氧化酶试剂用于空肠弯曲菌

1．弯曲菌属的主要特点及分类弯曲菌属(Campylobacter) 是一类呈逗点状或S形的革兰阴性杆菌，广泛分布于动物界，其中有些可引起动物和人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染。目前弯曲菌属共有18个菌种和亚种，引起人类疾病的主要是空肠弯曲菌空肠亚种，其次是胎儿弯曲菌和大肠弯曲菌等。2．细菌特性(1)形态染色 本属细菌为革兰阴性无芽孢的弯曲短杆菌，不易染色，菌体弯曲呈S状或海鸥展翅状等，一端或两端各有一根鞭毛，运动活泼，暗视野显微镜下呈“投标样”运动。(2)培养特性微需氧菌，最适生长环境是含氧气5％、二氧化碳10％、氮气85％；孵育温度通常取决于所需要分离的菌株，在不同的温度下培养基的选择性也不同，通常绝大多数实验室用42℃作为初始分离温度，这一温度对空肠弯曲菌、大肠弯曲菌的生长有利，相反其他菌株在37℃生长良好。营养要求高，在普通培养基上不生长，分离弯曲菌常用的选择性培养基大多含有抗生素(主要为头孢哌酮)，以抑制肠道正常菌群。常用的有含血的Skirrow培养基、头孢哌酮-万古霉素-两性霉素琼脂培养基(CVA)和不含血的碳-头孢哌酮-去氧胆酸盐(CCDA)、碳基选择性培养基(CSM)和半固体动力培养基等。(3)生化反应 氧化酶和触酶阳性，可还原硝酸盐为亚硝酸盐，不分解和不发酵各种糖类，不分解尿素，具体生化反应见表13－1。(4)抵抗力 本属细菌的抵抗力弱，对一般消毒剂敏感，但耐寒，在4℃冰箱或水中可存活达4周。http://www.foodmate.net/file/upload/201106/17/16-11-11-54-510998.jpg注：+，＞90％阳性；-，＜10％阳性；V，可变；ND，未定；W，反应较弱；S，敏感；R，耐药

上传一个检测方法，供大家参考。GB/T 4789.9—1994 食品卫生微生物学检验　空肠弯曲菌检验 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=23839]GB/T 4789.9—1994 食品卫生微生物学检验　空肠弯曲菌检验[/url]

1. 布氏杆菌属布氏杆菌属是一类革兰阴性细小杆菌，牛、羊、猪等动物最易感染。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布氏杆菌病广泛分布世界各地，我国部分地区曾有流行。布氏杆菌属分为羊、牛、猪、鼠、绵羊及犬布氏杆菌6个种，20个生物型。中国流行的主要是羊、牛、猪三种布氏杆菌，其中以羊布氏杆菌病最为多见。布氏杆菌属细菌为非抗酸性，无芽胞，无荚膜，无鞭毛，呈球杆状(见图1)。血琼脂(BAP)上为透明或半透明、光滑且有光泽菌落。此细菌不在麦康凯琼脂上生长。布氏杆菌属细菌尿素阳性，触酶、氧化酶阳性，而吲哚阴性。由于该菌属细菌具有强的传染性，因此一旦怀疑应送往LRN B级参考实验室进行确认。2. 空肠弯曲菌空肠弯曲菌是一种人畜共患病病原菌，可以引起人和动物发生多种疾病，并且是一种食物源性病原菌，认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因。其致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等四个方面，通过分子模拟机制可以引起最严重的并发症一格林一巴利综合征。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病。空肠弯曲菌对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感，但近年发现了不少耐药菌株及多重耐药性菌株。空肠弯曲菌菌体轻度弯曲似逗点状(见图2)。菌体一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽胞。微需氧菌，在含2.5～5%氧和10%CO2的环境中生长最好，在正常大气或无氧环境中均不能生长，最适温度为37～42℃。本菌在普通培养基上难以生长，在凝固血清和血琼脂培养基上培养36小时可见无色半透明毛玻璃样小菌落，单个菌落呈中心凸起，周边不规则，无溶血现象。空肠弯曲生化反应不活泼，不发酵糖类，不分解尿素。可还原硝酸盐，氧化酶和触酶为阳性。能产生微量或不产生硫化氢，甲基红和v-p试验阴性，枸椽酸盐培养基中不生长,在弯曲菌中马尿酸呈阳性反应具有重要鉴定价值。 http://www.biomerieux.com.cn/upload/CLSI_5a_thumb.jpg

黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD），可选择性催化氧化黄嘌呤和次黄嘌呤生成尿酸。有没有做过该酶传感器和对该酶性质了解的朋友？这种酶传感器似乎比较难做？因为：1. XOD活力小，0.67U/mg。2.检测对象次黄嘌呤在水中溶解度小，一般只能配到10^(-4)M级。所以电流响应始终做不出来。相同的方法换成葡萄糖氧化酶效果要好的多。大家多给意见。

海棠果多酚氧化酶活性测定方法？？？谁知道海棠果多酚氧化酶的测定方法，知道的麻烦回下要具体点。

海棠果多酚氧化酶活性测定方法？？？谁知道海棠果多酚氧化酶的测定方法，知道的麻烦回下要具体点。

关松荫的土壤多酚氧化酶测定方法中需要[font=宋体][font=Calibri]pH4.5的[/font][font=宋体]柠檬酸[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]磷酸缓冲液，但是没有具体的配置方法？重铬酸钾的标准也应该取多少量呢，要怎么制定？求大神解答！！！[/font][/font]

求土壤多酚氧化酶的测定方法，我用的是关松荫的那本书上的方法！有做过的帮帮忙！谢谢！

从哪能买到葡萄糖氧化酶？价格便宜的，网上的价格太贵了，我要做试验。谢谢大家！

我通过几种方法制备了葡萄糖氧化酶电极，利用恒压（0.3-0.5V）这PBS溶液中测试葡萄糖响应良好，100mg/dl的糖响应在2uA左右，但将电极放入血液中测试时，响应下降明显，而且有时出现尖峰，同时背景电流就带来很大的干扰，不知道各位达人有没遇到同样的情况。 我在葡萄糖氧化酶电极制备完成后，再固定扩散限制层和生物相容层，效果还是不明显，不知道各位有没试过对葡萄糖氧化酶电极再修饰。

[font=黑体, SimHei][size=15px]食品抗氧化剂是为了阻止或延缓食品氧化而生，是一种提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。[/size][/font] [font=黑体, SimHei][size=15px]抗氧化剂种类较多，抗氧化的作用机理也不尽相同，比较复杂，存在着多种可能性。归纳起来，主要有以下几种：一、是通过抗氧化剂的还原作用，降低食品体系中的氧含量 二、是中断氧化过程中的链式反应，阻止氧化过程进一步进行 三、是破坏、减弱氧化酶的活性，使其不能催化氧化反应的进行 四、是将能催化及引起氧化反应的物质封闭，如络合能催化氧化反应的金属离子等。[/size][/font] [font=黑体, SimHei][size=15px]目前，国内常用的合成抗氧化剂主要有：丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）等。[/size][/font] [font=黑体, SimHei][b]丁基羟基茴香醚（BHA）[/b][/font] [font=黑体, SimHei]白色或微黄色结晶状物，熔点48~63℃，沸点264~270℃（98 KPa），高浓度会略有酚味，易溶于乙醇（25 g/100 mL，25℃）、丙二醇和油脂，不溶于水。BHA对热稳定，在弱碱条件下不易被破坏，与金属离子作用不着色。[/font] [font=黑体, SimHei]BHA是一种很好的抗氧剂，在有效浓度时没有毒性。作食品抗氧剂，能阻碍油脂食品的氧化作用，延缓食品开始败坏的时间。[/font] [font=黑体, SimHei][b]2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）[/b][/font] [font=黑体, SimHei]无嗅、无味，无毒的白色晶体。熔点71℃，沸点265℃，不溶于水和稀碱，溶于苯、甲苯、乙醇、汽油及食物油中。其溶解度为：乙醇25%，豆油30%，棉籽油20%，猪油40%。[/font] [font=黑体, SimHei]BHT是一种抗氧化剂，有广泛的工业用途，主要用于食品的油脂领域，来增加油脂的货架期。[/font] [font=黑体, SimHei][b]特丁基对苯二酚（TBHQ）[/b][/font] [font=黑体, SimHei]为白色或微红褐色结晶粉末，有一种极淡的特殊香味，几乎不溶于水（约5%），溶于乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂。[/font] [font=黑体, SimHei]TBHQ是国家规定允许少量添加的食用抗氧化剂，跟BHT、BHA相比，TBHQ拥有更安全的无毒性能，可有效抑制枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产气短杆菌等细菌以及黑曲菌、杂色曲霉、黄曲霉等微生物生长。[/font]

在做标准曲线的时候，我用不加样品的空白调零后，再测定这个空白，为什么吸光值不是0，而是负数？ 还有啊， 多酚氧化酶的测定，需使催化成的没食子素溶于乙醚进行测定，标准溶液也要用乙醚萃取吗？还是直接比色就行， 我两种都有试过，但加了乙醚萃取的测出的值极不相关，不太确定 请教下高手啊-----------

请教,如何用分光光度法测定葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶的活性?急!!!!!谢谢

如何测豆浆中的脂肪氧化酶活性如题，想直接测豆浆，不知道什么方法

[quote]原文由 [B]leotron[/B] 发表:使用葡萄糖氧化酶GOD来探索酶传感器实现方法的研究做的是最多的了。大家有没有进一步做血液或血清样品中葡萄糖浓度的检测？有几个问题请教。如下：1. 样品前处理一般如何操作？2. 具体采取哪种电化学方法更为合适？循环伏安法，时间-电流法，计时电流法？还是其它？不同的方法获得的传感器参数（检测极限，线性范围，灵敏度等）不一样，操作起来的方便程度也不一样。3. 如何让修饰的电极真正成为传感器，即具有可知的且较稳定性能指标的检测装置？有哪些方面需要考虑？欢迎讨论。[/quote]

我要较快的方法检测发酵产生的多酚氧化酶的酶活,底物也是复合型的茶多酚类物质,有较好的思路吗?

氧化镁的用途广泛，应用于：化工产品－水硫酸镁、七水硫酸镁，耐火材料方面是制作炼钢镁球炉底料的主要原料。建筑方面广泛应用于集装箱、防火板、工艺美术、蔬菜大棚、墙体保温板、活动板、石棉瓦等制作。 有一种至今还没有人使用的新型涂料，这种涂料名为“镁漆”，镁漆防火、防锈、防霉、防蚀、防水 由其是防火性能现今没有几种物质材料可以相比，上万度的高温对他都无可奈何，甚至用于高超音速的战机机头和弹道导弹弹头的防高温涂料亦是可行 镁漆与金属特别是钢铁沾合性能很好，沾上凝固后怎样都刮不下来，除非用钢砂打掉一层钢表，是一种永久性的涂料 镁漆的生产工艺很简单，可以随用随生产，只要掌握配方和温度控制就可以 镁漆生产成本偏低只是油漆的三份之一或一半 美漆不含油基，无毒、无臭、无污染，即使吃少量下肚子里也无大害（当然无人会吃） 另外，镁漆是一种环保防火涂料，纽约世贸大厦如是用它来涂抹结构钢架，作防火防锈的涂料，不一定会倒塌 镁漆是纯白色的而且越泡在水里越白，不会发黑发黄，喜欢什么颜色生产时加添色素就可以，很方便，悉随尊便镁漆是一种理想的船舶及军舰内外壳涂料，终有一日全面取代油漆在船舶工业上的应用。 镁漆的主要原料产予我们伟大的祖国，这是美国无法开发和大规模使用的客观原因。 希望镁漆早日应用在解放军人民海军的军舰上！

LST_6124-2017 粮油检验 小麦粉多酚氧化酶活力的测定 分光光度法.pdf

一般需经3~4周培养才能见到有细菌生长的细菌是A ：结核分枝杆菌 B ：淋病奈氏菌 C ：空肠弯曲菌 D ：炭疽杆菌 E ：军团菌

抗氧化剂：是阻止氧气不良影响的物质。 它是一类能帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害的一类物质。如维生素Ａ、Ｃ、Ｅ；例胡萝卜素（虾青素、角黄素、叶黄素，B-胡萝卜素等）；微量元素：硒、锌、铜和锰等　　饮食中抗氧化剂长期以来倍受国内外学者关注，这是因为①食物中抗氧化剂能够保护食物免受氧化损伤而变质②在人体消化道内具有抗氧化作用，防止消化道发生氧化损伤@吸收后可在机体其他组织器官内发挥作用④来源于食物的某些具有抗氧化作用的提取物可以作为治疗药品。抗氧化剂的作用机理包括鳌合金属离子、清除自由基、淬灭单线态氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。

美国《男性健康》杂志最近评选出含细菌最多的8种食物：1、鸡肉美国消费者联盟一项全国调查发现，肉鸡中弯曲杆菌感染率高达42%，沙门氏菌感染率为12%，容易导致胃肠炎。专家建议：买回的生鸡肉最好先用水浸泡一段时间再烹调，一定要煮烂熟透，菜刀和砧板用前用后都应该用除菌剂清洗。2、牛肉馅美国农业部调查指出，牛肉馅中30%含葡萄球菌，12%含李斯特菌，会导致食物中毒或血液感染。专家建议：如果做肉饼，馅不要太厚，否则饼内达不到杀菌温度。3、生牡蛎其中含有诺罗病毒、空肠弯曲菌和创伤弧菌，极易导致腹泻。专家建议：最好不要生吃，如果一定要生吃，蘸蒜、姜、醋或柠檬汁，外加葡萄酒杀菌。4、哈密瓜美国食品和药品管理局检测发现，3.5%的哈密瓜表皮裂缝中藏有沙门氏菌，易导致腹泻。专家建议：千万别买切开的哈密瓜，食用前用自来水冲洗整瓜15—30秒，并用刷子刷洗。5、桃子美国农业部调查发现，为了让桃子光滑洁净，农民在收获前几周会给桃子喷洒农药。到桃子上市时，其表面覆盖的农药可达9种。专家建议：食用前用海绵或刷子洗掉桃子外面的保护蜡，或者削皮食用。6、鸡蛋煮蛋和未完全熟透的煎蛋最容易导致食物中毒。专家建议：有裂缝的鸡蛋不能吃；保存时先放入纸盒再放进冰箱冷藏室最低处保存；摸过鸡蛋后，一定要洗手。7、大葱美国食品和药品管理局调查发现，不干净的大葱可能会导致甲肝。专家建议：室温容易让大葱滋生沙门氏菌，买回后最好彻底清洗，剥去表层，放入冰箱保存。8、熟食美国疾控中心发现，冰箱中冷藏的熟食最易引起李斯特菌感染，因为该菌一般在寒冷环境中滋生。专家建议：少吃熟食，熟肉和香肠超过1周没吃完就应该扔掉。

测试镁硅合金中的氧化镁与镁，用XRD怎么做呀？第一次接触，高人指点下吧镁含量大约4%左右。氧化镁0.5%氧化镁0.5%含量是不是太微量了，做不出？

旋转弯曲试验机旋转杆弯曲疲劳试验在各种类型的标本具有高测量精度和舒适的操作主页 / 测试机器 / 标准测试机器 / 旋转弯曲试验机旋转弯曲试验机由hler根据DIN 50113设计，用于对线材、圆形试样和棒材等试样以及凸轮轴等适当部件进行动态疲劳试验。旋转弯曲试验机用于质量和材料控制。?旋转弯曲试验机UBM 8应用旋转弯曲试验机UBM 8用于根据DIN 50113在试样上进行疲劳试验，例如弯曲力矩高达约50纳米的线材、圆形试样和棒材。特征桌面设备试样由钢丝绳起重机加载，通过提升系统上的可调弹簧在试样上产生扭矩高测量精度:头部的旋转轴承设计成具有非常低的摩擦，以便不会扭曲所施加的弯矩。灵活性:承载样品的头部连续可调；这样，可以使用不同长度的样品。自动测试程序:从动头安装在滚轮滑轨上。这样，由弯曲引起的样品长度变化得到补偿。此外，当样品断裂时，滚轴滑座分离样品碎片，保持断裂模式。如果出现样品断裂、滑移、破裂检测或达到预设的应力循环次数，机器会自动停止。在测试之前和测试过程中，转数可在50至3400 rpm之间连续调节，并受到主动控制。?录像询问?旋转弯曲试验机UBM 9应用旋转弯曲试验机UBM 9用于根据DIN 50113在弯曲力矩高于50纳米的样品如线材、圆形样品和棒材上进行疲劳试验。特征独立设备试样由钢丝绳起重机加载，通过提升系统的可调重量在试样上产生扭矩转数:从100到6000 rpm连续可调舒适的操作:弯矩由可移动的砝码连续调节。通过直观设计的触摸屏，可以完成和读取所有必要的测试设置。其中，可以设置弯矩和载荷循环的极限值。高测量精度:由于弹簧夹头的概念，样品被安全地夹住。它保证夹紧力不会因振动而松动，从而防止打滑。加载的试样零件与夹具没有任何接触。弯曲和松弛时试样长度的变化得到了补偿，从而防止了试样的轴向扭曲。安全:头部和旋转样品由防护罩覆盖。保护罩配有安全开关，只有在电机停止时才能打开。?录像[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/11/202311062332058204_7034_1602049_3.png[/img]

什么是生物治理？ 　 　 生物治理指用微生物群体对既定环境污染体所进行的降解，转变和隔离。这个过程的先决条件就是在土壤或地下水中的微生物能够去除环境中的有机污染源。微生物留下的降解物是二氧化碳和水。 原地生物治理是指不挖掘受污染土壤而对原状生物修理。原地生物治理需要大量的氧分，这就意味着需要清理的区域必须是有氧环境，微生物将在有氧环境和营养物质的最佳增添量会生长，繁殖和消耗更多量的有害有机物质。 当使用生物治理时，保持有氧环境非常重要。要清理的特定区域必须长时间的供养氧气过氧化镁主要用于原地生物治理时氧气主要来源。原因在于这相关到过氧化镁的特定性质。 粉末状的过氧化镁能够稳定存在很长时间。总的氧气的释放期将持续3个月到1年，但不同的地方状况不同，主要由污染物的多少和地下水的流速而定。现场试验已表明，在大多碳氢化合物污染的地下水中镁化合物能够持续的释放氧气能够长达至少6个月。 过氧化镁是一种非毒性化合物，对蓄水层没有潜在的负面效应。过氧化镁和水反应的副产物是氧气和寻常的氢氧化镁，氢氧化镁实质上是不溶解的。因此，过氧化镁只对蓄水层释放出氧气，氢氧化镁只作为土壤的一个惰性部分残留于过滤袋中，可从注射井里取出。必须提到的是过氧化镁和氢氧化镁对人们的消费都是安全的，因为它们都用于普通药物的抗酸剂。 　 　 　 　 如何用过氧化镁进行生物治理？ 　 　 我们通常所知道的释放氧气的化合物过氧化镁(MgO2)能够提高蓄水层中溶解氧的浓度，能够创造有氧环境，刺激嗜油微生物在有氧的状况下将石油污染物降解成二氧化碳和水。 * 氧气的生成：过氧化镁和水结合时，按照下面的反应释放出氧气： MgO2+ H2O -- 1/2 O2+ Mg(OH)2 * 应用方法用可回收的过滤袋，或以泥浆状直接推进注入的办法加入到蓄水层中。在移出地下储罐或通过挖掘治理而导致的明开挖位置，把回填之前用过的氧化镁干粉和轻度污染的土壤混合。一般情况下，施加在土壤中的过氧化镁至少是每吨土壤100克，一吨土壤过氧化镁的用量最好是处于一公斤到十公斤之间。 * 使用：在石油污染治理中，使用过氧化镁效果显著： （1）在蓄水层中，为生物修复的足够养分已经存在，所有的溶解氧用来加速污染物的生物降解速度； （2）作为氧气屏障控制地下水的烟羽污染。 （3）作为主动的现场治理，例如用水泵先抽再处理等其它一些物理方法已不再奏效时，过氧化镁做为一步纯化精制的过程，以达到预期的污染物复原的水平。 （4）作为供氧剂，过氧化镁可和其它的注入生物治理产品混合，直接在蓄水层中加入营养素或微生物。

轻质氧化镁不明白有什么作用，要说调pH,明明已经用氢氧化钠了。另外轻质氧化镁为什么要除碳酸盐，不除去有什么影响

在原子荧光测食品中砷中，灰化剂氧化镁含砷是1/10000,怎么消除氧化镁中砷对样品测定的影响？若换灰化剂，哪种灰化剂好些？谢谢，急！

纳米二氧化钛在光催化作用下使细菌分解而达到抗菌效果的。由于纳米二氧化钛的电子结构特点为一个满 TiO2的价带和一个空的导带，在水和空气的体系中，纳米二氧化钛在阳光尤其是在紫外线的照射下，当电子能量达到或超过其带隙能时。电子就可从价带激发到导带，同时在价带产生相应的空穴，即生成电子、空穴对，在电场的作用下，电子与空穴发生分离，迁移到粒子表面的不同位置，发生一系列反应，吸附溶解在 TiO2 表面的氧俘获电子形成O2 ·，生成的超氧化物阴离子自由基与多数有机物反应(氧化) 。同时能与细菌内的有机物反应，生成 CO2和 H2O；而空穴则将吸附在TiO2表面的 OH和H2O氧化成·OH,·OH有很强的氧化能力，攻击有机物的不饱和键或抽取H原子产生新自由基，激发链式反应，最终致使细菌分解。TiO2 的杀菌作用在于它的量子尺寸效应，虽然钛白粉(普通 TiO2)也有光催化作用，也能够产生电子、空穴对，但其到达材料表面的时间在微秒级以上，极易发生复合，很难发挥抗菌效果，而达到纳米级分散程度的TiO2，受光激发的电子、空穴从体内迁移到表面。只需纳秒、皮秒、甚至飞秒的时间，光生电子与空穴的复合则在纳秒量级，能很快迁移到表面，攻击细菌有机体，起到相应的抗菌作用。在紫外线作用下，以0.1mg/cm3浓度的超细TiO2可彻底地杀死恶性海拉细胞，而且随着超氧化物歧化酶（SOD）添加量的增多，TiO2光催化杀死癌细胞的效率也提高；用TiO2光催化氧化深度处理自来水，可大大减少水中的细菌数，饮用后无致突变作用，达到安全饮用水的标准。在涂料中添加纳米二氧化钛可以制造出杀菌、防污、除臭、自洁的抗菌防污涂料，可应用于医院病房、手术室及家庭卫生间等细菌密集、易繁殖的场所，可有效杀死大肠杆菌、黄色葡萄糖菌等有害细菌，防止感染。因此，纳米纳米二氧化钛能净化空气，具有除臭功能。 纳米二氧化钛抗菌特点：对人体安全无毒，对皮肤无刺激性；抗菌能力强，抗菌范围广；无臭味、怪味，气味小；耐水洗，储存期长；热稳定性好，高温下不变色，不分解，不挥发，不变质；即时性好，纳米二氧化钛抗菌剂仅需1h就能发挥效果，而其他银系抗菌剂效果则需约24h；纳米二氧化钛是一种永久性维持抗菌效果的抗菌剂；具有很好的安全性，科用于食品添加剂等，与皮肤接触无不良影响。

大球盖菇过氧化物酶及超氧化物歧化酶的研究 张琪林1,王红2(1运城学院生命科学系,山西运城044000 2运城学院生化实验中心,山西运城044000) 摘　要:采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法测定大球盖菇过氧化物酶和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶活 性,结果表明大球盖菇过氧化物酶有4种同工酶,比移分别是:0.13、0.18、0.25、0.32,其活性大小接近. SOD三种都有,比移分别为0.20、0.21、0.25,以CuZn-SOD活性最大,Mn-SOD活性较小.CuZn-SOD 及Mn-SOD辅因子易于丢失,应用时应予以注意.关键词:大球盖菇 过氧化物酶 超氧化物歧化酶 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳中图分类号:Q935　文献标识码:A大球盖菇(Strophariarugoso-annulate)栽培广 泛,食药两用,深受菇农与消费者青睐,栽培研究颇 多,生理研究也日渐深入.已有液体培养氮碳营养 源[1]、与pH关系[2]、胞外酶特性[3]等研究报道,而 胞内酶研究报道尚未见到.过氧化物酶、超氧化物 歧化酶是机体清除H2O2、超氧离子(O-2)等活性氧 的氧化还原酶.[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903260925_140607_1614854_3.gif[/img]对生物抗氧化、防辐射、抗衰老等方面都有重要作 用,尤其是SOD.本文采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电 用方法鉴定大球盖菇上述两种酶的活性及种类,以 期为大球盖菇的生理生化研究和大球盖菇的应用 提供理论依据.1　材料与方法1.1　材料供试菌株引自河南省清丰县食用菌技术推广 中心.所用化学试剂均为分析纯.1.2　方法1.2.1　菌丝培养　20%土豆浸汁1000mL,蔗糖 20g,蛋白胨2g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1.5g,pH值 自然.分装于300mL锥形瓶,每瓶50mL,高压灭菌.接种后25~28℃恒温摇床培养21天,振荡频 率为120r/min.1.2.2　酶液制备　菌丝冲洗干净后,于-4℃冷冻 12h.按菌丝∶0.1MpH7.4磷酸缓冲液(冷藏)∶石 英砂=1∶2∶0.2比例混合.冰浴磨成匀浆.在 10℃以下环境离心(4000r/min,15min).取上清液 5份与40%蔗糖(冷藏)、0.01%溴酚蓝各1份混 合,置冰箱备用.1.2.3　电泳　方法为聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳. 样品分离胶浓度为7%,pH8.9.浓缩胶浓度为2. 5%,pH6.7.电极缓冲液为Tris-甘氨酸缓冲液, pH8.3.点样量为30μL/管.以溴酚蓝为指示剂.电 流开始为10mA,电泳两分钟后加大至50mA.待溴 酚蓝移至凝胶柱下端附近时停止电泳.电泳环境温 度为10℃,时间1.2h.1.2.4　染色1.2.4.1　过氧化物酶染色　A液:0.4g联苯胺加 入3mL冰醋酸于80℃溶解,加入17mL蒸馏水,随 用随配.B液:4%氯化铵.C液:5%EDTA.D液:0. 3%H2O2.按等体积加8倍水混合,量以淹没胶柱 为度.剥胶后立即放入染液,等到有蓝色谱带出现 后,取出用水冲洗干净,再用7%醋酸脱色漂洗后 观察.1.2.4.2　SOD染色　(1)对照a、在2.45×10-2M 氯化硝基四氮唑蓝(NBT)液中黑暗下浸泡1h,温 度37℃.b、在2.8×10-2M四甲基乙二胺、2.8× 10-5M核黄素和在3.6×10-2MpH7.8磷酸缓冲 液中黑暗下浸泡1h,温度37℃.c、在1×10-4M EDTA,5×10-2MpH7.8磷酸缓冲液中,距40W日 光灯20cm光照20min.(2)添加辅基处理.在(1 中分别添加5mMNa2SO4 FeSO4 MnSO4 CuSO4+ ZnSO4 FeSO4+MnSO4+CuSO4+ZnSO4.(3)添加 抑制剂处理.在酶液中分别添加10mMKCN或 30%氯仿-乙醇,其他同上.2　结果与讨论2.1　过氧化物酶谱及分析[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903260926_140608_1614854_3.gif[/img]结果如图1.从图1可见,大球盖菇菌丝体过 氧化物酶有4条带.比移分别为0.13,0.18,0.25, 0.32.其活性大小接近.2.2　超氧化物歧化酶谱及分析(1)添加SOD辅因子试验结果见图2.从中可 见共有三条带.比移分别为A:0.20,B:0.21,C:0. 25.都有B带,但加铁处理(3、6)的较亮,说明B带 是Fe-SOD,铁离子对该SOD活性有明显的增强作 用.没有加铁的处理(1,2,4,5)SOD也有活性,说 明铁与酶蛋白的结合较牢固,不易丢失.1,2,3,5 无A带,4,6有,说明A带是Mn-SOD.同理,C带为 CuZn-SOD.未加锰、铜、锌盐的没有相应的带,说 明锰、铜、锌与酶蛋白的结合较为松散,易于丢失. 比较三种SOD,以Mn-SOD活力最小,CuZn-SOD 活性最大.(2)添加抑制剂试验结果为:加KCN后,显色 结果无C带 加氯仿-乙醇后,无A带.已知10mM KCN抑制CuZn-SOD,30%氯仿-乙醇抑制Mn- SOD[4].说明2.2.1结论是正确的.综上所述,大球盖菇菌丝体抗氧化酶比较丰 富,过氧化物同工酶有4种 超氧化物歧化酶有3 种,以CuZn-SOD活性较高,Mn-SOD、Fe-SOD活 性较低,但CuZn-SOD、Mn-SOD辅因子易于丢 失,应用时应予以注意.参考文献:[1]张琪林,王红.大球盖菇液体培养碳氮营养源研究[J].食用 菌.2002,24(1):6.[2]王红,张琪林.大球盖菇液体培养与pH值关系研究[J].山西 师范大学学报(自然科学版).2003,17(增1期):108~109. [3]王红,张琪林.大球盖菇液体培养胞外酶特性研究[J].食用 菌.2003,25(2):8~9.[4]李中振,田廷亮.灵芝超氧化物歧化酶同工酶研究[J].中国食 用菌.1997,16(4):32~34.