正己烷中三氟氯氰菊酯高

发现做三苯时候苯峰被干扰的问题，特发一帖，与各位分享。昨天在做三苯样品时候发现空白二硫化碳中含有少量苯，如下图一：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/01/201501091717_531833_2780210_3.png一开始以为是二硫化碳被污染，本人遂再开一瓶，进样后发现仍然有苯峰，如下图二：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/01/201501091718_531834_2780210_3.png为再次确定结果，正好手头GCMS空闲，上GCMS上走Scan以及SIM后发现没有苯的定量离子，所以我得出的结论为，二硫化碳未被污染，而是GC问题。立即动手，更换耗材，老化柱子，老化检测器。老化过程中发现基线有一些杂峰出来，让我更加坚信是GC端的问题。当我开开心心的再次走三苯样品的时候，悲剧出现了，苯峰没有被完全消除！如下图三：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/01/201501091718_531835_2780210_3.png今天接了一个要分将对/间二甲苯分开的单，所以拿出好久没用的DB-WAX的柱子，在另外一台GC上老化后直接上曲线走样，在做空白的时候惊讶的发现万恶的苯峰又来了，我判断问题仍然处在二硫化碳上。可是同一瓶二硫化碳走过MS，MS的灵敏度总不会低于FID吧？在思考的时候，样品走到1ppm浓度的三苯标液上，我发现苯峰分叉了！如下图四，图五：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/01/201501091718_531836_2780210_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/01/201501091718_531837_2780210_3.jpg证明空白中的那个被当做苯的杂质并不是苯，是一种跟苯有着相同保留时间的另一种物质！突然想起又一次其他实验室的过我们实验室来交流的时候有说过，正己烷有可能干扰到苯的测定。回想一下，早上更换装WAX柱子GC的洗液时正好看洗液是做有机氯农药时候用的正己烷！立即拿着刚测定有苯的空白进GCMS走了一个Scan，如下图六：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/01/201501091718_531838_2780210_3.png正己烷 57 43 的离子果然在！终于发现问题所在了！各位，要小心正己烷冒充苯啊！刚刚很多老师建议说极性柱子正己烷出峰应该在前面，这的确是我没想到的地方，找个空闲时间进一针正己烷试试，谢谢各位老师提醒！刚刚我用相同的条件进了一针正己烷，出峰时间在二硫化碳后面一点！看来还是我考虑得不周到！

三聚氰胺（melamine）简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。三聚氰胺含氮量为66.6％，加入宠物饲料和牛奶中可以大幅提高蛋白质测定表观含量，但食用后可诱发肾衰竭并导致死亡。2007年，国内外发生多起宠物因食用添加了三聚氰胺的宠物食品而致死的例子，大量相关产品被召回。2008年9月，国内发生奶粉中三聚氰胺导致婴幼儿肾结石和肾功能衰竭甚至死亡的恶性事件。奶粉、奶制品中三聚氰胺的检测方法主要有HPLC紫外检测、GCMS和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS串级质谱检测。HPLC紫外检测样品处理简单，但检测限较高且易受干扰。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS串级质谱可以弥补HPLC液相紫外检测的缺点，但仪器成本高昂、操作复杂，不利于常规检测。GCMS检测具有灵敏度高、抗干扰性强、可靠性高等优点，缺点是样品必须进行硅烷化衍生后才能检测。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/06/200906181023_155943_1622715_3.jpg[/img]图1. 三聚氰胺硅烷化衍生物TIC图[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/06/200906181023_155944_1622715_3.jpg[/img]本文参考农业部NY/T 1372-2007饲料中三聚氰胺测定方法中的样品提取纯化过程，介绍了两种检测方法，一是采用反相离子对色谱法测定奶粉中三聚氰胺含量，操作简便，灵敏度高；二是使用GCMS对奶粉和奶制品中三聚氰胺含量进行检测。本文来源分析化学网

[align=center][b]原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法验证报告[/b][/align][align=center][b]GB/T22388-2008（第一法）[/b][/align][align=center]李晓东[/align]一、[b]方法概述1 范围[/b]本标准规定了原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的测定方法。本标准适用于原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的定量测定。[b]2 原理[/b]试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。二、[b]仪器与试剂[/b]1.仪器1.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器1.2分析天平：感量0.0001g和0.01g1.3固相萃取装置1.4超声波振荡器1.5氮气吹干仪1.6涡旋混合器1.7高速离心机：转速不低于4000r/min。1.8具塞塑料离心管1.9研钵2. 试剂除非另有说明，本方法所有实际均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。2.1甲醇(CH3OH )：色谱纯。2.2乙腈(CH3CN) : 色谱纯。2.3氨水：含量25%-28%2.4三氯乙酸2.5柠檬酸2.6辛烷磺酸钠2.7甲醇水溶液：准确量取50ml甲醇和50ml水，混匀后备用。2.8三氯乙酸溶液（1%）：准确称取10g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。2.9氨化甲醇溶液（5%）：准确量取5ml氨水和95ml甲醇，混匀后备用。2.10离子对缓冲液：准确称取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入约960ml水溶解，调节PH至3.0后，定容至1L备用。3. 材料3.1阳离子交换固相萃取柱:混合型阳离子交换萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60mg，3ml，或相当者。使用前依次用3ml甲醇、5ml水活化。3.2定性滤纸3.3海沙：化学纯，粒度0.65mm~0.85mm，二氧化硅（SiO[sub]2[/sub]）含量为99%。3.4微孔滤膜：0.2μm，有机相。3.5氮气：纯度≥99.999%三、[b]分析步骤[/b]1.标准曲线绘制1.1 三聚氰胺标品：纯度大于99.9%1.2标准储备液：准确称取100mg（精确到0.1mg）三聚氰胺标准品于100ml容量瓶中，用甲醇水溶解并定容至刻度，配置成浓度为1mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。1.3标准工作液：量取标准储备液适量，用甲醇水稀释成浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mLng/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL标准工作液。2.样品的处理2.1 提取2.1.1液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等 称取2g（精确至0.01g）试样于50ml具塞塑料离心管中，加入15ml三氯乙酸溶液和5ml乙腈，超声提取10min后，以不低于4000r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25ml，移取5ml滤液，加入5ml水混匀后做待净化液。2.1.2 奶酪、奶油和巧克力等 称取2g（精确至0.01g）试样于研钵中，加入适量海沙（式样质量的4倍-6倍）研磨成干粉状，转移至50ml具塞塑料离心管中，用15ml三氯乙酸溶液分数次清洗研钵，清洗液转入离心管中，再往离心管中加入5ml乙腈，余下操作同2.1.1中“超声提取10min，.......加入5ml水混匀后做待净化液”。（注：若样品中脂肪含量较高，可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱净化）2.2 净化将3.1中的待净化液转移至固相萃取柱中，依次用3ml水喝3ml甲醇洗涤，抽至净干后用6ml氨化甲醇溶液洗脱，整个固相萃取过程流速不超过1ml/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物（相当于0.4g样品）用1ml流动相定容，涡旋混合1min，过微孔滤膜后，供液相测试。3.仪器测定条件3.1色谱柱：C8柱，250mm×4.6mm，5μm，或相当者；C18柱, 250mm×4.6mm，5μm，或相当者。3.2流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（85:15，体积比），混匀。 C18柱，离子对试剂缓冲剂-乙腈（90:10，体积比），混匀。3.3流速：1.0ml/min3.4柱温：40℃3.5波长：240nm3.6进样量：20μl四、[b]结果处理[/b]分析结果的表述[b]1、计算公式[/b][align=center][img=,375,134]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807281407480482_5351_2904018_3.png!w375x134.jpg[/img][/align]式中：X-试样中三聚氰胺的含量mg/kg；C-标准溶液中三聚氰胺的浓度，μg/mL；m-试样质量,g；V-试样最终定容体积，mL；f-稀释倍数。五、验证结果1.线性结果将标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中， 测定相应的峰面积，以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。[u]Y=38040.6*X+2468.64 R^2=0.9999026 [/u][align=center][img=,690,434]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807281406375072_4673_2904018_3.png!w690x434.jpg[/img] [/align][align=center]表1 三聚氰胺标准系列试验结果[/align][table][tr][td]C（μg/mL）[/td][td][align=center]0.5[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]5.0[/align][/td][td][align=center]10.0[/align][/td][td][align=center]25.0[/align][/td][td][align=center]50.0[/align][/td][td][align=center]100.0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]A[/align][/td][td][align=center]32622[/align][/td][td][align=center]45831[/align][/td][td][align=center]178263[/align][/td][td][align=center]374953[/align][/td][td][align=center]971711[/align][/td][td][align=center]1886106[/align][/td][td][align=center]3812576[/align][/td][/tr][/table] 以上结果表明三聚氰胺在0.5μg/mL ~100.0μg/mL范围内，R=0.9999513,吸光值与浓度呈线性关系，线性良好，符合要求。2.检出限结果将0.5μg/mL标准溶液逐级稀释至S/N=3±1，得出三聚氰胺的方法检出限为 0.1mg/kg[color=#ff0000]，[/color]此检出限结果满足条件。[b]七、重复性测定[/b]A.对样品F1807000285进行7次进样，其三聚氰胺测试值如下表所示：[table][tr][td][align=center]编号[/align][/td][td][align=center]m（g）[/align][/td][td]C（μg/ml）[/td][td]V（ml）[/td][td][align=center]X(mg/kg)[/align][/td][td][align=center]X[sub]平[/sub](mg/kg)[/align][/td][td][align=center]RSD(%)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2.0231[/align][/td][td][align=center]11.609[/align][/td][td]1[/td][td]28.69[/td][td=1,7][align=center]28.85[/align][/td][td=1,7][align=center]0.33[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]2.0286[/align][/td][td][align=center]11.701[/align][/td][td]1[/td][td]28.84[/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]2.0304[/align][/td][td][align=center]11.747[/align][/td][td]1[/td][td]28.93[/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]2.0294[/align][/td][td][align=center]11.691[/align][/td][td]1[/td][td]28.8[/td][/tr][tr][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]2.0300[/align][/td][td][align=center]11.745[/align][/td][td]1[/td][td]28.93[/td][/tr][tr][td][align=center]6[/align][/td][td][align=center]2.0318[/align][/td][td][align=center]11.766[/align][/td][td]1[/td][td]28.95[/td][/tr][tr][td][align=center]7[/align][/td][td][align=center]2.0272[/align][/td][td][align=center]11.677[/align][/td][td]1[/td][td]28.85[/td][/tr][/table]本方法的精密度为 0.33% ，符合《原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的测定方法》GB/T22388-2008中给出的精密度要求。因此，本次测定均符合要求。[b]六、准确度验证（加标回收）[/b]对样品JF180401228加标，取三聚氰胺浓度100 .0 μg/mL的标液 0.12mL、0.20mL和0.4ml同样品同步处理后，结果见下表[table][tr][td=2,1][align=center]测定编号[/align][/td][td=6,1]三聚氰胺[/td][/tr][tr][td][align=center]序号[/align][/td][td][align=center]m（g）[/align][/td][td][align=center]V（mL）[/align][/td][td][align=center]C（μg/mL）[/align][/td][td][align=center]X（mg/kg）[/align][/td][td][align=center]X[sub]平[/sub]（mg/kg）[/align][/td][td][align=center]加标量（）[/align][/td][td][align=center]回收率%[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1#[/align][/td][td][align=center]2.0211[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]N.D[/align][/td][td][align=center]N.D[/align][/td][td=1,2][align=center]N.D[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2#[/align][/td][td][align=center]2.0187[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]N.D[/align][/td][td][align=center]N.D[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标1#[/align][/td][td][align=center]2.0236[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]11.747[/align][/td][td][align=center]29.03[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][td][align=center]24.71[/align][/td][td][align=center]97.91[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标2#[/align][/td][td][align=center]2.0224[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]20.491[/align][/td][td][align=center]50.66[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][td][align=center]49.45[/align][/td][td][align=center]102.45[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标3#[/align][/td][td][align=center]2.0312[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]38.246[/align][/td][td][align=center]94.15[/align][/td][td][align=center]/[/align][/td][td][align=center]98.46[/align][/td][td]95.62[/td][/tr][/table]由上表可以看出三聚氰胺的加标回收范围在 95.62%-117.48% ，RSD值为3.5%符合规定要求。七、总结本方法的检出限为0.1mg/kg。小于GB/T22388-2008中给出的最低检出浓度2mg/kg。本方法的精密度为 0.33%，符合《原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的测定方法》GB/T22388-2008中给出的精密度要求.通过对原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺测定方法的检出限、精密度和准确度的评价，本方法测定三聚氰胺数据准确，结果可信。此方法的准确性好，测定结果真实可靠，可用于原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的测定。

GB 22255-2014检测食品中三氯蔗糖样品处理：半固体、固体试样：准确称取4.0g（精确至0.01g）样品至50mL塑料离心管，加入15mL甲醇水溶液（75+25）均质提取，（含蛋白样品加入2 mL乙酸锌和2 mL亚铁氰化钾，振摇），3500 r/min离心5 min；上清液转移至另一离心管，残渣再用10 mL甲醇水溶液（75+25）提取，离心后合并提取液至150mL鸡心瓶中，50℃水浴浓缩至约5mL，用2mL水分两次冲洗鸡心瓶，合并冲洗液至50mL离心管，加入10mL正己烷，剧烈振荡2 min，静置分层，取下层清液过HLB柱净化（使用前用3mL甲醇，3mL水活化），3mL水淋洗，抽干，3mL甲醇洗脱，洗脱液经50℃氮气吹干，1.0mL乙腈水溶液（1+9）溶解，用0.25μm有机滤膜上机测定。液体试样：准确称取4.0g（精确至0.01g）样品至50mL塑料离心管，加入5mL水混匀，（含蛋白样品加入2 mL乙酸锌和2 mL亚铁氰化钾，振摇，3500 r/min离心5 min），取清液过HLB柱净化（使用前用3mL甲醇，3mL水活化），3mL水淋洗，抽干，3mL甲醇洗脱，洗脱液经50℃氮气吹干，1.0mL乙腈水溶液（1+9）溶解，用0.25μm有机滤膜过滤上机测定。样品处理流程如下图：[img=,690,427]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808082030060307_1108_2166779_3.png!w690x427.jpg[/img]仪器型号：戴安U-3000； 色谱柱： Thermo C18 250mm*4.6mm等性能相近的色谱柱 检测器：蒸发光检测器柱 温：35 ℃ ；蒸发温度：50 ℃；进样量：10 μL 流 速：1.0 mL/min 流动相：水/乙腈＝89：11配制20、50、100、200、400ug/mL三氯蔗糖标液，以指数的形式绘制三氯蔗糖的工作曲线：[img=,690,336]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808082037140887_1174_2166779_3.png!w690x336.jpg[/img][img=,690,144]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808082037250239_5858_2166779_3.png!w690x144.jpg[/img]50ug/mL三氯蔗糖的系统针：[img=,690,447]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808082038427666_6386_2166779_3.png!w690x447.jpg[/img]样品测定谱图：[img=,690,473]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808082049513462_3626_2166779_3.png!w690x473.jpg[/img]加标回收试验：加入1000ug/mL的三氯蔗糖标液40uL,相当于加标浓度为10mg/kg（方法的定量限为7.5mg/kg） 上机的理论浓度为40ug/mL，实测的浓度为：45.40ug/mL，故回收率为113.5%。[img=,690,415]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808082053594762_5155_2166779_3.png!w690x415.jpg[/img]总结：本处理方法的定量限与标准方法一致，检测步骤中标准用甲醇水溶液（75+25）提取后先与正己烷分配除油酯，再取下层水相经沸水浴蒸发至近干后过柱；流程中用甲醇水溶液（75+25）提取后减压浓缩至近干，剩余水相再与正己烷分配除油脂，方法简便可行。 正己烷与水液液分配除去样品中的油脂等非极性杂质，静置分层后若分层不明显，可通过离心使两相更好的分离； 水淋洗后应抽干小柱中的水，确保甲醇洗脱液最终能完全吹干； 液体样品若含油量较大，可考虑增加正己烷除油脂的步骤；从回收率来看：本处理方法还是不错的。