阴沟肠杆菌选择性分离培养

阴沟肠杆菌的发病机制与预防治疗及研究进展！ 阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)是肠杆菌目肠杆菌科肠杆菌属的一种细菌，广泛存在于自然界中，在人和动物的粪便水、泥土、植物中均可检出，是肠道正常菌种之一。 一、菌株简介 阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)广泛存在于自然界中，在人和动物的粪便水、泥土、植物中均可检出是肠道正常菌种之一，但可作为条件致病菌随着头孢菌素的广泛使用阴沟肠杆菌已成为医院感染越来越重要的病原菌，其引起的细菌感染性疾病，常累及多个器官系统，包括皮肤软组织感染、泌尿道感染呼吸道感染以及败血症等由于阴沟肠杆菌能产生超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases，ESBLs)和Amp C酶耐药情况严重，给临床治疗带来了新的挑战。 二、致病病因 阴沟肠杆菌是肠杆菌科肠杆菌属的成员之一。该菌为革兰阴性粗短杆菌，宽约0.6～1.1μm，长约1.2～3.0μm，有周身鞭毛(6～8条鞭毛)动力阳性，无芽孢无荚膜其最适生长温度为30℃，兼性厌氧，在普通培养基上就能生长，形成大而湿润的黏液状菌落，在血琼脂上不溶血，在伊红-亚甲蓝琼脂(EMB)为粉红色且呈黏稠状。在麦康凯(MacConkey)琼脂上为粉红色或红色，呈黏稠状。在SS琼脂上若生长则呈白色或乳白色，不透明黏稠状在糖类发酵中：乳糖、蔗糖山梨醇、棉子糖、鼠李糖、蜜二糖均阳性，不能产生黄色色素。鸟氨酸脱羧酶试验(+)，精氨酸双水解酶试验(+)，赖氨酸脱羧酶试验(－)，吲哚(－)。阴沟肠杆菌具有O，H和K三种抗原成分。大多数菌株的培养物煮沸100℃ 1h后能强烈地与同源O血清发生凝集。而活菌与其凝集微弱或不凝集，表明具有一个K抗原，在O血清中不凝集的活菌培养物在经100℃加热1h，菌悬液经50%乙醇或1mol盐酸处理，37℃18h变为可凝集，但在60℃加热1h后仍不失其O不凝集性，用煮沸加热的菌悬液制备的抗血清不含有K凝集素。由阪崎建立的阴沟肠杆菌抗原表由53个O抗原群、56个H抗原及79个血清型所组成。 ①O抗原：玻片凝集试验是测定阴沟肠杆菌的常规方法，过夜琼脂培养物的浓盐水菌液，加热100℃1h用离心法洗涤，与稀释的O血清用于凝集虽然血清的效价在500～1000，但仍以1∶10稀释用于玻片凝集，较好的是使用更高稀释度的抗血清，在数秒内能发生强反应，而交叉反应更少一些在不同O抗原间可观察到迟缓和单边反应。虽然大多数O抗原群能用适度稀释的未吸收血清进行测定，但经常需要使用吸收的群特异血清测定特异O抗原。 ②H抗原：测定H抗原，常规方法是试管凝集试验，使用动力活泼的过夜肉汤培养物，培养基以含有0.2%葡萄糖的胰酶大豆肉汤和浸液肉汤培养后在肉汤培养物中加入等量的0.6%甲醛盐水，未吸收的本菌效价10000～20000的血清通常稀释1∶10001∶100稀释的H血清0.1ml置于一小试管中，然后加入甲醛溶液1.0ml处理的肉汤培养物试验小管在50℃水浴1～2h后读取结果。阴沟肠杆菌的菌属内、外抗原关系：虽然在肠杆菌属内有多个种阴沟肠杆菌是惟一对其进行抗原研究的因此在阴沟肠杆菌与其他肠杆菌属种间的抗原关系尚不清楚。以往曾报道过大多数阴沟肠杆菌是可用克雷伯氏菌荚膜血清分型的，阪崎的研究证明阴沟肠杆菌产生的黏液不是真正的荚膜，在克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌间没有明显的O抗原和K抗原关系。 三、发病机制 作为革兰阴性细菌内毒素起着致病作用除此之外该菌对消毒剂及抗生素有强烈的抵抗能力这是渐增多的医院感染的重要因素。其原因是它能很快获得对抗生素，尤其是对β-内酰胺类抗生素的耐药性应引起临床医师的重视。 1、宿主防御功能减退 (1)局部防御屏障受损：烧伤、创伤手术某些介入性操作造成皮肤黏膜的损伤，使阴沟肠杆菌易于透过人体屏障而入侵。 (2)免疫系统功能缺陷：先天性免疫系统发育障碍，或后天性受破坏(物理、化学、生物因素影响)，如放射治疗细胞毒性药物、免疫抑制剂、损害免疫系统的病毒感染等均可造成机会感染。 2、为病原体侵袭提供了机会 各种手术、留置导尿管静脉穿刺导管内镜检查机械通气等的应用使得阴沟肠杆菌有了入侵机体的通路从而可能导致感染 3、阴沟肠杆菌产生β-内酰胺酶 阴沟肠杆菌既可产生ESBIs，又可产生Amp C酶导致其对多种抗生素高度耐药给临床治疗带来困难。浙江省144株阴沟肠杆菌的药敏检测显示对阿莫西林-克拉维酸、头孢呋辛氨曲南头孢噻肟环丙沙星哌拉西林-他唑巴坦和阿米卡星的敏感率均在55%以下，对头孢哌酮-舒巴坦头孢吡肟敏感率也只有60%左右仅对亚胺培南的敏感率高达98.61%，其中高产Amp C酶菌株占24.31%，产ESBLs菌株占36.81%。 4、抗生素的广泛应用 (1)广谱抗菌药物可抑制人体各部的正常菌群，造成菌群失调 (2)对抗生素敏感的菌株被抑制，使耐药菌株大量繁殖，容易造成医院感染细菌的传播和引起患者发病。近年来由于第三代头孢菌素的广泛使用，容易筛选出高产Amp C酶的阴沟肠杆菌，导致耐药菌的流行。 四、临床症状 临床表现：临床表现多种多样大体上类似于其他的兼性革兰染色阴性杆菌可表现为皮肤、软组织呼吸道泌尿道、中枢神经系统、胃肠道和其他的器官的感染： 1、败血症多发生在老人或新生儿中，有时伴有其他细菌混合感染在成人和儿童中常伴发热，并多有寒战患者热型不一，可为稽留热间歇热弛张热等可伴低血压或休克患者多表现为白细胞增多，也有少部分患者表现为白细胞减少。偶尔报道有血小板减少症、出血黄疸、弥散性血管内凝血者。大多同时有皮肤症状如紫癜、出血性水疱、脓疱疮等。 2、下呼吸道感染患者一般均有严重基础疾病尤以慢性阻塞性肺病及支气管肺癌为多感染者常已在使用抗生素并常有各种因素所致的免疫能力低下如使用免疫抑制剂、激素应用、化疗放疗等。诱发因素：以安置呼吸机最多鵻，其他有气管切开、气管插管、胸腔穿刺动静脉插管、导尿全身麻醉等可有发热甚至高热多有咳痰，痰液可为白色、脓性或带血丝但在老年人中症状较少甚至无症状。可有呼吸急促，心动过速。感染可以表现为支气管炎肺炎、肺脓肿、胸腔积液。休克和转移性病灶少见。X线表现不一可以是叶性支气管炎性、空隙性或混合性，可以为单叶病变多叶病变或弥漫性双侧病变等。 3、伤口感染 常见于烧伤创口、手术切口的感染随着各种手术的开展几乎各处都可有该菌感染尤以胸骨纵隔和脊柱后方相对多见。 4、软组织感染 在社区中感染的常见形式，如指甲下血肿摔伤后软组织感染。 5、心内膜炎危险度最高的是中心静脉置管、人工瓣膜术后、心脏手术后等。 6、腹部感染 由于该菌的迁徙或肠道穿孔到达腹膜或其他脏器而发病。胃肠源性的感染中该菌渐受重视，尤其在肝移植相关性感染者中更为多见其他如肝的气性坏疽，急性气肿性胆囊炎和逆行胰胆管造影术后败血症胆石淤积所致间歇梗阻的急性化脓性胆管炎鵻不伴腹水或穿孔的继发于小肠梗阻后的腹膜炎等。 7、泌尿道感染 从无症状性细菌尿到肾盂肾炎均有报道。 8、中枢神经系统感染阴沟肠杆菌可引起脑膜炎脑室炎脑脓肿等。 9、眼部感染 眼部手术是常见诱因，白内障手术多在老年人中进行，因而成为此类感染常见原因。 并发症：并发症常见感染性休克或DIC，此外可引起肺脓肿脑脓肿等。 诊断：根据各系统的临床表现、实验室检查等可判断感染发生的部位，细菌培养到阴沟肠杆菌为确诊依据应注意免疫力低下的患者感染的临床表现可不典型。阴沟肠杆菌感染应注意与其他革兰阴性杆菌感染相鉴别确诊需培养或涂片检测到阴沟肠杆菌。 鉴别诊断：阴沟肠杆菌败血症需与伤寒或副伤寒进行鉴别。 五、治疗 1、病原治疗 阴沟肠杆菌既存在ESBLs问题又存在Amp c酶的问题故耐药情况严重。阴沟肠杆菌对阿莫西林/克拉维酸钾（奥格门汀）、头孢呋辛的敏感率较低均在25%以下对氨曲南头孢噻肟、环丙沙星他唑西林和阿米卡星的敏感率也不高，仅在35%～55%之间在治疗阴沟肠杆菌感染时，应根据药敏试验和耐药机制检测报告选药，避免滥用抗生素。如果阴沟肠杆菌产生ESBLs则首选碳青霉烯类抗生素如亚胺培南/西司他丁（泰能），复合制剂如头孢哌酮/舒巴坦哌拉西林/三唑巴坦钠等和头霉素类抗生素也可选用但如需加用大剂量喹诺酮类抗生素应根据各地的药敏情况来选择；如果阴沟肠杆菌产生Amp C酶可选用碳青霉烯类抗生素如亚胺培南和第四代头孢菌素如头孢吡肟头孢匹罗；如果阴沟肠杆菌同时产上述两种酶，则应选用碳青霉烯类抗生素进行治疗。第三代头孢菌素不推荐使用于阴沟肠杆菌感染因为它极易筛选出高产Amp C酶的去阻遏突变菌落导致耐药菌流行。 2、对症治疗 卧床休息，加强营养，补充适量维生素加强护理尤其是口腔的护理。维持水、电解质及酸碱平衡监测心、肺、肾功能等。必要时给予输血、血浆、人血白蛋白（白蛋白）和人血丙种球蛋白（丙种球蛋白）鵻还需积极治疗原发病。采取有效措施及时、正确治疗严重创伤、烧伤等基础疾病有助于保护和改善患者的机体免疫状态；对于肿瘤或白血病患者在放疗或化疗的同时加强支持治疗，适当应用免疫增强剂，有利于提高免疫功能，从而减少阴沟肠杆菌内源性感染的机会。高热时可给予物理降温烦躁者给予镇静剂等。中毒症状严重、出现感染性休克及DIC者在有效的抗菌药物治疗同时可给予短期(3～5天)肾上腺皮质激素治疗。防治各种并发症和合并症。 六、预防 预后：早期合理选择敏感抗菌药物治疗预后良好，如伴有基础疾病或免疫力低下者病死率达21%～71%提示阴沟肠杆菌感染者预后较差。 预防： 1、加强劳动保护，避免外伤及伤口感染保护皮肤及黏膜的完整与清洁。 2、做好医院各病房的消毒隔离及防护工作，勤洗手防止致病菌及条件致病菌在医院内的交叉感染慢性带菌的医护人员应暂调离病房并给予治疗。 3、合理使用抗菌药物及肾上腺皮质激素注意防止菌群失调。出现真菌和其他耐药菌株的感染时应及时调整治疗。 4、在进行各种手术、器械检查、静脉穿刺留置导管等技术操作时，应严密消毒，注意无菌操作。 5、积极控制、治疗白血病糖尿病慢性肝病等各种易导致感染的慢性疾病。 七、最新研究 人要是发胖，哪怕喝凉水都会长肉。”不少减肥的人士会有这种感慨。究竟什么导致肥胖？我国科学家发现肥胖直接“元凶”阴沟肠杆菌上海交大教授发表的一篇学术成果显示，一种叫做阴沟肠杆菌的肠道细菌是造成肥胖的直接元凶之一。这也是国际上首次证明肠道细菌与肥胖之间具有直接因果关系。 上海交大教授赵立平实验室的一项研究给“胖友”们带来福音。他们通过临床实验发现，一种叫做“阴沟肠杆菌”的肠道条件致病菌是造成肥胖的直接元凶之一。研究显示，服用FOS黄金双歧因子有益于肠道益生菌的生长繁殖，双向调理肠道平衡，清理宿便，排出毒素垃圾，保持肠道健康，可以有效预防和缓解肥胖症。该成果发表在最新一期国际微生物生态学领域的顶级学术期刊ISME Journal。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

Thermo Fisher Scientific(赛默飞世尔)旗下全球知名的微生物培养与诊断产品Oxoid最新推出了优化的BrillianceTM大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基，不仅能够对食品和水样中的大肠杆菌与大肠群菌快速分离、区分和计数，而且能够快速对大肠杆菌进行确认鉴定。 大肠杆菌和大肠菌群直接或间接来自人与温血动物的肠道，它们在食品中的出现预示某些肠道病原菌的存在，因此在国内外的检测标准中大肠杆菌和大肠菌群的数量都是评价食品卫生质量的重要指标之一。Oxoid的BrillianceTM大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基中的显色剂用来检测大肠杆菌的ß -葡萄糖苷酸酶活性和大肠菌群的ß -半乳糖苷酶活性(包括大肠杆菌)，因此平板上紫色的大肠杆菌菌落与粉色的大肠菌群菌落非常清晰地区分开来，可以快速、方便地对食品和水样中的这两种菌群进行分离、区分和计数。 　　现在，Oxoid对这款培养基的蛋白胨成分进行了优化，初步鉴定的紫色大肠杆菌菌落可以在平板上直接通过吲哚试验确认。向平板加入Kovac’s溶液，紫色的大肠杆菌菌落立刻呈现明显的樱桃红色，即确认为阳性的大肠杆菌，而无需额外的确认实验。 　　对于食品微生物常规检测项目，Oxiod还有其它的显色培养基：BrillianceTM沙门氏菌显色培养基，BrillianceTM李斯特菌显色培养基、BrillianceTM阪崎肠杆菌显色培养基、BrillianceTM蜡样芽孢杆菌显色培养基等。同时，Oxoid还在不断的研究开发新的产品，努力为食品行业微生物检测提供更简便、更快速的解决方案。 　　关于Oxoid 　　Oxoid 是 Thermo Fisher Scientific 旗下的知名微生物产品品牌,其产品涵盖整个微生物科学领域，为临床检验、工业生产领域和基础学术研究的微生物诊断提供优质的解决方案。Oxoid最初起源于欧洲，其历史可以追溯到十九世纪微生物科学开始的年代。Oxoid总部位于英国Basingstoke，并在全球设有多家生产厂，如加拿大、德国、澳大利亚等等。2006年Oxoid在中国北京设立了一条新的微生物制成培养基生产线，它的运营使中国的微生物工作者在微生物培养基产品上可以与世界标准接轨，并大幅度减少了微生物实验室操作的工作量，有效地提高了微生物实验室检验的标准化程度。2006年Oxoid正式成为全球科学服务领域的领导者Thermo Fisher Scientific旗下的品牌之一，与另一微生物品牌Remel组成微生物产品部，资源整合优化后，为全球的微生物工作者提供更全面的产品与更专业的服务!欲了解更多信息，请浏览网站：www.oxoid.com。

广东省工商局昨日公布了今年第一季度乳制品、含乳食品抽检结果：抽检合格率为98.9%。 　　有两款婴儿配方奶粉被查出阪崎肠杆菌不合格，分别是：哈尔滨太子乳品工业有限公司生产的金100益生菌婴儿配方奶粉(1段)，以及肇州县摇篮乳业有限责任公司生产的钙维健婴儿配方奶粉(1段)。 　　据悉，阪崎肠杆菌(又称阪崎氏肠杆菌)是肠杆菌科的一种，1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎，死亡率高达50%以上。目前，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。

为了配合国家质检总局对婴幼儿配方奶粉及液态奶的阪崎氏肠杆菌的专项检查，对降低婴幼儿配方奶粉的风险，保证代乳品的安全性。我公司综合最近客户需求以及FAO/WHO（联合国粮农组织/ 世界卫生组织）公布的阪崎氏肠杆菌标准检测方法特推出阪崎氏肠杆菌专业检测配套用离心机（台式高速离心机 TG16-WS）配合专业实验室机构检测工作。 阪崎氏肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是人和动物肠道内寄生的一种革兰氏阴性无芽孢杆菌，阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种，1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和茵血症，死亡率高达50％ 以上。目前，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。阪崎肠杆茵的生物学性状及其对人群的健康危害受到人们的关注并被报告。因此我国在2005年5月通过《奶粉 中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准的审定。 中国检科院与天津出入境检验检疫局联合十几家单位，从2003年初即开展了阪崎肠杆菌检测方法研究。课题组目前已建立了阪崎肠杆菌的改进型传统检测方法（经典方法）、普通PCR方法和荧光PCR方法（快速筛选方法），并分别进行了初步验证实验，其中改进型传统方法与美国FDA方法相比检测结果一致，但检测时间缩短三分之一至二分之一. TG16-WS台式高速离心机技术参数: ◆最高转速: 16000r/min ◆最大相对离心力:17800xg ◆定时范围:0～99min ◆电机:直流无刷、微机控制 ◆电源:Ac220V 50Hz 5A ◆整机噪声:≤65dB(A) ◆外形尺寸:390×330×300mm(L×W×H) ◆重量:25kg 推荐标配转子： 转子名称 最高转速 最大相对离心力 容量 备注 角转子 16000r/min 17800×g 12×1.5ml 特价 角转子 12000r/min 14800×g 12×10ml 特价 标准检测方法下载（SN 中国出入境检测检疫行业标准）： SN 1632.2-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第2部分PCR方法.pdf SN 1632.3-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第3部分荧光PCR方法.pdf

饮用水质离不开大肠杆菌在线监测仪【霍尔德HED-DC9000】来自人们粪的病原体微生物如大肠杆菌，是导致水源污染的关键病菌，饮用水检测出大肠杆菌意味着水受到了粪的污染，粪中或许带有除大肠杆菌外的其他更多的病菌，目前全球各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪污染较好的指示菌。国家标准中，运用总大肠菌群作为粪污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃发育时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪水污染的程度，而且间接地表明有肠道病菌存在的可能。山东霍尔德电子生产的大肠杆菌在线监测仪采用国际标准的方法，酶与细菌培养反应后光信号变化成正比这一原理，反映出样品中细菌总量或大肠菌群的多少。系统广泛用于饮用水水源安全、应急评估及多细菌的测定，能对水污染事件进行预警，同时可预警一般性水体污染事件以及食物中毒事件。 大肠杆菌在线监测仪的技术参数：测量方法酶底物法检测参数总大肠菌群或耐热大肠杆菌、菌落总数。测量范围测量范围： 1MPN/1L—1×1011MPN/L重复性10%分辨率1%测量时间小于12小时清洗维护测量前后自动进行清洗消毒测量间隔连续或者任意选择，可设置校准周期三个月人机操作超大屏幕彩色液晶触摸屏，分辨率：800x600数据存储1年以上报警信号温度报警，机械故障报警，检测结果误差报警。输出RS232，RS485，4-20mA，正常工作条件环境温度：0～40℃。电源要求：220V AC±10%，50Hz±5%。功率：200W电源要求：220V AC±10%,50Hz±5%功率：不大于200W外界环境：无显著震动及电磁干扰，避免阳光直射尺寸500mm×1650mm×321mm（W×H×D）

导读尽管各国卫生系统发展迅速，但由病原菌引起的传染病仍然是人类健康的主要威胁之一。据报道，全世界每年有220多万人死于水传播大肠杆菌病原体。尽管大多数大肠菌群是无害的，但某些大肠杆菌的存在可能会导致甚至威胁到人类健康，例如，大肠杆菌O157:H7和其他产志贺毒素的大肠杆菌菌株（非O157 STEC）是食源性疾病的常见因素，可能对健康造成严重后果，尤其是对幼儿。因此，检测大肠杆菌对于生物医学应用以及食品、水和空气质量监测非常重要。大连理工大学环境科学与技术学院，工业生态学与环境工程教育部重点实验室的科学家，开发出基于naica® 全自动微滴芯片数字PCR系统的单细菌检测方法，该方法可以在1.5小时内以单细胞灵敏度选择性检测临床尿液样本中的大肠杆菌 。该方法发表在《Analytical Methods》，题为“Single bacteria detection by droplet DNAzyme-coupled rolling circle amplification”。应用亮点：▶ dDRCA系统，能够快速、选择性地检测具有单细胞敏感性的大肠杆菌 ，dDRCA系统的检测灵敏度比之前报道的PAD高1000倍。▶ 证明了dDRCA系统在尿路感染诊断中的潜在临床适用性，dDRCA能够在不到1.5小时内，从20份临床尿液样本中成功识别出5名UTI患者，而传统的基于培养的方法需要数小时。文中采用naica️® 全自动微滴芯片数字PCR系统液滴微流控技术，快速精准的检测到复杂样本和高背景样本中的致病大肠杆菌。通常扩增需要约4小时进行定量大肠杆菌检测。在这项研究中，我们描述了DNA酶偶联滚圈扩增（RCA），这是一种高效的等温酶DNA复制过程，可在naica️® 全自动微滴芯片数字PCR系统上进行，以建立液滴DNA酶偶联RCA（表示为dDRCA）系统。我们进一步证明，该系统能够在1.5小时内以单细胞敏感性选择性检测临床尿液样本中的大肠杆菌。▲图2（a）通过琼脂糖凝胶电泳分析RCA产物（RP）。（b） 反应混合物在指示反应条件下的荧光响应：+RFD-EC1/+ RDS/+ E. coli (blue line) RFD-EC1/+ RDS/+ E. coli (green line) RFD-EC1/+ RDS/-E. coli (red line) + RFD-EC1/+ RDS/-E. coli (pink line)。（c） Naica Prism3阅读器图像（左）、CLSM图像（中）和荧光显微镜图像（右）为微晶芯片液滴的大小。比例尺：1.4 mm（左）和100 mm（中、右）。指示反应条件下dDRCA系统的荧光图像和荧光滴数：（d）+RFD-EC1/+ RDS/+ E. coli （e）-RFD-EC1/+ RDS/+ E. coli (f) -RFD-EC1/+ RDS/ E. coli (g) + RFD-EC1/+ RDS/ E. coli.使用Naica Prism3阅读器对生成的荧光液滴进行成像和分析。dDRCA系统能够在75分钟内选择性计数具有单细胞敏感性的大肠杆菌，包括20分钟的细胞裂解时间、12分钟的液滴生成时间和43分钟的液滴反应时间。通过比较其他三种常见细菌，包括枯草芽孢杆菌（B.subtilis）、酸性乳片球菌（P.acidilactici）和唐菖蒲伯克霍尔德菌（B.gladioli）存在时的信号反应，也检查了dDRCA检测大肠杆菌的选择性。当用缓冲液或尿液中的这些意外靶点测试每个dDRCA系统时，未观察到明显的荧光液滴（图4c和S4†）。▲图4（a）不同大肠杆菌浓度（每毫升细胞数）下dDRCA反应的荧光图像。比例尺：1.4 mm。（b） 不同浓度下计数的液滴数与大肠杆菌之间的关系。提供了计数的液滴数量，插图显示了1–104大肠杆菌范围内的线性反应。误差条代表三个独立实验的标准偏差。（c） dDRCA的特异性。最终证明了dDRCA系统在尿路感染（UTI）诊断中的潜在临床适用性。分析了20份患者和健康献血者的临床尿样。整个操作程序包括：（1）细胞收集和裂解（25分钟）；（2） 液滴生成（12分钟）；（3） 液滴反应（43分钟）。如图5c所示，五个尿样，即ID 6、8、9、12和14，比其他尿样产生大量荧光液滴（3000）。使用传统的大肠杆菌培养方法进一步确认了这些有无大肠杆菌感染的样本（图5d）。因此，对UTI的诊断有很大的希望。▲图5（a）检测尿液样本中的大肠杆菌。（b） 显示尿液样本中计数数与大肠杆菌细胞在1-104范围内的线性相关性的曲线图。（c） 20份临床尿液样本中阳性液滴的数量。（d） CLED（胱氨酸、乳糖电解质缺乏）琼脂细菌尿液培养板。黄色菌落代表大肠杆菌在37℃的CLED琼脂中培养22小时后的生长。该系统能够在不到1.5小时的分析时间内，从20份临床尿液样本中成功识别出5名UTI患者，而传统的基于培养的方法需要数小时。原文：https://doi.org/10.1039/D2AY00656Anaica® 六通道数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica® 六通道数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

导读据中国经济网近日报道，美国FDA针对印度某药企生产的眼药水发出警告，该眼药水可能导致细菌感染，造成失明甚至死亡。该款眼药水是人工泪液，用于润滑眼球。美国疾控中心已确认共有55名患者感染了一种罕见绿脓杆菌耐药菌株，其中5名患者永久性失明，1名患者因血液感染死亡。绿脓杆菌又称铜绿假单胞菌，是比较常见的一种致病菌，常引发呼吸道、胃肠道、尿道等感染。专家认为，本次感染是由于眼睛可以通过泪管与鼻腔相连，致病菌可以从眼睛进入鼻腔，再进入血液等其他体液或组织，从而导致疾病。使用岛津MALDI-TOF微生物鉴定系统，可以快速鉴定绿脓杆菌，守护明亮双眸。认识绿脓杆菌绿脓杆菌又称铜绿假单胞菌( Pseudomonas aeruginosa) ，是一种革兰阴性条件致病菌，抗药性较强，是一种重要的食源性和水源性致病菌，如蔬菜、水果、瓶装水、桶装水中均较常见。同时也是医院内常见的引发慢性感染和急性感染的致病菌之一，严重者可引发患者肺部功能衰竭以及纤维化囊肿。其引起的感染具有进展快、易耐药、病死率高等特点，所以快速准确的鉴定铜绿假单胞菌显得尤为重要。常见检测方法目前，传统的微生物检测方法有生化反应法和16S rRNA序列分析法。生化反应法主要依靠铜绿假单胞菌的生物学特征，通过分离培养结合生化检测等方法对细菌进行鉴定，需经过增菌、选择性分离培养、鉴定等步骤，不仅操作繁琐、检测时间长、费时费力，且容易延误诊断，难以满足快速诊断及治疗的需要。因此，致病菌的快速鉴定仍是临床微生物检验工作者面临的重要问题。MALDI-TOF质谱法是近年来广泛用于微生物快速鉴定的方法，微生物都有自身独特的蛋白组成, 因而拥有独特的蛋白质图谱。细菌蛋白主要取决于细菌自身的遗传因素, 受培养基、培养时间以及其他培养条件等外部因素的影响较小, 因而具有很好的稳定性和可重复性。常见检测方法比较表岛津解决方案MALDI-TOF微生物鉴定系统优势&bull 数据库使用岛津MALDI-TOF iDPlus Assurance、Confidence、Performance等多款仪器，采集待测微生物的核糖体蛋白质谱图，与数据库中的标准谱图进行匹配检索，可以快速的进行致病菌鉴定。数据库中含有3400种以上微生物的标准图谱，涵盖大部分常见细菌及真菌。同时还支持用户自行追加新的标准谱图，以满足数据库中未收录菌种的鉴定需要。自建库流程图（以绿脓杆菌为例）&bull MALDI-TOF质谱法检测速度快从质谱数据采集到给出鉴定结果最快只需数十秒。日常使用只需要基质、纯水及少量有机试剂，成本低廉。使用MALDI-TOF专用384孔靶板，可以单次高通量检测384个样品，同时靶板可重复使用。鉴定流程图微生物鉴定流程图绿脓杆菌鉴定案例使用MALDI-TOF采集绿脓杆菌质谱图，导入微生物鉴定数据库匹配检索，可以快速检测绿脓杆菌。绿脓杆菌质谱图绿脓杆菌数据库检索结果结语使用岛津MALDI-TOF iDPlus微生物鉴定系统采集菌株的核糖体蛋白质谱图, 与数据库比对后, 可以快速获得绿脓杆菌的鉴定结果，为科研分析或临床筛查提供依据。MALDI-TOF质谱法快捷、准确、成本低，将在致病菌快速鉴定与分析中, 发挥着越来越大的作用。本文内容非商业广告，仅供专业人士参考。

近日，天木生物DREM cell设备助力中国农大、清华大学完成蜜蜂肠道微生物单细胞高通量培养，实现菌株级别功能多样性研究。 各种不同的生态系统都存在微生物群落，典型的微生物群落包括土壤、海洋或江湖等环境微生物以及人体或动物肠道微生物等。其中，肠道微生物群越来越引起人类的重视，越来越多的证据表明人体肠道微生物群的组成和活性变化与多种疾病和生态表型有关，如糖尿病、肥胖、结肠炎和严重抑郁症等。因此，若研究肠道微生物与宿主的关系，则能够更好地了解肠道共生体对疾病的作用机制，指导从肠道微生物角度出发的新的治疗方法和策略的构建，以达到治疗或预防疾病的目的。 今年6月份，中国农业大学的郑浩团队和清华大学的张翀团队在 Microbiome 上发表了名为“Strain-level profiling with picodroplet microfluidic cultivation reveals host-specific adaption of honeybee gut symbionts”的研究论文，使用高通量皮升级液滴微流控细胞分选仪（DREM cell）开发基于液滴的微流控技术培养蜜蜂肠道微生物，验证了微流控液滴平台在肠道微生物培养组学中的可行性，为更复杂微生物群落的大规模研究铺平了道路。 （来源：Microbiome） 传统培养方式限制测序技术深入研究微生物的基因型和表型多样性复杂微生物群由多种微生物组成，这些微生物是多物种复合体的一部分。尽管属于同一属和种的微生物拥有一个共同的、且对于细胞功能和物种的生存至关重要的核心基因组，但它们仍然拥有相当数量的菌株特异性基因，导致它们在生理和毒性特性等方面的不同表型，这些差异菌株可能会在不同程度上改变肠道微生物群的功能，进而影响到宿主健康。 因此郑浩表示：仅在物种水平上研究微生物群落是不够的，需要深入调查基因型和表型的多样性。培养是微生物研究的基础方法之一，但实际上由于培养条件的不适合，或是缺少互利共生的个体，很少有微生物可以在实验室条件下轻松培养，对于复杂群落而言，往往也只能成功实现其中一部分占多数的，或快速生长菌株的有效表征，并且传统的培养方式通常是低通量的，丰富的菌株多样性往往会在这个过程中被掩盖。 幸运的是，越来越强大的测序技术出现了，该技术可更深入、更清楚地了解共生肠道微生物组的结构、功能和多样性。16S rRNA 基因测序（16S rRNA gene sequencing）和鸟枪法宏基因组测序（Shotgun metagenomic sequencing）是当前用于微生物群落分析的两种主要工具。 16S rRNA 基因测序一般用于通过选择性扩增和测序微生物 16S rRNA 基因的高变区来识别和分类微生物，可以通过相对少量的原始读长来获得有代表性的细菌分类学估计。其具有高通量，成本低的特点，并拥有相当多成熟的生物信息学工具。但这种方法的主要限制为分类群是根据基因组的单个区域的序列分配的，这导致了分辨率不足。此外，扩增引物的选择也影响很大，一些引物已被证明会导致特定分类群的代表性过高或过低，这可能导致对分类单元的表示存在潜在偏差。 鸟枪法宏基因组测序对从整个微生物群落中分离出来的所有微生物的基因组进行测序。它的优势在于通过收集有关广泛基因组区域的序列信息，能够支持在物种水平上进行更准确的定义，提供更高的分类分辨率。同时还能支持进一步进行菌株水平的重建，得到新的基因或基因组，并对它们进行功能注释和途径预测以产生微生物群落的详细描述。但这种方法成本较高，需要深度测序获得更高的覆盖度以达到令人满意的分辨率，以及更复杂的下游分析。“虽然基于测序的方法不限于可培养的微生物群，但 16S rRNA 基因测序方法在种内分析的分辨率上仍然极其有限，并且可能会被每个基因组的 16S rRNA 基因的多个不同拷贝混淆，这同样会造成对实际存在于环境中菌株功能的误判；鸟枪法宏基因组测序通过考虑更多标记基因或全基因组来提供更多信息，目前也已经开发了许多工具来分析宏基因组数据来解决这些问题，但来自取样时间的或空间的偏差往往需要更深的测序深度来弥补，但这也带来了急剧升高的成本。”郑浩说道。 液滴微流控平台可克服传统培养方式的缺陷因此，若有一种培养方法可突破传统培养方式的局限，则会大大减轻测序技术的压力。基于液滴的微流控平台或许是个不错的选择。液滴微流控微流控（Microfluidics）是指一种在微米尺度空间对流体进行操控的技术，在该技术下可以将化学、生物等实验室的基本功能微缩到一个几平方厘米芯片上，因此又被称为“芯片实验室”。作为微流控芯片研究中的重要分支，液滴微流控是一种在微尺度的通道内利用流动剪切力或表面张力的改变，将两种互不相溶流体中的离散相流体分割成纳升级及以下体积的微液滴，并驱动微液滴运动对其进行操控的技术。张翀表示：基于液滴微流控的特征，我们可以通过在直径为数十至数百微米并由不混溶的油和工程表面活性剂分割的介质液滴种划分微生物来消除群落培养中过度生长的快速增长种群的影响。由于微制造的物理孔或通道不会限制液滴，因此可以快速创建数百万个独立的培养系统实现单个肠道微生物体的高通量培养。这极大克服了传统培养方式的缺陷，为通过培养来表征来自肠道共生体的稀有类群提供了机会。为了证明微流控液滴平台在肠道微生物群研究中的可行性，郑浩和张翀团队将蜜蜂作为研究对象。原因是与其他动物相比，蜜蜂的肠道细菌简单且稳定，宏基因组分析也表明，虽然蜜蜂肠道由数量有限的细菌系统发育型组成，但仍然存在显著的菌株水平多样性，个别菌株具有独特的基因组潜力和关键能力，这些能力在功能上与宿主的营养代谢和健康相关，为在菌株水平分析肠道共生体与宿主关系提供了很好的模型。具体做法如下：首先，构建了一个微流体液滴平台，并产生了用蜜蜂肠道中的单个细菌细胞包裹的液滴；随后，收集液滴并进行孵育培养，确定了液滴中微生物的生长能力，宏基因组分析揭示了与常规测序方法相比蜜蜂肠道更高的菌株水平多样性，证明了微流体平台在分离和富集稀有微生物菌株方面的潜力。▲图丨微液滴生成（来源：郑浩）最后，结合分箱策略，得到了蜜蜂肠道微生物的大量基因组草图，并进行了功能预测和比较基因组分析。对双歧杆菌属的分析揭示了潜在分类单元的存在，它们在跨膜运输、肌醇利用以及多糖利用方面存在丰富的菌株多样性。研究人员还得到了来自 Lactobacillus panisapium 的新菌株，该菌种在以往的研究中被认为特异性来源于中华蜜蜂；通过进一步的基因组比较，发现来自西方蜜蜂的菌株中独特地含有一组与饮食阿拉伯糖利用相关的代谢基因簇，包括araf43A, rafB, abfA 和abfB，这可能与它对不同蜜蜂宿主的适应密切相关。 ▲图丨微流控液滴中蜜蜂肠道细菌的单细胞封装和培养（来源：研究论文）“总体而言，结果证明了基于液滴的培养在研究蜜蜂肠道微生物多样性方面的适应性，同时这种方法也有潜力适用于其他复杂群落，在稀有类群的获得以及功能鉴定方面发挥作用。”张翀说道。他补充道，对于肠道微生物，当前的研究主要集中在特定培养基质下的微流体液滴培养，结合 16s rRNA 扩增子测序以研究肠道微生物个体的膳食碳水化合物代谢或抗生素耐药性。我们的研究则着重于通过隔离培养以富集在常规状态下难以检测的稀有类群，结合宏基因组的测序和分析，以较高通量实现对肠道稀有微生物的发现，以及代谢途径和功能预测，提供关于宿主和肠道共生体关系的崭新理解。“未来，我们可能会通过调整液滴大小、改善培养条件和测序方法来研究肠道真核微生物，并实现对单胞的高通量识别，这将进一步扩大我们对肠道复杂成员的理解。同时，我们的流程也可以进一步应用于人类肠道共生体的研究，扩展对人类肠道稀有类群以及它们与健康关系的认知和了解。”相关产品 研究团队所使用的液滴微流控细胞分选仪（DREM cell）是天木生物基于液滴微流控技术开发的皮升级液滴微流控单细胞分选平台，可将待筛选细胞进行包被形成单细胞微液滴，结合荧光筛选模型，可以在细胞水平完成微生物的高通量分离、培养、检测、分选等。 ▲图丨液滴微流控细胞分选仪（来源：天木生物） ‍ 高通量皮升级液滴单细胞分选系统（DREM cell）相比于传统筛选方法，筛选效率可提升1万倍，试剂消耗量可下降至百万分之一，在筛选通量显著提升的同时，单克隆筛选成本大幅度降低。该仪器不仅可广泛应用于细菌、酵母、动物细胞等的高通量筛选，还可以应用于蛋白、核酸、抗体等生物大分子筛选等相关研究领域。 项目技术参数液滴体积1-1000pL荧光激发与检测可选波段：（1）激发波长488nm，检测波长525±15nm，灵敏度1μM荧光素/单液滴（2）激发波长532nm，检测波长578±11nm，灵敏度100nM试卤灵/单液滴液滴生产频率0-10000个/s液滴分选频率0-1000个/s微注入速度0-1000个/s样品低温控制系统4℃恒温控制，±0.5℃工作环境常压状态下，室温，30%≤湿度≤80%，洁净暗室整机功率600W应用范围细胞、酵母、细菌、蛋白、核酸等 参考资料：1.https://blog.csdn.net/woodcorpse/article/details/125118043具有菌株分辨率的高通量、单微生物基因组学，应用于人类肠道微生物组|科学 (science.org)

国家卫健委日前发布2020年第9号公告，其中“马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种”乳杆菌被列为新食品原料。据悉，这是天津科技大学王艳萍教授科研攻关的成果，是我国首次分离得到、全球首株完成全基因组测序、具有自主知识产权的新乳杆菌，对酸奶及益生菌等发酵食品升级品质、改善口感、清洁标签等将起到提升作用。　　原料天然化、黏稠度和细腻口感是酸奶品质的高地。在欧洲，酸奶生产商通常使用特殊功能的乳酸菌来提高酸奶质地的“黏性”，同时，许多国家禁止在发酵乳中添加增稠剂、稳定剂，对天然酸奶的追求已成为未来市场趋势。　　酸奶等益生菌发酵食品以其较高的营养价值和容易被人体吸收等特点受到人们青睐，我国每年包括酸奶在内的益生菌类食品市场都保持了两位数的增长，高品质酸奶成为乳品新消费需求。“挖掘中国微生物宝库资源，研发胞外多糖乳杆菌，解决酸奶不添加增稠剂而获得味蕾舒适的黏性及口感，使中国益生菌食品行业与国际接轨，助推产业优质化发展。”王艳萍把酸奶新型乳杆菌目标定位为对胞外多糖乳酸菌的研究和开发，利用微生物的筛选技术，获得高产胞外多糖的乳酸菌，通过对其产糖分子机制的研究，最终发现了马奶酒样乳杆菌ZW3胞外多糖合成的途径及其关键基因的作用。　　经过近20年科学研究，在4次国家自然基金及多项省部级科研基金支持下，研发获得成功，在国内外学术期刊上发表文章论文30余篇。王艳萍通过收集、分离、功能确认菌株，到菌粉生产工艺、菌粉的稳定性、菌粉产品应用等一系列研究，对ZW3菌株高产胞外多糖的分子学机制、结构、性能及功能等方面进行了全面深入的研究，为该菌株在发酵食品、乳品、功能性食品、保健食品、化妆品以及微生态药物等领域的广泛应用奠定了坚实的基础。　　马奶酒样乳杆菌ZW3是全球研究最深入和最全面、首株完成全基因组测序的马乳酒样乳杆菌，通过其自身代谢产物实现酸奶黏度增稠，可以避免因添加增稠剂和稳定剂影响发酵乳制品的口感及质量，使酸奶更美味和优质。　　王艳萍介绍，乳酸菌胞外多糖具有独特的物理学和流变学特性以及公认的食用安全性，是天然的生物增稠剂，可以替代目前正在应用的、来源于非食品级细菌的稳定剂或增稠剂，在发酵乳品加工中具有重要用途，能提高干酪得率、降低酸奶凝胶脱水收缩现象，解决酸奶生产中常出现的凝胶易断裂、黏稠度低、乳清易析出等质量问题。　　据该菌种申报单位诺佰克（武汉）生物科技有限公司的专家介绍，该乳杆菌是具有优异食品加工性能与调节肠道、精神健康等多种益生功能于一体的多功能菌株，有高产胞外多糖的特性，在食品中应用能减少稳定剂、增稠剂的使用，打造清洁标签，升级产品；可去除或减少发酵过程中产生的亚硝酸盐，提高产品安全性；还在调节肠道健康、提高免疫、抗氧化等方面具有多种功能。许多乳品行业专家都认为此乳杆菌是“小菌种，大作为”。

大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一。而检测食品中大肠菌群的方法中，国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准，国家标准的三步九管法，即乳糖发酵试验、分离培养、证实试验。 由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。1.乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。2.分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。3.证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。 在乳糖发酵试验工作中，经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡（有时比小米粒还小），有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。 在试验过程中，会用到高压灭菌器来进行灭菌，九管法灭菌时，大肠菌在高温下会产生气泡，如果用的是ALP高压力灭菌锅，可以通过进入工程师菜单，调整在升温过程中的排气时间，可以有效的排走残留在培养基中的气泡。初始界面灭菌中灭菌结束 培养基中有气泡 目前市面上，高压灭菌器品种繁多，有进口的有国产的高压灭菌器，高压灭菌器产品质量参差不齐。在业内质量口碑最好的当属东南科仪总代理的日本ALP高压灭菌器，日本ALP高压灭菌器具备《进口压力容器生产许可证》、《进出口锅炉压力容器安全性能检验证书》以及高压灭菌器上的压力表和减压阀，送当地计量部门计量后取得计量证书。 ALP高压灭菌器开关轻松简便，电子锁仅在通电时才可开启，避免因断电或关机时意外泄漏未灭菌物质。高压灭菌器可清晰显示所处的状态，如温度、压力、程序及操作过程中的其它相关信息。高压灭菌器脉冲空气净化反复进行，直至压力高于对应温度而产生过饱和蒸汽压保证灭菌效果。ALP高压灭菌器可根据被灭菌物质的情况调整蒸汽排放情况，ALP高压灭菌器具备快速冷却功能可使灭菌后快速降温到80℃以下的安全温度。ALP高压灭菌器通过真空泵及经0.2um的滤膜过滤后的热空气快速干燥样品，使其快速可用。高压灭菌器标配物温探头安装孔，选配物温探头，方便进行内部灭菌效果的验证。ALP高压灭菌器三重脉冲，预真空设备配置强大的真空泵强行排空腔内留存的空气，使饱和蒸汽良好的渗透入灭菌物品中，从而确保充分有效的灭菌效果。 更多详细参数可关注ALP高压灭菌器中国总代理：东南科仪！

综合韩媒报道，韩国京畿道安山市一家幼儿园近日发生大规模食物中毒事件，截至27日，出现腹痛、呕吐、腹泻等食物中毒症状的孩子、家人和老师共111人，部分学生还出现了溶血性尿毒综合征症状。 溶血性尿毒症综合征，俗称“汉堡病”，因1982年美国儿童食用未熟的汉堡集体食物中毒而得名。致病原因主要为食用被污染或者没熟透的食物，免疫力较低的孩子和老人容易感染。若病情恶化至损伤肾脏，只能靠透析维持生命，1950年代，病死率一度高达40%～50%，近年来由于改进了对急性肾衰竭的治疗，病死率已下降至5~15%左右。 肠出血性大肠杆菌(EHEC)是可引起较严重的健康危害的致病菌，肠出血性肠杆菌感染是一种人畜共患病。大肠杆菌O157:H7是EHEC中最常见影响最广泛的致病性大肠菌，它除引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。自1982年美国首次发现因该致病菌引起的食物中毒以来，肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延，相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻爆发和流行。我国已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到大肠杆菌O157:H7。大肠杆菌STEC是肠出血性大肠杆菌的一类，能产生志贺毒素的非O157：H7大肠杆菌，包括了在日本出现的E.coli O111以及2011年在德国及欧洲其他国家出现的E.coli O104。这类大肠杆菌感染后，可引起自限性腹泻、出血性结肠炎和溶血性尿毒综合症（HUS）。一般寄生在牛、羊等家畜和其他反刍动物体内，人类主要是通过未经烹调烹调不彻底的肉类和奶制品等被感染。 食安科技针对于肠出血性大肠杆菌检测国内早期已推出大肠杆菌O157检测板、大肠杆菌O157测试片和大肠杆菌STEC测试片，适合于餐饮配餐企业、食品生产企业、校园食品安全、疾控中心、动物饲料质量安全等单位的使用。 大肠杆菌O157检测板 大肠杆菌O157测试片 大肠杆菌STEC测试片

随着重组DNA技术的迅猛发展，外源基因在不同宿主中的表达使得各种重组蛋白的工业生物生产成为可能。选择合适的宿主是生物工艺设计中的关键步骤之一，具体取决于：1.上游培养效率2.易于基因编辑和分子工具的可用性3.翻译后修饰的能力，如糖基化4.蛋白质（用于下游加工和作为生物制药成分等）的分泌能力目前，多种生物已被应用于重组蛋白的生产，尤其是大肠杆菌，易于基因改造，具有在酵母水解物等多种基质上快速生长并产生高蛋白滴度的优势。已成为迄今为止业界追捧的主力军。典型的生物工艺优化通常需要进行一些初步试验，以发现适用于宿主菌株并提高目的重组蛋白表达的培养基成分（特别是氮基营养素）。对于此类应用需求，能够提高实验效率和参数准确度的高通量筛选平台成为热门工具。贝克曼库尔特BioLector通过在线测量关键培养参数提供可放大的高通量分析。本案例为通过BioLector对多种酵母营养素就生物量生长和重组蛋白的形成进行评估和比较，筛选出了适合大肠杆菌重组蛋白生产和诱导时间的理想培养基。方法培养菌株：大肠杆菌BL21(DE3)pET-28a(+)EcFbFP。培养基：以标准TB培养基（Carl Roth）为参照物，对多个TB 样（Terrific 液）培养基进行比较。不同的TB 样培养基使用不同的酵母提取物。BioLector培养条件：在接种至微孔板之前，先在250 mL摇瓶中进行预培养， 37°C培养6小时。然后使用48孔梅花板（MTP-BOH2）在 BioLector中进行培养。温度 37°C ，振摇速度：1400 rpm。分别在每个培养孔中填充800μL培养液用于非诱导实验，填充790μL用于诱导实验。诱导实验中，在诱导时间点上添加 10μL 50μM 的 IPTG。环境氧气浓度保持在35%，避免培养物缺氧。BioLector在线测量：培养过程中对生物量、EcFbFP(黄素荧光蛋白)、pH以及 DO进行在线测量。结果不同TB样培养基的生物量生长情况：培养实验中，不同酵母营养素的培养基中生物量的生长情况如上图所示：培养基不同，最终的光密度和生长速率也会不同。ProCel 6 中的大肠杆菌OD最高，培养基 ProCel 3 中的大肠杆菌的OD低。ProCel 6为本特定工艺的最高生长速率。上图为培养过程的DO值。培养基 ProCel 3 和 ProCel 4 中的培养物未达到0%的氧饱和度，这表明由于耗氧量有限，该培养基中的菌株代谢活性较低。相反，其他培养物包括TB标准培养基，均在短时间内达到0%的氧饱和度，表明菌株代谢活性高。不同酵母营养素TB样培养基的产物生成：通过将IPTG 添加到培养物中来诱导 T7 聚合酶的表达促进黄素荧光蛋白的生成。BioLector使用梅花板为48个培养物提供了独立的培养空间，因此可测试不同的诱导时间点。使用自动化工作站整合BioLector后的 RoboLector 系统还可以自动进行培养诱导。首先选择一个固定的诱导时间点。分别为培养启动后的3小时、3.75小时和4.5小时。下图所示为每种TB样培养基在诱导时间下所测荧光的平均值。荧光动力学清晰地表明不同培养基有不同的EcFbFP（黄素荧光蛋白）表达水平。表现出最强荧光信号的两个样本为：ProCel 2，诱导点为3.75小时；ProCel 5，诱导点为 3 小时。经过 7.7 小时的培养，ProCel 5 的荧光值达到102.94a.u.，而ProCel 2 的荧光值达到 101.82 a.u.。本方法的不足之处在于未比较不同样本的生物量对蛋白质产量的影响。经过3小时的培养，一些培养物的OD已达到6，而其他培养物仅达到3。当诱导具有不同光密度的培养物时，可能会对在每种酵母营养素上生长的实验大肠杆菌的蛋白质生产性能造成误解。鉴于此，我们采用了一种新方法，将诱导点与生物量信号耦合。使用BioLector的信号驱动RoboLector，依赖于特定生物量的诱导对于每个单独的孔都是可行的。为自动化工作站设置3、6或8的OD目标值，以根据孔内培养物的生长动力学自动添加IPTG以诱导蛋白质生产。如下图所示，ProCel 2表现最佳，最终值为 146.23 a.u.，培养时间是 12.3 小时；ProCel 5表现次之，最终值为138.1 a.u.。与之前进行的一系列实验相比，本实验中的排名与在特定时间点进行诱导的实验不同。这一观察证明了最佳工艺条件的重要性，并使这些条件具有可比性。此处数据表明：与之前的实验相比，本实验中的荧光值更高。正如该领域诸多论文中所强调的那样，诱导时间确实是一个关键参数。同样，在优化大肠杆菌重组蛋白生产的过程中，也必须评估诱导剂的浓度。另外，与对照TB培养基相比，这里测试的一些酵母氮源产生了更高的重组蛋白产量。这些结果凸显了选择培养基成分的重要性，这些成分能够在特定的生物工艺中实现高而稳定的产量。结论通过BioLector系统，贝克曼库尔特可为用户提供适用于各种应用领域的高通量筛选平台。其独特的梅花形微孔板尤其适用于好氧培养，如同实验室生物反应器，BioLector系统通过非侵入式传感器使客户能够获取更多的在线测量参数。正如本应用，通过BioLector系统可轻松实现培养基的筛选，整合自动化工作站的RoboLector，还可实现更多功能。补料、pH调控以及文中所述的诱导功能，所有这些均可在小规模实验中实现，帮助客户同时兼顾成本和效率。RoboLector高通量自动化微型生物培养平台欲了解该应用详情，请扫描下方二维码下载应用指南《利用BioLector进行大肠杆菌重组蛋白生产用酵母营养素的筛选》

鲍曼不动杆菌的治疗和研究进展！鲍曼不动杆菌感染的治疗一直是临床上很大的难题，因为鲍曼不动杆菌极易对各种消毒剂和抗菌药物产生耐药性，对重症患者、ICU病房的患者等威胁很大。MDR-AB（多重耐药鲍曼不动杆菌）、PDR-AB（泛耐药鲍曼不动杆菌）、CRAB（耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌）等的广泛传播更是成了医生和患者的噩梦。 在院内感染中，不动杆菌属的感染占有较高的比例，而在院内提取到的不动杆菌属的菌株，绝大多数为鲍曼不动杆菌。鲍曼不动杆菌为革兰氏阴性菌，故对万古霉素等存在固有耐药，对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、氯霉素、四环素、diyi及第二代头孢菌素也保持着较高的耐药率。通常情况下，对鲍曼不动杆菌有较强作用的药物主要有抗绿脓杆菌的青霉素类、第三和第四代头孢菌素（主要是头孢他啶、头孢吡肟等）、碳青霉烯类、β-内酰胺类抗生素复合制剂（头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等）、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、替加环素、多粘菌素、舒巴坦等。但是因为近年来抗菌药物的滥用，鲍曼不动杆菌对以上药物的耐药率也在不断上升，氟喹诺酮类、氨基糖苷类等耐药率甚高，碳青霉烯类的耐药率也有上升。 考虑到鲍曼不动杆菌极易对抗菌药物耐药，故用药时应联合用药。常用的方案有β-内酰胺类+氟喹诺酮类、β-内酰胺类+氨基糖苷类等。我个人shouxuan的方案为头孢哌酮/舒巴坦+磷霉素（时间差攻击疗法），也可选择氨苄西林/舒巴坦+环丙沙星等）。 研究进展 随着医学技术的飞速发展，对疾病特别是危重病的救治水平不断提高，广谱抗生素的广泛使用是其重要手段之一。但是，临床治疗中滥用抗生素现象非常普遍，在抗生素的强大压力下，不可避免地产生大量耐药菌株，这些耐药菌株已成为当代医院感染的棘手问题，从本组资料结果显示，鲍曼不动杆菌对亚安培南、美罗培南的耐药率相对较低，原因是碳青霉烯类药物对青霉素结合蛋白（PBPS）亲和力强。　　但仍有少部分鲍曼不动杆菌对其耐药，原因可能是其能产生一种能水解碳青霉烯类药物的β-内酰胺酶ARI-I，这无疑是一个可怕的信号。此外，与头孢哌酮/舒巴坦的化学结构不同或鲍曼不动杆菌的多重耐药性表达形式不同有关。而对喹诺酮类抗生素耐药率达60%以上，这可能是近年来喹诺酮类药物的广泛应用引起抗菌药物介导的耐药性基因突变，编码DNA旋转酶的gyra 或gyrb基因发生突变被认为是细菌产生耐药的主要原因。此外，氨基糖苷类抗生素的耐药率皆较高，这可能是本院普遍应用该类抗生素出现的耐药，给临床治疗带来了巨大的困难，因此，应注意各类抗生素的合理应用。 试验结果表明，临床上不动杆菌感染中，鲍曼不动杆菌占绝大多数(75.0%)，其次为醋酸钙不动杆菌、洛菲不动杆菌、琼氏不动杆菌，与有关报道不一致，可能是由于不动杆菌属的命名较混乱，分类原则及鉴定系统不同所致。在4种不动杆菌的鉴定中，41℃培养时生长，苹果酸盐同化试验阳性，可初步鉴定为鲍曼不动杆菌与琼氏不动杆菌，两者的区别在于前者苯乙酸盐同化试验阳性，且氧化木糖，而后者不氧化木糖，且苯乙酸盐同化试验阴性。41℃培养时不生长，癸酸盐同化试验阳性，可初步鉴定为醋酸钙不动杆菌与洛菲不动杆菌，两者区别在于前者枸橼酸盐、苯乙酸盐同化试验均阳性，而后者均阴性。　　从72株鲍曼不动杆菌的来源看，其感染部位分布广泛，如呼吸系统、泌尿系统、伤口、腹腔及神经系统等。其中以呼吸系统感染占多数(54.2%)。不动杆菌是近几年医院内感染出现率较高的菌属，其中鲍曼不动杆菌所引起的感染应引起重视。 2001～2005年对12种抗菌药物的药物敏感监测显示，12种药物对鲍曼不动杆菌的耐药率呈总体上升趋势，耐药率zuijin的IMP，其耐药率从2001年的6.5%上升至2005年的31.7%，头孢菌素类（CAZ、CFP、FEP）的耐药率从2001年的20.0%、38.6%、31.5%上升至2005年的66.7%、72.4%、67.7%；PIP、SXT、ATM、CIP、TZP、LEV耐药率也从2001年的19.6%～60.2%增加到2005年的52.2%～72.1%；耐药率下降的有TOB和GEN 2种药物，其耐药率分别从2001年的62.8%和63.6%下降到2005年的48.2%和45.2%，这可能与这类药物临床上现在不常使用有关。从表3可见，ICU 12种药物的耐药率明显高于非ICU，差异存在非常显著性（P0.01），在ICU耐药率较低的是IMP和TZP，耐药率分别为41.7%和53.3%，除此外其余抗生素的耐药率均在70.0%以上，由此可见，ICU鲍曼不动杆菌耐药现象已十分严重，且表现为多重耐药。这与鲍曼不动杆菌产生多种酶有关：对头孢菌素类的耐药，主要是产超广谱β-内酰胺酶；对亚胺培南耐药，主要与产金属β-内酰胺酶有关；喹诺酮类的耐药主要与gyrA和parC基因突变有关。 综上所述，鉴于近年鲍曼不动杆菌的耐药率有进一步上升的趋势，这应当引起临床医师及微生物界的高度重视。为减少该菌医院感染的发生及多重耐药菌株的出现，我们应对医疗器械进行严格彻底的消毒及对鲍曼不动杆菌进行规范的连续监测，弄清其耐药机制并及时监测其耐药情况。同时，临床医师应重视获得性鲍曼不动杆菌感染，与临床微生物实验室密切协作，加强耐药性的监测，有效预防和控制感染。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

幽门螺杆菌是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的革兰氏阴性细菌，1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检组织中分离成功。世界上有约一半的人感染了幽门螺杆菌，但很多没有临床症状。幽门螺杆菌及其患病率在某些人群中高达80％。幽门螺杆菌可能通过接触感染者的唾液、呕吐物或粪便传播，食用受污染的食物或水也会感染。大多数感染幽门螺杆菌的人都是在儿童时期感染的。幽门螺杆菌感染可导致慢性胃炎、消化性溃疡病（PUD）、胃癌和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等胃肠道疾病。它还可能与非消化系统疾病有关，如口臭、身材矮小、营养不良和儿童难治性缺铁性贫血。根除幽门螺杆菌有助于治疗慢性胃炎、PUD 和其他相关疾病，并降低患胃癌的风险。 近期，重庆医科大学附属儿童医院消化科主任李中跃老师课题组在欧洲儿科医学期刊《European Journal of Pediatrics》上发表Antibiotic resistance of Helicobacter pylori isolated from children in Chongqing, China的研究论文，研究团队对重庆地区儿童幽门螺杆菌耐药性进行了分析。 研究背景幽门螺杆菌 (H. pylori) 感染是人类最常见的慢性细菌感染之一，作为幽门螺杆菌的一线治疗方案，标准的三联疗法包括一种质子泵抑制剂(PPI) 和两种抗生素：克拉霉素和阿莫西林（如果对青霉素过敏，可以用甲硝唑代替阿莫西林）。首次引入该疗法时，它达到了很高的根除率（ 90%）。然而，近年来该方案在世界许多地区的疗效一直在下降，根除率156例疑似幽门螺杆菌感染患儿进行胃活检，在调查前的最后2个月内，所有儿童均未服用任何H2受体拮抗剂、PPI、铋和抗生素。通过上消化道内镜在胃窦处采集胃黏膜活检标本，样本经处理培养后，对疑似透明菌落通过革兰氏染色和脲酶、过氧化氢酶、氧化酶活性试验鉴定，然后确定幽门螺杆菌。抗生素药敏试验：采用琼脂稀释法检测幽门螺杆菌菌株对六种抗生素（克拉霉素、甲硝唑、左氧氟沙星、阿莫西林、四环素和呋喃唑酮）的耐药性。将幽门螺杆菌悬浮液接种到含有5% 羊血和临界浓度的单一抗生素的培养板上，然后在微需氧条件下在37°C 下孵育 3 至 5 天。抗生素折点（breakpoints）为克拉霉素≥1.0 μg/mL、甲硝唑≥8.0 μg/mL、左氧氟沙星≥2.0 μg/mL、阿莫西林≥2.0 μg/mL、四环素≥2.0 μg/mL、呋喃唑酮≥2.0 μg/mL。试验中ACTC11637用作对照菌株。23S rRNA 和 gyrA 基因的突变分析：提取分离菌株的DNA，设计引物用于扩增23S rRNA 和 gyrA 基因。使用 BIO-GENER PCR 扩增仪进行PCR扩增，最后对PCR 产物进行鉴定，并进行 Sanger 测序以检测 23S rRNA 中 2143、2142 位、gyrA 基因中 87 和 91 位密码子的突变。统计学分析：数据采用SPSS 26.0统计软件进行分析。不同性别、年龄组和内镜检查结果的耐药发生率采用卡方检验（χ2 检验），概率（p）值≤0.05被认为具有统计学意义。其中，基因扩增实验中用到的PCR扩增仪来自柏恒科技。 结果研究显示，共分离出112株（71.8%）幽门螺杆菌。有56名男孩和56名女孩，所有儿童的平均年龄为9.6±3.0岁，范围为3.0至17.9岁。112例患者中，最常见的症状是腹痛（77.7%），内镜下主要表现为幽门螺杆菌相关性胃炎（86.6%），仅有15例患者出现十二指肠溃疡。在 112 个样本中，102 个菌株检测到 23S rRNA 和 gyrA 基因的突变。A2143G突变率为48.0%（49/102）；没有发现任何 A2142G 突变。gyrA基因突变率为16.7%（17/102），在17株菌株中，对应Asn87和Asp91的突变率分别为9.8%（10/102）和6.9%（7/102）。研究人员还发现11株同时具有23S rRNA和gyrA基因突变。没有观察到 Asn87 和 Asp91 突变之间的 MIC (最低抑菌浓度)值有显著差异(p0.05)。讨论许多国家都报道了儿童对克拉霉素的耐药性，其患病率从 16.0% 到 50.9% 不等。在该研究中，克拉霉素的耐药率为47.3%，高于中国其他地区以往报道（16.4-31.8%），但低于北京（84.9-96.6%）。欧洲的一项多中心研究分析了门诊社区中抗生素使用与抗生素耐药性之间的关系，以治疗幽门螺杆菌感染，并表明长效大环内酯类药物的使用与幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性相关。在大环内酯类中也观察到强烈的交叉耐药性。因此，中国幽门螺杆菌感染儿童对克拉霉素的高耐药性可能归因于大环内酯类药物在呼吸系统和其他疾病中的频繁使用。 在临床实践中调节和限制大环内酯类的给药可能有利于降低高耐药性。重庆市幽门螺旋杆菌感染儿童对克拉霉素、甲硝唑和左氧氟沙星耐药率较高。大多数克拉霉素耐药菌株均检测到A2143G突变，而gyrA突变点的Asn87和Asp91在左氧氟沙星耐药菌株中常见。在临床实践中，抗幽门螺杆菌治疗应根据药敏试验个体化。 在今天的介绍中，我们了解了关于幽门螺杆菌耐药一些情况及背后分子层面机理，对于我们预防和治疗幽门螺杆菌提供了不少信息。分子层面研究可以用到的PCR仪简介如下，欢迎咨询了解更多。 PCR仪产品简介 RePure系列智能二维梯度PCR仪本系列PCR仪具有二维梯度摸索功能，多种梯度摸索模式；自适应压杆式热盖，合盖紧盖一步到位；前进后出式风道，机器可并排放置，节约实验空间； Q3200系列荧光定量PCR仪本系列荧光PCR仪采用四通道双16孔模块设计，可实现一机多用；最大升降温速率8℃/s，大大节约实验时间；体积小，重量轻，方便携带；

使用超高效合相色谱(UPC2)分析短杆菌肽 Sean M. McCarthy, Andrew J. Aubin, 和 Michael D. Jones 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用效益 ■ 快速分离短杆菌肽 ■ 载量线性响应 ■ 准确、高精度分析短杆菌肽的方法 ■ 有可能用于其它疏水性肽和蛋白质 沃特世解决方案 ACQUITY UPC2系统 ACQUITY® SQD ACQUITY UPC2 CSH氟苯基色谱柱 Empower&trade 3软件 关键词 超高效合相色谱、UPC2、疏水性肽、短杆菌肽 简介 用反相液相色谱(RPLC)分析疏水性肽和蛋白质难度很大，因为溶液中经常需要使用洗涤剂保持疏水性物质的稳定性，而这些洗涤剂容易发生聚集和/或沉淀，严重影响它们的回收，这些因素以及其它原因使得难以用RPLC分离疏水性肽和蛋白质。 在本应用纪要中，我们为您介绍一种在ACQUITY UPC2TM系统上使用沃特世(Waters® )超高效合相色谱技术分离典型跨膜肽-短杆菌肽的方法。 短杆菌肽是由芽孢杆菌产生的一种常见和已被良好表征的跨膜肽物质，它被用作对抗革兰氏阳性和某些革兰氏阴性细菌的局部用抗生素，短杆菌肽包括通用组成为甲酰-L-缬氨酸-甘氨酸-L-丙氨酸-D-亮氨酸-L-丙氨酸-D-缬氨酸-L-缬氨酸-D-缬氨酸-L-色氨酸-D-亮氨酸-L-X-D-亮氨酸-L-色氨酸-D-亮氨酸-L-色氨酸-氨基乙醇的一族化合物，其中X取决于短杆菌肽分子，即分别占总短杆菌肽量约87.5%、7.1%和5.1%的革兰氏A(X=色氨酸)、革兰氏B(X=苯丙氨酸)和革兰氏C(X=酪氨酸)，1需要交替的D和L氨基酸单元构成_-螺旋状。 我们研究了色谱柱化学品、流动相改性剂和梯度斜率对分离短杆菌肽的影响。采用优化方法分离市场上销售的非处方药物(OTC)，将测定的短杆菌肽浓度与标示量进行对比。采用质谱仪测定短杆菌肽的浓度，采用选择离子谱表征每种物质。在ACQUITY UPC2系统上使用我们的方法，可得到线性和可重复的结果&mdash &mdash 测定的OTC制剂浓度为标示量的98.4%。 试验 测试条件 除非另有说明，以下是用于所有色谱最终方法的最佳条件。 UPC2测试条件 UPC2系统: ACQUITY UPC2 检测器： PDA、ACQUITY SQD PDA @ 280nm,分辨率为6 nm(补偿400至500 nm) 色谱柱： ACQUITY UPC2 CSH 氟苯基,3.0 x 100 mm, 1.7 &mu m 柱温： 50 ° C 样品温度： 15 ° C UPC2 ABPR: 1885 psi 进样量： 1 &mu L 流速： 2.0 mL/min 流动相A： CO2 流动相B： 含0.1%TFA的甲醇(除非另有标示) 梯度： 20%至30% B，1.5min SQD条件 离子源： ES+ 锥孔电压： 20 V 毛细管电压：3.7kV 源温度： 150 ° C 脱溶剂气温度： 500 ° C 脱溶剂气体流速： 400 L/hr 锥孔气体流速： 25 L/hr SIR: 922.6,930.3,941.9 数据管理 Empower 3软件 样品描述 用解硫胺素芽孢杆菌(短芽孢杆菌)制备的短杆菌肽从Sigma Aldrich公司购买，将样品溶解在甲醇中制成0.5mg/mL浓度的溶液，如需要，可用甲醇稀释。含有短杆菌肽的非处方软膏是从当地药店购买的。将0.2g软膏溶解在10mL正己烷中，然后用5mL甲醇萃取短杆菌肽，去除甲醇层，用0.2-&mu m的烧结玻璃盘过滤，然后直接进样ACQUITY UPC2系统。 结果与讨论 我们系统性地筛选了四种色谱柱，测定哪种分离效果最佳，结果如图1所示，色谱柱筛选过程可在1小时内非常快速地完成。在我们设定的筛选条件下，BEH 2-EP和BEH色谱柱未检测到谱峰，由于其它色谱柱表现出合适的色谱性能，因而未对这两者的非洗脱原因深入研究，其中ACQUITY UPC2 CSH氟苯基色谱柱检测的色谱峰形最佳，因此采用该色谱柱继续研究。 图1.通过短杆菌肽标准物的色谱峰形和保留时间筛选各种化学特性色谱柱。所有色谱柱规格为3.0x100mm，填装亚-2-微米填料；所有分离条件都采用流动相 A：CO2、流动相 B、含0.1% FA的MeOH、2 mL/min, 3%B至25% B，5min。 为了分离短杆菌肽物质，对酸性改性剂的影响进行了研究，结果表明：使用三氟乙酸(TFA)可得到稍好的峰形，提高了短杆菌肽A和短杆菌肽C之间的分离度，结果如图2所示。已知TFA会抑制质谱电离，但每种物质的信号都足以定量检测治疗制剂，后续将对此进行讨论。对于要求更高灵敏度的应用，可能需要降低TFA浓度或使用甲酸，以达到希望的检测限值。 图2.酸性改性剂对分离短杆菌肽的影响。 当设置好合适色谱条件后，通过减少梯度时间优化分离过程，结果如图3所示，我们能够在1.5分钟时间内使每种短杆菌肽组分的分离度达到1.4或更高，在相同流速下通过减少运行时间增加梯度斜率，不但实现有效分离，同时还将短杆菌肽A的信噪比从336提高至605。 图3.UV 280-nm痕量检测优化分离短杆菌肽A、B和C。 我们测试了最佳分离条件，能够使用单四极杆质谱(SQD)检测每种物质，图4显示：每种物质都被质谱良好分离和检测到，另外每种短杆菌肽物质都显示含有绝大多数的M+2H离子，后续的研究将使用这些参数进行选择离子监测。 图4：每种短杆菌肽物质的总离子图谱-A和加合离子图谱-B-D。选择强度最高的离子评估市场上销售的抗菌制剂中的短杆菌肽含量，对于多肽序列，红色残基是L型同分异构体，黑色残基是D型同分异构体。 为了评估我们的方法是否适用于定量分析市场上销售的非处方药中的短杆菌肽，我们在ACQUITY SQD上使用选择离子监测，结果如图5A所示。我们绘制浓度-峰面积曲线，得到每种物质的校正曲线。结果发现：如图5B-D所示，每种成分在测试范围内都呈线性响应。另外还使用校正曲线测定了非处方药物中的每种短杆菌肽物质浓度。 图5，图A-25.0、12.5、1.25和0.625mg/mL浓度的标准溶液中含有短杆菌肽物质的叠加选择离子谱。图B、C和D-每种短杆菌肽A、B和C各自的MS峰面积线性拟合图。 使用开发的方法评估非处方药物中的短杆菌肽物质的浓度和相对丰度。如图6所示，重复分析结果表明：每种短杆菌肽%RSD值小，计算浓度与标签上的标称值相吻合；我们还发现短杆菌肽物质的相对丰度与文献报道的丰度非常吻合1。 图6. 从抗菌软膏中萃取的短杆菌肽A、B和C的叠加选择离子谱重复进样分析的计算RSD值(N=3)在可接受限值以内，计算丰度与文献报道数值非常吻合1。 结论 正如本应用纪要所展示的，ACQUITY UPC2系统与ACQUITYUPC2色谱柱化学结合使用，可为短杆菌肽提供简单、准确和可重现的分析方法。该工作表明ACQUITY UPC2系统可用于分析疏水性肽，还可能用于分析疏水性蛋白质，例如膜蛋白。 参考文献 1. The Merck Index and Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals.13th ed. Whitehouse Station, NJ : Merck Research Laboratories 2001. 关于沃特世公司 (www.waters.com) 50多年来，沃特世公司(NYSE:WAT)通过提供实用和可持续的创新，使医疗服务、环境管理、食品安全和全球水质监测领域有了显著进步，从而为实验室相关机构创造了业务优势。 作为一系列分离科学、实验室信息管理、质谱分析和热分析技术的开创者，沃特世技术的重大突破和实验室解决方案为客户的成功创造了持久的平台。 2010年沃特世拥有16.4亿美元的收入和5,400名员工，它将继续带领全世界的客户探索科学并取得卓越成就。 联系人： 叶晓晨 沃特世科技（上海）有限公司 市场服务部 xiao_chen_ye@waters.com 周瑞琳(GraceChow) 泰信策略(PMC) 020-83569288 13602845427 grace.chow@pmc.com.cn

炎炎夏日里，能来上一杯清凉的啤酒，简直是无比畅爽！但是，你知道吗？为了保持啤酒的高品质，啤酒厂需要进行生物质量控制。由于乙醇含量高、酸度高、溶氧含量低、二氧化碳含量高，啤酒看起来似乎不太适合腐败和病原微生物生长，煮沸、巴氏杀菌、无菌过滤和冷却等生产流程也进一步降低了微生物生长的可能性。但是，事实上细菌和野生酵母等可以在这样恶劣的条件下茁壮成长，从而形成不良味道、气味、烟雾和沉积物，这一过程可能会发生在酿造的任何阶段，影响啤酒的最终感官特征。啤酒厂的微生物爆发会给企业带来很大的风险，轻则花费大成本召回不合格产品，重则对品牌声誉带来致命损害。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）法，是一种快速、高通量、高准确度鉴定微生物的技术，目前已经被应用于啤酒厂中，进行质量控制中啤酒腐败微生物的鉴定。然而，MALDI-TOF MS法的适用性受到混合培养物相关问题的阻碍，使得技术人员在鉴定之前需要耗费很长时间去做微生物选择性培养。南澳大利亚大学未来工业研究所进行了一项研究，提出了一种新型的低成本方法，将惯性微流体和螺旋微通道中二次流相结合，从啤酒腐败微生物（短乳杆菌和啤酒片球菌）中高通量和高效地分离酵母（巴氏酵母和酿酒酵母），然后使用MALDI-TOF MS平台进行微生物物种鉴定。 图1 巴氏酵母和短乳杆菌分离的实验装置示意图。在入口处（即A-A），巴氏酵母和短乳杆菌随机分散。在惯性分馏（即B-B）之后，巴氏酵母沿着通道的内壁聚焦，并且通过在分叉点处放置适当的出口，可以分离这些细胞。 在梯形截面的螺旋通道中，通过惯性升力和迪恩阻力的联合作用，内壁受力大于外壁，酵母细胞向出口内壁迁移。研究人员通过评估，选择1.5 mL/min的流速作为最佳流速，对巴氏酵母可以实现超过90％的分离效率。此外，为了提高短乳杆菌的分离效率，将其通过螺旋微通道再循环三次，分离效率可达90％以上。该研究证明，微流体分离与MALDI-TOF MS鉴定相结合，可以提高MALDI-TOF MS物种水平鉴定的检测限，而无需在选择性培养基上进行耗时的培养，为啤酒腐败微生物的检测提供一种新的、快速、灵敏的方法，可用于啤酒厂的质量控制。 虽然啤酒中条件艰苦，“菌”生艰难，但是总有那么一小撮细菌可以顽强生长，而MALDI-TOF MS微生物鉴定质谱可以快速帮助把这些微生物“揪”出来。融智生物基于新一代宽谱定量飞行时间质谱平台QuanTOF推出的微生物鉴定质谱系统，配备了自主研发的基于生物组学信息建立的全新微生物质谱数据库，该数据库拥有超过1,400属，4,500余种微生物，更针对传统MALDI-TOF MS难以鉴定的基因相近菌属建立了二级数据库，可实现难检菌的鉴定。QuanTOF微生物鉴定质谱系统检测效率高，10分钟内可完成超100个样本的检测；鉴定重现性好，RSD＜2%；不仅可鉴定出微生物，还能详细地提供质谱峰与蛋白的对应信息，为科研提供有力工具。另外，QuanTOF有别于友商最强大的功能，是可用一台仪器进行微生物鉴定、核酸分析、质谱成像以及糖化血红蛋白全血直接定量。

据美国食品安全新闻网消息，普杜大学的一位食品科学研究院已提出了一种使用红外光谱的方法，可用来检测和区分大肠杆菌的不同菌株，并且这种方法比现有的方法更加快速。 　　普杜大学的食品科学副教授Lisa Mauer说，这种新方法可以区分不同的大肠杆菌菌株，包括 O157:H7 型菌株和非 O157:H7 型菌株，而这些菌株属于致病菌。 　　而这种检测方法使美国农业部食品安全及检验服务针对除了被称为“杂菌”的O157:H7型大肠杆菌之外的六种其他类型的大肠杆菌菌株的这一做法更为容易。这些非 O157:H7型菌株包括：026, 045, 0111, 0121, 0145以及0103型。 　　只有O157:H7型大肠杆菌菌株一般被视作食物中的“杂菌”，虽然其他六种菌株更为稀有，但它们会有37000起感染病例，以及30起致死病例。 　　这种使用傅里叶变换红外光谱方法与需要在实验室中培养48小时细胞的传统方法相比，培养时间为6小时，检测时间大约是1小时。甚至即使牛肉中存在其他细菌，我们仍然可以检测并区分不同的大肠杆菌菌株。 　　研究者称，从牛肉表面获得细菌有2种方法：一种是抗体捕获法，该方法细菌附着在磁珠抗体上，大约4小时可出结果 第二种方法是过滤法，大约1小时可出结果。 　　该方法甚至可以区分死菌和活菌，因为能量不被吸收而被反射回来时，可得出这种结论。而这一性能是目前的此类检测方法无法做到的。 　　据悉，该方法之前被用于检测食品中的三聚氰胺。

&ldquo 恒天然毒奶粉&rdquo 事件8月28日上演&ldquo 神转折&rdquo ：新西兰官方称，恒天然乳清蛋白粉里所含的细菌并不是可能致毒的肉毒杆菌，而是与之相似的梭状芽孢杆菌(又称生孢梭菌)。 　　普通消费者不禁会问：这也能弄错?生孢梭菌又是一种什么菌? 　　新西兰初级产业部当天宣布，多达195次的追加检测结果表明，恒天然产品中检出的微生物是生孢梭菌。它不会像肉毒杆菌那样产生出致命的肉毒素，迄今也未曾报告过与生孢梭菌有关的食品安全问题。 　　换言之，生孢梭菌的性质不像肉毒杆菌那么严重，只是如果含量过高，生孢梭菌也有可能导致食物腐坏。 　　那么，检测机构怎会摆出这么离谱的&ldquo 乌龙&rdquo ?新西兰奥克兰大学微生物学专家苏西· 怀尔斯对媒体介绍说，生孢梭菌实际上是不产生毒素的肉毒杆菌分离菌，&ldquo 也就是说，这两种菌(肉毒杆菌和生孢梭菌)几乎是一样的，唯一区别在于是否含有负责编码生成肉毒素的基因。&rdquo 　　这位专家介绍说，检测微生物污染有多种方法，最简单的方法就是分离出菌株进行培养，然后进行相应的生物化学试验确定菌种 或者也可以通过寻找微生物中特定的DNA(脱氧核糖核酸)序列来确定菌种。但对于肉毒杆菌和生孢梭菌来说，这两种检测法根本无法分辨。 　　此前，肉毒杆菌一词曾引起消费者对恒天然产品的极大恐慌。实际上，真正有毒的不是肉毒杆菌本身，而是它在厌氧环境中产生的肉毒素(又称肉毒毒素)。肉毒素是一种毒性非常强的物质，不到1微克就可以致人死亡。也正因如此，恒天然这起食品安全事件迅速引起全球关注。 　　相关新闻：达能旗下奶粉向恒天然索赔 因错误检测损失严重

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2023年3月17日经国家市场监督管理总局（国家标准化管理委员会）批准发布GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》系列标准，代替实施16年之久的GB/T 5750-2006 《生活饮用水标准检验方法》。新标准将于2023年10月1日起正式实施。 GB/T 5750-2023标准历时5年，经过了3轮意见征求，有280+单位参与研制与验证，有超过500名行业专家参与的GB/T 5750修订工作，最终大功告成。本次修订微生物指标主要内容：新增肠球菌和产气荚膜梭状芽孢杆菌两个检测指标、3种检测方法和增加菌落总数酶底物法新方法。其中产气荚膜梭状芽孢杆菌是新增检测指标，有些老师不清楚检测过程中需要用到哪些设备，我们根据标准的要求做个简单介绍。根据标准要求我们需要准备以下仪器和耗材：1. 电子天平：实验室常用仪器2. pH计或精密pH试纸：实验室常用仪器或耗材3. 恒温培养箱：实验室常用仪器4. 冰箱：实验室常用仪器5. 恒温水浴箱：实验室常用仪器6. 显微镜：实验室常用仪器7. 无菌吸管：实验室常用耗材或仪器8. 无菌试管：实验室常用耗材9. 无菌平皿：实验室常用耗材10. 厌氧培养装置：华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统11. 过滤设备：华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置12. 滤膜:实验室常用耗材13. 无齿镊子：实验室常用耗材其他会用到的设备：HD-C系列菌落计数仪、HD-DT系列自动样品稀释仪、HD-GM系列全自动革兰氏染色仪、HD-S系列自动培养基分装仪、HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统产气荚膜梭状芽孢杆菌检测流程图一、 样品1. 污染较轻的水样，可直接取100 ml水样进行检验。2. 污染严重的水样，可使用0.1%缓冲蛋白胨水将水样按10倍系列稀释，取100ml进行检验。使用华端生物HD-DT系列自动样品稀释仪：自动称重，自动按比例稀释。二、 过滤水样先用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分，将滤膜正面朝上贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100 ml水样注入滤器中，打开滤器阀门，在-5.07X104Pa(-0.5 个大气压)下抽滤。每次试验均需要用100 mL0.1%缓冲蛋白胨水讲行空白对照。使用华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置：配备直排泵，无需废液瓶，直排废液；火焰灭菌支架和滤杯，提高实验效率。三、 厌氧培养过滤完水样后，关上滤器阀门，取下滤器，用无菌镊子夹取滤膜边缘部分，移滤膜倒置在SPS琼脂培养基上，滤膜截留细菌面与培养基完全贴紧，避免气泡产生，然后将平皿倒置于厌氧培养装置内，于36℃±1℃厌氧培养18 h~24 h，计数黑色菌落数。使用华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统：使用灵活、成本低，培养效果有保障，操作简单、智能。四、菌落计数对滤膜上证实为产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落进行计数使用华端生物HD-C系列菌落计数仪：手动菌落计数器辅助计数，操作方便；全自动菌落计数仪：软件自动计数，计数快捷、准确。五、 细菌鉴定用上述培养液涂片，革兰氏染色、镜检。产气荚膜梭状芽孢杆菌为革兰阳性粗大杆菌，其耐热菌株可能形成卵形芽抱,位于菌体中央或近端，其宽度一般不超过菌体宽度。使用华端生物HD-GM系列全自动革兰氏染色仪：自动化的染色仪使革兰氏染色实验自动化、标准化，批量大时可节约大量时间。使用华端生物HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统：标准化的试剂操作，仪器自动判读结果，避免人工判读偏差。六、其他仪器使用华端生物HD-S系列自动培养基分装仪：自动分装培养基或者其他微生物试剂，方便、快速。使用华端生物HD-M系列微生物质谱快速鉴定仪：相比传统鉴定方式更快出结果、准确性更高、操作更简单、检测范围更广。杭州华端生物科技有限公司创始团队十多年来一直专注于为用户提供有竞争力的食品、药品、医疗及科研微生物实验室的整体解决方案与服务。2021年我们开始运营品牌“华端生物”，品牌寓意中华之端，华端人不断创新研发，提升产品竞争力，打造新国货。在企业发展过程中，我们始终秉持这一理念，不断引进、培养高科技人才，加大研发力度，并通过对产品持续创新、服务坚持初衷和团队共同成长的持续投入，不断推出符合市场需求的解决方案和服务。我们坚信，“更好的产品、更好的服务和更好的团队”是我们能够赢得客户青睐的核心竞争力，我们会始终不忘初心、砥砺前行，实现“与客户共同保障食品安全、药品安全和公共卫生安全”的社会使命。以史为鉴、开创未来。杭州华端生物科技有限公司诚挚期待与广大用户深入交流，与想要加入团队共同奋斗的同仁，携手前行，共创美好未来。核心价值观：拼搏、专注，突破、创新！企业愿景：提升国产微生物检测设备的竞争力！公司使命：为食品、药品和公共卫生安全提供保障。

型号推荐：程控定量封口机-一块定量检测水中大肠杆菌数量的仪器2024实时更新，在水质监测的迫切需求下，程控定量封口机以其独特的优势，为水样中细菌微生物的快速、准确检测开辟了新的途径。它不仅能够针对绿脓假单胞菌群、肠球菌、总大肠菌群等多种致病菌进行高效检测，还具备野外携带、应急响应及定量检测的能力，成为水质安全的重要保障。 一、高效精准，细菌微生物无所遁形 程控定量封口机集成了先进的检测技术，能够迅速且准确地识别水样中的各类细菌微生物，包括绿脓假单胞菌群、肠球菌、总大肠菌群、粪大肠杆菌及大肠埃希菌等。其高效的检测速度，使得水质监测工作更加及时有效。 二、便携应急，适应多种监测场景 该封口机设计紧凑，轻便易携，非常适合野外作业和应急响应。无论是在偏远的山区水源地，还是突发的水污染事件现场，都能迅速投入使用，为水质安全提供第一时间的检测保障。 三、定量检测，科学评估水质状况 除了快速检测外，程控定量封口机还具备定量检测的功能。它能够精确测量水样中细菌微生物的数量，为水质评估提供科学的数据支持。这一特性使得水质监测结果更加准确可靠，为水质管理决策提供了有力依据。 四、方法优势无需在无菌室内操作。2.手工操作时间小于 1 分钟。3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。 程控定量封口机以其高效精准、便携应急及定量检测的特点，在水质监测领域发挥了重要作用。它不仅提升了水质监测的效率和准确性，还满足了野外和应急响应的需求，为水质安全保障提供了坚实的技术支持。随着技术的不断进步和应用领域的拓展，相信该设备将在未来发挥更加广泛和重要的作用。

自单壁碳纳米管被发现以来，其优异的电学性能引起了广泛的关注。但是，现有方法制备的单壁碳纳米管都是金属性管和半导体性管的混合物，两种管的互相影响会降低彼此的器件性能。为使金属性管和半导体性管各尽其用，而不是互相影响进而降低彼此的器件性能，单壁碳纳米管的分离/富集就显得尤为重要，并成为本领域一个亟待解决的瓶颈问题。 　　化学所有机固体院重点实验室与日本索尼公司先进材料实验室的科研人员合作，在单壁碳纳米管分离/富集领域取得了新进展，有关研究成果申请了发明专利并发表在近期的《先进材料》(Adv. Mater., 2009, 21, 813-816)上。 　　他们采用实验室常用的化学气相沉积装置(图1)，在400摄氏度的高温下通入刻蚀性气体，从而实现了单壁管的选择性分离/富集。与当前广泛报导的溶液分离方法选择性反应(刻蚀)金属性碳管不同，这种气相刻蚀的方法选择性刻蚀半导体性单壁管(图2)，被刻蚀的碳管转化为二氧化碳气体排出装置外，而金属性单壁管则被保留在了装置内。本方法对于不同直径范围的半导体管均有选择性刻蚀作用，尤其是对于直径小于1.18 nm半导体管，刻蚀效率高达90%。此外，本方法还具有成本低廉，操作方便，易于规模化及对金属性碳管破坏性小等优点，为大规模富集金属性单壁碳纳米管提供了一个新的思路。北京大学物理系相关教授还利用密度泛函法对选择性刻蚀进行了理论计算。　　 　　图1 用于气相刻蚀的电炉装置 　　 　　图2 选择性分离前后碳管样品的Raman 光谱(a，b)，及紫外可见近红外光谱(c，d)

奶粉中肉毒杆菌不是常规检测项目 　　肉毒杆菌中毒十分罕见 　　肉毒毒素不耐热，高温加热可破坏 　　几年前，演艺界有&ldquo 美容大王&rdquo 之称的台湾女明星大S，让一种叫做&ldquo 肉毒毒素&rdquo 的物质平民化了。大S在《揭发女明星》一书中大爆：女明星，其实都使用肉毒毒素瘦脸。虽然这是种毒素，它依旧使无数少男少女趋之若鹜。 　　而两天前开始，肉毒毒素的风光命运，开始被翻盘了&mdash &mdash 新西兰恒天然乳制品厂出产的恒天然奶粉， 被检测出可能引起食物中毒的肉毒杆菌。 　　肉毒毒素和肉毒杆菌是什么关系?肉毒杆菌和肉毒毒素的危险性有多大?我们国家的乳品标准或者婴幼儿配方食品标准，对肉毒毒素的要求是怎样的? 　　本报昨连线中国肉毒毒素培养、提纯发明人，兰州生物制品研究所王荫椿教授、国家食品安全风险评估中心风险交流部钟凯博士来为您解读。 　　肠道是理想的厌氧环境 　　1岁以下孩子，要特别小心 　　全世界，目前只有美国、英国、中国、德国，有用于治疗的肉毒毒素产品的生产资格。 　　中国肉毒毒素培养、提纯的发明人，是兰州生物制品研究所的王荫椿教授。 　　昨天，记者致电王教授，他说,&ldquo 肉毒杆菌本身是没有毒性的。有毒的是它的芽孢，经过滋养生成的肉毒毒素，也就是我们培养用作药用的物质。&rdquo 　　&ldquo 肉毒杆菌在土壤、动物粪便中，比较常见。&rdquo 王教授说，&ldquo 我国西北部，如新疆、青海甚至西藏等地区的土壤，含有肉毒杆菌比率比较高。&rdquo 　　肉毒杆菌本无毒，当它进入厌氧(缺氧)的环境，便很快滋生成肉毒杆菌毒素。 　　而厌氧环境，往往是人类&ldquo 提供&rdquo 的&mdash &mdash 　　比如，人们爱做一些发酵的食物。像臭豆腐、豆瓣酱，可能豆类在生长的时候就已经从土里无意中携带了肉毒杆菌，而这些食物的制作，需要密封发酵，这给肉毒毒素制造了很&ldquo 落位&rdquo 的环境。 　　而孩子的肠内，可能也是这样的理想环境。 　　上世纪80年代，王荫椿曾经到美国威斯康星大学食品研究所做访问学者。在一项研究中，美国科学家们发现，1岁以下的孩子，喝了蜂蜜、或者有蜂蜜配方的奶粉，产生了肉毒毒素中毒的症状。 　　科学界推测，孩子中毒，可能因为蜜蜂采集蜂蜜的过程，携带了带有芽孢的肉毒杆菌 也有可能是孩子到处跑，无意中直接吃到了带有芽孢肉毒杆菌的土壤。 　　周岁不到的孩子，体内的肠菌丛还没有像成年人那么完备，所以孩子吃了有肉毒杆菌芽孢污染的食品，非常容易发生婴儿肉毒中毒。 　　肉毒杆菌怎么跑到奶粉里的 　　买了污染奶粉不建议食用 　　肉毒杆菌，为什么奶粉里会有? 　　国家食品安全风险评估中心风险交流部的钟凯博士，昨天在果壳网上发文说，&ldquo 任何食品的生产环境都不可能无菌，奶粉中的肉毒杆菌很可能是随空气中的小颗粒物飞入生产管线，恰巧逃过消毒程序。 　　至于国家标准是怎么规定的，钟凯说：&ldquo 其实是没有任何规定!(我国婴幼儿配方对金葡、沙门和板岐菌是有规定的)。也许不少人会觉得这是因为我国的标准落后，这么厉害的细菌怎么可能没标准呢?其实，全世界都没有奶粉中肉毒杆菌的限量标准，它也并不是常规检测项目。&rdquo 钟凯解释，肉毒杆菌在乳品中并不是常见的污染物，而标准的管理是要考虑成本的，正因如此，各国都不把它列入标准。但这并不意味着根本不管，比如这次恒天然是在企业的质量控制中发现的问题。 　　对本次奶粉污染，钟凯认为这仅仅是一次偶发事件，公众无需恐慌，但是监管部门应该严格把关，确保污染批次的产品下架或召回。&rdquo 　　如果买到的奶粉被肉毒杆菌污染，专家建议家长停止给孩子食用。 　　临床感染病例罕见 　　避免中毒只须做到三点 　　浙医二院感染科主任王选锭认为，&ldquo 理论上，发生肉毒杆菌感染，以及肉毒毒素经过食物引起中毒，都是有可能的，但事实上，这两种情况都十分罕见。&rdquo 　　&ldquo 可能大部分医生都没有遇到过病例。&rdquo 王选锭从1986年开始在感染科当医生，从事感染研究和临床工作近三十年，但他从未遇到过这两种病例。 　　资料显示，只有广东省在上世纪90年代初发现过一例肉毒杆菌人体感染的病例。 　　中毒症状以对称性颅神经损害症状为特征。如视力模糊、眼睑下垂、瞳孔散大、语言障碍、吞咽困难、呼吸困难，继续发展可由于呼吸肌麻痹引起呼吸功能衰竭而死亡。肉毒杆菌致病性是其产生的肉毒毒素。肉毒毒素对酸的抵抗力特别强，胃酸溶液24小时内不能将其破坏，故可被胃肠道吸收。但肉毒毒素不耐热，对于易感染的罐头及密封腌渍食物只要加热5~10分钟，肉毒毒素都会被破坏掉，因此规范生产的罐头等，不应含有有效的肉毒毒素。 　　避免肉毒杆菌中毒的建议： 　　(1)吃熟食。肉制品最好吃熟食，彻底加热，肉毒毒素不耐热，75-85℃，加热10分钟，或100℃加热1分钟可被破坏。(2)平时自己做食物时，注意加工卫生。(3)加工后的食品迅速冷却并低温储存。 　　肉毒毒素，毒性最强 　　肉毒杆菌的发现，跟19世纪，法国拿破仑政府鼓励发明的肉罐头有关系。 　　经营蜜饯食品的法国人阿贝尔，找到了一个长期贮存食物的好办法：把肉装入宽口玻璃瓶，用木塞塞住瓶口，放入蒸锅加热，再将木塞塞紧，并用蜡封口。这就是最早的肉罐头。 　　阿贝尔没有想到，这种受到欢迎的方便食物，如果没有经过严格的消毒环节，很有可能成为肉毒杆菌的&ldquo 逍遥国&rdquo &mdash &mdash 肉毒杆菌进入了诸如罐头这种厌氧(缺氧)的环境，很快滋生成肉毒杆菌毒素。 　　肉毒毒素，是细菌类毒素中，毒性最强的&ldquo 毒王&rdquo 。上个世纪，战争狂人使用肉毒毒素作生物武器，它能阻断神经信号的传导，使人出现头晕、呼吸困难、肌肉乏力等症状。&ldquo 0.1～1微克(100万分之一克)肉毒毒素，可致人于死地。1克肉毒毒素，足够毒死一百万人。&rdquo 王教授说。

新闻背景：近日微信朋友圈又一条信息疯传 &ldquo 今接妇幼保健院提示，请不要给宝宝喝爽歪歪、旺仔牛奶等牛奶饮料，都含有肉毒杆菌，现在紧急召回。&rdquo &ldquo 喝了会导致白血病&rdquo 。这让很多家长十分担心：什么是肉毒杆菌?乳饮料中会有肉毒杆菌吗?有何危害? 　　肉毒杆菌没有毒!肉毒毒素才是&ldquo 真凶&rdquo ! 　　说到肉毒杆菌，很多人首先是想到它毒性很强。不过，我还是想说，看到这个消息，首先还是不要太恐慌。 　　肉毒杆菌的全名叫肉毒梭状杆菌(Clostridiumbotulinum，也叫肉毒梭菌)，是自然界广泛存在的一种细菌，比如土壤、动物粪便中经常可以见到它，它们可以随着空气中漂浮的灰尘、小液滴飘散到四面八方，继而污染我们的食品。在食品生产过程，由于很难做到所有生产环境都无菌，乳饮料生产过程中也是可能被肉毒梭菌污染的。 　　不过，即使存在肉毒杆菌并不意味着一定有毒害。具有卫生学意义的检验在于是否检出肉毒毒素。若只检出肉毒梭菌，但未检出肉毒毒素，不能证明此食物会引起肉毒中毒。 　　肉毒杆菌家族一共兄弟7个，本身其实没有毒性，但其中有4个能在一定条件下产生肉毒毒素。肉毒毒素是一种毒性很强的物质，不到1微克就可以置人于死地。而且这种毒素具有较强的耐酸性，不但胃液无法破坏其毒性，胃肠道的蛋白酶也对其无计可施。 　　肉毒毒素不容易&ldquo 被生产&rdquo 且易&ldquo 被杀死&rdquo 　　但是，要想产生肉毒毒素也不是一件特别容易的事情。肉毒杆菌能够繁殖和产毒条件相当苛刻：要严格隔绝空气，还要适宜的水分活度、营养条件、环境温度。当这些条件有一个不满足的时候，它就不能繁殖，也不能产生毒素。 　　也正因为肉毒杆菌生存繁殖所需要的苛刻条件，虽然肉毒杆菌它在自然界常见，但食品污染却比较少见，而且主要出现在家庭自制食品。目前还没有因为喝乳饮料导致肉毒杆菌中毒是案例。我国引起中毒的食品大多是家庭自制的发酵食品，如豆瓣酱、豆酱、豆豉、臭豆腐等，有少数发生于各种不新鲜肉、蛋、鱼类食品 在我国的新疆、青海等少数民族地区几乎每年都会出现自制发酵肉制品导致的肉毒中毒、甚至死亡。日本以鱼制品引起中毒者较多 美国以家庭自制罐头、肉和乳制品引起中毒者为多，欧洲多见于腊肠、火腿和保藏的肉类。 　　而且，虽然肉毒素的毒性很强，但是它自己也有很明显的弱点：怕热。肉毒素对热很不稳定，通常75-85℃，加热30分钟或100℃，10分钟可被破坏，煮开几分钟就破坏掉了。 　　肉毒素中毒不会导致白血病 　　还有人问肉毒杆菌会导致白血病吗?其实，肉毒素中毒是神经型食物中毒，中毒时，肉毒素可抑制神经传导介质&mdash 乙酰胆碱的释放，其症状主要是神经系统症状，如视力模糊、眼脸下垂、复视、瞳孔散大、语言障碍、吞咽困难、呼吸困难，继续发展可由于呼吸肌麻痹引起呼吸功能衰竭而死亡，并没有证据认为肉毒中毒会导致白血病。 　　事实上，这条朋友圈消息已经被证实为谣言。当地的记者向妇幼保健院和食药监部门打电话求证了，都证实没有发布过相关消息，这条消息完全是捏造的，大可不必恐慌。 　　肉毒杆菌真正的麻烦：&ldquo 芽孢&rdquo 　　说了这么多也不是想告诉大家完全不用担心肉毒梭菌。肉毒杆菌真正的麻烦在于它的芽孢。肉毒梭菌芽孢抗热性很强，但是有芽孢也不意味着有毒，芽孢还没开始生长就不产生肉毒毒素，因此，通常认为对人是无害的。然而，在儿童体内，由于肠道菌群的缺乏，肉毒梭菌的芽胞在儿童的肠道弱碱厌氧环境中是能够产毒的，也就是说即便将食物中的肉毒素破坏掉，但是对儿童的危害是不容忽视的。因此，被肉毒梭菌污染的食物是不能给小于1岁的孩子吃的。 　　在食品加工中，人们也采用了一些方法来防止肉毒杆菌。最常用的方法就是添加亚硝酸盐的方法来抑制肉毒梭菌。除了添加亚硝酸盐外，美国FDA提示的方法包括加酸剂(肉毒梭菌在pH 值低于4.5时生长会被抑制)、减少水分含量、加盐、加亚硝酸盐等，或者集中同时使用。另外，还有通过加入发酵剂和发酵基质来抑制咸肉中肉毒梭菌的生长。 　　如何避免肉毒梭菌中毒? 　　肉毒中毒最常发生在一些家庭自制食品中。那么，如何避免肉毒梭菌中毒呢?推荐从三个方面做起： 　　(1)烹调食物尽量熟透，吃熟食。可能受肉毒梭菌污染的食物，如肉制品、罐头等，最好吃熟食，烹调熟透。这个是避免肉毒毒素危害最有效的方法。 　　(2)平时自己在家做自制食物时，要注意加工卫生，尤其要做一些发酵豆制品、发酵肉类时。如果实在不太会，就不要自制了。 　　(3)加工后的食品迅速冷却并低温储存。 　　参考资料： 　　[1] BAM: Clostridium botulinum. FDA 　　[2] Merle D. Pierson, Leslie A. Smoot,Michael C. Robach. Nitrite, nitrite alternatives, and the control ofClostridium Botulinum in cured meats. C R C Critical Reviews in Food Scienceand Nutrition. Volume 17, Issue 2, 1983 　　[3] 刘爱萍.肉毒梭菌的控制.肉类研究，2007. 　　[4]罗云波. 食品安全导论. 　　[5]WHO.Clostridium botulinum 　　注：本文为食品与营养信息交流中心人员阮光锋原创，作者授权转载。

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）是人类最常见的慢性感染细菌，它生长缓慢且培养条件苛刻，因此临床合理用药和精准溯源均面临挑战。中国科学院青岛生物能源与过程研究所与中国疾病预防控制中心传染病预防控制所（中国疾控中心传染病所）、青岛市立医院、青岛星赛生物等医产学研联合团队，依托原创的临床单细胞拉曼药敏快检系统（CAST-R），建立了单个细菌细胞精度、“鉴定-药敏-溯源”全流程一体化的H. pylori诊疗技术CAST-R-HP，其具有快速病原鉴定、精确药敏表型检测、基于单细胞全基因组支撑耐药机制研究与精准溯源等优势。相关成果近日发表于《临床化学》（Clinical Chemistry）。　全球约半数人口感染H. pylori，70%以上的胃癌与H. pylori感染有关，根除H. pylori可显著减少胃癌发生。我国H. pylori感染呈现高感染率（约50%）、高疾病负担、高耐药率和低根除率特征，而低根除率的主要原因为H. pylori菌株耐药严重。因此，建立一个高效的药敏诊断、治疗与溯源体系，对于临床和相关疾病防控至关重要。目前H. pylori耐药菌鉴定的临床金标准是内镜检查与细菌培养相结合的药敏检验。由于其生长条件苛刻，分离和培养胃活检标本中的H. pylori通常需7~10天，且难以考察临床样品中“原位”的病原多样性。在获得纯培养后开展的表型药敏实验，同样耗时很长，且技术要求高。而基于基因型的药敏检测方法仅能预测部分已知耐药基因的突变，并存在不同程度的假阴性。目前临床医生主要依赖经验用药而非药敏结果指导性下的精准治疗。但是，随着H. pylori耐药性的不断增加，经验治疗的根除失败率日益严重。针对以上瓶颈问题，合作团队建立了单个细菌细胞精度、“鉴定-药敏-溯源”全流程一体化的H. pylori诊疗技术CAST-R-HP。他们构建了15种临床常见胃部共生菌的单细胞拉曼光谱（SCRS）参考数据库；进而利用端到端的深度卷积神经网络（DCNN），将拉曼光谱特征提取与分类模型训练过程相融合，有效提升了基于SCRS的病原鉴定准确率。直接从临床胃黏膜样品出发，对H. pylori细胞进行识别和鉴定，准确率达98.5 ± 0.27%。此外，研究人员建立了单细胞精度测定代谢抑制程度的H. pylori药敏表型快检技术。与临床标准E-test法相比，17株H. pylori临床分离株对左氧氟沙星、克拉霉素的药敏检测准确率分别为94%和100%。针对7例患者胃黏膜组织样本，通过48~72小时的重水饲喂和药物孵育，无需分离培养，研究直接测定样品中H. pylori细胞对于左氧氟沙星的药敏性，准确率为100%。针对耐药机制研究和全基因组溯源，研究人员进一步从临床样品中直接识别特定药敏表型的H. pylori细胞，进而通过拉曼光镊液滴单细胞分选（RAGE）芯片，完成高均衡性的目标单细胞分选和核酸扩增。拉曼分选后的单个H. pylori细胞，全基因组覆盖度可达99.7%，通过基因型验证了药敏表型。 该研究表明，利用CAST-R-HP，从临床样品到药敏结果的完整流程可大幅缩短至3天，而且能在单细胞分辨率、全基因组水平完成耐药机制研究与精准溯源。下一步，研究人员将基于“微生物药敏单细胞技术临床示范网络”（SinCheckNet），进一步开发CAST-R-HP系统，拓展其应用，从而为建立单细胞精度的H. pylori诊疗与疾控体系奠定技术和装备基础。该工作获得中科院战略性先导科技专项、国家自然科学基金委国家重大科学仪器研制项目、国家科技重大专项项目、广州生物岛实验室等的资助。　　论文链接 H. pylori单细胞精准诊疗技术CAST-R-HP

p 　　当国民还笼罩在非洲猪瘟疫情阴霾下，非洲、东欧等国家相继向世界动物卫生组织(OIE)报告：发生炭疽病疫情。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 意大利、亚美利亚、白俄罗斯相继发生炭疽病疫情 /span /strong /p p 　　9月16日，意大利兽医公共卫生部向OIE报告称，意大利发生了炭疽杆菌疫情。感染动物为牛，疑似病例42例，确认病例3例，死亡3例， /p p 　　9月2日，亚美尼亚农业部食品安全局向OIE报告称，亚美尼亚发生炭疽杆菌感染疫情。感染动物为牛，疑似病例10例，确认病例1例，死亡1例。 /p p 　　8月19日，哈萨克斯坦农业部兽医管理和监督委员会向OIE报告称，哈萨克斯坦发生炭疽杆菌疫情。这次在牛(323例)、马(53例)、绵羊(113例)、猪(126例)中均发现炭疽病疑似病例。 /p p 　　8月12日，白俄罗斯农业和食品部向OIE报告称，白俄罗斯发生了炭疽杆菌疫情，感染动物为马。 /p p 　　8月7日，阿塞拜疆食品安全局向OIE报告称，阿塞拜疆发生了炭疽杆菌疫情。感染动物为绵羊，疑似病例140例，确认病例1例，死亡1例。 /p p 　　& #8230 & #8230 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 何为炭疽病? /span /strong /p p 　　炭疽(anthrax)是炭疽杆菌( i Bacillus anthracis /i )引起的人畜共患的急性传染病。炭疽主要为食草动物(牛、羊、马等)的传染病。人接触患炭疽的动物后，可以受染而患病。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 259px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201909/uepic/1c4e00fc-fd2e-41e5-b582-afa92414f8c8.jpg" title=" 微信图片_20190918142301.jpg" alt=" 微信图片_20190918142301.jpg" width=" 600" height=" 259" border=" 0" vspace=" 0" / /p p style=" text-align: center " 图片来自网络 /p p style=" text-indent: 2em " 常见的炭疽有三种类型：皮肤炭疽，肺炭疽和肠炭疽。分型不同临床症状也不同。皮肤炭疽主要是皮肤斑丘疹，水泡，水泡破溃后皮肤出现黑色结痂，结痂脱落后成疤，同时伴有发热、头疼、淋巴结和肝脾肿大等。肺炭疽的主要表现为高热、呼吸困难、血样痰及胸痛等。肠炭疽的主要表现为恶心呕吐、腹痛、腹胀和血水样便等。 /p p 　　不管哪种类型炭疽病都具有传染性，而且病情较重，不及时治疗病死率高! /p p 　　世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。 /p p 　　对于如此具有高传染及高病死率的疾病，除了临床症状检查比对，实验室会用哪些方法检测? /p p 　　 strong span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 实验室检查方法 /span /strong /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 1.外周血象 /span /p p 　　(1)白细胞计数：一般为(10～20)× 10*9/L，有的增至(60～80)× 10*9/L。 /p p 　　(2)白细胞分类计数：中性粒细胞显著增多。 /p p 　　(3)血小板计数：血小板可减少。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 500px height: 295px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201909/noimg/e66c2ee0-aeee-40dd-bf1f-e74daf7fcb9d.gif" title=" unicel-dxh-800-25.gif" alt=" unicel-dxh-800-25.gif" width=" 500" height=" 295" border=" 0" vspace=" 0" / /p p style=" text-align: center " 血液分析仪 /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 2.细菌学检查 /span /p p 　　(1)涂片检查：酌情采集分泌物、痰液、粪便、血液和脑脊液作涂片染色镜检，可见粗大的革兰阳性杆菌。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201909/uepic/86f37d8d-cb82-439a-a118-83bb9a2314c8.jpg" title=" C114040.jpg!w300x300.jpg" alt=" C114040.jpg!w300x300.jpg" / /p p style=" text-align: center " 涂片检查用显微镜 /p p 　　(2)细菌学培养：取分泌物、痰液、粪便、血液和脑脊液等进行细菌学培养，可有炭疽杆菌生长。 /p p 　　(3)细菌学鉴定：其鉴定方法有串珠湿片法、荧光抗体染色法和噬菌体裂解试验等。 /p p 　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 　3.动物接种 /span /p p 　　将上述标本接种于家免、豚鼠与小白鼠皮下，24h后出现局部的典型肿胀、出血等阳性反应。接种动物大多于48h内死亡，从其血液与组织中可查出和培养出炭疽杆菌。 /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 4.血清学检查 /span /p p 　　近年来用荧光抗体法检测特异性抗体作快速诊断。 /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 5.Asco1i沉淀试验 /span /p p 　　主要用于检验动物皮毛与脏器是否染菌。 /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 6.其他辅助检查 /span /p p 　　X线摄片：肺炭疽可见支气管肺炎、胸腔积液、纵隔影增宽等。 /p p 　　那么如何才能预防炭疽?最重要的一点就是不接触传染源。 /p p 　　炭疽的传染源主要是病死动物， strong 病死的牛、羊肉以及来源不明的肉制品千万不能食用，正规渠道购买的牛羊肉都是经过检疫的，只要烹饪时能煮熟煮透，就可放心食用 /strong 。发现牛、羊等动物突然死亡，不接触、不宰杀、不食用、不买卖，立即报告当地农业畜牧部门。 /p

日前，国家质量监督检验检疫总局进出口食品安全局公布了今年4月进境的不合格食品、化妆品信息，其中，全球最大的乳品原料供应商新西兰恒天然(前译名方塔拉)多个批次的全脂奶粉被检验出含有致病菌阪崎肠杆菌。 　　不合格产品国家已按规定处理 　　据公布的数据显示，被检出阪崎肠杆菌的三批全脂奶粉，总数达277.9吨，分别是今年1月和3月进口的，被上海检验检疫局和广东检验检疫局截获。 　　对此，记者联系了恒天然商贸(上海)有限公司，该公司给记者发回传真表示，恒天然确有进口到中国的食品工业用乳品原料在4月份被相关地方的出入境检验检疫局检出阪崎肠杆菌。尊重中国政府的相关考虑和规定，已对被检测出阪崎肠杆菌的产品按规定作出了相应的处理。 　　在这份4月份进境不合格食品、化妆品信息的表格里，记者看到国家已经按相关的规定对这些批次的产品进行处理。 　　恒天然中国进口产品抽检频出问题 　　同时，记者在查阅相关的资料发现，去年9月恒天然同样有两批全脂奶粉，共计231吨被广东检验检疫局检出含有阪崎肠杆菌。 　　记者还了解到，这两年来，恒天然进口中国多个批次的产品均存在水分检测不合格、标签不合格等问题而被处理。仅某国内奶粉品牌这两年从方塔拉进口的奶粉当中，就有5个批次，超过650多吨原料被检验出了水分检测不合格、标签不合格等问题。最近一次是今年3月从方塔拉进口的119.95吨速溶脱脂奶粉被检出水分检测值与外包装标示不符。 　　对此，恒天然表示，恒天然公司一向极为重视标签问题，并利用国际日恩克的方法在经认证的实验室中进行检验。食品工业用原料奶粉的水分含量问题，差距可能来自于检测的可变性。如利用同一个方法多次重复检测，其结果可能不同 而当使用不同的检测方法时，其结果也可能产生差异。 　　恒天然中国战线在收缩? 　　据悉，恒天然作为世界上最大的乳品原料供应商，每年乳品原料的全球销量超过200万吨，出口到120多个国家。在中国，包括国内乳业巨头蒙牛、伊利、三鹿等都是恒天然的客户。而雅培等国际品牌的基粉都是来自恒天然。达能、益力多等乳制品企业都在用恒天然的脱脂奶粉作为原料，也会用到其全脂奶粉做增稠剂。 业内人士介绍，恒天然在中国的战线已经在逐渐收缩，减少了对中国的出口配额。其对中国的年出口量以前有20～30万吨，但现在逐步缩小到原来的1/3。 而恒天然媒体事务的相关负责人也表示，今年恒天然出口中国的原料确实会大幅缩减，一方面处于原加料价格成本的飞速上涨，另一方面则是产品供应的紧张。该人士表示，这种情况在日本、东南亚等国家也同时存在。 　　各方反应恒天然：中国标准与国际惯例有差别 　　对于此次恒天然的进口全脂奶粉也被检出阪崎肠杆菌，恒天然商贸(上海)有限公司方面表示，按照国际惯例通常只有应用于 0～6个月婴儿、早产儿、低体重婴儿的配方食品或原料将阪崎肠杆菌作为常规检测项目。国际上对于成人的食品原料和产品检测通常不将阪崎肠杆菌列为常规检测对象。而中国的标准是全部都要检查。 恒天然方面表示，此次被检验出的产品为食品工业用的全脂奶粉，供中国的乳品企业进行再加工或生产，如乳饮料、酸奶、酸奶饮料的生产等。国际上应用于生产酸奶、UHT酸奶饮料等产品的全脂乳粉常规上一般也不检测阪崎肠杆菌。由于在热处理参数为 68℃，16秒的条件下，能确保阪崎肠杆菌以10万级数减少。所有在UHT、酸奶等产品的生产过程中，其加工工艺均高于该热处理参数，并且酸奶类产品的 PH值都很低，因此阪崎肠杆菌不会存活于高温热处理和低PH值的工艺中，从而在终产品中也不存在。 　　业界：在华产品都要遵守中国标准 　　对此，有业内人士就认为，任何产品要进入中国市场，都要遵守中国市场的相关标准，对于恒天然来说也是如此。 “方塔拉的产品出口到120多个国家，产品均符合国际的标准。当在进口中国的某些批次产品后，公司也在积极与新西兰方面协调，希望能比较好地与中国的相关检测标准契合。恒天然公司已经实施了一个风险管理战略以宰加工环境中尽可能减少肠杆菌的水平，进而确保可能的阪崎场杆菌的污染降到一个非常低的水平，并与国际上认可的食品要求相一致”恒天然表示。 　　乳制品客户：目前并不受影响 　　那么世界最大的乳品原料供应商再次在“阪崎肠杆菌“和水分检测、标签等问题上触礁。是否会影响其众多乳制品客户的信心? 　　记者了解到，已经有牛初乳品牌为保证产品的质量，转换了其他的供应商。而部分乳品企业在接受记者采访时则表示，每一批进口奶粉包括恒天然在内，在进入中国之前一定要经过国家检验检疫部门的抽检，抽检过关后企业才会用。而且进入中国后，企业内部仍会进行抽检。因此部分批次产品被抽检出阪崎肠杆菌超标并不代表恒天然所有产品都是有问题的。 　　背景资料:阪崎肠杆菌对婴儿具有威胁 　　据了解，阪崎肠杆菌是乳制品中近几年新发现的引起广泛关注的一种致病菌。它是存在自然环境中的一种“条件致病菌”，已被世界卫生组织和许多国家确定为引起婴幼儿死亡的重要条件致病菌，可导致任何年龄层人群的疾病，尤其是对早产儿、出生体重轻的婴儿或免疫受损婴儿的威胁最大，严重者可导致败血症、脑膜炎或坏死性小肠结肠炎。 　　继美国FDA2002年在本土某一些国际乳业巨头生产的婴儿配方奶粉中检出阪崎肠杆菌后，2003年又一家国际乳业巨头公司主动召回在美国生产的一批检出极微量阪崎肠杆菌的罐装早产儿特殊配方奶粉，此后成为世界关注的焦点。我国在2005年5月通过《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准的审定，对奶粉严查此菌。 　　今年以来，广州、中山、汕头检验检疫部门在食品工业用进口奶粉中已多次检出阪歧肠杆菌。

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）是人类最常见的慢性感染细菌，它生长缓慢且培养条件苛刻，因此临床合理用药和精准溯源均面临挑战。青岛能源所与中国疾病预防控制中心传染病预防控制所（中国疾控中心传染病所）、青岛市立医院、青岛星赛生物等医产学研联合团队，依托原创的临床单细胞拉曼药敏快检系统（CAST-R），建立了单个细菌细胞精度、“鉴定-药敏-溯源”全流程一体化的H. pylori诊疗技术CAST-R-HP，具有快速病原鉴定、精确药敏表型检测、基于单细胞全基因组支撑耐药机制研究与精准溯源等优势。该成果近日发表于Clinical Chemistry《临床化学》。　幽门螺杆菌单细胞精准诊疗技术CAST-R-HP 　　全球约半数人口感染H. pylori，70%以上的胃癌与H. pylori感染有关，根除H. pylori可显著减少胃癌发生。我国H. pylori感染呈现高感染率（约50%）、高疾病负担、高耐药率和低根除率特征，而低根除率的主要原因为H. pylori菌株耐药严重。因此，建立一个高效的药敏诊断、治疗与溯源体系，对于临床和相关疾病防控至关重要。　　目前H. pylori耐药菌鉴定的临床金标准是内镜检查与细菌培养相结合的药敏检验。由于其生长条件苛刻，分离和培养胃活检标本中的H. pylori通常需7~10天，且难以考察临床样品中“原位”的病原多样性。在获得纯培养后开展的表型药敏实验，同样耗时很长，且技术要求高。而基于基因型的药敏检测方法仅能预测部分已知耐药基因的突变，并存在不同程度的假阴性。目前临床医生主要依赖经验用药而非药敏结果指导性下的精准治疗。但是，随着H. pylori耐药性的不断增加，经验治疗的根除失败率日益严重。　　针对以上瓶颈问题，单细胞中心刘敏、朱鹏飞、张磊等和中国疾控中心传染病所孙路、青岛市立医院王莉莉等合作，建立了单个细菌细胞精度、“鉴定-药敏-溯源”全流程一体化的H. pylori诊疗技术CAST-R-HP。　　首先，他们构建了15种临床常见胃部共生菌的单细胞拉曼光谱（SCRS）参考数据库；进而利用端到端的深度卷积神经网络（DCNN），将拉曼光谱特征提取与分类模型训练过程相融合，有效提升了基于SCRS的病原鉴定准确率。直接从临床胃黏膜样品出发，对H. pylori细胞进行识别和鉴定，准确率达98.5 ± 0.27%。　　进而，研究人员建立了单细胞精度测定代谢抑制程度的H. pylori药敏表型快检技术。与临床标准E-test法相比，17株H. pylori临床分离株对左氧氟沙星、克拉霉素的药敏检测准确率分别为94%和100%。另外，针对7例患者胃黏膜组织样本，通过48~72小时的重水饲喂和药物孵育，无需分离培养，直接测定样品中H. pylori细胞对于左氧氟沙星的药敏性，准确率为100%。　　最后，针对耐药机制研究和全基因组溯源，研究人员从临床样品中直接识别特定药敏表型的H. pylori细胞，进而通过拉曼光镊液滴单细胞分选（RAGE）芯片，完成高均衡性的目标单细胞分选和核酸扩增。拉曼分选后的单个H. pylori细胞，全基因组覆盖度可达99.7%，通过基因型验证了药敏表型。 　　总之，利用CAST-R-HP，从临床样品到药敏结果的完整流程可大幅缩短至3天，而且能在单细胞分辨率、全基因组水平完成耐药机制研究与精准溯源。下一步，研究人员将基于“微生物药敏单细胞技术临床示范网络”（SinCheckNet）”，进一步开发CAST-R-HP系统，拓展其应用，从而为建立单细胞精度的幽门螺杆菌诊疗与疾控体系奠定技术和装备基础。　　该工作由中国疾控中心传染病所张建中研究员和单细胞中心徐健研究员共同主持完成，得到了青岛市立医院消化科董全江主任和单细胞中心马波研究员等的帮助。并获得了中科院先导专项、基金委国家重大科学仪器研制项目、国家科技重大专项项目、广州生物岛实验室等的资助。　　原文链接： https://doi.org/10.1093/clinchem/hvac082　　Min Liu#, Pengfei Zhu#, Lei Zhang#, Yanhai Gong, Chen Wang, Lu Sun, Lili Wang, Rongze Chen, Yuli Mao, Xiaoting Fu, Lili Zhang, Teng Xu, Yuetong Ji, Quanjiang Dong, Bo Ma, Jianzhong Zhang*, Jian Xu*. Single-Cell Identification,Drug Susceptibility Test, and Whole-genome Sequencing of Helicobacter pylori Directly from Gastric Biopsy by Clinical Antimicrobial Susceptibility Test Ramanometry, Clinical Chemistry, 2022.

喷雾干燥技术微囊化鼠李糖乳杆菌ATCC 7469益生菌是一种活的微生物，当摄入足够的量时会对健康有益，只有在生存能力（107-1010 CUF m/L）得到保护的情况下才能发挥其作用。益生菌通常是乳杆菌和双岐杆菌，它们常与胃肠道有关；它们通常以冻干培养物的形式供应，或者被雾化并直接添加到食物中。益生菌功能食品在市场上需求量很大，酸奶和发酵乳制品通常被用作这类生物活性微生物的载体；然而，人们对在其他类型的非乳制品基质中掺入益生菌菌株越来越感兴趣，尤其是对于患有乳糖不耐受症、对酪蛋白过敏或与乳制品有关的其它问题的消费者。一些研究报告了微胶囊益生菌的应用。例如，将益生菌菌株掺入奶酪、巧克力涂层和巧克力中，以及掺入果汁、蛋黄酱、黄油、肉类和烘焙产品等非乳制品中。益生菌菌株对胃肠道健康很重要，因为它们可以预防肠道炎症，为上皮细胞提供保护，并调节抗体。它们可以产生细胞因子或趋化因子，改善乳糖不耐受，增加对结直肠癌的保护，抑制幽门螺杆菌活性，并用于治疗食物过敏和预防急性腹泻。然而，这些微生物有不幸的缺陷，特别是在菌株存活方面。喷雾干燥是微胶囊化最广泛使用的方法之一，因为其成本低，在最佳干燥条件下具有高存活率，并且在配方中加入了保护剂。近年来，乳清蛋白作为益生菌保护剂的使用获得了越来越多的兴趣，因为这些蛋白是提高益生菌活性的天然载体，并且由于结构和理化特征，可以作为胃肠道中的递送系统。蛋白质可以在干燥过程中增加益生菌的存活率，因为它们能够形成降低热应力的保护膜。糖的添加也会影响干燥的益生菌制剂的存活。研究人员肯定了糖（如肌醇、山梨醇、果糖、乳糖、葡萄糖和海藻糖）对脱水细菌细胞的保护作用。研究发现，海藻糖等糖是一种能够通过氢键与蛋白质分子相互作用的二糖；它可以在脱水和再水化过程中替代蛋白质周围的水分子，形成一种玻璃状基质，稳定生物大分子。科学家研究了使用奶酪乳清与淀粉、阿拉伯胶、麦芽糖糊精和乳清蛋白浓缩物联合干燥鼠李糖乳杆菌 64 的载体剂选择。另一方面，干燥温度是影响存活率的因素。例如，喷雾干燥的植物乳杆菌 WCFS1 再低干燥温度下表现出较高的存活率。在此背景下，本研究以 WPC、麦芽糊精和海藻糖为原料，采用喷雾干燥的方法对鼠李糖乳杆菌 ATCC 7469 进行微囊化，并评估微囊化对细胞活力和干粉性能的影响。以喷雾干燥条件（包括进口温度、空气流量和进料泵）为自变量，益生菌存活率、水分含量、水分活性和有效产量为因变量。采用响应面法对喷雾干燥包裹的鼠李糖乳杆菌的存活率进行了优化，并对粉末的稳定性进行了评估。1样品制备按最佳稳定性配方乳清浓缩蛋白：麦芽糊精：海藻糖（75：10：15）的比例采用超滤的方法制备乳制品悬浮液。将冻干的鼠李糖乳杆菌 ATCC 7469 菌株悬浮于 2ml 培养基中，在 MRS 肉汤（蛋白胨：10.0g，牛肉浸粉：10.0g，酵母浸粉：5.0g，葡萄糖：20.0g，吐温80：1.0g，磷酸氢二钾：2.0g，醋酸钠：5.0g，柠檬酸铵：2.0g，硫酸镁：0.1g，硫酸锰：0.05g，pH6.2±0.2，25℃）中重新激活制备细菌悬浮液。2实验过程在磁力搅拌下将鼠李糖乳杆菌 ATCC 7469 菌株悬浮液添加到每个乳悬浮液中，在微囊化过程期间使所述分散液保持在恒定的搅拌状态。喷雾干燥仪选用瑞士步琦 B-290，通过改变进口温度（120℃-180℃）、干燥空气流量（70%-90%，即：28-35m3/h）和进料量（10%-55%，即 3-17mL/min）来进行工艺摸索。▲S-300工艺探索采用响应面法和二次复合中心设计对益生菌微囊化进行了优化，其自变量有进口温度、空气流速和进料流量。在最优理论条件下进行了三次实验验证。图1 考察了菌株存活率的响应面变化。由图可知存活率与出口温度呈反比，低温时存活率在 69%、高温时存活率在 23%。其他科学家在使用含益生元的脱脂乳制备鼠李糖乳杆菌 GG（ATCC 53，103），70℃ 时的存活率为 76%。也跟我们的研究结果相吻合。图2 考察了水分含量的响应面变化。从图可得到进口温度与水分含量之间呈反比关系，当进口温度与进料量较高时，粉末的水分含量较低，结合存活率考虑，水分含量在 3.0%-5.8% 之间，与其他报道的数值相接近。图3 考察了水活度的响应面变化。在较高的进口温度下，进料量和气体流量得到了较低的水活度值，因素与结果之间呈反比关系。其他使用麦芽糊精、乳清蛋白浓缩物和葡萄糖的相关研究中，水活度的值与本研究中活性最高的粉末报告结果一致。3实验结果确定益生菌的包封中壁材的最佳比例对于提高微生物对抗整个胃肠道条件的稳定性很重要。在干燥过程中指定最佳条件以最大限度地提高作为壁材的蛋白质-海藻糖-麦芽糊精混合物的保护能力并因此提高鼠李糖的存活值也是重要的。因此，使用响应面方法确定干燥过程的最佳条件。表2显示了鼠李糖乳杆菌微囊化的最佳操作参数，结果表明，理论模型可以很好地近似实验值（差异＜10%）。得到的最佳喷雾干燥条件是进口温度、空气流量和进料泵流量分别为169℃、33m3/h和16ml/min，存活率为70%，吸气率为84%，出口温度为52℃，总体满意度为0.96。物理性质评价如图4所示，得到的粉末水活性动力学显示了较高的吸水能力，这可能是海藻糖作为低分子量碳水化合物，表现出的分子运动和扩散效应，与用于包封基质的典型吸水行为一致。吸湿性随着储存时间的延长有增加的趋势，直到达到某种程度的平衡。因此加入了 WPC 来降低吸湿性，因为它的表面活性和形成具有较高 Tg 膜的能力。粒径和形态结果如图5显示。（a）在最佳工艺参数上制备的粉体，其微胶囊紧凑，类球形形状，具有不同的大小和不规则的表面与压痕，外表面显示无裂缝或破坏的墙壁，这是确保更高的保护和更低的气体渗透性的基础。4结论结果表明，蛋白质-海藻糖-麦芽糊精混合物是包裹鼠李糖乳杆菌的良好壁材，在干燥过程中表现出重要的热保护作用，并提高了其存活率；通过响应面方法优化的喷雾干燥工艺条件生产的微胶囊具有可接受的理化性质——水分、水活性、吸湿性和粒径等，为益生菌的微囊化提供了思路。5文献来源Microencapsulation of Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469 by spray drying using maltodextrin, whey protein concentrate and trehalose.

老牌乳业公司飞鹤如今陷入"布鲁氏杆菌"传染病危机。这种源自牲畜的病菌，已被证实感染了飞鹤乳业的数十位员工，他们相信奶源遭到污染，不过飞鹤否认此事。如今，感染者与飞鹤的争议仍未了结…… 　　50年老厂黑龙江飞鹤乳业，曾在沸沸扬扬的"三聚氰胺"事件中幸免。不过，这次，它卷入一场关于布鲁氏杆菌病例(下称布病)的风波。 　　11月11日，《法治周末》记者调查获悉，黑龙江省飞鹤甘南欧美养殖有限公司(飞鹤乳业下属子公司，下称养殖公司)出现布病病例，几十名工人、600余头奶牛陆续染病。 　　多位职工向《法治周末》记者证实，"牛得病了之后还在正常产奶，牛奶还拉到北厂(飞鹤甘南乳业公司)生产线上生产奶制品".不过，养殖公司公开否认这一说法，并表示，牧场的全部奶牛健康状况良好。 　　目前，感染布病的职工依然在家养病，等待相关部门的鉴定结果。飞鹤乳业虽然按全额为患病职工补发了工资，但并没有得到职工的谅解。 　　现在，患病职工们很担心，因患病导致身体无法全面恢复健康，他们担心自己将来的健康无人负责。 　　布鲁氏病菌侵袭飞鹤 　　今年32岁的马光亮是2009年12月到养殖公司工作的，工种是挤奶工。 　　2010年10月左右，养殖场大量奶牛被查出得了布病，作为挤奶工的马光亮被临时抽调到兽医组为奶牛接种布鲁氏杆菌活菌疫苗。 　　"可能就是接种疫苗时感染上了布病，此后不久，我晚上睡觉时常常冒虚汗，走路都觉得没力气，以前在家自己喜欢炒菜，后来切菜都浑身冒汗，关节也时常疼痛麻木。"马光亮向《法治周末》记者介绍说。 　　和马光亮一样，当时厂内不同工种的多名职工也出现类似症状。这不是黑龙江省唯一的案例。2010年12月，4只未经检疫的山羊进入了东北农业大学的实验室，28名师生在实验后患上了布病。这个消息直到十个月之后才公开。 　　飞鹤养殖场场内兽医组修蹄工郑晓光和马光亮是病情相对严重的。他称，现在在家重活根本干不了，走几百米路就腰酸腿疼，以前能用手抬动100斤左右的煤，现在根本无法做到，已经基本没有劳动能力了。 　　发现有职工感染布病，2011年1月25日，养殖场组织11名职工到甘南县疾病预防控制中心检查，结果11名职工的检查结果全部感染了布病。 　　齐齐哈尔市疾病预防控制中心在今年3月29日出具的职业病诊断证明书显示：上述11名职工的诊断结论均是职业性布鲁氏菌病(急性期)。 　　多位接受采访的患病职工告诉《法治周末》记者，诊断结果出来后，养殖场并没有及时为工人治疗，态度也非常刁蛮，只是发了些口服药，吃药后效果并不明显。 　　在职工的要求下，今年5月，上述患病职工入住齐齐哈尔市第七医院住院治疗。3个月后，病情缓解后出院。 　　此后，他们又到黑龙江省农垦医院进行检查。 　　"黑龙江省农垦医院的检查结果中试管凝剂是1比800,半抗体是1比1600.西医说这病只能祛病症，没法祛病毒。我治了这么长时间，病情还是没减轻，我担心无法根治。"郑晓光称，他同其他几名职工治疗后，病情仍在不断加重。 　　黑龙江省农垦医院给出的诊断是布病感染，症状为骨骼蜕变。 　　"医生说，一般只有老年人才会骨骼蜕变，而我们刚刚壮年，今后能否恢复，自己很担心。"郑晓光说。 　　2011年4月15日，在染病职工的坚持下，甘南县人力和社会保障局为11名职工出具了《企业职工工伤申请和认定决定书》，认定上述职工的伤残为工伤。 　　多位染病职工向记者证实，11名染病职工被查出患病后，厂内组织职工分批进行了检查，又陆续有多名职工查出患有布鲁氏菌病，到目前为止，至少有26名职工被查出患有该病。"就连场长胡格吉勒及两名高层主管都查出患有布鲁氏菌病，但是他们是在海拉尔相关医院检查的，至今没有对外公布。" 　　郑晓光称，国庆节长假期间，媒体关注了此事，县里和场里的负责人已经向他们承诺，尽全力为他和工友进行治疗，现在他和工友们正在接受相关诊断。 　　前不久，他们在齐齐哈尔第一医院接受了彻底检查。 　　染病的挤奶工刘东军告诉《法治周末》记者，在染病治疗初期，厂里只给他开了每月600元的最低工资，前不久刚刚补发了工资。 　　据一位染病的职工介绍，场里最初对待职工染病很漠视，很多职工要求检查都遭到拒绝，有一位职工因自己旷工三天去医院检查，被单位辞退，后来因检查出布病，场里才为其支付了医疗费用。 　　被污染的产业链 　　布鲁氏菌病在中国属乙类传染病。《中华人民共和国传染病防治法》规定管理的传染病分甲、乙、丙三类。乙类传染病是指传染性非典型肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、甲型H1N1流感等疾病。布病病原菌主要由患病牲畜传染给人，使其出现发热、关节肌肉疼痛、乏力、多汗等临床表现，严重的可能导致中枢神经损伤，引起脑膜炎等并发症。 　　这种细菌可能通过三种途径进入人体：人吃了被感染的奶制品、通过人体表面的伤口感染，或通过眼睫膜、鼻腔黏膜、口腔等途径感染。 　　郑晓光是2010年10月到飞鹤养殖场工作的兽医组修蹄工，据他回忆，他刚来厂里不久，就有600余头牛被感染上了布鲁氏杆菌病。此事也得到了其他工友的证实。 　　他在没有任何兽医技术及经验的情况下，被抽调去为奶牛接种布鲁氏杆菌活菌疫苗，"虽然有防护措施，但自己根本没有意识到该病菌的传播和扩散的严重性，导致事后不久就染病。"郑晓光说。 　　多名受访的职工称，染病的牛被隔离在单独的牛舍，每个牛舍200头牛，但是得病的奶牛依然每天按时产奶，养殖场没有采取解决方案，病牛产的奶被拉到北厂的生产线上生产成奶粉。 　　养殖场里的病牛究竟是如何大面积染病的呢? 　　郑晓光怀疑，因为养殖场要建万头养牛基地，奶牛头数不够，去年从新西兰引进了一批，这批牛有可能是染病的牛，后期慢慢传染很多奶牛也得了该病。 　　染病职工分析，他们染病的原因可能是，给病牛投了布鲁氏杆菌活菌疫苗，这种菌到牛身上，可以让病牛一年内维持原来的产量。在第一批投放之后厂子又投了三次苗，这三次每投一次之后就有一批人得病。 　　得病的奶牛依然产奶，这让消费者开始担心飞鹤乳业的奶源安全问题。 　　飞鹤乳业在不久前发表声明矢口否认上述事实，并称奶源质量未受影响。 　　据《法治周末》记者从甘南县政府相关部门了解到，目前，黑龙江省有关部门组成调查组已经进驻该县，针对飞鹤乳业奶源及职工染病问题进行调查，调查结果尚未公布。 　　在飞鹤乳业的官方网站上，企业的口号是："一贯"好奶粉。 　　此前，飞鹤乳业董事长冷友斌在接受媒体采访时称："我的目标是要告诉所有的中国消费者，北纬47度(养殖场所在地)生产的牛奶是最好的。如果中国的孩子还要靠外国人养，那么我觉得是一种屈辱，我就是要做中国最好的婴幼儿奶粉，在我眼里任何事情都不能为质量让路，这是我的底线。" 　　飞鹤乳业一直以诚信著称，始终坚持"不合格原料坚决不投产，不合格产品坚决不出厂"的原则，对鲜奶、原材料、半成品、成品进行24小时全程跟踪检验，经过25道检验程序，203项次检验层层严格把关，确保每一滴奶各项指标不仅完全达到国家食品卫生安全标准，更符合世界卫生组织(WHO)关于婴幼儿食品卫生法规的严格要求。 　　但是，自从职工染病后该企业的诚信口号备受社会各界质疑。 　　甘南县畜牧局的一位未具姓名的负责人告诉《法治周末》记者，飞鹤乳业作为当地的招商引资企业，也是支柱产业，作为畜牧监管部门他们没有权力进场对奶牛进行防疫和检查，所有的检疫项目都由企业自己负责，作为畜牧部门，对发生上述事件也感到无奈。 　　而甘南县疾病预防控制中心主任曲江波对飞鹤乳业职工染病一事似乎是很气愤。 　　11月11日下午两点，养殖场与患病职工在疾病预防控制中心会议室协商患病职工的下一步治疗方案，《法治周末》记者以患病职工亲属身份参加了此次会议，原定和职工商讨的飞鹤牧业董事长王绍刚没有到场，只是派养殖场办公室主任张绍春参加了会议，引起了所有患病职工的不满，会议不欢而散。 　　曲江波介绍说，飞鹤乳业职工染病后，作为疾控中心，一直积极协调职工诊断，并帮助请权威专家，但作为企业的飞鹤乳业根本没有一个积极的态度。 　　染病职工前路茫然 　　黑龙江飞鹤乳业有限公司始建于1962年，2003年5月，飞鹤乳业在美国纳斯达克成功上市，成为中国乳品行业第一家在美国的上市企业 2005年4月，飞鹤乳业成功登陆美国纽约证券交易所 到2007年底，飞鹤仅原料粉销售收入就突破3亿元大关，并远销亚非、中东、欧洲等几十个国家和地区 2008年3月，飞鹤凭借超强实力荣获"2007婴幼行业奶粉类十佳品牌". 　　2008年9月，震惊行业的"三鹿奶粉事件"发生后，飞鹤乳业凭借优质的奶源、过硬的产品质量、严格的检测流程经受住了严峻的考验，成为了为数不多的合格企业之一。 　　2008年10月，飞鹤产品全国各地销售市场供不应求，最高销量与去年同期相比提升600%. 　　作为业内业绩佼佼者，飞鹤乳业在处理此次传染病事件中显得尤为被动。 　　国庆节长假后，媒体报道了飞鹤甘南欧美养殖有限公司有多名牧场的工人感染布鲁氏杆菌事件。飞鹤乳业在当地政府的督导下，为职工进行了进一步检查。 　　中国农业大学动物布鲁氏菌病防控技术研究室吴清民教授接受记者采访时表示，布病分为急性期和慢性期，发烧后一个月左右属于急性期。如果在急性期及时治疗，大多数病例在短期内临床症状会消失，这样病例的疾病复发或形成并发症者只占10%左右。如果患者能够坚持疗程和医嘱，对将来的工作、生活影响不大或无影响。如果治疗不及时或用药不合适，转化为慢性型，则病程很长、反复发作或出现并发症，如关节炎、劳动力下降等，治疗困难，可能影响终生。最为严重的后果是终生残疾，丧失劳动能力或生育能力，但在及时发现并有效治疗的情况下出现这种严重后果的比例较低。 　　可是，接受记者采访的患病职工称，自从查出染病后，只是断断续续治疗，现在所有患病职工都在家等待结果。 　　"得了病不可怕，可怕的是不能治愈，我们现在虽然出院了，可是上下楼都气喘嘘嘘，浑身冒汗，我现在很担心我们的病没有治愈。"马光亮告诉记者。 　　11月11日，患病职工在县疾控中心取走了齐齐哈尔市疾控中心的检验报告，检测结果显示，经定期培养和观察，检测结果为阴性。而同时下发的齐齐哈尔市第一医院的检验报告单显示，一般细菌培养与鉴定，未见细菌生长，布鲁氏菌虎红平凝集实验呈阳性。 　　疾控中心相关负责人为患病职工解释说，从上述结果看，职工感染的布病已经治愈，但体内还有布鲁氏杆菌，只是不再生长。 　　在场的职工要求疾控中心开出治愈证明，遭到婉拒。 　　很多职工在近一段时间要求到齐齐哈尔以外的医院进行检查治疗，但一直没有得到飞鹤乳业的回复。 　　"从结果看，我们现在还不是健康的人，现在找工作甚至自己开个店都需要有健康证，我们才30岁左右，有的刚大学毕业参加工作，我们的未来该怎么办?怎么生活?"刘东军无奈地告诉记者。 　　一位刚大学毕业的患病职工告诉记者，他到场内工作4个月，就得了布病，因为布病病情严重会影响生育，准备要结婚的女朋友也在近日和自己分手了，他觉得很茫然。 　　企业的社会责任 　　现在所有患病职工依然赋闲在家，等待最终结果。养殖场委派的办公室主任张绍春对此也很无奈："具体下一步该怎么做，我也无法答复你们，要等领导研究后再定。" 　　对于这样的结果，患病职工感到很伤心："企业根本没有诚意给我们治好病，让我们不再担心。" 　　此前，王绍刚面对媒体曾表示：对于患病的员工表示一个歉意的同时，承认在日常处理工作中，工作确实做得不细。 　　他表示，对于患病职工的整个赔偿工作现在已经初步达成了一些意见。按照伤残等级鉴定的级别，根据法律法规的规定和治疗期治疗鉴定，根据这几个要件，来共同进行下一步的赔偿流程。 　　染病职工对此说法并不认可，他们表示，自从患病以来，只见到王绍刚一次，王承诺以后，就再没有见到过他，他们怀疑企业对职工的诚意，并希望能进一步到相关权威医院继续诊疗。 　　10月4日，甘南县副县长陈景春在接受媒体采访时介绍，目前飞鹤甘南牧场的全部奶牛健康状况良好，奶源质量也没有受到影响，经过齐齐哈尔市质量技术监督部门的监测，乳制品产品的质量，符合国家标准。 　　但这一面之词受到公众质疑：在没有专家组调查得出结果前，甘南县政府单方面承诺上述事实，显然有失公允。在媒体报道短短两天之内，甘南县政府通过何种途径检测的，有没有第三方介入? 　　在甘南县政府网站，甘南县县委书记王洪公开讲话称，2010年，全县规模以上工业增加值实现12亿元，增长92.8% 实缴税金6707万元。飞鹤(甘南)乳品加工项目加工鲜奶45223吨，实缴税金4000万元，成为全县税收支柱企业。 　　甘南县县长崔凤臣所做的《2010年政府工作报告》显示，2009年，飞鹤乳业公司新建机械榨乳站60个，保证了鲜奶的品质和安全，累计加工鲜奶59426吨，实现增加值3.3亿元，实缴税金5146万元。 　　飞鹤甘南欧美养殖有限公司董事长王绍刚接受《法治周末》记者采访时承认，因为企业对传染病防治工作经验的欠缺，导致奶牛和职工染病，现在省市县三级政府对此事相当重视，会严格按照传染病防治法的相关规定，为职工继续治疗和相关补偿。 　　"我们已经对染病的奶牛进行处理，淘汰后屠宰掩埋。"王少刚介绍说。但他拒绝向记者透露染病奶牛的数量。 　　王绍刚称，虽然飞鹤乳业是当地的支柱产业，但政府已经积极应对，不会对此事进行隐瞒包庇。 　　对于染病奶牛还继续产奶一事，王绍刚没有向记者正面回复。