甲乙型流感病毒抗原检测试

深圳检验检疫局2月14日通报，2月12日起，首批1000个甲型流感病毒检测试剂盒在全市各个旅检口岸使用，口岸旅检现场对入境旅客进行甲型流感病毒抗原的快速定性测定后3分钟内即可得到可信结果。这是深圳口岸首次使用该试剂盒防控甲流。 　　当前正值冬春季呼吸道传染病高发季节，周边地区流感疫情呈上升趋势，因甲流导致的重症病例和死亡病例也不断增加。对此，深圳检验检疫局进一步严格健康申报、体温检测、医学巡查等卫生检疫措施，同时，在旅检口岸配备甲型流感病毒检测试剂盒，对高危人群实施口岸甲型H1N1流感快速检测防控策略，防止甲型H1N1流感经口岸传入。 　　甲型流感病毒检测试剂盒可以在口岸旅检现场对人体的鼻腔抽吸液、鼻腔擦拭液和咽喉擦拭液标本，进行甲型流感病毒抗原的快速定性测定，在3分钟内就可得到可信结果，大大缩短了送检和检测时间，更有利于甲型H1N1的防控工作，尤其适合深圳口岸多、客流量大的特点。为确保使用效果，深圳检验检疫局还特地对相关工作人员进行了培训。

为尽快筛选出有效的快速检测试剂推荐给相关部门和一线防控单位应用，应对甲型H1N1流感联防联控工作机制科技组（以下简称“科技组”）通过公开征集、现场双人双测等形式开展了相关工作。7月8日，科技组在前期工作基础上，综合判定后筛选出３种甲型H1N1流感抗原检测试剂。 1、广州万孚生物技术有限公司，流感病毒A型（influenza virus A）检测试剂盒（免疫层析法）； 2、北京万泰生物药业股份有限公司/厦门大学，甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）诊断试剂盒（免疫渗滤法）； 3、北京阿斯可来生物工程有限公司，甲型流感病毒检测试剂盒（胶体金法）。 上述3种抗原检测试剂的主要特点是操作方便，并可在15-30分钟内获得检测结果。 此前，科技部共向社会征集到甲型甲型H1N1流感快速抗原检测试剂25种，经专家初步筛选，选定16种试剂进入后续流程。随后，由中国药品生物制品检定所牵头，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所和军事医学科学院微生物流行病研究所参加的课题组，进行了产品信息及生产能力的进一步调查和核实，其中有4家企业因各种原因不能参加。 7月1日，课题组制备并获得灭活甲型H1N1流感病毒后，立即启动了评价参考品的制备。7月２日向各企业发出送样通知，12家企业于7月３日将样品送至中国药品生物制品检定所。课题组于7月3-4日对参考品进行了核实和确定，7月6-7日对送检样品采用双人双测方式集中进行统一测评。 7月8日，课题组和相关专家召开了“甲型H1N1流感诊断试剂快速评价专家研讨会”，主要对抗原检测试剂的筛选标准进行了讨论，会议决定在保证阴阳性符合的前提下，根据灵敏度并参考试剂的操作简易度及检测时限，综合判定后筛选出３家入选的试剂。

中山大学达安基因股份有限公司充分利用承担“十一五”863计划“分子诊断试剂”课题建立的real-time PCR研究开发平台，在此次墨西哥流感暴发后，广泛收集流感病毒的生物学信息，在国内率先研制出甲型H1N1流感病毒核酸检测(real-time PCR)试剂盒和通用型甲型流感病毒核酸检测试剂盒。 　　5月8日，在香港大学微生物系实验室(WHO网络实验室)袁国勇院士主持下进行了达安基因试剂盒进行了验证。使用甲型H1N1流感病毒核酸检测(real-time PCR法)试剂盒和通用型甲型流感病毒核酸检测试剂盒(同法)，对香港首例发现的人甲型H1N1流感病毒临床样本和病毒分离培养物样本进行检测，两种试剂盒检测均为阳性。使用甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒，对人甲型H1、H3的两种流感病毒株样本进行检测，结果均为阴性 使用人通用型甲型流感核酸检测试剂盒，对上述两种病毒株样本进行检测，结果为阳性。上述所有结果均符合预期，显示两种试剂盒具有良好的特异性和灵敏度，并能够在3小时内获得结果。 　　广东省卫生厅组织有关专家对达安基因甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒(real-time PCR法)进行评估认为，试剂盒经过香港确诊病例样本验证达到预期效果，建议在广东省疾病预防控制机构实验室试用，并尽快向国家有关部门申请批文，批量生产应用。 　　达安基因公司多年来得到科技部科技计划的扶持，在病毒检测技术方面有长达13年的技术经验积累，曾参加2003年抗击“非典”。 达安基因公司real-time PCR仪于2005年获得国家药监局医疗器械注册证，2008年获国家知识产权局颁发的发明专利优秀奖。目前该公司已具备大规模生产甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒和通用型甲型流感病毒核酸检测试剂盒的能力。

据中国之声《新闻晚高峰》报道，江苏苏州率先合成H7N9禽流感病毒的关键基因，研制出能准确区分普通流感和H7N9禽流感的H7N9禽流感检测试剂盒。目前，该试剂盒已送往中国疾病预防控制中心，大规模检测H7N9病毒即将成为可能。 　　在苏州生物纳米园中，杰恩生物着手利用公司特有的十余个H7亚型的特异性抗体，加紧研究H7N9病毒检测试剂。记者和正在美国马里兰州实验室的该研究组负责人裘志勇先生通了电话： 　　裘志勇：研发方面的工作，是在美国进行的，11种抗体当中，我们找到了一对我们叫配对的刻意抗体，能够用来检测H7N9禽流感病毒的抗原，已经有了初步的结果，我们能够检测出H7亚型病毒的抗原。 　　研制的初步结果显示，已经找到了针对H7N9病毒的高效特异抗体，可用于开发H7N9抗体检测的试剂盒，从而可以区分普通流感和H7N9禽流感。目前各地所使用的H7N9核酸检测试剂盒，不仅昂贵而且操作复杂，只适合在国家或省市级中心实验室作为确诊的手段。而一线医院迫切需要一种价廉、简易、灵敏度高的检测试剂盒，在感染早期便能快速有效区分H7N9感染患者与一般季节性流感患者。检测试剂的研发成功，成本仅50元一人，可以说是满足了这一紧迫需要。H7N9病毒检测试剂研发组俞惠元： 　　俞惠元：在一线的医院可以用患者的血清，或者他咽喉的粘液，用棉花棒沾取他的粘液，通过医院现有的设备，在2小时就能得出结果。 　　该检测试剂将在12号送达到北京，国家疾控中心将在H7N9禽流感患者身上进行测试，来判断是否可以投放市场。

人副流感病毒是呼吸道感染的重要病原体之一　　世界卫生组织WHO在2020年12月发布了最新的《全球卫生评估》报告，对全球死亡原因进行排序，其中下呼吸道感染已成为全球患者死亡的第四大因素。中国疾病预防控制中心在Nature communications发布的一项历时11年，来自106个城市、277家哨点医院和92个参考实验室的呼吸道传染病监测数据显示：在引起急性呼吸道感染的8种病毒中，人副流感病毒（HPIV）排名第4位，阳性率占比高达13.1%；其中HPIV-3占比56.4%，HPIV-2占比16.9%，HPIV-1占比16.1%。　　提高病原学检出率势在必行　　人副流感病毒在秋冬季节是高发期，儿童感染率极高。由于HPIV呼吸道感染的临床表现无特异性，因此临床早期诊断是非常关键的，特别是在当前新冠大流行的形势下，呼吸道病毒鉴别诊断愈加急迫。然而，传统检测方法难培养、耗时长、灵敏度低，且易受经验性用药的影响，无法给予临床精准、快速的诊断结果。　　可搭载安图全自动化核酸检测平台，实现随到随检 核酸检测以其灵敏度高、特异性强、时效性好等优势被广泛应用到新冠大规模筛查和诊断中。人副流感病毒核酸检测试剂可搭载安图生物全自动核酸提纯与实时荧光PCR分析系统，实现随到随检，能够快速明确病原体，指导临床个性化用药。该产品具有以下特点：　　分型全：覆盖HPIV 1,2,3三种常见型别；　　全自动：搭载安图生物全自动化核酸检测平台，操作便捷，安全高效；　　随到随检：无需攒样，无需等待，实现当天上机，当天出结果；　　时效性好：最快100分钟左右出结果；　　多项目同时检测：新冠、HPIV或其他病毒同时检测，快速明确诊断。　　安图生物人副流感病毒核酸检测试剂是国内首个可搭载全自动核酸检测平台的试剂，是检测人副流感病毒的新利器。未来，安图生物还将推出多项呼吸道疾病核酸检测产品，为临床提供更全面、更快速、更精准的呼吸道病原体解决方案。

继不久前成功研制出快速检测甲型H1N1流感病毒试剂盒后，中国军事医学科学院军事兽医研究所又研制出一种新型基因芯片，借助这种芯片能在5小时内获得检测结果。 　　据介绍，使用这种基因芯片能够用来检测1-16种亚型甲型流感病毒，并可以对当前流行的甲型H1N1流感病毒进行特异性检测，还可以对H1、H3、H5、H7、H9亚型流感病毒进行分型检测。该检测方法可同时对12个样品进行快速、灵敏、特异性检测(阳性样品显示特异荧光)，并在3.5-5小时内获得检测结果。 　　军事兽医研究所工作人员表示，与试剂盒检测相比，基因芯片具有用时短、一次性检测样品多等优点，将为中国应对潜在疫情提供有力的技术支持。

记者近日从华南理工大学获悉，由南方医科大学珠江医院和华南理工大学广州万孚生物技术有限公司联合研发生产的“甲型/乙型流感病毒抗原快速检测试剂盒”(胶体金法)，于2009年12月30日成功通过国家食品药品监督管理局注册审批，获准投产上市。该试剂盒能够在5～10分钟内实现甲型/乙型流感病毒的快速分型检测。 　　经国内多家权威单位进行的临床考核表明，该试剂盒与国内外同类产品相比，具有更高的灵敏度和准确性，且检测快速、操作简便、成本低廉。特别是检测鼻咽拭子标本，与确诊2009年流行的甲型H1N1病毒培养金标准方法比较，该试剂盒的灵敏度为96.80%，并可直接实现甲型与乙型流感的快速分型，临床考核中分型准确率超过99%。 　　据介绍，“甲型/乙型流感病毒抗原快速检测试剂盒”采用先进的免疫层析技术及联检分型技术，通过一步操作，就能够在5～10分钟内实现甲型/乙型流感病毒的快速分型检测，无须任何仪器设备，特别适用于医疗防控机构以及火车站、出入境口岸、学校、社区等人群密集区快速排查甲流患者。 　　据了解，2009年5月，科技部牵头面向全国科研院所及企业征集甲型H1N1流感快速检测产品。7月14日的评选中，南方医科大学珠江医院和华南理工大学广州万孚生物技术有限公司联合研发、生产的“甲型/乙型流感病毒抗原快速检测试剂盒”被选定荣登榜首，并获得国家首批进入绿色通道进行注册审批的资格。经过严格的注册审批程序，国家食品药品监督管理局于2009年12月30日正式向广州万孚生物技术公司颁发了医疗器械注册证书。 　　目前，全球正处于甲型H1NI流感暴发的第二波冲击之中，“甲型/乙型流感病毒抗原快速检测试剂盒”的面市具有重要意义。该试剂盒通过一步操作，实现显著简化甲型H1NI流感的诊断流程，对缩短甲型流感病例的排查时间、及时实施甲流防控措施、避免甲流的大规模传染、减少甲流重症病例的发生将起到非常重要的作用。

导读由流感病毒引起的急性呼吸道传染病每年会呈季节性流行。中国国家流感中心发布的2024年第14周中国流感监测周报显示，近期甲流、乙流的来势比较凶猛。如何快速检测流感病毒种类并预测其传播趋势是各国研究者共同关注的热点。瑞士苏黎世联邦理工学院生物系统科学与工程系、巴塞尔城市州立实验室环境微生物学系和巴塞尔州卫生局的研究者在SWISS MED WKLY发表了题为Influenza transmission dynamics quantified from RNA in wastewater in Switzerland的文章。作者使用naica® 微滴芯片数字PCR系统量化了瑞士三家最大的污水处理厂流入的甲型和乙型流感病毒（IAV和IBV）载量，估算了监测时间内这些区域的感染发病率和有效生殖数（Re）的趋势，并将估算结果与临床流感监测数据进行了比较。流感疫情的发现和监测是一项至关重要但具有挑战性的任务，因为轻症和无症状病例的比例很高，其症状也容易和其他常见循环呼吸道疾病症状相混淆。因此在人群层面监测流感感染具有挑战性。流感样疾病(ILI)和实验室确诊流感病例的报告系统可用于监测流感传播的时间趋势，而在临床报告外追踪病例的方法可以改善对流感传播的动态监测。排放到污水中的流感病毒是一个很有前景的信息来源，它能够区分具有重叠症状的疾病，并且可以捕获未报告的病例。一个社区污水样本中病原体负荷可以预示社区的疾病负担。在该研究中，作者检测了瑞士三个最大的污水处理设施中IAV和IBV的浓度应用亮点：▶ 使用naica® 微滴芯片数字PCR系统量化了污水中甲型和乙型流感病毒（IAV和IBV）载量。▶ 污水中流感病毒监测对瑞士IAV发病率的峰值更为敏感，与相同地理位置的确诊病例数据相比，可以得到更精确的估算结果。▶ 首次采用统计模型从污水数据中量化了流感传播动力学。这项研究的目的是在瑞士范围内实施污水流感监测，并估算污水中的IAV和IBV传播动力学。作者从瑞士苏黎世、日内瓦和巴塞尔（Zurich、 Geneva、Basel）的污水处理设施收集的污水样品中提取RNA用于IAV和IBV定量。先前的研究表明，污水中可检测到IAV用于研究社区传播动力学。但污水中IBV的浓度很低，经常无法检测到。作者在naica® 微滴芯片数字PCR系统上使用了IABV和RESPV4两种assay，通过逆转录数字PCR(RT-dPCR) 进行病毒核酸绝对定量。IABV assay是针对IAV和IBV的双重检测。RESPV4是一种四重检测方法，可以同时定量IAV、IBV 、SARS-CoV-2核蛋白座2(N2)和呼吸合胞病毒基质蛋白(RSV)。IAV分析使用了IABV和RESPV4 两种assay的结果，而IBV在IABV assay中阴阳性微滴分离度不够，只使用了RESPV4 assay的检测结果。实验结果：在检测时间范围内，作者能够在超过90%的采样日检测到污水中的IAV(苏黎世37/38天，从日内瓦39/42天，从巴塞尔45/50天。在污水中检测到IBV的频率较低(苏黎世7/35天，日内瓦9/33天，巴塞尔1/50天)。污水负荷数据和每周确诊病例数据都表明，每个集水区都有一个或多个IAV爆发高峰(图A)。区域层面的确诊病例数据比全国ILI（流感样疾病）更好地与污水检测值相对应 (图B)。▲图.污水与临床监测流感数据的比较。(A)用于估计Re的两个数据源。蓝色：污水检测流感平均值(点)和范围(误差线)。没有检测到病毒的天数显示为交叉点。红色：每周报告确诊病例数连接的折线。(B)同期全国每周流感样疾病发病率(橙色)和经校正的流感样疾病拭子每周流感阳性率(棕色)。结论：在这项工作中，作者提出了基于污水病毒载量的流感传播动力学量化的概念证明结果，能够在瑞士三个最大的污水集水区估计感染发病率的趋势。作者通过naica® 微滴芯片数字PCR系统定量了IAV的有效繁殖数量，也可检测到低浓度IBV。综合起来，这些数据与确诊病例数据相比，描绘了不同的流感爆发动态，基于污水的动态变化更好地符合研究时间范围内SARS-CoV-2变种造成的人口流动限制带来的流感感染趋势。艾普拜生物提供甲型流感、乙型流感检测试剂，同时提供多种病原微生物检测试剂和试剂盒，欢迎订购和咨询。个性化定制服务艾普拜生物数字PCR个性化定制服务覆盖多种检测试剂需求 ( 如鉴定、易位、突变检测、多重突变、高阶多重等 )，更多信息请联系您身边艾普拜生物工作人员或电话联系我们。

罗氏最新推出可检测甲型 H1N1 流感病毒的完整试剂盒 　　2009年5月14日，罗氏应用科学部宣布已成功研制开发了一款可检测甲型H1N1 流感病毒的检测试剂盒，目前也正在向卫生组织申请获取批准用以突发事件。 　　该试剂盒可应用于罗氏LightCycler® 480，2.0 和1.5荧光定量PCR平台上，快速筛选病毒阳性样本，检测出最新的甲型 H1N1流感病毒。与目前市面上现有的试剂盒相比，该款试剂盒在效率和操作方面都具有更大的优势。 　　罗氏应用科学部总监Manfred Baier在提到该产品时说到 “感谢多方面的研究合作所提供的信息，帮助我们研制和设计出该款全新检测试剂盒。我们很高兴可以提供这样快速、可靠的甲型 H1N1流感病毒检测工具。” 　　罗氏应用科学部提供的多样化产品可有效应用于甲型 H1N1流感病毒的检测鉴定，包括MagNA Pure 自动核酸纯化系统和High Pure手动核酸分离纯化系列产品，LightCycler® 荧光定量PCR系统，NimbleGEN芯片系统以及Genome Sequencer高通量测序系统。目前，公司也正在于全球多个研究机构和检测中心合作，对甲型H1N1流感病毒的特性和检测方法进行研究。 　　目前，市场上还没有有效的疫苗可抵抗甲型 H1N1流感。标准的治疗方案是采用达菲(Tamiflu)或是乐感清(Relenza)。想要了解更多有关甲型 H1N1流感的相关信息，请登陆www.who.int 。 Roche Launches Complete Detection Kit for Influenza A /H1N1 on LightCycler® System 　　Roche Applied Science announced today the availability of a new detection kit for the Influenza A/H1N1 virus. The detection tools are offered for use in life science research. Roche currently is filing to get approval of the local health authorities worldwide for use of the kit in emergency situations. 　　The kit runs on Roche´ s LightCycler® 480 II, 2.0, and 1.5 systems. It was evaluated with virus positive sample materials and selectively identifies the new Influenza A H1N1 virus. Compared with other detection kits, it features a couple of advantages in regard to efficiency and handling. 　　“The design of the new detection kits benefitted very much from information we got out of our manifold research cooperations. We are glad of our contribution in supplying fast and reliable tools for the detection of Influenza A/H1N1 to the research community,” said Manfred Baier, Head of Roche Applied Science. 　　Applied Science offers a variety of platforms that can be used to help identify the Influenza A H1N1 virus, including Nucleic Acid Purification, Real-Time PCR, Microarrays and Sequencing systems. The company is in close contact with various research institutions and test centers worldwide providing assistance in the detection and characterization of Influenza A H1N1 virus. 　　Currently, there is no human vaccine on the market that protects against swine influenza infection. Standard therapy for the disease includes treatment with antiviral drugs like Tamiflu or Relenza. For more information on Influenza A H1N1 please visit www.who.int.

近日，中国科学院合肥物质院安光所光电子中心生物医学光学团队在微流控CRISPR分子诊断新方法研究方面取得新进展。相关成果以《SEDphone: 空间编码离心式微流控芯片-智能手机平台联合RT/LAMP-CRISPR/Cas12a体系用于流感病毒分型检测》为题发表于化学类TOP期刊Sensors and Actuators: B. Chemical上。流感病毒是一种严重的公共卫生威胁，每年都会引起流行病，发病率和死亡率较高，特别是季节性流感爆发时，大批患者涌入社区和医院门诊，给医疗机构带来巨大压力。同时，流感病毒极易发生变异，表现出多种亚型，不同亚型需要采取不同的临床干预措施。因此，迫切需要开发一种准确、快速和便携的解决方案来区分不同流感病毒亚型，控制病毒传播及指导临床合理用药。CRISPR/Cas分子诊断技术，由于其特异性强、反应效率高和便携性好的特点，被称为最有可能替代PCR的下一代分子诊断技术。团队将LAMP等温扩增技术和CRISPR/Cas12a技术进行“双剑合璧”，靶标序列经过LAMP扩增后被CRISPR/Cas12a识别，并激活其反式切割的活性，进而切割报告探针，释放荧光信号。该方法既保证了检测的高灵敏度，又弥补了LAMP扩增过程中假阳性的问题。为了便于不同靶标的应用，研究人员基于LAMP-CRISPR/Cas12a系统开发了一个通用的设计过程模型。经优化后，可在45分钟内同时检测H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和乙型流感病毒(IBV) 5种流感分型，检测限达到10拷贝/μL，达到金标准水平。另外，为了实现LAMP扩增及CRISPR检测的一体化操作，研究人员设计并制备了具有空间编码功能的离心式微流控芯片，开发了基于智能手机的便携式床旁检测（point of care testing, POCT）设备SEDphone，实现了多种流感分型的“同时扩增，同时检测”。同时，采用双温区设计，克服了RT/LAMP与CRISPR/Cas12a技术反应温度差异的问题。采用临床样本验证了LAMP-CRISPR/Cas12a流感病毒快速分型方法及SEDphone平台的临床实用性。该项研究为多种病原体的高灵敏、准确、快速、即时检测提供一种新思路，有望用于发热门诊或是家庭自检，可最大限度地降低了不必要的交叉感染风险，缓解医疗压力。博士研究生尹雪儿为论文第一作者，朱灿灿副研究员、朱灵研究员和刘勇研究员为论文通讯作者。该项工作得到国家重点研发计划、中国科学院青促会优秀会员及合肥物质院院长基金高技术创新项目支持。图 SEDphone流感病毒检测平台工作流程示意图图 LAMP- CRISPR/Cas12a检测不同流感病毒分型特异性及灵敏度评估

p style=" text-indent: 2em " 今日，国家药品监督管理总局发布了“四价流感病毒裂解疫苗在我国获批上市”的通知。四价流感病毒裂解疫苗的上市，是对我国流感病毒疫苗品种的有力补充。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201806/insimg/b74acc35-d703-40b0-ab22-4a12019ca18f.jpg" title=" 1.jpg" / /p p 　　2017年12月以来至2018年初，全国各地流感疫情明显增高。由于2017-2018年度北半球三价流感疫苗株组分与我国流感优势毒株不匹配，导致流感疫苗保护效果受到一定影响。为了覆盖近年来全球流感流行的主要亚型，研发使用四价流感疫苗就成为当前疾病防控的一种迫切需求。为此，国家药品监督管理局会同有关部门，积极指导企业加快推进四价流感疫苗的研发进程，推动疫苗尽快上市应用。 span style=" color: rgb(84, 141, 212) " strong 2018年6月8日，国家药品监督管理局分别批准了华兰生物疫苗有限公司及长春长生生物科技股份有限公司四价流感病毒裂解疫苗的生产注册申请。 /strong /span /p p 　　流行性感冒(简称流感)主要由甲(A)型和乙(B)型流感病毒引起，由于病毒经常发生抗原变异，传染性大，传播迅速，极易发生大范围流行。特别对于婴幼儿、老年人和存在心肺基础疾病的患者，感染流感病毒可能并发肺炎等严重并发症而导致重症或死亡。目前，接种流感疫苗是预防流感疾病及大爆发的最有效的措施，世界卫生组织每年会根据全球流感流行情况，预测流感流行趋势，从而推荐适合本年度流感疫苗生产的毒株。 /p p 　　 span style=" color: rgb(84, 141, 212) " strong 之前，我国市场上的流感疫苗均为三价流感疫苗。此次获批上市的四价流感病毒裂解疫苗除包含普通三价流感疫苗的A1、A3、BV型病毒外，还包含BY型流感病毒，这也是2017-2018年我国流感季流行的主要病毒株。 /strong /span 该疫苗通过采用世界卫生组织推荐的流行毒株，经过鸡胚孵化培养收获病毒，结合灭活疫苗生产工艺制备而成，用于预防3岁及以上人群流感病毒的感染。 /p p 　　在疫苗的研发和审评注册过程中，国内外有关组织和部门均给予高度关注。作为我国首个上市的四价流感疫苗，为全面评估该创新疫苗的安全性及有效性，国家药品监督管理局各相关单位通过采取全程跟进、开放审评、前瞻指导、程序联动等方式，在充分借鉴国内外创新药品研发、评价经验基础上，严格把关，确保了注册工作的科学、客观、高效。 /p p 　　四价流感病毒裂解疫苗的上市，是对我国流感病毒疫苗品种的有力补充，它将与三价流感疫苗一起共同对我国防控季节性流感疫情发挥重要作用。 /p

近日，中国医药保健品进出口商会官网，更新了取得国外标准认证或注册的医疗物资生产企业清单，北京新羿生物科技有限公司推出的新型冠状病毒(SARS-CoV-2）抗原检测试剂盒和新型冠状病毒(SARS-CoV-2）/甲型流感病毒/乙型流感病毒抗原检测试剂盒进入商务部防疫物资出口“白名单”！附：新冠抗原检测系列试剂盒优异性能：高灵敏度、高特异性、重复性好。阴阳性符合率100%。检测快速：判读时间短，只需要10分钟【延长判读时间长，可达20分钟】，显色深。便 捷：拭子取样不需要深入鼻腔内部，减少病患痛苦。便于储存：常温保存，质保期24个月。检 测 限 ：最低为100 TCID50/mL；中检所最低检出限参考品可检至S7。多 规 格 ：1人份、5人份和25人份三种包装。抗原快速检测产品，以较短的检测时间、较低的成本、更方便的自测方式，在疑似患者辅助排查、高危人群筛查与自检自测中发挥了重要作用，可作为新冠感染筛查的辅助手段。加上之前我司已经进入商务部防疫物资出口“白名单”的产品，目前共有6款，包括：新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测试剂盒（数字PCR法）；新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）；新型冠状病毒（SARS-CoV-2）/甲型/乙型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）；核酸提取试剂（磁珠法）；新型冠状病毒(SARS-CoV-2）抗原检测试剂盒；新型冠状病毒(SARS-CoV-2）/甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂。现在，国外新冠疫情在进展，国内仍有偶发疫情，抗击疫情时刻不能放松，防疫物资更要做好充分准备。新羿生物作为疾病诊断的高科技企业，始终以维护人民健康为己任，不断推出适宜的新冠病毒检测解决方案，自主开发了基于数字PCR、荧光定量PCR与免疫三大技术平台的新冠相关产品，从样本采集到检测实现全流程覆盖。截至目前，新羿生物新冠相关产品均已具备出口资质和国外注册，为抗击全球疫情持续助力。

p style=" line-height: 1.75em text-indent: 2em " span style=" font-family: 宋体, SimSun " 近日，国际权威期刊《美国科学院院报》（PNAS）在线发布论文显示，一种重组的流感病毒G4 EA H1N1自2016年已经占据了国内猪流感病毒的主体，并具备在人群中流行的潜力。 /span /p p style=" line-height: 1.75em text-indent: 2em " span style=" font-family: 宋体, SimSun " 该论文是由中国农业大学刘金华教授和中国疾病预防控制中心主任高福担任通讯作者的研究报告。该报告提出，在中国境内发现了猪携带的一种& nbsp G4 基因型的& nbsp H1N1 流感病毒，该病毒由三个不同谱系病毒“重排”（交换基因）后生成，其核心是人类普遍缺乏免疫力的禽流感病毒，因此可能导致人际传播风险增加。 /span /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202007/uepic/f5e20ee6-833b-482c-aba2-7dc56378f65f.jpg" title=" 猪流感.jpg" alt=" 猪流感.jpg" / span style=" font-family: 宋体, SimSun text-indent: 2em " & nbsp /span /p p style=" line-height: 1.75em text-indent: 2em " span style=" font-family: 宋体, SimSun " 2011年至2018年期间，研究人员在中国10个养猪较多的省份对屠宰场内的正常猪进行了主动监测，共采集到29918份鼻拭子样本，并从中分离出了136种流感病毒，分离率为0.45%。同期，研究人员在中国农业大学实验室中从病猪身上分离出了43种流感病毒，分离率为4.23%。对病毒进行基因测序后，研究人员发现绝大多数病毒为基因型4 (G4)重组的欧亚禽类流感(EA) H1N1病毒（以下简称G4病毒）或相关G系病毒，并且自2016年以来G4毒株一直占主导地位，2018年占了绝大多数。 /span /p p style=" line-height: 1.75em text-indent: 2em " span style=" font-family: 宋体, SimSun " 结果发现，G4毒株能够以高亲和力与人体SAα2,6Gal受体相结合，这是感染人类细胞的先决条件，并且该病毒能够在人气道上皮细胞中高效复制。除此之外，G4型病毒还容易感染并在雪貂之间传播，雪貂是研究人类流感的一种流行动物模型。 /span /p p style=" line-height: 1.75em text-indent: 2em " span style=" font-family: 宋体, SimSun " 同时，与G4重组的EA H1N1病毒的人流感疫苗株的低抗原交叉反应表明，现有的人群免疫不能提供对G4病毒的保护。对职业接触人群的进一步血清学监测显示，10.4%(35/338)的猪工人G4 EA H1N1病毒呈阳性，特别是18岁至35岁的参与者，其血清阳性率为20.5%(9/44)，这说明以G4 EA H1N1病毒为主的人传染性增强。这种传染性大大增加了病毒在人类中适应的机会，并引起了对可能产生大流行性病毒的担忧。 /span /p p style=" line-height: 1.75em text-indent: 2em " span style=" font-family: 宋体, SimSun " 同一天时间，发表在《Science》的一篇评论文章中，悉尼大学进化生物学家Edward Holmes说，“目前的数据表明，这似乎是一种即将在人类身上出现的猪流感病毒。”当然，中国有5亿头猪，从这方面来看，这项研究的样本量还不够大，只是让人们对猪流感病毒有了一个较小的了解。& nbsp /span /p p br/ /p

6月14日，中国科学院计划财务局组织专家，对由中国科学院动物研究所主持，电子研究所参加的院科研装备研制项目《便携式禽流感病毒快速检测仪的研制》项目进行了验收。 　　该项目在中国科学院动物研究所野生动物疫病研究组何宏轩研究员的主持下，联合中科院电子所崔大付研究员，联合研制开发出了新设备1套，包括SPR快速检测仪和禽流感快速检测生物芯片，申报国家发明专利2项。经过专家现场测试，总体技术水平达到了设计要求。专家组通过现场测试和听取报告，针对项目研究报告、用户检测报告和财务决算报告，进行认真细致的讨论，认为项目组研制的“便携式禽流感病毒快速检测仪”性能达到了实施方案规定的技术指标，同意通过验收。 　　该项目开发了多项新技术，取得了多项重要研究成果，为我国野生动物禽流感的野外快速监测提供了科技支撑，同时对我国野生动物疫病的主动预警和主动监测具有重要意义。

4月17日，在北京检验检疫局承担的国家质检总局科技计划项目“禽流感病毒H7N9亚型双重荧光RT-PCR定型技术研究”鉴定会上，专家组一致认为：该项目创新性地实现了对禽流感病毒H7N9亚型的一步快速定型，可在一次检测中确认样品中是否存在H7N9亚型禽流感病毒或其他H7亚型和N9亚型的禽流感病毒 在通用性、特异性、灵敏性上，技术优势突出。专家组同意项目成果通过鉴定，并建议在进一步扩大和完善动物临床验证实验基础上，尽快推广应用。 　　目前，在国内通用的确诊禽类中禽流感病毒H7N9亚型的检测技术中，除采用传统的鸡胚病毒分离方法外，通常采用核酸检测方法，如普通PCR方法和基于荧光RT-PCR的“二步法”，但还没有建立起采用荧光RT-PCR技术“一步法”检测禽流感病毒H7N9亚型的方法。 　　据该项目组负责人、北京局检验检疫技术中心动物实验室博士高志强介绍，项目在实验过程中，共建立了3种检测方法。最终的禽流感病毒H7N9亚型双重荧光RT-PCR检测方法是在禽流感病毒H7亚型和N9亚型单重荧光RT-PCR检测方法的基础上通过优化建立，从而实现了对禽流感病毒H7N9亚型的一步快速定型。这种方法不仅能检测最近流行的H7N9毒株，还可以用于筛查其他H7亚型毒株。此方法不仅引物特异，而且探针特异，这一“双特异”性保证了结果的准确性，同时比普通PCR检测技术要灵敏100~1000倍。 　　高志强还指出，本项目在实施过程中，制备了H7N9病毒的HA和NA基因全长的外标物质，具有均匀和稳定的特点，可在检测过程中对逆转录和PCR扩增这两个重要环节进行控制，对规范诊断检测试剂和实验室质量控制具有重要意义，使不同试剂的检测结果具有了可比性，可用于消除不同人员操作间的差异，解决了目前H7N9检测缺乏质量控制外标物质的现状。 　　鉴定会上，由来自中国农业大学、中国医学科学院、中国科学院、中国农业科学院等单位的7名专家组成的鉴定委员会审查了项目组提交的相关资料，听取了项目组的汇报，审阅了相关鉴定资料，最终同意项目成果通过鉴定。 　　北京局自2001年开始开展荧光RT-PCR检测技术研究，是国内首家将荧光PCR技术应用到检验检疫领域和动物疫病防控领域的单位，并在实践中不断发展完善荧光RT-PCR检测技术，先后建立了禽流感病毒、新城疫病毒、口蹄疫病毒等多项荧光RT-PCR检测技术，获得国内首个动物疫病荧光PCR检测新药证书。 　　据悉，自3月31日国家卫生和计划生育委员会通报上海和安徽发现3例人感染H7N9禽流感病例后，在国家质检总局有关领导的指导下，该局第一时间成立了禽流感检测技术研究应急专项小组。北京局局长齐京安号召：“疫情就是命令，我们要迅速行动、全力以赴，为保障人民群众身体健康作出检验检疫部门的贡献。”一声令下，科技人员纷纷行动起来：及时收集、查阅最新流感资料 第一时间获得此次H7N9亚型禽流感病毒的安徽株和上海株的基因序列 结合实验室多年整理保存的禽流感研究资料，重点针对HA基因和NA基因进行序列分析比对……经过一系列努力，最终找到了变异位点，确定了双重荧光RT-PCR检测技术研究方案。 　　北京局副局长李忠榜表示，该项目为禽流感病毒H7N9亚型的检测提供了快速、高效方法，能够检测到样品中微量禽流感病毒。该课题鉴定后，课题组还将做大量的验证工作，在实践的检验过程中不断完善并制定禽流感病毒H7N9亚型检测国家标准，以便将该技术尽早应用到防控工作中，为确保活禽和禽产品的进出口安全，为国内养殖企业禽流感疫情普查，为老百姓吃上放心禽产品提供服务。同时，该局会尽快将研究成果应用到检验检疫工作中，接受实践检验，为提高口岸一线的检测能力做好技术储备和技术支持工作。

美国食品和药品管理局日前批准使用一种H5N1型禽流感病毒快速检测技术，用这种技术可以在40分钟内检测出人是否感染了H5N1型禽流感病毒。 　　该局发表新闻公报说，这一技术由加利福尼亚州一家公司开发，其原理是通过判断被检测者体内是否存在NS1蛋白质来确认其是否感染H5N1型禽流感病毒。 　　该局医疗设备和放射卫生管理中心主任丹尼尔舒茨说，这种技术有助于保护广大公众免受禽流感威胁。 　　H5N1型禽流感病毒是对人类威胁较高的一种病毒。世界卫生组织的最新数据显示，自2003年以来，全球已有413人感染这种病毒，其中256人死亡。

项目编号：BDH202207048-1项目名称：北大荒集团红兴隆医院乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒等检验试剂采购项目预算金额：222.0000000 万元（人民币）采购需求：购置乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒（化学发光法）100盒，乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（化学发光法）100盒，乙型肝炎病毒e抗体检测试剂盒（化学发光法）100盒等，详见招标文件合同履行期限：合同签定后由医院通知具体送货时间，接到订货电话后，48小时内送货到使用科室。本项目( 不接受 )联合体投标。

当前新冠疫情之下，流感在全国各地又呈爆发之势，流感的防控刻不容缓，这也对各级医院针对流感的诊断和治疗提出了更高的要求。因流感发病具有“快”和“急”的特点，所以流感病毒快速抗原检测是目前临床初筛的主要手段，其准确性起到至关重要的作用，直接影响了后续的临床处理手段。为什么今年夏季流感活跃度抬高？江西省报告，今年3月中旬以来流感的优势毒株发生了变化，而A(H3N2)季节流感病毒株近两年相对沉寂，群众的免疫水平偏低，且这一型别流感毒株易引发夏季流行高峰，导致今年夏季季节性A(H3N2)型流感活跃度增高。中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心主任王大燕研究员预测，今年的流感会对医疗机构造成压力，同时也会出现严重的病例。目前临床上流感病毒抗原检测普遍使用胶体金技术，其灵敏度和特异性存在较大的局限性，无法满足临床需求。因此，临床上急需准确性高的流感快速抗原检测试剂以满足患者需求。亿立方基于荧光纳米微球技术，成功开发了流感荧光免疫层析抗原检测试剂，是国内首个采用该技术的高灵敏度流感抗原检测试剂，2019年获广东省科技进步奖。用市面认可度高的流感核酸检测试剂检出的阳性样本和阴性样本，分别用亿立方荧光纳米微球方法与市场认可度高的胶体金法对照。可以看出亿立方荧光纳米微球方法远高于胶体金法的准确性。以下分别是10份阳性结果和10份阴性结果的对照表。备注：“-”：阴性，“+”：阳性， “++”：强阳性。PCR检测的亚型包括：H1N1、H3N2、H7N9、H5N1、H9N2、B/Victoria、B/Yamagata.

日本制成 快检流感病毒装置 　　环球短讯 　　新华社东京2月8日电 (记者蓝建中)日本东京都医学综合研究所的一个研究小组发表报告说，他们开发出一种简易检测装置，能在发病12小时内迅速诊断人体是否患流感，其灵敏度比现有同类装置高多倍。 　　据这份发表在新一期美国在线科学杂志《科学公共图书馆综合卷》的报告介绍，目前对流感进行简易诊断多数是利用鼻咽拭取液来检查是否含病毒。原有的检查元件是利用抗体来捕捉病毒，但这种检测方式须等病毒在人体内增殖24小时后才能测出。 　　研究小组说，新开发的方法是利用带有荧光色素的抗体来捕捉病毒，即使是少量病毒也能发现。研究小组通过对200名流感患者进行测试，确认新技术能在患者发病12小时内就以97%的准确率测出病毒，整个检测过程最长只需约15分钟。由于它能较快发现病毒，医护人员因而能对患者迅速开展治疗。 　　研究小组表示，他们将争取使这一成果在下个冬季达到实用水平。如果该装置更换抗体的话，还可用于诊断致死率很高的禽流感、登革热和埃博拉等病毒。

大家好，本周为大家分享一篇发表在Journal of Proteome Research上的文章，Template-Assisted De Novo Sequencing of SARS-CoV‑2 and Influenza Monoclonal Antibodies by Mass Spectrometry [1]，文章的通讯作者是德克萨斯大学生物医学研究支持中心的Maria D. Person。抗体在对病毒和其他病原微生物的适应性免疫反应中起着重要作用。对病毒中和抗体的详细表征对于开发能够有效预防病毒疾病的新疫苗和单克隆抗体疗法至关重要。目前，仅从蛋白质中获得抗体的完整氨基酸序列仍然具有挑战性，且许多用于氨基酸从头测序的软件对计算、硬件及操作人员知识和经验的要求较高。另一种蛋白基因组学方法是使用来自DNA序列的数据库作为起点，以数据库序列和实验数据之间的最佳匹配作为模板。这种方法在分析抗体时特别有用，因为大部分抗体序列（不包括CDR3区域）通常与种系序列非常相似。此外，准确区分Ile和Leu在抗体CDR区测序时尤为重要，而大多数蛋白质从头测序软件都没有解决这个问题。Supernovo是从种系序列模板开始的测序程序之一，该模板可以利用ETD和EThcD片段数据来自动区分Ile/Leu。在这项研究中，作者利用SARS-CoV-1人类抗体来开发模板辅助从头测序的方案，对两株SARS-CoV-2人类单克隆抗体进行了测定，最终优化的方案使用四种蛋白酶、双片段化方法、优化补充激活归一化碰撞能量和Supernovo获得99%准确的氨基酸序列，并以该方案对25株流感人单抗进行了测序。一、模板辅助从头测序方法的建立Supernovo的工作原理是，首先将MS/MS数据与种系数据库中的序列进行匹配，在初始种系序列选择之后，使用通配符搜索来确定接合（J）区域，以与可变区和恒定区候选最佳结合，然后进行in silico重组以生成模板。接下来，限制的从头测序和Byonic通配符搜索通过在迭代过程中改变单个氨基酸来改进模板，实现实验数据最佳匹配。最初由种系序列确定的Ile和Leu残基通过蛋白酶切割特异性和w离子的存在进行修正。利用多种蛋白酶从基因组数据库中选择种系支架序列，并通过通配符搜索获得从头测序所需的各种肽。胰蛋白酶和糜蛋白酶是根据其不同的切割特异性选择的，并选择特异性较低的弹性蛋白酶和胃蛋白酶提供额外的切割位点。由于Supernovo利用来自特异性和非特异性裂解肽的所有信息来构建序列，因此具有许多重叠的裂解位点对于序列测定至关重要。作者首先用序列已知的重组单抗CR3022制定和优化方案。CR3022用胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶和胃蛋白酶酶切，用HCD和EThcD LC-MS/MS分析酶切溶液。实验显示使用EThcD可以在不针对选定的单个z离子的情况下全局碎裂肽混合物，并且产生足够的w离子来区分Ile/Leu。b、c、y、z和w离子的产率取决于SA-NCE， 35%的SA-NCE值产生了最高数量的高置信度Ile/Leu分配，并被选择用于最终方案。图1显示了两种含有Leu和Ile的重链肽，其中检测到w离子z-43（Leu）和z-29（Ile），从而允许Supernovo区分Ile和Leu。虽然在碎裂谱中可以检测到w离子，但使用单一SA-NCE值的宽带碎裂，其丰度较低，这是该方法的主要限制。将多重断裂能量相结合，可以提高对w离子的检测，而使用额外的蛋白酶增加切割位点的数量，有助于分离位置相近的Ile/Leu。图1 使用EThcD对Ile/Leu进行MS/MS分配图2显示了用胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶和弹性蛋白酶酶切的重链Fab区域在HCD碎裂下的序列覆盖图。由于四种蛋白酶的不同切割特异性以及Supernovo对非特异性切割肽的匹配，可以观察到肽在许多氨基酸残基上的切割。除脯氨酸外，大多数残基的MS/MS中都观察到对应碎片离子。图3显示了DNA确定的参考CR3022序列（DNA sq）、通过将IMGT数据库中的序列片段与MS数据（SNO-gm）进行数据库匹配而识别的种系模板，以及通过对抗体可变区Fab的MS数据（SNO-MS）进行Supernovo分析而生成的最终从头序列之间的比较。所有CDR区域均实现100%正确的氨基酸序列（灰色高亮）覆盖，具有正确的Ile/Leu分配。Supernovo的错误分配（蓝色高亮）主要发生在HC和LC上的N-末端残基以及LC上的C-末端序列。与DNA衍生序列不匹配的外来N和 C-末端残基均与初始种系支架存在偏差，如图3中重链末端的洋红高亮所示。末端氨基酸具有较少的裂解和片段数据，并且可能具有混杂的修饰。半胱氨酸残基可导致附近氨基酸的错误分配，因为半胱氨酸硫的氧化修饰。总的来说，99%的单克隆抗体序列是通过这种方法正确测定的。结合HCD和EThcD数据，68个Ile/Leu中有67个被正确分配。图2 用胰蛋白酶（黑色）、糜蛋白酶（蓝色）、弹性蛋白酶（红色）和胃蛋白酶（黄色）酶切并用HCD裂解的CR3022重链Fab的肽覆盖图。图3 对CR3022 DNA衍生序列（DNA sq）、MS Supernovo种系模板（SNO-gm）和Fab区域的实验结果（SNO-MS）进行比对接着，作者使用两种具有DNA衍生序列的SARS-CoV-2抗体CM66和CM67来测试该方案的最终版本（即四蛋白酶酶切，HCD和EThcD活化，SA-NCE 35%）。表1总结了该方法对已知序列的三种抗体CR3022、CM66和CM67的测试结果。CDR区氨基酸在HC和LC中的分配均正确，只有两个Ile错误分配给Leu。在高通量方法中，产生足够强度的诊断性w离子仍然不一致，但当与蛋白水解切割偏好和种系模板结合使用时，该方法是有效的，至少提供97%的正确Ile/Leu分配。因此，四酶酶切双活化法被确定足以对抗体进行高度准确的序列测定。表1 受试单抗的氨基酸序列和Ile/Leu分配置信水平以及正确匹配的总结二、基于质谱的25种流感抗体分析产生高置信度序列作者用最终确定的方案分析了另外25种序列信息不确定的抗体，以评估该方法在更大规模的实验下是否能产生与SARS-CoV-1和2抗体相同水平的高置信度结果，并最终确定生成的序列是否可用于产生克隆和表达功能性抗体的基因。对于25株流感单克隆抗体，平均97%的序列和76%的Ile/Leu分配可在高置信度下确定。大多数置信度较低的氨基酸分配位于N端和C端，因此不太可能影响抗体结合。与半胱氨酸残基相邻的序列也有较高的中低置信度分配和偏离种系序列的发生率。在25株单克隆抗体中的24株中，两条链上三个CDR区域的所有残基都得到了高度可信的鉴定。由于该方法不总是在可检测水平上产生可区分的w离子，CDR区域具有一些中低置信度Ile/Leu分配。因此，当大规模应用于各种IgG抗体时，该方案提供了高置信度氨基酸序列。获得的流感单克隆抗体序列随后用于通过克隆和在HEK293细胞中表达产生抗体。三、流感病毒HA特异性人单克隆抗体的生物学活性及序列分析在克隆、表达和纯化后，通过ELISA评估原始25种流感病毒和相应重组表达的HA特异性单克隆抗体的生物活性。图4显示了25种单克隆抗体与原始和重组单克隆抗体的HA抗原的结合曲线。通过评估单克隆抗体对相应HA抗原的结合活性，证实了单克隆抗体对H1N1、H3N2和B型流感病毒HA的特异性。如图4所示，流感特异性单克隆抗体表现出与季节性和大流行性流感病毒株的重组HA（rHA）的差异结合，与原始抗体显示的结合活性相当。图4 原始MS测序（左曲线）和重组表达（右曲线）流感HA特异性单克隆抗体的ELISA结合曲线总的来说，作者通过对25个未知序列单克隆抗体进行测序，确认所采用的方法在不同单克隆抗体上产生的残基测定置信度与已知序列或商业来源的单克隆抗体相同。蛋白质组学方法可以用来检查基于DNA的方法，这些方法被认为更准确，或者可以用来清除样本处理和标记中的错误。通过ELISA结合试验观察并验证了CDR序列的多样性。这些分析证实，当克隆和重组表达时，质谱模板辅助从头测序产生的高置信度序列会产生与特异性流感病毒rHA抗原结合的重组单克隆抗体，从而对该方法进行生物学验证。撰稿：夏淑君 编辑：李惠琳文章引用： Template-Assisted De Novo Sequencing of SARS-CoV-2 and Influenza Monoclonal Antibodies by Mass Spectrometry.

为进一步规范新型冠状病毒相关检测试剂的管理，国家药监局器审中心组织制定了《新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂注册审查指导原则》《新型冠状病毒（2019-nCoV）抗体检测试剂注册审查指导原则》和《新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原检测试剂注册审查指导原则》现予发布。特此通告。国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心2022年4月27日新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂注册审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂（以下简称“新冠病毒核酸检测试剂”）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门提供参考。本指导原则是对新冠病毒核酸检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用。若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供注册申请人和技术审评人员使用的指导性文件，但不包括审评审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，相关内容也将适时进行调整。一、适用范围新型冠状病毒（2019-nCoV）属于β属冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，直径约为60~140nm。具有5个必需基因，分别针对核蛋白（N）、病毒包膜（E）、基质蛋白（M）和刺突蛋白（S）4种结构蛋白及RNA依赖性的RNA聚合酶（RdRp）。核蛋白（N）包裹RNA基因组构成核衣壳，外面围绕着病毒包膜（E）,病毒包膜包埋有基质蛋白（M）和刺突蛋白（S）等蛋白。实验室检查包括一般检查，病原学及血清学检查，胸部影像学检查等。病原学检查又包括核酸检测和抗原检测。核酸检测主要采用逆转录PCR，二代测序等方法，在鼻、口咽拭子、痰液和其他下呼吸道分泌物等标本中均可检测出新型冠状病毒核酸。新型冠状病毒在流行过程中基因组不断发生变异，新的变异株可能在传播力、致病性、免疫逃逸能力等方面发生改变。变异株可能影响检测试剂的性能，甚至出现漏检。本指导原则适用于采用逆转录实时荧光 PCR法，对咽拭子、鼻咽拭子、肺泡灌洗液或痰液等呼吸道样本中的新型冠状病毒(2019-nCoV )核酸进行体外定性的检测试剂。对于采用其他方法学的新冠病毒核酸检测试剂，可能部分要求不完全适用或本文所述内容不够全面，申请人应参照本指导原则，根据产品特性对适用部分进行评价，并补充其他的评价资料。本指导原则适用于新冠病毒核酸检测试剂注册申请和变更注册申请的情形。本指导原则针对新冠病毒核酸检测试剂注册申报资料中的部分内容进行撰写，其他未尽事宜应当符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家药品监督管理局公告2021年第122号）等相关法规要求。二、注册审查要点（一）监管信息1. 产品名称及分类编码产品名称应符合《体外诊断试剂注册与备案管理办法》（国家市场监督管理总局令第48号）及相关法规的要求，如新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）。根据《体外诊断试剂分类规则》，该产品按照第三类体外诊断试剂管理，分类编码为6840。2. 其他信息还包括产品列表、关联文件、申报前与监管机构的联系情况和沟通记录以及符合性声明等文件。（二）综述资料综述资料主要包括概述、产品描述、预期用途、申报产品上市历史及其他需说明的内容。应详细说明产品所采用的技术原理及检测流程。提供不同适用机型的检测通量，即一次检测最多可检测的样本数。提供核酸提取（手工和自动提取方式应分别明确）和PCR扩增的时间，以及检测全过程所需的时间。不同检测流程，分别提供最少和最多检测样本量下的检测时间。与已上市同类产品进行比较，比较内容包括样本类型，检测原理，检测靶基因，组成成分，内标，质控品，判读规则，分析性能和临床性能等。预期用途中明确产品检测的靶基因，需选择保守性和特异性相对较高的基因，同时还应考虑基因的扩增效率。具体检测基因一般为ORF1ab和N基因，如果检测其他基因，应提供相关指南或文献，并分析所检测基因的灵敏度和特异性是否符合临床需求。（三）非临床资料1. 产品技术要求及检验报告注册申请人应当在原材料质量和生产工艺稳定的前提下，根据产品研制、前期评价等结果，依据国家标准、行业标准及有关文献资料，结合产品特性按照《医疗器械产品技术要求编写指导原则》（ 2022 年第 8 号） 的要求编写。该类产品作为第三类体外诊断试剂，应当以附录形式明确主要原材料以及生产工艺要求。新冠病毒核酸检测试剂已有国家标准品，技术要求中应体现国家标准品的相关要求，并使用国家标准品对三批产品进行检验。新冠病毒核酸检测试剂的检出限水平应符合国家相关指南文件规定，申报产品对国家灵敏度标准品的检测结果应与声称的检出限水平相当。如有适用的国家标准、行业标准，产品技术要求的相关要求应不低于相应的要求。2. 分析性能研究注册申请人应采用在符合质量管理体系的环境下生产的试剂盒进行所有分析性能研究，提交具体研究方法、试验方案、试验数据、统计分析等详细资料。如申报产品适用不同的机型，需要提交采用不同机型进行性能评估的资料。如申报产品包含不同的包装规格，需要对各包装规格进行分析或验证。适用的不同样本类型应分别进行分析性能研究。分析性能评估所用样本的基本信息均需明确，例如样本来源、样本类型、采集和处理方式、稀释方式、定值过程及数据等。研究中采用的新冠病毒阳性样本，应采用科学合理的方法确定其阴阳性和浓度水平，提交具体的试验资料。分析性能评估用样本一般应为真实样本，如涉及稀释后检测，应采用与适用样本类型一致的阴性基质。不可采用质粒进行分析性能评估。对于各项性能中采用的样本，在下述各项性能研究资料中分别提供样本信息列表。2.1样本稳定性考虑到病毒RNA极易被降解的特性，应对样本稳定性进行详细研究，包括采集后未经处理的样本，加入不同裂解液/消化液的样本，灭活处理后的样本，研究内容包括冷藏保存时间，冷冻保存时间，冻融次数等。如产品适用拭子、痰液等不同的样本类型，因其中干扰物质存在较大差异，可能对病毒RNA降解的影响不同，建议对每种样本类型均进行稳定性研究。如核酸提取液可不立即进行检测，还需对核酸提取液的保存条件和稳定性进行研究。2.2适用的样本类型列明产品适用的样本类型。2.3企业参考品验证根据主要原材料研究资料中的企业参考品设置情况，采用三批产品对企业参考品进行检验并提供详细的试验数据。2.4精密度应对精密度指标，如标准差或变异系数等的评价标准做出合理要求。应考虑运行、时间、操作者、仪器、试剂批次和地点等影响精密度的条件，设计合理的精密度试验方案进行评价。精密度评价试验应包含核酸提取步骤。设定合理的精密度评价周期，例如为期至少20天的检测。对检测数据进行统计分析，获得重复性、实验室内精密度、实验室间精密度、批间精密度等结果。采用临床样本进行精密度评价，应至少包含3个水平：阴性样本、临界阳性样本、中/强阳性样本，并根据产品特性设定适当的精密度要求，例如：阴性样本：待测物浓度低于检出限或为零浓度，阴性检出率应为100%（n≥20）。临界阳性样本：待测物浓度略高于试剂盒的检出限，阳性检出率应≥95%（n≥20）。中/强阳性样本：待测物浓度呈中度到强阳性，阳性检出率为100%且Ct值的CV≤5%（n≥20）。2.5包容性2.5.1病毒样本的验证验证具有时间和区域特征性的至少20个不同来源的阳性样本（临床样本或病毒培养物），应包括检出限和重复性的验证。样本应覆盖目前国内流行的变异株型别，并适当纳入其他代表性的变异株。注意包容性研究样本和检出限研究样本不能重复。2.5.2生物信息学分析及人工合成样本的验证按照器审中心另行公布的变异株验证相关要求进行评价。2.6检出限2.6.1检出限的确定将不同来源的至少5个新冠病毒样本梯度稀释于与适用样本一致的基质中，进行检出限的确定。每个浓度梯度最少重复3次检测，以100%可检出的最低浓度水平作为估计检出限，在此浓度附近制备若干梯度浓度样本，每个浓度至少重复20次检测，将具有95%阳性检出率的最低浓度水平作为确定的检出限。2.6.2检出限的验证选择另外5个不同来源的新冠病毒样本在检出限浓度水平进行验证，应达到95%阳性检出率。2.7分析特异性2.7.1交叉反应需验证相关病原体和多例人类基因组DNA（表1）的交叉反应。除SARS冠状病毒和MERS冠状病毒可采用假病毒外，各病原体均应采用临床样本或培养物进行验证。建议在病毒和细菌感染的医学相关水平进行交叉反应的验证。通常，细菌感染的浓度水平为106CFU/mL或更高，病毒为105PFU/mL或更高，提供所有用于交叉反应验证的病原体样本的来源、阴阳性、种属/型别和浓度确认等试验资料。表1 需进行交叉反应验证的物质地方性人类冠状病毒（HKU1，OC43，NL63和229E）、SARS冠状病毒、MERS冠状病毒H1N1（新型甲型H1N1流感病毒（2009）、季节性H1N1流感病毒、H3N2、H5N1、H7N9，乙型流感Yamagata、Victoria，呼吸道合胞病毒A、B型，副流感病毒1、2、3型，鼻病毒A、B、C组，腺病毒1、2、3、4、5、7、55型，肠道病毒A、B、C、D组，人偏肺病毒、EB病毒、麻疹病毒、人巨细胞病毒、轮状病毒、诺如病毒、腮腺炎病毒、水痘-带状疱疹病毒肺炎支原体、肺炎衣原体军团菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、肺炎克雷伯菌、结核分枝杆菌烟曲霉、白色念珠菌、光滑念珠菌、新生隐球菌等高浓度人类基因组DNA2.7.2竞争性干扰申请人应充分考虑临床上容易与新冠病毒合并感染的病原体，在高浓度的情况下对低浓度（例如检出限浓度）新冠病毒核酸检测的影响，进行竞争性干扰研究。2.7.3干扰试验应根据所采集样本类型，针对可能存在的内源/外源物质干扰情况进行验证。建议申请人在每种干扰物质的潜在最大浓度（“最差条件”）条件下进行试验，检测包含临界阳性水平在内的新冠病毒样本。对结果进行合理的统计分析，对比添加干扰物质前后的 Ct 值差异。检测的潜在干扰物包括样本中的原有物质及在样本采集和处理期间引入的物质。表2 用于干扰试验的物质类别具体物质粘蛋白血液（人类）鼻腔喷雾剂或滴鼻剂苯福林、羟甲唑啉、氯化钠（含防腐剂）鼻用皮肤类固醇倍氯美松、地塞米松、氟尼缩松、曲安奈德、布地奈德、莫米松、氟替卡松缓解咽部症状的药物相关含片、喷剂等过敏性症状缓解药物盐酸组胺抗病毒药物α-干扰素、扎那米韦、利巴韦林、奥司他韦、帕拉米韦、洛匹那韦、利托那韦、阿比多尔抗生素左氧氟沙星、阿奇霉素、头孢曲松、美罗培南全身性抗菌药物妥布霉素样本采集和处理期间引入的物质2.8核酸（RNA）提取/纯化性能在进行核酸检测之前，建议有核酸（RNA）提取/纯化步骤。该步骤的目的除最大量分离出目的RNA外，还应有相应的纯化作用，尽可能去除PCR抑制物。对配合使用的所有核酸提取试剂进行提取核酸纯度、浓度、提取效率的研究，并与质量较好的核酸提取试剂进行平行比对。若产品适用两种或以上核酸提取试剂，则每一种核酸提取试剂均需配合检测试剂进行抗干扰、精密度和检出限的验证。2.9反应体系2.9.1样本采集和处理2.9.1.1样本采集方式的选择2.9.1.2样本采集时间点的选择：是否受病程、临床症状、用药情况等因素的影响。2.9.1.3采样拭子及样本保存液的选择：对拭子头和拭子杆的材质要求。明确保存液或裂解液的成分、浓度、使用量的要求等。配套的不同保存液或裂解液需验证检出限和重复性。2.9.1.4样本处理方式的选择：研究产品适用的灭活方式，包括热灭活和化学灭活，研究内容包括胍盐的使用浓度及用量、样本用量。如适用，对痰液消化方式及消化液进行研究。2.9.2核酸提取和反应体系研究确定最佳核酸提取和反应体系，包括核酸提取用的样本体积、洗脱体积和PCR加样体积、各种酶浓度、引物/探针浓度、dNTP浓度、阳离子浓度及反应各阶段温度、时间、循环数等。建议在保证核酸提取质量的情况下尽量扩大总反应体系和加样量，以提高检测灵敏度。反应体系研究应确保不同基因的检测能力具有一致性，对于结果为单基因阳性时需要复测的试剂，需使用至少10例临床样本梯度稀释，观察各基因检出情况是否存在显著差异，避免过高的复测率。提交不同适用机型基线和阈值循环数的确定资料。不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述，并提交验证资料。3. 稳定性研究申报试剂的稳定性主要包括实时稳定性（有效期）、开瓶稳定性及冻融次数限制等研究，申请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案。稳定性研究资料应包括具体的实施方案、详细的研究数据以及统计分析结论。对于实时稳定性研究，应提供至少三批产品在实际储存条件下保存至成品有效期后的研究资料。4. 阳性判断值研究阳性判断值一般为申报产品检测病毒核酸阳性的Ct值。阳性判断值研究用样本来源应具有多样性和代表性，考虑不同时间、地域、不同的感染阶段和生理状态等因素，尽量纳入较多弱阳性和高阴性水平的样本。在条件允许的情况下，建议覆盖目前的流行株进行阳性判断值研究。采用ROC曲线分析建立每个检测靶基因的阳性判断值，然后确定产品的判读规则（单基因阳性、双基因阳性等）。对于结果为单基因阳性时需要复测的试剂，建议对阳性判断值研究数据进行复测率的统计分析。如判定值存在灰区，应提供灰区的确认资料。如果产品适用不同样本类型，需要对各样本类型进行阳性判断值的验证。提交阳性判断值研究所用样本的背景信息列表，至少包括性别、年龄、临床诊断信息、样本来源机构、检测结果等信息。提供内标检测结果范围的确定方法和研究资料。5. 其他资料5.1主要原材料研究资料该类产品的主要原材料包括引物、探针、酶、dNTP、核酸分离/纯化组分（如有）、质控品、参考品等。应提供主要原材料的选择与来源、制备过程、质量控制标准等相关研究资料、质控品的定值试验资料等。如主要原材料为企业自制，应提供其详细制备过程；如主要原材料源于外购，应提供资料包括：选择该原材料的依据及对比筛选试验资料、供货方提供的质量标准、出厂检验报告，以及该原材料到货后的质量检验资料。供应商应固定，不得随意更换。5.1.1引物和探针：应详述引物和探针的设计原则，提供引物、探针核酸序列、靶序列的基因位点及两者的对应情况。建议每种病毒设计两套或多套引物、探针以供筛选，通过序列比对和功能性试验等方式，对病毒进行包容性和特异性（如交叉反应）的评价，其中序列比对包括与已公布新冠病毒序列的比对，及与易产生交叉反应的其他病原体的序列比对；功能性试验包括对不同来源、不同滴度的新冠病毒核酸阳性样本，和不同的近缘病原体的检测。通过筛选确定最佳的引物和探针组合。引物、探针的质量标准应至少包括序列准确性、纯度、浓度及功能性实验等。5.1.2脱氧三磷酸核苷（dNTP）：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP，应提供对其纯度、浓度、功能性等的详细验证资料。5.1.3酶：需要的酶主要包括DNA聚合酶、逆转录酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等，应分别对酶活性、功能性等进行评价和验证。5.1.4质控品试剂盒一般包含阴性质控品和阳性质控品。阳性质控品应包含试剂盒检测的靶序列，可采用假病毒制备。质控品需参与样本处理、核酸的平行提取和检测的全过程，以对整个提取和PCR扩增过程、试剂/设备、交叉污染等环节进行合理质量控制。提交试剂盒质控品有关原料选择、制备、定值过程、浓度范围等试验资料，对质控品的检测结果Ct值范围做出明确的要求。5.1.5内标内标，又称内对照，可对管内抑制导致的假阴性结果进行质量控制，应与靶核酸一同提取及扩增。申请人需对内标的引物、探针设计和相关反应体系的浓度做精确验证，既要保证内标荧光通道呈明显的阳性曲线又要尽量降低对靶基因检测造成的抑制。明确内标的检测结果Ct值范围。建议科学设置内标，对待测样本的取样质量、试剂的反应体系进行监控。5.1.6企业参考品该类产品的企业参考品一般包括阳性参考品、阴性参考品、检出限参考品和重复性参考品。应根据产品性能验证的实际需要设置企业参考品。应提交企业参考品的原料来源、选择、制备、阴阳性及浓度确认方法或试剂等相关验证资料。企业参考品应采用临床样本，或者使用病毒培养物加入阴性基质。企业参考品的设置建议如下：阳性参考品：应着重考虑不同来源的病毒样本和滴度要求，应至少选取不同来源的5个病毒样本。阴性参考品：主要涉及对交叉反应的验证情况，建议包括冠状病毒（HKU1、OC43、NL63、229E）、SARS冠状病毒（可采用假病毒）、MERS冠状病毒（可采用假病毒）、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等。检出限参考品：可采用95%阳性检出水平或略高于检出限的水平，如100%阳性检出水平。重复性参考品：建议包括高、低两个浓度的样本，其中一个浓度应为检出限附近的浓度。5.2生产工艺研究资料介绍产品主要生产工艺，可用流程图结合文字的方式表述。提交主要生产工艺的确定及优化研究资料。（四）临床评价资料该类试剂应通过临床试验路径进行临床评价。临床试验应满足《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（国家药品监督管理局通告2021年第72号）的要求，如相关法规、文件有更新，临床试验应符合更新后的要求。下面仅说明该类试剂临床试验中应关注的重点问题。该类试剂临床试验应按要求在三家以上临床试验机构进行，开展临床试验的机构应按要求经国家药品监督管理局医疗器械临床试验机构备案系统备案。1. 试验设计采用试验体外诊断试剂与已上市同类产品及临床参考标准进行比较研究，从而对产品临床性能进行确认。2. 受试者选择临床试验的入组人群应为产品的预期适用人群，该产品的适用人群包括：新型冠状病毒感染的疑似病例，以及根据国家卫生健康委员会相关规定需到临床试验机构就诊并进行新冠病毒核酸检测的其他人群。临床试验入组人群应以新冠疑似病例为主，并能代表适用人群的各种情形，如：最终确诊病例应包括不同病毒载量（根据对比试剂核酸检测结果确定）的病例，最终排除病例应适当纳入有疑似症状的其他呼吸道病原体感染病例。应注意，排除病例应绝大部分来源于疑似病例，也可适量纳入部分出院排除病例和其他疾病患者。国家卫生健康委员会发布了《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》《新型冠状病毒肺炎防控方案》和其他相关诊疗指南，申请人在进行临床试验时应考虑现行方案对疑似病例和其他适用人群的规定，按照规定入组病例进行临床试验。3. 临床试验样本要求试验体外诊断试剂可同时适用于上呼吸道样本和下呼吸道样本，也可仅适用于上呼吸道样本。建议按照《新冠病毒样本采集和检测技术指南》进行样本采集。应采用临床原始样本进行临床试验。临床试验所用样本类型、样本采集、样本处理、样本稳定性、核酸提取纯化及结果判读等应分别满足试验体外诊断试剂与对比试剂产品说明书的要求，并在临床试验小结和报告中明确上述内容。临床试验前应对上述内容进行充分的性能评估。4. 临床试验样本量应基于与对比试剂的比较研究估算临床试验样本量。根据已有研究数据进行初步估算，建议对比试剂（核酸检测试剂）检测阳性样本不少于200例，阴性样本不少于3002019-nCoV）xx基因。有关“疑似病例”等人群的定义参照《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》《新型冠状病毒肺炎防控方案》等文件执行。该产品在使用上应当遵守《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》《新型冠状病毒肺炎防控方案》等文件的相关要求。开展新型冠状病毒核酸检测，应符合《新冠病毒样本采集和检测技术指南》等的要求，做好生物安全工作。本试剂盒检测结果仅供临床参考，不得作为临床诊断的唯一标准。建议结合患者临床表现和其他实验室检测对病情进行综合分析。2.【检验原理】简述产品的核酸提取和RT-PCR原理。明确内标基因名称及其作用。如采用了防污染措施，进行简要描述。性别样本类型受试者临床诊断背景信息新冠确诊/排除

p 　　韩国科学技术研究院发布消息称，该院联合韩国建国大学等机构共同研发出准确检测禽流感病毒的新方法。研究小组利用光和生物传感器技术开发出分子检测平台，此平台适用于检测各种非标记定量生物分子技术。 /p p 　　目前的标记技术会改变病毒的性质，难以观察病毒状态。该技术利用光固有特性，具有不改变病毒性质、非接触和非破坏的特性。研究组开发的太拉赫超材料，对微量的禽流感病毒亚型病毒进行定向分析。利用太拉赫超材料的分光技术克服现有技术局限，提高灵敏度，并能准确快速检测病毒。 /p p 　　研究组期待该技术今后可以应用于迅速判断各种疾病，特别是人体低分子物质诊断研究中。该成果近日在美国进行专利注册，并发表在国际学术杂志《科学报告》上。 /p p /p p /p

基因重配模式初步揭示，病毒可能来自于欧亚大陆迁徙至东亚地区的野鸟所携带的禽流感病毒和中国上海、浙江、江苏等地的鸭群和鸡群所携带禽流感病毒发生的基因重配。 　　近日，中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室(CASPMI)研究人员对人感染H7N9禽流感病毒基因进行分析，初步揭示了病毒可能来自于欧亚大陆迁徙至东亚地区的野鸟所携带的禽流感病毒和中国上海、浙江、江苏等地的鸭群和鸡群所携带禽流感病毒发生的基因重配。 　　祸起鸟禽病毒基因重配 　　“病毒重配是自然界很常见的现象，不同病毒可以通过宿主之间的接触交换其基因片段。”4月9日，中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室副主任刘文军在接受《中国科学报》记者采访时说。 　　该实验室对中国疾病预防控制中心(CDC)提供的H7N9病毒基因数据进行的分析结果显示，在H7N9病毒的8个基因片段中，H7片段来源于浙江鸭群中分离的禽流感病毒，并可追溯至东亚地区野鸟中分离的相似病毒 N9片段与东亚地区野鸟中分离的禽流感病毒同源。其余6个基因片段(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)来源于H9N2禽流感病毒。据病毒基因组比对和亲缘分析显示，H9N2禽流感病毒来源于中国上海、浙江、江苏等地的鸡群。 　　“此次疫情之所以发生在长三角地区，可能是因为欧亚大陆迁徙至韩国等东亚地区的携带H亚型(包括H7N3和H7N9亚型禽流感病毒)的野鸟经过中国长三角地区时，接触到浙江鸭群，病毒产生重配使鸭群携带H7亚型病毒，并和浙江、上海等地携带H9N2禽流感病毒的鸡群接触，最终基因重配成为新型禽流感病毒H7N9。”CASPMI从事生物信息分析的副研究员刘翟在接受《中国科学报》记者采访时说。 　　对于此前有媒体称H7N9病毒是“中韩混血”，刘文军纠正说，野鸟是不断迁徙的，没有国籍，不能说H7N9病毒是两国混血。 　　该团队的研究结果还显示，H7N9禽流感病毒暂未发现在猪群中进化的痕迹，猪在这次病毒基因重配中未发挥中间宿主作用。这一结果也否定了此前一些人关于H7N9病毒可能来源于黄浦江死猪的猜疑。 　　死亡率高或因病毒变异 　　这种在禽类身上呈现低致病性的病毒，在人身上却极具破坏力，病毒会在人的肺部疯狂复制，导致病情发展迅速，死亡率也很高。 　　“血凝素(HA)像一把钥匙，使病毒获得入侵人类或牲畜细胞的通道 神经氨酸酶(NA)帮助病毒破坏细胞受体，并使新复制合成的病毒扩散 剩余的6个基因片段协作，完成病毒大量在细胞体内复制的过程。”刘翟解释说。 　　刘翟表示，三个步骤的配合缺一不可，哪一个失衡，都可造成病毒力量弱化，不足以对人体起到杀伤作用。但不幸的是，在新型的H7N9禽流感病毒中，这三个步骤高效配合，也因此对人体造成了极大破坏。 　　该实验室研究人员表示，新型H7N9禽流感病毒感染人类，并导致高死亡率，可能源于病毒变异。目前已观察到N9的变异，其基因片段比一般的N9基因片段短一些，但尚不知这种变异导致何种具体后果。 　　而在此次的研究过程中，H7基因片段和惯常的H7并未有太大不同。但在决定人—禽受体结合的特异性上，出现了关键氨基酸的变化。这种变化对人的影响有待进一步的科学评估，因为此前H7亚型禽流感病毒感染人的案例曾有发生。 　　疫苗不能滥用 　　据了解，禽类中HA共有16种亚型，NA有9种亚型，两者可以组合成144种不同的病毒亚型，目前已发现130余种。 　　刘文军指出，要想研究出针对各类流感的疫苗仍存在困难。因为流感变异速度非常快，很难预测会发生哪些变异。同时，疫苗也不能滥用，否则可能会加快病毒变异速度。 　　然而，他指出，流感病毒研究的重要性并不亚于艾滋病或乙肝。流感病毒可能通过飞禽、家畜家禽等多种宿主来传播，很难切断其中任何一种传播途径，主动预防非常困难。 　　流感病毒对人类危害非常大。如1918年至1919年西班牙型流行性感冒就曾导致全世界约10亿人感染、2500万到4000万人死亡。 　　对于下一步的研究，刘文军表示，CASPMI将继续追踪研究H7N9的感染机制，为下一步防控工作提供理论基础。

空气污染究竟是否会加重呼吸系统病毒感染？现在，中国科学家发现，答案是肯定的。中国科学院生态环境研究中心（以下简称生态中心）刘思金研究员团队与中国科学院微生物研究所（以下简称微生物所）方敏研究员等合作，发现大气细颗粒物可以打破流感病毒本身在动物体内散播方式，像“特洛伊木马”一样将病毒运送到细胞中，同时让病毒更容易进入肺脏深部，甚至进入肝脏、脾脏和肾脏等肺外器官。相关研究近日发表于《科学进展》(Science Advances) 期刊。“我们的研究详细阐释了空气污染如何影响呼吸道感染，说明了考虑空气质量管理和减少空气污染政策的紧迫性。”论文共同通讯作者刘思金对《中国科学报》说。诞生在校车上的合作2020年9月里的一天，担任环境化学与生态毒理学国家重点实验室副主任的刘思金像往常一样搭乘校车从研究所前往中国科学院大学雁栖湖校区给研究生上课。这段一个多小时的教学之旅，他喜欢在车上和邻座的老师学生们聊聊感兴趣的研究。这一次，刘思金遇到了方敏，交流中，他们发现了共同感兴趣的话题：空气污染与呼吸系统感染性疾病。近年来，越来越多的研究表明，PM2.5等大气颗粒物可以吸附携带多种病原微生物，但它们是否会增加人群的疾病风险及其相关机制并不清楚。刘思金团队主要开展大气细颗粒物暴露的健康危害研究，特别关注颗粒物诱发机体损伤效应的过程和机制；方敏团队主要从事病原微生物感染和免疫、病原与宿主互作的研究，在流感病毒的致病机理研究方面做了大量的工作。这让他们对大气细颗粒物如何影响呼吸系统病毒感染这个长期未解答的跨学科问题都十分感兴趣。两人越聊越投机，短短的旅途上，初步的合作意向已经达成。随后，两个团队合作申请了国家自然科学基金委的面上项目，以及原创性探索项目。他们开始以流感病毒为研究对象，着手研究大气细颗粒物与病毒感染之间的关系与机制。“之所以选择流感病毒，是因为流感病毒是造成呼吸系统感染的重要病原之一，并且可以在微生物所的生物安全二级实验室进行操作。我们也在小鼠流感病毒感染模型的建立方面积累了一些技术方法和实操经验。”论文共同通讯作者方敏对《中国科学报》说。细颗粒化身“特洛伊木马”流行病学研究表明，当空气污染严重时，人类呼吸道病毒传播似乎也会增加。空气中细颗粒与病毒究竟如何协作？合作团队选择了四种具有不同来源和组成的颗粒物来验证其与病毒之间的相互作用，包括大气环境中采集的PM2.5、以二氧化硅为主要成分的粉尘颗粒、通过生物质燃烧形成的生物炭颗粒以及由化石燃料燃烧产生的碳黑颗粒。“大气中的病毒不是纯粹自由态存在的，它往往是有载体的。我们发现，细颗粒物就可以作为一个载体，它们可以像‘特洛伊木马’一样将病毒运送到细胞中。”刘思金比喻说。值得注意的是，研究者发现，细颗粒物与病毒的相互作用在很大程度上依赖于其物理化学性质。例如PM2.5比其他三种细颗粒物吸附的病毒要多得多，因为它具有较高的表面积和孔隙率等特性。生物炭的病毒载量紧随其后。那么，装载在细颗粒物上的病毒是否可以感染呢？研究者通过经典的血凝素实验对细颗粒物与病毒的复合物进行了检验。“血凝素（HA）是流感病毒表面的一种糖蛋白，它能够与多种禽类和哺乳动物红细胞上的血凝素受体结合，引起红细胞凝集。”方敏介绍，研究发现细颗粒物与病毒复合物的凝聚能力是纯病毒的70%~90%，其活性在培养4小时后保持不变，这说明被吸附或者沉积在颗粒物上的病毒仍然具有较高的感染活性。针对搭载“特洛伊木马”的病毒被机体吸入后产生的损伤效应，合作团队发现所有的细颗粒物都能在不同的程度上增强病毒对细胞的感染并促进了病毒的出芽和释放。更为重要的是，小鼠实验发现颗粒物可以运载病毒进入肺脏深部，并且突破气血屏障，到达肝脏、脾脏和肾脏等肺外器官，导致小鼠产生更严重的损伤效应，包括全身性炎症、局部组织损伤和体重减轻等。“由于颗粒物的载体作用，改变了流感病毒在呼吸道的分布，并运载病毒到达肺外器官。与单独的病毒相比，复合体由于颗粒性质更容易被细胞摄取，这个过程可以不依赖病毒特异性受体。另外，颗粒物可以通过脂筏促进子代病毒出芽释放，导致病毒的整个感染过程被重排和加速了。”方敏解释说。红细胞上的流感颗粒（蓝色；人工着色），可搭载细颗粒进入细胞图片来自：NIBSC / SPL/Nature“摸着石头过河”《自然》（Nature）对这项研究进行了专文报道，认为该研究“有助于解释为什么空气污染严重时流感病毒感染更加严重”。“我们的研究为空气污染对呼吸道感染的影响提供了详细的见解，也表明了考虑空气质量管理和进一步减少空气污染政策的紧迫性。”刘思金说。刘思金课题组成员、论文第一作者董政告诉《中国科学报》，该研究从2020年9月开始，到现在花费了将近三年时间。由于研究中涉及到环境化学、病毒学以及免疫学等跨学科知识和技术方法，很多实验思路和方法都需要“摸着石头过河”，才能逐步建立。董政说，“做研究有趣的地方正在于克服一个又一个难题后的喜悦感。”不过，研究者表示，这项研究也有一定的局限性，如实验室模拟与真实的环境条件可能存在差别，同时实验动物与人体存在很大的差别，单纯动物实验得到的结论不能完全外推到人体，接下来仍需要更多的研究对此进行深入探索。空气中的细颗粒，如PM2.5、灰尘、生物炭和碳黑，可吸附不同数量的病毒，形成传染性的细颗粒-病毒复合物。复合物通过非病毒受体依赖的途径感染宿主细胞，引导病毒的内化和出芽。不同的细颗粒负载的病毒沿着呼吸道分布在不同的位置，并运输到更远处的肺外器官图片来源：受访对象

世界卫生组织已将甲型H1N1流感警告级别提到5级，强烈显示即将发生的大流行。据世卫组织公布，截止于2009年5月13日11点，全球确认甲型H1N1流感5,969例并蔓延28个国家，给各国在紧急预警和疫情控制方面提出了严峻的挑战。继香港首例甲型H1N1确诊后，5月11日，四川一例甲型H1N1流感疑似病例被确诊，5月12日17时，山东报告1例甲型H1N1型流感疑似病例，当日香港发现一名甲型H1N1流感疑似个案。由于病毒引起的感染症状多比较相似，采用常规方法很难确认感染类型，因此对于甲型H1N1流感的早期快速确诊对于有效控制疫情至关重要。 　　美国贝克曼库尔特公司在病毒核酸提取，实验室自动化和病毒核酸检测领域有着丰富的经验和完整的解决方案。针对本次甲型H1N1流感疫情，公司已与国家CDC开展合作，根据世界卫生组织最新发布的H1N1流感病毒序列信息和双方技术基础联合开发甲型H1N1型流感病毒快速诊断方案，并同时开发包括人流感，禽流感，猪流感，SARS等多种上呼吸道病毒检测和变异分析标准方案，该方案具有快速、准确、安全、低成本等特点，并可用于流感病毒快速筛查、病毒分型、突变检测和流行病学研究。 　　• 病毒核酸安全提取 　　美国贝克曼库尔特公司的SPRI-TETM Viral NA提取试剂盒结合SPRI-TETM自动核酸提取仪，为甲型H1N1流感病毒核酸的提取提供了快速安全的解决方案。SPRI-TETM采用固相载体可逆式磁珠对病毒RNA进行高效抽提，从样品的裂解到核酸的洗脱都无需人工干预，将操作者危险性降到最低。SPRI-TETM系统可以一批次提取1-10个样品，每批次提取时间约30分钟。 　　• 特异性引物设计 　　根据WHO已公布甲型H1N1流感序列，美国贝克曼库尔特公司与国家CDC合作设计出高特异性PCR扩增引物组。该引物组采用GeXP系统的 eXpress ProfilerTM模块设计，包括5对特异性引物，分别为A型流感，H1N1型流感，季节性流感，甲型H1N1流感和质控序列。与常规PCR引物不同，每对引物5’端均带有通用引物，5组扩增产物长度范围在100- 600碱基。 　　• 甲型H1N1病毒快速检测 　　利用贝克曼公司专利的XP-PCR技术，对5对引物(5对流感病毒特异引物和一对内质控引物)进行多重扩增( 整个流程由BiomekTM系列自动化工作站完成)。多重PCR产物因长度不同，可经过毛细管电泳分离检测。电泳原始数据、样本信息和基因信息输入GeXP软件系统进行分析， 即可得到样本的病毒检测报告。 　　• 病毒分型和变异检测 　　在多重病毒监测基础上，利用标准甲型H1N1病毒引物扩增病毒基因组序列，利用GeXP系统的序列分析功能分析病毒变异位点和可能的蛋白质序列变异。 　　该方法可以将常见流感症状的可能病原体一次性扫描，确定检测样本的感染类型，具有样本需求低，检测速度块，同时可以监测病毒的变异状况。

新华网北京4月26日电(记者徐博)中国检验检疫科学研究院院长李怀林26日在质量和安全年实验室开放日对来访的市民进行答疑时表示，我国完全有能力、有技术对人感染猪流感病毒进行检测。 　　据世界卫生组织通报，近期美国、墨西哥出现人感染猪流感(A/H1N1)疫情，截至4月23日，两国共报告流感样病例898例，62人死亡。 　　李怀林说，中国相关部门已采取措施严防美国、墨西哥出现的人感染猪流感传入，检科院将竭尽全力进行配合，积极应对。 　　他同时介绍，人感染猪流感以呼吸道感染为主，一般来说，食用熟制猪肉或猪肉产品不会感染猪流感。 　　26日，北京市100多名市民走进检科院参观，目睹了实验室科技人员对食品严格准确的检测过程，听取了质检专家和检测人员对食品、化妆品等产品质量和安全常识的讲解。 　　检科院是我国唯一的国家级公益型检验检疫科研机构，该院在食品营养，食品中的农/兽药残留、添加剂、转基因、食源性疾病、生物源性成分等方面有着雄厚的技术实力和较高的科研水平。

人民网11月8日讯 据日本共同社消息，日本东京都医学综合研究所等研究小组日前开发出一种针对强毒性H5N1型禽流感病毒的新型检测方法，检测灵敏度是以往方法的50倍以上。该装置仅为手掌大小。日本北海道大学和熊本大学也参与了该项研究。这一检测方式将有助于防治禽流感。 　　据悉，只需提取被检测者鼻腔和喉部的粘膜，将其滴在检测装置上，15分钟左右就可诊断出结果。研究小组对孕检和流感检测中已被使用的“免疫层析法”进行了改良。新型检测机器可使H5N1相关抗体与微量荧光色素相结合，并对该色素进行高灵敏度检测。 　　之前的方法只能检测出部分H5型病毒，研究小组此次开发出了新抗体。经确认，新检测方式可以检测出各类H5型病毒。

本文要点：新冠病毒（SARS-CoV-2）的早期发现是预防其传播的有效途径。新冠病毒抗原检测是便捷的方法，但如何发展高灵敏度的有效诊断方法仍是一个挑战。本文提出了一种基于近红外二区窗口荧光发射纳米颗粒的横向流动分析方法( lateral flow assay，LFA)，用于新冠病毒抗原的灵敏检测。得益于NIR-II荧光的高穿透性和低自体荧光，这种NIR-ⅡLFA可以增强SBR，使得SARS-CoV-2抗原的检测限可降至0.01 ngmL-1。在临床拭子样本测试中，NIR-II LFA优于胶体金LFA，与聚合酶链反应测试的总体一致性更高。NIR-II LFA可以成功检测低抗原浓度(0.015 ~ 0.068 ngmL-1)的临床标本，而胶体金LFA检测失败。NIR-II LFA可为新冠肺炎感染的早期诊断和大规模筛查提供一个高灵敏度、快速、经济有效的平台。NIR-II荧光纳米颗粒是通过将有机染料封装在聚苯乙烯(PS)纳米颗粒中制备的。纳米颗粒表面修饰的羧基，允许与胺功能化的单克隆抗体(mAbs117)进行偶联。与mAbs117偶联后，纳米颗粒(NIR-II nanoparticles@mAbs117)尺寸增大47 nm、表面变粗糙(Figure 1(a))。制备的纳米颗粒分散在水中呈淡绿色，并显示明亮的NIR-II荧光(Figure 1(b))。其紫外-可见-近红外(UV-Vis-NIR)吸收光谱在806 nm处出现峰值，而荧光发射光谱在1046 nm处出现峰值(Figure 1(c))。纳米颗粒对于新冠病毒抗原进行LFA检测的原理如Figure 2 所示。LFA条带由5部分组成:样品垫（Sample pad）、结合垫（Conjugate pad）、NC膜（NC membrane）、吸收垫（Absorbent pad）和塑料衬底（Plastic backing）。NIR-II nanoparticles@mAbs117被固定在结合垫上。将N蛋白捕获抗体(mAbs30)和链霉亲和素分别置于NC膜上的测试线(T线)和控制线(C线)上，T线和C线之间的间隙约为3 mm。样品液被滴加到样品垫上后，在毛细力作用下流向吸收垫。在流动过程中，样品中新冠病毒N蛋白将与结合垫上的nanoparticles@mAbs117形成 nanoparticles@SARS-CoV-2 N蛋白复合物。由于新冠病毒N蛋白与mAbs30之间的抗原抗体相互作用，该复合物在T线上被mAbs30抗体捕获，形成三明治免疫复合物结构。样品中N蛋白越多，在试验线上聚集的夹心免疫复合物越多。随着样品继续流动，生物素标记的nanoparticles@mAbs117被链霉亲和素捕获在C线上。在808 nm激发并在1000 nm长通滤波器滤波后，可使用低成本的InGaAs光电探测器在室温下记录荧光信号。荧光信号与纳米颗粒的数量呈正相关。通过对T线和C线的荧光信号强度积分，建立抗原浓度与荧光强度的对应关系，可以得到定量的样品浓度。基于此原理，建立了一种高灵敏度的SARS-CoV-2抗原横向流动检测方法，可用于SARS-CoV-2抗原的定量早期诊断。优化筛选出NIR-II nanoparticles@mAbs117的抗体载量和免疫测定时间为240 ngmL-1和15min。随后，通过检测不同浓度的新冠病毒重组抗原，评估LFA的灵敏度。随着N蛋白浓度的增加，T/C信号强度相应增加(Figure 3(a))。T/C强度与N蛋白浓度在0.02-120 ngmL-1范围内呈良好的线性关系。在检测阈值附近进行了一系列低浓度实验。通过空白加三倍标准差的平均信号强度计算，LoD降至0.01 ngmL-1(Figure 3(b))。再现性是评价方法有效性的关键因素。在N蛋白浓度为0.5、10和100 ngmL-1时，回收率估计分别为102.6%、98.9%和109.1%(Figure 3(c))。通过检测甲型流感、乙型流感、S蛋白(SARS-CoV-2重组刺突蛋白)和N蛋白，验证了条带的特异性。结果表明，本研究的条带可以特异性识别新冠病毒，并且与其他蛋白没有交叉反应(Figure 3(d))。从低抗原浓度的检测中发现，T线与背景信号区分明显：当抗原浓度降低到0.1 ngmL-1时，SBR高达3.46；当抗原浓度低至0.01 ngmL-1时，SBR仍可达到1.21，但T线看起来比较模糊(Figure 4(a))。与商业胶体金分析试剂盒进行比较，在用相同抗体制备的胶体金检测试剂盒中：当抗原浓度稀释到0.1 ngmL-1时，T线不明显；而0.5 ngmL-1时SBR仅为1.23(Figure 4(b))。另一种商业胶体金型新冠病毒抗原试剂盒，当抗原浓度稀释至0.5 ngmL-1时，T线不清晰。结果提示NIR-II LFA检测新冠病毒抗原的敏感性高于胶体金LFA。为进一步验证NIR-II LFA的有效性，研究采集了30份临床拭子样本，包括18份COVID-19阳性样本和12份COVID-19阴性样本(由深圳疾病预防控制中心PCR证实)。通过比较荧光强度分布曲线可以清楚地区分阳性样品和阴性样品。其中10例抗原浓度较低，范围为0.015 ~ 0.068 ngmL-1(Figure 5(a))。我们测试了相同条件下胶体金检测方法 (WWHS Biotech, Inc.)。18份阳性样本中仅检出8例抗原浓度较高的病例(Figure 5(b))，其余10例抗原浓度较低无法与阴性样品区分。如Figure 5(c)所示，NIR-II LFA优于胶体金LFA，因为它可以减少假阴性样品的数量。需要指出的是，标本保存液和保存时间可能会影响临床标本抗原定量的准确性。目前的结果表明，NIR-II方法在疑似病例或早期感染的情况下可以实现更敏感的COVID-19检测，但仍需要对临床COVID-19样本进行更详细的研究，以供未来应用。参考文献doi.org/10.1007/s12274-022-4351-1⭐️ ⭐️ ⭐️近红外二区小动物活体荧光成像系统 - MARS NIR-II in vivo imaging system高灵敏度 - 采用Princeton Instruments深制冷相机，活体穿透深度高于15mm高分辨率 - 定制高分辨大光圈红外镜头，空间分辨率优于3um荧光寿命 - 分辨率优于 5us高速采集 - 速度优于1000fps （帧每秒）多模态系统 - 可扩展X射线辐照、荧光寿命、一区荧光成像、原位成像光谱，CT等显微镜 - 近红外二区高分辨显微系统，兼容成像型光谱仪 ⭐️ ⭐️ ⭐️ 恒光智影 上海恒光智影医疗科技有限公司，专注于近红外二区成像技术。致力于为生物医学、临床前和临床应用等相关领域的研究提供先进的、一体化的成像解决方案。自主研发近红外二区小动物活体荧光成像系统-MARS。 与基于可见光波长的传统成像技术相比，我们的技术侧重于X射线、紫外、红外、短波红外、太赫兹范围，可为肿瘤学、神经学、心血管、药代动力学等一系列学科的科研人员提供清晰的成像效果，助力科技研发。 同时，恒光智影还具备探针研发能力，我们已经成功研发了超过15种探针，这些探针将广泛地应用于众多生物科技前沿领域的相关研究中。

中国内地分离出首株甲型H1N1流感病毒并完成全基因组序列测定 　　新华网北京5月18日电，从中国疾控中心获悉，根据中国内地确诊的首例输入性甲型H1N1流感病例标本，国家流感中心日前成功分离出中国内地第一株甲型H1N1流感病毒并完成了全基因组序列测定。 　　据介绍，2009年5月10日23时50分，在收到四川省疾病预防控制中心送检的一份采自包某某的咽拭子标本后，国家流感中心迅速对标本进行检测并确定为甲型H1N1流感病毒阳性，这是中国内地确诊的第一例输入性甲型H1N1流感病例。 　　在对这一标本进行核酸检测的同时，国家流感中心采用细胞接种和鸡胚接种两种方法进行了病毒分离工作，通过连续两次接种传代，于5月17日获得中国内地第一株甲型H1N1流感病毒，病毒命名为A/sichuan/1/2009(H1N1)swl，并于5月18日凌晨完成了病毒全基因组的序列测定工作。 　　国家流感中心主任舒跃龙表示，经过序列分析比较，中国内地分离出的第一株甲型H1N1流感病毒与美国、墨西哥分离的甲型H1N1流感病毒高度同源，表明为同一类病毒，并没有发生变异。通过序列的耐药性分析，该毒株对神经氨酸酶抑制剂类药物如达菲敏感。 　　舒跃龙说，中国内地首株甲型H1N1流感病毒的成功分离，为今后中国开展诊断试剂、疫苗、分子流行病学、传播机制等相关工作提供了基础。目前，相关基因组序列信息已经提交全球公共序列数据库Genebank和全球流感自发禽流感共享数据库(GISAID)，可以供全球的科学家用于甲型H1N1流感病毒的分析和监测。

本报北京7月1日电（记者陈磊）今天，科技部在京发布甲型H1N1流感核酸检测试剂统一测试结果。上海科华生物工程股份有限公司等7家单位8种试剂被联防联控工作机制科技组（简称科技组）推荐使用。 　　目前我国已研制出针对甲型H1N1流感特异而且灵敏的快速诊断方法，但检测试剂仅停留在实验室阶段，尚无甲流快速检测试剂产品获得国家批准上市。为尽快筛选或开发出有效的快速检测试剂推荐给相关部门和防控一线应用，加快其产业化进程，受科技组委托，中国药品生物制品检定所（简称中检所）牵头，会同中国疾病预防控制中心病毒所、军事医学科学院五所共同负责快速检测试剂现场测试工作。 　　5月19日，科技组向社会公开征集甲型H1N1流感快速检测试剂。截至5月25日，共征集到甲型H1N1流感快速检测试剂93种，其中核酸类检测试剂68种，抗原类检测试剂25种。 　　“通过专家组初步筛选和参选企业自检，最终确定对盲样自测结果较好的7家单位的8种核酸类检测试剂进入现场统一测评。所有参选试剂分别在中检所、中国疾病预防控制中心和军事医学科学院的4个实验室同时进行，每一种试剂在不同实验室内重复测试两次。”中检所副所长王军志介绍说。 　　6月29日，记者在中检所核酸检测实验室看到，工作人员通过核酸提取、反应液配置等核酸样本前期处理之后，通过传递舱，将样品送到检测房进行扩增检测。实验员把样品放入荧光PCR检测机中，根据软件设置参数，然后进行反应。完成整个测试过程需要2—4个小时。 　　通过两天现场测试，科技组今天公布了测试结果。上海科华生物工程股份有限公司、军事医学科学院放射与辐射医学研究所/上海海泰金芯生物分子检测技术有限公司、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所/北京金豪制药股份有限公司、中山大学达安基因股份有限公司、中国检验检疫科学研究院卫生检疫研究所、中科院北京基因组研究所/上海复星医学科技发展有限公司、上海之江生物科技有限公司榜上有名。 　　核酸检测方法是目前世界上鉴别甲型H1N1流感病毒的主要诊断方法，优点在于能够准确定位。据悉，初筛出来的抗原类检测试剂也将进入现场测试阶段，不日将出结果。 　　卫生部科教司副司长何维认为，一直以来，都是由国家疾控系统负责甲型H1N1流感病毒的检测诊断工作，随着病例数的增加，最终发展方向是让企业参与，促进检测试剂的商业化。 　　“目前生产出检测试剂的单位都要走申报、审批等程序，国家食品药品监督管理局也为此设立了快速审批通道。检测试剂产业化后，有条件的地方医院就可以进行甲流核酸检测，从而加强对疫情的监测。”王军志说。 　　“本次向社会公开征集测试试剂，是动员全国力量、筛选最好的技术和试剂，规范企业和单位的研发行为，并把较好的产品推荐给药审部门，加快审批，促进产业化。”科技部社发司副司长杨哲表示，科技部将以产学研联盟的方式支持我国诊断试剂产业和企业的快速发展。