我发现在做冻干粉针剂的无菌检查时,用0.9%氯化钠溶液溶解药品,后薄膜过滤?有一次,同事错用了pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液,结果药粉都没溶解。在做一种药品的原料药的微生物限度检查时,一种用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液,然后薄膜过滤。请问微生物无菌检查和限度检查时用的冲洗液,为什么有时候用0.9%氯化钠溶液,有时候用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液?如何去选择?依据是什么?谢谢!
不知道大家现在测细菌总数平板计数用的稀释液是哪种.是生理盐水还是氯化钠蛋白胨缓冲溶液?
本文引用自cheney《蛋白胨和胰蛋白胨简介》蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂,具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物,也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料,在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大。不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽,因此存在着各种蛋白胨,一般来说,用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白(酪蛋白、肉类)和植物蛋白(豆类)等两种。能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。因此,蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨,而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有:蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。 不同来源的蛋白质和不同的水解条件,其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水,过热不凝固,在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料,也有用作啤酒等产品的稳定剂。胰蛋白胨,又称胰酪蛋白胨(Casein Tryptone)、胰酶消化酪蛋白胨(Pancreatic digest of casein),是一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等,可配制各种微生物培养基,用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定,以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业,氨基酸、有机酸、酶制剂、黄原胶等发酵工业,生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大,临床用于抗炎消肿,工业上用于皮革制造,生丝处理,食品加工。在国际市场上,胰蛋白胨也属于货紧价昂的短线品种之一。 胰酪蛋白胨质量标准及其检验标准: 常规各项理化指标: 1. 澄清度(磷酸盐、碱性沉淀):无沉淀、澄清 2. 2%水溶液:透明 3. 酸碱度:6-7 4. 氨基氮:≥3% 5. 色氨酸:≥0.8% 6. 胨含量:≥80% 7. 总氮:≥13% 8. 水份:≤5% 9. 灰份:≤6% 10. 氯化钠:≤0.2%胰蛋白胨特指用胰蛋白酶酶解酪蛋白生成的蛋白胨产物,与一般蛋白胨的区别在于酶解工艺处理上,属于水解度更高、胨分子量更小更均衡的蛋白胨。
蛋白胨水培养基( l )成分 蛋白胨 10g 水 l000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法 取上述成分混合,微温使溶解,调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ,分装于小试管,121 ℃ 灭菌15 分钟。( 3 )用途 用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。 ① 靛基质试验取可疑菌落或斜面培养物,接种于蛋白胨水培养基中,置35 ℃ 培养24~48 小时,必要时培养4~5 天,沿管壁加人靛基质试液数滴,液面呈玫瑰红色为阳性,呈试剂本色为阴性。 ② 靛基质试液 称取对二甲氨基苯甲醛5g ,加入戊醇(或异戊醇)75ml ,充分振摇,使完全溶解后,再取盐酸25ml 徐徐滴入,边加边振摇,以免骤热导致溶液色泽变深.或称取对二甲氨基苯甲醛1g ,加人95 %乙醇95ml ,充分振摇,使完全溶解后,再取盐酸20ml 徐徐滴入。
[align=center][/align][align=left][b] 摘要:目的 [/b]确立不同稀释液对凝血因子效价检测的影响,研究因子效价检测的稀释方法,从而完善因子类血液制品效价检测的方法。 [b]方法 [/b]对同一批和连续生产的10批人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物样品进行全自动血凝仪法的效价检测,分别选用全自动血凝仪稀释液和含1%人血白蛋白稀释液进行检测,统计10次以上的检测结果以确定不同稀释液之间的差别。 [b]结果 [/b]本实验确定了在人凝血因子Ⅷ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ的样品进行稀释,无论是对同一批质控品的测定还是对连续批次样品的测定,检测结果之间存在较大的差别。而在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ的样品进行稀释,同一批质控品和连续批次样品检测结果之间差别较小。[b]结论 [/b]因子类血液制品效价检测时,同一样品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别,应对血凝仪是否可用于因子类血液制品进行评估,并应建立起正确的检测操作规程。[/align][b] 关键词: [/b]凝血因子; 稀释液; 效价测定 目前国内血液制品的生产是以健康人血浆为原料,经过分离纯化和病毒灭活制成,主要分为三大类,人血白蛋白、人免疫球蛋白类产品、人凝血因子类产品。国内已上市或在研的人凝血因子类产品主要有人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人纤维蛋白原、人纤维蛋白粘合剂、人凝血因子Ⅸ、人抗凝血酶Ⅲ等。人凝血因子Ⅷ主要用于防治甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状病人的手术治疗。人凝血酶原复合物主要有效成分为人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ,主要用于治疗主要用于乙型血友病、 维生素K依赖的凝血因子缺乏症等病症的治疗。 人凝血因子Ⅸ主要用于防治乙型血友病和获得性凝血因子Ⅸ缺乏而致的出血症状病人的手术治疗。因子类血液制品是血液中凝血因子的高纯度浓缩物,在进行效价测定时需要对样品进行稀释,而稀释液中蛋白含量的不同对其检测结果有着影响。因子效价测定方法有一期法、二期法和发色底物法。一期法是目前应用最广泛的检测方法,系用人凝血因子缺乏血浆为基质,在APTT试剂和氯化钙的参与下,根据凝血因子国家标准品和供试品的凝集时间来计算供试品中的人凝血因子效价,实际检测过程中将基于一期法原理的人凝血因子效价测定法分为三种方法,即手工法、半自动血凝仪法、全自动血凝仪法。全自动血凝仪只是对一期法中各反应试剂的加入顺序进行了修订以便实现仪器的自动操作。相对于手工法检测,消除了很多主观因素。在日常工作中,当使用不同种类的稀释剂而采用相同的检测原理和方法进行效价测定应不会对测定结果产生影响,但实际工作中发现使用不同种类的稀释剂对效价测定结果有一定的影响。在人凝血因子Ⅷ效价检测过程中,采用手工法、半自动血凝仪法、全自动血凝仪法进行人凝血因子Ⅷ效价的比对试验,发现手工法、半自动血凝仪法检测结果一致,这两种方法比全自动血凝仪法的检测结果高20%以上。血液制品的原料来源于人血浆,受原料限制,一直较为稀缺,尤其是当前人凝血因子Ⅷ的生产量远远无法满足血友病患者的需求[sup][[/sup][sup]1-5[/sup][sup]][/sup],不同检测方法间20%以上的检测差别可能影响20%的产品收率,所以建立起因子类产品效价准确的检测至关重要。[b][b]1 实验仪器与试剂1.1 仪器[/b][/b]Stago-compact全自动血凝仪(法国Diagnostica Stago公司),漩涡振荡器(美国Thermo Scientific公司)。[b][b]1.2 试剂[/b][/b]人凝血因子Ⅷ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅸ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),APTT试剂(法国Diagnostica Stago公司),Owren-Koller(稀释液)(法国Diagnostica Stago公司),0.025 mol/L氯化钙溶液(法国Diagnostica Stago公司),Desorb U(清洗液)(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅷ国家标准品(批号20100101),人凝血酶原复合物国家标准品(批号20130306),生理氯化钠溶液(石家庄四药有限公司),咪唑(天津市巴斯夫化工有限公司),氯化钠(天津市巴斯夫化工有限公司),枸橼酸钠(台山新宁制药有限公司),人血白蛋白(公司自产)。[b][b]2 方法2.1 人凝血因子Ⅷ不同稀释液稀释效价测定2.1.1 人凝血因子Ⅷ供试品Owren-Koller(稀释液)稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.1.2 人凝血因子Ⅷ供试品药典稀释液稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标同2.1.1人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ不同稀释液稀释效价测定2.2.1 人凝血酶原复合物供试品Owren-Koller(稀释液)稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《STAGO Compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2.2 人凝血酶原复合物供试品药典稀释液稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标同2.1.1。人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]3 结果3.1 人凝血因子Ⅷ不同稀释液稀释效价测定结果[/b][/b] 2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ为泰邦公司人凝血因子Ⅷ产品的质控品,取自正常生产的产品,用国家标准品标定后用作工作质控品。在进行人凝血因子Ⅷ效价测定时,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ进行再稀释。检验结果见表1,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表1 FⅧ质控品两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,586,268]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141920_02_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图1:[align=center][img=,488,300]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141921_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图1 FⅧ质控品两种稀释液检测结果对比[/align] 选取泰邦公司生产的连续10个批次的人凝血因子Ⅷ产品,进行人凝血因子Ⅷ效价测定,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ进行再稀释。检验结果见表2,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表2 连续10批FⅧ两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,580,273]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141921_03_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图2:[align=center][img=,499,310]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141922_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图 2 连续10批FⅧ两种稀释液检测结果对比[/align][b][b]3.2 人凝血酶原复合物不同稀释液稀释效价测定结果[/b][/b] 2015ZK0901批人凝血酶原复合物为泰邦公司人凝血酶原复合物产品的质控品,取自正常生产的产品,用国家标准品标定后用作工作质控品。在进行人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定时,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ进行再稀释。检验结果见表3,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表3 PCC质控品两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,580,269]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141923_01_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图3:[align=center][img=,548,288]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141923_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图3 PCC质控品两种稀释液检测结果对比[/align] 选取泰邦公司生产的连续10个批次的人凝血酶原复合物产品,进行人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ进行再稀释。检验结果见表4,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表4 连续10批PCC两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,573,259]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141947_01_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图4:[align=center][img=,548,327]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141947_03_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图4 连续10批PCC两种稀释液检测结果对比[/align][b][b]4 讨论[/b][/b] 本实验确定了在人凝血因子Ⅷ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ的样品进行稀释,无论是对同一批质控品的测定还是对连续批次样品的测定,检测结果之间存在较大的差别,另外对FⅧ质控品两种稀释液检测结果运用软件SPSS17.0进行均值单因素ANOVA比较,计算P值,P<0.05表明两种方法的结果有显著性差异,含有蛋白的稀释液的检测结果明显高于不含蛋白的稀释液。而在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ的样品进行稀释,同一批质控品和连续批次样品检测结果之间差别较小,另外对PCC质控品两种稀释液检测结果运用软件SPSS17.0进行均值单因素ANOVA比较,计算P值,P>0.05表明两种方法的结果无显著性差异。在使用全自动血凝仪进行人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物等因子类血液制品效价检测时,一般按照仪器的使用说明书和配套试剂进行稀释检测,但是忽视了血凝仪的开发目的是用于临床血浆样品的检测,而血浆与高纯度的血液制品浓缩物是不同的,用检测血浆样品的方法进行因子类血液制品的效价检测可能影响检测结果。因子类血液制品效价检测时,同一样品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别,应对血凝仪是否可用于因子类血液制品进行评估,并应建立起正确的检测操作规程。因子类血液制品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别可能跟产品本身的性质有关,因子类血液制品经过分离、纯化,去除了众多的杂质蛋白,为高纯度的浓缩物,活性较高,但蛋白质含量较低,人凝血因子Ⅷ的蛋白质含量约为0.1%,人凝血酶原复合物的蛋白质含量约为2.3%,而临床血浆样本的蛋白质含量约为5%,, 人凝血因子Ⅷ加入含1%人血白蛋白的稀释液后对FⅧ效价测定影响较大,PCC中加入含1%人血白蛋白的稀释液后对FⅨ效价测定影响较小,可能是人凝血因子Ⅷ的蛋白质含量远小于血凝仪设计用于检测的血浆样本的蛋白含量,故建立不同蛋白质浓度梯度的稀释液对因子效价进行测定,从而确认蛋白质浓度对因效价测定的影响。[b]参考文献:[/b]Cheng E, Jinzenji D, Lorthiois AP, et al. Purification of coagulation factorⅧ using chromatographic methods. Direct chromatography of plasma in anion exchange resins . Biotechnol Lett, 2010, 32(9):1207-1214.李策生, 周志军, 胡勇, 等. 人凝血因子Ⅷ中试纯化工艺的质量控制 .中国生物制品学杂志, 2013, 26(10):1508-1512.冉曙光, 刘文芳, 赵辉. 凝血因子Ⅷ浓缩物的制备及安全性和有效性 .中国输血杂志, 2008, 21(2):156-159.倪道明, 朱威. 血液制品 . 北京: 人民卫生出版社, 2013:21.王卓, 赵雄, 吕茂民, 等. 血液制品的现状与展望 . 生物工程学报, 2011, 27(5):730-746.[b] [/b]
我是做啤酒微生物检测的新手,做了2次菌落总数都没有成功,遇到几个问题请教一下;1.培养基中是用的蛋白胨代替的胰蛋白胨,可以吗?2.空白培养基上有菌落长出。(生理盐水和培养基是用的灭菌锅灭菌,移液管和培养皿是用的牛皮纸包好后160度干燥2小时灭菌。操作在无菌室内的超净工作台上。)个人觉得是不是移液管灭菌不好,培养皿一直都是这样灭菌的,做酵母的时候没有问题。3.有几个细菌长在培养基表面的,大部分长在培养基内部的,一点一点的,不知道是不是这样子的?
配营养琼脂时 换一瓶新蛋白胨 结果发现上次买的一批蛋白胨全成板块了 。。。 还能用吗???
一、目的与要求(一)学习制备培养基的基本技术。(二)制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基,这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质,可供作繁殖之用,制作固体培养基时须加2%琼脂,培养细菌时,应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。牛肉膏蛋白培养基的配方:牛肉膏0.5%,蛋白胨1%,NaCl0.5%,pH7.4~7.6。三、材料与仪器(一)试剂 牛肉膏,蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。(二)其他 试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,漏斗,乳胶管,弹簧夹,纱布,棉花,牛皮纸,线绳,pH试纸,电炉,台称。四、操作步骤(一)称量 根据用量按比例依次称取成分,牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯,蛋白胨易吸湿,称量时要迅速。(二)溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量,加热,ZHU一加入各成分,使其溶解,琼脂在溶液煮沸后加入,融化过程需不断搅拌。加热时应注意火力,勿使培养基烧焦或溢出。溶好后,补足所需水分。(三)调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。(四)过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利于某些实验结果的观察,如无特殊要求时可省去此步骤。(五)分装 按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内,分装装置如实验图8所示;分装时注意,勿使培养基沾染在容器口上,以免沾染棉塞引起污染。1.液体分装 分装高度以试管高度的1/4左右为宜,分装三角瓶的量则根据需要而定,一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。2.固体分装 分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,斜面长度不超过管长的1/2。分装三解瓶,以不超过容积的1/2为宜。3.半固体分装 装置以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。(六)加棉塞 分装完毕后,在试管口或三解瓶口塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等,以阻止外界微生物进入培养基而造成污染,并保证有良好的通气性能。(七)包扎 棉塞头上包一层牛皮纸,扎紧,即可进行灭菌。(八)保存 灭菌后的培养基放入37℃养箱中培养24小时,以检验灭菌的效果,无污染方可使用。
为什么大肠菌群MPN法,GB4789.2-2003是用9管的乳糖胆盐,而GB5750做水时候要用15管法的乳糖蛋白胨,而改版后的新GB4789.2008.2中改用LST,其与乳糖胆盐相比又有什么优势呢?
[size=4]关于食品中氯化钠的测定GB/T12457-2008k稀释倍数计算?称取20g试样定容到[b]200ml[/b]容量瓶,过滤后吸取含有50-100mg氯化钠的试液,假如是[b]10m[/b]l吧,定容到[b]100m[/b]l容量瓶吸取20ml硝酸银静置5分钟,快速过滤,吸取[b]50ml[/b]于250ml锥形瓶中,滴定,这样稀释倍数是不是40倍啊?空白试验,为什么假如沉淀试样氯化物时滴加硝酸银的体积一半?[/size]
请教各位老师,从一个资料上看说乳糖蛋白胨中的乳糖不能换成葡萄糖是因为葡萄糖经发酵产酸过多使PH达到4.5,使大肠杆菌死亡!这个说法对吗?还有大肠菌群的生长ph范围是多少。有根据吗?
[font=宋体]中国食品药品检定研究院(以下简称“中检院”)对纤维蛋白原和硫酸氨基葡萄糖氯化钠标准物质原料项目进行公告,现诚邀符合项目要求的供应商报名参加。[/font][b][font=宋体]一、项目基本情况[/font][/b][font=宋体]项目名称:中检院纤维蛋白原和硫酸氨基葡萄糖氯化钠标准物质原料项目[/font][font=宋体]项目编号:ZFCG202300023[/font][font=宋体]采购需求:[/font][table][tr][td=1,1,30][b][font=宋体]序号[/font][/b][/td][td=1,1,79][b][font=宋体]品种名称[/font][/b][/td][td=1,1,64][b][font=宋体]采购数量[/font][/b][/td][td=1,1,95][b][font=宋体]预算金额(万元)[/font][/b][/td][td=1,1,221][b][font=宋体]技术要求[/font][/b][/td][td=1,1,108][b][font=宋体]供应商特殊资质要求[/font][/b][/td][/tr][tr][td=1,1,30][font=宋体]1[/font][/td][td=1,1,79][font=宋体]纤维蛋白原[/font][/td][td=1,1,64][font=宋体]8000[/font][font=宋体]支[/font][/td][td=1,1,95][font=宋体]52.8[/font][/td][td=1,1,221][align=left][font=宋体]标准试剂,应为牛血来源,应为白色安瓿冻干分装,凝固物含量应不低于50%。[/font][/align][/td][td=1,1,108][font=宋体]/[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,30][font=宋体]2[/font][/td][td=1,1,79][font=宋体]硫酸氨基葡萄糖氯化钠[/font][/td][td=1,1,64][font=宋体]1000g[/font][/td][td=1,1,95][font=宋体]2.2[/font][/td][td=1,1,221][align=left][font=宋体]应符合硫酸氨基葡萄糖氯化钠质量标准规定,氯化钠为19.0%-22.0%,乙醇应不得超过0.5%,硫酸根应为16.3%-17.3%,干燥失重应小于0.5%,炽灼残渣应为23.5%-26.0%,纯度应大于99.0%,含量应不低于99.0%。[/font][/align][/td][td=1,1,108][font=宋体] [/font][font=宋体]应具有硫酸氨基葡萄糖氯化钠原料药生产许可或口服制剂批准文号[/font][/td][/tr][/table][font=宋体]提供技术资料要求:[/font][font=宋体]1[/font][font=宋体]、根据采购需求中“技术要求”提供品种检验报告,报告应包括要求所列明内容;[/font][font=宋体]2[/font][font=宋体]、具有特殊资质要求的品种,按要求提供相关资质证明文件;[/font][font=宋体]3[/font][font=宋体]、货期要求[b]:[/b]纤维蛋白原3个月[b];[/b]硫酸氨基葡萄糖氯化钠:现货。[/font][font=宋体]4[/font][font=宋体]、质保期要求标化合格后1年。[/font][b][font=宋体]二、供应商资格要求[/font][/b][font=宋体]1.[/font][font=宋体]具有独立承担民事责任的能力;[/font][font=宋体]2.[/font][font=宋体]具有良好的商业信誉和健全的财务会计制度;[/font][font=宋体]3.[/font][font=宋体]具有履行合同所必需的专业技术能力;[/font][font=宋体]4.[/font][font=宋体]有依法缴纳税收和社会保障资金的良好记录;[/font][font=宋体]5.[/font][font=宋体]参加政府采购活动前三年内,在经营活动中没有重大违法记录;[/font][font=宋体]6.[/font][font=宋体]资格审查时,通过“信用中国”网站、中国政府采购网、国家企业信用信息公示系统、天眼查、企查查网站等渠道查询供应商信用记录,经查询列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为记录名单、经营异常名录信息、严重违法失信企业名单(黑名单)信息的,经查询在经营活动中有重大违法记录的,截至本项目采购活动开始前三年内因违法经营受到刑事处罚或者责令停产停业、吊销许可证或者执照、较大数额罚款等行政处罚的,不得参加本项目;[/font][font=宋体]7.[/font][font=宋体]单位负责人为同一人或者存在控股、管理关系的不同单位,不得参加同一项目响应;[/font][font=宋体]8.[/font][font=宋体]本项目不接受联合体参加,禁止转包或分包;[/font][font=宋体]9.[/font][font=宋体]法律、行政法规规定的其他条件。[/font][b][font=宋体]三、报名及提交响应文件方式[/font][/b][font=宋体]1.[/font][font=宋体]本项目采取网上报名的方式,不设现场报名及其他形式的报名。[/font][font=宋体]符合项目要求的潜在供应商需填写完整报名表(附件1)发送至邮箱hqzc@nifdc.org.cn。(邮件命名:项目名称+报名单位名称)[/font][font=宋体]2.[/font][font=宋体]潜在供应商需提交真实有效的响应文件(具体内容见附件2)并盖章密封邮寄至中检院联系人处。[/font][font=宋体]3.[/font][font=宋体]报名和邮寄时间截止至2023年3月10日(北京时间)。[/font][b][font=宋体]四、供应商确定原则[/font][/b][font=宋体]本项目以单品种有效报价最低原则确定供应商。[/font][b][font=宋体]五、联系方式[/font][/b][font=宋体]采购单位:中国食品药品检定研究院[/font][font=宋体]地址:北京市大兴区生物医药产业基地华佗路31号院后勤政采部[/font][font=宋体]联系人: 王晓雅[/font][font=宋体]联系电话:010-53852853[/font][font=宋体]电子邮箱:hqzc@nifdc.org.cn [/font][font=宋体]附件:[/font][font=宋体]1.[/font][font=宋体]标准物质原料项目报名表[/font][font=宋体]2.[/font][font=宋体]供应商报名响应文件[/font][font=宋体][/font]
[b]中文摘要:目的[/b] 确立因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果的影响,从而完善因子类血液制品效价检测的方法。[b]方法 [/b]选取不同蛋白质浓度梯度的稀释液对同一供试品进行稀释来确定蛋白质影响的规律。 [b]结果 [/b]建立起人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物的全自动血凝仪因子效价检测方法,根据效价检测反应体系中蛋白浓度对检测结果的影响,建立因子类血液制品效价全自动血凝仪检测的方法。[b]结论 [/b]建立的两种稀释方法均消除了样品中蛋白质含量的不同对检测结果的影响,提高了检测的准确性,不但可以适用于现在产品的效价检测,而且适用于随着生产工艺的提升生产的更高纯度、低蛋白含量的FⅧ和PCC,同时也是对中国药典标准的补充。[b]关键词[/b]:人凝血因子Ⅷ;人凝血酶原复合物;效价;蛋白含量 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人凝血因子Ⅸ等因子类血液制品,是以健康人血浆为原料,经分离纯化和病毒灭活制成,在临床上主要用于各种凝血因子缺乏的治疗,这些因子类血液制品的凝血因子效价是药品有效性的指标,凝血因子效价的测定也是药品质量检测中的关键检测项目。血液制品生产企业及各级检测机构一般采用全自动血凝仪并按照仪器使用说明来进行因子效价的检测,然而在不同检测方法结果比对中,发现全自动血凝仪检测结果与中国药典中一期法的检测结果在部分因子效价检测中存在检测差异,差异可能是样品稀释中使用的稀释液的蛋白含量不同引起的,故本课题主要研究因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果影响。通过蛋白含量对因子效价检测影响的研究建立起的全自动血凝仪因子效价检测方法,消除了产品本身性质的影响,可以准确进行因子效价的测定,方法的建立不但可以准确控制因子类血液制品的质量,保证生产企业持续稳定生产出质量均一的药品,而且可以减少因子类产品在临床使用中的风险。[b]1 实验仪器与试剂[b]1.1 仪器[/b][/b]Stago-compact全自动血凝仪(法国Diagnostica Stago公司),漩涡振荡器(美国Thermo Scientific公司)。[b][b]1.2 试剂[/b][/b]人凝血因子Ⅷ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅸ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),APTT试剂(法国Diagnostica Stago公司),Owren-Koller(稀释液)(法国Diagnostica Stago公司),0.025 mol/L氯化钙溶液(法国Diagnostica Stago公司),Desorb U(清洗液)(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅷ国家标准品(批号20100101),人凝血酶原复合物国家标准品(批号20130306),生理氯化钠溶液(石家庄四药有限公司),咪唑(天津市巴斯夫化工有限公司),氯化钠(天津市巴斯夫化工有限公司),枸橼酸钠(台山新宁制药有限公司),人血白蛋白(公司自产)。[b][b]2 方法2.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备:选取全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液分别定义为稀释液1、稀释液2、稀释液3。向3种稀释液中分别加入人血白蛋白,使其中人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b] [/b]人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.3 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备同2.1。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]2.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]3 结果3.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表1、2、3,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表1 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][img=,590,266]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142017_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表2 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果 [/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表3 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果 [/align][align=center][img=,585,261]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_02_1626619_3.png[/img][/align]人凝血因子Ⅷ质控品2015ZK0801批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释效价检测结果平均值用折线图表示,如图1:[align=center]图1 FⅧ质控品不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,548,295]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_03_1626619_3.png[/img][/align] 选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果见表4、5,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表4 658668A批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,585,99]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142020_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表5 A3B1814批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,577,97]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142021_01_1626619_3.png[/img][/align]FⅧ效价检测结果用折线图表示,如图2、3:[align=center][img=,563,299]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142029_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图2 658668A批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,567,287]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142030_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图3 A3B1814批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][b][b]3.2 人凝血酶原复合物不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了不同蛋白质浓度梯度稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、2%、3%、4%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表6、7、8,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表6 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][img=,583,269]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表7 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果[/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表8 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果[/align][align=center][img=,593,263]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142043_01_1626619_3.png[/img][/align]人凝血酶原复合物质控品2015ZK0901批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释FⅨ效价检测结果平均值用折线图表示,如图4:[align=center][img=,556,300]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图4 PCC质控品不同蛋白质浓度FⅨ检测结果对比[/align][b][b]3.3 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定,共测定10次。效价检测结果见表9,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表9 FⅧ质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,579,74]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_02_1626619_3.png[/img][/align]选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定。效价检测结果见表10,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表10 国外产品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,578,77]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142036_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]3.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,共测定10次。效价检测结果见表11,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表11 PCC质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,582,89]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142047_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]4 讨论[/b][/b] 本实验中对人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物分别用不同蛋白浓度梯度的稀释液进行了效价测定,另外用人凝血因子缺乏血浆稀释后进行了效价测定。因子效价测定中,稀释液1、稀释液2、稀释液3中加入相同浓度的人血白蛋白后,得到的因子效价检测结果没有差异,说明全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液作为稀释液时没有区别。 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物不同蛋白浓度梯度效价测定时,随着稀释液中蛋白质含量的增高,效价检测结果也不断升高,但在人凝血因子Ⅷ效价测定中,采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别,在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定中,采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别。另外,人凝血因子Ⅷ进行人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定效价检测结果与采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液得到的检测结果也无显著差异,人凝血酶原复合物人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价检测结果与采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液得到的检测结果也无显著差异。另外,国外生产的人凝血因子Ⅷ和VWF的混合制剂FⅧ效价的检测结果及血浆、稀释液的影响同泰邦公司产品一致。[b]参考文献[/b][align=left] 邬杨斌, 余蓉. 凝血因子Ⅸ复合物的研制 . 华西药学杂志, 2000, 15(3):177-179. Pabinger I, Brenner B, Kalina U, et al. Prothrombin complex concentrate(Beriplexw P/N)for emergency anticoagulation reversal: A prospective multinational clinical trial . J Thromb Haemost, 2008, 6(4):622-631. Kiman E, Elela AA, Ramsis N, et al. Evaluation of the coagulation factors activity of Cryosupernatant . Suez Canal Univ Med J, 2003, 6(2):247-258.Tullis JL, Melin M, Jurigian P. Clinical use of human Prothrombin complexes . N Engl J Med, 1965, 73(13):667-674.马莉, 孙盼, 李长清, 等. 去冷沉淀血浆的质量分析 . 中国生物制品学杂志, 2013, 26(1):81-83.魏舒, 时凯, 刘国荣, 等. 冻干人凝血酶原复合物的生产工艺研究 . 中国输血杂志, 2008, 21(10):282-284.Samama CM. Prothrombin complex concentrates: a brief review . Eur J Anaesthesiol, 2008, 25(10):784-789.焦丽华, 代旭兰, 刘文芳. 凝血酶原复合物的制备及其临床应用进展 .中国输血杂志, 2008, 21(9):737-741.[/align][b] [/b]
[b]中文摘要:目的[/b] 确立因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果的影响,从而完善因子类血液制品效价检测的方法。[b]方法 [/b]选取不同蛋白质浓度梯度的稀释液对同一供试品进行稀释来确定蛋白质影响的规律。 [b]结果 [/b]建立起人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物的全自动血凝仪因子效价检测方法,根据效价检测反应体系中蛋白浓度对检测结果的影响,建立因子类血液制品效价全自动血凝仪检测的方法。[b]结论 [/b]建立的两种稀释方法均消除了样品中蛋白质含量的不同对检测结果的影响,提高了检测的准确性,不但可以适用于现在产品的效价检测,而且适用于随着生产工艺的提升生产的更高纯度、低蛋白含量的FⅧ和PCC,同时也是对中国药典标准的补充。[b]关键词[/b]:人凝血因子Ⅷ;人凝血酶原复合物;效价;蛋白含量 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人凝血因子Ⅸ等因子类血液制品,是以健康人血浆为原料,经分离纯化和病毒灭活制成,在临床上主要用于各种凝血因子缺乏的治疗,这些因子类血液制品的凝血因子效价是药品有效性的指标,凝血因子效价的测定也是药品质量检测中的关键检测项目。血液制品生产企业及各级检测机构一般采用全自动血凝仪并按照仪器使用说明来进行因子效价的检测,然而在不同检测方法结果比对中,发现全自动血凝仪检测结果与中国药典中一期法的检测结果在部分因子效价检测中存在检测差异,差异可能是样品稀释中使用的稀释液的蛋白含量不同引起的,故本课题主要研究因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果影响。通过蛋白含量对因子效价检测影响的研究建立起的全自动血凝仪因子效价检测方法,消除了产品本身性质的影响,可以准确进行因子效价的测定,方法的建立不但可以准确控制因子类血液制品的质量,保证生产企业持续稳定生产出质量均一的药品,而且可以减少因子类产品在临床使用中的风险。[b]1 实验仪器与试剂[b]1.1 仪器[/b][/b]Stago-compact全自动血凝仪(法国Diagnostica Stago公司),漩涡振荡器(美国Thermo Scientific公司)。[b][b]1.2 试剂[/b][/b]人凝血因子Ⅷ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅸ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),APTT试剂(法国Diagnostica Stago公司),Owren-Koller(稀释液)(法国Diagnostica Stago公司),0.025 mol/L氯化钙溶液(法国Diagnostica Stago公司),Desorb U(清洗液)(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅷ国家标准品(批号20100101),人凝血酶原复合物国家标准品(批号20130306),生理氯化钠溶液(石家庄四药有限公司),咪唑(天津市巴斯夫化工有限公司),氯化钠(天津市巴斯夫化工有限公司),枸橼酸钠(台山新宁制药有限公司),人血白蛋白(公司自产)。[b][b]2 方法 2.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备:选取全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液分别定义为稀释液1、稀释液2、稀释液3。向3种稀释液中分别加入人血白蛋白,使其中人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b] [/b]人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.3 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备同2.1。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]2.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]3 结果3.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表1、2、3,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表1 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][/align][align=center][img=,590,266]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142017_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表2 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果 [/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表3 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果 [/align][align=center][img=,585,261]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_02_1626619_3.png[/img][/align]人凝血因子Ⅷ质控品2015ZK0801批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释效价检测结果平均值用折线图表示,如图1:[align=center]图1 FⅧ质控品不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,548,295]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_03_1626619_3.png[/img][/align] 选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果见表4、5,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表4 658668A批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,585,99]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142020_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表5 A3B1814批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,577,97]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142021_01_1626619_3.png[/img][/align]FⅧ效价检测结果用折线图表示,如图2、3:[align=center][img=,563,299]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142029_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图2 658668A批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,567,287]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142030_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center][/align][align=center]图3 A3B1814批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][b][b]3.2 人凝血酶原复合物不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了不同蛋白质浓度梯度稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、2%、3%、4%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表6、7、8,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表6 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][img=,583,269]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表7 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果[/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表8 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果[/align][align=center][img=,593,263]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142043_01_1626619_3.png[/img][/align]人凝血酶原复合物质控品2015ZK0901批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释FⅨ效价检测结果平均值用折线图表示,如图4:[align=center][img=,556,300]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图4 PCC质控品不同蛋白质浓度FⅨ检测结果对比[/align][b][b]3.3 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定,共测定10次。效价检测结果见表9,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表9 FⅧ质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,579,74]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_02_1626619_3.png[/img][/align]选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定。效价检测结果见表10,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表10 国外产品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,578,77]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142036_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]3.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,共测定10次。效价检测结果见表11,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表11 PCC质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,582,89]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142047_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]4 讨论[/b][/b] 本实验中对人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物分别用不同蛋白浓度梯度的稀释液进行了效价测定,另外用人凝血因子缺乏血浆稀释后进行了效价测定。因子效价测定中,稀释液1、稀释液2、稀释液3中加入相同浓度的人血白蛋白后,得到的因子效价检测结果没有差异,说明全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液作为稀释液时没有区别。 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物不同蛋白浓度梯度效价测定时,随着稀释液中蛋白质含量的增高,效价检测结果也不断升高,但在人凝血因子Ⅷ效价测定中,采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别,在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定中,采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别。另外,人凝血因子Ⅷ进行人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定效价检测结果与采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液得到的检测结果也无显著差异,人凝血酶原复合物人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价检测结果与采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液得到的检测结果也无显著差异。另外,国外生产的人凝血因子Ⅷ和VWF的混合制剂FⅧ效价的检测结果及血浆、稀释液的影响同泰邦公司产品一致。[b]参考文献[/b][align=left] 邬杨斌, 余蓉. 凝血因子Ⅸ复合物的研制 . 华西药学杂志, 2000, 15(3):177-179. Pabinger I, Brenner B, Kalina U, et al. Prothrombin complex concentrate(Beriplexw P/N)for emergency anticoagulation reversal: A prospective multinational clinical trial . J Thromb Haemost, 2008, 6(4):622-631. Kiman E, Elela AA, Ramsis N, et al. Evaluation of the coagulation factors activity of Cryosupernatant . Suez Canal Univ Med J, 2003, 6(2):247-258.Tullis JL, Melin M, Jurigian P. Clinical use of human Prothrombin complexes . N Engl J Med, 1965, 73(13):667-674.马莉, 孙盼, 李长清, 等. 去冷沉淀血浆的质量分析 . 中国生物制品学杂志, 2013, 26(1):81-83.魏舒, 时凯, 刘国荣, 等. 冻干人凝血酶原复合物的生产工艺研究 . 中国输血杂志, 2008, 21(10):282-284.Samama CM. Prothrombin complex concentrates: a brief review . Eur J Anaesthesiol, 2008, 25(10):784-789.焦丽华, 代旭兰, 刘文芳. 凝血酶原复合物的制备及其临床应用进展 .中国输血杂志, 2008, 21(9):737-741.[/align][b] [/b]
需要配置20mg/L的氯化钠标液。有氯化钠基准物质,是用十万分之一天平直接称量吗,加蒸馏水稀释。
一、原理:本法系依据特异性抗体(免疫球蛋白)F a b段与红细胞上已包被的相应抗原结合,抗体暴露出F c段补体Clq的结合位点,从而激活后续的补体各成分,最终导致红细胞的细胞膜受到攻击、破裂,释放出血红蛋白。通过溶血反应动力学曲线,计算人免疫球蛋白激活补体活性的功能指数(4 ) ,以此测定供试品F c段生物学活性。二、试剂(1) P B S (pH7.2) 称取无水磷酸氢二钠1.02g,无水磷酸二氢钠0.34g、氣化钠8.77g,加适量水溶解,用lmol/L氢氧化钠溶液或盐酸溶液调p H 值至7.2,再加水稀释至1000ml。( 2 )钙-镁贮备液 称取氯化钙1.10g、氯化镁5. 0 8 g ,加水25ml使溶解。( 3 )巴比妥-钙镁贮备液称取氯化钠51.85g、巴比妥钠6.37g,加水1000ml使溶解,加人钙-镁贮备液3.125ml,用lmol/L盐酸溶液调p H 值至7. 3,再加水稀释至1250ml。除菌过滤后4°C保存备用。( 4 )牛白蛋白-巴比妥缓冲液称取牛血清白蛋白0. 15g加入巴比妥-钙镁贮备液20 m l中,加水溶解并稀释至100ml。临用前配制。(5) 1. 3mg/L 鞣酸 P B S (pH7. 2) 溶液A 液称取鞣酸l m g ,加PBS (pH7.2) 10ml,使溶解。B 液量取 A 液 0.1ml,加 F*BS (pH7. 2) 7.5ml,混匀,即得,临用前配制。(6) 10%氯化铬溶液称取氯化铬5g,加生理氯化钠溶液50ml使溶解。4°C保存(可保存半年)。(7) 1 % 氯化铬溶液取1 0 %氯化铬溶液0. lml,加生理氯化钠溶液0.9ml,混匀。临用前配制。(8)敏化红细胞的制备A 液取健康人抗凝的O 型血3 人份以上混合,用P B S 洗涤3 次,最后一次以每分钟2 0 0 0转离心1 0分钟分离红细胞。取适量压积红细胞悬浮于1 . 3 m g / L鞣酸P B S(1 : 4 0 ) , 置3 7 ° C水浴中轻摇3 0分钟后再用P B S 洗涤3次,最后用P B S 制备成2. 5 % 红细胞悬浮液。B 液用P B S适当稀释的白喉类毒素或腮腺炎病毒与1 % 氯化铬溶液0.25ml混合(1 0 : 1 ) 后,置37°C水浴中轻摇1 5分钟。将A 液、B 液按1 : 4 混合,置37°C水浴中轻摇3 0分钟。离心,去上清液,用P B S将沉淀(敏化红细胞)洗涤3 次,用牛白蛋白-巴比妥缓冲液悬浮红细胞,调节至适宜浓度,使其在波长5 4 1 n m处的吸光度为1.0土0. 1。
做蛋白质疏水层析,发现pH 6的PBS缓冲液中加入氯化钠溶液的pH会变低,加入3M氯化钠溶液pH测出来4.66,氯化钠不是中性盐吗?ph值为什么会变低啊?这种情况我应该怎么配溶液呢?有大佬知道吗
使用雷磁3e PH计,301电极,测量5%氯化钠溶液(使用去离子水及分析纯氯化钠配制)。使用三种标准缓冲溶液校准正常。当电极放入氯化钠溶液中后,PH读数在几分钟内读数从5.X或6.X一直跳动到9.X,最后停止于9.X。静止时跳动得慢,晃动电极跳动得快。经多种PH试纸测试,溶液的PH值应该在5~7之间。请问是怎么回事呢?求助各位大神。另外,求助过仪器厂家。但厂家的人连氯化钠溶液是否导电都搞不清楚。
论坛的各位大拿,在使用免疫亲和柱检测赭曲霉毒素时,不同厂家的IAC柱处理有那么一些差异,各位在实际应用时遇到过类似的情况吗?1笔者用的是凯斯科的小柱,它们家最明显的一点是样品中一定要加氯化钠,不加氯化钠柱效降低,我查了食品的国标和饲料的国标,食品中对于油脂、蛋白含量比较高的(如食用植物油、大豆、油菜籽等)都标明了要加氯化钠,而饲料默认都加氯化钠。氯化钠作用是降低蛋白脂类等大分子的溶解,从而降低对目标物的干扰。应用时加了氯化钠之后回收确实比不加要好很多。在使用过程中,[b][size=12px][color=#ff0000]通常对于基质复杂的样品,稀释液和淋洗液都用PBS代替水,对于降低杂质影响、减少杂峰干扰效果显著,不管哪家的产品都是这样![/color][/size][/b]2网上查资料发现2019年CNW出过一篇免疫亲和柱条件优化的报告,主要从稀释液和淋洗液(水、PBS)进行了验证:A稀释时用纯水,淋洗分三种①20ml水(回收率24.41%)②10ml水+10mlPBS(回收率21.13%)③20mlPBS(回收率65.16%)B稀释时用PBS,淋洗分四种①20ml水(回收率70.71%)②10mlPSB+10ml水(回收率55.90%)③[color=#ff6666]20mlPBS(回收率99.34%)[/color]④[color=#ff6666]10ml水+10mlPBS(回收率82.91%)[/color]并未提到前处理时需不需要加盐。可见安谱着重点在于稀释液和淋洗液。3跟同行聊天,他们用的是美正小柱,据说厂家的技术反馈,他们家的小柱着重点在于洗脱,洗脱时在洗脱液中要需要加入乙酸(即酸化甲醇),对于目标物的解离效果最佳。公司条件有限,成本控制比较严格,无法对几个品牌进行验证,大家在应用过程中有遇到类似的问题或者困惑吗?欢迎来交流~
乳糖蛋白胨灭菌完放在室内不放冰箱可以保存吗
10%的氯化钠和0.9%的氯化钠应该是质量百分浓度(w/w),(请问各位,这种表示方式是不是就只有一种理解)如果是质量百分浓度(w/w)的话,那么:10%的氯化钠配置应该是10g氯化钠加90g水(90ml)0.9%的氯化钠配置应该是9g氯化钠加991g水(991ml)但是实际配的时候常常是(w/v)10%的氯化钠配置是10g氯化钠直接溶于100ml水(或者定容至100ml)0.9%的氯化钠配置是9g氯化钠直接溶于1000ml水(或者定容至1000ml)这样配置是不是相差也不会很大,很多书上也是这么写的,好像都没有很明确的规定。我们需要有个统一的方法,应该采用那种比较合适,应该从实际出发吧,但总有些过意不去是吧。
乳糖蛋白胨的培养基,是需要自己培养还是买 成品?成品是否需要 检测纯度之类的???
呵呵,上次发了EP6.0有好多老师帮我指出了问题,所以这次又把自己弄得微生物部分放上来,希望大家多多指教啊。呵呵2.6.1未灭菌产品的微生物检测:总的可生长生物菌数这个总章有两套测试方法。第一套方法给出了测定是否符合各论的参考方法。除非其中指定了使用第二套检测方法,专论中的这个章节的参考标准表示符合第一套检测方法。第二套的检测方法也组成欧洲药典的官方检测方法,或者提到类似的说明,特别是在市场营销授权中。现在打算用方法二代替方法一,一旦有关的专论被修改。介绍的第二套检测方法与日本药典和美国药典合作获得一致的要求。A.欧洲药典的方法以下所要描述的试验可定量检测出有氧条件下嗜温性细菌及菌类的数目。 这个试验首先旨在于确定专题论文中的物质是否符合药典中关于微生物的要求。当用于此目的时可参考下面的说明,包括取样的数目及以结果的解释如下。这个测试还可用作药典中保存的抗菌剂功效(5.1.3)试验。他们可以用于进一步监测原料质量和用于连同指导的微生物质量(5.1.4)的相关项目。当用于这些目的时,例如制造者用于监测原料或成品或工艺验证,测试的产品包括取样的数目,结果的解释等都需要制造者与有能力的权威机构达成共识。 在避免产品额外污染的条件下进行检测。避免污染进行的预防措施不能影响到试验中显示出的微生物。如果要检测的产品有抗菌活动性必须将其充分消除。如果灭活剂用于此目的,他们对微生物的的功效及无毒性就会显现出来。 通过药典中所描述的膜过滤方法确定活菌总数目,或用平板计数法。 当没有其它方法可用于计算细菌数目时,最可能数量法被保留。方法的选择基于几个因素,例如产品的性质,微生物的期待值。选择任何方法都要经过适当的验证。 当联合使用5.1.3和5.1.4时,平板计数法,表面铺展法和膜过滤法可能用到。 样品的制备 取样方案 产品取样必须依照一个较好定义的取样方案。取样方案主要取决于例如批量,不可接受的高污染产品的健康危害,产品的物性及污染的预期水平等因素。除非另有指定,取10g或10ml物质或者制剂样品进行试验,采取上文提到的预防措施。从散料中或者制剂可用的容器中随机的选择样本。如果必要的话,混合足够数量的容器中的内容物来提供每个样品,以取得所需的数量,取决于待检测物质或者制剂的性质。一个抽样方案适合于微生物在产品中分布均匀的状况,一般认为可分为以下三类:1. 可接受样品,例如,样品每克或每毫升包含少于m集落形成单位,m表示相关专著中规定的限度。 2. 边际样品,例如每克或者每毫升中多于m菌落形成单位,但少于10m菌落形成单位3. 缺陷试样,例如每克或者每毫升中包含多于10m菌落形成单位。水溶性产品 在pH=7.0缓冲氯化钠蛋白胨溶液或其它恰当的液体中溶解或稀释10g或10ml产品.一般来说一个样品稀释十倍制备,尽管如此,由于产品的特性或对灵敏度的要求可以制成其它的比例。如果已知此产品有抗微生物活性,可加灭活剂到稀释液中。如果需要,调节pH=7值,用相同的稀释剂制备进一步的一系列的10倍稀释液。 不溶于水的非脂肪产品.在pH=7.0缓冲氯化钠蛋白胨溶液或其它恰当液体中溶解10g或10ml产品。一般一份样品制备成10倍的悬浮液,但由于某些产品的特性可能有必要增大使用的体积。一种恰当的表面活性剂,例如可加入1g/l聚山梨酯80至可湿性较差的悬浮液中。如果已知产品有抗微生物活性,可加入灭活剂到稀释液中。如果需要,调节pH约等于7,可进一步用同一溶剂制备一系列的10倍稀释液。 脂肪产品.混合10g或10ml的待测样品与不超过其重量一半的已消毒的聚山梨酯80或其它的恰当的表面活性剂,调匀,如果必要的话加热至不超过40℃,如果特例的话不超过45℃。小心混合,如果有必要可在水浴或者恒温箱中保温。加入充分预热的pH=7.0的氯化钠蛋白胨缓冲溶液制备制备原始产品的10倍稀释液。小心混合,保持乳状物形成所需的最短时间内的温度,在任何情况下都不要超过30分钟,进一步用pH=7.0的氯化钠蛋白胨缓冲溶液,适当浓度已消毒的聚山梨酯80或其它浓度的表面活性剂进一步制备10倍稀释液 。 贴剂.用消毒的产钳去掉十个制备好的透皮贴剂的防护膜(露出衬垫),有粘性的一面往上,放到已消毒的玻璃或塑料盘上。用消毒的纱布盖住粘性面(或无纺布过滤器型单丝聚合物网),如果必要的话将这十个贴片转移到含有适宜的灭活剂例如聚山梨酯80或蛋黄素,最小体积500mlpH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲溶液中。用力振荡此制备品至少三十分钟(制剂A)以相同方式制备另外十个贴片,将其放在500ml肉汤介质D中,并用力振荡制剂至少三十分钟(制剂B) 产品的检测 薄膜过滤.用名义孔径不超过0.45um且已建立有效保持细菌的薄膜过滤。过滤材料的选择以薄膜对细菌保持的有效性不受检测样品成分的影响。硝酸纤维素过滤膜,例如,可用于水性,油性,弱酒精性溶液 醋酸纤维素膜例如可用于强酒精性溶液。过滤装置的设计允许将过滤转移至培养介质中。 取按照样品制备部分描述的方法制备的样品适量(最好一种产品取1g,如果集落形成单位要求较大的话也可少取些)每个用两层膜迅速过滤。用三倍量,每次大概100ml的适当液液体例如pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗过滤器,可向溶液中加入表面活性剂如聚山梨酯80或抗微生物的灭活剂。如果得到验证,冲洗次数可以少于3次。转移一层过滤膜,首先对细菌计数,在表面上放一层适当的琼脂,例如介质B或其它,如果为了真菌计数在表面上也放一层适当的琼脂例如介质C, 在30-35℃孵化琼脂B的培养基,琼脂C的培养基在20-25℃,五天,除非在短时间内就可得到可靠数量。选择最大数目少于100集落的平板,并且计算每克或每毫升产品的集落数。 当检测贴剂时,分别用两个无菌滤膜过滤每分50ml制备品A。一个膜放上琼脂B用来测总存活数,另一个用琼脂C测真菌数。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=177158]20612e.pdf[/url][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=177159]20613e.pdf[/url]
我今天已经把装有乳糖蛋白胨的培养基115[size=2]℃[/size]20min高压灭菌好了,但样品明天才来,那我这培养基可以放到明天才用吗?
我是做的血清白蛋白纯化,其中涉及前处理有氯化钠,这个该怎么去掉,他对质谱影响大吗,还有谁可以回答下大家水解白蛋白变为氨基酸的方法呢
请教,谁知道氯化钠的吸收波长是多少nm?
氟康唑氯化钠注射液的测定一.样品分子结构氟康唑分子结构:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/03/201003031435_203516_1896702_3.jpg二. 样品来源记录样品商品名:氟康唑氯化钠注射液 样品测定描述:主成分含量测定三. 液相方法条件方法来源:客户提供; 具体方法:色谱柱:Ultimate® XB-C18,5um,4.6×250mm,Ult090902P29; 检测波长:260nm ; 流动相:磷酸盐缓冲溶液:甲醇=55:45 磷酸盐缓冲溶液的配制:准确称量0.68g KH2PO4至于100ml容量瓶中,加入0.1mol/L 的NaOH溶液29.1ml,用水稀释至刻度(此时测得pH为7.59);温 度:室温20℃; 流 速:1.0ml/min; 进样量:20ul; 流动相的配制: 准确量取上述配制好pH 7.59的磷酸二氢钾缓冲溶液275ml和甲醇225ml,混合均匀,搅超声脱气,冷却至室温;样品处理方法: 取氟康唑氯化钠注射液1ml于10ml容量瓶中,用流动相稀释至刻度;注意事项: 1. 与客户提供方法完全相同; 2. 用流动相溶解样品; 3. 色谱柱的维护: 1)一天分析开始前,先用甲醇:水=40:60以1ml/min冲洗色谱柱30min,然后用流动相走基线,基线平稳后进样; 2)一天分析完成后,先用甲醇:水=40:60以1ml/min反向冲洗色谱柱40min,再用甲醇:水=90:10反向
蛋白复性液稀释沉淀如何去除,0.22过滤不掉 啊我的蛋白复性液稀释后还有一部分沉淀析出,但是沉淀过滤去除不了啊,请大家帮忙啊? 蛋白复性液稀释沉淀如何去除,0.22过滤不掉 啊,除了高速离心有什么好的办法吗,快速或量大点的处理方法,
[align=center][b]xxxx胶囊微生物限度方法适用性试验[/b][/align] 根据中国药典2015年版要求,为保证该分析方法有效性,确保检验结果的准确性和可靠性,对xxxx囊检查的方法适用性试验进行了考察,现将测定结果报告如下:[b]1. 供试品:xxxx胶囊三批[/b]批号:20151001 20151002 20151003[b]2. 培养基:[/b]胰酪大豆胨液体培养基(150629) 胰酪大豆胨琼脂培养基(150611) 沙氏葡萄糖液体培养基(150821) 沙氏葡萄糖琼脂培养基(150827) PH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲溶液(140725) 麦康凯液体培养基(150911) 麦康凯琼脂培养基(150907) 胰酪大豆胨肉汤对照培养基(135026-201401) 胰酪大豆胨琼脂对照培养基(135025-201402) 麦康凯琼脂对照培养基(135009-201102) 沙氏葡萄糖肉汤对照培养基(1305008-201102)沙氏葡萄糖琼脂对照培养基(135013-201001)麦康凯液体对照培养基(135030-201501) 以上培养基均由中国食品药品检定研究院提供。[b]3. 菌种:[/b]菌落计数用菌用:金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌黑曲霉 铜绿假单胞菌控制菌检查用菌种:大肠埃希菌 以上菌种均由中国食品药品检定研究院提供。[b]4. 所用仪器:[/b]双人单面垂直净化工作台BJ-2CD型 编号ZB-HY-174(上海博迅实业有限公司)净化工作台 SB-JC-IA型 编号ZB-HY-023(上海博迅实业有限公司)生化培养箱 SPX-250B-Z型 编号 ZB-HY-080(上海博迅实业有限公司)生化培养箱 SPX-250B-Z型 编号 ZB-HY-081(上海博迅实业有限公司)生化培养箱 SPX-250B-Z型 编号 ZB-HY-172(上海博迅实业有限公司)生化培养箱 SPX-250B-Z型 编号 ZB-HY-173(上海博迅实业有限公司)调速多用振荡器 HY-4型 编号ZB-HY-087(金坛市岸头国瑞实验仪器厂)立式压力蒸汽灭菌器 YXQ-LS-100A型 编号ZB-HY-175(上海博迅实业有限公司)手提式电热灭菌锅 YX280B型 编号ZB-HY-003(上海三申医疗器械有限公司)[b]5.环境要求[/b]:微生物限度室在C级条件下的A级环境进行,试验环境达到无菌检查的要求,检验全过程严格遵守无菌操作,防止微生物污染,防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。[b]6. 微生物计数[/b]按照中国药典2015年版微生物限度检查法进行微生物计数的方法适用性试验及菌落计数。6.1 菌液制备(1)接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中,30~35℃培养18~24小时,取此培养液1ml加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10[sup]-5[/sup]~10[sup]-7[/sup],使菌数不大于100cfu/ml,见表1。(2)接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml沙氏葡萄糖液体培养基中,20~25℃培养2~3天,取此培养液1ml加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10[sup]-4[/sup]~10[sup]-6[/sup],使菌数不大于100cfu/ml,见表1。(3)接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面培养基上,20~25℃培养5~7天,使大量的孢子成熟,加入3~5ml 含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液,振摇或用接种针将孢子洗脱。然后,用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。[img=,600,244]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311814113392_7928_2204446_3.png!w600x244.jpg[/img][b]6.2 培养基的适用性检查[/b]6.2.1胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基 分别取不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉,注入无菌平皿中,立即倾入胰酪大豆胨琼脂培养基;30~35℃培养不超过三天。分别取不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉,注入无菌平皿中,立即倾入沙氏葡萄糖琼脂培养基,每株试验菌制备2个平皿,混匀,凝固,20~25℃培养不超过五天,计数。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果见表2。[img=,583,548]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311814344516_9988_2204446_3.png!w583x548.jpg[/img]结论:被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值均在0.5-2范围内,该培养基的适用性检查符合规定。6.2.2胰酪大豆胨液体培养基 将不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌接种至胰酪大豆胨液体培养基试管中,30~35℃培养不超过三天。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果见表3。[img=,628,219]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311814563036_8094_2204446_3.png!w628x219.jpg[/img]结论:被检培养基管与对照培养基管比较,被检培养基管试验菌生长良好,该培养基的适用性符合规定。6.2.3麦康凯液体培养基6.2.3.1 麦康凯液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于麦康凯液体培养基和麦康凯液体对照培养基试管中,在42~44℃培养24~48小时,与对照培养基管比较,被检培养基管试验菌生长良好,结果见表4。6.2.3.2 麦康凯液体培养基抑制能力检查分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌于麦康凯液体培养基和麦康凯液体对照培养基试管中,在42~44℃培养24~48小时,被检培养基管内试验菌未生长,结果见表4。6.2.4麦康凯琼脂培养基6.2.4.1 麦康凯琼脂培养基促生长能力检查 取大肠埃希菌0.1 ml涂布于麦康凯琼脂培养基和麦康凯琼脂对照培养基上,在30~35℃培养18~72小时,被检培养基上大肠埃希菌的菌落大小、形态特征、与对照培养基一致,结果见表4。6.2.4.2麦康凯琼脂培养基指示特性检查 取大肠埃希菌0.1 ml涂布于麦康凯琼脂培养基和麦康凯琼脂对照培养基上,在30~35℃培养18~72小时,被检培养基上大肠埃希菌的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等与对照培养基一致,结果见表4[img=,610,225]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311815494696_355_2204446_3.png!w610x225.jpg[/img]结论:被检培养基上的生长显示与对照培养基一致,该培养基的适用性符合规定。6.2.5沙氏葡萄糖液体培养基6.2.5.1沙氏葡萄糖液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的白色念珠菌于沙氏葡萄糖液体培养基和沙氏葡萄糖肉汤对照培养基试管中,在20~25℃培养2~3天,与对照培养基管比较,被检培养基管试验菌生长良好,结果见表5。[img=,635,136]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311817326133_7606_2204446_3.png!w635x136.jpg[/img]结论:被检培养基上的生长显示与对照培养基一致,该培养基的适用性符合规定。6.3 供试液制备:取供试品10g,加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液(≤45℃)至100ml,振摇溶解使成1:10的供试液。6.4 试验方法(1)菌液对照组:取1ml菌液加入稀释液至100ml,另取1ml注入培养基,培养。采用平皿计数法。(2)供试品对照组:取1ml供试液,注入培养基,培养。采用平皿计数法。(3)试验组:将1ml菌液加入至制备好的供试液中,另取1ml注入培养基,培养。采用平皿计数法。进行了3次独立的平行试验,并分别计算试验组菌落数减去供试品对照组菌落数与菌液对照组菌落数的比值。测定结果见表9。6.5 测定结果按照中国药典2015年版微生物限度方法适用性试验,该供试品对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收试验中,试验组菌落数减去供试品对照组菌落数与菌液对照组菌落数的比值均在0.5~2范围内。采用平皿法可进行本品的微生物检查。[b]7. 大肠埃希菌[/b]按照中国药典2015年版微生物限度检查法进行控制菌的检查方法适用性试验及检查。7.1 菌液制备:接种大肠埃希菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中,30~35℃培养18~24小时,取此培养液1ml加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10[sup]-5[/sup]~10[sup]-7[/sup],使菌数不大于100cfu/ml。7.2.2供试液的制备:取供试品10g,加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液(≤45℃)至100ml,药物摇匀溶解使成1:10的供试液。7.2.3试验方法(1)试验组分别取供试液10ml,加到胰酪大豆胨液体培养基100ml中,重复两份,其是一份作为供试品组,另一份再加入大肠埃希菌不大于100cfu作为试验组;另取大肠埃希菌不大于100cfu,加到胰酪大豆胨液体培养基100ml中(不加供试液)作阳性对照,30~35℃培养18~24小时。取上述培养物1ml接种至麦康凯液体培养基中,42~44℃培养24~48小时,取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基上,置30~35℃培养18~72小时,观察结果,见表7。(2)阴性对照组取胰酪大豆胨液体培养基100ml,加入PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml作为阴性对照,30~35℃培养18~24小时,取上述培养物1ml接种至麦康凯液体培养基中,42~44℃培养24~48小时,取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基上,置30~35℃培养18~72小时,观察结果,见表6。[img=,596,265]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311820557634_9209_2204446_3.png!w596x265.jpg[/img]由表6可见,试验组可检出大肠埃希菌,阴性菌对照组未检出,本法适用于本品的控制菌检查。[b]8. 结论[/b]根据上述试验结果,本品的微生物检查可采用平皿法,控制菌检查采用常规法测定即可。三批样品测定:8.1 取供试品10g,加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml使成1:10的溶液,稀释成1:10[sup]1[/sup],1:10[sup]2[/sup],1:10[sup]3[/sup]稀释级。取各稀释级供试液1ml,置直径为90mm的无菌平皿中,然后注入15~20ml温度不超过45℃的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,倒置培养。每稀释级每培养基各制备2个平板,平板计数。阴性对照试验:另取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,取1ml,置无菌平皿中,注入上述两种培养基中,混匀,凝固,倒置培养。每种培养基各制备2个平板。样品测定结果见表8。8.2大肠埃希菌测定取供试品10g,加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液(≤45℃)至100ml,振摇溶解使成1:10的供试液。(1)样品测定:取样品的供试液10ml,加到100ml胰酪大豆胨液体培养基中培养18~24小时。(2)阳性对照试验:取样品的供试液10ml,取大肠埃希菌10[sup]-6[/sup]稀释液1ml,加入100ml胰酪大豆胨液体培养18~24小时。(3)阴性对照试验:取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml,加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中,经培养18~24小时。取上述培养物1ml接种至麦康凯液体培养基中,42~44℃培养24~48小时,取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基上,置30~35℃培养18~72小时,观察结果,见表7。[img=,595,566]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311823378838_9210_2204446_3.png!w595x566.jpg[/img][align=left][img=,611,235]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311824514031_6226_2204446_3.png!w611x235.jpg[/img] [/align][align=left]不同试验菌回收率测定结果如下:[/align][align=left][img=,690,416]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311827356326_5887_2204446_3.png!w690x416.jpg[/img][img=,690,251]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311827558476_8031_2204446_3.png!w690x251.jpg[/img][/align][align=left][b]总结:[/b][/align][align=left] 通过对不同培养基的适用性实验分析,本品的微生物检查可采用平皿法,控制菌检查采用常规法测定,就可以满足该产品出厂检验需求。[/align]
我用的是石墨炉[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url],也知道氯化钠如果不用机体改进剂处理,测试效果很差。现在我有一个无法理解的现象是:当把氯化钠直接用1%硝酸稀释到100倍时,Cd和Ni的吸光值都是很高,达到2.5左右;当将其稀释到200倍,两者的吸光值又都非常低,基本上0.0xx左右。找不到能让其吸光值在0.2-0.7范围内,请问到底是怎么一回事呢,感激不尽!!!