想要对液体中的大肠菌进行分离纯化,能不能直接将样品或者稀释后的样品接种于培养基?选择性培养基是选用VRBA、麦康凯、伊红美蓝?或者有另外适宜的培养基?
1、 1、血琼脂平板:适用于各类细菌的生长,一般细菌检验标本的分离都应接种到血平板上。其中肉浸液琼脂中加兔血(对嗜血杆菌生长更好)或羊血均可。用血量为5%--7%.在血平板上除可以观察菌落的形态外,还可判断溶血情况,菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为β-溶血环,菌落周围呈绿色为α-溶血。2、巧克力平板:该平板是用马血、羊血或兔血制备,因其含有X和V因子,嗜血杆菌、奈瑟菌等生长良好,血液标本培养增菌后有细菌生长,若移种该平板上有利于分离出更多的细菌。3、中国蓝平板或伊红美兰平板:可抑制革兰氏阳性细菌,是较好的弱选择性培养基,有选择性促进革兰氏阴性菌生长。发酵型革兰氏阴性杆菌因分解乳糖能力不同,在此种平板上的菌落颜色不同,便于鉴别菌种。该培养基不含胆盐,与SS平板配对用于大便中志贺氏菌和沙门氏菌的分离培养最为理想。4、麦康凯平板:该培养基中含有胆盐,为中等程度选择性,抑菌力略强,有少数阴性菌不生长。在麦康凯平板能否生长是非发酵菌鉴定的一个依据,如果用麦康凯平板作为原始标本分离的培养基时,应注意观察该标本在血平板上的细菌分离情况,以免遗漏部分被抑制生长细菌。5、SS平板:因含胆盐较高,有较强的抑菌力,用于志贺氏菌和沙门氏菌的分离培养。在目前商品培养基中,不同厂家的产品抑菌力不同,使用时应注意,选择性过强可影响检出率,所以最好是加上一种弱选择性平板同时培养。6、碱性琼脂或TCBS或庆大霉素琼脂或4号琼脂:用于分离培养霍乱弧菌及其他弧菌。选择其中1-2种作为常规检验用就行了,这几种培养基对肠道非致病菌的抑制力各不相同,使用时应有所了解。7、M-H琼脂平板(水解酪蛋白琼脂):专用于抗菌药物敏感试验。8、营养琼脂平板:用于纯化菌种和保存菌种,以及卫生细菌学方面的细菌总数测定培养基。9、营养肉汤:用于标本及各类细菌的增菌。10、TTC沙氏培养基:(氯化三苯四氮唑培养基)用于检测酵母菌和酵母样真菌分离。11、Cary-Blair运送培养基:用于空肠弯曲杆菌、霍乱弧菌、沙门氏菌和志贺氏菌的保存运送培养基,但在该采样管中的标本只能保存72小时。12、S.F培菌液(亚硒酸盐培菌液):用于肠道致病菌的增菌培养。注意该培养基灭菌后PH为7.1,有棕黄色沉淀物出现,不宜高压蒸汽灭菌,增菌培养时标本约占培养液体积的10%,培养时间不超过24小时,此培养基储存时不超过两个星期。
1 外观控制制备好的培养基应有相应的颜色,一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化,是否蒸发/脱水。2 污染控制 从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验),确定无微生物生长方可使用。3 性能测试3.1 测试菌株选择测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株,应来自国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株,菌株的选择参考卫生行业标准WS/T232-2002《商业性微生物培养基质量检验规程》。3.2 定量测试方法改良Miles-Misra法测试菌株过夜培养物10倍递增稀释;测试平板和参照平板划分为4个区域并标记;从最高稀释度开始,分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域;将稀释液涂满整个1/4区域,37℃培养18小时;对易计数的区域计数,按公式计算生长率(生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数/参考培养基平板上获得的菌落总数)。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7,该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1。3.3 半定量测试方法 改进的划线法接种法平板分ABCD四区,共划16条线,平行线大概相隔0.5cm,每条有菌落生长的划线记作1分,每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分,没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分,分数加起来得到生长指数G。目标菌在培养基上应呈现典型的生长,而非目标菌的生长应部分或完全被抑制, 目标菌的生长指数G大于6时,培养基可接受。3.4 定性测试方法平板接种观察法用接种环取测试菌培养物,在测试培养基表面划平行直线。按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养, 目标菌应呈现良好生长,并有典型的菌落外观、大小和形态,非目标菌应是微弱生长或无生长。
培养结核杆菌的培养基,从性状上分主要有固体培养基、液体培养基、半流体培养基、固液双相培养基等类型,这些培养基各有特点。 1.1 固体培养基 最常用的是罗氏(Lownstein-Jenson,L-J)培养基,也是最具代表性的一种,其他的还有小川辰次(Tatsujiogawa)鸡蛋培养基和Middle brook 7H10、7H11等琼脂培养基等。在固体培养基中,由于可以直接观察菌落的形态并可做鉴别用,因此常用于临床标本的分离培养、鉴别、保存菌种及对抗结核药物的敏感性测定等方面,缺点是结核菌生长缓慢。 1.2 液体培养基 常用的有苏通(Sauton)培养基、Middle brook 7H9等液体培养基。结核杆菌在液体培养基中能够更广泛的接触营养成分,因此在液体中生长相对较快,主要在液体表面生长,搅动时下沉至管底,可获得大量的结核杆菌。主要缺点是:在对临床标本的收集、采样、运输方面有不利的一面;不能根据肉眼观察菌落形态;培养基污染机会多,影响结核杆菌的生长,污染时不易与结核杆菌鉴别,需涂片染色镜检判断结核杆菌是否生长。 1.3 半流体培养基 改良苏通半流体琼脂培养基是一种人工综合培养基,基质透明,呈半流体状态,生长的结核杆菌形成白色颗粒状菌落悬浮于培养基中段,便于观察。 1.4 固液双向培养基 Septi-Check AFB双相培养基是国外应用较早的一种培养基,采用BD专利式封闭式固液双相一体化培养基设计。液相为Middle brook 7H9分枝杆菌专用增菌培养基,可迅速繁殖分枝杆菌,固相为3种固体培养基平面:Middle brook 7H11和改良的L-J培养基用于及时将增菌肉汤内分枝杆菌进行分离纯化以获得单个菌落,巧克力琼脂用于早期发现污染菌,避免时间浪费。由于有液相作为基础,因此结核杆菌生长较快,也是一种非常有效的培养基。国内有用平菇制备的平菇双相培养基是利用平菇浸出液为基础,加小牛血清、琼脂等成分而配制的一种培养基,根据琼脂的量不同制成液相、固相培养基。在国内应用较少,主要特点是成本低,制备简单,适合于基层使用,有一定的研究价值。
请教一下,培养基需要做灵敏度实验,是指所有用到的培养基么?还是只是限定无菌试验和限度试验中用到的培养基?比如做某个菌的检验时用到增菌液体培养基,选择性增菌液体培养基,选择性培养基等,这些都要一一做灵敏度实验么?选择性增菌的液体培养基的灵敏度实验如何做呢?
真菌培养基培养基真菌培养基的成分有碳源、氮源和其他营养物质。葡萄糖提供碳源,硝酸盐、亚硝酸盐、氨、尿素、氨基酸和其他化合物提供氮源。1.普通培养基(1)改良沙氏琼脂、多选择沙氏琼脂(Sabouraud dextrose agar , SDA): 含有放线菌酮和氯霉素,放线菌酮可抑制腐生性真菌(多数可能为条件致病菌),氯霉素可抑制大多数细菌(并非所有细菌) 。放线菌酮也抑制新型隐球菌、一些念珠菌、烟曲霉等。(2) 马铃薯葡萄糖培养基(potato dextrose agar , PDA) : 天然培养基。(3)脑心浸膏琼脂 临床常用脑心浸膏琼脂(brain-heart infusion agar , BHI) 分离深部真菌、双相真菌如皮炎芽生菌等,也可以在其中加入抗生素和血液制品。(4) 抑制性霉菌琼脂(inhibitory mold agar , IMA ) : 含有氯毒素,可抑制细菌的生长,是用于临床真菌培养标本初次增菌的理想培养基,常用于筛选放线菌酣敏感的真菌,如隐球菌、组织胞浆菌和接合菌等。2. 选择培养基(1)咖啡酸琼脂(CAA) : 用于鉴定新型隐球菌。由于该菌含有靛酚氧化酶,在CAA 培养基中菌落呈黑色。CAA 培养基对光敏感,应避光保存。(2) 鸟食琼脂(BA) : 用于从痰等标本中分离新型隐球菌。新型隐球菌在培养基上产生棕黑色色素,但是其他隐球菌在延长培养时也可产生色素。其他真菌也可在此培养基上生长,但不产生色素。(3) KT 培养基:由吐温、蛋白、烟酸和0.3 %水解酪蛋白氨基酸组成,用于皮炎芽生菌转相(为酵母相)培养时使用。(4) Kelley 琼脂:用于皮炎芽生菌( B. dermatitidis) 转相(为酵母相)时使用。(5) CHROM 琼脂: 念珠菌显色培养基。是一种用于鉴定培养念珠菌的培养基,不同念珠菌在此培养基上生长显不同颜色。
[align=center]耗材和试剂的验收之培养基[/align]耗材和试剂如果在一定程度上影响实验室检测数据的质量情况下,我们要对其进行识别,不仅仅做符合性验收,还要根据其特性,做相应的技术性验收,本文依据GB 4789.28—2013.食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 SN/T1538.1-2005.培养基制备指南 第1部分:实验室培养基制备质量保证通则[s].SN/T1538.2-2007.培养基制备指南 第2部分:培养基性能测实用指南,[/s]为培养基的验收提供指导。 符合性验收:购买培养基到货后,由试剂管理员和微生物检测人员共同核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求,同时应填写“培养基验收检查记录单”验收符合要求后,交由检测人员接受保管,填写培养基入库记录和建立试剂台帐。技术性验收之前需要制备培养基,小心称量所需量的脱水合成培养基(必要时佩戴口罩或在通风柜中操作,以防吸入含有有毒物质 的培养基粉末),先加入适量的水,充分混合(注意避免培养基结块),然后加水至所需的量后适当加热,并重复或连续搅拌使其快速分散,必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟。湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行,高压灭菌一般采用121 ℃±3 ℃灭菌15 min,具体培养 基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行检查,尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进 行检查。在初次使用每批培养基时,均需随同检测配制一个测试培养基,在灭菌或消毒后应在25℃温度下采用精密PH 试纸测试PH值,并判断是否符合要求。购置的同一批次培养基其质量检查应能通过无菌检查(制备好的培养基经30~35℃培养48小时,真菌培养基经20~25℃培养72小时候后,应无菌生长)、新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试,经检查合格的该批次培养基方准许使用,否则不准使用,做好检查记录。新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试,包括物理指标和微生物指标的测试,根据测试结果及时填写“实验室培养基质量控制性能测试记录及评估报告”物理指标控制1)测试20℃~25℃的pH值2)琼脂层厚度;色泽;透明度和(或)是否存在肉眼可见杂质。微生物学指标控制可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法(参考SN/T 1538.2-2016《培养基制备指南 第2部分:培养基性能测试实用指南》和GB 4789.28—2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》)对培养基性能进行测试,具体操作方法如下:(1)生长率将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中,每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。1)定量方法生长率PR的计算: PR = NS/NONS:从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。N0:从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数(该菌落总数应≥100cfu )。要求:非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.7,该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1;每平板(或每试管)的接种水平为10CFU~100CFU。2) 半定量方法半定量方法采用生态测量技术在平板上划线,平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G,G值不应超过标准规定的允许范围。3) 定性方法定性方法采用划线法观察。①选择性将浓度为104CFU/mL~106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中,培养基的选择性应达到规定值。②定量方法选择因子SF: SF = DO - DSDO:能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度DS:能在测试培养基上显示生长的最高稀释度要求:非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2 ;半定量和定量法中,非目标菌应部分或全部被抑制。③生理生化特性(选择性和特异性)规定培养基的基本特性,使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性(菌落形态、大小等)和非目标菌的被抑制程度进行测试。(2)性能评价和结果解释按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定,则该批培养基品质优良;若只有物理指标和微生物指标符合规定,则该批培养基可被接收。综上所述,培养基在微生物实验室有着很重要的作用,其质量能够影响整个微生物检测过程,所以在其购置回来后,应该进行技术性验收,在使用过程中,也应注意存储条件和有效期,避免发生异常情况,导致检测结果出错。[s][s][/s][/s]
如何有效管理微生物实验室干粉培养基在微生物检验中,培养基的质量关乎微生物的检验结果。加强对培养基的质量管理,能够有效提升微生物检验结果的准确性和科学性,因此需要注重培养基的质量管理工作。?本文从培养基的采购验收、质量控制、培养基制备后的质量控制以及培养基的灭菌和储存等环节简要分析了培养基的质量控制工作。1、培养基供应商选择培养基应当从可靠的供应商处采购,必要时应当对供应商进行评估。评估应确定其生产工艺,运输条件是否符合规定,资质是否齐全,质量保证能力和生产能力是否符合需求。如果新增培养基供应商,应对该厂家所生产的不同批次的培养基理化及微生物指标进行检测,并进行审计评估,评估合格后才可以将该品牌纳入合格供应商名录。2、培养基初步验收在培养基到达实验室后,应安排专业的人员对培养基进行验收,首先查看培养基的名称是否正确、配方是否符合药典或国标等相应的法规文件的要求、是否临近有效期、生产批号是否清晰、能否提供商品质检报告、检查包装是否完整,规格、数量是否与采购申请一致。在接收完毕后安排管理人员进行入库保存,并尽快安排对培养基进行入厂检测。3、培养基理化及微生物检测培养基的理化指标主要包括pH值、澄明度以及凝胶强度(琼脂类),培养基的微生物指标一般包括:灵敏度、促生长能力、抑制能力以及指示特性,即培养基适用性检查。这些指标供应商在培养基出厂前就已经进行了检测,合格后放行。使用单位验收时仍需进行培养基适用性检查,并与厂家提供的质检报告进行对比,看与报告内容是否一致。使用单位也可采用有资质的第三方检测报告。4、干粉培养基储存对入库保存的培养基应张贴标签,以区分验收与未验收的培养基,避免混淆与差错。在此为大家提供一个简单的标签,仅供参考:?点击重新加载使用单位存储培养基时标签也可以做编号处理,例如购进100瓶TSB,产品号为11104,其编号为11104-100-1、11104-100-2、...、11104-100-100按照流水号领用培养基,可减少对培养基的盘点,方便管理。培养基的储存条件一般为常温、干燥、密闭,当然不同供应商的存储条件稍有差别,按照标识执行即可。称量后应及时旋紧瓶盖,避免后期存储因空气湿度较大受潮或结块,如出现结块现象,该瓶培养基不可继续使用。培养基开瓶后在称量和存储的过程中会不可避免的吸收空气中的水分,而水分含量的增加,培养基的微生物负载可能亦随之增大,进而影响到干粉培养基的质量。所以干粉培养基在开瓶后,应定期进行复检,并对复检结果进行统计分析,确定开瓶有效期。如果实验室所在地区湿度较大(相对湿度高于75%),开瓶后的培养基应采取适宜的保护措施,如果数量较少,可放置于干燥器内,如果数量较多,可使用封口膜瓶口位置缠绕数匝。5、培养基配制--称量培养基的制备环节,应当严格按照培养基配方制备,在培养基的称量过程中,建议在干爽、无风的区域或者通风柜中进行,这样能够避免培养基吸潮使称量结果不准。应当选择灵敏度较高的称重天平,这样能够保证称量的准确性,同时称量过程中要选择专用的称量匙,避免其他杂质混入培养基中。操作人员应当对称量过程进行详细的记录,记录中应该体现培养基名称、批号、称量数量、具体配制方法、制备人姓名日期、复核人姓名日期等信息,方便后期的溯源调查。6、培养基配制--容器和水配制培养基所用的容器不得影响培养基质量,一般为玻璃容器,培养基配制所用的容器和配套器具应洁净,可用纯化水冲洗玻璃器皿以消除清洁剂和外来物质残留。在大体积配制培养基时,企业也可根据自己的情况采用不锈钢容器,建议专锅专用,且容器应洁净。不建议使用陶瓷或搪瓷容器。培养基用水是培养基制备过程中非常重要的一个物质。不可以使用自来水,自来水中的杂质可能会对检验结果有一定的影响。许多法规在培养基配方中采用蒸馏水作为配制用水,实际上纯化水的洁净程度不差于蒸馏水,甚至更优,所以不必单独制备蒸馏水,直接使用纯化水即可,配制用纯化水应按药典的要求定期进行检测。在制备过程中,可先加入培养基,再将纯化水倒入容器内,同时需要将器具内壁上的培养基粉末一同带到容器中,然后根据说明书的要求进行操作。涉及到大体积配制后要分装的培养基(例如TSA、TSB、FTM等),分装前一定要将培养基加热至完全溶解,避免后续可能会出现的瓶间差异。7、培养基的灭菌培养基的灭菌过程是影响培养基质量的关键环节。大部分培养基需要高温高压湿热灭菌,但部分选择性培养基由于一些组分不可高温高压灭菌,所以会采用煮沸灭菌,因此灭菌前应阅读培养基使用说明。?点击重新加载培养基灭菌应采用验证过的灭菌程序,灭菌参数应通过无菌性试验和促生长试验的验证。此外,对高温高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证,以保证其在一定装载方式下的正常热分布。温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基过度加热,过度灭菌会影响绝大多数的细菌和真菌培养基的促生长质量。灭菌器中培养基的容积和装载方式也会影响加热的速度。因此应根据灭菌培养基的特性,进行全面的灭菌程序验证。煮沸灭菌的培养基建议现配现用,高温高压湿热灭菌的培养基可以大量配制,在适宜的条件下储存,固体培养基灭菌后只允许一次再融化。灭菌后培养基的储存效期应进行验证。制备好的培养基,使用前需进行pH的监测。对于固体培养基pH监测,可使用平头电极或固液两用电极。
培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。 按所用原料不同,可分为两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基,大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在2~6。C的冰箱内。 常见培养基有: 1、细菌培养基 配方一 牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏0.3克 ,蛋白胨1.0克,氯化钠 0.5克,琼脂1.5克, 水 100毫升 在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二 马铃薯培养基 取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。 配方三 根瘤菌培养基 葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克 碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克 酵母粉 0.4克 琼脂 20克 水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升 先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。 2、放线菌培养基 配方一 淀粉琼脂培养基(高氏培养基) 可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克 磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克 硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克 琼脂 2克 水 100毫升 先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH值到7.2~7.4,分装后灭菌,备用。 配方二 面粉琼脂培养基 面粉 60克 琼脂 20克 水 1000毫升 把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟。另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。 3、真菌培养基 配方一 萨市(Sabouraud’s)培养基 蛋白胨 10克 琼脂 20克 麦芽糖 40克 水 1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。 本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。 配方二 马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分。在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。 把这培养基的pH值调到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 配方三 黄豆芽汁培养基 黄豆芽 100克 琼脂 15克 葡萄糖 20克 水 1000毫升 洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟。用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用。 把这培养基的pH值调到7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌。 配方四 豌豆琼脂培养基 豌豆 80粒 琼脂 5克 水 200毫升 取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用。 4、食用菌菌种培养基 配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基 20%马铃薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 琼脂 18克 把马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定。 配方二 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 葡萄糖 20克 维生素 10毫克 琼脂 18克 先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。分装,灭菌,备用。该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 5.烟草的培养基 在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽 CTK/IAA低时,分化根 CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化
培养基是发酵过程或动植物细胞大量培养中供微生物或动、植物细胞的生长、繁殖或积累代谢产物,以合成生物化工产品所必需的营养基质。培养基的选择应根据微生物生长代谢活动的需要,并有利于合成细胞物质和生物化工产品的生成。培养基中主要含有水、碳源(能源)、氮源、矿物质,有的还需要提供维生素等。在酶反应过程中,原料液中被转化的物质亦即酶的作用物,亦可称为底物。 培养基的选择一般尽可能要满足以下要求:①单位质量基质,应能产生最大量的生物物质或生物化工产品,并且要使所产生的生物物质或生物化工产品在发酵液中的浓度最高,产率最高,使不需要的其他代谢产物的生成,限在最低范围内。②培养基成本低、质量均一并随时保证提供使用。③培养基使用时,对通气、搅拌、后处理和三废治理等方面所产生的问题最少。 分类 按其组成成分分成三类:①天然培养基,全由天然产物组成,例如含淀粉、黄豆饼粉等天然物质;②复合培养基,由部分天然产物和部分已知成分的化合物组成,例如其中的氮源既有天然物质黄豆饼粉,又有合成化合物硫酸铵;③合成培养基,全由已知成分的化合物所组成,例如以纯的碳水化合物或碳氢化合物为碳源,以铵盐为氮源。天然培养基和复合培养基常用于工业生产,而合成培养基(偶尔包括复合培养基)则常用于试验。 按用途分类包括:①基础培养基,营养需求相似的一些生物其所需的营养物大体相同,因之可配制一种适合于它们共同需要的含有基本营养成分的基础培养基;②增殖培养基,又称丰富培养基,常用于菌种选育方面。它是由基础培养基,再加入特殊的营养物质,以使某种差异型微生物在其中迅速生长繁殖;③鉴别培养基,即在培养基中加入某种试剂,从而在培养过程中表现出特殊反应,用以鉴别不同类型的微生物,如无菌试验用的酚红肉汤培养基,就是一种鉴别培养基;④选择培养基,根据某些微生物具有特殊营养要求,或对某些化学物质具有抗性而设计的,例如在配方中加入某种化学药物,以限制对敏感菌的生长繁殖,而将对其不敏感的所需的微生物分离出来。如在分离酵母菌时,可加入青霉素、链霉素等以抑制细菌的生长。 培养基还可根据其形态分成液体或固体培养基。例如用于无菌试验的肉汤培养基为液体培养基。用于培养青霉菌孢子的小米或大米为固体培养基,在培养基中加入适量琼脂而形成的凝胶培养基,也称固体培养基。 成分 培养基的成分包括:碳源、氮源、矿物质,以及其他必需物质。这些成分通过生物反应过程,生成生物物质、生物化工产品,并放出CO2、H2O和热量。 培养基的成分还可以由发酵过程中所需的元素出发,如C、H、O、N、S、P、Mg、K等。此外,必要时还有一些需要量很少的微量元素,如Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo、B等。在发酵过程中某些生物本身不能合成的物质,如氨基酸、维生素或核苷酸等,必要时亦作为营养物质加入到培养基中。 碳源 具有双重作用。生物在产生生物物质或生物化工产品过程中,它不仅为其提供碳源,也为其提供能源。碳水化合物是微生物发酵中的主要碳源,包括淀粉、葡萄糖、蔗糖和乳糖等。此外,植物油如豆油、棉籽油、玉米油等亦常被应用作为碳源。这类油常与表面活性剂合用,以消除发酵过程中所产生的泡沫。甲醇可用以生产单细胞蛋白。正烷烃类可用以生产有机酸、氨基酸和维生素等,甚至二氧化碳也可作为光合细菌的碳源。 氮源 包括无机氮源和有机氮源。无机氮源包括氨、铵盐及硝酸盐等,它们在被应用时应注意发酵中pH的变化;有机氮源包括氨基酸、蛋白质及尿素等,有机氮源的加入往往加快了生物的生长。因考虑到成本因素,一些有机氮源,如黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、鱼粉、酵母粉等常被选用。 培养基的组成中除了水分外,碳源和氮源的含量是最大的。碳源含量一般不超过10%,氮源含量较低,一般碳氮比应为3[
配制后质量控制(1)培养基外观情况:包括颜色、透明度、有无沉淀和凝固。如发现培养基表面有裂纹或与培养皿的边缘分离,说明培养基有脱水现象,必须丢弃。(2)无菌试验:每一批配好的培养基均须进行无菌试验。先灭菌后分装的培养基,可采用抽样方法试验,少于100个样本通常选取5%~10%的量,如果配制大量培养基,则任意选取10 个培养基;无菌分装培养基则需全部做无菌试验。样本在35 ℃ 或其他适宜的温度下隔夜培养,如培养基含有血液,则需再置于室温1天,以检查嗜冷菌。选择性培养基因含有抑制物质,能抑制许多微生物,因此,可加入10倍量的无菌液体培养基,稀释抑制物质,以利于检出污染菌。即使做过无菌试验,接种时,也要检查每个平板上的可见菌落。(3)性能测试:每一批新制或新购的培养基,使用前均须取已知性质的库存菌种进行性能测试。培养基按目的不同可分为增菌培养基、分离培养基和鉴定培养基。①增菌培养基:接种少量难以生长的细菌,在一定时间内观察增菌情况,细菌能生长的最小接种浓度越小,说明增菌培养基性能愈好。②分离培养基:要求目的菌生长良好,非目的菌被抑制。一般要求生长的目的菌接种量不可过多,较好的方法是将测试菌调成0.5麦氏浊度的菌悬液,再用0.001ml的标准接种环涂划在培养基上,观察菌落生长。③鉴定培养基:应选择具有典型特征的菌株作性能试验。如三糖铁琼脂,须用弗劳地枸橼酸杆菌、福氏志贺菌及铜绿假单胞菌3种菌分别接种3支培养基,若反应结果为斜面产酸/高层产酸、硫化氢阳性,斜面产碱/高层产酸,斜面产碱/高层产碱,质量才算合格。
大肠杆菌显色培养基 E.Coli Chromogenic Medium 大肠菌群显色培养基 Coliform Chromogenic Medium 大肠杆菌/大肠菌群显色培养基 E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 细菌总数显色培养基 Total Genes Chromogenic Medium O157显色培养基 O157 Chromogenic Medium 沙门氏菌显色培养基 Salmonella Chromogenic Medium 李氏菌显色培养基 Listera Chromogenic Medium 金黄色葡萄球显色培养基 Staphylococcus Chromogenic Medium 霉菌和酵母菌显色培养基 Mould and Yeast Chromogenic Medium 弧菌显色培养基 Vibrio Chromogenic Medium 坂崎杆菌显色培养基 Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium 平板计数琼脂(PCA) Plate Count Agar 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST) Lauryl Sulfate Tryptose Broth 4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷 (MUG) 煌绿乳糖胆盐肉汤 (BGLB) Brilliant Green Lactose Bile Brogh EC 肉汤 E.Coli Broth 新生霉素A 伊红美蓝琼脂 (EMB) Eosin-Methylene Blue Agar 营养肉汤 (NB) Nutrient Broth 营养琼脂 (NA) Nutrient Agar 乳糖胆盐发酵培养基 Lactose Bile Broth 乳糖复发酵培养基 Lactose Broth 去氧胆酸盐琼脂 Desoxycholate Lactose Agar MR-VP培养基 Methyl Red Voges Proskauer Broth 结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar 西蒙氏枸橼酸盐琼脂 Simmons Citrate Agar 肠道菌计数琼脂 (VRBDA) Violet Red Bile Dextrose Agar 菌种保存培养基 Strain Store Medium 品红亚硫酸钠琼脂 Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar 乳糖蛋白胨培养液 Lactose Peptone Broth Cary-Blair 氏运送培养基 Cary-Blair Transport Medium 山梨酸麦康凯琼脂基础 Sorbitol Maconkey Agar Base 噻孢霉素 A 1%亚碲酸钾溶液 亮绿乳糖培养基 Brilliant Green Lactose Medium 肠道菌增菌肉汤(EE) Enterobacteria Enrichment Broth TTC营养琼脂 TTC Nutrient Agar LB肉汤 LB Broth LB营养琼脂 LB Nutrient Agar 苯丙氨酸脱氨酶培养基 Phenylalanine Deaminase Agar Medium 哥伦比亚血琼脂基础 Columbia Blood Agar Base 2216E琼脂 2216E Agar 肠球菌琼脂(胆盐-七叶苷-叠氮钠琼脂) Enterococcosel Agar(Bile Esculin Azide Agar) BDS培养基 BDS Medium 葡萄糖琼脂 Dextrose Agar Andrade氏糖类肉汤 Andrade's Carbohydrate Broth Koser氏枸椽酸盐肉汤 Koser Citrate Sodium Broth Endo 培养基 Endo Agar 缓冲MUG琼脂 Buffer MUG Agar 乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂 LMG Agar 茜素-β-半乳糖苷琼脂 Aliz-gal Agar Tergitol-7 琼脂 Tergitol-7 Agar TTC 溶液(0.125%) TTC Solution(0.125%) 胰蛋白胨大豆肉汤 Trypticase (Tryptic) Soy Broth Baird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base 亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion 胰蛋白胨大豆肉汤 Trypticase (Tryptic) Soy Broth Baird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base 亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion 兔血浆 Freeze-Dried Plasma DNA酶琼脂 DNase Agar 7.5%氯化钠肉汤 7.5% Sodium Chloride Broth 普通肉汤培养基 Broth Medium 亚碲酸钠肉汤培养基基础 Sodium Tellurite Broth Base 葡萄球菌增菌肉汤 Staphylococcus Enrichment Broth 葡萄球菌选择性琼脂 Staphylococcus Selective Agar EEM培养基
一、目的要求 通过对分离真菌用的马丁氏(Martin)培养基配制,掌握对选择培养基的配制方法,并明确选择的原理。 二、基本原理 马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4•7H2O、孟加拉红(玫瑰红,Rose Bengal)和链霉素等组成。其中葡萄糖主要作为碳源,蛋白胨主要作为氮源,KH2PO4和MgSO4•7H2O作为无机盐,为微生物提供钾、磷和镁离子。而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂,对真菌无抑制作用,因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长,从而达到分离真菌的目的。 马丁氏培养基配方如下: KH2PO4 1g MgSO4•7H2O 0.5g 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 自然 此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3.3ml。临用时每100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml。 三、器材 KH2PO4,MgSO4•7H2O,蛋白胨,葡萄糖,琼脂,孟加拉红,链霉素; 试管,三角烧瓶,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅等。 四、操作步骤 1.称量和溶化 按培养基配方,准确称取各成分,并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后,补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液,在1000ml培养液中加入1%的孟加拉红溶液3.3ml,混匀后,加入琼脂加热溶化(方法同实验十九)。 2.分装、加塞、包扎、灭菌,无菌检查与实验十九相同。 3.链霉素的加入 由于链霉素受热容易分解,所以临用时,将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液,在100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml,使每毫升培养基中含链霉素30μg。
大肠杆菌显色培养基E.Coli Chromogenic Medium大肠菌群显色培养基Coliform Chromogenic Medium大肠杆菌/大肠菌群显色培养基E.Coli/Coliform Chromogenic Medium细菌总数显色培养基Total Genes Chromogenic Medium O157显色培养基O157 Chromogenic Medium沙门氏菌显色培养基Salmonella Chromogenic Medium李氏菌显色培养基Listera Chromogenic Medium金黄色葡萄球显色培养基Staphylococcus Chromogenic Medium霉菌和酵母菌显色培养基Mould and Yeast Chromogenic Medium弧菌显色培养基Vibrio Chromogenic Medium坂崎杆菌显色培养基Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium平板计数琼脂(PCA)Plate Count Agar月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST) Lauryl Sulfate Tryptose Broth4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)煌绿乳糖胆盐肉汤 (BGLB) Brilliant Green Lactose Bile BroghEC 肉汤 E.Coli Broth新生霉素A伊红美蓝琼脂 (EMB)Eosin-Methylene Blue Agar营养肉汤 (NB) Nutrient Broth营养琼脂 (NA) Nutrient Agar乳糖胆盐发酵培养基 Lactose Bile Broth乳糖复发酵培养基 Lactose Broth去氧胆酸盐琼脂 Desoxycholate Lactose AgarMR-VP培养基 Methyl Red Voges Proskauer Broth结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar西蒙氏枸橼酸盐琼脂 Simmons Citrate Agar肠道菌计数琼脂 (VRBDA) Violet Red Bile Dextrose Agar 菌种保存培养基 Strain Store Medium品红亚硫酸钠琼脂 Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar乳糖蛋白胨培养液 Lactose Peptone BrothCary-Blair 氏运送培养基 Cary-Blair Transport Medium山梨酸麦康凯琼脂基础 Sorbitol Maconkey Agar Base噻孢霉素 A1%亚碲酸钾溶液亮绿乳糖培养基 Brilliant Green Lactose Medium肠道菌增菌肉汤(EE) Enterobacteria Enrichment BrothTTC营养琼脂 TTC Nutrient AgarLB肉汤 LB BrothLB营养琼脂 LB Nutrient Agar苯丙氨酸脱氨酶培养基 Phenylalanine Deaminase Agar Medium哥伦比亚血琼脂基础Columbia Blood Agar Base2216E琼脂2216E Agar肠球菌琼脂(胆盐-七叶苷-叠氮钠琼脂)Enterococcosel Agar(Bile Esculin Azide Agar)BDS培养基BDS Medium葡萄糖琼脂Dextrose AgarAndrade氏糖类肉汤Andrade's Carbohydrate BrothKoser氏枸椽酸盐肉汤Koser Citrate Sodium BrothEndo 培养基Endo Agar缓冲MUG琼脂Buffer MUG Agar乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂LMG Agar茜素-β-半乳糖苷琼脂Aliz-gal AgarTergitol-7 琼脂Tergitol-7 AgarTTC 溶液(0.125%)TTC Solution(0.125%)胰蛋白胨大豆肉汤 Trypticase (Tryptic) Soy BrothBaird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion胰蛋白胨大豆肉汤 Trypticase (Tryptic) Soy BrothBaird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion兔血浆 Freeze-Dried PlasmaDNA酶琼脂 DNase Agar7.5%氯化钠肉汤 7.5% Sodium Chloride Broth普通肉汤培养基 Broth Medium亚碲酸钠肉汤培养基基础 Sodium Tellurite Broth Base葡萄球菌增菌肉汤 Staphylococcus Enrichment Broth葡萄球菌选择性琼脂 Staphylococcus Selective AgarEEM培养基EEM medium甘露醇高盐琼脂 Manitol Salt Agar肠毒素产毒培养基TMP琼脂培养基缓冲蛋白胨水(BPW) Buffered Peptone Water亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) Selenite Cystine Broth四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB)Tetrathionate Broth Base胆硫乳琼脂(DHL) Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar三糖铁琼脂(TSI) Triple Sugar Iron AgarSS 琼脂 Salmonella Shigella Agar亚硫酸铋琼脂(BS) Bismuth Sulfite Agar亚利桑那菌琼脂(SA) Salmonella Arizona Agar氯化镁孔雀绿肉汤(MM,RV Medium) Rappaport-Vassiliadis MdeiumHE 琼脂(HE) Hekton Enteric Agar赖氨酸脱羧酶培养基 Lysine-decarboxylase Test Broth尿素酶琼脂基础 Urease Agar Base 40%尿素水 40%Urea WaterV-P 半固体琼脂 Voges-Proskauer Semisolid Agar吲哚培养基 Indole MediumKovacs氏靛基质试剂盒硝酸盐氰化钾培养基基础 Nitrate(KCN) Broth Base丙二酸钠培养基 Malonate Broth卫矛醇半固体琼脂 Dulcitol Semisolid AgarGN 增菌液 Gram Negative Enrichment BrothXLD 培养基 Xylose Lysine Desoxycholate MediumWS 琼脂 WS Salmonella Agar葡萄糖铵培养基 Ammonium Dextrose Medium葡萄糖半固体培养基 Dextrose Semisolid Medium动力-吲哚-尿素培养基基础(MIU) Motility Indol Urea Medium Base亚硒酸盐增菌液(SF) Selenite Enrichment Medium醋酸铅培养基 Lead Acetate MediumSIM培养基 Hydrogen Sulfide Indole Motility Medium乳糖肉汤 Lactose Broth
(一)按培养基用途分 1.营养培养基。含微生物生长繁殖所需基本营养物质的培养基常用以牛肉浸粉、蛋白胨、氯化钠为基础,也可增加所需的其他营养物质,如血液等。琼脂是培养基中常用的凝固剂,以支撑细菌的生长形态形成菌落,它对细菌无营养价值。 2.增菌运送培养基。将可疑标本接种于运送培养基中。增菌培养基为液体,是扩大培养的手段,也是细菌生化反应的主要培养方法。 3.选择鉴别培养基。在培养基中加入指示剂或化学物质,抑制某些细菌生长而有助于需要的细菌生长,或通过指示剂颜色变化分离鉴别细菌。 4.特殊培养基。包括厌氧培养基及其他(抗生素效价测定和药敏试验)培养基。 (二)按培养基物理性状分 1.液体培养基。将营养物质溶解于液体中,调整pH灭菌后即为液体培养基。常用于细菌增菌或观察细菌的生化反应。 2.固体培养基。液体培养基中加入13~15g/L琼脂,溶化后凝固成固体培养基。制成平皿,用于分离培养、活菌计数、选择培养、药敏试验。固体培养基可在试管中制成斜面用于菌种传代和短期保存。 3.半固体培养基。液体培养基中加入2~5g/L琼脂。用于细菌动力观察和菌种保存
1.固体培养基标本或液体培养物划线接种到固体培养基表面后,单个细菌经分裂繁殖可形成一个肉眼可见的细菌集团,称为菌落(colony)。(1)菌落的形态特征:大小、形状(露滴状、圆形、菜花样、不规则等)、突起或扁平、凹陷、边缘(光滑、波形、锯齿状、卷发状等)、颜色(红色、灰白色、黑色、绿色、无色、黄色等)、表面(光滑、粗糙等)、透明度(不透明、半透明、透明等)和粘度等。据细菌菌落表面特征不同,可将菌落分为3型: ①光滑型菌落(S型菌落):菌落表面光滑、湿润、边缘整齐,新分离的细菌大多呈光滑型菌落。②粗糙型菌落(R型菌落):菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状,边缘大多不整齐。R型菌落多为S型细菌变异失去菌体表面多糖或蛋白质形成。R型细菌抗原不完整,毒力和抗吞噬能力都比S型细菌弱。但也有少数细菌新分离的毒力株就是R型,如炭疽孢杆菌、结核分枝菌等。③粘液型菌落(M型菌落):菌落粘稠、有光泽、似水珠样。多见于厚荚膜或丰富粘液层的细菌、结核杆菌等。(2)菌落溶血特征:菌落溶血有下列3种情况。①α溶血:又称草绿色溶血,菌落周围培养基出现1~2mm的草绿色环,为高铁血红蛋白所致;②β溶血:又称完全溶血,菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血环,是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致;③γ溶血:即不溶血,菌落周围的培养基没有变化,红细胞没有溶解或缺损。(3)色素:有些细菌产生水溶性色素,使菌落和周围的培养基出现绿色、金黄色、白色、橙色、柠檬色等颜色,产生的色素有水溶性或脂溶性。(4)气味:某些细菌在培养基中生长繁殖后可产生特殊气味,如铜绿假单胞菌(生姜气味)、变形杆菌(巧克力烧焦的臭味)、厌氧梭菌(腐败的恶臭味)、白色假丝酵母菌(酵母味)和放线菌(泥土味)等。
微生物培养基在资料上有很多类:http://wenku.baidu.com/view/8b6d9262caaedd3383c4d3ee.html 同一类微生物又有不同培养基供选择:http://www.hopebiol.com/medium.asp。那用选择培养在培养分离各种细菌的时候怎么选用培养基配方呢?例如培养高盐浓度下球衣细菌的选择培养基?
用于沙门氏菌属的选择性分离培养。该培养基中成分对眼睛、皮肤及呼吸道系统均有毒害作用。
灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物,灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种,即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内 蛋白质凝固变性,从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关,含水量越高,其凝固所需要的温度越低。在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大,因为在湿热情况下,菌体吸收水分,使蛋白质易于凝固;同时湿热的穿透力强,可增加灭菌效力。 2.1 湿热灭菌 煮沸消毒法 :注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注射器等用纱布包好,然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约15~30min,对于芽孢则需煮沸约1~2h。 高压蒸汽灭菌法:高压蒸汽灭菌用途广,效率高,是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时,水蒸气的温度升高到121℃,经15~30min,可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。 2.2 操作方法和注意事项 加水:打开灭菌锅盖,向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水,以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够,防止灭菌过程中干锅。 装料、加盖:灭菌材料放好后,关闭灭菌器盖,采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋,使蒸汽锅密闭,勿使漏气。 排气:打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热,待水煮沸后,水蒸气和空气一起从排气孔排出,当有大量蒸汽排出时,维持5min,使锅内冷空气完全排净。 升压、保压和降压:当锅内冷空气排净时,即可关闭排气阀,压力开始上升。当压力上升至所需压力时,控制电压以维持恒温,并开始计算灭菌时间,待时间达到要求(一般培养基和器皿灭菌控制在121℃,20min)后,停止加热,待压力降至接近“0”时,打开放气阀。注意不能过早过急地排气,否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 灭菌后的培养基空白培养:灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养,经24h培养无菌生长,可保存备用;斜面培养基取出后,立即摆成斜面后空白培养;半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后,空白培养。 2.2 干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后,放入电烘箱中烘烤,即加热至160~170℃维持1~2h。 干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品,液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。 2.2.1 灭菌前的准备 玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞,以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下:平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内;三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸,用棉绳以活结扎紧,以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染;吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心,轻轻捅入管口,松紧必须适中,管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去,灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌,也可用纸条斜着从吸管尖端包起,逐步向上卷,头端的纸卷捏扁并拧几下,再将包好的吸管集中灭菌。 2.2.2 干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内,注意不要摆放太密,以免妨碍空气流通;不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160~170℃并恒温1~2h,注意勿使温度过高,超过170℃,器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿,温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60~70℃时方可打开箱门,取出物品,否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。 用此法灭菌时,绝不能用油、蜡纸包扎物品。 2.2.3 火焰灭菌 直接用火焰灼烧灭菌,迅速彻底。对于接种环,接种针或其它金属用具,可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外,在接种过程中,试管或三角瓶口,也采用通过火焰而达到灭菌的目的。
DM培养基PP:DM培养基是一种好氧反硝化培养基,该培养基中在为好氧反硝化菌提供丰富的碳源及氮源的同时,也提供了多种微量元素。该培养基还具用良好缓冲效果。具体配方如下:DM(g/L):NaB2BHPOB4B •7HB2BO 7.9;KHB2BPOB4B 1.5;NHB4BCl 0.3;微量元素溶液 1mL;pH值 7.2。微量元素溶液( g/L ) : EDTA 50.0 ; ZnSOB4B 2.2 ; CaClB2B 5.5 ;MnClB2B • 4HB2BO 5.06 ; FeSOB4B • 7HB2BO 5.0 ; (NHB4B)B6BMo7OB2B • 4HB2BO 1.1 ;CuSOB4B•5HB2BO 1.57;CoClB2B•6HB2BO 1.61;pH值 6.0。2.FM培养基PP:FM培养基是好氧反硝化菌的富集培养基,是在牛肉膏及蛋白胨培养基基础上添加硝酸钾配置而成。对好氧反硝化菌具有富集及诱导好氧反硝化酶表达的效果。具体配方如下:FM(g/L):牛肉膏1.0;蛋白胨5.0;KNOB3B 1.0;pH值 7.2。
01糖发酵管:包括蔗糖发酵管,乳糖发酵管,水杨苷发酵管等等02 ONPG培养基:现常配制成现成的生化管03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸-苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液 42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN-1培养基 70 嗜盐性试验培养基
01糖发酵管:包括蔗糖发酵管,乳糖发酵管,水杨苷发酵管等等02 ONPG培养基:现常配制成现成的生化管03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸-苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液 42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN-1培养基 70 嗜盐性试验培养基
老师们,我看国标里MRS好像更适用于测乳杆菌,想知道未改良的MRS培养基对于嗜热链球菌和双歧杆菌也可以有检测效果吗?实验室如果要检测乳酸菌活菌数的话是否需要另外购买莫匹罗星锂盐、半胱氨酸盐酸盐以及MC培养基呢?有没有这方面有经验的老师可以解答一下
培养基灭菌是否彻底,影响因素很多,除了培养基内杂菌的种类和数量,灭菌温度的高低,时间长短外,还取决于:1. 营养成分的保持湿热灭菌时,微生物被杀死的同时,培养基的营养成分也遭到了一定的破坏,特别是氨基酸和维生素。如在121℃,仅20min,就有59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏,蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏。在热的作用下某些营养成分还可能因受热而相互之间发生反应,造成培养基中原有营养成分的数量变化,因而影响培养基质量。2. 微生物的耐热性细菌芽孢的热阻较大,灭菌所需要的时间取决于把细菌芽孢减少到所规定数目的时间。3. pH值pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值介于6.0~8.0时,微生物最不易死亡。pH6.0时,微生物比较容易死亡,此时H+很容易渗入微生物的细胞,从而改变细胞的生理反应,促使其死亡。所以培养基的pH越低,所需的时间也越短。4. 培养基成分油脂、糖类及蛋白质等组成的高浓度有机物会包于细胞的周围形式一层薄膜、影响热的传导。而高浓度的盐类、色素则削弱其耐热性,灭菌较易。例如:大肠杆菌在水中加热至60-65℃便死亡,在10%糖液中需70℃加热4-6分钟才死亡,在30%糖液中需30分钟才死亡。一般糖类含量较多的时候最好选用115℃,30分钟;一般的培养基可选择121℃20分钟。5. 泡沫泡沫中的空气形成隔热层,使热量难以渗透进去,杀死其中的杂菌。6. 颗粒颗粒小,容易灭菌,颗粒大,则难灭菌。对于含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基,可用粗滤的方法(不应影响培养基质量)予以除去,培养基结块会造成培养基灭菌的不彻底。7. 灭菌锅内空气是否排净这个是影响灭菌是温度和压力比例关系的要点,同样达到了相同的压力的情况下,如果空气未能排净,也就是说不是纯蒸汽灭菌,此时的温度不一定能达到目的要求,会严重影响灭菌效果。
我们刚开始做粪性链球菌的培养~~请问下~哪位知道Pfrizer选择性肠球菌琼脂培养基倒入皿盘的体积呀~要倒多少合适~~谢谢~~急~
一、实验目的1、了解并掌握培养基的配制、分装方法;2、掌握各种实验室灭菌方法及技术。二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异,但从营养角度分析,培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外,培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质,是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98~100℃下融化,于45℃以下凝固。但多次反复融化,其凝固性降低。任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌,以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。三、实验材料 1、器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 2、药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 3、流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 四、实验步骤 1 培养基的制备 1.1 称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品,放入适当大小的烧杯中,琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。 1.2 溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中,在放有石棉网的电炉上小火加热,并用玻棒搅拌,以防液体溢出。待各种药品完全溶解后,停止加热,补足水分。如果配方中有淀粉,则先将淀粉用少量冷水调成糊状,并在火上加热搅拌,然后加足水分及其它原料,待完全溶化后,补足水分。 1.3 调节pH 根据培养基对pH的要求,用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 1.4 溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后,置电炉上一面搅拌一面加热,直至琼脂完全融化后才能停止搅拌,并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 1.5 过滤分装 分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口,以免浸湿棉塞,引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5,半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜;分装三角瓶,其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 1.6 包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽,再包上一层防潮纸,用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称,制备组别和姓名、日期等。 1.7 灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min,以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后,如需要作斜面固体培养基,则灭菌后立即摆放成斜面,斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜;半固体培养基灭菌后,垂直冷凝成半固体深层琼脂。1.8 倒平板 将需倒平板的培养基,于水浴锅中冷却到45~50℃,立刻倒平板。2、灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物,灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种,即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内 蛋白质凝固变性,从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关,含水量越高,其凝固所需要的温度越低。在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大,因为在湿热情况下,菌体吸收水分,使蛋白质易于凝固;同时湿热的穿透力强,可增加灭菌效力。 2.1 湿热灭菌 煮沸消毒法 :注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注射器等用纱布包好,然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约15~30min,对于芽孢则需煮沸约1~2h。 高压蒸汽灭菌法:高压蒸汽灭菌用途广,效率高,是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时,水蒸气的温度升高到121℃,经15~30min,可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。 2.2 操作方法和注意事项 加水:打开灭菌锅盖,向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水,以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够,防止灭菌过程中干锅。 装料、加盖:灭菌材料放好后,关闭灭菌器盖,采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋,使蒸汽锅密闭,勿使漏气。 排气:打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热,待水煮沸后,水蒸气和空气一起从排气孔排出,当有大量蒸汽排出时,维持5min,使锅内冷空气完全排净。 升压、保压和降压:当锅内冷空气排净时,即可关闭排气阀,压力开始上升。当压力上升至所需压力时,控制电压以维持恒温,并开始计算灭菌时间,待时间达到要求(一般培养基和器皿灭菌控制在121℃,20min)后,停止加热,待压力降至接近“0”时,打开放气阀。注意不能过早过急地排气,否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 灭菌后的培养基空白培养:灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养,经24h培养无菌生长,可保存备用;斜面培养基取出后,立即摆成斜面后空白培养;半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后,空白培养。 2.2 干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后,放入电烘箱中烘烤,即加热至160~170℃维持1~2h。 干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品,液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。 2.2.1 灭菌前的准备 玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞,以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下:平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内;三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸,用棉绳以活结扎紧,以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染;吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心,轻轻捅入管口,松紧必须适中,管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去,灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌,也可用纸条斜着从吸管尖端包起,逐步向上卷,头端的纸卷捏扁并拧几下,再将包好的吸管集中灭菌。 2.2.2 干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内,注意不要摆放太密,以免妨碍空气流通;不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160~170℃并恒温1~2h,注意勿使温度过高,超过170℃,器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿,温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60~70℃时方可打开箱门,取出物品,否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。 用此法灭菌时,绝不能用油、蜡纸包扎物品。 [/siz
蜡样芽孢杆菌显色培养基Bacillus cereus Chromogenic Medium用途:用于蜡样芽孢杆菌的显色培养,蜡样芽孢杆菌显蓝绿色蜡样芽孢杆菌显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基,用于食品、水、乳制品和肉制品中蜡样芽孢杆菌的快速检测。蜡样芽孢杆菌显蓝绿色且菌落比较大,苏云金芽孢杆菌显蓝绿色,李斯特氏菌显深蓝色,菌落比较小,其它菌显黄色或无色,革兰氏阴性菌被抑制。 成份 (g/L) 特殊营养物质41.9 显色剂 0.5 抑菌成份 0.6琼脂 15.0 pH 7.0 ± 0.2 25 ℃ 此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。 注意 此培养基仅供实验室使用。 用法 称取本品 11.6g 加入200ml蒸馏水,加热溶解并不停搅拌,煮沸不要超过1分钟。冷却至45-50℃时,倾入无菌平皿,备用。 贮存 制备好的平板可保存 2-5 天,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处, 保存温度 2-8 ℃,注意避光保存。 失效 干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。 操作步骤 1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液; 2、样品液在30±1℃增菌培养18-24小时; 3、取增菌液划线接种于蜡样芽孢杆菌显色培养基平板上,30±1℃培养18~24h。蜡样芽孢杆菌典型菌落为蓝绿色且菌落比较大。若24小时没有出现典型菌落,可延长培养至48小时。 4、对可疑蜡样芽孢杆菌可划线接种到营养琼脂平板上,30±1℃培养18-24小时,挑取单菌落做蜡样芽孢杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装SHBG09 7种x2套/盒*5盒)
培养基灭菌是否彻底,影响因素很多,除了培养基内杂菌的种类和数量,灭菌温度的高低,时间长短外,还取决于:1. 营养成分的保持湿热灭菌时,微生物被杀死的同时,培养基的营养成分也遭到了一定的破坏,特别是氨基酸和维生素。如在121℃,仅20min,就有59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏,蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏。在热的作用下某些营养成分还可能因受热而相互之间发生反应,造成培养基中原有营养成分的数量变化,因而影响培养基质量。2. 微生物的耐热性细菌芽孢的热阻较大,灭菌所需要的时间取决于把细菌芽孢减少到所规定数目的时间。3. pH值pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值介于6.0~8.0时,微生物最不易死亡。pH6.0时,微生物比较容易死亡,此时H+很容易渗入微生物的细胞,从而改变细胞的生理反应,促使其死亡。所以培养基的pH越低,所需的时间也越短。4. 培养基成分油脂、糖类及蛋白质等组成的高浓度有机物会包于细胞的周围形式一层薄膜、影响热的传导。而高浓度的盐类、色素则削弱其耐热性,灭菌较易。例如:大肠杆菌在水中加热至60-65℃便死亡,在10%糖液中需70℃加热4-6分钟才死亡,在30%糖液中需30分钟才死亡。一般糖类含量较多的时候最好选用115℃,30分钟;一般的培养基可选择121℃20分钟。5. 泡沫泡沫中的空气形成隔热层,使热量难以渗透进去,杀死其中的杂菌。6. 颗粒颗粒小,容易灭菌,颗粒大,则难灭菌。对于含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基,可用粗滤的方法(不应影响培养基质量)予以除去,培养基结块会造成培养基灭菌的不彻底。7. 灭菌锅内空气是否排净这个是影响灭菌是温度和压力比例关系的要点,同样达到了相同的压力的情况下,如果空气未能排净,也就是说不是纯蒸汽灭菌,此时的温度不一定能达到目的要求,会严重影响灭菌效果。
微生物常用培养基中英文对照一、显色培养基:大肠杆菌显色培养基 E.Coli Chromogenic Medium大肠菌群显色培养基 Coliform Chromogenic Medium大肠杆菌/大肠菌群显色培养基 E.Coli/Coliform Chromogenic Medium细菌总数显色培养基 Total Genes Chromogenic MediumO157显色培养基 O157 Chromogenic Medium沙门氏菌显色培养基 Salmonella Chromogenic Medium李氏菌显色培养基 Listera Chromogenic Medium金黄色葡萄球显色培养基Staphylococcus Chromogenic Medium霉菌和酵母菌显色培养基 Mould and Yeast Chromogenic Medium弧菌显色培养基Vibrio Chromogenic Medium坂崎杆菌显色培养基Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium二、常用检测培养基:平板计数琼脂(PCA) Plate Count Agar月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST) Lauryl Sulfate Tryptose Broth煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB) Brilliant Green Lactose Bile BrothEC 肉汤 E.Coli Broth伊红美蓝琼脂 (EMB) Eosin-Methylene Blue Agar营养肉汤 (NB) Nutrient Broth营养琼脂 (NA) Nutrient Agar乳糖胆盐发酵培养基 Lactose Bile Broth乳糖发酵培养基 Lactose Broth结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar去氧胆酸盐琼脂 Desoxycholate Lactose Agar肠道菌计数琼脂 (VRBDA) Violet Red Bile Dextrose Agar肠道菌增菌肉汤(EE) Enterobacteria Enrichment Broth7.5%氯化钠肉汤 7.5% Sodium Chloride BrothBaird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base胰蛋白胨大豆肉汤(TSB) Trypticase (Tryptic) Soy Broth胰蛋白胨大豆琼脂(TSA) Tryptose Soya Agar胰月示-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础 (TSC) Tryptose Sulfite Cycloserine Agar Base甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP)Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion缓冲蛋白胨水(BPW) Buffered Peptone Water亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) Selenite Cystine Broth四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB) Tetrathionate Broth Base胆硫乳琼脂(DHL) Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose AgarSS 琼脂 Salmonella Shigella Agar亚硫酸铋琼脂(BS) Bismuth Sulfite Agar亚利桑那菌琼脂(SA) Salmonella Arizona AgarHE 琼脂(HE) Hekton Enteric Agar三糖铁琼脂(TSI) Triple Sugar Iron Agar马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) Potato Dextrose Agar高盐察氏琼脂 Salt Czapek Dox Agar沙氏琼脂培养基 Sabouraud’s Agar孟加拉红培养基 Rose Bengal MediumYPD琼脂Yeast Peptone Dextrose Agar胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base酪蛋白琼脂Casein Agar产芽孢肉汤Sporulation Broth溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基 Glucase Peptone Water Medium李氏菌增菌肉汤(LB1,LB2)基础Listeria Enrichment Broth Base半固体动力培养基Motility Test三、培养基基础:胰蛋白胨Tryptone酪蛋白胨Peptone from Casein植物(大豆)蛋白胨Peptone from soy月示胨Proteose peptone多价蛋白胨Polypeptone特殊蛋白胨Peptone Special牛心浸粉Beef Heart Infusion肝浸粉Liver Infusion牛肉浸粉Beef Extract Powder酵母浸粉Yeast Extract Powder酸水解酪蛋白Casein acid Hydrolysate细菌琼脂粉Bacterial Agar牛胆盐Bile Salt
碱性琼脂 用于霍乱弧菌分离培养蛋白胨10g ,氯化钠5g,牛肉膏3g ,脂20g ,蒸馏水1L 。将前4 种成分混合于水中,加热溶解,校正pH 至8.4 ,分装后121℃ 灭菌15min ,倾注平板。凡急性患有水样便标本做增菌培养的同时,应直接取标本接种到碱性琼脂平板或亚碲酸钾琼脂平板上。置35 ℃ 培养12-16h ,观察结果。霍乱弧菌生长较快,菌落大而扁平,呈青灰色,半透明,光滑湿润。在亚碲酸钾琼脂上菌落呈灰黑色。 各实验室凡自配培养基或商品培养基,在使用前可用标准菌株生长对照,临床实验室可送防疫部门所设立的专门检验机构进行目的菌监测,质量可靠者方可使用。EL-Tor弧菌生长良好;大肠埃希菌ATCC25922 生长抑制。 置4℃ 冰箱,1 周内用完2 碱性胆盐琼脂 用于霍乱弧菌分离培养蛋白胨10g ,牛肉膏5g,氯化纳5 -10g ,琼脂20g,胆盐(牛、猪)2.5g,蒸馏水1L。 将上述成分称量混合于水中加热溶解,校正pH 至8.4 ,分装121 ℃ 灭菌15min ,倾注平板。取粪便标本或增菌培养物1 接种环接种平板,置35 ℃ 温箱培养16-18h 。霍乱弧菌迅速生长,其它细菌生长较缓慢。在16-18h 后,霍乱弧菌的菌落,直径可达2mm左右,呈扁平,青灰色,半透明,光滑湿润,易挑起。其它细菌菌落小而凸起,不透明,或有色素。同碱性琼脂置冰箱,1 周内用完。3 庆大霉素琼脂用于霍乱弧菌分离培养。 蛋白胨10g ,牛肉浸膏3g ,氯化钠g,构椽酸钠10g,无水亚硫酸钠3g ,蔗糖(或白糖)10g ,琼脂15-20g 庆大霉素、多粘菌素B “双抗液”2 ml,蒸馏水1L 。将上述成分(除“双抗液”外)称量混合于水中,加热溶解,校正pH 至8.4 ,分装灭菌121 ℃ 15 min ,待冷却至50 ℃ 后,每100ml内加“双抗液”0.2ml,另加5g / L 亚碲酸钾溶液0.1ml,再倾注平板。最后每毫升培养基内含有庆大霉素0.5U ,多粘菌素B6U 。将粪便标本或增菌培养物划线接种到该平板上,置35 ℃ 培养16-18h。 由于该培养基抑制性强,其它非弧菌科细菌被抑制,而霍乱弧菌生长迅速,16h 菌落可达2mm,菌落青灰色半透明,扁平,光滑湿润。若培养时间长,菌落略黄色、隆起,中心厚而不透明。霍乱弧菌(小川、稻叶)生长良好,培养18-24h 菌落直径2.5-3.0mm;大肠埃希菌和变形杆菌生长抑制。置4 ℃ 冰箱内,1 周内用完。注:(1)该培养基国内有商品出售,多数产品已加入庆大霉素,使用时,应详阅说明书。(2)“双抗液”配制:98ml 工灭菌蒸馏水中加庆大霉素(25 000U / ml)1ml,多粘菌B 或抗敌E ( 300 000U / ml)1ml4 ℃ 冰箱保存,1 月用完。4 四号琼脂用于霍乱弧菌分离培养 蛋白胨10g ,氯化钠5g,牛肉浸膏3g ,亚硫酸钠(无水)3g ,枸椽酸钠10g ,猪胆汁粉5g,十二烷硫酸钠20g,利凡诺(雷佛奴尔)3g ,琼脂粉12g ,庆大霉素亚碲酸钾混合液1ml,蒸馏水1L。将前8种成分放入玻璃或搪瓷容器内(严禁用铝制容器等金属容器),加入蒸馏水,加热溶解混合后,调整至pH8.0 ,然后按12%加入琼脂,煮沸至琼脂溶化后,冷至60 ℃ 左右,按每100ml琼脂加入庆大霉素亚碲酸钾混合液(1ml 40 000U 庆大霉素加79ml蒸馏水混合后,加入0.8g 亚碲酸钾溶解混合即成,每毫升含500U 庆大霉素和10g / L 亚碲酸钾)0.1ml,摇匀,倾注平板。 取待检标本划线接种平板,置35 ℃ 培养过夜。8h 后即可初步观察结果。24h 培养后,霍乱弧菌呈中心黑色、较大而扁平的菌落。配成的培养基呈亮黄色透明;EL-Tor弧菌稻叶型生长良好;EL-Tor弧菌小川型生长良好;大肠埃希菌ATCC25922 抑制生长。注:(1)庆大和亚碲酸钾混合液应新鲜配制并置冰箱保存。(2)雷佛奴尔应避光保存,而且每批均应预试后方可使用。成品培养基应避光保存。