流动相

HPLC中，溶剂的洗脱能力与溶剂极性相关。1、正相色谱的流动相：在正相色谱中，溶剂强度随极性的增强而增加。正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。2、反相色谱的流动相：在反相色谱中，溶剂强度随极性的增强而减弱。反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂（如甲醇、乙腈和四氢呋喃等）。极性调整剂的性质及所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下，甲醇－水系统满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小，价格低，是反相色谱zui常用的流动相。乙腈－水系统与甲醇－水系统相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，可满足在紫外185～205nm处检测的要求，综合来看，乙腈－水系统优于甲醇－水系统。在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，需采用梯度洗脱。

03流动相和储液器被污染由于污染，噪音越来越大，检测器基线上升。污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统，而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出多余的峰。用梯度洗脱时弱流动相可以使污染物聚在柱顶，流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一个大的伪峰。有时基线噪音突然增大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久（通宵）所造成的。新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌。脏的储液器会污染清洁的流动相。每种流动相备有专用的储液器，或者定期报废储液器。

对于不同的流动相，我们能根据流动相中各组分的极性大小、以及各组分的比例组成，可以计算出流动相的极性大小吗？这个流动相的极性大小，对于我们的分析工作，有如何的意义？

各位大侠，跪求帮助。刚刚接触高压色谱仪。目前存在如下问题：流动相本底测试时，当流动相A切换成流动相B时，光电检测器就会有一个较大的峰。例如：流动相A切换为流动相B时，本底有一个向上的峰；流动相B切换成流动相A时，有个向下的峰。请问该峰的原因是什么呢？？，有啥办法能够消除该峰。

[b][color=#444444]请教高手们！[/color][color=#444444]用HPLC时，用流动相溶解样品，我想请问这个流动相是一定要和仪器里面走的流动相配比一样吗？比如说我的流动相是乙腈：乙酸铵=35：65，那么我溶解样品时，是一定也要用这个比例的流动相配呢，还是只要用乙酸铵溶解，测定时不影响基线平衡就可以了？[/color][color=#444444]敬请高手大侠们赐教啊！！！[/color][/b]

1.流动相应不改变填料的任何性质：低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。2.纯度：色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。3.必须与检测器匹配：使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。 4.粘度要低（应2cp）：高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长，最好选择沸点在100℃以下的流动相。5.对样品的溶解度要适宜：如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子效率降低。6.样品易于回收：应选用挥发性溶剂。

流动相供给不畅02流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。过滤器被微粒所阻塞或长霉，去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的过滤器则可。有时候换上新的过滤器仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。不管如何，流动相都需要重新过滤。流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。如果流速大于10mL/min，常会出现这种现象。使用下列方法解决：（1）使用低流速；（2）换大孔径的过滤器；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加压储液器；（5）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。应松开盖子或留有1mm的缝隙；（7）进液管道阻塞或弯曲使泵抽不到液，注意调整进液管道或更换新的。其它问题包括渗漏或接头松动、泵部件损坏等，都能引起供液不正常。

HPLC中，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k值减小；较弱的溶剂使溶质在填料表面的吸附增加，相应的容量因子k值增大。因此，k值是流动相组成的函数。理论塔板数一般与流动相的粘度成反比。1、流动相应不改变填料的任何性质：低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝和氧化镁等吸附剂的柱系统。 2、纯度高：色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。3、必须与检测器匹配：当使用UVD时，所用流动相在检测波长下应没有吸收或吸收很小。当使用RID时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。4、粘度低：高粘度溶剂会影响溶质的扩散和传质，使柱效降低，还会使柱压增加，分离时间延长。zui好选择沸点在100℃以下的流动相。5、对样品的溶解度要适宜：如果溶解度欠佳，样品会在色谱柱内沉淀，不但影响纯化分离，而且会使色谱柱恶化。6、样品易于回收：应选用挥发性溶剂。

最近配流动相容器，都洗干净了，试剂也没问题，比例也对，为什么配的流动相不能用，不出峰。。。。。。。。大家把那个忙解决一下，大家讨论一下导致流动相不能用的原。。。。。。。。。。。。。。。

请教大家一个问题，如果当前流动相不能有效的将两个峰分开，即在关注的峰旁边出现了肩峰，大家都怎样调节流动相呢？假入当前流动相是甲醇：水=50:50，在15min出峰。

Agilent 1200的四元泵和1290的四通道二元泵，请问，如果长期某通道或者某泵都是一种流动相，如都是水相或者都是有机相，长时间走样后，会不会有什么影响。如果产生了一定的影响，要怎么处理？是否要经常更换通道的流动相的种类？或者二元泵的某个泵的两个通道分别用有机相和水相，这样避免长期单一的流动相，有必要这样吗？

小弟不才，有个不是问题的问题请教。异丙醇：正己烷：1%乙酸=8:8:1，①这个流动相比例中8:8可以改成1:1吗？②1%乙酸是指先把乙酸配成1%再加进去，还是根据总的流动相体积计算出需要加入乙酸的量，这样乙酸就占整个流动相的1%。

04试剂质量不高，玻璃器皿不合格；微生物的影响；配制流动相时操作不当等；因此要求高纯度化学试剂和HPLC级溶剂；玻璃器皿按规定清洗干净；为防止微生物生长，每天要用甲醇清洗系统；怀疑系统内生长了微生物，可用稀硝酸冲洗即可（注意不要损坏柱和管道系统）；真空脱气时防止泵油带入流动相；用清洁的惰性塞子、搅棒、过滤器和玻璃器皿配制流动相；已经污染的流动相一定要废弃掉。

为向中填入固定相，以流动相溶剂浸润后在上方倒入待分离的溶液，再滴加流动相，因为待分离物质对固定相的吸附力不同，吸附力大的固着不动或移动缓慢，吸附力小的被流动相溶剂洗下来随流动相向下流动，从而实现分离。以滤纸条为固定相，在纸条上点上待分离的混合溶液的样点，将纸条下端浸入流动相溶剂中悬挂，溶剂因为毛细作用沿滤纸条上升，样点中的从而被分离。薄层色谱是在玻璃板上涂以固定相涂层，然后点样，下端浸入溶剂，同样自下而上分离。常用于探索柱色谱实验条件，溶剂和固定相的选择等。常用固定相有石膏、氧化铝、蔗糖、淀粉等，常用流动相为水、苯等各种有机溶剂。色谱法的分类方法很多，最粗的分类是根据流动相的状态将色谱法分成四大类。色谱法按流动相种类的分类为向中填入固定相，以流动相溶剂浸润后在上方倒入待分离的溶液，再滴加流动相，因为待分离物质对固定相的吸附力不同，吸附力大的固着不动或移动缓慢，吸附力小的被流动相溶剂洗下来随流动相向下流动，从而实现分离。以滤纸条为固定相，在纸条上点上待分离的混合溶液的样点，将纸条下端浸入流动相溶剂中悬挂，溶剂因为毛细作用沿滤纸条上升，样点中的从而被分离。薄层色谱是在玻璃板上涂以固定相涂层，然后点样，下端浸入溶剂，同样自下而上分离。常用于探索柱色谱实验条件，溶剂和固定相的选择等。常用固定相有石膏、氧化铝、蔗糖、淀粉等，常用流动相为水、苯等各种有机溶剂。色谱法的分类方法很多，最粗的分类是根据流动相的状态将色谱法分成四大类。色谱法按流动相种类的分类为向中填入固定相，以流动相溶剂浸润后在上方倒入待分离的溶液，再滴加流动相，因为待分离物质对固定相的吸附力不同，吸附力大的固着不动或移动缓慢，吸附力小的被流动相溶剂洗下来随流动相向下流动，从而实现分离。以滤纸条为固定相，在纸条上点上待分离的混合溶液的样点，将纸条下端浸入流动相溶剂中悬挂，溶剂因为毛细作用沿滤纸条上升，样点中的从而被分离。薄层色谱是在玻璃板上涂以固定相涂层，然后点样，下端浸入溶剂，同样自下而上分离。常用于探索柱色谱实验条件，溶剂和固定相的选择等。常用固定相[color=#ff6666]有石膏、氧化铝、蔗糖、淀粉等，常用流动相为水、苯等各种有机溶剂。色谱法的分类方法很多，最粗的分类是根据流动相的状态将色谱法分成四大类。色谱法按流动相种类的分类为向中填入固定相，以流动相溶剂浸润后在上方倒入待分离的溶液，再滴加流动相，因为待分离物质对固定相的吸附力不同，吸附力大的固着不动或移动缓慢，吸附力小的被流动相溶剂洗下来随流动相向下流动，从而实现分离。以滤纸条为固定相，在纸条上点上待分离的混合溶液的样点，将纸条下端浸入流动相溶剂中悬挂，溶剂因为毛细作用沿滤纸条上升，样点中的从而被分离。薄层色谱是在玻璃板上涂以固定相涂层，然后点样，下端浸入溶剂，同样自下而上分离。常用于探索柱色谱实验条件，溶剂和固定相的选择等。常用固定相有石膏、氧化铝、蔗糖、淀粉等，常用流动相为水、苯等各种有机溶剂。色谱法的分类方法很多，最粗的分类是根据流动相的状态将色谱法分成四大类。色谱法按流动相种类的分类[/color]

[color=#444444]液相色谱中，更改流动相后，要如果设计实验验证更改后的流动相可行？实验的定量方法是外标法，测蛋白浓度。[/color][color=#444444]可否选用一种标准品（自己纯化的蛋白，该标准品就是平时用来做标准曲线的），看它用新流动相和旧流动相时的结果？[/color]

C18短柱，流动相中没有盐溶液。最初：100甲醇，平稳后压力3.1。流动相65水35乙腈甲醇（1：1），平稳后压力5.9。经过几天的进样，每天大概10-20针，工作结束后，10甲醇冲洗20min，100甲醇冲洗30min以上。现在：100甲醇，平稳后压力3.4。流动相65水35乙腈甲醇（1：1），平稳后压力7.4。问题：为什么流动相压力会升高的比100甲醇时压力高那么多？

比如，配制500ml的70%乙腈+30%水做为流动相，在方法中设置如果剩下100ml时，泵停止运行，免得抽空流动相。那么剩下的100ml流动相应该怎么处理呢？和后来新配置的500ml流动相合并吗？还是废弃？如果合并，是将新配制的500ml流动相超声之后，将这100ml倒到500ml里，还是将这100ml先倒到500ml，再一起超声？合并后，需要再次抽滤吗？再者，一般溶剂瓶中，最小剩余多少流动相才算安全呢？非常感谢！

各位高手：常常看到资料上说，用初始流动相做定溶液溶解样品，以及用来标准储备液做曲线。。。。我的问题是用初始流动相的好处有哪些？？？？

1．流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。④粘度要低（应2cp）。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。2．流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。流动相选择方法1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。2：三倍规则 ：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

一直对流动相的PH很迷惑，有没有老师详细解答一下调流动相PH应遵循什么原则？以及为什么要这样调？

请问流动相一定要经过流动相过滤器处理吗?我们用的蒸馏水也不是HPLC级别的。觉得滤片、保护住、色谱柱污染得特别快。这个都是我们老大要节省节省。。。。

16、在硅胶往上，用甲苯为流动相，某组分的保留时间为30min，如果改用四氯化碳或乙醚为流动相，试指出选用哪一种溶剂能减少该组分的保留时间? 原因

今天同事问了一个问题，他问：公司的开放实验室，不管做什么类型的样品，流动相都用酸性流动相？添加三氟乙酸。谁知道是为什么吗？

在做2015药典时，有一个品种的检测流动相是0.1M磷酸二氢钠溶液，用磷酸调节pH=4.4，可是我们实验室配了3次流动相pH都在4.26，这是怎么回事呢？遇到这种情况应该怎么办呀？？？要用碱调到4.4吗？

[em61] [em61] [em61] [em61] 请教高手:由于一种物质的强水解作用而不能用含水的溶剂，那么是否意味着就不能用含水的流动相？那么那种流动相呢？

1.1 过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1-2ml甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。1.2 保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。1.3 保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

老师们好： [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]新手上路，对流动相选择上存在一些疑惑，求教各位。 根据GBT20756-2006标准检测水产品中的氯霉素，标准流动相中水相（A）为水，有机相（B）为甲醇+水（40+60），但仪器提供改进的检测方法流动相中水相（A）为1%的氨水，有机相（B）为乙腈，该如何正确的选择流动相？标准中的提取步骤加入氢氧化铵和流动相中的水相使用1%的氨水是否作用一样，都是为了提高样本进样检测时的离子化程度？

流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。

流动相为甲醇和水，如何改变流动相来改变峰形

采用反相色谱分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相pH值，以抑制样品组分的解离、增加组分在固定相上的保留和改善峰形的技术，称为反相离子抑制。1、弱酸样品：对于弱酸样品，流动相pH值越小，组分k值越大，当pH值远远小于弱酸pKa值时，弱酸主要以分子形式存在。分离弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液。2、弱碱样品：对于弱碱样品，情况与弱酸样品相反。分离弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象，在这种情况下有机胺（如三乙胺）称为减尾剂或除尾剂。