最低定量浓度为0.001 mg/L,通过公式(1)计算得到大豆中大豆异黄酮含量,最终确定本方法大豆异黄酮的定量限(LOQ)为0.0001 g/kg。糠氨酸质量分数计算公式:[align=center][img=,207,87]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050915166414_5621_3299836_3.jpg!w207x87.jpg[/img] ………………(1)[/align] 式中:X为试样中大豆异黄酮含量,以g/kg计;C为大豆异黄酮上机浓度(mg/L);V为定容体积(V=100)。表2 大豆异黄酮标准溶液的线性方程和相关系数[align=center]Table 2 Linear equation and correlation of soybean isoflavone in 10% methanol-water standard solutions[/align] [table][tr][td] [align=center]Analyte[/align] [/td][td] [align=center]Linear range/(mg/L)[/align] [/td][td] [align=center]Linear equation[/align] [/td][td] [align=center]R[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D[/align] [align=center]GL[/align] [align=center]G[/align] [align=center]De[/align] [align=center]GLe[/align] [align=center]Ge[/align] [/td][td] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [/td][td] [align=center]Y=2393.6x+479.38[/align] Y=1885x+139.66 [align=center]Y=1470.9x+187.97[/align] [align=center]Y=4287.9x+442.79[/align] [align=center]Y=3521.7x-103.62[/align] [align=center]Y=1993x+122.79[/align] [/td][td] [align=center]0.9995[/align] [align=center]0.9999[/align] [align=center]0.9993[/align] [align=center]0.9998[/align] [align=center]0.9997[/align] [align=center]0.9998[/align] [/td][td] [/td][/tr][/table]2.4回收率和精密度大豆中De、GLe、Ge含量较低,而D、GL、G含量较高,故本方法准确度实验分为高低浓度梯度组进行加标。称取大豆试样1.00 g,分别添加0.01、0.05、0.2 g/kg(De、GLe、Ge)和0.2、1、2 g/kg(D、GL、G),每个水平重复6次,同时做该大豆的空白本底实验。按照1.4前处理方法处理后上机检测,计算回收率(扣除空白),结果表明:不同添加浓度下,De、GLe、Ge的平均回收率为91.7%~96.2%,相对标准偏差(RSD,n=6)为2.78%~5.93%;D、GL、G的平均回收率为86.6%~93.8%,相对标准偏差(RSD,n=6)为1.07%~3.77%。[b]3 结语[/b]本文建立了超高效液相色谱-串联质谱法(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS)测定大豆中大豆异黄酮含量的分析方法。该方法灵敏度高,线性范围宽,能同时覆盖大豆中多梯度浓度大豆异黄酮组分含量的测定。同时该方法具有较高的准确度和精密度,前处理步骤简单,分析速度快,可有效避免由于色谱柱柱效下降对最终检测结果的影响,特别适合大批量样品的检测。田娟娟, 宋宏哲, 张飞, 等. 水剂法纯化大豆异黄酮的研究. 大豆通报, 2005, 6:19-22. Hagen M K, Ludke A, Araujo A S, et al.Antioxidant characterization of soy derived products in vitro and the effect ofa soy diet on peripheral markers of oxidative stress in a heart disease model .Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, 2012,90(8):1095-1103. 徐春华, 张治广, 谢明杰, 等. 大豆异黄酮的抗氧化和抗肿瘤活性研究研究 . 大豆科学, 2010, 29(5): 870-873. 李俏俏, 王清路, 薛金艳, 等. 大豆异黄酮对绝经女性血清中脂类物质的影响的研究 . 大豆科学, 2009, 28(1):172-174. 胡润芳, 张玉梅, 陈宇华, 等. 大豆异黄酮含量的初步研究. 东南园艺, 2017, 6:9-11. 刘琴, 朱媛媛, 白兴梁. 不同种类大豆中大豆异黄酮含量及抗氧化性比较. 北京工商大学学报(自然科学版), 2012, 30(6): 45-51. 袁凤杰, 姜莹, 董德坤, 等. 中国大豆核心种质异黄酮含量分析.中国粮油学报, 2011, 26(2):5-8. Tepavcevic V, Atanackovic M,Miladinovic J,et al. Isoflavone composition,total polyphenolic content,and antioxidant activity in soybeans of different origin. MedFood,2010,13(3):657-664 GB/T 26625-2011《粮油检验大豆异黄酮含量测定高效液相色谱法》. Liggins J,Bluck J C. Deidzein and genistein content of fruits and nuts. Journal ofNutritional Biochemistry,2000,11(6):326-331. 鞠兴荣, 袁建, 汪海峰. 三波长紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量的研究. 食品科学, 2001, 22(5):46-48.
我准备用紫外来测定我的样品中总异黄酮的含量,但由于我是用乙醇对原料进行提取的,得到的样品液中不仅含有异黄酮,随之色素、醇溶性蛋白也被提取出来,那么我在测量的时候怎么把这些杂质的干扰扣除?急寻帮助!
【作者】 王晓辉; 刘涛; 李清; 陈晓辉; 毕开顺;【Author】 WANG Xiaohui,LIU Tao,LI Qing,CHEN Xiaohui,BI Kaishun(School of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China)【机构】 沈阳药科大学药学院; 沈阳药科大学药学院 辽宁沈阳110016; 辽宁沈阳110016;【摘要】 对蒙古黄芪中5种异黄酮类成分的含量进行了反相高效液相色谱法测定。色谱柱为D iam ons il C18柱,流动相为乙腈-水系统,梯度洗脱,检测波长230nm,柱温35℃。毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷在20.12~201.2m g/L、芒丙花素-7-O-β-D-葡萄糖苷在4.62~46.2m g/L、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷在4.86~48.6m g/L、毛蕊异黄酮在9.24~92.4m g/L、芒丙花素在6.92~69.2m g/L时峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999 2,0.999 7,0.999 7,0.999 5和0.999 5。5种成分的加样回收率均高于94%,相对标准偏差(RSD)小于3.2%(n=9)。该法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于黄芪药材中5种主要异黄酮类成分的含量测定。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207301613_380608_2379123_3.jpg
黄芪净药材—毛蕊异黄酮葡萄糖苷梯度设置请教一下怎么设置的 为什么我的不出峰 有没有做过的 请教请教[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106032032470096_8789_4180826_3.png[/img]
大豆异黄酮是从植物中提取,与雌激素有相似结构,因此又称植物雌激素,大豆异黄酮的雌激素作用影响到激素分泌、代谢生物学活性、蛋白质合成、生长因子活性,是天然的癌症化学预防剂。主要成分:大豆甙(Daidzin),大豆甙元(Daidzein),染料木甙(Genistin),染料木素(Genistein),黄豆甙(Glycitin),黄豆甙元(Glycitein)。迪马科技用户采用Endeavorsil C18超高效液相色谱柱成功实现8分钟内6种大豆异黄酮的良好分离,对于大豆异黄酮的分离和检测具有实际意义。UPLC色谱分析条件*:色谱柱:Endeavorsil C18 50 × 2.1 mm, 1.8 μm(Cat.#.:87002)流动相:A:0.2%的磷酸水溶液,B:乙腈时间(min)02467A(%)9085706090B(%)[align=cente
作者:程龙琼, 周晓英(成都市食品药品监督检测中心,四川 成都 610045)摘要:目的采用HPLC法测定青娥丸中补骨脂的含量。方法色谱柱为钻石C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm)。流动相为甲醇-水(55:45);流速1.0 ml.min-1;检测波长246 nm;柱温为室温。结果补骨脂素的线性范围是0.1004~1.5060μg(r=0.9998)。平均加样回收率为97.8%,RSD=1.92%(n=6)。异补骨脂素的线性范围是0.0830~1.2450μg(r=0.9993)。平均加样回收率为98.5%,RSD=1.60%(n=6)。结论所建方法可用于测定青娥丸中的补骨脂。谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207161015_377764_1606903_3.jpg
作者:徐晓明;徐大勇;邢俊波;(梅河口市卫生职工中等专业学校;梅河口市医院爱民医院药剂科;中国人民解放军总后卫生部药品仪器检验所;)摘要:目的建立补肾健脑软胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(48∶52),流速为1.0mL/min,检测波长为246nm,柱温40℃。结果补骨脂素和异补骨脂素线性范围分别为0.01008~0.252μg(r=0.9998)、0.00914~0.2285μg(r=0.9999)。平均回收率分别为98.91%(RSD=1.74%)、99.93%(RSD=1.27%)。结论本法分离度好,快速、简便,可作为该产品的质量控制方法。谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208131425_383490_1606903_3.jpg
[b][size=16px]药用补骨脂[/size][/b][size=16px][/size][b][size=16px]《药性论》:“主男子腰疼,膝冷囊湿,逐诸冷痹顽,止小便利,腹中冷。”《本草纲目》:“治肾泄,通命门,暖丹田,敛精神。”《本草求真》:“能敛神明,使心包之火与命门之火相通,因而元阳坚固,骨髓充实。”《本草经疏》:“能暖水脏,阴中生阳,壮火益土之要药也。”[/size][/b][size=16px][/size][size=16px]补骨脂单用有效,也常与杜仲、核桃仁、熟地黄、五味子、菟丝子等药材同用,以增强补肾壮阳、固精缩尿的效果。[/size][size=16px][/size][size=16px]如用于治疗由肾阳不足引起的阳痿遗泄、尿频、遗尿等症,常配伍仙灵脾、菟丝子等同用。治虚冷泄泻,常与肉豆蔻等同用。肾气不足,摄纳无权,引起喘促,补骨脂温肾而纳气平喘,常与胡桃肉配伍以治虚寒气喘。[/size]
【作者】 刘亚男; 王跃飞; 韩立峰; 潘桂湘; 王虹;【Author】 LIU Ya′nan,WANG Yuefei,HAN Lifeng,PAN Guixiang,WANG Hong(Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique Traditional Chinese MedicineResearch Centre of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China)【机构】 天津中医药大学中医药研究院现代中药发现与制剂技术教育部工程研究中心;【摘要】 目的:建立补骨脂药材中化学成分的高效液相色谱-电喷雾质谱分析方法。方法:采用DiamonsilTMC18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相0.05%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱;流速1 mL.min-1;柱温30℃;DAD扫描范围190~400nm;检测波长246 nm。Finnigan电喷雾离子阱多级质谱仪;正离子检测模式;ESI喷雾电压4 500 V;鞘气(N2)流速60个单位;辅助气(N2)流速20个单位;毛细管温度350℃;毛细管电压19 V,扫描范围m/z90~800。结果:补骨脂中化学成分获得了较好的分离和检测,共鉴定出2个香豆素苷,3个香豆素,8个黄酮和1个单萜酚类成分。结论:该方法灵敏度高、分离度好,适用于补骨脂药材中化学成分的快速定性鉴定。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207301609_380605_2379123_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207301609_380606_2379123_3.jpg
新手求助: 芦丁标准品,用来做类黄酮的标准曲线用的?有知道的请告诉一声。或者发个短信,不胜感激。13969884347 中国海洋大学食品工程学院
各位老师,帮忙想个办法能从黄芪蜜中分离出来毛蕊异黄酮葡萄糖苷
大豆异黄酮是一种植物性雌激素,又称为植物动情激素,是一种天然荷尔蒙,被认为有防癌丰胸之效,目前几乎没有明显副作用的报告。这个东西可防治一些和雌激素水平下降有关的疾病,延缓女性衰老、改善更年期症状、骨质疏松、血脂升高、乳腺癌、前列腺癌、心脏病、疏松症、心血管疾病等。对于高雌激素水平者,表现为抗激素活性,可防治乳腺、子宫内膜、结肠、前列腺、肺、皮肤等癌细胞的生长和白血病,及其它心血管疾病。其性状为:浅黄色粉末,气味微苦,略有涩味。来源于大豆类植物的胚芽,主要成分有:大豆甙(Daidzin),大豆甙元(Daidzein),染料木甙(Genistin),染料木素(Genistein),黄豆黄素(Glycitin),黄豆黄素甙元(Glycitein)。1 材料与方法1. 1 仪器与试剂1. 1. 1 仪器Waters2695高效液相色谱仪,配有二极管阵列检测器和Empower 色谱工作站; 脱气泵( 美国Millipore 公司) ; 超纯水系统( 美国Millipore公司) ; CW - 2000 超声波萃取仪(上海) 。1. 1. 2 试剂大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素对照品由美国Sigma 公司生产; 甲醇为色谱纯( 美国Fisher 公司) ; 乙醇、丙酮均为分析纯( 天津市科密欧化学试剂有限公司) ,磷酸为优级纯( 天津市化学试剂三厂) ; 实验用水为超纯水。1. 2 方法1. 2. 1 色谱条件色谱柱:Ultimate XB-C18 4.60×250mm,5 um .PartNumber 00201-31043Serial Number 211302350.检测器: 二极管阵列。检测波长: 254 nm。流动相: 1% 磷酸水溶液和甲醇采用梯度洗脱,洗脱程序如下: 0 ~ 4 min,70% 磷酸水溶液+30%甲醇; 14 ~ 24 min, 45% 磷酸水溶液+55% 甲醇; 25~ 30 min,70% 磷酸水溶液+ 30% 甲醇。柱流速: 1. 0 ml /min。柱温: 30℃。进样量: 10μl。1. 2. 2 标准曲线制作1. 2. 2. 1 标准溶液配制 单标标准储备液配制: 准确称取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、染料木素和大豆黄素对照品各0. 0500 g,分别置于小烧杯中,加70%乙醇溶解,如果不好溶解,可以在超声波中超声加速溶解,或者加入少量丙酮也可以加速溶解,待溶解完全后,移入50 ml 容量瓶中,加70% 乙醇定容至刻度,混匀,此溶液作为单标储备液,浓度各为1. 0 mg /ml。混合标准储备液配制: 准确吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、染料木素和大豆黄素单标储备液各5. 0 ml 于50 ml 容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,混匀,此混标溶液6 种成分浓度各为100 μg /ml。1. 2. 2. 2 标准工作曲线制备 准确吸取混合标准储备液2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0 ml 分别于100ml 容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,混匀,6种成分的浓度各为2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0 μg /ml,按1. 2.1 色谱条件进行测定; 以各组分浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线,得回归方程。1. 2. 3 样品测定1. 2. 3. 1 样品前处理 固体样品: 准确称取2. 0 g样品于100ml 容量瓶中,加入50 ml 70% 乙醇超声波提取30min,加70%乙醇定容至刻度,混匀, 0. 45μm 滤膜过滤后,供高效液相色谱测定用。液体样品: 准确吸取5. 0 ml 样品于100 ml 容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,混匀,0.45 μm滤膜过滤后,供高效液相色谱测定用。1. 2. 3. 2 样品测定 吸取样品处理液及标准溶液各10 μl,按1. 2. 1 色谱条件进行测定,以标准保留时间定性,峰面积外标法与标准系列比较定量。
【作者】 叶英响;【机构】 浙江省义乌市中心医院; 温州医学院附属义乌医院中药科;【摘要】 目的:建立癃闭舒片中补骨脂素的含量测定方法;方法:采用高效液相色谱法,色谱柱Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-1%冰醋酸水溶液(45∶55),检测波长297 nm;结果:补骨脂素回归方程为Y=41 651X+9 228,r=0.999 4,线性范围为3.52~17.6μg.mL-1,平均回收率101.1%,RSD 2.1%。结论:本方法简单、稳定,测定准确。 更多还原http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208131339_383473_2379123_3.jpg
如题请问用芦丁对照品绘制标准曲线是否能用槲皮素或其他的黄酮对照品替代?由于实验室的芦丁标准品不见了,老师建议先用槲皮素替代,请问是否可行?
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=87706]薄层色谱法分离鱼藤中异黄酮类化合物 [/url]
哪位大侠知道黄酮类标准品的有效时间是多少????????????、、、[em04]
[img=,690,186]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/09/201809252029170856_9222_3263389_3.png!w690x186.jpg[/img]色谱柱型号:C18/5um/4.6*250mm最近跑标准品:抗坏血酸、咖啡因、大豆异黄酮,最近两个月来新柱子和老柱子都跑成了分叉峰非常难看,看着基线都没问题,流动相比例也没调过,标准溶液也是新配的在有效期内,泵的压力也正常,那是什么原因请赐教了,感谢!
请问怎样可以买到像槲皮素等类黄酮物质的标准品?最好有电话,谢谢!
国内最大最专业的国家标准物质服务平台坛墨质检-国家标准物质中心(北京坛墨质检科技有限公司),是国家质检总局指定的国家标准物质研制单位,是国内最大最专业的食品、环境、职业卫生标准物质生产商和服务商。 产品编号 产品名称 标准值 BW6044林泽兰内酯D对照品,有报告HPLC≥98%BW6015辛辣内酯A对照品,有报告HPLC≥98%BW6043宋果灵/准噶尔乌头碱,对照品,有报告HPLC≥98%BW6035人参皂苷Rk1对照品,有报告HPLC≥98%BW5374白花前胡甲素对照品,有报告HPLC≥98%BW5003扁蒴藤素对照品,有报告HPLC≥98%BW6008五味子酚对照品,有报告HPLC≥98%BW5023桂皮醛对照品,有报告HPLC≥98%BW5027鬼舀毒素对照品,有报告HPLC≥98%BW5031麦角甾苷(毛蕊花糖苷)对照品,有报告HPLC≥98%BW5041毛蕊异黄酮苷;毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品,有报告HPLC≥98%BW5551灰毡毛忍冬皂苷乙对照品,有报告HPLC≥98%BW5055木犀草苷对照品,有报告HPLC≥98%BW5157新橙皮苷对照品,有报告HPLC≥98%BW5057橙皮苷对照品,有报告HPLC≥98%BW5062连翘酯苷A对照品,有报告HPLC≥98%BW5064苍术素对照品,有报告HPLC≥98%BW6086盐酸益母草碱对照品,有报告HPLC≥98%BW5068-2松脂醇二葡萄糖苷对照品,有报告HPLC≥97%BW5072人参皂苷Ro对照品,有报告HPLC≥98%BW5083欧当归内酯A对照品,有报告HPLC≥98%BW5080β-谷甾醇对照品,有报告HPLC≥98%BW5085棘苷;斯皮诺素对照品,有报告HPLC≥98%BW5084异欧前胡素对照品,有报告HPLC≥98%BW5090常春藤皂苷元对照品,有报告HPLC≥98%BW5093特女贞苷对照品,有报告HPLC≥98% 坛墨质检现有员工79人,办公室面积450平米,实验室1650平米;销售、客服、财务及行政人员35人,实验室工作人员21人,库房14人,市场部8人。实验仪器设备:气相色谱、液相色谱、气质联用、液质联用、离子色谱、紫外分光光度计,原子吸收、ICP-OES和ICP-MS;库房面积450平米,库房工作人员12人,现货产品5万个,坛墨质检自主研发的产品近3000个,已申报国标345项,填补国内空白的产品达到65项。坛墨质检是国内唯一提供标准溶液定制服务的标准物质研制单位,定制范围:特殊浓度定制、特殊溶剂定制、混标定制。
12月1日起,多项与食品质量直接相关的国家标准将正式实施,其中既有《运动饮料》等涉及具体食品的产品标准,也有《婴幼儿配方粉企业良好生产规范》等涉及企业质量安全管理的生产标准,更有《保健食品中大豆异黄酮的测定方法 高效液相色谱法》等与食品安全相关的检测标准,还有《食品用塑料自粘保鲜膜》这样的包装标准和《塑料一次性餐饮具通用技术要求》这样的通用标准,它们将一起进入我国食品安全规范的大家庭,为食品安全保驾护航。 标准对兴奋剂等方面要求更严,运动饮料严禁添加世界反兴奋剂机构最新版规定的禁用物质。更新后的《运动饮料》将运动饮料定义为:“营养素及其含量能适应运动或体力活动人群的生理特点,能为机体补充水分、电解质和能量,可被迅速吸收的饮料”,首次强调运动饮料被机体迅速吸收的特点。 同时,新国标还取消了产品分类、对净含量的要求和“国际奥委会禁用物质”的附录。在理化指标上,放宽了钠和钾含量的范围,删除了抗坏血酸、硫胺素及其衍生物、核黄素及其衍生物、钙、镁等指标。同时,细化了卫生指标,要求铅含量≤0.3毫克/升;砷≤0.2毫克/升;每毫升样品中含有的菌落总数≤30000;不得检出致病菌。此前,我国尚未有一次性塑料餐具的国家标准,而是由每个企业制定企业标准,一次性塑料饭盒等不可降解餐具长期无标准可依,虽未明文禁止,却始终没有合法身份。12月1日起施行的国标《塑料一次性餐饮具通用技术要求》将彻底结束这一现状,长期不被认可的一次性塑料饭盒等不可降解餐具将有合法地位。 除此之外,标准还对一次性餐饮具的范围进行了明确的界定:是指预期用餐或类似用途的器具,包括一次性使用的餐盒、盘、碟、刀、叉、勺、筷子、碗、杯、罐、壶、吸管等,但不包括无预期用餐目的或类似用途的食品包装物,如生鲜食品托盘、酸奶杯、果冻杯等。同时,对餐饮具的耐热水性能、耐热油性能、漏水性能、负重性能以及微波炉耐温性能等,都作了具体的规定。 从12月1日起正式实施的国标《食品用塑料自粘保鲜膜》增加了对原料的技术要求,对于使用的树脂要求必须为“食品级”原料。而且,可用于包装食品的保鲜膜将标示“食品用”字样,并将标示出“不能接触带油脂食品”、“不得微波炉加热”、“不得高温使用”等警示性语言。 对于我国的广大婴幼儿配方企业来说,从12月1日起开始实施的国家标准《婴幼儿配方粉企业良好生产规范》,为其如何生产质量安全可靠的婴幼儿配方奶粉设定了“规矩”。该标准规定了婴幼儿配方生产企业在原材料采购、产品加工、包装及贮运等过程中,有关人员、建筑、设施、设备的设置,以及卫生、生产过程、产品品质等管理应达到的条件和要求,以确保提供安全、可靠、健康的产品。 以原材料为例,标准从原材料的采购与处理、原材料的卫生与质量管理等方面都进行了严格的规定,如标准规定,原料购进后对来源、规格、包装情况进行初步检查,按验收制度的规定填写入库账、卡,入库后应向质检部门申请取样检验。外包装有破损的原料应单独存放并有标示,在检验合格后方可使用。
中药 中药补骨脂的分析和杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的分析http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/10/200910311054_179312_1896702_3.jpg