DB34/T 813-2008 饲料中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化荧光光度法DB37/T 2617-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法(暂无文本)DB51/T 1077-2010 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定高效液相色谱法(暂无文本)GB/T 17480-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法GB/T 30955-2014 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法(2015-1-10实施)GB/T 8381-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 半定量薄层色谱法LS/T 6108-2014 粮油检验 谷物中黄曲霉毒素B1的快速测定 免疫层析法(2014-6-1实施)LS/T 6111-2015 粮油检验 粮食中黄曲霉毒素B1测定 胶体金快速定量法(2015-7-10实施)(暂无文本)NY/T 2071-2011 饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定 液相色谱-串联质谱法NY/T 2548-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 时间分辨荧光免疫层析法(2014-6-1实施)NY/T 2549-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 免疫亲和荧光光度法(2014-6-1实施)NY/T 2550-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 胶体金法(2014-6-1实施)
食品中黄曲霉毒素的测定,主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法,TLC法灵敏度和重现性较差;ELISA法重现性差,易受样品基质干扰假阳性率高,仅能作为筛选方法。近年来,由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点,现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素,一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响,正相色谱中,B1和B2的荧光强度仅稍低一点,不需衍生化;而在常用的反相色谱中,B1和G1两种异构体荧光强度很弱,需进行衍生化,提高其荧光强度,灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类, 柱前衍生一般使用三氟乙酸,柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来,很多标准方法利用免疫亲合柱净化,HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析,方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么,它是怎样工作的,为什么要用它? 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点,不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶(黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体),基于抗原抗体反应进行工作,专一性很强,再加上另一种原理(反相或正相液相色谱)的分离,即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净,直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定,也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱(不是免疫柱)要便宜一些,能做的霉菌毒素品种也多,但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴,这对分析有什么作用?是可以提高灵敏度吗?如果是,溴是如何与黄曲霉素反应的?络合?氧化?还是别的什么? 由欧以上的论述,应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究,可能和柱后衍生类似(氧化?),考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍,是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施?这个阿胖讲得差不多了,方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿,当然最好不要自己称固体标样,那东东有静电,很容易飞出来,买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕,对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证,每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少,有的HPLC筛选方法,提取后不净化就直接进样了,也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关,如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干,肯定是要用HPLC法;如果就骗骗中国的官僚和老百姓,那就像啊胖说的,酶免法又省钱有省事,嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法,净化方法很差,UV灯下看上去是一条亮带,满足国标20PPB的限量都很勉强,这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品,加入氯化钠5 g和125 mL甲醇:水(7+3),均质2min,过滤。取15 mL滤液加30 mL水,再次过滤后,取10 mL过免疫亲和柱,2×10 mL水洗柱,最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素,用水定容至2 mL,供HPLC测定。HPLC条件:色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:甲醇-乙腈-水(1+1+3);流速:1.0 mL/min; 柱后衍生试剂:100 mg碘溶于2 mL甲醇,加水至200 mL。流速0.3 mL/min;衍生化温度:70 ℃;衍生化时间:55 s;激发波长:360 nm;发射波长: 420 nm;进样量:50 μL。3. 方法技术指标:免疫亲和柱净化,HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平:5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平:2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃,需要单独的柱温箱,还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生(1)过溴化吡啶溴(PBPB)衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3);流速:1.00 mL/min;衍生化溶液:25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水,室温下避光可保存5天;衍生化溶液流速:0.30 mL/min;衍生化反应管:55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度:室温。(2)电化学反应池衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3),每升加350 μL HNO3 (5 mol/L),同时溶解120 mg KBr;衍生化反应池:Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.,衍生化操作电流:100 μA。
中药材中黄曲霉毒素检测方案 黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于药材、谷物、坚果、花生、瓜子、棉籽以及动物饲料等相关的产品中。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药毒性,其中以B1毒性最大。人摄入含有该类毒素物品时,摄入量在身体内是要累积的,不管量大量小对身体都有较大伤害。 近年来,各级食品药品等监管部门不断加大生产流通监管力度,努力保持食药多环节总体质量。现在对乳制品、玉米等食品及食品原料都有相关检测标准,2015版药典也重点明确该项目的检测。 下面我们就一起分享一下高效液相色谱法柱后光化学衍生荧光检测器检测中药材中黄曲霉毒素方法等重要内容。实验原理 样品经甲醇-水溶解,搅拌、离心及免疫亲和柱层析净化提取,进入高效液相色谱系统,亲水性C18色谱柱分离,经光化学衍生器柱后衍生,紫外检测器检测,外标法计算,即得。仪器与试剂 仪器:高效液相色谱仪(荧光检测器+等度泵+亲水性C18色谱柱+光化学衍生器等),气控操作架(含气泵),固相萃取装置,黄曲霉毒素免疫亲和柱,高速搅拌仪(搅拌速度大于11000转/分钟),离心机(离心速度4000转/分钟),氮吹仪,超声波清洗器,溶剂过滤器,电子天平等。 试剂:黄曲霉毒素对照品(均为SIGMA标准品),甲醇(色谱纯),氯化钠(分析纯),超纯水等。样品制备 混合对照品溶液制备:精密量取黄曲霉毒素混合标准液(黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2,标示浓度分别为1.0μg/ml、 0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml)0.5ml,置于10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,制备为标准品储备液。精密量取储备液1ml,置于25ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,备用。 供试品溶液制备:取适量被测某药材(或药品)充分粉碎,过二号筛(药典筛),精密称取过筛粉朱15g,加入氯化钠3g,置于具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌仪搅拌2分钟,离心机离心5分钟,精密量取上清液15ml,置50ml容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,微膜(0.45μm)滤过,精密量取续滤液20.0ml,通过固相萃取装置萃取(免疫亲合柱),流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用5ml甲醇洗脱,收集洗脱液,氮吹仪吹至近干,用甲醇定容1ml,摇匀,微膜(0.45μm)滤过,待测。色谱
关于黄曲霉毒素的检测,迪马科技应用实验室做了一系列的应用,分享给大家~方法优势:目前检测黄曲霉毒素主要主要是免疫亲和柱-高效液相色谱法串联质谱法等,免疫亲和柱-液相色谱法和液相色谱法-串联质谱能够准确定量,但是由于免疫亲和柱与质谱检测成本高,应用范围受到限制。而迪马科技使用SPE的前处理净化方法,不但能保持与免疫亲和小柱差不多的回收率和重现性,而且过柱方法简单易操作,对操作人员要求不高,检测成本相对较低,这对于企业来说还是非常经济实惠的~实验应用 《黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2 》 - 方法:HPLC - 应用编号:103148 2014-05-05 《DHA冬化油和植物油中黄曲霉毒素B1的测定》 - 方法:HPLC - 应用编号:103121 2014-01-15 《DHA冬化油和植物油中黄曲霉毒素B1的测定》 - 方法:SPE - 应用编号:103120 2014-01-15 《乳制品中黄曲霉毒素M1检测》 - 方法:SPE - 应用编号:103002 2013-01-31 《粮谷中黄曲霉毒素检测》 - 方法:SPE - 应用编号:102977 2013-01-30 《粮谷中黄曲霉毒素检测》 - 方法:HPLC - 应用编号:102976 2013-01-30 《新型、快速、低成本SPE法检测黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、M1》 - 方法:SPE - 应用编号:101897 2012-07-03 《新型、快速、低成本SPE法检测黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、M1》 - 方法:HPLC - 应用编号:101895 2012-07-02 《乳制品中黄曲霉毒素M1检测》 - 方法:HPLC - 应用编号:101713 2012-01-12 《谷物、坚果及其制品中黄曲霉毒素的测定》 - 方法:HPLC - 应用编号:101314 2010-07-02 《谷物、坚果及其制品中黄曲霉毒素的测定》 - 方法:SPE - 应用编号:101200 2010-07-01
牛奶中黄曲霉毒素M1的检测黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂,因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取,对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化,荧光检测器测定牛奶中黄曲霉毒素M1。检测依据:GB5413.37-2010 设备和耗材黄曲霉毒素免疫亲和柱:Welchrom IAC 3 mL/支;高效液相仪岛津LC-10Avp(带荧光检测器);黄曲霉毒素M1标准品(用甲醇稀释配制成工作所需的标准使用液); PBS 缓冲溶液:称取1.16 g Na2HPO4,0.20 g KH2PO4,8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中,用HCL或NaOH调节pH至7.4,然后定容至1000ml。甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);样品前处理称取50g(精确至0.01 g)混匀的样品,置于50 mL具塞离心管中,水浴加热至35℃[color=#3
那位有(1)、GB/T 18979-2003 《食品中黄曲霉毒素的测定??免疫亲和层净化高效液相色谱法和荧光光度法》(2)、GB/T 18980-2003 《乳和乳粉中黄曲霉毒素M1的测定??免疫亲和层净化高效液相色谱法和荧光光度法》麻烦给共享一下。谢谢啦
高效液相色谱方法检测食品中黄曲霉毒素研究进展由于黄曲霉具有极强的毒性和致癌性,大多数国家和地区都规定了食品中的限量要求,这就要求对黄曲霉毒素进行有效的监督,一方面可以保护公众的食品安全和健康,另一方面可以减少食品对外贸易带来的经济损失。高效液相色谱法是一种检测痕量物质常用的方法,检测黄曲霉毒素的一般步骤是用适合的溶剂提取目标物,净化浓缩,C18柱分离后检测器检测,根据检测器的不同,可分为荧光检测法和质谱检测法两类。1提取和净化样品提取溶剂的选择取决于黄曲霉毒素自身的物化性质,一般用到的提取溶剂有甲醇、乙腈的水溶液,尽管早期的方法中经常用到氯仿,但考虑到氯仿对环境的影响,现已基本上被替代;一些新的提取技术,如超临界流体萃取、加压流体萃取(加速流体萃取)被用于黄曲霉毒素的提取,但是超临界流体的提取物常有大量的杂质,而加压流体萃取设备价格昂贵,限制了其广泛使用。样品的提取溶液中常含有共提取物,给黄曲霉毒素的检测带来干扰和基质效应。为了排除基质对分离和检测的干扰,常用的净化手段有液液萃取、固相萃取柱、免疫亲和柱和多功能净化柱。对于含油量大的样品,常需要在提取溶液中加入正己烷用液液萃取法去油;传统固相萃取柱在黄曲霉毒素净化方面的应用较早,填料主要有C18、硅胶、弗洛里硅土、氧化铝等,但由于选择性差,且往往既耗时又浪费溶剂,因此不及免疫亲和柱和多功能净化柱应用广,而微型固相萃取柱的应用便于建立简单快速、成本低廉的前处理方法。Mahoney等采用硅胶柱(30 mg/3 mL)建立了简单可靠的方法来分析检测来自不同植物源的油中黄曲霉毒素,结果表明硅胶柱可以选择性保留植物油中的黄曲霉毒素;Sobolev使用自制氧化铝柱(200 mg/1.5 mL)用于来净化检测主要农产品(玉米粉、棉籽、花生、杏仁、英国胡桃、巴西坚果、阿月浑果)中的黄曲霉毒素,该方法简单快速,成本低廉。由于弗罗里硅土对黄曲霉的吸附能力强,因此用弗罗里硅土柱净化洗脱需要用到大量的丙酮-水溶液;Sobolev对于弗罗里硅土柱(130 mg/1.5 mL)净化的的洗脱条件进行了研究,结果显示丙酮/水/甲酸(96:3.7:0.3, v/v)为洗脱溶剂时的洗脱能力最强,2 mL的洗脱体积即可得到大于98%的回收率;该净化方法用于花生、巴西坚果、玉米、棉籽等样品基质,其中花生基质中B1定量限达到0.05 µg/kg;使用商品化的弗罗里硅土柱可以保证样品检测的重复性,同时可进行实验室间结果比对。免疫亲和柱具有高效和特异性吸附的优点,可同时实现样品的净化和富集,达到比普通固相萃取柱更好的净化效果和更高的信燥比,而且有机试剂使用量少,因此免疫亲和柱越来越多用于黄曲霉毒素等真菌毒素的样品净化。AOAC对免疫亲和柱净化的黄曲霉毒素检测方法进行了协同研究;我国将免疫亲和柱用于黄曲霉毒素检测的国标方法(GB/T 18979-2003)。多种真菌毒素免疫亲和柱的商品化使同时净化分析多种真菌毒素成为可能,如人参和姜中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A的同时净化,谷物中黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮三种真菌毒素的同时净化富集;最新推出的商品化免疫亲和柱可实现黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、伏
高效液相色谱方法检测食品中黄曲霉毒素研究进展由于黄曲霉具有极强的毒性和致癌性,大多数国家和地区都规定了食品中的限量要求,这就要求对黄曲霉毒素进行有效的监督,一方面可以保护公众的食品安全和健康,另一方面可以减少食品对外贸易带来的经济损失。高效液相色谱法是一种检测痕量物质常用的方法,检测黄曲霉毒素的一般步骤是用适合的溶剂提取目标物,净化浓缩,C18柱分离后检测器检测,根据检测器的不同,可分为荧光检测法和质谱检测法两类。1提取和净化样品提取溶剂的选择取决于黄曲霉毒素自身的物化性质,一般用到的提取溶剂有甲醇、乙腈的水溶液,尽管早期的方法中经常用到氯仿,但考虑到氯仿对环境的影响,现已基本上被替代;一些新的提取技术,如超临界流体萃取、加压流体萃取(加速流体萃取)被用于黄曲霉毒素的提取,但是超临界流体的提取物常有大量的杂质,而加压流体萃取设备价格昂贵,限制了其广泛使用。样品的提取溶液中常含有共提取物,给黄曲霉毒素的检测带来干扰和基质效应。为了排除基质对分离和检测的干扰,常用的净化手段有液液萃取、固相萃取柱、免疫亲和柱和多功能净化柱。对于含油量大的样品,常需要在提取溶液中加入正己烷用液液萃取法去油;传统固相萃取柱在黄曲霉毒素净化方面的应用较早,填料主要有C18、硅胶、弗洛里硅土、氧化铝等,但由于选择性差,且往往既耗时又浪费溶剂,因此不及免疫亲和柱和多功能净化柱应用广,而微型固相萃取柱的应用便于建立简单快速、成本低廉的前处理方法。Mahoney等采用硅胶柱(30 mg/3 mL)建立了简单可靠的方法来分析检测来自不同植物源的油中黄曲霉毒素,结果表明硅胶柱可以选择性保留植物油中的黄曲霉毒素;Sobolev使用自制氧化铝柱(200 mg/1.5 mL)用于来净化检测主要农产品(玉米粉、棉籽、花生、杏仁、英国胡桃、巴西坚果、阿月浑果)中的黄曲霉毒素,该方法简单快速,成本低廉。由于弗罗里硅土对黄曲霉的吸附能力强,因此用弗罗里硅土柱净化洗脱需要用到大量的丙酮-水溶液;Sobolev对于弗罗里硅土柱(130 mg/1.5 mL)净化的的洗脱条件进行了研究,结果显示丙酮/水/甲酸(96:3.7:0.3, v/v)为洗脱溶剂时的洗脱能力最强,2 mL的洗脱体积即可得到大于98%的回收率;该净化方法用于花生、巴西坚果、玉米、棉籽等样品基质,其中花生基质中B1定量限达到0.05 μg/kg;使用商品化的弗罗里硅土柱可以保证样品检测的重复性,同时可进行实验室间结果比对。免疫亲和柱具有高效和特异性吸附的优点,可同时实现样品的净化和富集,达到比普通固相萃取柱更好的净化效果和更高的信燥比,而且有机试剂使用量少,因此免疫亲和柱越来越多用于黄曲霉毒素等真菌毒素的样品净化。AOAC对免疫亲和柱净化的黄曲霉毒素检测方法进行了协同研究;我国将免疫亲和柱用于黄曲霉毒素检测的国标方法(GB/T 18979-2003)。多种真菌毒素免疫亲和柱的商品化使同时净化分析多种真菌毒素成为可能,如人参和姜中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A的同时净化,谷物中黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮三种真菌毒素的同时净化富集;最新推出的商品化免疫亲和柱可实现黄曲霉毒素、赭曲霉毒素[font=T
转自色谱网,作者:Mass 食品中黄曲霉毒素的测定,主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法,TLC法灵敏度和重现性较差;ELISA法重现性差,易受样品基质干扰假阳性率高,仅能作为筛选方法。近年来,由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点,现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素,一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响,正相色谱中,B1和B2的荧光强度仅稍低一点,不需衍生化;而在常用的反相色谱中,B1和G1两种异构体荧光强度很弱,需进行衍生化,提高其荧光强度,灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类, 柱前衍生一般使用三氟乙酸,柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来,很多标准方法利用免疫亲合柱净化,HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析,方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么,它是怎样工作的,为什么要用它? 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点,不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶(黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体),基于抗原抗体反应进行工作,专一性很强,再加上另一种原理(反相或正相液相色谱)的分离,即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净,直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定,也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱(不是免疫柱)要便宜一些,能做的霉菌毒素品种也多,但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴,这对分析有什么作用?是可以提高灵敏度吗?如果是,溴是如何与黄曲霉素反应的?络合?氧化?还是别的什么? 由欧以上的论述,应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究,可能和柱后衍生类似(氧化?),考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍,是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施?这个阿胖讲得差不多了,方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿,当然最好不要自己称固体标样,那东东有静电,很容易飞出来,买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕,对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证,每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少,有的HPLC筛选方法,提取后不净化就直接进样了,也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关,如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干,肯定是要用HPLC法;如果就骗骗中国的官僚和老百姓,那就像啊胖说的,酶免法又省钱有省事,嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法,净化方法很差,UV灯下看上去是一条亮带,满足国标20PPB的限量都很勉强,这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品,加入氯化钠5 g和125 mL甲醇:水(7+3),均质2min,过滤。取15 mL滤液加30 mL水,再次过滤后,取10 mL过免疫亲和柱,2×10 mL水洗柱,最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素,用水定容至2 mL,供HPLC测定。HPLC条件:色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:甲醇-乙腈-水(1+1+3);流速:1.0 mL/min; 柱后衍生试剂:100 mg碘溶于2 mL甲醇,加水至200 mL。流速0.3 mL/min;衍生化温度:70 ℃;衍生化时间:55 s;激发波长:360 nm;发射波长: 420 nm;进样量:50 μL。3. 方法技术指标:免疫亲和柱净化,HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平:5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平:2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃,需要单独的柱温箱,还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生(1)过溴化吡啶溴(PBPB)衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3);流速:1.00 mL/min;衍生化溶液:25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水,室温下避光可保存5天;衍生化溶液流速:0.30 mL/min;衍生化反应管:55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度:室温。(2)电化学反应池衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3),每升加350 μL HNO3 (5 mol/L),同时溶解120 mg KBr;衍生化反应池:Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.,衍生化操作电流:100 μA。
最近药典增加了14味中草药的黄曲霉毒素检测, 不少企业开始检测黄曲霉毒素了,所以做了一个药材中黄曲霉毒素计算模板供大家使用~
关于乳中黄曲霉毒素M1的检测,依据GB 5413.17 -2010 《乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定》中第三法 免疫层析净化荧光分光度法(见附件)。用分子荧光测的话有没有比较成功的事例呢?我用荧光分光光度计进行检测,其中测试条件如下:1、激发360nm,发射450nm2、电压700V,激发和发射狭缝均为5nm3、以0.05mol/L硫酸溶液(相当于0μg/L黄曲霉毒素M1) 以硫酸奎宁溶液(相当于20μg/L黄曲霉毒素M1)请问各位大侠,用以上的条件来测未知样品会不会对测试结果带来很大的误差呢?
奶粉中黄曲霉毒素b1的加标回收率大约是多少?
10,抽取5个版友);中奖名单:sunpengwjh(注册ID:sunpengwjh)ZHAOGUANGXI(注册ID:ZHAOGUANGXI)langyabeilei(注册ID:langyabeilei)牛一牛(注册ID:v2700892)馨语(注册ID:huangdm)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607261512_601820_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607261506_601819_1610895_3.png积分奖励:所有回答正确的版友奖励10个积分(幸运奖获得者除外)。【注意事项】同样的答案,每人只能发一次PS:该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”,回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容,无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除,即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================谷物、坚果及其制品中黄曲霉毒素的测定方法:SPE基质:;粮谷应用编号:101200化合物:黄曲霉毒素G2; 黄曲霉毒素G1; 黄曲霉毒素B2;黄曲霉毒素B1固定相:ProElut Silica色谱柱/前处理小柱:ProElut Silica 500mg/3ml 50/pkg样品前处理:1、提取 50 g 粉碎样品与200 mL 甲醇水溶液(85%)混合,超声提取20 min,过滤;取40 mL 滤液,加入40 mL 氯化钠溶液(0.1%),用50 mL 正己烷分两次萃取,正己烷弃去;然后用50 mL 三氯甲烷分两次萃取,收集三氯甲烷萃取液,减压浓缩至约2 mL。 2、净化 a 活化: 依次将3 mL 甲醇、3 mL 三氯甲烷加入ProElut Silica 500 mg/3 mL (Cat.#63004) 中,流出液弃去; b 上样: 将处理浓缩液加入小柱中,用2 mL 三氯甲烷洗涤浓缩瓶,也加入柱中,流出液弃去; c 淋洗: 用3 mL 正己烷、3 mL 乙醚、3 mL 三氯甲烷淋洗,流出液弃去; d 洗脱: 用6 mL 三氯甲烷+ 丙酮(9+1)洗脱样品,收集洗脱液; e 重新溶解:室温下将洗脱液用氮气吹干,然后用50% 甲醇水溶液溶解,微孔滤膜过滤,HPLC 分析色谱条件:色谱柱:Diamonsil C18(2) 250 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99603) 流动相:甲醇/ 水=50/50 流速:1 mL/min 进样量:20 μL 柱温:40 oC 检测器:UV 365 nm文章出处:P078关键字:谷物,坚果,黄曲霉素,SPE,ProElut Silica摘要:适用于谷物、坚果及其制品中黄曲霉毒素的检测。谱图:http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/p47%20copy.png图例:.1 黄曲霉毒素G2; 2. 黄曲霉毒素G1; 3. 黄曲霉毒素B2; 4. 黄曲霉毒素B1
牛奶中黄曲霉毒素M1测定用上海纤检的黄曲霉毒素测定仪怎么样?好测定吗?
地沟油中黄曲霉毒素和苯并芘的检测近几年来,地沟油事件频频爆发,严重危害人们的身心安全。2014年9月,正值中秋佳节,台湾台湾地沟油事件震惊两岸。“地沟油”是一种质量极差、极不卫生的非食用油。一旦食用“地沟油”,它会破坏人们的白血球和消化道黏膜,引起食物中毒,甚至致癌的严重后果。目前没有特定科学方法检测和鉴别用“地沟油”制造的食用油。国际上一般会检测如苯并(a)芘、黄曲霉毒素和金属杂质等含量,香港食安中心和台湾当局均采取同类检测方法。上海安谱一直致力于食品安全检测,特推出地沟油中黄曲霉毒素和苯并芘的检测整体方案。一. 油中黄曲霉毒素的检测1.1.样品前处理l 称取25g样品及2.5g氯化钠并转移到干净的三角瓶中。l 加50ml 80%甲醇/水溶液。l 漩涡混合震荡1mim,4000r/min 离心6min。l 取甲醇/水溶液至少10ml。l 取5ml萃取液加入20ml水,彻底混合。l 用玻璃纤维滤纸过滤至澄清,取10ml加入到免疫亲和柱(SBHL-20-0383)中。1.2 使用免疫亲和柱纯化1.2.1 检测前的准备1. 将所需的免疫亲和柱在使用前回温至室温(20-25℃)。2. 免疫亲和柱的上下端有塑料塞子,在使用时可以取下。3. 在使用的过程中避免免疫亲和柱的干燥。例外情况为1.2.2.中第4步(洗脱前短暂的排空)和5步(洗脱后的完全排空)。4. 过高的压力或真空提取设备产生的负压会压紧凝胶而导致回收率降低。1.2.2 检测操作1. 将10ml注射器连接于免疫亲和柱上端。2. 处理好的样品液以1-2滴/秒的速度通过亲合柱,弃掉流出的液体。3. 以10ml水淋洗柱子两次,弃掉流出的液体。4. 利用真空设备压入空气(约10秒),确保所排除所有的液体。5. 用1ml甲醇缓慢洗脱(流速约为[font='Arial','sans-seri
食品中黄曲霉毒素的测定,主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法,TLC法灵敏度和重现性较差;ELISA法重现性差,易受样品基质干扰假阳性率高,仅能作为筛选方法。近年来,由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点,现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素,一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响,正相色谱中,B1和B2的荧光强度仅稍低一点,不需衍生化;而在常用的反相色谱中,B1和G1两种异构体荧光强度很弱,需进行衍生化,提高其荧光强度,灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类, 柱前衍生一般使用三氟乙酸,柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来,很多标准方法利用免疫亲合柱净化,HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析,方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么,它是怎样工作的,为什么要用它? 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点,不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶(黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体),基于抗原抗体反应进行工作,专一性很强,再加上另一种原理(反相或正相液相色谱)的分离,即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净,直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定,也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱(不是免疫柱)要便宜一些,能做的霉菌毒素品种也多,但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴,这对分析有什么作用?是可以提高灵敏度吗?如果是,溴是如何与黄曲霉素反应的?络合?氧化?还是别的什么? 由欧以上的论述,应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究,可能和柱后衍生类似(氧化?),考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍,是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施?这个阿胖讲得差不多了,方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿,当然最好不要自己称固体标样,那东东有静电,很容易飞出来,买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕,对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证,每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少,有的HPLC筛选方法,提取后不净化就直接进样了,也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关,如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干,肯定是要用HPLC法;如果就骗骗中国的官僚和老百姓,那就像啊胖说的,酶免法又省钱有省事,嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法,净化方法很差,UV灯下看上去是一条亮带,满足国标20PPB的限量都很勉强,这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品,加入氯化钠5 g和125 mL甲醇:水(7+3),均质2min,过滤。取15 mL滤液加30 mL水,再次过滤后,取10 mL过免疫亲和柱,2×10 mL水洗柱,最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素,用水定容至2 mL,供HPLC测定。HPLC条件:色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:甲醇-乙腈-水(1+1+3);流速:1.0 mL/min; 柱后衍生试剂:100 mg碘溶于2 mL甲醇,加水至200 mL。流速0.3 mL/min;衍生化温度:70 ℃;衍生化时间:55 s;激发波长:360 nm;发射波长: 420 nm;进样量:50 μL。3. 方法技术指标:免疫亲和柱净化,HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平:5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平:2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃,需要单独的柱温箱,还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生(1)过溴化吡啶溴(PBPB)衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3);流速:1.00 mL/min;衍生化溶液:25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水,室温下避光可保存5天;衍生化溶液流速:0.30 mL/min;衍生化反应管:55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度:室温。(2)电化学反应池衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3),每升加350 μL HNO3 (5 mol/L),同时溶解120 mg KBr;衍生化反应池:Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.,衍生化操作电流:100 μA。
什么是黄曲霉毒素 黄曲霉毒素(Aflatoxins)是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物,特曲霉也能产生黄曲霉毒素,但产量较少,目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种,主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2等。黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素,B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物,含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素),前者为基本毒性结构,后者与致癌性有关。B1的毒性(其毒性比氰化钾毒性高)及致癌性极强且耐热(B1的分解温度为268℃左右,一般烹调加工破坏很少),在天然污染的食品中以B1最为多见。 黄曲霉毒素分布 黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食物中;在水中的溶解范围为10毫克/升~20毫克/升, 可大量溶解于氯仿、甲醇、二甲基亚砜等中等极性的有机溶剂中,不溶于己烷、石油醚和乙醚;易被碱或强氧化剂破坏;进入人体后主要经消化道吸收,大部分分布 在肝脏、肾脏,少部分分布在血液、肌肉、脂肪组织中,其在体内的代谢过程主要为羟基化作用、去甲基作用和环氧化作用。 为什么奶粉中会含有黄曲霉毒素 人类接触黄曲霉毒素的主要来源是污染的食物,有两种通过膳食可以摄入:途径一是由受黄曲霉毒素(主要为B1)污染的植物性食物摄入,途径二是经饲料而进入奶或乳制品(包括乳酪、奶粉等)的黄曲霉毒素(主要为M1)。中国农业大学食品学院营养与食品安全系主任,副教授何计国(微博)介绍,黄曲霉毒素具有很强的毒性和致癌性。黄曲霉毒素是微生物产生的,不像三聚氰胺属于恶意添加。黄曲霉毒素是脂溶性的,如果牛饲料中存在黄曲霉毒素,牛肉中含量不会很高。但内脏特别是肝脏中含量会高。黄曲霉毒素非常耐热,加热到280°都不会被破坏,所以奶粉中只要含有,就不会被去除。紫外线只能少量破坏。 黄曲霉毒素有何危害 黄曲霉毒素是一种毒性极强的物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中,以黄曲霉毒素B1最为多见,其毒性和致癌性也最强。生产企业如果使用劣质的原料,如发霉的花生、菜籽、玉米等生产食用油,则有可能造成黄曲霉素超标,对消费者的身体健康造成威胁。 食用受黄曲霉毒素污染的食品,会出现急性中毒。临床表现以黄疸为主,并有呕吐、厌食和发烧等症状。重症者在2~3周后出现腹水、下肢水肿,甚至死亡,死亡前出现胃肠道出血。黄曲霉毒素危害性大,存在范围广,为了预防黄曲霉毒素中毒事件的发生,维护人类健康,世界上已有70多个国家和地区对食品中黄曲霉毒素的含量作了限量要求。下面是一些国家和地区对食品中的黄曲霉毒素的检验检疫要求: 我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准(GB2761-81)规定,玉米、花生仁、花生油中不得超过20微克/公斤,玉米及花生仁制品(按原料折算)中不得超过20微克/公斤,大米、其他食用油中不得超过10微克/公斤,其他粮食、豆类、发酵食品中不得超过5微克/公斤,婴儿代乳食品中不得检出,其他食品可参照以上标准执行;牛乳及其制品中黄曲霉毒素M1限量卫生标准(GB9676-88)规定,不得超过0.5微克/公斤。 测定黄曲霉毒素方法有哪些 目前,测定食品中的黄曲霉毒素的方法有薄层层析法、液相色谱法、放射免疫分析法、酶联免疫法、免疫层析法、微柱筛选法、金标试纸法等。我国现行使用的国家标准GB/T 5009.22-1996规定了食品中黄曲霉毒素B1的测定方法,GB/T 5009.23-1996规定了食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定方法,GB/T 5009.24-1996规定了食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定方法。此外,卫生部于1990年11月发布了《防止黄曲霉毒素污染食品卫生管理办法》。 食品的防霉去毒措施 吉林大学军需科技学院食品质量安全专业教授徐克成介绍,颗粒状的被污染粮食可通过晾晒、清洗消除部分黄曲霉,但如果是粉末状的食物或饲料,则很难通过以上方法清除。 (1) 防霉:控制粮食含水量在12~13%以下即可防霉。保持米粒及花生外壳的完整,使用化学熏蒸剂,对防止霉菌侵染也有一定作用。 (2) 去毒方法: 挑除霉粒:适用花生。因黄曲霉素主要存在于发霉,变色,破损及皱缩的花生中,挑除后,可使黄曲霉毒素含量显著降低。碾轧加工及加水搓洗:适应于大米,因毒素主要存在于米糠及大米表层。脱胚去毒:适用于玉米。脱胚法有两种:一是浮选,将玉米碾3MM左右的碎粒。加入清水,搅拌,轻搓,胚部碎片轻而上浮,捞出浮层;二是碾轧法,将玉米碾轧,去掉外皮及胚部.4)加碱破坏毒素:适用于食用油.5)其他:如紫外线照射,盐炒法等有一定去毒效果。 (3) 加强食品卫生监测。
在外聚餐时,餐桌上常会有赠送的餐前小吃——花生米,不过,如果你在金灿灿的花生米中无意夹到一颗变黑的,这时可千万不要往嘴里送,因为它们有可能已经被黄曲霉毒素污染而可能会对人体产生一定的危害。那什么是黄曲霉毒素呢?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507071036_553899_2984502_3.jpg1黄曲霉毒素 黄曲霉毒素是一种由黄曲霉和寄生曲霉等真菌经过聚酮途径产生的次生代谢产物,是一组结构类似的化合物总称。迄今为止,已发现的黄曲霉毒素至少包含有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q1、H1、GM、B2a、G2a及毒醇等20种左右结构相似化合物。 通常黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶及奶制品、食用油等制品中也可能会发现黄曲霉毒素。2黄曲霉毒素在食物中的限量标准 根据我国国家标准GB2761-2011《食品中真菌毒素限量》的规定,我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准为:玉米及其制品、花生及其制品中不得超过20μg/kg;稻谷、糙米、大米和其他植物油脂中不得超过10μg/kg;小麦、大麦、其他谷物、发酵豆制品和其他熟制坚果及籽类中不得超过5μg/kg;部分调味品(如酱油、醋、酿造酱)中不得超过5μg/kg;婴幼儿配方食品中不得超过0.5μg/kg。乳及乳制品和特殊膳食用食品中黄曲霉毒素M1限量不得超过0.5μg/kg。3黄曲霉毒素的检测方法(1)薄层色谱法(TLC法) TLC法是测定黄曲霉毒素的经典方法,是我国测定食品及饲料中黄曲霉毒素B1的标准方法之一(GB/T5009.23-2006)。适用于各种食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。(2) 免疫分析法 免疫化学分析法是以抗原抗体的免疫化学反应为基础进行抗原抗体含量测定的方法。用于黄曲霉毒素测定的免疫分析法主要有免疫亲和层析净化—荧光光度法、免疫亲和层析净化—高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。 免疫亲和层析净化—荧光光度法和免疫亲和层析净化—高效液相色谱法 免疫亲和层析技术的方法特异性好、灵敏度高,是目前我国现行国家标准推荐的方法之一(GB/T18979-2003),适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。 酶联免疫吸附法(ELISA) ELISA法是应用抗原抗体特异性反应和酶的高效催化作用来测定黄曲霉毒素含量的免疫分析方法,其相对应的标准是GB/T5009.22-2003(第二法),适用于粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B1的测定。4黄曲霉毒素的预防与控制措施(1) 挑选霉粒法 因黄曲霉毒素主要集中在霉坏、破损、皱皮、变色和虫蛀等的粮粒中,这些带毒颗粒比健康颗粒轻,外表也较易辨认,可用机械或人工掏除。(2) 植物油加碱去毒法 油料种子受黄曲霉毒素污染后,榨出的油中含毒素,可用碱炼法去毒。因为不溶于水的黄曲霉毒素在碱性条件下可形成香豆素钠盐而溶于水,故加减后用水洗可将毒素去除。(3) 加水搓洗法 在淘洗大米时,用手搓洗,随水倾去悬浮物,如此反复5~6次,煮熟后可去除大部分毒素。(4) 吸附去毒法 植物油受黄曲霉毒素污染,可利用活性白土和活性炭吸附,效果较好。(5)高温高压去毒法 黄曲霉毒素较耐高温,在280℃高温下才能分解,因此一般烹调温度下难以消除。但高温高压下去毒效果较好。(6) 碾磨去毒法 在粮食中,黄曲霉毒素大部分集中于脂肪较多的胚体和糠皮等部位。稻谷经精碾后95%的毒素可去除。玉米磨粉也有类似的效果。
固相萃取-高效液相色谱法检测乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1摘要:建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法。样品经乙腈提取,ProElut AFT固相萃取柱净化,以正己烷和三氟乙酸衍生后,通过DiamonsilC18(2)色谱柱分离,流动相为水、乙腈和异丙醇,梯度洗脱,流速1 mL/min,荧光检测器检测,激发波长365nm,发射波长435 nm,外标法定量。结果表明5种黄曲霉毒素在0.01~5μg/L范围内线性关系良好。样品加标回收率在80%~100%之间,相对标准偏差1.58%~4.21%,方法检出限为牛奶:0.02~0.06μg/kg,奶粉:0.04~0.12 μg/kg。 黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次生代谢产物,是现在发现的毒性和致癌性最强的天然污染物,其毒性是氰化钾的10倍,砒霜的68倍。黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1是最为常见且最重要的五种衍生物,可存在于土壤、坚果、谷物、食用油、及乳制品中。由于新生儿童免疫系统不完善,抵抗力较弱,所以婴幼儿食品尤其是奶粉、牛奶中黄曲霉毒素的检测尤为重要。 目前,黄曲霉毒素的检测方法有薄层色谱法(TLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD);高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)。TLC法对人和环境的污染系数大,操作繁琐,灵敏度不高,很难普及。ELISA方法虽然操作简单,但定量不精确,易出现假阳性结果。HPLC-MS法仪器昂贵,检测成本较高,而HPLC-FLD操作简单,选择性好,灵敏度高,定量准确,同时仪器价格适中,适宜推广。另外,乳制品成分复杂、蛋白含量高、含有多种维生素及微量元素,所以样品净化在检测过程中占有重要的地位,目前的净化方法主要采用免疫亲和柱(IAC)净化和其它固相萃取柱净化,如石墨化碳黑柱;CN柱;HLB柱等。IAC虽然选择性好但是价格昂贵、储存条件苛刻、保存期短,其它固相萃取柱净化过程中涉及步骤较多,且净化效果一般。故本文选择ProElutAFT固相萃取柱结合高效液相色谱荧光检测器测定乳品中黄曲霉毒素,方法灵敏度高,步骤简单,净化效果好,成本较低,适合推广。1 实验部分1.1仪器与试剂岛津LC-20A高效液相色谱仪,RF-20A荧光检测器,柱温箱,涡旋混合器(予华仪器),高速离心机(予华仪器),旋转蒸发仪(予华仪器),12孔固相萃取装置(迪马公司),Diamonsil C18(2),250 mm×4.6 mm,5 μm色谱柱(迪马公司),ProElut AFT固相萃取柱(迪马公司)。乙腈、甲醇、异丙醇均为色谱纯(迪马公司),黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1标准品浓度10 μg/mL(Sigma)。分别取标准品各10 μL于10 mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,配置成10ng/mL中间液,0-4 ℃避光保存。1.2色谱条件色谱柱:Diamonsil C18(2),250 mm×4.6 mm,5 μm;流速:1 mL/min;检测器:FLD,Ex: 365 nm,Em: 435nm;柱温:30 ℃;进样量:20 μL;流动相:A-水;B-异丙醇 : 乙腈=3 : 2;梯度程序:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171533_556047_2452211_3.png1.3样品提取1.3.1牛奶、原料乳等液态奶制品称取2 g样品,加入2mL乙腈,涡旋混合1 min,再加入4 mL乙腈,涡旋混合1 min,4000 rpm,离心5 min,取上清液4 mL,作为上样液待净化。1.3.2奶粉等固体奶制品称取2 g样品,加入5mL水,涡旋混合2 min,样品与水充分混匀,加入5 mL乙腈,涡旋混合1 min,再加入10 mL乙腈,涡旋混合1 min,4000 rpm,离心5 min,取上清液5 mL,作为上样液待净化。1.4样品净化用10mL乙腈活化ProElut AFT固相萃取柱,将上样液加入柱中(流速控制每滴/两秒),接收流出液,采用10 mL乙腈洗脱样品(流速控制每滴/两秒),收集流出液,合并流出液,在40 ℃下减压蒸馏浓缩至大约2 mL,向旋蒸瓶中加入5 mL无水乙醇,继续减压蒸馏至完全干燥,依次加入0.5 mL正己烷和0.5 mL三氟乙酸,旋好玻璃塞充分混匀衍生液,45 ℃静置10 min,然后挥干衍生液,用10%乙腈水溶液定容至0.5 mL,待检测。2结果与讨论2.1色谱条件的选择分别考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-水、乙腈-异丙醇-水为流动相对五种黄曲霉毒素分离的影响,结果表明,在A相为水,B相为异丙醇: 乙腈=3 : 2条件下进行梯度洗脱,可使五种黄曲霉毒素达到很好的分离效果(图1)。原因为乙腈中加入异丙醇可降低流动相极性,增加样品与色谱填料间的吸附-脱附次数,从而增加分离度。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171534_556048_2452211_3.png2.2提取溶剂的选择比较了正己烷、甲醇、乙腈对黄曲霉毒素的提取效果,结果表明用正己烷提取时会产生乳化现象,且会提取出大量脂肪,影响净化效果;甲醇提取同时可除掉部分蛋白,但是也会有少量脂肪溶解;乙腈作为提取溶剂既可除掉绝大多数蛋白质,同时对油脂的溶解度大大降低,因此本实验采用乙腈作为提取溶剂。2.3固相萃取柱的选择对于乳及乳制品类样品,采用固相萃取柱进行样品进化是必不可少的步骤。本文采用了硅胶、氨基、PSA、C18、CARB、AFT填料的固相萃取柱,发现采用硅胶柱时黄曲霉毒素回收率极低,应该是样品与硅羟基形成了部分死吸附导致;采用氨基柱、PSA柱净化,可吸附少量的油脂及酸性杂质;采用C18柱可吸附弱极性和中等极性的维生素、脂肪等杂质,但这些固相萃取柱都不能达到同时吸附样品中多种干扰物的效果。AFT萃取柱为黄曲霉毒素检测专用多功能净化柱,可在保证高回收率的前提下同时吸附蛋白、脂肪、维生素、微量元素等干扰物,达到很好的净化效果(图2、图3)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171536_556049_2452211_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171536_556050_2452211_3.png2.4回收率结果分别对牛奶、奶粉进行加标回收试验,每个样品平行测定6次,计算回收率及RSD值(表1、表2)。结果表明,牛奶中添加的黄曲霉毒素回收率为83%-93%、RSD为1.5%-2.8%;奶粉中添加黄曲霉毒素回收率为75%-96%、RSD为1.7%-4.2%,结果满意。3.结论黄曲霉毒素毒性强,若存在于食品中尤其是婴幼儿食品中会对人类造成极大的伤害。本文建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法,本方法通用性强、灵敏度高、重现性好、结果准确,符合现代技术的发展趋势。 参考文献1、 GB\T5009.24-2010 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定2、GB\T17480-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定-酶联免疫吸附法3、 AzizA. Fallah. Food and Chemical Toxicology,2009,47:1872-18754、 SN/T1664-2005 牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的测定5、 王娜,潘治利等. 花生中黄曲霉毒素检测方法的研究,安徽农业科学,2008,36(2
花生中黄曲霉毒素的检测黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物,它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起,欧盟就规定了最大限量。本文采用高效液相色谱法测定花生中的黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,采用了柱后衍生法测定,灵敏度高,结果理想。检测依据:GB/T18979-2003 ;液相色谱仪:LC-10AVP色谱条件:色谱柱:色谱柱:Welchrom-C18 ( 250 mm ×4.6 mm 5μ ); Serial Number:W13212257;流动相:水:甲醇=55:45;流速:1mL/min。荧光检测器:激发光波长:360nm 发射光波长:450nm 增益:17;柱温:30℃;衍生方式:柱后光化学衍生(254nm)进样量:10uL混合对照品溶液的配置: 精密量取黄曲霉毒素混合标准品溶液0.5ml于10ml容量瓶中,用甲醇定容,为储备液,精密量取该储备液适量,分别制成不同浓度的混标溶液;供试品溶液的配置:称取粉碎花生试样约15g ,加人氯化钠3g ,置于均质瓶中,用70%甲醇溶液定容至125ml,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11 000转/分钟),离心5 分钟( 离心速度2500 转/ 分钟) , 精密量取上清液15ml,用水定容至50mL,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,量取此滤液10.0ml,通过免疫亲合柱(Welchrom®Aflatoxin G1 G2 B1 B2 货号:01140-00031 ),流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,收集洗脱液,置2ml容量瓶中,甲醇定容,过滤后进液相色谱分析。定容体积为:125mL; 稀释用样品滤液体积:15mL;定容至50mL;过免疫亲合柱滤液体积:10mL,甲醇洗脱液体积;2mL。工作曲线系列B1、B2、G1、G2混标使用液浓度:0、2、4、8。5、10、21ng/mL。2ng/mL混标分离色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647236_2166779_3.png20ng/mL混标液分离色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040622_498285_2166779_3.pngG2、G1、B1、B2工作曲线线性:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040626_498286_2166779_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040626_498287_2166779_3.png花生样品的检测色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040630_498290_2166779_3.png平行试验:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040630_498291_2166779_3.png表1 加标回收率测定结果
[b][color=#444444]谁知道GB/T 5009.22-2003中使用的黄曲霉毒素B1标准溶液能否用黄曲霉毒素B1固体配制?标准品价格略贵啊。[/color][/b]
花生油中黄曲霉毒素B1交流 QQ 402340041,或群484188013
2015版药典中药中黄曲霉毒素的检测有两种方法,不知大家是采用的哪种方法呢?液质?还是液相色谱-光化学衍生+荧光呢?
有参加山东出入境检验检疫局组织的花生中黄曲霉毒素能力验证的吗?群号:69275845
共享应用,继续。。。花生油和粮谷中黄曲霉毒素检测提取称取2.0 g样品,加入8 mL 85%乙腈水,振荡2 min,超声10 min,6000 rpm离心2 min,收集上清液,待净化。SPE柱净化——ProElut AFT-3 12mL(CAT:65915)将待净化液加入柱中,收集2 mL流出液,在50 ℃水浴下减压蒸干,用初始流动相定容到1mL,过膜上机分析。UPLC 条件:色谱柱:Leapsil C18,100×2.1 mm,2.7 μm (Cat#:86005)流 速:0.3 mL/min 进样量:5 μL 柱 温:40 ℃流动相:乙腈:0.1%甲酸水梯度 时间(min) 0 6 7 15 乙腈(%) 30 70 30 30 0.1%甲酸水(%) 70 30 70 70 质谱条件:电离模式:ESI 扫描方式:正离子扫描检测方式:多反应监测 电喷雾电压:5500 V雾化气压力:50 psi 辅助气压力:50 psi气帘气压力:20 psi 离子源温度:500 ℃粮谷及油类样品中黄曲霉毒素检测(添加水平10ug / kg)的添加回收结果(%) 基质 AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 AFM1 花生油 94.0 102.4 106.6 93.2 96.2 糙米 96.0 99.2 87.2 108.4 87.6 高粱 94.4 93.8 86.4 95.0 92.6 小米 96.8 90.6 112.8 91.4 89.0 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608251327_606734_1987954_3.png
乳制品中黄曲霉毒素M1检测 黄曲霉毒素是一种强致癌物,它广泛存在于食品、药品、饲料、乳制品等中,尤其是发霉或变质了的产品。严重的影响着我们消费者的身体健康和生活质量。现在社会各个阶层都非常重视这个问题,很多行业也都在研究和制定着本行业的方法和标准。限量检测要求也越来越高,越来越严。下面我们先来介绍下高效液相色谱法,荧光检测器检测乳制品中黄曲霉毒素M1含量的检测吧。实验部分1.适应性:该方法适用于牛奶、奶粉、乳酪等乳制品中黄曲霉毒素M1的检测。2.检测原理样品经溶解、振动、离心、固相萃取等提取后,由进样器进入高效液相色谱系统,C18色谱柱分离,荧光检测器检测,保留时间定性,峰面积定量(外标法)计算。3.设备及试剂设备:高效液相色谱仪(等度泵+荧光检测器+进样器+C18色谱柱+柱温箱等),超声波清洗仪,溶剂过滤器,涡旋振动仪,离心机(大于等于4000rpm),分析天平,固相萃取装置(包括专业的净化柱),氮吹仪等。试剂:乙腈(色谱纯),无水乙醇(分析纯),超纯水等。4.样品提取及制备牛奶、原料乳等液态奶制备:准确称取5g样品置于具塞离心管中,加入5mL乙腈,涡旋混合1min; 再加入10mL乙腈,涡旋混合1 min,4000rpm离心机离心5min; 取上清液5mL,作为上样液待净化。 奶粉、乳酪等固体奶制备:准确称取2g样品置于具塞离心管中,加入5mL水,涡旋混合2min,使样品与水充分混匀; 加入5mL乙腈,涡旋混合1 min; 再加入10mL乙腈,涡旋混合1min,4000rpm离心机离心5min; 取上清液5mL,[/
[font=&][color=#666666]点击链接查看更多:[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-392.html[/url]黄曲霉毒素(Aflatoxins),是一组化学结构类似的化合物,主要包括B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇,黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素。B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物,即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素),前者为基本毒性结构,后者与致癌有关。M1是黄曲霉毒素B1在体内经过羟化而衍生成的代谢产物。黄曲霉毒素的主要分子型式含B1、B2、G1、G2、M1、M2等,其中M1和M2主要存在于牛奶中,B1为毒性及致癌性最强的物质。[/color][/font][font=&][color=#666666] 黄曲霉毒素(Aflatoxins)具耐热性,一般烹调加工温度不能将其破坏,裂解温度为280℃。加入强碱和5%次氯酸钠可完全破坏;酸性条件下稳定,在pH值1-3的强酸性溶液中稍有分解。在水中溶解度较低,溶于油及一些有机溶剂,如氯仿和甲醇中,但不溶于乙醚、石油醚及乙烷。食品中所污染的主要是黄曲霉毒素B1,其毒性目前一般认为有三种临床特征;急性中毒、慢性中毒和致癌性。[/color][/font][font=&][color=#666666] 广东省微生物分析检测中心建立了检测食品、乳粉样品中“黄曲霉毒素M1”的方法。[/color][/font][font=&][color=#666666]检测方法:[/color][/font][font=&][color=#666666]1)食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定GB 5009.24-2010[/color][/font][font=&][color=#666666]2)食品安全国家标准 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定 GB 5413.37-2010(不做第三法)[/color][/font][font=&][color=#666666]限量标准:婴幼儿配方食品按GB 5009.24-2010规定的方法检测;乳及乳制品按GB 5413.37-2010规定的方法检测。限量要求≤0.5μg/kg。[/color][/font]
独家解读黄曲霉毒素有何危害2011年12月26日09:36 新浪健康 国家质检总局24日公布了近期对200种液体乳产品质量的抽查结果。抽查发现蒙牛、长富纯牛奶两种产品黄曲霉毒素M1项目不符合标准的规定。据称,牛奶中含有黄曲霉毒素,主要是因为奶牛食用了含有黄曲霉毒素的饲料所致。什么是黄曲霉毒素?黄曲霉毒素会导致哪些疾病? 什么是黄曲霉毒素 黄曲霉毒素(Aflatoxins)是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物,特曲霉也能产生黄曲霉毒素,但产量较少,目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种,主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2等。黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素,B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物,含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素),前者为基本毒性结构,后者与致癌性有关。B1的毒性(其毒性比氰化钾毒性高)及致癌性极强且耐热(B1的分解温度为268℃左右,一般烹调加工破坏很少),在天然污染的食品中以B1最为多见。 黄曲霉毒素分布 黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食物中;在水中的溶解范围为10毫克/升~20毫克/升, 可大量溶解于氯仿、甲醇、二甲基亚砜等中等极性的有机溶剂中,不溶于己烷、石油醚和乙醚;易被碱或强氧化剂破坏;进入人体后主要经消化道吸收,大部分分布 在肝脏、肾脏,少部分分布在血液、肌肉、脂肪组织中,其在体内的代谢过程主要为羟基化作用、去甲基作用和环氧化作用。 为什么牛奶中会含有黄曲霉毒素 人类接触黄曲霉毒素的主要来源是污染的食物,有两种通过膳食可以摄入:途径一是由受黄曲霉毒素(主要为B1)污染的植物性食物摄入,途径二是经饲料而进入奶或乳制品(包括乳酪、奶粉等)的黄曲霉毒素(主要为M1)。中国农业大学食品学院营养与食品安全系主任,副教授何计国(微博)介绍,此次牛奶中检出的是黄曲霉毒素M,具有很强的毒性和致癌性。据了解,应是饲料受到了污染造成的。但是如果饲料的原料(粮食)保存好的话,污染黄曲霉毒素的概率不会很高。此次事件中的黄曲霉毒素来源于饲料,经过代谢形成。黄曲霉毒素是微生物产生的,不像三聚氰胺属于恶意添加。黄曲霉毒素是脂溶性的,如果牛饲料中存在黄曲霉毒素,牛肉中含量不会很高。但内脏特别是肝脏中含量会高。黄曲霉毒素非常耐热,加热到280°都不会被破坏,所以牛奶中只要含有,就不会被去除。紫外线只能少量破坏。 黄曲霉毒素有何危害 黄曲霉毒素是一种毒性极强的物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中,以黄曲霉毒素B1最为多见,其毒性和致癌性也最强。生产企业如果使用劣质的原料,如发霉的花生、菜籽、玉米等生产食用油,则有可能造成黄曲霉素超标,对消费者的身体健康造成威胁。 食用受黄曲霉毒素污染的食品,会出现急性中毒。临床表现以黄疸为主,并有呕吐、厌食和发烧等症状。重症者在2~3周后出现腹水、下肢水肿,甚至死亡,死亡前出现胃肠道出血。黄曲霉毒素危害性大,存在范围广,为了预防黄曲霉毒素中毒事件的发生,维护人类健康,世界上已有70多个国家和地区对食品中黄曲霉毒素的含量作了限量要求。下面是一些国家和地区对食品中的黄曲霉毒素的检验检疫要求: 我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准(GB2761-81)规定,玉米、花生仁、花生油中不得超过20微克/公斤,玉米及花生仁制品(按原料折算)中不得超过20微克/公斤,大米、其他食用油中不得超过10微克/公斤,其他粮食、豆类、发酵食品中不得超过5微克/公斤,婴儿代乳食品中不得检出,其他食品可参照以上标准执行;牛乳及其制品中黄曲霉毒素M1限量卫生标准(GB9676-88)规定,不得超过0.5微克/公斤。 目前,测定食品中的黄曲霉毒素的方法有薄层层析法、液相色谱法、放射免疫分析法、酶联免疫法、免疫层析法、微柱筛选法、金标试纸法等。我国现行使用的国家标准GB/T 5009.22-1996规定了食品中黄曲霉毒素B1的测定方法,GB/T 5009.23-1996规定了食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定方法,GB/T 5009.24-1996规定了食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定方法。此外,卫生部于1990年11月发布了《防止黄曲霉毒素污染食品卫生管理办法》。 食品的防霉去毒措施 吉林大学军需科技学院食品质量安全专业教授徐克成介绍,颗粒状的被污染粮食可通过晾晒、清洗消除部分黄曲霉,但如果是粉末状的食物或饲料,则很难通过以上方法清除。 (1) 防霉:控制粮食含水量在12~13%以下即可防霉。保持米粒及花生外壳的完整,使用化学熏蒸剂,对防止霉菌侵染也有一定作用。 (2) 去毒方法: 挑除霉粒:适用花生。因黄曲霉素主要存在于发霉,变色,破损及皱缩的花生中,挑除后,可使黄曲霉毒素含量显著降低。碾轧加工及加水搓洗:适应于大米,因毒素主要存在于米糠及大米表层。脱胚去毒:适用于玉米。脱胚法有两种:一是浮选,将玉米碾3MM左右的碎粒。加入清水,搅拌,轻搓,胚部碎片轻而上浮,捞出浮层;二是碾轧法,将玉米碾轧,去掉外皮及胚部.4)加碱破坏毒素:适用于食用油.5)其他:如紫外线照射,盐炒法等有一定去毒效果。 (3) 加强食品卫生监测。
目前检测黄曲霉毒素主要有薄层色谱法 ( TLC )、免疫亲和柱-高效液相色谱法( HPLC- FL)、酶联免疫法( ELISA)、免疫亲和柱-高效液相色谱法串联质谱法等,薄层色谱法和酶联免疫法主要应用黄曲霉毒素的定性,不能准确定量,免疫亲和柱-液相色谱法和液相色谱法-串联质谱能够准确定量,但是由于免疫亲和柱与质谱检测成本高,应用范围受到限制。方法优势: 对比国标方法《GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》,迪马科技开发的《DHA冬化油和植物油中黄曲霉毒素B1的测定》采用检测成本较低的固相萃取-液相色谱法,也可达到准确定性定量,并且本方案具有:前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好等特点;避免了免疫亲和柱容易受环境影响而引起黄曲霉毒素B1回收率低和净化效果不好的弊端,保证了实验结果的重现性和准确性;过柱方法简单易操作,对操作人员要求不高,检测成本相对较低,能被很多企事业单位采用;检出限是0.1 μg /kg,远低于国家标准和欧盟标准(欧盟对植物油中黄曲霉毒素B1限量标准不得高于 2 μg /kg,我国标准《GB 2761-2011 食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》对其限量要求不得高于10 μg /kg)以下为详细解决方案,敬请参考!1、适用范围本方案适用于DHA冬化油和植物油中黄曲霉毒素B1的检测,方法检出限是0.1 μg /kg。2、提取(1) 取0.5 g样品于15 mL离心管中,加入2 mL正己烷混匀,加入10 mL乙腈,涡旋混合2 min,6000 rpm下离心2 min,收集上清液;(2) 向步骤(1)下层残渣中加入10mL乙腈,按照步骤(1)重复提取一次,收集上清液。(3) 合并步骤(1)、(2)的上清液,在40 ℃下减压蒸至低于5 mL,待净化。3、净化——ProElut AFT-2 12 mL(Cat.#65906)a活化:向柱中加入10 mL乙腈,流出液弃去;b上样:加入待净化液,收集流出液;c洗脱:加入20 mL 乙腈,收集流出液,合并步骤(b)、(c)流出液;d衍生:将流出液在40 ℃下减压蒸至完全干燥,依次加入0.5 mL正己烷和0.5 mL三氟乙酸,旋紧玻璃塞充分混匀衍生液,45 ℃静置10 min,吹干衍生液,用流动相定容至1 mL。[/siz
一、背景信息 近日,媒体曝光了广西梧州和广东肇庆两地市场所出售的部分散装花生油存在黄曲霉毒素超标情况。黄曲霉毒素是什么?毒性怎样?本期将为您解读。 二、专家解读 (一)黄曲霉毒素的污染在世界范围内广泛存在。 黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)最早被发现于1960年,是黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)的次级代谢产物,目前已分离鉴定出12种以上,常见的有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、B2a、G2a、BM2a和GM2a等。黄曲霉毒素的热稳定性非常好,常规烹调和加热法不易分解。 世界范围内黄曲霉毒素的污染相当广泛,包括谷物、坚果和籽类以及牛乳等,尤以玉米、花生被污染的程度最严重。其主要原因是食物在田间未收获前被黄曲霉等产毒菌浸染,在适宜的气温和湿度等条件下繁殖并产毒,或未经充分干燥,在储藏期间产生大量毒素。食用油也存在容易受黄曲霉毒素污染的问题,但通过原料筛选、碱炼、吸附等控制手段可以使成品油中黄曲霉毒素降到非常低的水平。 (二)摄入量决定黄曲霉毒素是否引起急性中毒。 世界范围内曾报道数起人类的黄曲霉毒素急性中毒,如非洲的霉木薯饼中毒,印度的霉玉米中毒等。2004-2005年肯尼亚暴发了迄今史上最大规模的黄曲霉毒素急性中毒事件,中毒千余人,死亡125人,中毒玉米中检出黄曲霉毒素B1的含量高达4400ppb(μg/kg),是罕见的黄曲霉毒素中毒事件。黄曲霉毒素中毒的症状一般为一过性发烧、呕吐、厌食、黄疸、腹水、下肢浮肿等肝中毒症状,严重者出现暴发性肝功能衰竭、死亡。 根据我国及世界其他国家的标准规定,黄曲霉毒素的含量如果在安全限量范围之内,并不会对消费者的健康构成风险。 (三)全球已高度重视对食品中黄曲霉毒素的控制。 黄曲霉毒素B1是影响人和动物健康的主要真菌毒素之一,也是全球食品安全控制中最主要的真菌毒素。2003年联合国粮农组织(FAO)发布的全世界食品和饲料真菌毒素法规报告中显示,除国际食品法典委员会(CAC)的规定以外,全球100多个国家和地区制定了各类食品中黄曲霉毒素限量标准。食品中黄曲霉毒素B1的限量范围为1-20ppb,黄曲霉毒素总量(AFB1、B2、G1、G2)的限量范围为0-35ppb。 2011年我国发布的《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》(GB2761-2011)中规定花生及其制品中黄曲霉毒素B1的限量为20ppb。 (四)“土榨油”看似原生态实存安全隐患。 近年来,“纯天然”和“原生态”成为部分消费者的追求,除了购买“土榨油”外,也有使用家用榨油机自制油的方式。对于这两种榨油方式,专家认为存在较大安全隐患。除了原料品质是否过关的问题,“土榨油”或自榨油还存在下列问题:未经过精炼加工,杂质多,易氧化变质;榨油设备不易彻底清洗干净,残留的油渍及谷物残渣在氧化后会产生霉变,食品安全隐患很大;此外,资源利用率低,会造成很大浪费。 三、专家建议 (一)科研人员应加大“从田间管理到加工过程”对黄曲霉毒素污染及控制手段的研究力度,为保证食品安全提供更加有效的科技支撑。 (二)以玉米、花生等为主要原料的食品生产、加工企业,特别是“土榨油”生产作坊,应严格执行食品安全国家标准和相关技术规范,积极采取有效措施,重视原料安全,严格把关每一个生产环节,确保产品的质量和安全。 (三)媒体应注重全面、科学、客观报道,采用相应领域权威专家的专业观点,以正确解读国家相关标准法规,引导消费者理性认识和理解黄曲霉毒素的危害,避免公众过度恐慌。 (四)消费者应注意培养良好的消费习惯,注意产品的标签、标识,做到在保质期内妥善储藏。特别应注意通过正规可靠渠道购买食用油,不要片面迷信“纯天然”和“原生态”制品。来源:国家食药监局