阪崎肠杆菌成套生化鉴定管

[b]阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种，如果用SN标准检测肠杆菌科还需要再另检阪崎肠杆菌吗？谢谢！[/b]

2007年7月下旬，国家质量监督检验检疫 总局公布了今年4月入境的不合格食品、化妆品信息，其中全球最大的乳品原料供应商新西兰恒天然多个批次的全脂奶粉被检验出含有致病菌阪崎肠杆菌。这些有问题的全脂奶粉，总数达277.9吨，分别是今年1月和3月进口的。 恒天然公司表示，尊重中国政府的相关考虑和规定，已对被检验出阪崎肠杆菌的产品按规定做了处理。 阪崎肠杆菌是寄生于人和动物肠道的“条件性肠道致病菌”。也许，阪崎肠杆菌目前只引起了专业人员的高度重视，并未吸引普通公众的目光，原因在于它不仅对公众是陌生的，且现在造成的危害似乎并不算重。回顾近年来国内的食品安全问题，阪崎肠杆菌也确实被忽略了。 2004年安徽阜阳出现著名的“大头婴儿”事件。据该市县级以上医疗机构核查统计，从2003年5月以来，因食用劣质奶粉出现营养不良综合征共171例，死亡13例，病死率7.6%。婴儿发病和死亡的主因是由于劣质奶粉导致的营养不良，但是现在回过头来看，有一个可能的致病因素在当时被忽略了——这些劣质奶粉中含有阪崎肠杆菌。 阜阳劣质奶粉事件发生后，中国疾控中心营养与食品安全研究所的刘秀梅等人运用来自美国和加拿大的方法，建立了婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的分离鉴定技术。从87份阜阳劣质奶粉样品中，他们检测到11份阪崎肠杆菌阳性样品，污染阳性率为12.6%。 这是国内首次从婴儿配方奶粉中分离到阪崎肠杆菌菌株。固然，劣质奶粉导致婴幼儿死亡是因其中蛋白质含量极低，不能满足婴儿的生长需要。比如，按照3-6个月婴儿的生长需要，蛋白质每日摄取量为3g / kg，而劣质奶粉每日只能提供0.07g / kg的蛋白质。所以，长期食用这种几乎没有营养的伪劣奶粉的婴儿，会产生四肢短小，身体瘦弱，头部尤显偏大的症状。 阪崎肠杆菌的污染是否会对当地婴幼儿造成雪上加霜的伤害呢？事过境迁，要得出确切的结论已经很难。不过事后查出阜阳劣质奶粉含有阪崎肠杆菌，对今天的食品安全不啻是敲响了一次警钟。 对婴幼儿最具杀伤力 早在2004年，广州检验检疫局就率先提出，在进口婴幼儿配方奶粉和奶制品中，对阪崎肠杆菌进行监测，并首次从进口奶粉中检查出阪崎肠杆菌。2007年以来，广州、中山、汕头检验检疫部门在进口奶粉中已多次检出阪崎肠杆菌。因此国内的专业人员多次呼吁，要重视阪崎肠杆菌对食品污染和对人健康的危害。

一、阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种，1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和茵血症，死亡率高达50％ 以上。目前，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。阪崎肠杆茵的生物学性状及其对人群的健康危害受到人们的关注并被报告。例如，味全配方奶粉2008年年10月份被检出含有致病菌阪崎肠杆菌。　　阪崎肠杆菌是奶粉(乳)制品中新发现的一种致病菌。由其引发的婴儿、早产儿脑膜炎、败血症及坏死性结肠炎散发和暴发的病例已在全球相继出现。多份研究报告表明婴儿配方奶粉是当前发现致婴儿、早产儿脑膜炎、败血症和坏死性结肠炎的主要感染渠道,在某些情况下，由阪崎肠杆菌引发疾病而导致的死亡率可达40％～80%。阪崎肠杆菌已引起世界多国相关部门的重视。据报道,国外乳业巨头曾因此被召回.在美国FDA2002年在本土某一些国际乳业巨头生产的婴儿配方奶粉中检出阪崎肠杆菌后，2003年又一家国际乳业巨头公司主动召回在美国生产的一批检出极微量阪崎肠杆菌的罐装早产儿特殊配方奶粉，阪崎肠杆菌从此成为世界瞩目的焦点。但是国内企业鲜有自查能力,原因是国内以前还没有专门的检测手段,而去买一套以前国内从未有过的检测设备也不是马上就可办到的。目前,国外 奶粉(乳)制品巨头却拥有检测手段,惠氏中国宣称保证在中国销售的每一个产品都经过了阪崎肠杆菌的检测才上市。同样宣称设有此检测设备的企业还有美赞臣中国公司。　　在国外发现的奶粉中的阪崎肠杆菌并非有其特定的区域局限性，中国奶粉企业又面临一项大难题。　　2005年5月20日，由中国检验检疫科学研究院和天津出入境检验检疫局牵头完成的《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准在京通过了审定。这项标准的出台，解决了我国检测婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌无标准、无检测方法的问题。10月该标准被实施。　　该标准建立了阪崎肠杆菌的改进的传统检测方法、普通[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法和荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法。　　据了解，阪崎肠杆菌是乳制品中近几年新发现的一种致病菌。它是存在自然环境中的一种“条件致病菌”，已被世界卫生组织和许多国家确定为引起婴幼儿死亡的重要条件致病菌，可导致任何年龄层人群的疾病，尤其是对早产儿、出生体重轻的婴儿或免疫受损婴儿的威胁最大，严重者可导致败血症、脑膜炎或坏死性小肠结肠炎。　　继美国FDA2002年在本土某一些国际乳业巨头生产的婴儿配方奶粉中检出阪崎肠杆菌后，2003年又一家国际乳业巨头公司主动召回在美国生产的一批检出极微量阪崎肠杆菌的罐装早产儿特殊配方奶粉，此后成为世界关注的焦点。我国在2005年5月通过《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准的审定，对奶粉严查此菌。　　今年以来，广州、中山、汕头检验检疫部门在食品工业用进口奶粉中已多次检出阪歧肠杆菌。　　二、控制阪崎肠杆菌危险的几点建议 　　（1）制定婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌微生物标准，建立有效控制措施，将其危险性降低到最低。　　（2）制定加工、使用和操作婴幼儿配方食品的导则，研究降低阪崎肠杆菌污染水平的方法，在生产环境和配方奶粉中降低阪崎肠杆菌的浓度和流行的危险性；为高危人群生产较大比例的商业无菌配方替代产品。　　（3）制定有效的环境监测计划，将肠杆菌科而不是大肠杆菌作为工业生产线的卫生指标菌。　　（4）建立实验室监测网络，对阪崎肠杆菌的来源、传播途径等进行调查研究；加强相关学科的基础研究，包括生态学、分类学、菌株毒力等。　　（5）用商业无菌液体或开水冲调配方食品，喂养婴幼儿后剩余的调配食品应放置冰箱保存，并在食用前再加热。我国应根据实际情况制定相应管理办法，加强对阪崎肠杆菌的检测技术及控制技术研究，进一步完善婴幼儿配方食品标准，以保证我国广大婴幼儿群体的健康与安全。　　三、阪崎肠杆菌检测必备仪器--荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪：　　实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测系统也叫实时荧光定量核酸扩增检测系统（英文全名是Real-time Quantitative [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] Detection System），简称实时荧光q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]，q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]的核心是实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪及与其配套的检测分析软件系统。　　聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction简称[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]）原理凭借敏感、特异、快速的特点荣获1993年诺贝尔化学奖。因其在病原体检测方面的独特优势，因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快，成为分子生物学诊断的主流，至今仍处于学术和应用前沿，发展至今已有三代产品：第一代[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]定性检测技术及设备由基因扩增热循环仪（DNA Thermal Cycler）+电泳仪+紫外分析仪+定性试剂构成；第二代[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]-DNA终点定量技术及设备（End-point quantitative [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] detection）由基因扩增热循环仪+荧光仪+终点定量试剂构成，其又分为终点酶免定量（End-point ELISA-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]）和终点荧光定量（End-point Flour-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]）两种；第三代产品为Real-time q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]-DNA/RNA实时荧光定量检测。　　q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测灵敏度高，检测线性范围宽，检测精度和重复性好等突出优势，因此被公认为目前世界用于临床及科研的最先进核酸分子诊断技术，被美国FDA承认并推崇。检测项目包括：食物等病原菌以及疾病病毒等病原体如：乙肝病毒HBV DNA，丙肝病毒HCV RNA，艾滋病病毒HIV RNA，沙眼衣原体CT，淋病双球菌NG，巨细胞病毒CMV，结核分支杆菌Mtb、禽流感、阪崎肠杆菌、口蹄疫、新城疫、猪瘟、大肠埃希菌O157∶H7、沙门菌、炭疽芽孢杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等。　　[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪的应用范围广，几乎所有的生命科学领域都要涉及：食品检测、临床检验、疾病控制、检验检疫、科研实验室、食品安全、化妆品检测、环境卫生等。国内多家试剂厂商生产了包括肝炎、性病、优生优育、呼吸道疾病、禽流感、阪崎肠杆菌、口蹄疫、新城疫、猪瘟、大肠埃希菌O157∶H7、沙门菌、炭疽芽孢杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等在内的数十种荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]试剂盒，购买方便，价格便宜，并获得了国家相关认证。　　值得一提的是鉴于当前流行病的频发以及实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术的实际应用，国内外已将实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测技术强制应用于相关行业并相继制定了国际、国家、及行业标准作为法律依据。例如：　　SN/T 1632.3-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法　　GB/T 19438.1-2004 禽流感病毒通用荧光RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 检测方法　　GB/T 19438.2-2004 H5 亚型禽流感病毒荧光RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 检测方法　　ISO22174-2005 食物病原体[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法　　相对于价格十分昂贵的进口仪器，选择质量性能与进口仪器相当而售价只有进口仪器三分之一甚至五分之一的优质国产荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪是国内绝大多数用户的必要选择，也是国家卫生主管部门、国家卫生部临床检验中心以及国家食品药品监督管理局提倡的；使用质量性能与进口仪器相当的国产荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪能为国家节省大量外汇，使更多的用户能够拥有先进的实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术和设备，同时还能促进国产仪器的技术进步、民族产业的发展，利国利民。　　西安天隆科技有限公司生产的TL988型实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪经过国家药监局指定的、具有国家质量检验检疫局认定的具有CNAL全球互认检测资质的检测中心检测合格，性能达到同类产品国际先进水平，并通过两家国家药物临床基地临床试验，获得了国家食品药品监督管理局SFDA核发的医疗器械注册证，并符合国家卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理规范》和《临床基因扩增检验实验室工作规范》。　　2005年至今我国科研人员围绕着阪崎氏肠杆菌的分类、致病机理、危害评估、减少污染措施、检测方法仪器和标准等进行了研究，相关研究论文包括：　　阪崎肠杆菌的生物学性状与健康危害，裴晓燕，刘秀梅， 中国疾控制中心营养与食品安全所 　　乳制品中的阪崎肠杆菌可致婴儿死亡，中国食品产业网 2008年5月28日10:56 　　乳品检测中实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪的研制，彭年才，苏明权，张镇西，中国乳品工业，CN23-1177/TS200705：62-64；　　乳制品中阪崎肠杆菌的快速检测，彭年才，李明，食品安全导刊，CN11-5478/R 2008.07；　　婴儿奶粉中阪崎肠杆菌及其检测，彭年才，张镇西，苏明权，中国乳业，CN 11-4768/S，2008.08。　　浅析乳品中高危害食品源性致病菌阪崎肠杆菌的快速检测，彭年才 内蒙古乳业 P18-20, 2008，03

2014全年没做出来阪崎肠杆菌，食品中，主要是奶粉中

阪崎肠杆菌是人和动物肠道内寄生的一种革兰阴性无芽孢杆菌。作为肠杆菌科的一种，一直被称为黄色阴沟肠杆菌，直到1980年才更名为阪崎肠杆菌。该菌是肠道正常菌丛中的一种，在一定条件下可引起人和动物致病，所以称为“条件致病菌”。 　　阪崎肠杆菌自然来源非常广泛，在水、土壤、植物根茎、动物肠道甚至加工食品都可存在，其中婴儿配方奶粉是婴儿感染阪崎肠杆菌的主要渠道。阪崎肠杆菌的繁殖、宿主和感染途径一直是研究人员正在进行的课题。2002年，有研究人员从奶酪、碎牛肉、腊肠和蔬菜中分离到阪崎肠杆菌，但目前仍不能确定该菌的自然宿主到底是什么。 　　2003年又有研究人员从厩螫蝇中肠中分离到阪崎肠杆菌?熏因而认为厩螫蝇幼虫肠道是阪崎肠杆菌的环境宿主之一。而厩螫蝇在世界范围内广泛分布?熏以牛、马、狗、猪和人的血液为食?熏在牛、猪或马的养殖场所可见该蝇?熏在牛棚更常见?熏因而可能污染牛奶。流行病学研究发现厩螫蝇的地理分布和阪崎肠杆菌感染直接相关。 　　同时，美国一家疫情控制公司的技术报告中记载舍蝇中存在阪崎肠杆菌，但没有确切记录该菌究竟是在舍蝇体内还是体外。研究人员推测，昆虫很可能是阪崎肠杆菌的环境宿主。 　　阪崎肠杆菌感染并非是不治之症，用抗生素就可以有效控制。虽然阪崎肠杆菌的毒力因子和致病性现在还不太清楚，但已发现有些阪崎肠杆菌可能产生一种毒力因子——类肠毒素样化合物。而且，组织培养也发现一些菌株可产生细胞毒效应。 　　与肠杆菌属其他细菌相比?熏阪崎肠杆菌对常用的抗菌药更敏感。但是由于阪崎肠杆菌耐药性不断增强?熏近来一些专业人员建议采用碳青霉烯类或新一代头孢霉素和其他药物联合治疗阪崎肠杆菌。不过在临床上，需要根据临床诊断和细菌的药敏试验来找到合理的药物配伍治疗方案。

旧国标中阪崎肠杆菌检验的第二步是10ml增菌培养液+90mlEE肉汤培养---做的是十倍稀释培养；而新国标中的第二步是1ml的培养液+10ml的mlst-vt做的不是十倍培养，对这些有些迷惑，请前辈们指点谢谢。

北京商报2月2日报道 日前，国家质检总局公布了去年8月至11月进境的852批不合格食品、化妆品名单。其中，味全食品的三类配方奶粉被检验出含有致病菌阪崎肠杆菌。 去年10月17日，产自台湾的9.624吨配方奶粉从香港进境时被检验出阪崎肠杆菌超标，进口商为深圳市恒利安贸易有限公司。不合格奶粉包括味全婴儿配方奶粉、味全幼儿成长配方奶粉和味全较大婴儿配方奶粉。　　据了解，阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种，能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和茵血症，死亡率高达50%以上，婴儿配方奶粉是目前发现的阪崎肠杆菌主要感染渠道。此外，检验出的不合格婴儿食品还包括产自澳大利亚的宝利氏牛奶菌落总数超标、百乐斯婴儿米粉霉菌超标等。　　此次公布的不合格食品、化妆品产地涉及美国、日本、西班牙等多个国家和地区，包括葡萄酒、冻鱼冻肉、饮用水、饼干等多种产品。如美国产莱萃美品牌叶酸营养素片霉菌数超标、强维牌氨基酸混合食品原料铅和砷超标，韩国的兰芝柔润凝亮修护眼霜和大长今牌黄土美面膜被检出细菌总数超标。 (本文来源：北京商报 作者：李雪)

味全食品的三类配方奶粉被检验出含有致病菌阪崎肠杆菌。 请问现在有高手测定这项目吗？难吗？有没有阳性对照的图片呢？

有人说在EMB上带有金属光泽的典型菌落，做生化一定是大肠杆菌？真的吗？我们做的时候，在EMB上带有金属光泽的典型菌落，做生化时却不一定是大肠杆菌，请大家分享一下经验。

据加拿大食品检验署（CFIA）消息，9月1日CFIA发布产品了核桃产品的召回公告。CFIA称，目前Johnvince Foods公司正在对预包装核桃辬实施召回，因为该产品可能含有大肠杆菌O157:H7.该产品进口自美国，包装于加拿大，相关信息如下：产品：President's Choice Raw California Walnut Halves Unsalted,规格：250克，条形码：0 60383 87185 7,代码：保质期为2012年10月7日产品： Reddi Snack Hand Selected California Walnuts,规格：350克，条形码：0 64777 28695 1,代码：16581截至目前，尚未出现因食用该产品而染病的报告。Johnvince Foods公司正在召回问题产品，CFIA正对召回效果进行监控。原文链接：

关于阪崎肠杆菌，新国标规定用缓冲蛋白胨水BPW，规定44℃下称量，但是在规定的温度下，我们不可能完全准确的在44℃下称量，因为如果检侧样品多的情况下没有那么多的条件，那么我们测出来的值会准确么？上传该标准更方便大家讨论

一、概述及分类肠杆菌科是由多个菌属组成，生物学性状相似，均为革兰氏阴性杆菌，这些细菌常寄居在人和动物的消化道，并随粪便排出体外，广泛分布在水和土壤中，大多数肠道杆菌属于正常菌群。当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时，成为条件致病菌而引起疾病。部分肠道杆菌是致病菌。例如：产毒大肠埃希氏菌、伤寒沙门氏菌、各种志贺氏菌可使人患肠道传染病。肠杆菌科细菌种类繁多，主要根据细菌的形态，生化反应，抗原性质以及核酸相关性进行分类。肠杆菌科的细菌分为20个属。1、 什么是大肠菌群？大肠菌群名称并非细菌分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化反应及血清学方面并非完全一致。大肠菌群：需氧及兼性厌氧，在37℃能分解乳糖，产酸，产气的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。目前已被国内外广泛应用于评价食品卫生质量的重要指标之一。2、 什么是大肠杆菌？埃希氏菌属的代表菌种是大肠埃希氏菌。大肠埃希氏菌俗称大肠杆菌，它是人类和动物肠道正常菌群的成员，随粪便排到自然界，并污染食品，本菌是组成水、食品中大肠菌群成员之一，其数目多少代表粪便污染和程度。能引起肠道感染的大肠埃希氏菌有下列五个病原群(1)肠产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)产生ST、LT、引起婴儿、旅游者腹泻。(2)肠致病性大肠埃希氏菌(EPEC)寄居十二指肠、回肠、空肠。引起婴儿腹泻。(3)肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)有侵袭力，痢疾样症状。(4)肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)引起出血性结肠炎，主要菌型O157。(5)肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)损害肠细胞外毒素，引起小儿顽固性腹泻。3、 什么是大肠杆菌O157：H7？ EHEC O157:H7属于肠杆菌科埃希氏菌属。它是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的主要血清型。

做大肠杆菌(确定是大肠杆菌)的生化鉴别,其他项目都出结果了,就是乳糖发酵的那项总是阴性,阳性对照也很好,各位高手能不能帮忙分析下是什么原因呢?[em53] [em53] [em53] ,已经做了三次了,还是一样的结果[em53] [em53]

威化产品，我们自检到大肠杆菌。然后抽了一些全部混匀揉碎，一半再做，还是测到大肠杆菌，另一半送到第三方，但第三方没捡到，说的合格，这是怎么回事

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昨天，国家质检总局公布了最新一批截至去年12月进境不合格食品和化妆品的名单，有159批次的产品上了黑名单，当中不乏知名品牌。不合格批次列表包括了乳制品、糖果、饼干、葡萄酒等多种进口食品或食品原料(主要不合格产品见下表)。 多批进口乳清蛋白粉检出阪崎杆菌。据悉，阪崎杆菌在一般情况下不会对人体健康产生危害，但对于新生儿可能致病，严重者可引起坏死性小肠结肠炎、败血症、脑膜炎等。国家质检总局强调，不合格的产品已经依法做退货、销毁或改作他用处理。这些不合格食品、化妆品未在国内市场销售。

大肠杆菌发酵经验总结首先，补料速率与比生长速率直接影响着乙酸的生成速率和积累量（主要是补料速率与比生长速率影响发酵液中的残糖量，进而影响），所以适当的控制补料速率和比生长速率，对于控制乙酸的量有很好的效果。 其次，必须要保证充足的溶氧，并严格控制pH值，而且补酸碱的速率尽量缓和，不能太快；温度对于蛋白的表达也有很重要的影响，较低的发酵温度下所生产出的蛋白大多是有活性的，而较高的发酵温度下产生的蛋白大多一包涵体形式存在。第三，选取合理的诱导时间非常重要，一般的诱导时间选在指数生长后期，而且诱导时的比生长速率最好能控制在0.2之内，选在此时诱导，1.将菌体的快速生长期与蛋白合成期分开，使这两个阶段互不影响，有利于蛋白的高表达；2.已经得到了大量的菌体，而且菌体的生物量基本接近稳定，不论是从动力学角度，还是能耗，物料成本方面，都比较合理。第四，补料过程中的碳氮比也很重要。若氮源过高，会使菌体生长过于旺盛，pH偏高，不利于代谢产物的积累，氮源不足，则菌体繁殖量少从而影响产量；碳源过多，则容易刑场较低的pH，抑制菌体生长，碳源不足，则容易引起菌体的衰老和自溶。另外，碳氮比不当还会引起菌体按比例的吸收营养物质，从而直接影响菌体的生长和产物的合成。 根据自己的经验，一般情况下，对于一个稳定的发酵工艺下，如果总是在固定的发酵时间段出现溶菌现象，而且能排除噬菌体和染菌的可能性后，那就可能是因为碳氮比不合理造成的。可以适当调整碳氮比。 大家讨论得较多的是关于代谢副产物乙酸对大肠杆菌发酵的影响，针对我们论坛所发的帖，我先总结以下几点，并作出相应解决措施。一、代谢副产物-乙酸乙酸是大肠杆菌发酵过程中的代谢副产物，在多大的浓度下产生抑制作用各种说法不一，一般认为在好气性条件下，5～10g/L 的乙酸浓度就能对滞后期、最大比生长速率、菌体浓度以及最后蛋白收率等都产生可观测到的抑制作用。当乙酸浓度大于10或20g/L 时，细胞将会停止生长，当培养液中乙酸浓度大于12g/L 后外源蛋白的表达完全被抑制。预防乙酸产生的措施： 1、通过控制比生长速率来减少乙酸的产生：比生长速率越高，乙酸产生越多，当比生长速率超过某个值时，乙酸开始产生。可以通过降低温度，调节酸碱度，控制补料等方法来降低比生长速率。 2、透析培养： 在大肠杆菌的培养过程中可以用透析技术除去发酵液中的有害物质，降低乙酸含量从而实现重组菌的高密度发酵和产物的表达。3、 控制葡萄糖的浓度：葡萄糖是大肠杆菌发酵过程中重要的碳源之一，用其作碳源是要将其控制在一个较低的水平上，以减少乙酸的产生。 常用的控制方法主要有： 恒pH法：大肠杆菌会代谢葡萄等产生乙酸，使pH 值下降。因此可通过pH值的高低作为控制葡萄糖的指标，该法的缺点是pH 的变化不完全是由葡萄糖代谢的结果，容易造成补料体系出错。 恒溶氧法：菌体代谢时会消耗氧，使溶氧下降，当葡萄糖浓度低到一定程度时菌体代谢下降，消耗氧能力下降，溶氧上升。因此，根据溶氧曲线补加葡萄糖，保持溶氧恒定，可以控制葡萄糖在一定的水平。 二、温度大肠杆菌发酵最适温度是37 C，当温度最适菌体生长时，比增长速率将会增大。随温度上升细菌代谢加快，其产生代谢副产物也会增加。这些副产物会对菌体的生长产生一定的抑制作用。菌体生长过快也会影响质粒的稳定性。降低培养温度，菌体对营养物质的摄取和生长速率都会下降。同时也减少了有毒代谢副产物的产生和代谢热的产生。有时降低温度更有利于目的蛋白的正确折叠及表达。在重组大肠杆菌的发酵中不同发酵阶段其最适温度也不 同，为了能获得大量的目的蛋白，首先要保证菌体的量，因此在前期可优先考虑菌体的生长，到诱导阶段应将目的产物的表达放在首位。三、培养方式 微生物的培养方式主要有分批、连续和补料分批3种。大肠杆菌发酵大多采用补料分批培养，这是在现代发酵工艺得到优化的一种方式，能有效的优化微生物培养过程中的化学环境。使微生物处于最佳的生长环境。这种方式一方面可以避免某些营养成分初始浓度过高出现底物抑制现象，另一方面能够防止限制性营养成分被耗尽而影响细胞的生长和产物的形成。补料分批培养已广泛应用于各种各样的初级、次级生物产品和蛋白等的发酵生产中。

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三鹿又验出致命肠杆菌 甘肃实行签字放行制http://www.tech-food.com 2008-9-24 9:12:25 中国食品科技网　 甘肃省质量技术监督局21日再次发出紧急通知，通报在“三鹿”较大婴儿及幼儿配方奶粉(慧幼2段)检出阪崎氏肠杆菌。甘肃全省的乳制品企业已经实行驻厂监管员签字放行制度，每一批检验合格的乳制品必须经监管员签字方可出厂销售。　　《兰州晨报》报道，甘肃质监局日前通报了该局送国家食品质量安全监督检验中心检验结果，结果显示，“三鹿”较大婴儿及幼儿配方奶粉(慧幼2段)检出阪崎氏肠杆菌。阪崎氏肠杆菌可能使初生婴儿染上脑膜炎和脓毒病，严重会导致婴儿死亡。　　甘肃省质监局要求，全省驻厂监管员必须严格监督企业检验进场原料，严格监督企业生产过程质量控制，严格监督企业对产品批批检验，严把产品出厂关口。所有的乳制品必须批批检验“三聚氰胺”等有害有毒物质，每一批检验合格的乳制品，必须经监管员签字后，方可销售。经监管员签字后出厂销售的乳制品，如被检出有毒有害物质，将严肃追究监管员的责任。　　甘肃省质监局同时要求，除已经公布的质监系统举报电话12365外，甘肃省各市、州还将公布辖区内的举报电话，引导社会力量举报食品中非法添加有毒有害物质的案件线索，对举报有毒有害物质有贡献的人员，要按有关规定实施重奖。　　甘肃省质监局还要求省质检中心和各市州质检所要发挥技术优势，充分运用精密分析仪器等手段，确定乳制品及相关食品中除“三聚氰胺”外其它有毒有害物质监测项目，实施重点监管和检验检测。　　截至9月20日下午6时，甘肃质监系统共检查生产企业115家，检查销售单位9880家，共查封三鹿牌慧幼系列婴幼儿配方奶粉150955袋(听)，三鹿牌其它系列婴幼儿配方奶粉39663袋(听)，总计查封190618袋(听)。ps:阪崎肠杆菌是乳制品中近几年新发现的致病菌。该菌已被世界卫生组织和许多国家确定为引起婴幼儿死亡的重要条件致病菌，它可导致任何年龄层人群的疾病，尤其是对早产儿、出生体重轻的婴儿或免疫受损婴儿的威胁最大，严重者可导致败血症、脑膜炎或坏死性小肠结肠炎。二○○二年九月，香港食物环境卫生署曾在德国生产的「美乐宝ＨＮ２５」婴儿特别配方奶粉中，验出这种可能会导致初生婴儿肠脏及脑膜发炎的阪崎肠杆菌，当时香港也要求回收「美乐宝ＨＮ２５」婴儿特别配方奶粉。

阪崎肠杆菌、沙门氏菌、金葡菌能在同一个实验室做实验里培养吗？ 这些相互之间有没有影响呢？

请问有使用MIDI软件鉴定分枝杆菌的高手吗？电脑启动不了，软件用不上，该怎么办？有相关电话吗？若正常使用状态下，标准品曲线能通过，标准菌株的判别不正确是什么问题？

实验室常用来破碎大肠杆菌，用于提取表达外源蛋白等试验，在超声波破碎大肠杆菌过程中常常温度探头测得大肠杆菌菌液中温度逐渐升高，有可能会致使热敏物质失活，该怎么解决呢？今天来谈谈在超声波细胞破碎仪处理大肠杆菌过程中降低温度的解决措施。 超声波细胞破碎仪在处理大肠杆菌过程中，由于超声波的空化效应会产生大量的热使菌液的温度逐渐升高，所以我们在处理样品的时候一定要采用冰浴或者其他降温方法，在这您提供两点建议，一种是用实验室的碎冰来做冰浴，示意图如下：（同学们的智慧是无穷的，此图来自于中国药科大学某实验室正在处理大肠杆菌） http://www.shunmayq.com/Upload/image/dachangganjun.jpg （图中液体为冰水混合物，也可以用碎冰） 另外一种方法一般适用于50或者50毫升以上超声细胞破碎仪处理大肠杆菌时使用。图片中超声波细胞破碎仪，。您可以将菌液放置于我们特制的双层夹套反应杯中，在冷却水循环系统上设置好您需要的温度，就可以放心实验不必担心菌液的温度升高啦 http://www.shunmayq.com/Upload/image/1234.jpg 与此同时，在处理大肠杆菌过程中实验条件摸索也来得尤为重要。功率是根据您的处理量多少来调节的，我们建议如果可以用小功率来处理样品切忌用大功率，功率越小对应的超声波的热效应也会相对降低，另外超声时间尽量放短，间隙时间尽量放长，例如超声1秒停2-3秒。

一次完整的流感嗜血杆菌分离鉴定摘要：流感嗜血杆菌是革兰阴性小杆菌或球杆菌，生长是需要“X”和“V”两种生长辅助因子，因此，流感嗜血杆菌在巧克力平板上生长良好。总结：流感嗜血杆菌生长要求苛刻，临床采集后应立即检测。在巧克力平板上生长的菌落为无色透明、半透明或灰白色、湿润、露滴状。V+X因子纸片周围有菌落生长，而在V因子和X因子纸片周围无菌落生长。

一次完整的流感嗜血杆菌分离鉴定摘要：流感嗜血杆菌是革兰阴性小杆菌或球杆菌，生长是需要“X”和“V”两种生长辅助因子，因此，流感嗜血杆菌在巧克力平板上生长良好。总结：流感嗜血杆菌生长要求苛刻，临床采集后应立即检测。在巧克力平板上生长的菌落为无色透明、半透明或灰白色、湿润、露滴状。V+X因子纸片周围有菌落生长，而在V因子和X因子纸片周围无菌落生长。

总大肠菌群（Total Coliforms) 大肠菌群系指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，具有指标菌的一般特征故以此作为粪便污染指标评价饮水的卫生质量。耐热大肠菌群(Thermotolerant Coliforms) ，原名：粪大肠菌群（Fecal Coliforms ) 用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为粪大肠菌群。是水体受人畜粪便污染的比较直接指标。大肠埃希氏菌（大肠杆菌，E.Coli.) 大肠埃希氏菌是指能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培养液呈黄色，能产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的细菌。大肠埃希氏菌是粪大肠菌群的组成部分，是水体受人畜粪便污染的最直接指标，水中含有大肠埃希氏菌提示有粪便污染。