副溶血性弧菌成套生化鉴定

夏天，正是大家都吃海鲜的时候。 一提到海鲜，人们便会想起美味可口的多宝鱼、大龙虾、扇贝、生蚝等，在沿海地区尤其受到人们的喜爱。不过大家在品尝之余也得留个心眼，若在细节上不注意，因吃海鲜引起的食物中毒事件也时有发生。2011年7月18日,遂昌县一个赴厦门旅游的旅行团因食用叶子鱼导致多名游客出现腹泻、腹痛、呕吐等症状等，经确定食源性致病菌副溶血性弧菌为罪魁祸首。据深圳疾控中心2012年提供的数据显示：近年来深圳平均每年发生30-50起中毒事件，中毒总人数在300-500人，其中有四成源于副溶血性弧菌食物中毒，7-9月为该菌食物中毒的高发季节，常以集体发病方式出现。主要危害 由副溶血性弧菌引起的食物中毒一般为急性肠胃炎，其发病急、潜伏期短，主要症状为腹痛，并有腹泻、恶心、呕吐和胃寒发热等，也可导致免疫低下的人群发生致命的败血症，中毒发生情况与临床表现跟摄入的致病菌量有关。广东省2012年统计数据表明由副溶血性弧菌引起的肠胃炎占由微生物引起的食源性疾病暴发的34.7%，已成为导致食源性疾病的主要细菌，其对人类的危害已经超过沙门氏菌。致病性菌株所含有的主要毒力因子包含耐热直接溶血素(tdh) 、耐热直接相关溶血素（trh）、不耐热溶血素（tlh）、Ш型分泌系统（T3SS1和T3SS2）或尿素酶等。来源和传播途径 副溶血性弧菌主要分布在海水和鱼、贝类、虾、海蜇等海产品中，携带该菌的食品可以通过交叉污染从而引发食物中毒，如可以通过污染淡水产品以及其他没有携带该菌的食品如畜禽肉、咸蛋等以及器具进行传播，因此水产品产地、销售、加工场所、超市、菜市场等都可能成为引发食物中毒及食源性疾病发生的关键场所。检测方法 目前常采用的检测方法标准为GB 4789.7-2013《食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》，该标准包含定性和定量两种检测方法，菌株经生化鉴定后进行血清型（O抗原和K抗原）分型。1996年以后临床上分离的致病性强的大流行株有14种血清型，O1:K25、O1:K41、O1:K56、O1:KUT、O3:K6、O3:K58、O3:K68、O3:K75、O4:K8、O4:K12、O4:K68、O4:KUT、OUT:K6、O5:KUT。预防措施 根据该菌不耐热、不耐酸以及交叉污染的特点，可以采取下列预防措施：　　1、动物性食品应当煮熟透后再吃；　　2、对加工海产品的器具需要严格的清洗消毒；　3、加工过程中生菜和熟菜要区分开来；　　4、隔餐的剩菜食用前应充分加热；　　5、在烹调过程中可适当加点食醋。

副溶血弧菌生化甘露醇、精氨酸、嗜盐实验不符是怎么回事。

实时荧光PCR快速检测水产品中副溶血性弧菌的研究注：全文见附件。有用到的鼓掌不要都做伸手党

水产品中副溶血性弧菌特异性二重PCR检测方法的研究注：全文见附件。有用到的鼓掌不要都做伸手党

[color=#444444]各位同仁，有没有参加中国检科院组织的ACAS-PT535(2018)食品中副溶血性弧菌定量检测能力验证？一共两个样品，黄色的是18-N，白色的是18-J[/color]

乳酸菌、单细胞核李斯特氏菌、副溶血性弧菌这几种细菌的测定有没有相关的试剂盒呢？即便有试剂盒，前增菌、纯培养阶段仍需购买相关的培养基吧？有没有用过的朋友？

SNT 0173-2010 进出口食品中副溶血性弧菌检验方法

应用PCR技术快速检测食品中副溶血性弧菌注：全文见附件。有用到的鼓掌不要都做伸手党

请教一下：溶血性链球菌和β型溶血性链球菌是一样的吗？只是叫法不同？还是说溶血性链球菌范围比较大吧？包括β型溶血性链球菌其他型号？

卫生部办公厅关于征求《食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》等12项食品安全国家标准意见的函 中华人民共和国卫生部 www.moh.gov.cn 2011-07-05 14:17:29 各有关单位：根据《食品安全法》及其实施条例的规定，我部组织制定了《食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》等12项食品安全国家标准（征求意见稿）。现征求你部门意见并向社会公开征求意见，请于2011年9月10日前以传真或电子邮件形式反馈我部。传　　真：010-67711813电子信箱：foodsafetystandards@gmail.com附件：12项微生物标准征求意见稿.rar 二○一一年六月三十日

溶血性链球菌在血清肉汤中生长时，管中的现象是()。 A、块状沉淀 B、絮状或颗粒状沉淀 C、均匀生长 D、混浊

这儿有俩问题请教下有没大佬知道嗜肺军团菌采样用的里面滴一滴矿物油 这个矿物油用哪种的。找来找去都是那种杀菌的矿物油。第二个问题就是 GB4789.11-2014 β-溶血性链球菌这个方法只单单说需要生化试剂盒。不过好像市面上没有对应的生化试剂，这个有解决办法吗？希望微生物大牛帮忙解答下。感恩

疑似的溶血性链球菌，进行了链激酶试验，在24小时内如何看是否完全溶解

送风系统测β－溶血性链球菌，那么这个菌长什么样呢?[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/04/202004262134046384_8893_4157961_3.png[/img]

刚收到的邀请函，有兴趣的可以参加啊！[~151037~]广东省疾病预防控制中心关于邀请参加国家认监委食品中副溶血性弧菌的检测能力验证计划的函各有关单位：能力验证是实验室用户、认可机构和实验室管理部门判定实验室能力的重要技术手段之一，也是实验室内部质量控制技术的有效补充。由于能力验证活动是判定实验室能力的国际通行的做法，其结果可得到广泛的承认，对实验室了解、提高和证实自身能力都具有积极作用。2008年，国家认证认可监督管理委员会(CNCA)组织开展了A、B两类22个涉及食品和建材安全等领域的能力验证活动，实验室参加累计达1500余家次。为继续加强重点领域实验室检测能力建设，在一些社会热点和重点关注的领域验证并提升实验室的检测水平，国家认监委决定，2009年继续组织开展重点领域实验室的能力验证工作。受国家认监委的委托，我中心承担了“CNCA-09-B06食品中副溶血性弧菌的检测” 能力验证计划的实施和协调工作（国认实函〔2009〕34号)，为确保此次能力验证工作有序、顺利的开展，现将有关事项通知如下：一、实验室检测能力验证的结果是实验室在相关领域检测能力的客观反映，此次验证取得满意结果的实验室，国家认监委将建议有关部门在相应领域指定、授权、委托检验任务时，优先选用；在2010年进行实验室认可、计量认证/审查认可验收(授权)评审时，免于对该项目的现场实验。二、国家产品质检中心、直属检验检疫局技术中心和省级(含计划单列市和副省级市)产品质检所(院)，以及其他具有本项目检测能力的实验室，都可自愿报名参加本次能力验证。本计划也是中国合格评定国家认可委员会（CNAS）承认的能力验证活动，欢迎已获认可或即将准备申请认可的实验室报名参加。三、该项计划属于B类项目，参加该项能力验证的实验室，需向项目协调单位（广东省疾病预防控制中心）支付能力验证费用人民币650元。四、2009年6月28日前，请各实验室将能力验证计划报名表以邮寄(以邮戳为准)或传真方式发至我中心，为确保报名信息有效准确，请将报名表通过电子邮箱发送至我中心。我中心在收到报名表和汇款后将通过电子邮件方式进行确认，未收到确认邮件的实验室请及时与我中心联系。五、各单位在参加能力验证过程中如遇到问题，请及时与我中心或认监委实验室与检测监管部联系，相关信息可在认监委及我中心网站上查询。六、其它事项（一）联系方式：单位名称：广东省疾病预防控制中心单位地址：广州市海珠区新港西路176号，510300。联系人：罗建波、刘礼平电话（传真）：020-84183019电子信箱：zhikong@cdcp.org.cn网址：http://www.cdcp.org.cn实验室质量管理/质量管理工作信息与交流（二）款项请寄交下列账户（汇款单注明“CNCA-09-B06 能力验证费”）：收款单位：广东省疾病预防控制中心开户银行：广州市工行怡乐支行单位账号：3602000309001568331附件：国家认监委(CNCA)2009年能力验证计划报名表 广东省疾病预防控制中心印章 二○○九年五月十一日 附件国家认监委(CNCA)2009年能力验证计划报名表编号：CNCA-09-B06/项目名称 食品中副溶血性弧菌的检测实验室名称/法人单位名称 通讯地址 邮 编联系人电话/传真E-mail手 机拟采用的检测方法本实验室该检测项目为□已获计量认证， 证书编号： ；□未获计量认证□已获实验室认可，证书编号： ；□未获实验室认可说明：1.实验室应独立地完成能力验证计划项目的试验；2.对出现了可疑值和不满意结果的实验室，国家认监委将要求其开展纠正措施；3.对于结果满意的检验机构，国家认监委将建议有关部门在相应领域指定、授权、委托检验任务时，优先选用；在2010年进行实验室认可、计量认证／审查认可验收（授权）评审时，免予对该项目的现场实验；4.在能力验证结果报告中，出于为实验室保密原因，均以实验室的参加代码表述；5.实验室填好报名表并确认后，不得无故退出本次计划。6.能力验证计划报名表可在广东省疾病预防控制中心网上下载（网址：www.cdcp.org.cn实验室质量管理/质量管理工作信息与交流） 实验室负责人签名：实验室（盖章） ： 年 月 日

各位大虾：我单位一直用斜面保存十几种菌种，均很成功。但在用加有琼脂的BHI斜面保存乙型溶血性链球菌时，发现其菌苔面逐渐变得很薄，在一个月后用BHI来接种复苏时，发现其已死亡。请问死亡原因是什么？可有好的保藏方法介绍？谢谢。

前 言本标准代替GB/T4789.11－2003《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。本标准与GB/T4789.11－2003相比主要变化如下：—— 删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤；—— 增菌培养基以改良胰蛋白胨大豆肉汤代替了葡萄糖肉浸液肉汤和匹克氏肉汤；—— 分离培养基以哥伦比亚CNA血琼脂和哥伦比亚血琼脂代替了血琼脂平板；—— 完善了操作步骤；—— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆；—— 增加了规范性附录A。本标准的附录A为规范性附录。本标准所代替的历次版本发布情况为：—— GB4789.11－1984、GB/T4789.11－1994、GB/T4789.11－2003。食品安全国家标准食品微生物学检验 溶血性链球菌检验范围本标准规定了食品中溶血性链球菌（Streptococcushemolyticus）的检验方法。本标准适用于食品中β型溶血性链球菌的检验。2 术语与定义β型溶血：在菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱： 36 ℃±1℃。3.2 冰箱：2 ℃～5℃。3.3 厌氧培养装置。3.4 天平：感量0.1 g。3.5 均质器。3.6 显微镜：10×～100×。3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01mL刻度）、10 mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。3.8 无菌锥形瓶：容量100mL、200 mL、2000 mL。3.9 无菌培养皿：直径90mm。3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11 水浴装置: 36 ℃±1 ℃。3.12 离心机：离心速度≥20000×g。

一、培养基明细： 名称 3%氯化钠碱性蛋白胨水（APW） 硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂（TCBS）3%氯化钠三糖铁琼脂（TSI） 嗜盐性试验用培养基 3%氯化钠甘露醇试验用培养基 3%氯化钠赖氨酸脱羧酶试验培养基 3%氯化钠MR-VP培养基 我妻氏血琼脂基础 氧化酶试剂 革兰氏染色液 ONPG V-P试剂盒 弧菌显色培养基

GB-T 18203-2000 室内空气中溶血性链球菌卫生标准 .rar

问一下：副溶血性弧菌在TSI培养基里，怎么样算是有运动性，谢谢。

我公司新从日本日水公司（NISSUI）引进一些治病菌的快速检测板，沙门20-24小时出结果，金葡48小时出结果，副弧菌18-24小时出结果，使用的是选择性的显色培养基，操作简单，只需取1毫升样品添加到测试板中央，等样品自动扩散开来后，倒置培养即可，一些产品还有AOAC认证，我们的原理和传统方法是一样的，觉得传统致病菌检测方法操作麻烦，对本产品有兴趣的朋友请来电索要试用装。可上网站看简介。电话：13764674081 蒲先生上海千慕生物科技有限公司021-62272335/62994599

近年来，随着微生物基因组学的发展，微生物基因检测迎来了新的机遇。2000年，Makino等已经完成V．p的基因组测序，V．p毒力基因及特异的基因序列得到进一步确定。根据V．p特异基因序列，设计引物，进行PCR检测，是现阶段检测V，p的最快速准确的方法。目前应用于检测V．p的PCR方法主要有任意引物PCR(abritrarilyprimedPCR，Ap-PCR)、针对任意引物PCR、多重PCR(muhiplex-PCR)、实时PCR(Real-timePCR)。1)任意引物PCR Matsumoto等采用任意引物PCR对V．p进行检测。他们针对V。p的tdh基因和trh基因一段特异的序列，设计两条引物，引物1：5，--GGTGCGGGAA--3，，引物2：5，一GTTTCGCTCC一3，，对1977～1998年所收集的227株V．p进行PCR。通过电泳分析发现，1996-1998年收集的22株血清型为03：K6菌株与1996年以前收集的03：K6血清型菌株基因序列有所不同，为03；K6血清型新出现的变异株，并最初出现在孟加拉国。这是目前最简单的以基因为基础的细菌亚分型方法。

已做出大肠杆菌O157、金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、福氏志贺菌、副溶血弧菌、单核细胞增生性李斯特菌共6种菌单抗的细胞株，效价高，无交叉反应

据美国食品安全网站报道，近日华盛顿州5人因食用生牡蛎而感染了副溶血性弧菌，目前该州正在对部分可能感染弧菌的牡蛎实施召回。 9月24日华盛顿州卫生部门告诫消费者，勿食用产自胡德运河4号养殖区的牡蛎，这些牡蛎生产日期介于8月30日与9月19日之间，它们可能感染了弧菌，该菌可引起人体患上弧菌病。同时华盛顿州卫生部还建议经销商、零售商、餐馆勿出售或者分销这些产品。 弧菌感染的症状通常出现在食用染菌食物后15小时左右，尽管症状表现出来的时间长达4天，这些感染症状包括：腹泻、恶心、呕吐、腹痛、头疼、发烧、怕冷。通常症状会在2天后自行消失，然而对于免疫力低下者或者肝病患者来讲，这些人的病程会较长，感染后症状会较为严重，有时甚至造成死亡。 贝类在食用前应放于冰箱贮藏，要杀灭牡蛎中可能含有的病菌，需保证其烹饪温度达到145℉。

求助沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌及溶血性链球菌检验时，使用生化鉴定编码管，前增菌和分离的步骤怎么做？能否统一使用一种或两种前增菌和分离的步骤？谢谢帮忙！！！Email ：qhdztj@163.com

新标准与GB/T4789 .7-2008相比，主要修改了设备和材料；修改了培养基和试剂；修改了样品制备过程；修改了检验程序

【解读】GB 29921-2013《食品安全国家标准 食品中致病菌限量》2014-10-22 SMQ食品检测1标准的制定目的致 病菌是常见的致病性微生物，能够引起人或动物疾病。食品中的致病菌主要有沙门氏菌、副溶血性弧菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。目前，我国涉及食品致病菌限量的现行食品标准共计500多项，标准中致病菌指标的设置存在重复、交叉、矛盾或缺失等问题。　　为控制食品中致病菌污染，预防微生物性食源性疾病发生，同时整合分散在不同食品标准中的致病菌限量规定，国家卫生计生委委托国家食品安全风险评估中心牵头起草《食品中致病菌限量》（GB29921-2013，以下简称GB29921）。标准经食品安全国家标准审评委员会审查通过，于2013年12月26日发布，自2014年7月1日正式实施。　　GB29921属于通用标准，适用于预包装食品。其他相关规定与本标准不一致的，应当按照本标准执行。其他食品标准中如有致病菌限量要求，应当引用本标准规定或者与本标准保持一致。2标准的适用范围和主要内容 适用食品类别肉制品、水产制品、即食蛋制品、粮食制品、即食豆类制品、巧克力类及可可制品、即食果蔬制品、饮料、冷冻饮品、即食调味品、坚果籽实制品等五种致病菌限量◆沙门氏菌◆ 单核细胞增生李斯特氏菌◆ 大肠埃希氏菌O157:H7◆ 金黄色葡萄球菌◆ 副溶血性弧菌该标准中未规定致病菌限量的食品类别包括：★　非即食生鲜类食品，致病菌应主要通过生产加工过程标准（规范）进行控制；★　乳与乳制品、婴幼儿食品以及特殊膳食食品中的致病菌限量，暂时按现行有效的产品安全标准执行；★　甜味料、蜂蜜及蜂蜜制品、发酵酒及其配制酒、脂肪和油及乳化脂肪制品、果冻等，及糖果、食用菌属于微生物风险较低的食品或食品原料，参照CAC、ICMSF等组织的制标原则，不对致病菌进行规定；★　罐头类食品应达到商业无菌的要求，因此不在该标准中规定致病菌限量。3新标准修订重点适用范围：只适用于预包装食品，不适用于罐头类食品及散装或现场制售等食品。不论是否规定致病菌限量，各生产企业和经营者在食品生产、加工和经营过程中均应采取控制措施，尽可能降低食品中的致病菌含量水平。原致病菌限值多存在于相关的卫生标准或食品标准中，常指沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌，限值要求均为不得检出。新标准取消对志贺氏菌、溶血性链球菌的限值要求，增加大肠埃希氏菌O157:H7、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌，限值要求为不得检出或允许有最大限值。新标准采取二级或三级采样方案。4常见问题解答Q1：其他标准中的致病菌限值与本标准不同的，应如何处理？答：《GB29921-2013食品中致病菌限量》是食品安全国家标准，属于强制执行的标准。其他食品标准中如有致病菌限量要求，应当引用本标准规定或者与本标准保持一致，其他相关规定与本标准不一致的，应当按照本标准执行。Q2：取消志贺氏菌指标和限量的理由和依据？答：根据ICMFS(1996)五册，志贺氏菌的传播一般是由于手被粪便污染或食物被飞蝇污染所导致，或因饮用水处理不当或下水道污水渗漏，使水成为了志贺氏菌传播的载体。在我国，志贺氏菌感染人群主要发生在餐饮业而非食品加工工业化食品，结合我国志贺氏菌食品安全事件的实际发生情况和多年来国家食品安全风险监测中鲜有在加工食品中检出的事实，参考CAC、ICMSF、欧盟、美国、加拿大、澳新等食品安全标准，本标准未规定志贺氏菌的限量要求。Q3：取消溶血性链球菌指标和限量的理由和依据？答：溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：1）食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；2）食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；3）熟食制品因包装不善而使食品受到污染。所以溶血性链球菌主要发生在餐饮业而非食品加工工业化食品中，结合我国溶血性链球菌食品安全事件的实际发生情况和多年来鲜有在加工食品中检出的事实，本标准未规定溶血性链球菌的限量要求。

致病性微生物检验原始记录样 品 编号编 号样 品名 称检 测 环 境温度（T）： ℃ ；相对湿度（RH）： %检 测 项 目食 品微 生 物 指 标检 测 地 点高 洁 净 微 生 物 室检测起止日期年 月 日～ 月 日检 测 项 目及 依 据□沙门氏菌GB/T4789.4-2008 □志贺氏菌GB/T4789.5-2012 □致泻性大肠埃希氏菌GB/T4789.6-2003□副溶血性弧菌GB/T4789.7-2008 □金黄色葡萄球菌GB/T4789.10-2008 □溶血性链球菌GB/T4789.11-2003 □蜡样芽胞杆菌GB/T4789.14-2003 □霍乱弧菌WS289-2008 □变形杆菌《全国临床检验规范》第三版□其他检 测 仪 器□电子天平（型号：SC6010）编号00-2 □霉菌培养箱（型号：WJP-150）25～28℃编号04-16 □电热恒温培养箱（型号：DNP-9272）36±1℃编号□04-15 □04-24 □05-11□均质器（型号：BJ-IV）编号08-J3 转速8000r/min时间□1分钟□2分钟□3分钟检 测 流 程先将样品分别直接划线接种于相应的选择性分离平板；再根据检测项目将样品增菌后，划线接种于相应的选择性分离平板；按规定温度和时间培养后观察菌落形态及生化试验。检测项目前增菌增菌分离培养

日前，中国CDC（疾病预防控制中心）发布《肠出血性大肠杆菌O104H4感染防控方案（试行）》（点击此处下载全文pdf），对肠出血性大肠杆菌（EHEC）O104H4规定了严格的防范与控制措施。根据方案要求，临床诊断病例、确诊病例、疑似病例均应及时予以报告，并原则上要求其住院治疗。 　　明确3种病例诊断标准 　　各地首例确诊病例须经复核 　　根据中国CDC确定的定义，EHEC-O104H4疑似病例为，发病前10天内曾在该病流行地区旅行或居住，或发病前10天内与该病临床诊断/确诊病例有密切接触，且符合下列条件之一者（1）有血性腹泻或腹部痉挛性疼痛等症状，无实验室证据诊断为其他非EHEC-O104H4感染者；（2）有微血管病性溶血性贫血（外周血涂片破碎红细胞≥2%）、血小板减少、肾脏受累（血尿、蛋白尿、急性肾损伤）等溶血性尿毒综合征临床表现者。确诊病例为，疑似病例具备下列之一者：从粪便标本中分离到EHEC-O104H4菌株，stx1和/或stx2基因检测阳性；从粪便标本中检测到stx1和/或stx2基因阳性，同时aggR、wzy（O104）和fliC（H4）基因检测全部阳性。 　　临床诊断病例为，在同一起暴发疫情中，与确诊病例流行病学密切相关，并排除其他疾病的疑似病例。 　　根据该方案，医疗机构发现疑似病例、临床诊断病例或确诊病例时，应按照感染性腹泻报告要求上报，并在传染病报告卡中注明疑似、临床诊断或确诊EHEC-O104H4感染；及时采集粪便和其他相关标本，以备检测。 　　该方案要求，各省（区、市）首例确诊病例须经中国CDC复核。