甲胎蛋白溶液纯度标准物质

促胰岛素分泌肽( Exendin-4) 是一种来源于美洲希拉毒蜥唾液中的含39个氨基酸的多肽，其作用机制与GLP-1类似，能够促进胰岛素的分泌、增加胰岛素敏感性、改善胰岛细胞功能。促胰岛素分泌肽融合蛋白( Exendin-4-Fc fusion protein，简称E4F4) 是将促胰岛素分泌肽( Exendin-4)与人IgG的Fc片段相连重新构建的结构蛋白，可在不影响药效的同时延长了药物的体内半衰期，有效改善Exendin-4 在机体内的药物代谢动力学特性。文献中采用了尺寸排阻色谱柱TSKgel G2000SWXL色谱柱（I.D. 7.8 mm× 30 cm）建立了促胰岛素分泌肽融合蛋白纯度测定方法，经验证该方法适合E4F4纯度检测。

摘要：介绍了玉米种子盐溶蛋白电泳鉴定真伪及纯度的操作技术, 并对该方法在实际应用中应参照的国标及存在的问题进行了分析和探讨。关键词玉米 电泳 品种纯度 操作技术

重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白，是由人干扰素α2b和人血清白蛋白2种编码基因通过基因工程技术构建的毕赤酵母工程菌，通过诱导表达产生的胞外分泌蛋白。干扰素类重组蛋白药品是目前临床上广泛用于治疗乙型肝炎、丙型肝炎等顽症的有效药物。2015年版《中华人民共和国药典》对重组蛋白制品的纯度要求为不低于95.0%。本篇应用中，作者采用了离子交换色谱柱TSKgel Q-STAT建立了测定重组人血清白蛋白干扰素α2b 融合蛋白药物纯度的方法，经验证该方法适合 rIFNα2b-HSA纯度检测。

液质联用鉴定肽段的样品制备，通常由多步骤工作流程组成，包括溶液内蛋白酶解、肽段纯化，以及肽段分馏。该过程通常需要根据样品特性及分析目的（ 即定量或表征）定制为具体的应用方法。样品制备工作流程的自动化可提高样品处理能力、降低差异性，并且无需熟练操作人员执行重复工作。然而，自动化平台通常并不用于最初的分析开发，这是因为分析开发者很少具有开发复杂自动化方案的经验。相反，分析通常是采用湿式工作台相关技术进行开发，然后在自动化专家的帮助下移植到自动化平台。采用 AssayMAP 肽段样品制备解决方案，无需掌握专门的技术也能实现自动化操作。开发者可通过一个简单的软件用户界面和灵活的实验方案对关键实验变量进行完全控制，从而能够专注于科学分析研究。如今，分析开发者、科学家或技术员无需具备自动化专业知识也能实现可扩展、精确的自动化操作。采用 AssayMAP 平台，整个工作流程可直接在相同的硬件上进行开发，如需实现高通量样品前处理，也易于对硬件进行扩展，从而可减少或避免已有实验方案实现自动化所需的额外时间和资源。本文将介绍发现（鸟枪法）蛋白组学研究的一种常规液质联用工作流程，包括溶液内酶解、反相肽段纯化，以及肽段的强阳离子交换分馏 (SCX)，所有这些操作均由 AssayMap Bravo 液体处理器完成。采用 SCX 小柱通过增加 pH 或离子强度对大肠杆菌蛋白裂解液进行逐步洗脱，在六个 SCX 馏分中鉴定出 15000 多条特定肽段序列，其中 64-67% 的肽段可专属性地在其中一个馏分中得到鉴定。

卡尔费休试剂的标定(水-甲醇标准溶液) 应用资料卡尔费休法测定水分是世界上广泛应用的方法，被认为是最可靠的测量水的方法。卡尔费休在许多国际标准中所采用，不仅包括GB、ISO、ASTM、DIN和BS，还有JIS、JAS和日本药典。在卡尔费休测量中，需要在实际测量前使用标准物质确定卡尔费休试剂的力价(滴定度)。本应用是使用水-甲醇标准溶液进行力价(滴定度)的测定。

基准物质标定法与标准溶液标定法1、 基准物质标定法：称取一定量的基准物质，溶解后用待标定的溶液滴定。根据基准物质的质量和溶液的消耗体积，计算待标定溶液的准确浓度。2、 标准溶液标定法：准确吸取一定量的待标定溶液，用另一种已知准确浓度的标准溶液滴定；或准确吸取一定量的已知准确浓度的标准溶液，用待标定的溶液滴定。根据两种溶液的消耗体积及已知的标准溶液浓度，计算待标定溶液的准确浓度。此法若标准溶液浓度不准确会直接影响待标定溶液浓度的准确性。因此，标定时应尽量采用基准物质标定法。无论用哪种方法标定，一般要求平行做3～4次实验，至少2～3次。相对偏差小于0.2%。标定好的标准溶液应妥善保存。放置一段时间后，标准溶液要先摇匀，再使用，若不稳定的溶液，还要定期标定。

人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)抗原、生物素化的人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)检测试剂盒人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)抗原、生物素化的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)检测试剂盒人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)抗原、生物素化的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)检测试剂盒人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)抗原、生物素化的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

尽管蛋白质生物制品总体来说是相对稳定的分子，但是在生产、制剂和储存过程中，还是会发生一些化学修饰和降解反应。许多蛋白质在纯化过程中可能发生水解断裂，而断裂形成的片段污染物可能会导致患者免疫反应的不良后果。由于存在化学修饰和降解反应，因此需要可靠而且灵敏的方法来评价研发和生产过程中蛋白质的纯度和结构完整性。 完整蛋白质、完整亚基或结构域的精确质量测定对于蛋白质序列组成的快速确认和翻译后修饰、降解和样品处理引起的分子变异的鉴定非常有帮助。电泳、色谱和质谱 (MS) 技术是完整蛋白质及其降解物分子量测定的最常用技术。其中一种最常用的分析是体积排阻色谱 (SEC)，它用于测定蛋白质是否为单体结构，并且在生产和制剂过程中是否始终保持这一结构。

白蛋白是制药工业中应用最广泛的蛋白质之一。牛血清白蛋白(BSA)是生产治疗药物和体外诊断剂作为酶稳定剂等的重要成分。使用EMS粘度计测量蛋白质溶液在不同浓度下的粘度变化，可以通过密封、灭菌和非接触来测量。即使是稀有的样品或昂贵的样品，如蛋白质，也可以通过在样品中加入稀释溶剂来测量少量样品的粘度值。

水解蛋白中氨基酸态氮的测定 应用资料水解蛋白中氨基酸态氮的测定，利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，以自动电位滴定仪测定终点。

豆粕是棉籽粕、花生粕、菜籽粕等动植物油粕饲料产品中产量最大，用途最广的一种。其作为一种高蛋白质，是制作牲畜与家禽饲料的主要原料。在不需额外加入动物性蛋白的情况下，仅豆粕中所含有的氨基酸就足以平衡家禽和猪的营养，从而促进牲畜对饲料营养的吸收。本实验参照《GB/T 24318 杜马斯燃烧法测定饲料原料中总氮含量及粗蛋白质的计算》使用杜马斯定氮仪对豆粕标准品中粗蛋白含量进行测定。

豆粕是棉籽粕、花生粕、菜籽粕等动植物油粕饲料产品中产量最大，用途最广的一种。其作为一种高蛋白质，是制作牲畜与家禽饲料的主要原料。在不需额外加入动物性蛋白的情况下，仅豆粕中所含有的氨基酸就足以平衡家禽和猪的营养，从而促进牲畜对饲料营养的吸收。本实验参照《GB/T 24318 杜马斯燃烧法测定饲料原料中总氮含量及粗蛋白质的计算》使用杜马斯定氮仪对豆粕标准品中粗蛋白含量进行测定。

速溶咖啡是通过将咖啡萃取液中的水分蒸发而获得的干燥的咖啡提取物。其配料表中明确表示其中添加有酪蛋白，酪蛋白是哺乳动物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白质，其在速溶咖啡中主要起到增稠、溶解、增白及中和等作用。因此本实验采用杜马斯燃烧法使速溶咖啡在高纯氧气中燃烧释放出氮，参照《GB 28050-2011 食品安全国家标准 预包装食品营养标签通则》和《GB 5009.5 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》，使用杜马斯定氮仪对速溶咖啡中的蛋白质进行定量测定。

小角X射线散射（SAXS）是研究溶液中蛋白质非常完美的工具。SAXS 可以允许蛋白质在自然状态下进行表征。由于被照射的样品体积大使得SAXSess mc² 可以提供优秀高超的强度，因此1分钟后就可以得到该蛋白质的结构数据。

乙醇梭菌蛋白是用乙醇梭菌作为发酵菌种，利用含有一氧化碳的工业尾气和氨水为主要原料进行液态发酵、离心分离浓缩、喷雾干燥，人工合成的一种新型单细胞蛋白产品。乙醇梭菌蛋白饲料不仅蛋白质含量高，营养丰富，并且氨基酸结构平衡，易于动物消化，同时还具有优异的饲料蛋白质原料加工特性，富含核苷酸等功能性物质，有利于动物肠道与肝脏的健康。本实验参照《GB/T 24318 杜马斯燃烧法测定饲料原料中总氮含量及粗蛋白质的计算》使用杜马斯定氮仪对乙醇梭菌蛋白的粗蛋白含量进行测定。

目的：测定乳粉中非蛋白氮含量，比较4种蛋白质沉淀剂分离蛋白质和非蛋白含氮物质的效果。 方法：样品加水溶解后分别用15%三氯乙酸溶液、丙酮、20%乙酸铅溶液+3%草酸钾+7%磷酸氢二钠溶液、乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白质，过滤后取滤液进行消化定氮，同时在样品中加标三聚氰胺，检测计算回收率。结果：三氯乙酸沉淀法的非蛋白氮含量为0.2036±0.0002%，丙酮沉淀法的非蛋白氮含量为0.0981%±0.0050%，乙酸铅沉淀法的非蛋白氮含量为0.1372%±0.0012%，乙酸锌沉淀法的非蛋白氮含量为0.3466%±0.0100%。当 10 g 样品中加标量高于2 mg 低于20 mg 三聚氰胺时，三氯乙酸沉淀法的加标回收率最好。结论：三氯乙酸沉淀法结果准确度和稳定性较其他3种方法更好，但受到加标量的影响，当10 g 样品加标79.2 mg时，三氯乙酸沉淀法加标回收率低且相对标准偏差较大，此时乙酸铅沉淀法的加标回收率优于三氯乙酸沉淀法。

本应用简报介绍了如何像生物分析科学家在典型生物药理学环境下进行纯度分析那样，使用 Agilent Easy Access 软件来分析模式治疗性蛋白的批次间纯度。分析模式治疗性蛋白的批次间纯度时，将 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统与 Agilent 6530 精确质量Q-TOF LC/MS 联用，并通过 Agilent Easy Access 软件进行数据分析。LC/MS 平台拥有卓越的色谱分离度和质量精度，结合强大的数据处理能力，可简便、快速地分析批次间的蛋白纯度。本应用简化了工作流程，使用者可以快速做出决策，以作进一步的下游处理。该软件可用于比较蛋白谱图，从而确保监管机构要求的批次一致性。此外，该软件还有助于了解工艺放大或生产过程中纯化后蛋白的杂质谱图。该数据可帮助开发生物仿制药的公司在产品上市前评估其产品与原始药物的相似度，重要性不言而喻。

蛋白质溶液中粘度的测定 应用资料白蛋白是制药工业中应用最广泛的蛋白质之一。牛血清白蛋白(BSA)是生产治疗药物和作为酶稳定剂等的体外诊断剂的必要成分。使用EMS粘度计测量蛋白质溶液动态粘度的浓度依赖性应用资料，该粘度计可以通过密封、灭菌和非接触来测量。

溴化钾-溴酸钾标准溶液的标定 应用资料碘量瓶中加入50mL冰乙酸和1mL浓盐酸，并将其放入冰水浴中冷却10min左右。然后，不断地摇动瓶子，同时用校准过的10mL滴定管以每秒1滴或2滴的速度向其中加入5mL±0.01mL溴化钾-溴酸钾标准溶液。立刻盖上瓶塞，摇匀，再次放到冰水浴中。然后在瓶口处加5mL碘化钾溶液。5min后从冰水浴中取出碘量瓶，慢慢地打开瓶塞，让碘化钾溶液流入瓶中，剧烈地摇动。用100mL水冲洗瓶塞、瓶口及瓶壁，然后迅速地用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液进行滴定。

摘要汞是一种毒性较强，熔点低、易挥发的重金属元素，是常温下**的液态金属，其游离利存在于自然界或辰砂、甘汞等矿物中，汞中毒可导致 。近年来，由于科技水平的发展，居民对于汞污染可能造成的危害有了深入的认识，汞的检测手段有了长足进步，从早期的冷原子吸收法、原子荧光法、原子荧光法，到电耦合等离子体质谱法，再到专门化的测汞仪，长期困扰检测人员的汞检测手段已得到解决。但由于汞具有强烈的亲疏性和亲铜性，易吸附在其他物质上，使汞标准溶液的稳定性远低于其他元素，实验室需要经常配制汞标准溶液，尤其对于低浓度的汞标准溶液，甚至现用现配。不但增加了检测人员的劳动强度，弃用的汞标准溶液也对环境造成了较大的污染。本研究对4中介质条件下汞标准溶液的稳定性进行比较，为配制稳定有效的汞标准溶液提供科学依据。实验仪器：DMA-80直接测汞仪

高锰酸钾是一种强氧化剂，被广泛用于滴定铁（ II） 的一级标准物，该物质很难获得纯态， 故无法仅凭称量试剂的质量， 制作具有准确浓度的溶液，需对其进行标准化处理。 多数情况下， 其含有少量的二氧化锰， 可将其标准化成草酸钠、 草酸、 氧化砷（ III） 、 纯铁等一级标准物质。本项试验选用草酸钠作为一级标准物质， 在酸性溶液中滴定高锰酸钾，求得高锰酸钾的实际标准溶液浓度。

人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗原、生物素化的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

参考团体标准 奶及奶制品中乳铁蛋白的测定 液相色谱法（T/TDSTIA 006-2019），用于测定生乳、液态奶和乳粉中乳铁蛋白的含量。纳谱分析SelectCore Heparin肝素亲和SPE柱和ChromCore 300 C4-T分析柱，不仅能满足此标准的检测要求，相比标准所列的GE HiTrap Heparin前处理柱和Waters的Xbridge Protein BEH C4分析柱，前处理更加方便快捷，色谱分析时间更快更准确，可以更加快速高效的检测乳铁蛋白的含量。

1 前言乳清蛋白质粉是以乳清为原料，不经脱盐，经干燥制成的粉末状产品，它以其纯度高、吸收率高、氨基酸组成最合理等诸多优势被推为“蛋白之王”。能够为人体提供必需的蛋白质营养；维持皮肤和组织器官的正常；避免一些摄入动物蛋白引起的危害。参照《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》标准方法测定乳清蛋白粉中的粗蛋白含量。

溴化钾-溴酸钾标准溶液(0.25mol/L)的标定 应用资料溴化钾-溴酸钾标准溶液(0.25mol/L)的标定方法参考: GB/T 11135, JIS K2605, ASTM D1159和ISO 3839。加入50mL冰乙酸和1mL浓盐酸，加入5mL溴化钾-溴酸钾标准溶液，放到冰水浴中，加5mL碘化钾溶液，用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液进行滴定。

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定非蛋白饮料中赤藓糖醇的含量。色谱条件：氨基色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样量为20μL，检测器为示差折光检测器，检测池温度为30℃。实验结果：赤藓糖醇的理论塔板数为3878，拖尾因子为1.13；重复性测试中，赤藓糖醇标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.145%，峰面积的RSD为1.066%；灵敏度测试中，赤藓糖醇的仪器检出限为0.153mg/mL，仪器定量限为0.509mg/mL；赤藓糖醇在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R2大于0.999；对汽水进行测试，赤藓糖醇的含量为0.41%，其加标回收率为96.9%。因此，Wooking K2025可以满足《GB 5009.279-2016食品安全国家标准 食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的测定》中汽水中赤藓糖醇含量测定的需求。

蛋白质的产率和纯度是衡量纯化是否成功的重要指标。除有效的色谱分离外，配置良好、可靠的仪器也能影响纯化的成功。制备型反相(RP)液相色谱由于具有高分离能力，经常被用做多肽和小分子亲水蛋白纯化流程的最后一步。虽然大家都知道反相液相色谱所用的溶剂条件会使蛋白结构变性，但也能通过调节适当的条件再使其复性，特别是小分子蛋白。Agilent 1100系列纯化系统是设计良好、合适的反相色谱的系统。