即用型硫乙醇酸盐流体培养

硫乙醇酸盐流体培养硫基在培养过程中会变红色，培养基会不会无效了

问：常用菌种及培养基英文对照答：Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌 Bacillus pumilus 短小芽胞杆菌 Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌 Micrococcus luteus藤黄微球菌 Escherichia coli 大肠埃希杆菌 Saccharomyces cerevisiae啤酒酵母菌 Candida albicans 白色念珠菌 Aspergillus niger黑曲霉 Salmonella paratyphi B 乙型副伤寒沙门(氏)菌 Pseudomonas aeruginosa铜绿假单胞菌 Coliform 大肠菌群 Clostridium 梭菌 Nutrient agar 营养琼脂培养基 Rose Bengal agar Sodium 玫瑰红钠琼脂培养基 Nutrient broth medium营养肉汤培养基 Thioglycollate medium 硫乙醇酸盐流体培养基 Martin medium modified 改良马丁培养基 Bile salt lactose enrichment 胆盐乳糖培养基 0.1％ peptone water medium 0.1% 蛋白胨水 pH 7.0 sodium chloride peptone buffer pH 7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液 Lactose bile salt fermentation medium 乳糖胆盐发酵培养基[

[color=#444444]国标中的亚硝酸盐的测定方法是针对肉制品的，偶的乳酸菌培养液为[/color][color=#444444]MRS[/color][color=#444444]液体培养基[/color][color=#444444]+[/color][color=#444444]番茄汁，请问如何测它的亚硝酸盐残留量？[/color]

培养结核杆菌的培养基，从性状上分主要有固体培养基、液体培养基、半流体培养基、固液双相培养基等类型，这些培养基各有特点。　　1.1 固体培养基 最常用的是罗氏（Lownstein-Jenson，L-J）培养基，也是最具代表性的一种，其他的还有小川辰次（Tatsujiogawa）鸡蛋培养基和Middle brook 7H10、7H11等琼脂培养基等。在固体培养基中，由于可以直接观察菌落的形态并可做鉴别用，因此常用于临床标本的分离培养、鉴别、保存菌种及对抗结核药物的敏感性测定等方面，缺点是结核菌生长缓慢。　　1.2 液体培养基 常用的有苏通（Sauton）培养基、Middle brook 7H9等液体培养基。结核杆菌在液体培养基中能够更广泛的接触营养成分，因此在液体中生长相对较快,主要在液体表面生长，搅动时下沉至管底，可获得大量的结核杆菌。主要缺点是：在对临床标本的收集、采样、运输方面有不利的一面；不能根据肉眼观察菌落形态；培养基污染机会多，影响结核杆菌的生长，污染时不易与结核杆菌鉴别，需涂片染色镜检判断结核杆菌是否生长。　　1.3 半流体培养基 改良苏通半流体琼脂培养基是一种人工综合培养基，基质透明，呈半流体状态，生长的结核杆菌形成白色颗粒状菌落悬浮于培养基中段，便于观察。　　1.4 固液双向培养基 Septi-Check AFB双相培养基是国外应用较早的一种培养基，采用BD专利式封闭式固液双相一体化培养基设计。液相为Middle brook 7H9分枝杆菌专用增菌培养基，可迅速繁殖分枝杆菌，固相为3种固体培养基平面：Middle brook 7H11和改良的L-J培养基用于及时将增菌肉汤内分枝杆菌进行分离纯化以获得单个菌落，巧克力琼脂用于早期发现污染菌，避免时间浪费。由于有液相作为基础，因此结核杆菌生长较快，也是一种非常有效的培养基。国内有用平菇制备的平菇双相培养基是利用平菇浸出液为基础，加小牛血清、琼脂等成分而配制的一种培养基，根据琼脂的量不同制成液相、固相培养基。在国内应用较少，主要特点是成本低，制备简单，适合于基层使用，有一定的研究价值。

单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落（colony）。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔（lawn）。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板（culture plate）的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。　　　1. 稀释倒平板法（pour plate method）　　先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。　　　2. 涂布平板法（spread plate method）　　由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。　　3. 平板划线法（streak plate method）　　用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。　　　4. 稀释摇管法（dilution shake culture method）　　用固体培养基分离严格厌氧菌有它特殊的地方。如果该微生物暴露于空气中不立即死亡，可以采用通常的方法制备平板，然后置放在封闭的容器中培养，容器中的氧气可采用化学、物理或生物的方法清除。对于那些对氧气更为敏感的厌氧性微生物，纯培养的分离则可采用稀释摇管培养法进行，它是稀释倒平板法的一种变通形式* 。先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，菌落形成在琼脂柱的中间。进行单菌落的挑取和移植，需先用一只灭菌针将液体石蜡--石蜡盖取出，再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，置放在培养皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。

首先需了解微生物需要的营养物质。 （1）微生物需要的营养物质营养物质应满足微生物的生长、繁殖和完成各种生理活动的需要。它们的作用可概括为形成结构（参与细胞组成）、提供能量和调节作用（构成酶的活性和物质运输系统）。微生物的营养物质有六大类要素，即水、碳源、氮源、无机盐、生长因子和能源。① 水水是微生物的重要组成部分，在代谢中占有重要地位。水在细胞中有两种存在形式：结合水和游离水。结合水与溶质或其他分子结合在一起，很难加以利用。游离水（或称为非结合水）则可以被微生物利用。② 碳源碳在细胞的干物质中约占50%，所以微生物对碳的需求最大。凡是作为微生物细胞结构或代谢产物中碳架来源的营养物质，称为碳源。作为微生物营养的碳源物质种类很多，从简单的无机物（CO2、碳酸盐）到复杂的有机含碳化合物（糖、糖的衍生物、脂类、醇类、有机酸、芳香化合物及各种含碳化合物等）。但不同微生物利用碳源的能力不同，假单孢菌属可利用90种以上的碳源，甲烷氧化菌仅利用两种有机物：甲烷和甲醇，某些纤维素分解菌只能利用纤维素。大多数微生物是异养型，以有机化合物为碳源。能够利用的碳源种类很多，其中糖类是最好的碳源。异养微生物将碳源在体内经一系列复杂的化学反应，最终用于构成细胞物质，或为机体提供生理活动所需的能量。所以，碳源往往也是能源物质。自养菌以CO2、碳酸盐为唯一或主要的碳源。CO2是被彻底氧化的物质，其转化成细胞成分是一个还原过程。因此，这类微生物同时需要从光或其他无机物氧化获得能量。这类微生物的碳源和能源分别属于不同物质。③ 氮源凡是构成微生物细胞的物质或代谢产物中氮元素来源的营养物质，称为氮源。细胞干物质中氮的含量仅次于碳和氧。氮是组成核酸和蛋白质的重要元素，氮对微生物的生长发育有着重要作用。从分子态的N2到复杂的含氮化合物都能够被不同微生物所利用，而不同类型的微生物能够利用的氮源差异较大。固氮微生物能利用分子态N2合成自己需要的氨基酸和蛋白质，也能利用无机氮和有机氮化物，但在这种情况下，它们便失去了固氮能力。此外，有些光合细菌、蓝藻和真菌也有固氮作用。许多腐生细菌和动植物的病原菌不能固氮，一般利用铵盐或其他含氮盐作氮源。硝酸盐必须先还原为NH+4后，才能用于生物合成。以无机氮化物为唯一氮源的微生物都能利用铵盐，但它们并不都能利用硝酸盐。有机氮源有蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、玉米浆等，工业上能够用黄豆饼粉、花生饼粉和鱼粉等作为氮源。有机氮源中的氮往往是蛋白质或其降解产物。氮源一般只提供合成细胞质和细胞中其他结构的原料，不作为能源。只有少数细菌，如硝化细菌利用铵盐、硝酸盐作氮源和能源。④ 无机盐无机盐也是微生物生长所不可缺少的营养物质。其主要功能是：① 构成细胞的组成成分；② 作为酶的组成成分；③ 维持酶的活性；④ 调节细胞的渗透压、氢离子浓度和氧化还原电位；⑤ 作为某些自氧菌的能源。磷、硫、钾、钠、钙、镁等盐参与细胞结构组成，并与能量转移、细胞透性调节功能有关。微生物对它们的需求量较大（10-4～10-3 mol/L），称为“宏量元素”。没有它们，微生物就无法生长。铁、锰、铜、钴、锌、钼等盐一般是酶的辅因子，需求量不大（10-8～10-6 mol/L），所以，称为“微量元素”。不同微生物对以上各种元素的需求量各不相同。铁元素介于宏量和微量元素之间。在配制培养基时，可通过添加有关化学试剂来补充宏量元素，其中首选是K2HPO4和MgSO4，它们可提供需要量很大的元素：K、P、S和Mg。微量元素在一些化学试剂、天然水和天然培养基组分中都以杂质等状态存在，在玻璃器皿等实验用品上也有少量存在，所以，不必另行加入。⑤ 生长因子一些异养型微生物在一般碳源、氮源和无机盐的培养基中培养不能生长或生长较差。当在培养基中加入某些组织（或细胞）提取液时，这些微生物就生长良好，说明这些组织或细胞中含有这些微生物生长所必须的营养因子，这些因子称为生长因子。生长因子可定义为：某些微生物本身不能从普通的碳源、氮源合成，需要额外少量加入才能满足需要的有机物质，包括氨基酸、维生素、嘌呤、嘧啶及其衍生物，有时也包括一些脂肪酸及其他膜成分。各种微生物所需的生长因子不同，有的需要多种，有的仅需要一种，有的则不需要。一种微生物所需的生长因子也会随培养条件的变化而变化，如在培养基中是否有前体物质、通气条件、pH和温度等条件，都会影响微生物对生长因子的需求。从自然界直接分离的任何微生物，在其发生营养缺陷突变前的菌株，均称为该微生物的野生型。绝大多数野生型菌株只需简单的碳源和氮源等就能生长，不需要添加生长因子；经人工诱变后，常会丧失合成某种营养物质的能力，在这些菌株生长的培养基中，必须添加某种氨基酸、嘌呤、嘧啶或维生素等生长因子。⑥ 能源能源是指为微生物的生命活动提供最初能量来源的营养物或辐射能。化能异养型微生物的能源即碳源；化能自养型微生物的能源都是还原态的无机物，如NH4+、NO2-、S、H2S、H2、Fe2+等，它们分别属于硝化细菌、亚硝酸细菌、硫化细菌、硫细菌、氢细菌和铁细菌等。一种营养物常有一种以上营养要素的功能，即除单功能营养物外，还有双功能，甚至三功能营养物。辐射能是单功能；还原态无机养分常是双功能的（NH4+既是硝化细菌的能源，又是它的氮源）甚至是三功能的（能源、氮源和碳源）；有机物常有双功能或三功能作用。（2）配制培养基必须遵循的原则微生物的培养基通常指人工配制的适合微生物生长繁殖，或积累代谢产物的营养基质。广义上说，凡是支持微生物生长繁殖的介质或材料，均可作为微生物的培养基。一个适当的培养基配方，对发酵产品的产量和质量有着极大的影响。针对不同微生物，不同的营养要求，可以有不同的培养基。但它们的配制必须遵循一定原则。① 营养物质应满足微生物的需要。不同营养类型的微生物对营养的需求差异很大，应根据菌种对各营养要素的不同要求进行配制。② 营养物的浓度及配比应恰当。营养物浓度太低，不能满足微生物生长的需要；浓度太高，又会抑制微生物生长。糖和盐浓度高有抑菌作用。碳氮比（C∶N，以还原糖含量与粗蛋白含量的比值表示）：一般培养基为C∶N=100∶0.5～2。在设计培养基配比时，还应考虑避免培养基中各成分之间的相互作用，如蛋白胨、酵母膏中含有磷酸盐时，会与培养基中钙或镁离子在加热时发生沉淀作用；在高温下，还原糖也会与蛋白质或氨基酸相互作用而产生褐色物质。③ 物理、化学条件适宜。pH：各种微生物均有其生长繁殖的最适pH，细菌为7.0～8.0，放线菌为7.5～8.5，酵母为3.8～6.0，霉菌为4.0～5.8。对于具体的微生物菌种，都有各自的特定的最适pH范围，有时会大大突破上述界限。在微生物生长繁殖过程中，会产生能够引起培养基的pH改变的代谢产物，尤其是不少微生物有很强的产酸能力，如不适当地加以调节，就会抑制甚至于杀死其自身。在设计培养基时，要考虑培养基的pH调节能力。一般应加入缓冲液或CaCO3，使培养基的pH稳定。其他：培养基的其他理化指标，如水活度、渗透压也会影响微生物的培养。在配制培养基时，通常不必测定这些指标，因为培养基中各种成分及其浓度等指标的优化，已间接地确定了培养基的水活度和渗透压。此外，各种微生物培养基的氧化还原电位等也有不同的要求。④ 培养目的：培养基的成分直接影响培养目标。在设计培养基时，必须考虑是要培养菌体，还是要积累菌体代谢产物；是实验室培养，还是大规模发酵等问题。用于培养菌体的种子培养基营养成分应丰富，氮源含量宜高，即碳氮比值应低；相反，用于大量积累代谢产物的发酵培养基，氮源应比种子培养基稍低；当然，若目的产物是含氮化合物时，有时还应该提高培养基的氮源含量。在设计培养基时，还应该特别考虑到代谢产物是初级代谢产物，还是次级代谢产物。如果是次级代谢产物，还要考虑是否需加入特殊元素（如维生素B12中Co）或特殊的前体物质（如生产青霉素G时，应加入苯乙酸）。在设计培养基，尤其是大规模发酵生产用的培养基时，还应该重视培养基组分的来源和价格，应该优先选择来源广、价格低廉的培养基。（3）几种培养基的配制原则① 种子培养基：适用于微生物菌体生长的培养基，目的是为下一步发酵提供数量较多，强壮而整齐的种子细胞。一般要求氮源、维生素丰富，原料要精。② 发酵培养基：用于生产预定发酵产物的培养基，一般的发酵产物以碳源为主要元素。发酵培养基中的碳源含量往往高于种子培养基。如果产物的含氮量高，应增加氮源。在

微生物培养的仪器问题对于微生物的研究，拥有大量的实验材料是十分必要的，这就需要进行微生物的培养。而且，对于某些微生物病原体的检测，也是需要进行微生物的培养。所以微生物培养用的培养基的制作也就成为了最基本的实验技术。 然而现今培养基已经可以工业化生产，技术也比较成熟，也就对培养基不是那么重视了。常识性的，培养基分为天然的（Defined Media）和合成的（Complex Media） 。天然培养基是提供接近于微生物生长的自然环境的营养物质，然而为此付出的代价是我们并不完全清楚其中的物质的组成或其含量，这种培养基可以用于实验用基本培养基和生产，但在作某些实验时得到的数据会不稳定。合成的培养基是用多种高纯化学试剂配制成的，各种成分和含量都是已知的。虽然制作成本高，也很烦琐，但成分精确，重复性强，用于对于营养、代谢、生理生化特性的研究等要求较高的工作。然而可以在这种微生物培养基上生长的微生物十分有限，原应是许多微生物的生长代谢我们并不完全了解，无法配出微生物满意的营养基质。现在的微生物培养技术已经相当成熟了，然而其中总有令人不满的地方。比如，无论何时空气中总有微生物，无论是制作培养基过程中还是将微生物接种到培养基上时总会和空气接触，很容易想到不久后长出的菌落到底是谁的，样品的？还是空气的？这些也许是无法避免的，但确实会带来很多麻烦。整个过程充满着失败的可能性，没有先进的仪器设备就无法降低这种可能性，对于研究这种时时处处在身边的小东西我们总显得有点力不从心。用铁丝接种环划线就很容易弄坏培养基，更别说分离出单菌落了。这需要经验和技术，对于一个研究微生物的人来说本不该去关心的经验和技术。前人也许是这样的，但我们未必也需要这样。对于无法用肉眼观察的东西，研究和培养是很困难的，尤其是没有先进的仪器设备的时候，那种痛苦是可想而知的。我们现在用的固体培养基大都是用琼脂。在琼脂发现以前，想要做细菌的纯培养是非常困难的，那时候只有液体培养基，根本无法进行纯培养。后来用凝胶培养基，但很多细菌都无法在基质上正常生长，直到琼脂被用来做固体培养基的基质，才解决了这个难题。应为琼脂是多聚糖的硫酸盐，其中主要是D-半乳糖，一般微生物很难分解利用它。这在微生物培养上是一次很大的革新。由于材料容易获得，而且本身的特性又很好，所以至今仍在使用。然而，微生物的培养依旧受到很大限制。我们对微生物的了解还不够多，许多微生物的培养只能用天然培养基，这在要求可重复的实验中会带来很大的麻烦；另外，条件的限制导致很多实验都无法达到无菌环境，实验结果有多少是可靠的，很难说明。微生物的培养只是一种手段，但却是一种很重要的手段。虽然只要能说明研究成果就可以了，但在实际操作中也确实有着非常繁琐，难以操作的地方存在，只要做过微生物培养的实验便可以知道，想要做出漂亮的结果是非常困难的，其中需要改进的地方有很多，比如有没有办法就算再不是无菌的环境下也能尽量减少空气中细菌的干扰，可不可以用更柔软的材料做接种环来划线，有没有其他的方法来给涂布棒灭菌。不然实验失败很难找出其中的原因。虽然实验失败的可能性很多，但我们至少应该减少它发生的可能性。微生物培养基是微生物实验必不可少的组成，它以及与它有关的组成构成了微生物培养的装置，这些仪器和操作中的不确定因素太多，这样做出的实验结果是没有说服力的。这些仪器和操作有待于改进。（因为我的基础太差，所以无法指出其中需要改进的地方到底应该改成怎样，但已经明显体会到了这些仪器以及操作的不足之处。）

最近用SE-54毛细管色谱柱分离：二乙醇胺和二氯乙醇胺盐酸盐，用乙醇溶解，分离效果很不理想，头痛啊，请高手指点，是不是柱子不适合，还是条件参数问题？

01糖发酵管：包括蔗糖发酵管，乳糖发酵管，水杨苷发酵管等等02 ONPG培养基：现常配制成现成的生化管03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸-苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液 42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN-1培养基 70 嗜盐性试验培养基

01糖发酵管：包括蔗糖发酵管，乳糖发酵管，水杨苷发酵管等等02 ONPG培养基：现常配制成现成的生化管03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸-苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液 42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN-1培养基 70 嗜盐性试验培养基

我最近在做生物反硝化实验，需要测定培养基中的硝酸盐浓度。我采用标准方法紫外分光光度计，对加了1000mg/LNO3浓度的胰蛋白大豆肉汤培养基测试，结果得到NO3浓度为1945mg/L，相对误差达95%。请问有谁用此法测过深色培养基中的NO3浓度吗？可用紫外法测试吗？请有这方面信息的朋友告我知。谢谢！

大肠杆菌显色培养基E.Coli Chromogenic Medium大肠菌群显色培养基Coliform Chromogenic Medium大肠杆菌／大肠菌群显色培养基E.Coli/Coliform Chromogenic Medium细菌总数显色培养基Total Genes Chromogenic Medium O157显色培养基O157 Chromogenic Medium沙门氏菌显色培养基Salmonella Chromogenic Medium李氏菌显色培养基Listera Chromogenic Medium金黄色葡萄球显色培养基Staphylococcus Chromogenic Medium霉菌和酵母菌显色培养基Mould and Yeast Chromogenic Medium弧菌显色培养基Vibrio Chromogenic Medium坂崎杆菌显色培养基Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium平板计数琼脂（PCA）Plate Count Agar月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） Lauryl Sulfate Tryptose Broth4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB） Brilliant Green Lactose Bile BroghEC 肉汤 E.Coli Broth新生霉素A伊红美蓝琼脂 (EMB)Eosin-Methylene Blue Agar营养肉汤 (NB) Nutrient Broth营养琼脂 (NA) Nutrient Agar乳糖胆盐发酵培养基 Lactose Bile Broth乳糖复发酵培养基 Lactose Broth去氧胆酸盐琼脂 Desoxycholate Lactose AgarMR-VP培养基 Methyl Red Voges Proskauer Broth结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar西蒙氏枸橼酸盐琼脂 Simmons Citrate Agar肠道菌计数琼脂 (VRBDA) Violet Red Bile Dextrose Agar 菌种保存培养基 Strain Store Medium品红亚硫酸钠琼脂 Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar乳糖蛋白胨培养液 Lactose Peptone BrothCary-Blair 氏运送培养基 Cary-Blair Transport Medium山梨酸麦康凯琼脂基础 Sorbitol Maconkey Agar Base噻孢霉素 A1%亚碲酸钾溶液亮绿乳糖培养基 Brilliant Green Lactose Medium肠道菌增菌肉汤(EE) Enterobacteria Enrichment BrothTTC营养琼脂 TTC Nutrient AgarLB肉汤 LB BrothLB营养琼脂 LB Nutrient Agar苯丙氨酸脱氨酶培养基 Phenylalanine Deaminase Agar Medium哥伦比亚血琼脂基础Columbia Blood Agar Base2216E琼脂2216E　Agar肠球菌琼脂(胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂)Enterococcosel Agar(Bile Esculin Azide Agar)BDS培养基BDS Medium葡萄糖琼脂Dextrose AgarAndrade氏糖类肉汤Andrade's Carbohydrate BrothKoser氏枸椽酸盐肉汤Koser Citrate Sodium BrothEndo 培养基Endo Agar缓冲MUG琼脂Buffer MUG Agar乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂LMG Agar茜素-β-半乳糖苷琼脂Aliz-gal AgarTergitol-7 琼脂Tergitol-7 AgarTTC 溶液(0.125%)TTC Solution(0.125%)胰蛋白胨大豆肉汤 Trypticase (Tryptic) Soy BrothBaird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion胰蛋白胨大豆肉汤 Trypticase (Tryptic) Soy BrothBaird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion兔血浆 Freeze-Dried PlasmaDNA酶琼脂 DNase Agar7.5%氯化钠肉汤 7.5% Sodium Chloride Broth普通肉汤培养基 Broth Medium亚碲酸钠肉汤培养基基础 Sodium Tellurite Broth Base葡萄球菌增菌肉汤 Staphylococcus Enrichment Broth葡萄球菌选择性琼脂 Staphylococcus Selective AgarEEM培养基EEM medium甘露醇高盐琼脂 Manitol Salt Agar肠毒素产毒培养基TMP琼脂培养基缓冲蛋白胨水（BPW） Buffered Peptone Water亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC） Selenite Cystine Broth四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB)Tetrathionate Broth Base胆硫乳琼脂（DHL） Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar三糖铁琼脂（TSI） Triple Sugar Iron AgarSS 琼脂 Salmonella Shigella Agar亚硫酸铋琼脂（BS） Bismuth Sulfite Agar亚利桑那菌琼脂（SA） Salmonella Arizona Agar氯化镁孔雀绿肉汤（MM，RV Medium） Rappaport-Vassiliadis MdeiumHE 琼脂（HE） Hekton Enteric Agar赖氨酸脱羧酶培养基 Lysine-decarboxylase Test Broth尿素酶琼脂基础 Urease Agar Base 40%尿素水 40%Urea WaterV-P 半固体琼脂 Voges-Proskauer Semisolid Agar吲哚培养基 Indole MediumKovacs氏靛基质试剂盒硝酸盐氰化钾培养基基础 Nitrate(KCN) Broth Base丙二酸钠培养基 Malonate Broth卫矛醇半固体琼脂 Dulcitol Semisolid AgarGN 增菌液 Gram Negative Enrichment BrothXLD 培养基 Xylose Lysine Desoxycholate MediumWS 琼脂 WS Salmonella Agar葡萄糖铵培养基 Ammonium Dextrose Medium葡萄糖半固体培养基 Dextrose Semisolid Medium动力－吲哚－尿素培养基基础(MIU) Motility Indol Urea Medium Base亚硒酸盐增菌液(SF) Selenite Enrichment Medium醋酸铅培养基 Lead Acetate MediumSIM培养基 Hydrogen Sulfide Indole Motility Medium乳糖肉汤 Lactose Broth

1、选择适宜的营养物质 总体而言，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但由于微生物营养类型复杂，不同微生物对营养物质的需求是不一样的，因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。自养型微生物能从简单的元机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物，因此培养自养型微生物的培养基完全可以(或应该)由简单的无机物组成。例如，培养化能自养型的氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxdans)的培养基组成见表3.9。在该培养基配制过程中并末专门加入其他碳源物质，而是依靠空气中和溶于水中的CO2为氧化硫硫杆菌提供碳源。 就微生物主要类型而言，有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分，培养它们所需的培养基各不相同。在实验室中常用牛肉膏蛋白胨培养基(或简称普通肉汤培养基)培养细菌，用高氏I号合成培养基培养放线菌，培养酵母菌一般用麦芽汁培养基，培养霉菌则一般用查氏合成培养基。2、营养物质浓度及配比合适 培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用，例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑菌或杀菌作用。另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。严格地讲，碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。例如，在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中，培养基碳氮比为4/l时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；当培养基碳氮比为3/l时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。再如，在抗生素发酵生产过程中，可以通过控制培养基中速效氮(或碳)源与迟效氮(或碳)源之间的比例来控制菌体生长与抗生素的合成协调。3、控制pH条件 培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同，一般来讲，细菌与放线菌适于在pH7～7.5范围内生长，酵母菌和霉菌通常在pH4.5～6范围内生长。值得注意的是，在微生物生长繁殖和代谢过程中，由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累，会导致培养基pH发生变化，若不对培养基pH条件进行控制，往往导致微生物生长速度下降或(和)代谢产物产量下降。因此，为了维持培养基pH的相对恒定，通常在培养基中加入pH缓冲剂，常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐(如KH2PO4 和K2HPO4)组成的混合物。K2HPO4溶液呈碱性，KH2PO4溶液呈酸性，两种物质的等量混合溶液的pH为6.8。当培养基中酸性物质积累导致H+浓度增加时，H+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物，培养基pH不会过度降低；如果培养基中OH-浓度增加，OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物，培养基pH也不会过度升高。 但KH2PO4 和K2HPO4缓冲系统只能在一定的pH范围(pH6.4～7.2)内起调节作用。有些微生物，如乳酸菌能大量产酸，上述缓冲系统就难以起到缓冲作用，此时可在培养基中添加难溶的碳酸盐(如CaCO3)来进行调节，CaCO3难溶于水，不会使培养基pH过度升高，但它可以不断中和微生物产生的酸，同时释放出CO2，将培养基pH控制在一定范围内。 在培养基中还存在一些天然的缓冲系统，如氨基酸、肽、蛋白质都属于两性电解质，也可起到缓冲剂的作用。4、控制氧化还原电位(redox　potential) 不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样，一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长，一般以+0.3一+0.4V为宜，厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长，兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸，在+0.1V以下时进行发酵。F值与氧分压和pH有关，也受某些微生物代谢产物的影响。在pH相对稳定的条件下，可通过增加通气量(如振荡培养、搅拌)提高培养基的氧分压，或加入氧化剂，从而增加F值；在培养基中加入抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等还原性物质可降低F值。5、原料来源的选择 在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分，特别是在发酵工业中，培养基用量很大，利用低成本的原料更体现出其经济价值。例如，在微生物单细胞蛋白的工业生产过程中，常常利用糖蜜(制糖工业中含有蔗糖的废液)、乳清(乳制品工业中含有乳糖的废液)、豆制品工业废液及黑废液(造纸工业中含有戊糖和己糖的亚硫酸纸浆)等都可作为培养基的原料。再如，工业上的甲烷发酵主要利用废水、废渣作原料，而在我国农村，已推广利用人畜粪便及禾草为原料发酵生产甲烷作为燃料。另外，大量的农副产品或制品，如鼓皮、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、花生饼、蛋白胨等都是常用的发酵工业原料。

微生物常用培养基中英文对照一、显色培养基：大肠杆菌显色培养基 E.Coli Chromogenic Medium大肠菌群显色培养基 Coliform Chromogenic Medium大肠杆菌/大肠菌群显色培养基 E.Coli/Coliform Chromogenic Medium细菌总数显色培养基 Total Genes Chromogenic MediumO157显色培养基 O157 Chromogenic Medium沙门氏菌显色培养基 Salmonella Chromogenic Medium李氏菌显色培养基 Listera Chromogenic Medium金黄色葡萄球显色培养基Staphylococcus Chromogenic Medium霉菌和酵母菌显色培养基 Mould and Yeast Chromogenic Medium弧菌显色培养基Vibrio Chromogenic Medium坂崎杆菌显色培养基Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium二、常用检测培养基：平板计数琼脂(PCA) Plate Count Agar月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST) Lauryl Sulfate Tryptose Broth煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB) Brilliant Green Lactose Bile BrothEC 肉汤 E.Coli Broth伊红美蓝琼脂 (EMB) Eosin-Methylene Blue Agar营养肉汤 (NB) Nutrient Broth营养琼脂 (NA) Nutrient Agar乳糖胆盐发酵培养基 Lactose Bile Broth乳糖发酵培养基 Lactose Broth结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar去氧胆酸盐琼脂 Desoxycholate Lactose Agar肠道菌计数琼脂 (VRBDA) Violet Red Bile Dextrose Agar肠道菌增菌肉汤(EE) Enterobacteria Enrichment Broth7.5%氯化钠肉汤 7.5% Sodium Chloride BrothBaird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base胰蛋白胨大豆肉汤（TSB) Trypticase (Tryptic) Soy Broth胰蛋白胨大豆琼脂（TSA) Tryptose Soya Agar胰月示-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础 (TSC) Tryptose Sulfite Cycloserine Agar Base甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP)Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion缓冲蛋白胨水(BPW) Buffered Peptone Water亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) Selenite Cystine Broth四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB) Tetrathionate Broth Base胆硫乳琼脂(DHL) Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose AgarSS 琼脂 Salmonella Shigella Agar亚硫酸铋琼脂(BS) Bismuth Sulfite Agar亚利桑那菌琼脂(SA) Salmonella Arizona AgarHE 琼脂(HE) Hekton Enteric Agar三糖铁琼脂(TSI) Triple Sugar Iron Agar马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) Potato Dextrose Agar高盐察氏琼脂 Salt Czapek Dox Agar沙氏琼脂培养基 Sabouraud’s Agar孟加拉红培养基 Rose Bengal MediumYPD琼脂Yeast Peptone Dextrose Agar胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base酪蛋白琼脂Casein Agar产芽孢肉汤Sporulation Broth溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基 Glucase Peptone Water Medium李氏菌增菌肉汤(LB1,LB2)基础Listeria Enrichment Broth Base半固体动力培养基Motility Test三、培养基基础：胰蛋白胨Tryptone酪蛋白胨Peptone from Casein植物(大豆)蛋白胨Peptone from soy月示胨Proteose peptone多价蛋白胨Polypeptone特殊蛋白胨Peptone Special牛心浸粉Beef Heart Infusion肝浸粉Liver Infusion牛肉浸粉Beef Extract Powder酵母浸粉Yeast Extract Powder酸水解酪蛋白Casein acid Hydrolysate细菌琼脂粉Bacterial Agar牛胆盐Bile Salt

水质 硫酸盐的测定 火焰[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度法Water quality-Determination of sulphate-Flame atomic absorption spectrophotometric methodGB 13196—911 主题内容与适用范围1.1 本标准规定了间接测定水中可溶性硫酸盐的火焰[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度法。 1.2 本标准适用于地表水、地下水及饮用水可溶性硫酸盐的测定。1.3 本标准的最低检出浓度为0.4mg／L，测定上限当取样量为10mL时，是30mg／L。当取样虽为1mL时，则是300mg／L。水样适当稀释，测定范围还可以扩大。1.4 Pb2＋和PO43－对测定产生于扰，但10μg以下的Pb2＋或PO43－可允许存在。2 原理在水-乙醇的氨性介质中，硫酸盐与铬酸钡悬浊液反应。反应式如下：SO42－＋BaCrO4→BaSO4↓＋CrO42－用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]法测定反应释放出的铬酸根，即可间接算出硫酸盐的含量。所用火焰。为空气-乙炔富燃性黄色火焰，测定波长为359.3nm。3 试剂除非另有说明，分析时均使用符合国家标准或专业标准分析纯试剂，去离子水或同等纯度的水。3.1 盐酸(HCl)：ρ＝1.19g／mL。3.2 冰乙酸(CH3COOH)：ρ＝1.05g／mL。3.3 氢氧化铵(NH4OH)：ρ＝0.880g／mL。3.4 无水乙醇(CH3CH2OH)。3.5 氢氧化铵溶液：1＋1。用氢氧化铵(3.3)配制。临用时现配。3.6 混合酸溶液：盐酸(3.1)0.42mL，冰乙酸(3.2)14.7mL混合，用水稀释至200mL。3.7 钙溶液：1mg／mL。称0.28g氯化钙(CaCl2)溶于100mL水中，摇匀。3.8 铬酸钡悬浊液：称0.5g铬酸钡(BaCrO4)溶于200mL。混合酸溶液(3.6)中，贮于聚乙烯瓶中。用前振摇。3.9 硫酸盐标准溶液，SO42－：100mg／L。准确称取无水硫酸纳(Na2SO4，在105℃烘2h)0.0740g，用适量水溶解，转入500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。4 仪器一般实验室仪器和4.1 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度计。4.2 铬空心阴极灯。4.3 乙炔的供气装置。4.4 空气压缩机，加除油、水及杂质装置。4.5 过滤器，见下图。过滤装置图1－抽滤瓶；2—10mL比色管；3－带砂芯的玻璃过滤器；4－比色管塞；5－胶盖；6－0.45μm滤膜；7－接抽气泵5 采样及样品水样采集后，立即用0.45μm滤膜抽滤除去悬浮物，贮存于聚乙烯瓶中。6 步骤6.1 试料取10mL水样置于25mL比色管中，如硫酸根含量大于30mg／L，可适量少取样品，然后加水至10mL。6.2 测定6.2.1 前处理：在试料(6.1)中，依次加入铬酸钡悬浊液(3.7)2mL，氢氧化铵溶液(3.5)1mL，钙溶液(3.6)1mL，无水乙醇(3.4)8mL，加水至标线，摇匀。放置30min后，用0.45μm滤膜抽滤(装置见图1)于10mL干燥比色管中，备测。6.2.2 测定：遵照仪器使用说明书调节仪器至最佳工作条件，测定滤液的吸光度。6.3 校准曲线的绘制在一组25mL比包管中，加入硫酸盐标准溶液0，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00mL，然后按步骤(6.2.1)进行前处理，并按(6.2.2)中的条件测定其吸光度。用减去空白的吸光度与相对应的硫酸盐浓度(mg／L)绘制校准曲线。7 分析结果的表述7.1 硫酸盐含量，由下式给出：式中：c——试样中硫酸盐的浓度，mg／L；c／——由样准曲线上查得的浓度，mg／L；V——所取试样的体积，mL；25——比色管的体积，mL。7.2 硫酸盐含量，用回归方程计算。8 精密度和准确度八个实验室测定了三个不同浓度水平的统一样品，硫酸盐含量分别为：4.83，10.5，25.7mg／L。8.1 重复性重复性相对标准倡差分别为：3.69％、3.65％和2.65％。8.2 再现性再现性相对标准偏差分别为：7.98％、3.84％和4.07％。8.3 准确度相对误差分别为：＋1.45％、－2.86％和－1.56％。附加说明：本标准由国家环境保护局科技标准司标准处提出。本标准由中国环境监测总站负责起草。本标准主要起草人刘京、魏复盛。本标准委托中国环境监测总站负责解释。

培养基是人工配制的供微生物或动植物细胞生长、繁殖、代谢和合成人们所需产物的营养物质和原料，同时，培养基也为微生物等提供除营养外的其它生长所必须的环境条件。常用的培养基都应符合一些基本要求：1 ) 都必须含有作为合成细胞组成的原料；2 ) 满足一般生化反应的基本条件，如碳源、氮源、无机盐、生长因素；3 ) 一定的pH等条件。 2 培养基的组成 2.1 碳源 碳源是组成培养基的主要成分之一。常用的碳源有糖类、油脂、有机酸和低碳醇。在特殊情况下( 如碳源贫乏时) ，蛋白质水解产物或氨基酸等也可被某些菌种作为碳源使用。葡萄糖是碳源中最易利用的糖，几乎所有的微生物都能利用葡萄糖，所以葡萄糖常作为培养基的一种主要成分，并且作为加速微生物生长的一种有效的糖。但是过多的葡萄糖会过分加速菌体的呼吸，以致培养基中的溶解氧不能满足需要，使一些中间代谢物不能完全氧化而积累在菌体或培养基中，如丙酮酸、乳酸、乙酸等导致pH下降，影响某些酶的活性，从而抑制微生物的生长和产物的合成。 2.2 氮源 氮源主要用于构成菌体细胞物质( 氨基酸、蛋白质、核酸等) 和含氮代谢物。常用的氮源可分为两大类： 有机氮源和无机氮源。 2.2.1 有机氮源 常用的有机氮源有玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉和酒糟等。它们在微生物分泌的蛋白酶作用下，水解成氨基酸，被菌体吸收后再进一步分解代谢。 有机氮源除含有丰富的蛋白质、多肽和游离氨基酸外， 往往还含有少量的糖类、脂肪、 无机盐、 维生素及某些生长因子， 因而微生物在含有机氮源的培养基中常表现出生长旺盛， 菌丝浓度增长迅速的特点。大多数发酵工业都借助于有机氮源，来获得所需氨基酸。 玉米浆是一种很容易被微生物利用的良好氮源。因为它含有丰富的氨基酸( 丙氨酸、 赖氨酸、谷氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸等) 、还原糖、磷、微量元素和生长素。玉米浆是玉米淀粉生产中的副产物，其中固体物含量在50％左右，还含有较多的有机酸，如乳酸，所以玉米浆的 pH在4左右。 2.2.2 无机氮源 常用的无机氮源有铵盐，硝酸盐和氨水等。微生物对它们的吸收利用一般比有机氮源快， 所以也称之谓迅速利用的氮源。但无机氮源的迅速利用常会引起pH的变化。 氨水在发酵中除可以调节pH外，它也是一种容易被利用的氮源，在许多抗生素的生产中得到普遍使用。氨水因碱性较强，因此使用时要防止局部过碱，加强搅拌，并少量多次地加入。 2.3 无机盐微生物在生长繁殖和生产过程中，需要某些无机盐和微量元素如磷、 镁、 硫、 钾、 钠、 铁、氯、锰、锌、钙等，以作为其生理活性物质的组成或生理活性作用的调节物，这些物质一般在低浓度时对微生物生长和产物合成有促进作用，在高浓度时常表现出明显的抑制作用。在培养基中，镁、磷、钾、硫、钙和氯等常以盐的形式( 如硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、碳酸钙、氯化钾等) 加入，而钴、铜、铁、锰、锌、钼等缺少了对微生物生长固然不利，但因其需要量很少，除了合成培养基外，一般在复合培养基中不再另外单独加入。 2.3.1 磷 是核酸和蛋白质的必要成分，也是重要的能量传递者——三磷酸腺苷的成分；在代谢途径的调节方面，磷起着很重要的作用，磷有利于糖代谢的进行，因此它能促进微生物的生长。但磷若过量时，许多产物的合成常受抑制。2.3.2镁 除了组成某些细胞的叶绿素的成分外，并不参与任何细胞物质的组成。但它处于离子状态时，则是许多重要酶( 如己糖磷酸化酶、柠檬酸脱氢酶、羧化酶等) 的激活剂，镁离子不但影响基质的氧化，还影响蛋白质的合成。镁常以硫酸镁的形式加入培养基中。 2.3.3 氯 氯离子在一般微生物中不具有营养作用，但对一些嗜盐菌来讲是需要的，在一些产生含氯代谢物的发酵中，除了从其它天然原料和水中带入的氯离子外，还需加入约0.1％氯化钾以补充氯离子。 2.3.4钠、钾、钙 钠、钾、钙等离子虽不参与细胞的组成，但仍是微生物发酵培养基的必要成分。钠、钾离子与维持细胞渗透压有关，故在培养基中常加入少量钠盐、钾盐，但用量不能过高，否则会影响微生物生长。钙离子能控制细胞透性，它不能逆转高浓度无机磷对某些产品的抑制作用。 2.4前体、 促进荆和抑制剂发酵培养基中某些成分的加入有助于调节产物的形成，而并不促进微生物的生长。这些添加的物质包括前体、抑制剂和促进剂／ 包括诱导剂、生长因子等) 。2.4.1前体 指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物分子中去，而其自身的结构并没有多大变化，但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高。 2.4.2促进剂 指那些既不是营养物又不是前体，但却能提高产量的添加剂。 2.4.3抑制剂 在发酵过程中加入抑制剂会抑制某些代谢途径的进行， 同时会使另一代谢途径活跃，从而获得人们所需的某种产物或使正常代谢的某一代谢中间物积累起来。 2.5 水 除了少数微生物如蓝细菌能利用水中的氢作为还原CO2时的还原剂外，其他微生物都不是利用水作为营养物质。即使如此，由于水在微生物的生命活动过程包括营养过程中的重要性，它仍应属于营养要素之一，为培养基的重要组成之一。 3 结束语 对某一微生物和产品来讲，究竟用哪些原料作培养基还需经过一系列实验的摸索，能确定一种既有利于微生物生长，又能保证得到高产优质的较为理想的培养基配方。另外，工业生产培养基所用的原材料还必须来源丰富、价格低廉、质量稳定。当然一种好的培养基配方还应随菌种的改良、发酵控制条件( pH、溶解氧、中间补料等工艺条件) 和发酵设备的变化而作相应的变化。

培养基是发酵过程或动植物细胞大量培养中供微生物或动、植物细胞的生长、繁殖或积累代谢产物，以合成生物化工产品所必需的营养基质。培养基的选择应根据微生物生长代谢活动的需要，并有利于合成细胞物质和生物化工产品的生成。培养基中主要含有水、碳源(能源)、氮源、矿物质，有的还需要提供维生素等。在酶反应过程中，原料液中被转化的物质亦即酶的作用物，亦可称为底物。 培养基的选择一般尽可能要满足以下要求：①单位质量基质，应能产生最大量的生物物质或生物化工产品，并且要使所产生的生物物质或生物化工产品在发酵液中的浓度最高，产率最高，使不需要的其他代谢产物的生成，限在最低范围内。②培养基成本低、质量均一并随时保证提供使用。③培养基使用时，对通气、搅拌、后处理和三废治理等方面所产生的问题最少。 分类 按其组成成分分成三类:①天然培养基,全由天然产物组成，例如含淀粉、黄豆饼粉等天然物质；②复合培养基，由部分天然产物和部分已知成分的化合物组成，例如其中的氮源既有天然物质黄豆饼粉，又有合成化合物硫酸铵；③合成培养基，全由已知成分的化合物所组成，例如以纯的碳水化合物或碳氢化合物为碳源，以铵盐为氮源。天然培养基和复合培养基常用于工业生产，而合成培养基(偶尔包括复合培养基)则常用于试验。 按用途分类包括：①基础培养基，营养需求相似的一些生物其所需的营养物大体相同，因之可配制一种适合于它们共同需要的含有基本营养成分的基础培养基；②增殖培养基，又称丰富培养基，常用于菌种选育方面。它是由基础培养基，再加入特殊的营养物质，以使某种差异型微生物在其中迅速生长繁殖；③鉴别培养基，即在培养基中加入某种试剂，从而在培养过程中表现出特殊反应，用以鉴别不同类型的微生物，如无菌试验用的酚红肉汤培养基，就是一种鉴别培养基；④选择培养基，根据某些微生物具有特殊营养要求，或对某些化学物质具有抗性而设计的,例如在配方中加入某种化学药物,以限制对敏感菌的生长繁殖，而将对其不敏感的所需的微生物分离出来。如在分离酵母菌时，可加入青霉素、链霉素等以抑制细菌的生长。 培养基还可根据其形态分成液体或固体培养基。例如用于无菌试验的肉汤培养基为液体培养基。用于培养青霉菌孢子的小米或大米为固体培养基，在培养基中加入适量琼脂而形成的凝胶培养基，也称固体培养基。 成分 培养基的成分包括:碳源、氮源、矿物质,以及其他必需物质。这些成分通过生物反应过程，生成生物物质、生物化工产品，并放出CO2、H2O和热量。 培养基的成分还可以由发酵过程中所需的元素出发，如C、H、O、N、S、P、Mg、K等。此外,必要时还有一些需要量很少的微量元素,如Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo、B等。在发酵过程中某些生物本身不能合成的物质，如氨基酸、维生素或核苷酸等，必要时亦作为营养物质加入到培养基中。 碳源 具有双重作用。生物在产生生物物质或生物化工产品过程中，它不仅为其提供碳源，也为其提供能源。碳水化合物是微生物发酵中的主要碳源，包括淀粉、葡萄糖、蔗糖和乳糖等。此外，植物油如豆油、棉籽油、玉米油等亦常被应用作为碳源。这类油常与表面活性剂合用，以消除发酵过程中所产生的泡沫。甲醇可用以生产单细胞蛋白。正烷烃类可用以生产有机酸、氨基酸和维生素等，甚至二氧化碳也可作为光合细菌的碳源。 氮源 包括无机氮源和有机氮源。无机氮源包括氨、铵盐及硝酸盐等，它们在被应用时应注意发酵中pH的变化；有机氮源包括氨基酸、蛋白质及尿素等，有机氮源的加入往往加快了生物的生长。因考虑到成本因素，一些有机氮源，如黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、鱼粉、酵母粉等常被选用。 培养基的组成中除了水分外，碳源和氮源的含量是最大的。碳源含量一般不超过10％，氮源含量较低，一般碳氮比应为3[

培养基是一种有液体、半固体、固体形式，用于保证微生物繁殖、鉴定或保持其活力的试验用品。生产力学性能稳定的固体培养基及半固体培养基，已经成为国内众多商品化即用型培养基生产厂商关注的重要因素。培养基的流动性、均匀性、结块情况等物理性质判断培养基质量优劣和变化的最直观要素。微生物培养基力学性能测试仪，可迅速便捷的量化其力学性质，提供更为客观的数据参数指导微生物培养基的产品开发与质量评价。本款微生物培养基力学性能测试仪TA. Medium具有以下优势：○高清精密触摸设计，无需外联电脑，无场地约束，即搬即用。○内置运算软件，结果即时显示,可USB接口传输或连接打印机。○底部步进电机设计，位移精确稳定，无共振，无噪音。○高力量分辨率，专为微量力测试设计。*1.测试结果显示精度：0.01g2.位移精度：0.01mm*3.测试臂移动距离：350mm*4.检测速度：0.1~20 mm/s。5.速度解析度：0. 1mm/s，精度优于1%6. 数据采集率：不低于200组/秒，每组4个通道同时读取。

[font=宋体]茯苓载于《神农本草经》，列为上品，为多孔菌科真菌茯苓[/font][i]Poria cocos [/i](Schw.) Wolf[font=宋体]的干燥菌核，具有利水渗湿、健脾宁心之效[/font][sup][1][/sup][font=宋体]。茯苓被誉为中药四君八珍之一，是方剂配伍的要药及中成药的重要原料。在[/font]2019[font=宋体]年新型冠状病毒肺炎治疗方案中，由茯苓配伍的多个中药组方疗效显著[/font][sup][2][/sup][font=宋体]。茯苓多糖和三萜类化合物分别占菌核干质量的[/font]70%[font=宋体]～[/font]90%[font=宋体]和[/font]0.3%[font=宋体]，为其主要活性成分，其药理活性较为丰富，具有抗肿瘤、抑菌抗炎、增强免疫和镇静等疗效[/font][sup][3-5][/sup][font=宋体]。[/font][font=宋体]此外，茯苓在食品和化妆品等行业相关产品均有[/font][font=宋体]应用，且市场需求较大。[/font] [font=宋体]茯苓需以松属植物的根部或木段为寄主完成生命过程，但持续增长的市场需求与松木资源的过度消耗形成严峻矛盾，因而推动了茯苓代料栽培和液体发酵等新技术的快速发展。不同的培养方式对茯苓产量、药材品质和推广应用均有不同的影响，目前未见对茯苓培养方式全面科学的评价论述。基于此，笔者提出药材“四性”特征，即临床疗效“三性”（安全性、有效性、质量可控性）及经济性，用于综合评价药材种植、药材品质和临床药效。其中安全性是中药材用于临床治疗的前提，指按规定的适应证、用法和用量使用药材及相关产品过程中或使用后人体产生不良反应的程度，而培养过程中的重金属、农药残留等环境障碍因子会影响药材的安全性；有效性则是药材及相关产品存在、应用和优劣的根据，即在药品规定的适应证、用法和用量的条件下，能满足预防、治疗、诊断疾病，有目的地调节人生理机能的性能；质量可控[/font][font=宋体]性是保证药品安全性和有效性的基础，即在生产过程中可以切实控制达到药品内在质量的一致，不同培养方式下药材的质量可控性差异较大；经济性则代表了药材及其相关产品在达到相同治疗[/font]/[font=宋体]保健等效果时的利润空间，涉及培养时期的成本投入、相关产品的推广应用等。因此，本文以茯苓药材“四性”特征与供需关系的现状为切入点，分析了其培养方式的发展动态及未来趋势，总结了不同培养方式对茯苓“四性”特征的影响情况，对缓解菌木矛盾、促进茯苓相关产业可持续发展具有重要的意义。[/font] 1 茯苓的应用历史及现状[font=宋体]茯苓最初以“服零”载于战国时期医学帛书《五十二病方》，与半夏、白附子、牡蛎等配伍治疗痰症[/font][sup][6][/sup][font=宋体]；[/font][font=宋体]后载于《神农本草经》[/font][sup][7][/sup][font=宋体]，谓：“气味甘、平、无毒。主胸胁气逆，忧恚，惊邪恐悸，心下结痛，寒热烦满，咳逆，口焦舌干，利小便。久服安魂养神，不饥延年。”至东汉时期，《伤寒论》所载茯苓相关的方剂共计[/font]15[font=宋体]首，以利水消肿、健脾渗湿、宁心安神功效为主。至唐朝时期，茯苓的临床应用愈加普遍，《备急千金要方》中所载茯苓方剂达[/font]465[font=宋体]首[/font][sup][8][/sup][font=宋体]。[/font][font=宋体]根据[/font]2022[font=宋体]年对全国[/font]18[font=宋体]个省份共约[/font]43[font=宋体]万张汤剂处方的数据统计分析得知，在常用的临床汤剂中药饮片排名中，茯苓位列第[/font]2[font=宋体]，仅次于甘草，素有“十药九苓”之说。在常用的中药方剂中，茯苓配伍率高达[/font]70%[sup][9][/sup][font=宋体]；在国家中医药管理局制定的[/font]100[font=宋体]首古代经典名方中，以茯苓为原料的经典名方占[/font]24%[sup][10][/sup][font=宋体]。茯苓的药用价值高、复方制剂适配广。此外茯苓是我国著名的食药两用真菌，于[/font]2002[font=宋体]年列入卫生部《既是食品又是药品的中药名单》[/font][sup][11][/sup][font=宋体]，已逐渐被开发为保健品、面食、饼干、酸奶、保健醋、保健型饮料等，茯苓的市场需求急剧增加，对其培养要求亦相应提高。[/font]2 茯苓资源市场现状[font=宋体]随着茯苓从临床应用拓展到食品、保健品、药膳等多元化的产品，茯苓市场需求与日俱增，也推动了茯苓种植的发展。目前全国茯苓种植面积约有[/font]1.2[font=宋体]亿[/font]hm[sup]2[/sup][font=宋体]，年产量达[/font]4[font=宋体]万[/font]t[font=宋体]，并保持持续的增长态势。全国[/font]10[font=宋体]余个省已建立了[/font]150[font=宋体]多个茯苓规范化种植基地。国内的茯苓供给已难以满足需求，自[/font]2019[font=宋体]年起，欧洲和朝鲜半岛成为我国茯苓进口的主要国家和地区，主要进口省份是我国吉林、辽宁、安徽、江苏和河北[/font][sup][12][/sup][font=宋体]。中国乃至全球对茯苓的需求量均呈逐年递增的趋势，伴随着对松木消耗的大幅增长，茯苓培养方式的深入研究及变革势在必行。[/font]3 茯苓培养方式的沿革[font=宋体]茯苓药材最初依赖于野生资源，受气候、地域及无序采挖等因素影响，茯苓收获不稳定、品质差异大，且随着药用需求的增加，野生茯苓资源逐渐枯竭，遂开始了人工培养茯苓的探索。南北朝梁代的《本草经集注》记：“彼土人乃故斫松作之，形多小，虚赤不佳”[/font][sup][13][/sup][font=宋体]，揭示了茯苓常以松木蔸或木段为寄主生长，开创了茯苓人工培养的先河。此培养方式一直延续至今，期间经过多年的探索和完善，技术逐渐规范化，产量和质量得以显著提高，在现阶段茯苓栽培中仍占有主导地位。然而该技术需要消耗大量的松木资源，约每生产[/font]1 t[font=宋体]茯苓需要消耗[/font]20 m[sup]3[/sup][font=宋体]的松木。[/font]2005[font=宋体]年，习近平主席提出“绿水青山就是金山银山”的发展理念，出台了限制砍伐森林原木的条例，茯苓生产与保护森林资源形成相互制约，菌林矛盾凸显。为缓解资源矛盾，协同发展，现代化培养技术逐步得到关注，如以木屑和各种农副产品为培养基开展茯苓的代料培养。该培养方式能大幅度减少对松木的消耗。但目前该技术尚不成熟，茯苓产量较低、生产成本较高，难以推广。在此两难之际，微生物发酵技术被引入茯苓生产，相较于茯苓固体培养技术易受环境和人为操作影响导致茯苓质量稳定性较差的缺点，液体发酵技术具有制备菌种周期快、菌龄齐的特点，制备得到的发酵茯苓质量稳定性高等优势；同时在短时间内可获得大量茯苓菌丝体和次生代谢产物，有利于茯苓功能型产品的开发，并较好地解决了茯苓质量稳定性差的难题。至此，茯苓的培养方式经历了野生培养、传统人工培养、现代培养（代料栽培和液体发酵）[/font]3[font=宋体]个重要变革阶段（图[/font]1[font=宋体]）。如今茯苓固体栽培技术和液体发酵技术仍需深入研究，二类技术的共同发展，既能较好满足茯苓市场需求，又能保护松木资源，维护生态平衡。[/font]3.1 [font=黑体]野生培养[/font][font=宋体]我国幅员辽阔，松木资源丰富，生态多样性形成了优质的茯苓种质资源。其中黄河以南的安徽、云南、贵州、湖北、湖南、广西、四川、河南、浙江、山西、陕西等都有分布[/font][sup][14-16][/sup][font=宋体]。初期，茯苓药材完全依靠于采挖野生资源，但其野生资源分布零散，采收不宜；同时野生资源的无序开发导致其资源几近枯竭，无法满足临床用药需求。南宋时期，江苏一带开始对茯苓进行人工培养的探索。明代中期，浙江一带开展茯苓林下仿野生人工培养。经过长期探索，成功将野生茯苓转为家种，其生产规模不断扩大。至此，茯苓结束了源于野生资源的历史。[/font]3.2 [font=黑体]传统人工培养[/font]3.2.1 [font=宋体]传统人工培养的应用[/font] [font=宋体]人们对茯苓人工培养的探索始于《本草经集注》，发现松树是茯苓的重要寄主。其中郁洲即今江苏连云港云台山一带，描述了人们砍伐松树，开展人工培养茯苓的场景，但该方式生产的茯苓产量低、品质差。宋末元初《癸辛杂识》载：“择其小者，以大松根破而系于其中，而紧束之，使脂渗入于内，然后择其地之沃者，坎而瘗之”，出现“肉引”培养的雏形，开始了小范围的茯苓种植，但培养技术尚不成熟。茯苓人工培养虽有[/font]1 500[font=宋体]多年的历史，但直到[/font]19[font=宋体]世纪中后期，其人工培养技术才逐步成熟稳定，至此，茯苓才完全转变为人工培养。目前，茯苓的传统人工培养模式主要有段木培养和树蔸培养[/font]2[font=宋体]种形式[/font][sup][2,17-18][/sup][font=宋体]。湖北等地区主要以段木培养为主，即以松木段作为培养基，将人工培育的菌种接种于木段上，入窖后菌丝可在段木上结苓，此方法为“菌引法”。向亮[/font][sup][19][/sup][font=宋体]发现段木培养一般每窖[/font]15[font=宋体]～[/font]20 kg[font=宋体]段木采收鲜茯苓[/font]2.5[font=宋体]～[/font]15.0 kg[font=宋体]，高产可达[/font]25[font=宋体]～[/font]40 kg[font=宋体]，折干率为[/font]50%[font=宋体]左右。云南和四川等地区主要以树蔸培养为主，树蔸培养茯苓是利用松木砍伐后遗留的松树蔸培养茯苓，即直接将菌种接种在树蔸上结出茯苓菌核。廖盛祥[/font][sup][20][/sup][font=宋体]采用直径[/font]23 cm[font=宋体]以上松树蔸培养茯苓，年产茯苓可达[/font]7.5[font=宋体]～[/font]50.0 kg[font=宋体]。菌核质量因培养模式不同而有所差异，目前以段木窖栽为主。[/font]3.2.2 [font=宋体]传统人工培养的现状[/font] [font=宋体]茯苓段木培养方式存在松木消耗量大（约每生产[/font]1 t[font=宋体]茯苓需要消耗[/font]20 m[sup]3[/sup][font=宋体]松木）、茯苓菌种质量差异大、生产周期长和易受环境条件影响等不足，导致茯苓产量较低，品质不稳定。同时随着茯苓栽培需求增加，对松木资源的损耗也同比增长，从而引发松木过度砍伐、森林生态失衡、水土流失、连作障碍等问题。为解决松木资源保护与茯苓资源开发间的矛盾，现多地采用耕种[/font]1[font=宋体]年、休耕[/font]3[font=宋体]年，及松木林间伐等措施，既能解除连作障碍，又能给松木生长提供时间空间。但松木生长常需较长的时间，随着茯苓需求与日俱增，菌木矛盾仍旧凸显，严重地制约其产业的可持续发展，亟需探寻新的培养技术。[/font]3.3 [font=黑体]现代化培养[/font]3.3.1 [font=宋体]代料培养[/font] [font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）[/font][font=宋体]代料培养的应用：为缓解茯苓人工培养中的菌木矛盾，[/font]21[font=宋体]世纪初人们尝试开展代料培养。茯苓代料培养以松木屑及其他粮食废料为培养基，将菌种接种于代料进行室内培养，结出茯苓菌核。食用菌和药用真菌所需营养主要是氮源和碳源。氮源可从麸皮、谷糠等有机氮和硫酸铵等无机氮中获得；由于茯苓不能直接利用无机碳源，其碳源全部来自于有机碳源，如葡萄糖、蔗糖等小分子有机物及纤维素、半纤维素、木脂素和果胶等高分子有机物。松木屑、木块等工业边角余料中含有丰富的纤维素、半纤维素、木脂素和果胶等物质。代料培养过程[/font][sup][21-24][/sup][font=宋体]主要是：代料制作[/font]→[font=宋体]苓场的选择和整理[/font]→[font=宋体]接种[/font]→[font=宋体]下窖与覆土[/font]→[font=宋体]管理[/font]→[font=宋体]采收。已有较多研究针对茯苓代料配方及其培养效果进行了探讨（表[/font]1[font=宋体]），多以菌丝存活率和产量作为基本指标，并比较了代料培养茯苓与段木培养茯苓活性成分（如总三萜、多糖等）的含量，发现代料培养方式有望替代段木培养。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）[/font][font=宋体]代料培养的现状：代料培养所需培养料均属于工业边角余料和农副产品，如松木屑、玉米芯和麸皮等，廉价易得；且进行代料室内培养不需要占用土地，其生长发育过程不受外界天气影响，有利于茯苓快速生长，也避免了连作障碍的发生。相较于传统人工培养，该法减少了松木消耗，简化了种植方法，提高了松木利用率。但由于目前茯苓的代料培养技术尚不成熟，其所培养的茯苓产量较低、成本较高，目前该培养方式还难以推广。[/font]3.3.2 [font=宋体]液体发酵[/font] [font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）[/font][font=宋体]液体发酵的应用：液体发酵技术兴起于[/font]20[font=宋体]世纪[/font]80[font=宋体]年代，是微生物发酵技术的一种，指将培养物料制备成液态培养基灭菌后，再将微生物接入而产生的生物反应。该技术兴起之初主要用于食品和医药等领域，近年来，微生物发酵技术逐渐融入到食用菌和药用真菌产业中，其产业模式和效益等方面均有不同程度的提升。液体发酵的培养基由碳源、氮源、无机盐和微量元素等组成[/font][sup][28-31][/sup][font=宋体]。碳源主要包括葡萄糖、蔗糖、乳糖和甘油等；氮源分为蛋白胨、酵母浸粉等有机氮和[/font]NH[sub]4[/sub]Cl[font=宋体]、[/font](NH[sub]4[/sub])[sub]2[/sub]SO[sub]4[/sub][font=宋体]等无机氮[color=red]二[/color]类。碳氮比是药用真菌生物发酵过程的关键因素，不同种类药用真菌的最适碳氮比不同，同一种类药用真菌在发酵的不同时期适宜的碳氮比也有所差异。培养基中[/font]K[sub]2[/sub]HPO[sub]4[/sub][font=宋体]、[/font]KH[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub][font=宋体]、[/font]MgSO[sub]4[/sub][font=宋体]、[/font]NaCl[font=宋体]、[/font]KCl[font=宋体]等无机盐和磷、镁、钠、钾、铁和硫等微量元素对于维持真菌菌丝体的生长发育及相关蛋白稳定性具有重要作用。在整个液体发酵过程中除了菌丝及其孢子大量增殖外，还可产生三萜、多糖和氨基酸等多种活性成分，且部分活性成分高于传统培养茯苓[/font][sup][32][/sup][font=宋体]。其发酵过程主要是：液体种子培养基的制备[/font]→[font=宋体]接种[/font]→[font=宋体]液体发酵培养基的制备[/font]→[font=宋体]接种[/font]→[font=宋体]发酵[/font]→[font=宋体]发酵茯苓。[/font][font=宋体]邵伟等[/font][sup][33][/sup][font=宋体]使用单因素实验优化茯苓液体发酵条件，发现茯苓液体发酵的适用温度为[/font]26 [font=宋体]℃，摇瓶装量为[/font]150 mL/500 mL[font=宋体]三角瓶，摇瓶转速为[/font]100[font=宋体]～[/font]150 r/min[font=宋体]，培养基初始[/font]pH[font=宋体]为[/font]5.0[font=宋体]～[/font]5.5[font=宋体]。课题组前期也通过响应面优化技术获得了茯苓液体发酵最适培养基，即葡萄糖[/font]-[font=宋体]酵母浸膏[/font]-[font=宋体]蛋白胨[/font]-K[sub]2[/sub]HPO[sub]4[/sub]- MgSO[sub]4[/sub]7H[sub]2[/sub]O[font=宋体]为[/font]30.0[font=宋体]∶[/font]3.9[font=宋体]∶[/font]5.1[font=宋体]∶[/font]1.0[font=宋体]∶[/font]0.5[font=宋体]（[/font]w/w[font=宋体]，[/font]1 L[font=宋体]）；在此基础上得到的最佳培养条件是培养温度[/font]26 [font=宋体]℃，摇瓶装量[/font]60 mL/250 mL[font=宋体]三角瓶，转速[/font]150 r/min[font=宋体]，培养基初始[/font]pH[font=宋体]值[/font]5.5[font=宋体]，液体菌种菌龄[/font]2 d[font=宋体]，液体菌种接种量[/font]6%[font=宋体]，摇瓶培养[/font]7 d[sup][34-36][/sup][font=宋体]。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）[/font][font=宋体]液体发酵的优势[/font][font=宋体]：[/font]①[font=宋体]培养基成本低、来源广泛。工业葡萄糖和工业蔗糖等工业原料可作为液体发酵培养基的碳源；黄豆饼粉、蚕蛹粉、麸皮粉等农作物废料可作为液体发酵培养基的氮源。木材水解液、各种农作物深加工废水等工业废水也可作为代用品，其原料来源相当广泛。[/font]②[font=宋体]菌丝体生长速度快，生产周期短。茯苓菌丝体在液体培养基中发菌点多、萌发快，新陈代谢旺盛，生长分裂迅速，培养周期为[/font]7 d[font=宋体]。而固体培养时间较长，段木培养一般需要[/font]240[font=宋体]～[/font]300 d[font=宋体]，代料培养一般需要[/font]180[font=宋体]～[/font]240 d[font=宋体]。[/font]③[font=宋体]短时间可积累大量代谢产物。茯苓菌丝体在液体发酵过程中能充分接触和吸收营养物质，在短时间内可以获得大量的菌丝体和茯苓多糖、三萜类等活性代谢产物。[/font]④[font=宋体]液体发酵工艺易于控制，菌龄整齐。在液体发酵过程中，可全程适时动态控制茯苓菌丝体所需营养物质和发酵参数，且液体培养基的营养成分分布均匀，培养得到的茯苓菌丝体菌龄较齐，有利于提高茯苓质量可控性。[/font][font=宋体]综上，茯苓的液体发酵技术具有培养周期短、工艺易调控、可有效减轻菌种退化和大规模工业化生产等优势。相较于茯苓的固体发酵（树兜、段木、代料培养），液体发酵的优势体现在生产周期较短、获得的茯苓产品品质稳定可控，不受环境气候影响等优点，可有效解决野生茯苓资源逐渐枯竭和固体培养过程中成本高、质量不稳定等难题，减少茯苓培养对生态环境的影响。从长远来看，液体发酵方式有广阔的发展前景。 [/font]4 基于药材“四性”不同培养方式茯苓的综合评价[font=宋体]为满足茯苓逐年增长的市场需求，研究者开展了多元化培养模式的探索，但目前尚缺少对中药材科学且全面的评价体系，笔者提出了药材“四性”特征概念，即临床药效“三性”（安全性、有效性、质量可控性）及经济性，[/font][font=宋体]用于对茯苓培养过程、药材品质、临床药效等方面的综合评价。 [/font]4.1 [font=黑体]安全性[/font][font=宋体]安全性是中药材药用、食用的前提。药食两用物质因使用量和使用频率明显高于中药材，其安全问题更应被关注。茯苓在野外人工培养过程中，常因白蚁危害等问题喷洒毒死蜱、吡虫啉和氰戊菊酯等防白蚁低毒农药，而导致农药残留问题突出[/font][sup][37-40][/sup][font=宋体]。同时，茯苓加工厂为杀灭微生物和增加茯苓饮片的美观度[/font][sup][41][/sup][font=宋体]，在炮制加工时会对茯苓进行硫磺熏蒸，而过度硫磺熏蒸会导致茯苓二氧化硫残留超标，危害人体健康。而液体发酵工艺易于控制，培养过程完全转变为工厂化生产，可规避白蚁危害，能有效解决农药残留的问题。同时，在培养过程中，注重无菌操作，严格控制微生物限量，可避免微生物污染等情况。 [/font]4.2 [font=黑体]有效性[/font][font=宋体]有效性是中药材及相关产品优劣的直观指标。研究发现茯苓中活性成分包括三萜类、多糖类、甾醇类、氨基酸和脂肪酸等，主要发挥活性的成分为三萜和多糖，其中三萜类化合物约有[/font]80[font=宋体]种，多糖类化合物有[/font]60[font=宋体]余种[/font][sup][5,42-46][/sup][font=宋体]。茯苓中多糖成分主要存在于茯苓的细胞壁中，具有较强的调节免疫、抑制肿瘤、抗炎和保护肝脏等作用[/font][sup][47-48][/sup][font=宋体]。根据茯苓多糖溶解度的不同，又将其分为水溶性多糖和碱溶性多糖，主要成分为葡聚糖，由主链[/font]β-1,3-[font=宋体]葡糖聚及少量支链[/font]β-1,6-[font=宋体]葡糖聚组成[/font][sup][49-51][/sup][font=宋体]。茯苓三萜类成分广泛分布于茯苓皮与菌核中。茯苓三萜类成分以羊毛甾型三萜为主，如茯苓酸、茯苓新酸和依布里酸等[/font][sup][52-53][/sup][font=宋体]。其中，茯苓酸为茯苓特有成分，是评估茯苓质量的化学标志物。[/font][font=宋体]杨祺等[/font][sup][54-55][/sup][font=宋体]开展了代料茯苓与传统松木培养茯苓质量的对比研究，结果表明代料茯苓总多糖和总三萜含量普遍高于传统松木培养茯苓。刑康康等[/font][sup][56][/sup][font=宋体]发现室内袋料培养茯苓的产量、结苓率、茯苓多糖含量等多项测定指标优于段木培养茯苓。[/font]Wang[font=宋体]等[/font][sup][57][/sup][font=宋体]研[/font][font=宋体]究报道菌丝体中的水提多糖和三萜类物质显著高于茯苓菌核。课题组前期在粉末显微特征、三萜类、多糖类、灰分和氨基酸含量等方面，对液体发酵茯苓和天然茯苓展开研究，发现发酵茯苓的氨基酸含量远高于天然培养茯苓[/font][sup][58-61][/sup][font=宋体]。在研究中发现[/font]4[font=宋体]种培养方式茯苓的总多糖含量从高到低依次为代料茯苓、段木茯苓、野生茯苓和发酵茯苓，发酵茯苓总多糖显著低于其他[/font]3[font=宋体]种茯苓；水溶性多糖和三萜类含量从高到低依次为发酵茯苓、代料茯苓、段木茯苓和野生茯苓，其中发酵茯苓含量较其他培养方式茯苓含量均高出数倍，代料茯苓和段木茯苓成分含量接近，无显著性差异。分析其原因在于野生茯苓、段木茯苓和代料茯苓均为固体发酵，药用部位为菌核；而液体茯苓的培养基与其他[/font]3[font=宋体]种培养方式的培养基显著不同，且其药用部位为

老师们，我看国标里MRS好像更适用于测乳杆菌，想知道未改良的MRS培养基对于嗜热链球菌和双歧杆菌也可以有检测效果吗？实验室如果要检测乳酸菌活菌数的话是否需要另外购买莫匹罗星锂盐、半胱氨酸盐酸盐以及MC培养基呢？有没有这方面有经验的老师可以解答一下

张韧，王建超，陈文庆，刘华杰，高飞，徐舸辰，林龙飞（北京清大天一科技有限公司，北京102200） 反应器悬浮培养技术是目前国内外疫苗生产的热点之一，它可以极大提高疫苗的质量和生产率。介绍了该技术在国内外疫苗生产中的研发和应用现状，表明国内该技术目前已经在口蹄疫疫苗生产中获得成功应用，利用MDCK、Vero等细胞培养生产禽流感疫苗的技术也正在积极研发中，并将逐步替代传统的鸡胚生产工艺。积极推广和应用这一新型疫苗生产技术将是我国兽用生物制品行业升级换代的必然趋势。 生物反应器；悬浮培养；微载体培养；口蹄疫；禽流感 在我国，细胞反应器悬浮培养和微载体培养技术在动物疫苗生产领域的研发和应用正成为行业技术革新、产业升级的重要内容。农业部公告第1708号中明确规定，自2012年2月1日起，各省级兽医行政管理部门停止转瓶培养生产方式的兽用细胞苗生产线项目兽药GMP验收申请。该公告对动物疫苗生产技术升级做出了强制性规定。本文就反应器细胞悬浮培养和微载体培养技术在口蹄疫疫苗和禽流感疫苗生产中的国内外应用和发展进行了综述，分析了动物疫苗产业发展趋势和我国疫苗产业技术升级所面临的机遇和挑战。1 反应器悬浮培养技术在口蹄疫疫苗生产中的应用口蹄疫被认为家畜传染性疾病中传染性最强的一种疾病，国际兽医局（OIE）将之列为A类传染病。2010和2011年，在亚洲、非洲都有口蹄疫局部的爆发。接种安全、高效的疫苗是预防口蹄疫疫情发生的最有效策略之一。通常主要通过浓缩技术提高口蹄疫疫苗的有效抗原量来实现其高效性；通过病毒纯化工艺、有效的病毒灭活工艺来保证疫苗的安全性。反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒能显著提高口蹄疫病毒抗原浓度。国际上先进的口蹄疫疫苗的生产工艺都采用反应器悬浮培养BHK21细胞技术、有效的病毒纯化工艺及二次病毒灭活工艺。当前，面对国内外严峻的口蹄疫防控形势，高质量的口蹄疫疫苗必将在口蹄疫防控中发挥关键作用。1.1 国外应用现状和发展趋势 BHK21细胞是繁殖口蹄疫病毒的理想宿主。20世纪60年代，许多国家实验室建立起了转瓶培养BHK21细胞繁殖口蹄疫病毒的生产系统。1962年BHK21细胞悬浮培养成功，细胞增殖迅速，并成功应用于口蹄疫病毒的生产。反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒也就成为最普遍的口蹄疫疫苗生产方式，主要集中在印度、土耳其、巴西、阿根廷等国家（表1）。印度口蹄疫生产企业使用8000L反应器生产口蹄疫疫苗，南美口蹄疫疫苗生产企业一般采用3000~5000 L反应器生产口蹄疫疫苗，口蹄疫病毒抗原146S浓度大约在2 μg/mL。因为口蹄疫疫苗保护力与146S有正相关性，这些企业根据口蹄疫病毒146S来配制疫苗有效地保证了疫苗的质量。表1 国外部分悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗企业及其生产工艺http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/08/A1375859824_small.jpg*来自作者所属公司的客户信息调查但是，这种20世纪60年代开发的口蹄疫疫苗生产工艺延续至今，存在许多技术上的缺陷。国外口蹄疫疫苗生产使用的BHK21细胞培养液是添加磷酸肉汤（Tryptosephosphate broth, TPB）或水解乳蛋白（Lactalbumin hydrolysate, LAH）的GMEM及EMEM，再补加5%~10%牛血清（表1）。不同批次间血清质量差异引起细胞培养效果不稳定，导致影响疫苗生产工艺的稳定性和疫苗质量。疫苗中残留的血清蛋白使接种动物过敏反应升高，一定程度上影响疫苗的安全性。在口蹄疫强制免疫的国家，牛血清中存在含有抗口蹄疫病毒抗体的可能性，不仅影响病毒繁殖，而且可能导致口蹄疫病毒在抗体压力下选择性变异。牛血清中潜在污染朊病毒或疯牛病病毒可给动物疫苗带来潜在的生物危害，TPB或LAH等动物来源成份也存在安全隐患。为提升产品质量及安全性，目前国外多数口蹄疫疫苗生产厂家急于将现使用的含血清生产工艺升级为不含血清生产工艺。自从20世纪的80年代起，细胞培养基（液）发展迅速，低血清细胞培养基、无血清细胞培养基、无血清无动物来源成分细胞培养基已商品化，为疫苗生产中少使用或不使用血清奠定了物质基础。1.2 国内应用现状 默克密理博北京清大天一科技有限公司（以下简称“清大天一”）在国内较早开发了BHK21低血清细胞培养基和BHK21无血清无动物来源成分细胞培养基。2008年，清大天一开发了BHK21低血清细胞培养基及反应器悬浮培养BHK21技术，并于2009年成功应用到国内一家口蹄疫疫苗生产企业中。使用该工艺生产的口蹄疫抗原146S浓度可以达到3 μg/mL左右，工艺全过程管道化操作，产品内毒素含量低，口蹄疫疫苗生产和质量显著提高，同时生产成本下降30%。2009年，清大天一成功开发了BHK21无血清无动物来源成分培养基和反应器无血清悬浮培养BHK21细胞技术，并 2010年成功应用到国内某口蹄疫生产企业。相比于含血清悬浮培养工艺，无血清悬浮培养工艺具有巨大的技术优势。从种子库复苏BHK21细胞开始，到口蹄疫病毒繁殖、直至收获的全过程，不添加任何的血清和动物来源成分，消除了血清抗体对病毒繁殖的干扰，同时减轻了纯化压力。无血清悬浮培养BHK21细胞的细胞密度可以达到5×106~6×106/mL以上，为生产高浓度口蹄疫疫苗奠定了技术基础。图1是反应器无血清培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒的工艺流程图，相比于含血清口蹄疫病毒生产工艺，因实现细胞无血清培养，工艺过程无需沉降换液。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/08/A1375859832_small.jpg 图1 4000L反应器无血清悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒工艺流程目前国内某企业使用该工艺生产的口蹄疫疫苗正处于报批阶段，其他多家口蹄疫疫苗生产企业及研究单位也在研发或寻求无血清悬浮培养生产口蹄疫疫苗的工艺。

真菌培养基培养基真菌培养基的成分有碳源、氮源和其他营养物质。葡萄糖提供碳源，硝酸盐、亚硝酸盐、氨、尿素、氨基酸和其他化合物提供氮源。1.普通培养基(1)改良沙氏琼脂、多选择沙氏琼脂(Sabouraud dextrose agar , SDA): 含有放线菌酮和氯霉素，放线菌酮可抑制腐生性真菌(多数可能为条件致病菌)，氯霉素可抑制大多数细菌(并非所有细菌) 。放线菌酮也抑制新型隐球菌、一些念珠菌、烟曲霉等。(2) 马铃薯葡萄糖培养基(potato dextrose agar , PDA) : 天然培养基。(3)脑心浸膏琼脂 临床常用脑心浸膏琼脂(brain-heart infusion agar , BHI) 分离深部真菌、双相真菌如皮炎芽生菌等，也可以在其中加入抗生素和血液制品。(4) 抑制性霉菌琼脂(inhibitory mold agar , IMA ) : 含有氯毒素，可抑制细菌的生长，是用于临床真菌培养标本初次增菌的理想培养基，常用于筛选放线菌酣敏感的真菌，如隐球菌、组织胞浆菌和接合菌等。2. 选择培养基(1)咖啡酸琼脂(CAA) : 用于鉴定新型隐球菌。由于该菌含有靛酚氧化酶，在CAA 培养基中菌落呈黑色。CAA 培养基对光敏感，应避光保存。(2) 鸟食琼脂(BA) : 用于从痰等标本中分离新型隐球菌。新型隐球菌在培养基上产生棕黑色色素，但是其他隐球菌在延长培养时也可产生色素。其他真菌也可在此培养基上生长，但不产生色素。(3) KT 培养基:由吐温、蛋白、烟酸和0.3 %水解酪蛋白氨基酸组成，用于皮炎芽生菌转相(为酵母相)培养时使用。(4) Kelley 琼脂:用于皮炎芽生菌( B. dermatitidis) 转相(为酵母相)时使用。(5) CHROM 琼脂: 念珠菌显色培养基。是一种用于鉴定培养念珠菌的培养基，不同念珠菌在此培养基上生长显不同颜色。

4.1培养基的准备选用硫乙醇酸盐流体培养基：硫乙醇酸盐流体培养基200g注射用水6600ml加注射用水搅拌混合均匀并慢慢加热溶解，然后煮沸1分钟，在121℃高压灭菌30分钟。4.2试验条件 4.2.1在进行培养基无菌灌装试验前，应对车间无菌作业的环境进行全面监测，包括空气悬浮粒子监测、表面微生物监测、空气浮游菌监测、层流罩下的沉降菌监测，以及人员的个人卫生（如工作服、手的微生物污染状况）监测。只有各项监测结果达标时，方可进行培养基灌封。4.2.2严格按照生产厂商的配制要求，在配料间用注射用水配制培养基。除菌过滤前，用一无菌瓶取50ml培养基溶液，用作除菌过滤前培养基溶液的微生物污染水平检测，除菌过滤作业完全模拟实际生产。4.2.3由受过培训的无菌生产操作人员模拟实际的灌装作业进行培养基灌封，其灌装容器及胶塞与产品生产时完全一致，每批灌装数量3300瓶以上，每瓶灌装量与实际产品相同。4.2.4西林瓶、胶塞、安瓿瓶和灌装用管道用具等按生产工艺要求进行灭菌。4.2.5人员按工艺要求穿灭菌的洁净工作服操作。

培养基的成分还可以由发酵过程中所需的元素出发，如C、H、O、N、S、P、Mg、K等。此外,必要时还有一些需要量很少的微量元素,如Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo、B等。在发酵过程中某些生物本身不能合成的物质，如氨基酸、维生素或核苷酸等，必要时亦作为营养物质加入到培养基中。 碳源 具有双重作用。生物在产生生物物质或生物化工产品过程中，它不仅为其提供碳源，也为其提供能源。碳水化合物是微生物发酵中的主要碳源，包括淀粉、葡萄糖、蔗糖和乳糖等。此外，植物油如豆油、棉籽油、玉米油等亦常被应用作为碳源。这类油常与表面活性剂合用，以消除发酵过程中所产生的泡沫。甲醇可用以生产单细胞蛋白。正烷烃类可用以生产有机酸、氨基酸和维生素等，甚至二氧化碳也可作为光合细菌的碳源。 氮源 包括无机氮源和有机氮源。无机氮源包括氨、铵盐及硝酸盐等，它们在被应用时应注意发酵中pH的变化；有机氮源包括氨基酸、蛋白质及尿素等，有机氮源的加入往往加快了生物的生长。因考虑到成本因素，一些有机氮源，如黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、鱼粉、酵母粉等常被选用。 培养基的组成中除了水分外，碳源和氮源的含量是最大的。碳源含量一般不超过10％，氮源含量较低，一般碳氮比应为3～4:1。碳、氮源含量不能过高的原因是避免产生基质或产物对反应的抑制和因渗透压过高引起细胞失水而死亡。 矿物质 培养基中 Mg、P、K、S、Ca、Cl常是主要的矿物质的组成成分，其他如Co、Cu、Fe、Mn、Mo及Zn也往往不可少，但需要量很小，可从其他主要培养基成分中得到。如是使用合成培养基就需要把这些微量元素加进去。它们不仅为生物生长所必需，也是为了得到某些产物所必不可少者。例如生物合成青霉素或头孢菌素需要一定量的硫；生物合成维生素B1需要一定量的钴。 维生素 某些生物在培养过程中需要某些维生素，往往在天然培养基中已经提供了必要的维生素，但在某些特殊情况下需单独加入维生素。例如在谷氨酸生产过程中需加入生物素,某些植物细胞培养中需要硫胺素(维生素B1)。 缓冲剂 由于发酵过程中pH对形成生物产物的影响很大，为维持稳定的pH，常采用缓冲剂，例如碳酸钙或磷酸盐。后者除能调节pH外，还为培养基提供磷源。

蛋白胨水培养基( l )成分 蛋白胨 10g 水 l000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管，121 ℃ 灭菌15 分钟。( 3 )用途 用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。 ① 靛基质试验取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，置35 ℃ 培养24～48 小时，必要时培养4～5 天，沿管壁加人靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。 ② 靛基质试液 称取对二甲氨基苯甲醛5g ，加入戊醇（或异戊醇）75ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸25ml 徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深．或称取对二甲氨基苯甲醛1g ，加人95 ％乙醇95ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸20ml 徐徐滴入。

如何有效管理微生物实验室干粉培养基在微生物检验中，培养基的质量关乎微生物的检验结果。加强对培养基的质量管理，能够有效提升微生物检验结果的准确性和科学性，因此需要注重培养基的质量管理工作。?本文从培养基的采购验收、质量控制、培养基制备后的质量控制以及培养基的灭菌和储存等环节简要分析了培养基的质量控制工作。1、培养基供应商选择培养基应当从可靠的供应商处采购，必要时应当对供应商进行评估。评估应确定其生产工艺，运输条件是否符合规定，资质是否齐全，质量保证能力和生产能力是否符合需求。如果新增培养基供应商，应对该厂家所生产的不同批次的培养基理化及微生物指标进行检测，并进行审计评估，评估合格后才可以将该品牌纳入合格供应商名录。2、培养基初步验收在培养基到达实验室后，应安排专业的人员对培养基进行验收，首先查看培养基的名称是否正确、配方是否符合药典或国标等相应的法规文件的要求、是否临近有效期、生产批号是否清晰、能否提供商品质检报告、检查包装是否完整，规格、数量是否与采购申请一致。在接收完毕后安排管理人员进行入库保存，并尽快安排对培养基进行入厂检测。3、培养基理化及微生物检测培养基的理化指标主要包括pH值、澄明度以及凝胶强度（琼脂类），培养基的微生物指标一般包括：灵敏度、促生长能力、抑制能力以及指示特性，即培养基适用性检查。这些指标供应商在培养基出厂前就已经进行了检测，合格后放行。使用单位验收时仍需进行培养基适用性检查，并与厂家提供的质检报告进行对比，看与报告内容是否一致。使用单位也可采用有资质的第三方检测报告。4、干粉培养基储存对入库保存的培养基应张贴标签，以区分验收与未验收的培养基，避免混淆与差错。在此为大家提供一个简单的标签，仅供参考：?点击重新加载使用单位存储培养基时标签也可以做编号处理，例如购进100瓶TSB，产品号为11104，其编号为11104-100-1、11104-100-2、...、11104-100-100按照流水号领用培养基，可减少对培养基的盘点，方便管理。培养基的储存条件一般为常温、干燥、密闭，当然不同供应商的存储条件稍有差别，按照标识执行即可。称量后应及时旋紧瓶盖，避免后期存储因空气湿度较大受潮或结块，如出现结块现象，该瓶培养基不可继续使用。培养基开瓶后在称量和存储的过程中会不可避免的吸收空气中的水分，而水分含量的增加，培养基的微生物负载可能亦随之增大，进而影响到干粉培养基的质量。所以干粉培养基在开瓶后，应定期进行复检，并对复检结果进行统计分析，确定开瓶有效期。如果实验室所在地区湿度较大（相对湿度高于75%），开瓶后的培养基应采取适宜的保护措施，如果数量较少，可放置于干燥器内，如果数量较多，可使用封口膜瓶口位置缠绕数匝。5、培养基配制--称量培养基的制备环节，应当严格按照培养基配方制备，在培养基的称量过程中，建议在干爽、无风的区域或者通风柜中进行，这样能够避免培养基吸潮使称量结果不准。应当选择灵敏度较高的称重天平，这样能够保证称量的准确性，同时称量过程中要选择专用的称量匙，避免其他杂质混入培养基中。操作人员应当对称量过程进行详细的记录，记录中应该体现培养基名称、批号、称量数量、具体配制方法、制备人姓名日期、复核人姓名日期等信息，方便后期的溯源调查。6、培养基配制--容器和水配制培养基所用的容器不得影响培养基质量，一般为玻璃容器，培养基配制所用的容器和配套器具应洁净，可用纯化水冲洗玻璃器皿以消除清洁剂和外来物质残留。在大体积配制培养基时，企业也可根据自己的情况采用不锈钢容器，建议专锅专用，且容器应洁净。不建议使用陶瓷或搪瓷容器。培养基用水是培养基制备过程中非常重要的一个物质。不可以使用自来水，自来水中的杂质可能会对检验结果有一定的影响。许多法规在培养基配方中采用蒸馏水作为配制用水，实际上纯化水的洁净程度不差于蒸馏水，甚至更优，所以不必单独制备蒸馏水，直接使用纯化水即可，配制用纯化水应按药典的要求定期进行检测。在制备过程中，可先加入培养基，再将纯化水倒入容器内，同时需要将器具内壁上的培养基粉末一同带到容器中，然后根据说明书的要求进行操作。涉及到大体积配制后要分装的培养基（例如TSA、TSB、FTM等），分装前一定要将培养基加热至完全溶解，避免后续可能会出现的瓶间差异。7、培养基的灭菌培养基的灭菌过程是影响培养基质量的关键环节。大部分培养基需要高温高压湿热灭菌，但部分选择性培养基由于一些组分不可高温高压灭菌，所以会采用煮沸灭菌，因此灭菌前应阅读培养基使用说明。?点击重新加载培养基灭菌应采用验证过的灭菌程序，灭菌参数应通过无菌性试验和促生长试验的验证。此外，对高温高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证，以保证其在一定装载方式下的正常热分布。温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基过度加热，过度灭菌会影响绝大多数的细菌和真菌培养基的促生长质量。灭菌器中培养基的容积和装载方式也会影响加热的速度。因此应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。煮沸灭菌的培养基建议现配现用，高温高压湿热灭菌的培养基可以大量配制，在适宜的条件下储存，固体培养基灭菌后只允许一次再融化。灭菌后培养基的储存效期应进行验证。制备好的培养基，使用前需进行pH的监测。对于固体培养基pH监测，可使用平头电极或固液两用电极。

我曾经用水配过硫酸铈显色液，溶液为亮黄色，其有很好的显色效果，但其渗透性不够好，吹干也不容易。但无水乙醇，95%乙醇配的显色液却不能很好的溶解硫酸铈钼酸胺，磁力搅拌一段时间后用于显色斑点呈褐色，并不是亮蓝色。刚试过80%的乙醇，头天通过超声、搅拌溶解的不错，溶液成微黄色，但第二天溶液又变为无色，且有白色粉末溶出，显色斑点呈褐色。为什么？究竟改用多大浓度的乙醇呢？在配这种显色剂是该注意些什么呢？

[font=黑体, SimHei]自己购买干粉培养基配制后，总是会出现沉淀的现象。现总结可能是以下几种原因。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000] 一、称量错误[/color][/font] [font=黑体, SimHei] 天平称量不准确、计算称量错误导致配制培养基的浓度不正确，都有可能导致岀现部分沉淀。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000] 二、水质不佳[/color][/font] [font=黑体, SimHei] 多数培养基的制备需要使用纯化水、去离子水配制，而天然水中含有含有较多的矿物盐离子，若错误的使用了自来水，矿泉水配制，或使用的纯化水离子未除净，都有可能导致培养基灭菌后岀现浑浊现象或沉淀（磷酸盐含量高的培养基更易出现此类问题。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000] 三、培养基pH不正确[/color][/font] [font=黑体, SimHei] 偏酸或偏碱的pH有可能使培养基中的部分金属离子产生沉淀。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000] 四、容器不干净[/color][/font] [font=黑体, SimHei] 新开封的容器或容器清洗不干净，内壁留有杂质，都会导致灭菌后的培养基中有杂质出现。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000] 五、培养基本身有沉淀[/color][/font] [font=黑体, SimHei] 培养基配方中无机盐成分较多，或培养基本身含有不溶性成分，灭菌后会有沉淀存在，此为正常现象，不影响使用。例如MC、TTB、BS等，配方中含有不溶物，灭菌后有沉淀。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000] 六、溶解不充分[/color][/font] [font=黑体, SimHei] 培养基灭菌前应充分搅拌热至完全溶解，方可进行灭菌。若灭菌前未将培养基溶解完全就进行灭菌处理，灭菌后易出现絮状或团块状沉淀，如Fraser培养基含有大量磷酸盐，若灭菌前未进行充分溶解，灭菌过程中磷酸盐易结成块灭菌后不溶解。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000] 七、灭菌方式不正确或灭菌过度[/color][/font] [font=黑体, SimHei] 含有不耐热成分的培养基，若灭菌过度或加热过度，都有可能导致灭菌后的培养基颜色不正确或岀现沉淀。如亚shai酸氢钠胱氨酸増菌液(SC)，正常制备好的培养基应为淡黄色透明液体，澄凊无沉淀，若加热过度则培养基中亚shai酸氢钠分最终制备的培养基会出现红色沉淀。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000] 八、添加剂加入时温度不正确[/color][/font] [font=黑体, SimHei] 卵黄、血液等对温度敏感的添加成分，若加入时温度过高或温差过大，易岀现凝块或絮状沉淀。[/font]

大肠杆菌显色培养基 E.Coli Chromogenic Medium 大肠菌群显色培养基 Coliform Chromogenic Medium 大肠杆菌／大肠菌群显色培养基 E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 细菌总数显色培养基 Total Genes Chromogenic Medium O157显色培养基 O157 Chromogenic Medium 沙门氏菌显色培养基 Salmonella Chromogenic Medium 李氏菌显色培养基 Listera Chromogenic Medium 金黄色葡萄球显色培养基 Staphylococcus Chromogenic Medium 霉菌和酵母菌显色培养基 Mould and Yeast Chromogenic Medium 弧菌显色培养基 Vibrio Chromogenic Medium 坂崎杆菌显色培养基 Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium 平板计数琼脂（PCA） Plate Count Agar 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） Lauryl Sulfate Tryptose Broth 4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷 （MUG） 煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB） Brilliant Green Lactose Bile Brogh EC 肉汤 E.Coli Broth 新生霉素A 伊红美蓝琼脂 (EMB) Eosin-Methylene Blue Agar 营养肉汤 (NB) Nutrient Broth 营养琼脂 (NA) Nutrient Agar 乳糖胆盐发酵培养基 Lactose Bile Broth 乳糖复发酵培养基 Lactose Broth 去氧胆酸盐琼脂 Desoxycholate Lactose Agar MR-VP培养基 Methyl Red Voges Proskauer Broth 结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar 西蒙氏枸橼酸盐琼脂 Simmons Citrate Agar 肠道菌计数琼脂 (VRBDA) Violet Red Bile Dextrose Agar 菌种保存培养基 Strain Store Medium 品红亚硫酸钠琼脂 Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar 乳糖蛋白胨培养液 Lactose Peptone Broth Cary-Blair 氏运送培养基 Cary-Blair Transport Medium 山梨酸麦康凯琼脂基础 Sorbitol Maconkey Agar Base 噻孢霉素 A 1%亚碲酸钾溶液 亮绿乳糖培养基 Brilliant Green Lactose Medium 肠道菌增菌肉汤(EE) Enterobacteria Enrichment Broth TTC营养琼脂 TTC Nutrient Agar LB肉汤 LB Broth LB营养琼脂 LB Nutrient Agar 苯丙氨酸脱氨酶培养基 Phenylalanine Deaminase Agar Medium 哥伦比亚血琼脂基础 Columbia Blood Agar Base 2216E琼脂 2216E　Agar 肠球菌琼脂(胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂) Enterococcosel Agar(Bile Esculin Azide Agar) BDS培养基 BDS Medium 葡萄糖琼脂 Dextrose Agar Andrade氏糖类肉汤 Andrade's Carbohydrate Broth Koser氏枸椽酸盐肉汤 Koser Citrate Sodium Broth Endo 培养基 Endo Agar 缓冲MUG琼脂 Buffer MUG Agar 乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂 LMG Agar 茜素-β-半乳糖苷琼脂 Aliz-gal Agar Tergitol-7 琼脂 Tergitol-7 Agar TTC 溶液(0.125%) TTC Solution(0.125%) 胰蛋白胨大豆肉汤 Trypticase (Tryptic) Soy Broth Baird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base 亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion 胰蛋白胨大豆肉汤 Trypticase (Tryptic) Soy Broth Baird-Parker琼脂基础 Baird-Parker Agar Base 亚碲酸盐卵黄增菌液 Egg-Yolk Tellurite Emulsion 兔血浆 Freeze-Dried Plasma DNA酶琼脂 DNase Agar 7.5%氯化钠肉汤 7.5% Sodium Chloride Broth 普通肉汤培养基 Broth Medium 亚碲酸钠肉汤培养基基础 Sodium Tellurite Broth Base 葡萄球菌增菌肉汤 Staphylococcus Enrichment Broth 葡萄球菌选择性琼脂 Staphylococcus Selective Agar EEM培养基

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。 土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。