卡维地洛系统适用性对照品

[img=,480,596]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/09/201809260906045200_3378_2449119_3.png!w480x596.jpg[/img]请教各位同仁： 上述是盐酸雷尼替丁含量测定方法，其中划红线的是系统试液。可见系统适用性试液是用氢氧化钠进行破坏的溶液，因该物质极易被氢氧化钠破坏，故在进样5针后，其重复性不满足要求。故在进样过程中，只测试一针。 [b] 疑问：[/b]1.测试一针是合理的，但是否还要用对照品溶液连续测试5针来验证系统适用性？2.盐酸雷尼替丁的有关物质方法同含量测定，采用的是自身对照法，请问测试有关物质与含量不是同一天，请问有关物质方法中系统适用性试验如何测试？是继续用破坏性试液测试1针，还是用什么测试5针？目前有没有对有关物质方法中系统适用性试验测试要求？3.请问有关物质测试中，是对照溶液和供试品溶液各进1针，各配1个样？还是双样双针？单样双针？希望有比较权威的解答！感谢各位

http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203081038_353205_1638724_3.jpg上文中的阿莫西林系统适用性对照品就是含量测定用的对照品吗？

2010 版中国药典 VIII R 规定TOC分析仪是要定期进行系统适用性测试，GE为客户提供即开即用的液体系统适用性标准品，省心省力。8月15日-9月15日，GE携全国代理商惠馈客户，优惠活动如下:如果了解更多有关TOC的系统适用性测试知识，可以点击此处http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208221014_385307_2359237_3.jpg

[align=center][b]xxxx胶囊微生物限度方法适用性试验[/b][/align] 根据中国药典2015年版要求，为保证该分析方法有效性，确保检验结果的准确性和可靠性，对xxxx囊检查的方法适用性试验进行了考察，现将测定结果报告如下：[b]1. 供试品：xxxx胶囊三批[/b]批号：20151001 20151002 20151003[b]2. 培养基：[/b]胰酪大豆胨液体培养基（150629） 胰酪大豆胨琼脂培养基（150611） 沙氏葡萄糖液体培养基（150821） 沙氏葡萄糖琼脂培养基（150827） PH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲溶液（140725） 麦康凯液体培养基（150911） 麦康凯琼脂培养基（150907） 胰酪大豆胨肉汤对照培养基（135026-201401） 胰酪大豆胨琼脂对照培养基(135025-201402) 麦康凯琼脂对照培养基（135009-201102） 沙氏葡萄糖肉汤对照培养基（1305008-201102）沙氏葡萄糖琼脂对照培养基（135013-201001）麦康凯液体对照培养基（135030-201501） 以上培养基均由中国食品药品检定研究院提供。[b]3. 菌种：[/b]菌落计数用菌用：金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌黑曲霉 铜绿假单胞菌控制菌检查用菌种：大肠埃希菌 以上菌种均由中国食品药品检定研究院提供。[b]4. 所用仪器：[/b]双人单面垂直净化工作台BJ-2CD型 编号ZB-HY-174（上海博迅实业有限公司）净化工作台 SB-JC-IA型 编号ZB-HY-023（上海博迅实业有限公司）生化培养箱 SPX-250B-Z型 编号 ZB-HY-080（上海博迅实业有限公司）生化培养箱 SPX-250B-Z型 编号 ZB-HY-081（上海博迅实业有限公司）生化培养箱 SPX-250B-Z型 编号 ZB-HY-172（上海博迅实业有限公司）生化培养箱 SPX-250B-Z型 编号 ZB-HY-173（上海博迅实业有限公司）调速多用振荡器 HY-4型 编号ZB-HY-087（金坛市岸头国瑞实验仪器厂）立式压力蒸汽灭菌器 YXQ-LS-100A型 编号ZB-HY-175（上海博迅实业有限公司）手提式电热灭菌锅 YX280B型 编号ZB-HY-003（上海三申医疗器械有限公司）[b]5.环境要求[/b]：微生物限度室在C级条件下的A级环境进行，试验环境达到无菌检查的要求，检验全过程严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。[b]6. 微生物计数[/b]按照中国药典2015年版微生物限度检查法进行微生物计数的方法适用性试验及菌落计数。6.1 菌液制备（1）接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，30~35℃培养18~24小时，取此培养液1ml加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10[sup]-5[/sup]~10[sup]-7[/sup]，使菌数不大于100cfu/ml，见表1。（2）接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml沙氏葡萄糖液体培养基中，20~25℃培养2~3天，取此培养液1ml加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10[sup]-4[/sup]~10[sup]-6[/sup]，使菌数不大于100cfu/ml，见表1。（3）接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面培养基上，20~25℃培养5~7天，使大量的孢子成熟，加入3~5ml 含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，振摇或用接种针将孢子洗脱。然后，用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。[img=,600,244]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311814113392_7928_2204446_3.png!w600x244.jpg[/img][b]6.2 培养基的适用性检查[/b]6.2.1胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基 分别取不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，注入无菌平皿中，立即倾入胰酪大豆胨琼脂培养基；30~35℃培养不超过三天。分别取不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉，注入无菌平皿中，立即倾入沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌制备2个平皿，混匀，凝固，20~25℃培养不超过五天，计数。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果见表2。[img=,583,548]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311814344516_9988_2204446_3.png!w583x548.jpg[/img]结论：被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值均在0.5-2范围内，该培养基的适用性检查符合规定。6.2.2胰酪大豆胨液体培养基 将不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌接种至胰酪大豆胨液体培养基试管中，30~35℃培养不超过三天。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果见表3。[img=,628,219]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311814563036_8094_2204446_3.png!w628x219.jpg[/img]结论：被检培养基管与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长良好，该培养基的适用性符合规定。6.2.3麦康凯液体培养基6.2.3.1 麦康凯液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于麦康凯液体培养基和麦康凯液体对照培养基试管中，在42~44℃培养24~48小时，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长良好，结果见表4。6.2.3.2 麦康凯液体培养基抑制能力检查分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌于麦康凯液体培养基和麦康凯液体对照培养基试管中，在42~44℃培养24~48小时，被检培养基管内试验菌未生长，结果见表4。6.2.4麦康凯琼脂培养基6.2.4.1 麦康凯琼脂培养基促生长能力检查 取大肠埃希菌0.1 ml涂布于麦康凯琼脂培养基和麦康凯琼脂对照培养基上，在30~35℃培养18~72小时，被检培养基上大肠埃希菌的菌落大小、形态特征、与对照培养基一致，结果见表4。6.2.4.2麦康凯琼脂培养基指示特性检查 取大肠埃希菌0.1 ml涂布于麦康凯琼脂培养基和麦康凯琼脂对照培养基上，在30~35℃培养18~72小时，被检培养基上大肠埃希菌的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等与对照培养基一致，结果见表4[img=,610,225]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311815494696_355_2204446_3.png!w610x225.jpg[/img]结论：被检培养基上的生长显示与对照培养基一致，该培养基的适用性符合规定。6.2.5沙氏葡萄糖液体培养基6.2.5.1沙氏葡萄糖液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的白色念珠菌于沙氏葡萄糖液体培养基和沙氏葡萄糖肉汤对照培养基试管中，在20~25℃培养2~3天，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长良好，结果见表5。[img=,635,136]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311817326133_7606_2204446_3.png!w635x136.jpg[/img]结论：被检培养基上的生长显示与对照培养基一致，该培养基的适用性符合规定。6.3 供试液制备：取供试品10g，加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（≤45℃）至100ml，振摇溶解使成1:10的供试液。6.4 试验方法（1）菌液对照组：取1ml菌液加入稀释液至100ml，另取1ml注入培养基，培养。采用平皿计数法。（2）供试品对照组：取1ml供试液，注入培养基，培养。采用平皿计数法。（3）试验组：将1ml菌液加入至制备好的供试液中，另取1ml注入培养基，培养。采用平皿计数法。进行了3次独立的平行试验，并分别计算试验组菌落数减去供试品对照组菌落数与菌液对照组菌落数的比值。测定结果见表9。6.5 测定结果按照中国药典2015年版微生物限度方法适用性试验，该供试品对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收试验中，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数与菌液对照组菌落数的比值均在0.5~2范围内。采用平皿法可进行本品的微生物检查。[b]7. 大肠埃希菌[/b]按照中国药典2015年版微生物限度检查法进行控制菌的检查方法适用性试验及检查。7.1 菌液制备：接种大肠埃希菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，30~35℃培养18~24小时，取此培养液1ml加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10[sup]-5[/sup]~10[sup]-7[/sup]，使菌数不大于100cfu/ml。7.2.2供试液的制备：取供试品10g，加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（≤45℃）至100ml，药物摇匀溶解使成1:10的供试液。7.2.3试验方法（1）试验组分别取供试液10ml，加到胰酪大豆胨液体培养基100ml中，重复两份，其是一份作为供试品组，另一份再加入大肠埃希菌不大于100cfu作为试验组；另取大肠埃希菌不大于100cfu，加到胰酪大豆胨液体培养基100ml中（不加供试液）作阳性对照，30~35℃培养18~24小时。取上述培养物1ml接种至麦康凯液体培养基中，42~44℃培养24~48小时，取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基上，置30~35℃培养18~72小时，观察结果，见表7。（2）阴性对照组取胰酪大豆胨液体培养基100ml，加入PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml作为阴性对照，30~35℃培养18~24小时，取上述培养物1ml接种至麦康凯液体培养基中，42~44℃培养24~48小时，取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基上，置30~35℃培养18~72小时，观察结果，见表6。[img=,596,265]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311820557634_9209_2204446_3.png!w596x265.jpg[/img]由表6可见，试验组可检出大肠埃希菌，阴性菌对照组未检出，本法适用于本品的控制菌检查。[b]8. 结论[/b]根据上述试验结果，本品的微生物检查可采用平皿法，控制菌检查采用常规法测定即可。三批样品测定：8.1 取供试品10g，加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml使成1:10的溶液，稀释成1:10[sup]1[/sup]，1:10[sup]2[/sup]，1:10[sup]3[/sup]稀释级。取各稀释级供试液1ml，置直径为90mm的无菌平皿中，然后注入15~20ml温度不超过45℃的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每培养基各制备2个平板，平板计数。阴性对照试验：另取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，取1ml，置无菌平皿中，注入上述两种培养基中，混匀，凝固，倒置培养。每种培养基各制备2个平板。样品测定结果见表8。8.2大肠埃希菌测定取供试品10g，加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（≤45℃）至100ml，振摇溶解使成1:10的供试液。（1）样品测定：取样品的供试液10ml，加到100ml胰酪大豆胨液体培养基中培养18~24小时。（2）阳性对照试验：取样品的供试液10ml，取大肠埃希菌10[sup]-6[/sup]稀释液1ml，加入100ml胰酪大豆胨液体培养18~24小时。（3）阴性对照试验：取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中，经培养18~24小时。取上述培养物1ml接种至麦康凯液体培养基中，42~44℃培养24~48小时，取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基上，置30~35℃培养18~72小时，观察结果，见表7。[img=,595,566]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311823378838_9210_2204446_3.png!w595x566.jpg[/img][align=left][img=,611,235]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311824514031_6226_2204446_3.png!w611x235.jpg[/img] [/align][align=left]不同试验菌回收率测定结果如下：[/align][align=left][img=,690,416]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311827356326_5887_2204446_3.png!w690x416.jpg[/img][img=,690,251]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810311827558476_8031_2204446_3.png!w690x251.jpg[/img][/align][align=left][b]总结：[/b][/align][align=left] 通过对不同培养基的适用性实验分析，本品的微生物检查可采用平皿法，控制菌检查采用常规法测定，就可以满足该产品出厂检验需求。[/align]

[color=#444444]一、[/color][b][color=#444444]以下内容为[/color][color=#444444]FDA发给中国某机构的警告信中摘抄片段。[/color][color=#444444] [/color][/b][color=#444444]You failed to routinely establish system suitabilitywhen testing samples for OSCS.[/color][color=#444444]你们在检测样品的OSCS项目时，日常检测未运行系统适用性。[/color][color=#444444]Furthermore, on December 26, 2014, you conducted asystem suitability test that failed. You did not investigate why your equipmentfailed system suitability for detection of OSCS, or determine the reliabilityof other OSCS tests conducted prior to the date of the system suitabilityfailure.[/color][color=#444444]另外，2014年12月26日，你们运行了系统适用性，但系统适用性失败。你们未调查为什么仪器的OSCS检测用系统适用性会失败，也没有确定该系统适用性失败之前其它OSCS检测结果是否可靠。[/color][color=#444444]System suitability testing determines whetherrequirements for precision are satisfied and ensures the NMR spectrometer isfit for the intended testing before analyzing samples. It is critical that yoursystem be demonstrated as suitable for detecting OSCS contamination in heparinto avoid the possibility of samples erroneously passing when an instrument isnot working properly.[/color][color=#444444]系统适用性检测决定了精密度是否满足要求，在开始样品分析之前确保NMR仪器适合既定检测。证明系统适合于检出肝素中的OSCS污染，避免仪器不正常工作时使得样品错误地通过检测是非常重要的。[/color][color=#444444][/color][b][color=#3e3e3e]二、从[/color][color=#444444]美国[/color][color=#444444]FDA警告信[/color][color=#3e3e3e]中获得的信息[/color][color=#3e3e3e]（个人理解）[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]1、[/color][/b][color=#444444]You failed to routinely establish system suitabilitywhen testing samples for OSCS.[/color][color=#444444]你们在检测样品的OSCS项目时，日常检测未运行系统适用性。[/color][b][color=#3e3e3e]理解：系统适用性需要日常中进行[/color][color=#3e3e3e]而不仅仅是在方法验证中进行，即在使用中进行[/color][color=#3e3e3e]。[/color][color=#3e3e3e]2、[/color][/b][color=#444444]Furthermore, on December 26, 2014, you conducted asystem suitability test that failed. You did not investigate why your equipmentfailed system suitability for detection of OSCS, or determine the reliabilityof other OSCS tests conducted prior to the date of the system suitabilityfailure.[/color][color=#444444]另外，2014年12月26日，你们运行了系统适用性，但系统适用性失败。你们未调查为什么仪器的OSCS检测用系统适用性会失败，也没有确定该系统适用性失败之前其它OSCS检测结果是否可靠。[/color][b][color=#444444]理解：一旦系统适用性失败，需要对失败前的结果进行追溯。[/color][/b]3、[color=#444444]System suitability testing determines whetherrequirements for precision are satisfied and ensures the NMR spectrometer isfit for the intended testing before analyzing samples. It is critical that yoursystem be demonstrated as suitable for detecting OSCS contamination in heparinto avoid the possibility of samples erroneously passing when an instrument isnot working properly.[/color][color=#444444]系统适用性检测决定了精密度是否满足要求，在开始样品分析之前确保NMR仪器适合既定检测。证明系统适合于检出肝素中的OSCS污染，避免仪器不正常工作时使得样品错误地通过检测是非常重要的。[/color][b]理解：系统适用性不仅仅针对色谱系统，NMR（核磁共振）也需要做系统适用性检查。[/b][color=#3e3e3e]三、什么是系统适用性[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#444444]1、国外关于系统适用性的定义[/color][color=#444444]2015[/color][color=#444444]年[/color][color=#444444]7月 FDA 发布了"analytical procedures and methods validation for drugs and biologics"[/color][color=#444444]《FDA分析方法验证指南》，其中[/color][color=#444444]“[/color][color=#444444]2.8 [/color][color=#444444]款[/color][color=#444444] [/color][color=#444444]系统适应性[/color][color=#444444]：[/color][color=#444444]对测试程序和参数进行确证以保证系统（仪器、数据工作站和分析操作要点和分析的控制点）能在使用时作为一个整体正确运行。适用于对照控制和样品的系统适用性的可接受标准，如拖尾因子、精密度和分辨率可接受标准，在适当时可以进行要求。色谱系统的系统适用性，参见FDA行业指南《色谱方法的验证》和USP通论色谱[/color][color=#444444]附件[/color][color=#444444]《色谱方法的验证》[/color][color=#444444]https://wenku.baidu.com/view/3f634e115f0e7cd18425367d.html?re=view[/color][color=#444444]2、国内关于系统适用性的定义[/color][color=#444444]GB/T 32467-2015中9.6款 明确了分析系统以及分析系统适应性的概念[/color][img=,690,108]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708112027_01_3243837_3.jpg[/img]附件：[color=#444444]GB/T 32467-2015 [/color][url=http://www.doc88.com/p-2562805803443.html]www.doc88.com/p-2562805803443.html[/url]四、为什么国内的检测实验室很容易忽略系统适用性国内的实验室认证认可主要为CNAS认可，CMA计量认证，以及一些行业认真如农业的CATL等，而相关的评审准则例如CNAS-CL01、《检验检测机构资质认定评审准则》、《食品检验机构资质认定条件》、《农产品质量安全检查机构考核评审细则》等均未对系统适应性做出明确要求，这就导致经过相关部门行政许可的检验检测实验室很容易忽略系统适用性，甚至没有什么概念。五、国内是否有相关标准或者文件对系统适用性做出明确要求呢？GB/T 32465-2015中明确了在方法验证和确认以及日常检测时要进行系统适用性的内容附件：[color=#444444]GB/T 32465-2015 [url]http://www.doc88.com/p-6764562110886.html[/url][/color][color=#444444][/color][b][color=#3e3e3e]六、那么[/color][color=#3e3e3e]如何进行[/color][color=#3e3e3e]系统适用性[/color][color=#3e3e3e]核查[/color][color=#3e3e3e][/color][/b]GB/T 32465-2015 中9.6.1明确了核查的一般原则[b][color=#3e3e3e][img=,750,399]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2017081120583719_01_3243837_3.jpg[/img][/color][color=#3e3e3e]GB/T 32465-2015中9.6.3明确了系统适用性核查的频率[/color][color=#3e3e3e]GB/T 32465-2015中9.6.4明确了系统适用性核查的工具[/color][color=#3e3e3e]（内容比较多请自行查看标准）[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]七、我们在日常检验检测过程中应如何去做[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]1、在方法使用前的确认或证实过程要明确构成系统的要素，并给出相关的技术参数指标，该指标要被证明能够满足相关要求给出准确检测结果。[/color][color=#3e3e3e]2、编制SOP时将这些指标在SOP中明确，并且要给出详尽具体操作方式。[/color][color=#3e3e3e]3、日常检测过程中要按照SOP进行系统适用性检查，通常使用质控样品。[/color][color=#3e3e3e]4、这些质控样品通常是自己进行的质控，绘制质控图用以对整个系统进行控制，参考GB/T 27407和GB/T 32464[/color][color=#3e3e3e]5、除了日常质控外还可以集合实验室比对、能力验证等手段进行系统适用性核查。[/color][color=#3e3e3e]6、同时应给出不系统的确定度（一般在方法确认或证实阶段进行，后期也需要定期进行），将不确定度结合到质控图中。[/color][color=#3e3e3e][/color][color=#3e3e3e]个人感觉第1、2、3、4款是必须进行的，5，6款可以根据自身条件进行。[/color][/b][color=#3e3e3e][/color][b][color=#3e3e3e]八、结论以及系统适用性[/color][color=#3e3e3e]核查的必要性[/color][/b]总而言之，[color=#444444]在每次日常检测前，进行系统适用性检查，看似比较繁琐，但是从法律举证角度上来说，系统适用性检查十分必要[/color][color=#444444]目前很多检测报告都涉及到食品安全、政府的监督抽检、企业委托，在涉及的不合格样品后续处理过程中需要举证。不做系统适用性检[/color][color=#444444]查[/color][color=#444444]，严格来说不能够作为法庭相关证据，你在检测样品时，不能证明你的整个检测系统[/color][color=#444444]在检测时[/color][color=#444444]是可靠的，被告方完全可以以此为突破点对数据进行推翻。建议大家仔细阅读GB/T 32465-2015，来运用有依有据的手段，规避日常检测过程中的风险。[/color][color=#444444]个人感觉相关的检验检测认证认可准则也应加系统适用性方面的要求，保证出具的检测结果具有法律效力。[/color][b][color=#3e3e3e]九、[/color][color=#3e3e3e]以上内容仅为个人观点，不对之处欢迎大家指正。[/color][/b]

妇科止痒洗剂微生物限度检查方法适用性试验一、检验依据：《中国药典》2015年版四部1105、1106二、仪器与实验材料1、仪器 高压锅 型号：G154DW 致微（厦门）仪器有限公司生物安全柜 型号：AC2-4S1 新加坡艺思高公司生化培养箱 型号：SHP-350 上海精宏实验设备有限公司生化培养箱 型号：LRH-250 上海一恒科学仪器有限公司天平 型号：LD3102 沈阳龙腾电子有限公司恒温水温箱 型号：S.HH.W21.600S 上海跃进医疗器械有限公司2、样品 品名：妇科止痒Ⅰ号洗剂 批号：20190221；20190315；20181211 规格： 250ml/瓶 生产单位：南平市人民医院3、培养基胰酪大豆胨液体培养基（TSB）（批号:1901222）沙氏葡萄糖液体培养基（SDB）（批号:180925）胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA）（批号:1901162）沙氏葡蔔糖琼脂培养基（SDA）（批号:190116）梭菌增菌培养基（批号:181213）哥伦比亚琼脂培养基（批号:170914）以上培养基均由北京三药科技有限公司提供；溴化十六烷基三甲铵培养基（批号:20180403）由海博生物技术有限公司提供；甘露醇氯化钠琼脂培养基（批号:3104327）由广东环凯微生物科技有限公司提供。4、菌种枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】（第4代）金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】（第4代）铜绿假单胞菌【CMCC(B)10 104】（第4代）白色念珠菌【CMCC（F）98001】（第3代）黑曲霉【CMCC（F）98 003】（第3代）大肠埃希菌【CMCC（B）44 102】（第5代）生孢梭菌【CMCC（B）64 941】（第3代）以上菌种均来源于广东环凯微生物科技有限公司。三、菌液制备1、接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌至胰酪大豆胨液体培养基中，经30～35℃培养18～24小时后，分别取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌的胰酪大豆胨液体培养基培养物1ml，用0.9％无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5～10-7，做活菌计数备用，选择适宜梯度使细菌数不大于100cfu/ml。2、将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30～35℃培养24～48小时，用0.9％无菌氯化钠溶液制成菌悬液或者孢子悬液，10倍稀释至10-3～10-5做活菌计数备用，选择适宜梯度使菌数不大于100cfu/ml。3、接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖液体培养基中，经20～25℃培养48～72小时取白色念珠菌液体培养物1ml，用0.9％无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-4～10-6做活菌计数备用，选择适宜梯度使菌数不大于100cfu/ml。4、接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，经20～25℃培养7天，取黑曲霉新鲜培养物，加入5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍稀释至10-4～10-6，做活菌计数备用，选择适宜梯度使菌数不大于100 cfu/ml。四、计数方法适用性试验1、供试液制备 取10mL供试品，用胰酪大豆胨液体培养基稀释制成1：10的供试液，备用。2、供试品中微生物的回收试验组：取上述制备好的供试液，加入金黄色葡萄球菌菌悬液，混匀，使每1ml供试液中含菌量不大于100 cfu，取该混合液2ml（lml／皿），分别置直径为90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃相应的琼脂培养基。置规定温度、时间培养，观察计数结果。铜绿假单胞、桔草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉均依法操作。供试品对照组：取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。菌液组：取相应的稀释液代替供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。3.结果判断计数方法适用性试验中，采用平皿法时，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5～2范围内，若各试验菌的回收试验均符合要求，照所用的供试液制备法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。试验结果详见表1。[img=,609,570]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152300475214_6517_2232106_3.png!w609x570.jpg[/img]表1结果表明：按此方法进行适用性检查，所有试验菌的回收比值均小于0.5，试验菌的回收比值均不在0.5~2范围内，因此采用1：10的供试液重新进行适用性试验。[img=,432,585]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152302434224_4507_2232106_3.png!w432x585.jpg[/img]表2结果表明：按此方法进行适用性检查，所有试验菌的回收比值均在0.5～2范围内，故可采用制备1：10供试液按平皿法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。五、控制菌1、铜绿假单胞菌试验组：取1:10供试液10ml接种至100ml的胰酪大豆胨液体培养基中，加入54cfu/ml的铜绿假单胞菌菌悬液1ml，混匀，30～35℃培养18～24小时，取上述培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时，观察并记录。阴性对照组：以稀释液代替供试液，不加试验菌，其他同试验组的控制菌检查。阳性对照组：不加供试液，其他同试验组的控制菌检查。供试品对照组：不加试验菌，其他同试验组的控制菌检查。[img=,650,235]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152303530254_4222_2232106_3.png!w650x235.jpg[/img]2、金黄色葡萄球菌试验组：取1:10供试液10ml接种至100ml的胰酪大豆胨液体培养基中，加入72 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌悬液1ml，混匀，30～35℃培养18～24小时，取上述培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时，观察并记录。阴性对照组：以稀释液代替供试液，不加试验菌，其他同试验组的控制菌检查。阳性对照组：不加供试液，其他同试验组的控制菌检查。供试品对照组：不加试验菌，其他同试验组的控制菌检查。[img=,658,530]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152305306414_5621_2232106_3.png!w658x530.jpg[/img][img=,602,169]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152305386274_4226_2232106_3.png!w602x169.jpg[/img]注：+代表沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上有典型菌落生长，-代表沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上无典型菌落生长。4、梭菌试验组：取1:10供试液10ml，另取一份1:10供试液10ml置80℃保温10min后迅速冷却分别接种至100ml的梭菌增菌培养基中，分别加入71cfu/ml生孢梭菌菌悬液1ml，混匀，置厌氧条件下30～35℃培养48小时。取上述培养物划线接种于哥伦比亚琼脂培养基平板上，置厌氧条件下30～35℃培养48～72小时。阴性对照组：以稀释液代替供试液，不加试验菌，其他同试验组的控制菌检查。阳性对照组：不加供试液，其他同试验组的控制菌检查。供试品对照组：不加试验菌，其他同试验组的控制菌检查。[img=,674,615]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152307107304_5206_2232106_3.png!w674x615.jpg[/img]