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次黄嘌呤核苷一磷酸二钠纯

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  • 【讨论】请教:黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase)

    黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD),可选择性催化氧化黄嘌呤和次黄嘌呤生成尿酸。有没有做过该酶传感器和对该酶性质了解的朋友?这种酶传感器似乎比较难做?因为:1. XOD活力小,0.67U/mg。2.检测对象次黄嘌呤在水中溶解度小,一般只能配到10^(-4)M级。所以电流响应始终做不出来。相同的方法换成葡萄糖氧化酶效果要好的多。大家多给意见。

  • 选择合适做嘌呤类碱基的液相色谱柱

    如题,本人想选择一款可以很好分离,成型四种嘌呤的液相色谱柱,分别是鸟嘌呤,腺嘌呤,黄嘌呤,次黄嘌呤,文献中的色谱柱是waters的Atlantic T3 流动相是0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲盐,不含有机相,现在我的疑问是1、waters这款柱子到底适不适合这种纯水相的条件2、waters这款色谱柱有点小贵,有没有其他品牌但是效果差不多的色谱柱呢,当然要是再贵一点,但是比这款柱子更适合的也可以希望懂的人能够给与解答,不胜感激

  • 【分享】一起分享核苷酸

    【分享】一起分享核苷酸

    [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/10/200910241555_177765_1610969_3.jpg[/img][color=#DC143C]核苷酸 [/color]   一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。又称核甙酸。戊糖与有机碱合成核苷,核苷与磷酸合成核苷酸,4种核苷酸组成核酸。核苷酸主要参与构成核酸,许多单核苷酸也具有多种重要的生物学功能,如与能量代谢有关的三磷酸腺苷(ATP)、脱氢辅酶等。某些核苷酸的类似物能干扰核苷酸代谢,可作为抗癌药物。根据糖的不同,核苷酸有核糖核苷酸及脱氧核苷酸两类。根据碱基的不同,又有腺嘌呤核苷酸(腺苷酸,AMP)、鸟嘌呤核苷酸(鸟苷酸,GMP)、胞嘧啶核苷酸(胞苷酸, CMP)、尿嘧啶核苷酸(尿苷酸,UMP)、胸腺嘧啶核苷酸(胸苷酸,TMP)及次黄嘌呤核苷酸(肌苷酸,IMP)等。核苷酸中的磷酸又有一分子、两分子及三分子几种形式。此外,核苷酸分子内部还可脱水缩合成为环核苷酸。   核苷酸是核糖核酸及脱氧核糖核酸的基本组成单位,是体内合成核酸的前身物。核苷酸随着核酸分布于生物体内各器官、组织、细胞的核及胞质中,并作为核酸的组成成分参与生物的遗传、发育、生长等基本生命活动。生物体内还有相当数量以游离形式存在的核苷酸。三磷酸腺苷在细胞能量代谢中起着主要的作用。体内的能量释放及吸收主要是以产生及消耗三磷酸腺苷来体现的。此外,三磷酸尿苷、三磷酸胞苷及三磷酸鸟苷也是有些物质合成代谢中能量的来源。腺苷酸还是某些辅酶,如辅酶Ⅰ、Ⅱ及辅酶A等的组成成分。   在生物体内,核苷酸可由一些简单的化合物合成。这些合成原料有天门冬氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、一碳单位及 CO2等。嘌呤核苷酸在体内分解代谢可产生尿酸,嘧啶核苷酸分解生成CO2、β-丙氨酸及β-氨基异丁酸等。嘌呤核苷酸及嘧啶核苷酸的代谢紊乱可引起临床症状(见嘌呤代谢紊乱、嘧啶代谢紊乱)。   核苷酸类化合物也有作为药物用于临床治疗者,例如肿瘤化学治疗中常用的5-氟尿嘧啶及6-巯基嘌呤等。   有些核苷酸分子中只有一个磷酸基,所以可称为一磷酸核苷(NMP)。5''-核苷酸的磷酸基还可进一步磷酸化生成二磷酸核苷(NDP)及三磷酸核苷(NTP),其中磷酸之间是以高能键相连。脱氧核苷酸的情况也是如此。   体内还有一类环化核苷酸,即单核苷酸中磷酸部分与核糖中第三位和第五位碳原子同时脱水缩合形成一个环状二酯、即3'',5''-环化核苷酸,重要的有3'',5''-环腺苷酸(cAMP)和3'',5''-环鸟苷酸(cGMP)。

  • GB5413.40 核苷酸标准品

    求助:GB5413.40 核苷酸标准品中有5种核苷酸的标准品要购买,不知道应该买哪里的。请教各位,能具体告知下购买的品牌和货号吗?胞嘧啶核苷酸 CMP:标准品,C9H14N3O8P,纯度≥99%次黄嘌呤核苷酸 IMP:标准品,C10H13N4O8P,纯度≥99%鸟嘌呤核苷酸 GMP:标准品,C10H14N5O8P,纯度≥99%尿嘧啶核苷酸 UMP:标准品,C9H13N2O9P,纯度≥99%腺嘌呤核苷酸 AMP:标准品,C10H14N5O7P,纯度≥99%

  • 1.2 反相高效液相色谱法测定乳制品中核苷酸方法的研究

    1.2  反相高效液相色谱法测定乳制品中核苷酸方法的研究

    作者:郝岩平  姜金斗(国家乳制品质量监督检验中心 ,哈尔滨  150086)胡向蔚(中国食品发酵工业研究院 ,北京  100027)摘要:建立了高效液相色谱法测定乳制品中核苷酸含量的方法。采用紫外检测器 ,波长为 2 5 4nm ;色谱柱为迪马钻石C18,柱温为 2 5℃ ,流动相为① 0 0 1mol/LK2 HPO496 0ml+0 1mol/LK2 HPO440mlpH5 ;测定腺嘌呤核苷 (AMP)、鸟嘌呤核苷 (GMP)、次黄嘌呤核苷 (IMP)。②乙腈 :(0 0 1mol/LKH2 PO4+0 0 0 5mol/LK2 HPO4+1mmol/L四丁基溴化氨 ,磷酸调 pH5 0 ) =5 :95 ,测定胞嘧啶核苷 (CMP)、脲嘧啶核苷 (CMP)。流速为 1 0ml/min。五种核苷酸组分。标准曲线相关系数r为CMP 0 986 8;UMP 0 9879;GMP 0 9792 ;IMP 0 9799;AMP0 95 5 3;回收率为 94 6 % ;8次样品重复测定变异系数为 1 79%。谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207161012_377763_1606903_3.jpg

  • 【资料】蛹虫草及其培养基中主要核苷类成分的分析比较

    采用高效液相色谱法测定虫草中的核苷类成分,优化后的色谱条件为YMC-Polyamine 柱(250mm × 4.6mm,5μm);采用梯度洗脱,流动相:乙腈- 水(V/V):0~15min 为90:10,15~20min 为86.5:13.5,20~30min 为75:25,30~35min 为70:30;流速:1mL/min;柱温:30℃;检测波长:259nm;进样量:10μL。结果表明:胸腺嘧啶、虫草素、尿嘧啶、腺苷、腺嘌呤、尿苷、鸟嘌呤、次黄嘌呤均能得到较好分离,该方法稳定性好、精密度高、重现性好,适用于虫草中的核苷类成分的分析。经分析发现,蛹虫草子实体核苷类物质组成大致相似,但含量差异非常显著,同时发现蛹虫草培养基残基及固体发酵产物中虫草素含量较高,其他核苷类成分很少,因此认定蛹虫草培养基残基及固体发酵产物是非常优良的分离纯化虫草素的原料。

  • 【分享】极性化合物分析实例

    很多种类的极性化合物分离条件。􀂗 UDP-葡萄糖􀂗 UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、磷酸半乳糖􀂗 葡萄糖􀂗 蔗糖􀂗 红细胞中的UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、三磷酸腺苷(ATP)􀂗 ADP-葡萄糖、CDP-葡萄糖􀂗 糖核苷酸􀂗 胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤􀂗 三磷酸腺苷(ATP)、一磷酸腺苷(AMP)􀂗 黄嘌呤-磷酸、鸟嘌呤-三磷酸􀂗 体液中的黄嘌呤、尿酸、次黄嘌呤􀂗 色胺、五羟色胺、多巴胺􀂗 L-天冬氨酸、L-精氨酸􀂗 L-精氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸􀂗 谷氨酸、赖氨酸􀂗 亮氨酸、异亮氨酸􀂗 L-甲硫氨酸、L-谷氨酸􀂗 甲基琥珀酸、戊二酸、草酸、肌酸、4-羟脯氨酸、天冬氨酸、鸟氨酸􀂗 叶酸􀂗 抗坏血酸􀂗 胆汁酸􀂗 柠檬酸、马来酸、反式乌头酸􀂗 马来酸、富马酸􀂗 3-羟基肉桂酸􀂗 矮壮素、甲哌啶􀂗 苯海拉明􀂗 4-二甲氨基吡啶􀂗 草甘膦􀂗 三聚氰胺、三聚氰酸􀂗 胍

  • 【资料】极性化合物分析实例

    很多种类的极性化合物分离条件。􀂗 UDP-葡萄糖􀂗 UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、磷酸半乳糖􀂗 葡萄糖􀂗 蔗糖􀂗 红细胞中的UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、三磷酸腺苷(ATP)􀂗 ADP-葡萄糖、CDP-葡萄糖􀂗 糖核苷酸􀂗 胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤􀂗 三磷酸腺苷(ATP)、一磷酸腺苷(AMP)􀂗 黄嘌呤-磷酸、鸟嘌呤-三磷酸􀂗 体液中的黄嘌呤、尿酸、次黄嘌呤􀂗 色胺、五羟色胺、多巴胺􀂗 L-天冬氨酸、L-精氨酸􀂗 L-精氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸􀂗 谷氨酸、赖氨酸􀂗 亮氨酸、异亮氨酸􀂗 L-甲硫氨酸、L-谷氨酸􀂗 甲基琥珀酸、戊二酸、草酸、肌酸、4-羟脯氨酸、天冬氨酸、鸟氨酸􀂗 叶酸􀂗 抗坏血酸􀂗 胆汁酸􀂗 柠檬酸、马来酸、反式乌头酸􀂗 马来酸、富马酸􀂗 3-羟基肉桂酸􀂗 矮壮素、甲哌啶􀂗 苯海拉明􀂗 4-二甲氨基吡啶􀂗 草甘膦􀂗 三聚氰胺、三聚氰酸􀂗 胍

  • GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定

    [align=left][color=black]核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。根据碱基的不同,分别有胞嘧啶核苷酸(CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、尿嘧啶核苷酸(UMP)、[/color]鸟嘌呤核苷酸(GMP)及次黄嘌呤核苷酸(IMP)等。由于核苷酸类化合物的极性较强,在常规反相C18色谱柱上难以保留,通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。[/align][align=left][b]第一部分[color=red]CAPCELL PAK C18 AQ[/color]检测方法[/b][/align][align=left][/align][align=left][b]C[color=black]APCELL PAK C18 AQ[/color][/b][color=black]色谱柱可耐受纯水条件,适用于极性较大物质的高水相条件下的分析,因此也非常适合《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》。[/color][color=black]按照国标方法,对核苷酸标准品以及样品进行分析,可得到良好线性以及定量分析结果;对30个样品进行前处理后进行分析,样品中各核苷酸与其前后杂质分离良好,且不同样品之间各核苷酸的保留时间相一致。[/color][/align][align=left][b][color=red] [/color][/b][/align][align=left][b]《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》方法微调[/b][/align][align=left][img=,600,248]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051502543279_7587_2222981_3.jpg!w813x337.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051503129151_4402_2222981_3.jpg!w776x226.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left] 下表为样品定量浓度结果[/align][align=left][img=,600,126]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051455159701_7741_2222981_3.jpg!w900x190.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,221]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456000129_1190_2222981_3.jpg!w844x311.jpg[/img] 上图为核苷酸样品与标准品的对比谱图[/align][align=left][/align][align=left]基于个别样品分析时遇到的CMP与其前杂质未得到良好分离的情况,通过对洗脱条件进行调整,可实现CMP与其前杂之间的良好分离。[/align][align=left][img=,600,215]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456501881_4082_2222981_3.jpg!w843x303.jpg[/img][img=,600,175]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456507871_7358_2222981_3.jpg!w900x263.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left][b]第二部分[color=red]CAPCELL PAK ADME[/color]色谱柱的分析[/b][/align][align=left][color=black]CAPCELLPAK ADME[/color][color=black]键合了笼状金刚烷基团,兼具高极性和疏水性特点,对高极性化合物有出色的保持和分离效果。[/color]在国标原条件下,不论是标准品还是样品均可使用CAPCELL PAK ADME得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。[/align][align=left]值得注意的是,ADME色谱柱的溶出顺序与常规反相C18色谱柱不尽相同,再次印证了其独特的保留分离模式。对于不局限于C18色谱柱的老师来说,具有独特溶出模式的CAPCELL PAK ADME色谱柱是分析强极性化合物的不二之选。[/align][align=left][img=,500,346]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051457304991_1509_2222981_3.jpg!w758x525.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸标准品的分析结果[/color][/align][align=left][/align][align=left][img=,500,347]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051458490969_9562_2222981_3.jpg!w758x527.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸实际样品的分析结果[/color][/align]

  • GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定

    GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定

    [align=left][/align][align=left][color=black]核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。根据碱基的不同,分别有胞嘧啶核苷酸(CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、尿嘧啶核苷酸(UMP)、[/color]鸟嘌呤核苷酸(GMP)及次黄嘌呤核苷酸(IMP)等。由于核苷酸类化合物的极性较强,在常规反相C18色谱柱上难以保留,通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。[/align][align=left][b]第一部分[color=red]CAPCELL PAK C18 AQ[/color]检测方法[/b][/align][align=left][/align][align=left][b]C[color=black]APCELL PAK C18 AQ[/color][/b][color=black]色谱柱可耐受纯水条件,适用于极性较大物质的高水相条件下的分析,因此也非常适合《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》。[/color][color=black]按照国标方法,对核苷酸标准品以及样品进行分析,可得到良好线性以及定量分析结果;对30个样品进行前处理后进行分析,样品中各核苷酸与其前后杂质分离良好,且不同样品之间各核苷酸的保留时间相一致。[/color][/align][align=left][b][color=red] [/color][/b][/align][align=left][b]《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》方法微调[/b][/align][align=left][img=,600,248]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051502543279_7587_2222981_3.jpg!w813x337.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051503129151_4402_2222981_3.jpg!w776x226.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left]下表为样品定量浓度结果[/align][align=left][img=,600,126]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051455159701_7741_2222981_3.jpg!w900x190.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,221]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456000129_1190_2222981_3.jpg!w844x311.jpg[/img]上图为核苷酸样品与标准品的对比谱图[/align][align=left][/align][align=left]基于个别样品分析时遇到的CMP与其前杂质未得到良好分离的情况,通过对洗脱条件进行调整,可实现CMP与其前杂之间的良好分离。[/align][align=left][img=,600,215]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456501881_4082_2222981_3.jpg!w843x303.jpg[/img][img=,600,175]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456507871_7358_2222981_3.jpg!w900x263.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left][b]第二部分[color=red]CAPCELL PAK ADME[/color]色谱柱的分析[/b][/align][align=left][color=black]CAPCELLPAK ADME[/color][color=black]键合了笼状金刚烷基团,兼具高极性和疏水性特点,对高极性化合物有出色的保持和分离效果。[/color]在国标原条件下,不论是标准品还是样品均可使用CAPCELL PAK ADME得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。[/align][align=left]值得注意的是,ADME色谱柱的溶出顺序与常规反相C18色谱柱不尽相同,再次印证了其独特的保留分离模式。对于不局限于C18色谱柱的老师来说,具有独特溶出模式的CAPCELL PAK ADME色谱柱是分析强极性化合物的不二之选。[/align][align=left][img=,500,346]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051457304991_1509_2222981_3.jpg!w758x525.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸标准品的分析结果[/color][/align][align=left][/align][align=left][img=,500,347]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051458490969_9562_2222981_3.jpg!w758x527.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸实际样品的分析结果[/color][/align][align=left][color=black][/color][/align][align=left][color=black][/color][/align][align=left][/align]

  • 单克隆抗体第一次筛选的方法详解

    [font=宋体]单克隆抗体第一次筛选是制备过程中的关键步骤,涉及抗原特异性、抗体分泌量和细胞生长特性等多方面评估。通过精细操作和科学流程,确保筛选出特性优良的杂交瘤细胞株,为后续研究与应用奠定坚实基础。下面一起来看下[b]单克隆抗体第一次筛选的方法[/b]:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]第一次筛选[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]首先,在已免疫过的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞(即效应[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞)和骨髓瘤细胞进行杂交时,可能出现的情况应该先弄清楚。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果只考虑两两融合,可能的情况有:(效应)[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞和(效应)[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞的融合;(效应)[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合(即杂交瘤细胞);骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合(即瘤瘤细胞)。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]第一类细胞在体外培养的条件下,因为无法无限增殖,最终死亡,因此,筛选的关键是限制第二类细胞的增殖。科学家在设计实验时,已经考虑到这方面问题,所以他们选择的瘤细胞是有遗传缺陷的,即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷([/font][font=Calibri]TK[/font][font=宋体]-)或者次黄嘌呤磷酸核苷转移酶([/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]-)缺陷。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]筛选的目的:获得杂交瘤细胞。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]筛选的方法:[/font] [font=宋体]用选择性培养基来完成,即[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]加入次黄嘌呤([/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体])、氨基喋呤([/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体])及胸腺嘧啶核苷([/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体])的培养基称[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其中,氨基喋呤可阻断[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成的主要途径。主要途径阻断后,依靠应急途径即在[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体](次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)和[/font][font=Calibri]TK[/font][font=宋体](胸苷激酶)作用下,利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体],缺少其中一种,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成不能发生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞,细胞内均无[/font][font=Calibri]TK[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体],所以单个或融合骨髓瘤细胞在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养液中将死亡。[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞虽然有[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]TK[/font][font=宋体],但在体外通常培养条件下,尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]因此,只有杂交瘤细胞才能在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养液中生长繁殖。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]即[/font][font=Calibri]:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①淋巴细胞:不能生长,[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]天死亡;[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的主要合成途径被[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]阻断。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②骨髓瘤细胞:不能生长,[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]天死亡;[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]缺乏,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成的旁路途经受阻。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成杂交瘤细胞,可长期生长繁殖。利用淋巴细胞的[/font][font=Calibri]HGRT[/font][font=宋体]将[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]合成为嘌呤碱并最终与[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]一起合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息,从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]由于通过以上方法选择出杂交瘤细胞,虽然都是杂交瘤细胞,但可能是同一抗原的不同抗原决定簇刺激产生的。所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯,这样得到的是多克隆抗体,所以,需要第二次筛选。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service][b]杂交瘤细胞培养及抗体生产服务[/b][/url],可采用低血清或无血清培养基进行高密度体外培养,降低牛[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]污染,是国内外客户优选的杂交瘤细胞生产抗体方案。详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 没有内标,做单,二,三磷酸的核苷酸分析,可以定量吗?

    目前想用Thermo Fisher的四级杆-静电轨道离子阱质谱做一个药物单,二,三磷酸核苷酸分析。文献报道是用同位素做内标,是他们实验室自己合成的,买不到现成的。用阴离子,MRM模式来做。想问,如果没有内标的话,只有该药物的单,二,三磷酸核苷酸的标准品的话,能够定量吗?第一次发帖求助,先谢谢大家的热心帮助!

  • CAPCELL PAK ADME 对代谢产物分析的有用性~与C18色谱柱溶出行为的比较~

    CAPCELL PAK ADME 对代谢产物分析的有用性~与C18色谱柱溶出行为的比较~

    键和金刚烷基团的ADME色谱柱对于极性化合物能得到良好的保留与分离,对于代谢产物的分析具有优势。如LC Café espresso No.2016005所述,从疏水性及表面极性参数可以对其具有特长的溶出行为进行说明。本次实验以极性化合物别嘌呤醇与黄嘌呤氧化酶反应生成的代谢物别嘌呤二醇,嘌呤体代谢产生的次黄嘌呤、黄嘌呤以及尿酸作为样品(参照图1),分别使用CAPCELL PAK ADME、CAPCELL PAK C18 AQ、CAPCELL PAKC18 MGII以及3种他社杂化型ODS色谱柱(粒径均为5 μm)进行分析,对各色谱柱的溶出行为进行了比较。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607210842_601338_2222981_3.jpg分析所得色谱图见图2。分析所用HPLC条件如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607210842_601339_2222981_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607210842_601340_2222981_3.jpg如图2,各化合物的保留随着各色谱图右侧所示色谱柱表面极性的增加而增强。其中,只有键和金刚烷基团的CAPCELL PAK ADME色谱柱实现了尿酸(峰1)与次黄嘌呤(峰2)间的分离;键和C18基团的色谱柱均无法得到良好分离。进一步,在本次进行比较的色谱柱中,CAPCELL PAK ADME所得理论塔板数(别嘌呤醇:峰5)是最高的,彰显了其对极性化合物优异的分析能力。

  • 【求助】怎么能让保留时间延长点

    请坛子里的大牛们帮我看下有什么办法可以分离的跟好些?最近要检测次黄嘌呤肌苷(IMP)又称肌苷酸,是核苷酸的一种。水溶液稳定,呈中性,在酸性溶液中加热易分解。由于这种物质的极性较大用C18柱分离保留时间很短大约是4.7分钟出峰,不能满足在生物样本中的检测要求,因为生物样本中比如血浆的杂质比较多难以清除。使用的是waters717系列的HPLC C18 4.6×200mm依立特的反向柱(新柱)流动相是采用20mM磷酸缓冲溶液:乙腈:三乙胺(98.5:1:0.5)流速为1.1ml/min柱温:35用甲醇:水=2:8溶解IMP进样量:10微L使用乙腈是因为文献上用了它,柱温,流速也是,而为了修正峰型自己加了三乙胺。还有就是觉得奇怪进生物样本时,目标峰有所延迟大约5.2分钟出来,但是还是不能和前面的后面的峰分开,最好是在6分多钟出峰。谢谢大家~~!希望大家群策群力,多多建议~:)[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/12/200812210003_125453_1844186_3.gif[/img]非常感谢大家的帮忙,保留时间的问题已经解决了~~!:)不过又出现了新的问题~-.-!现在将条件改成:20mM磷酸缓冲液:甲醇:三乙胺(V:V:V)=98.9:1:0.1 pH=2.5现在的目标峰保留时间能调整到8分钟左右了,在标曲中与杂质分离地很好,但是在加入底物孵育的条件后底物峰很大,因为浓度很高了在体系中有1.95mM/L。所以一直造成拖尾严重,基线一直不能下降到0的位置,影响到了目标峰已经试过的条件有:1 将pH调整到2.3,峰型有所改变但是还是不能分开。2 调整三乙胺的浓度,0.5完全分不开,0.05没有太大的改善。3 这个浓度是文献中做过酶动力学实验的,如果降低底物浓度,要求再做酶动力学验证比较复杂,是费力不讨好的事情。希望大家再次伸出援手呀~~能早日解决这个难题,回家过年!~谢谢~! 将最近的图片上传,大家帮忙看看吧,谢谢~!甲醇的浓度越大不是洗脱能力更强了么,应该更加分不开了吧~梯度洗脱没有条件啊~~泪奔~[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/01/200901162144_129421_1844186_3.gif[/img]

  • 磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的纯化方法

    最近参照欧洲药典标准在做药物稳定性试验,需要用到磷酸氢二钠和磷酸二氢钾做缓冲溶液,但是走空白的时候就出了很多色谱峰,最后确定是缓冲盐的问题。采用重结晶、固相萃取等方法只能去除部分。后来买了色谱纯(国内生产)的试剂也不行,怎么办呀?欧洲药典里做结果就没有这个问题,大家遇到过这类情况吗?都是怎么解决的?

  • 【分享】PCR和RT-PCR基础大全(三)

    【分享】PCR和RT-PCR基础大全(三)

    PCR和RT-PCR 兰州大学 王映珍第五章 增加PCR特异性引物设计 细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点: * 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长,保证序列独特性,并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交,降低了特异性,而且比短序列杂交慢,从而降低了产量。 * 选择GC含量为40%到60%或GC含量反映模板GC含量的引物。 * 设计5'端和中间区为G或C的引物。这会增加引物的稳定性和引物同目的序列杂交的稳定性。 * 避免引物对3'末端存在互补序列,这会形成引物二聚体,抑制扩增。 * 避免3'末端富含GC。设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T。 * 避免3'末端的错误配对。3'端核苷需要同模板退火以供聚合酶催化延伸。 * 避免存在可能会产生内部二级结构的序列,这会破坏引物退火稳定性。 目的序列上并不存在的附加序列,如限制位点和启动子序列,可以加入到引物5'端而不影响特异性。当计算引物Tm值时并不包括这些序列,但是应该对其进行互补性和内部二级结构的检测。 有时候,仅有有限的序列信箱可供用于引物设计。比如,如果仅知道氨基酸序列,可以设计简并引物。简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性,可以参考密码子使用表,根据不同生物的碱基使用偏好,减少简并性。次黄嘌呤可以同所有的碱基配对,降低引物的退火温度。不要在引物的3'端使用简并碱基,因为3'端最后3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR。使用较高的引物浓度(1μM到3μM),因为许多简并混合物中的引物不是特异性针对目的模板。 引物退火温度 引物的另一个重要参数是熔解温度(Tm)。这是当[/

  • 【原创大赛】三磷酸腺苷二钠注射液含量方法学研究

    【原创大赛】三磷酸腺苷二钠注射液含量方法学研究

    三磷酸腺苷二钠注射液含量方法学研究 三磷酸腺苷二钠的重量比 照高效液相色谱法(中国药典2010年版附录V D)测定。1.色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基键合硅胶为填充剂;以0.2mol/L磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠35.8g,磷酸二氢钾13.6g,加水900ml溶解,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0,加入四丁基溴化铵1.61g,加水至1000ml,摇匀)-甲醇(95:5)为流动相;柱温为35℃;检测波长为259nm;理论板数按三磷酸腺苷二钠峰计算应大于1500;各色谱峰的分离度应符合规定。出峰次序依次为一磷酸腺苷钠、二磷酸腺苷二钠与三磷酸腺苷二钠。测定法 取精密量取A液适量,用流动相制成每1ml中含0.2mg的溶液;取20ml注入高效液相色谱仪,记录色谱图,按下式计算: http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212272334_416487_2583865_3.jpg2. 测定三磷酸腺苷二钠的重量比溶液稳定性试验将供试品溶液在室温放置8小时,记录液相色谱图峰面积,结果见表1。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212272335_416489_2583865_3.jpg验结果表明:本品溶液在8小时内测定稳定。3. 测定三磷酸腺苷二钠的重量比溶液重复性试验取供试品溶液连续进样6针,结果见表2。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212272336_416490_2583865_3.jpg试验结果表明:本品重复性良好。4. 测定三磷酸腺苷二钠的重量比溶液精密度试验精密量取040413批A液6份,用流动相制成每1ml中含0.2mg的溶液,分别测定重量比,结果见表3。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212272336_416491_2583865_3.jpg试验证明,本方法测定三磷酸腺苷二钠重量比的精密度良好。5. 回收率试验精密称取三磷酸腺苷二钠约0.4g、0.5g、0.6g各三份,分别置10ml量瓶中,分别加入处方量的辅料空白溶液,超声助溶后,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,量取续滤液1.0ml,加0.1mol/L磷酸盐缓冲液制成每1ml中含20μg的溶液,照分光光度法测定259nm波长处的吸收度,计算出总核苷酸。另取续滤液1.0ml,用流动相制成每1ml中含0.2mg的溶液,摇匀,精密量取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,计算三磷酸腺苷二钠重量比。含量按下式计算。测定结果见表4。三磷酸腺苷二钠含量(%)=总核苷酸×三磷酸腺苷二钠重量比 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212272337_416492_2583865_3.jpg平均回收率为99.84%;RSD为0.17%结论:由以上结果知,本品含量测定方法准确度较高。6. 含量测定取本品A液1.0ml,加0.1mol/L磷酸盐缓冲液制成每1ml中含20μg的溶液,照分光光度法测定259nm波长处的吸收度,计算出总核苷酸。另取本品A液1.0ml,用流动相稀释制成1ml中约含0.2mg的溶液,取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,计算三磷酸腺苷二钠重量比。按下式计算三磷酸腺苷二钠含量,结果见表5。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212272338_416494_2583865_3.jpg 计算公式:三磷酸腺苷二钠含量(%)=总核苷酸×三磷酸腺苷二钠重量比。

  • 坛墨质检-国家标准物质目录(251)

    国内最大最专业的国家标准物质服务平台坛墨质检-国家标准物质中心(北京坛墨质检科技有限公司),是国家质检总局指定的国家标准物质研制单位,是国内最大最专业的食品、环境、职业卫生标准物质生产商和服务商。 产品编号 产品名称 标准值 BW4092 苯甲醇标准品,有证书 99.90% BW4087 吡哆胺标准品,有证书 ≥98% BW4086 盐酸吡哆醛标准品,有证书 ≥98% BW4085 乙基麦芽酚标准品,有证书 99.80% BW4084 三氮唑嘧啶酮标准品-催吐剂,有证书 ≥98% BW4083 D-果糖标准品,有证书 99.50% BW4082 三聚氰胺标准品,有证书 98.50% BW4076 1,4-苯醌标准品,有证书-(对苯醌) ≥98% BW4075 维生素E标准品,有证书-(α-生育酚) 98.00% BW4074 双氰胺标准品,有证书 98.50% BW4073 维生素K3标准品,有证书 99.60% BW4072 靛蓝标准品(脂溶性、染料分析用),有证书 95.00% BW4071-1g 胆固醇标准品,有证书 98.50% BW4071 胆固醇标准品,有证书 98.50% BW4070 L-色氨酸标准品,有证书 99.30% BW4069 托品酸标准品,有证书 ≥98% BW4068 丙酸钠标准品,有证书 99.00% BW4067 脱氢醋酸钠标准品,有证书-脱氢乙酸(钠盐) 99.40% BW4066 鸟嘌呤核苷标准品,有证书-(鸟甙) 98.00% BW4065 次黄嘌呤核苷标准品,有证书-(肌酐) 98.00% BW4064 D-水苏糖标准品,有证书 76% BW4063 乙基香兰素标准品,有证书 99.90% BW4062-2 低聚果糖标准品套装(蔗果三糖,蔗果四糖,蔗果五糖),有证书 ≥98% BW4062-1 低聚果糖标准品套装(蔗果三糖,蔗果四糖,蔗果五糖),有证书 ≥98% BW4062 低聚果糖标准品套装(蔗果三糖,蔗果四糖,蔗果五糖),有证书 99% 坛墨质检现有员工79[color=#33

  • 【分享】增加PCR特异性

    1、引物设计 细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点:1.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长,保证序列独特性,并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交,降低了特异性,而且比短序列杂交慢,从而降低了产量。2.选择GC含量为40%到60%或GC含量映像模板GC含量的引物。3.设计5'端和中间区为G或C的引物。这会增加引物的稳定性和引物同目的序列杂交的稳定性。4.避免引物对3'末端存在互补序列,这会形成引物二聚体,抑制扩增。5.避免3'末端富含GC。设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T。6.避免3'末端的错误配对。3'端核苷需要同模板退火以供聚合酶催化延伸。7.避免存在可能会产生内部二级结构的序列,这会破坏引物退火稳定性。目的序列上并不存在的附加序列,如限制位点和启动子序列,可以加入到引物5'端而不影响特异性。当计算引物Tm值时并不包括这些序列,但是应该对其进行互补性和内部二级结构的检测。有时候,对于引物设计仅了解有限的序列信息。比如,如果仅知道氨基酸序列,可以设计兼并引物。兼并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性,可以参考密码子使用表,根据不同生物的碱基使用偏好,减少兼并性。次黄嘌呤可以同所有的碱基配对,降低引物的退火温度。不要在引物的3'端使用兼并碱基,因为3'端最后3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR。使用较高的引物浓度(1μM到3μM),因为许多兼并混合物中的引物不是特异性针对目的模板。

  • 核苷类成分对ph敏感度很高吗?

    核苷类成分含量测定,有鸟苷、尿苷、腺苷,10mmol/L磷酸二氢钠(1%磷酸调pH 2.6-2.7):甲醇(97:3);C18柱,检测波长254nm,25℃柱温当时我把ph调到2.60,样品中(板蓝根注射液)三种核苷类均能很好的分开;今天ph2.61,结果腺苷和鸟苷的保留时间均延长了3min左右,而且样品图谱中鸟苷的峰与其它峰合并在一起了。想来想去其它的条件都是一样的,唯独pH不同,是不是核苷类真的对ph敏感?

  • 【讨论】双波长法测定呈味核苷二钠的含量

    取0.400g样品于250mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。吸取5.0mL溶液于另一容量瓶中,用0.01mol/LHcl溶液定容至刻度,用石英比色皿,0.01mol/LHcl溶液做空白,在250 nm,280nm处分别测其吸光度。我测定的吸光度很不稳定,变化比较大。有没有检测呈味核苷二钠的含量(包括IMP含量、GMP含量)的同行,我们讨论一下体会?

  • 坛墨质检-国家标准物质目录(501)

    国内最大最专业的国家标准物质服务平台坛墨质检-国家标准物质中心(北京坛墨质检科技有限公司),是国家质检总局指定的国家标准物质研制单位,是国内最大最专业的食品、环境、职业卫生标准物质生产商和服务商。 产品编号 产品名称 纯度 BW4054低聚果糖-蔗果三糖标准品,有证书99.90%BW4055低聚果糖-蔗果四糖标准品,有证书99.20%BW4056低聚果糖-蔗果五糖标准品,有证书94.80%BW4057水杨酸钠标准品,有证书99.30%BW4058L-谷氨酸标准品,有证书99.90%BW4059D-棉籽糖标准品,有证书98.00%BW4060L-天门冬氨酸标准品,有证书99.60%BW4061维生素E醋酸酯标准品,有证书99.90%BW4062低聚果糖标准品套装(蔗果三糖,蔗果四糖,蔗果五糖),有证书见证书BW4062-1低聚果糖标准品套装(蔗果三糖,蔗果四糖,蔗果五糖),有证书见证书BW4062-2低聚果糖标准品套装(蔗果三糖,蔗果四糖,蔗果五糖),有证书见证书BW4063乙基香兰素标准品,有证书99.90%BW4064D-水苏糖标准品,有证书76%BW4065次黄嘌呤核苷标准品,有证书-(肌酐)98.00%BW4066鸟嘌呤核苷标准品,有证书-(鸟甙)见证书BW4067脱氢醋酸钠标准品,有证书-脱氢乙酸(钠盐)99.40%BW4068丙酸钠标准品,有证书见证书BW4069托品酸标准品,有证书见证书BW4070L-色氨酸标准品,有证书99.30%BW4071胆固醇标准品,有证书98.50%BW4071-1g胆固醇标准品,有证书98.50%BW4072靛蓝标准品(脂溶性、染料分析用),有证书95.00%BW4073维生素K3标准品,有证书99.60%BW4074双氰胺标准品,有证书98.50%BW4075维生素E标准品,有证书-(α-生育酚)98.00% 坛墨质检现有员工79人,办公室面积450平米,实验室1650平米;销售、客服、财务及行政人员35人,实验室工作人员21人,库房14人,市场部8人。实验仪器设备:气相色谱、液相色谱、气质联用、液质联用、离子色谱、紫外分光光度计,原子吸收、ICP-OES和ICP-MS;库房面积450平米,库房工作人员12人,现货产品5万个,坛墨质检自主研发的产品近3000个,已申报国标345项,填补国内空白的产品达到65项。坛墨质检是国内唯一提供标准溶液定制服务的标准物质研制单位,定制范围:特殊浓度定制、特殊溶剂定制、混标定制。

  • 【每日一贴】磷酸氢二钠

    【每日一贴】磷酸氢二钠

    【中文名称】磷酸氢二钠【英文名称】sodium hydrogen phosphate;disodium monohydricphosphate【结构或分子式】 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/05/201205072109_365442_1855403_3.jpg【相对分子量或原子量】358.14【密度】1.52【熔点(℃)】34.6【折射率】1.432(20℃)【性状】 无色透明单斜晶系棱形晶体。【溶解情况】 溶于水,不溶于乙醇。【用途】 用作织物、木材和纸张的防火剂,釉药,焊药,并用于电镀等。可在食品工业中用作品质改良剂,作青霉素、链霉素的培养基、生产焙粉以及用作饲料添加剂。【制备或来源】 由碳酸钠和磷酸作用而制得。【其他】 在空气中迅速风化,在100℃失去结晶水而成无水物。在250℃分解成焦磷酸钠。在高于30℃的温度下由水溶液中结晶为7水物。【生产单位】 略

  • 求助:核苷酸盐中偏磷酸的检测

    [font=&]求助:[/font][font=&] 1. 需要分析一种有机盐(核苷酸钠盐)中的偏磷酸类的含量,应该用什么方法较合适?[/font][font=&] 2.偏磷酸无紫外吸收,本人没有用过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url](电导检测器),哪位高兄建议一下[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法对此分析的前景![/font]

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