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嘉娜宝相关的论坛

  • 【讨论】央视曝部分纳豆产品虚假宣传 专家剖析纳豆胶囊

    涉嫌虚假宣传,纳豆产品遭央视曝光  据央视每周质量报告报道,一种叫高N肽的纳豆产品在广告中宣传对心脑血管疾病患者有很好的治疗效果,有效率在90%以上。  这种纳豆产品是一种纳豆软胶囊,每盒售价598元。  生产厂家并在广告中宣称,产品所使用的纳豆激酶是被称为日本“纳豆之父”的须见洋行博士研制的。  纳豆激酶含量比普通纳豆产品高,不仅能预防心脑血管疾病,还能治疗高血脂、高血压、糖尿病等。  而据央视记者调查,该纳豆产品只是一种特膳食品,根本不具备广告中所宣传的疗效。  且国内所有打着日本纳豆之父“招牌”的纳豆产品,都跟须见洋行博士没有任何关系。  博士本人在央视记者采访时表示,到目前为止,他还没有在中国授权过一家企业生产销售他所研制的纳豆激酶。

  • 单细胞“纳米生物间谍”技术能进入活细胞取样

    原标题 “纳米生物间谍”技术能进入活细胞取样 可用于深入揭示线粒体基因组变异的重要性 科技日报讯 据物理学家组织网近日报道,美国加利福尼亚大学圣克鲁兹分校(UCSC)研究人员开发出一种机器人式的“纳米生物间谍”系统,能从单个活细胞内提取出微量样本,进行RNA或DNA测序,而不会杀死细胞。研究人员表示,这种单细胞“纳米生物间谍”技术是一种了解活细胞内部动态过程的有力工具。相关论文发表在最近出版的美国化学协会《纳米》杂志上。 “我们能从活细胞中拿走一个‘生物间谍’,再把它送回该细胞,在几天内这样重复多次而不会杀死细胞。如果用其他技术,你不得不牺牲这个细胞才能分析它。”该生物传感与生物电技术小组负责人、UCSC巴斯金工程学院生物分子工程教授内德·波曼德说。 “纳米生物间谍”平台是研究小组用纳米吸液管开发的最新设备。纳米吸液管是一种小玻璃管,取液端越来越细,至尖端直径仅50到100纳米。波曼德说:“我能在实验室造出纳米吸液管,这不需要昂贵的纳米制造设备。但要进入一个细胞,问题是即使在高倍显微镜下,你也看不见吸液管尖端,不知道它偏离了细胞有多远。” 实验室博士后研究员亚当·赛格尔解决了这一问题。他基于在一台改造过的扫描离子电导显微镜(SICM),开发出一种反馈控制系统。该系统能利用通过纳米吸液管尖端的离子流作为反馈信号,在尖端接近细胞表面时探测其中的液滴。在尖端进入细胞之前,一种自动控制系统能定位它在细胞上面的位置,然后尖端很快插入穿透细胞膜,通过操控电压有控制地提取一小点细胞内物质。由于吸液管尖端极精细,对细胞造成的损害极微小。 研究小组用这种系统从活细胞中提取的微量细胞物质,估计只有50毫微微升(千万亿分之一升),约一个人体细胞百分之一的量。他们从单个人体癌细胞中提取物质并进行RNA测序,还从人类成纤维细胞中提取了线粒体并对其进行了DNA测序。“人们已经知道,线粒体和多种神经退化疾病有关。该技术可用于深入揭示线粒体基因组变异的重要性。”波曼德说。 该技术应用前景广阔。波曼德希望能与其他研究人员合作,探索其更多用途。“对于癌症生物学家、干细胞生物学家等想要了解细胞内部情况的科学家来说,这是一种多功能的平台。”(常丽君)来源:中国科技网-科技日报 2014年01月20日

  • 美国分析公司:美部分汉堡包惊现人类和老鼠DNA

    提起美式食品,人们就会想起汉堡包。但美国食品分析公司Clear Labs 5月10日发布报告说,美国市面上的汉堡包超过10%存在问题。他们甚至在少数汉堡包中检测到人类与老鼠的DNA(脱氧核糖核酸)。不过,该公司以及美国食品安全专家都指出,食品里出现人类与老鼠DNA难以避免,不一定就会对人的健康造成损害。该公司研究人员最近对加利福尼亚州22个零售店销售的汉堡包进行了基因组分析,涉及77个品牌的258份样品。结果显示,13.6%的汉堡包存在问题,如所含成分与标签标示不相符、卫生问题与病菌污染等。研究人员还在一份汉堡包样品中发现了人类DNA,在3份汉堡包样品中发现老鼠DNA。报告分析认为,人类DNA可能来源于汉堡包加工过程中操作人员的头发、皮肤或指甲等。报告解释称:“尽管令人不快,但需要强调的是,人类或老鼠DNA不太可能对消费者健康造成损害。”报告指出,美国食品和药物管理局允许食品中存在一定量的人类与老鼠DNA,因为这在生产过程中无法完全避免。在他们研究中检测到的人类与老鼠DNA量很可能符合监管的要求范围。佐治亚大学食品微生物学教授迈克尔·多伊尔表达了类似看法。他说:“在食品中发现一些老鼠和人类DNA并不令人意外……听上去很恶劣,但需要客观看待。这与其说与人类健康相关,还不如说是审美关切。”此外,素食汉堡包问题颇多。在89份样品中,23.6%存在所含成分与标签不一致等问题。比如,两份素食汉堡包样品中出现牛肉DNA,一份黑豆汉堡包里根本不含黑豆。最引人关注的是,4.3%的样品里含有假结核耶尔森氏菌、嗜水气单胞菌等病菌的DNA。不过,多伊尔评价说,这一结果会有一点误导,因为基因组分析技术无法区分出死与活的细胞,发现死细胞的病菌DNA并没有多大意义。而且,所发现的病菌要么不是人们通常担心的病菌,要么数量较少不足以致病。

  • 【讨论】淘宝商城找你要CNAS、CMA检测报告没?

    针对近日淘宝商城围绕“品牌正品 商城保障”淘宝将从产品、服务、物流多角度对入驻商家进行严格选择、认证。有严格的产品质量控制体系。必须要有CNAS、CMA资质的机构出具检测报告。想问问大家有没有收到淘宝商城的检测订单, 都做哪些测试?

  • 【分享】科学家揭秘“急性癌症”成因:染色体“爆炸”破坏DNA

    据英国《每日邮报》1月7日报道,英国科学家找到了“急性癌症”的形成原因:细胞内的染色体发生“爆炸”破坏了DNA,从而让人有可能在短时间内患上癌症。相关论文发表于《细胞》。传统理论认为癌症是人体经历成千上万次的细胞突变后,慢慢演化的结果。但英国著名的疾病研究机构桑格研究所的新发现推翻了这种看法。这暗示了不管人们怎么努力保持身体健康,也不能保证命运不会拿他们开玩笑。同时还说明了为什么有些人在体检时根本没发现癌症痕迹,但数月后突然就被诊断患上这种疾病了。桑格学院的科学家是通过研究750个肿瘤的遗传缺陷后得出以上结论的。其中大部分的案例都与传统理论相符,染色体的损坏是常年累积的结果。然而,其中至少有1/40的肿瘤不符合“标准模式”,有的染色体似乎是在一夜之间遭到破坏的。参与此项研究的坎贝尔博士称:“测验结果太让我们惊讶了。在一个细胞里面,染色体经过一次或者是多次爆炸成为碎片。如果这个细胞开始笨拙地修补,把碎片杂乱的缝合起来,这样就破坏了原来的DNA结构,为癌症的快速形成提供了条件。”坎贝尔博士表示:“这个细胞应该说‘好吧,我放弃’,而不是像对待昂贵的瓷器一样,把染色体拼接回去。细胞试图修复一个不可修复的东西,最后造出一个灾难性的、能让癌症更快形成的基因组。”这种“急性癌症”在骨癌里面特别常见,大概1/4的患者身上都能看到明显的染色体受损特征模式。科学家目前还不能肯定是什么引起了这种染色体“爆炸”,但有嫌疑的罪魁祸首包括X光和晒伤。坎贝尔博士称:“如果我们能了解根本的病因,或许就可以防止患上这种癌症。”http://www.dailymail.co.uk/health/article-1344740/Why-cancers-develop-instant--cells-explode-wreaking-havoc-DNA.html---科学网

  • CNAS 申报项目问题

    大家在申请CNAS项目的时候有没有遇到一个标准里面测好多项目,同时每一个项目根据样品类型不同又有好几个标准,碰到这种情况大家怎么申请CNAS项目的?比如GBT 29665-2013 这个标准是测化妆品中护肤乳液中的香气,外观,耐热,耐寒、离心考验等指标,而GBT 29679-2013 这个标准是测化妆品中洗发液洗发膏中的香气,外观,耐热,耐寒、离心考验等指标,还有其他标准测洗面奶、洗面膏、润肤油、去角质啫喱、润肤膏霜、护发素、化妆水、面膜中香气,外观,耐热,耐寒、离心考验等指标,这种情况怎么去申报CNAS项目,怎么去做CNAS申报的每个项目能力验证?

  • 纳米钻石“温度计”测量活细胞温度更精准

    有望提供一种新的治疗癌症的方法2013年08月01日 来源: 科技日报 作者: 陈丹 科技日报讯(记者陈丹)据《自然》杂志网站8月1日(北京时间)报道,纳米钻石可用于量子计算机中处理量子信息,而哈佛大学的研究人员利用纳米钻石的量子效应,将其变为“温度计”,测量出了人类胚胎干细胞内部的温度变化,精确度是现有技术的10倍。通过加入金纳米粒子,研究人员还能够利用激光对细胞的特定部分加热甚至杀死细胞,这有望提供一种新的治疗癌症而不损害健康组织的方法,以及研究细胞行为的新手段。研究论文发表在本周的《自然》杂志上。 在这项最新研究中,研究人员使用纳米线将直径约100纳米的钻石晶体注入一个人类胚胎干细胞中,然后用绿色激光照射细胞,使氮杂质发出红色荧光。当细胞内局部温度出现变化时,红色荧光的强度会受到影响。通过测量荧光的强度,便可以计算出相应的纳米钻石的温度。由于钻石具有良好的导热性,就可以像温度计一样显示出其所处细胞内部环境的即时温度。 研究人员同时还将金纳米粒子注入细胞内,然后用激光来加热细胞的不同部位,加热点的选择和温度升高多少都可由纳米钻石“温度计”来精确控制。“现在我们有了一个可以在细胞水平上控制温度的工具,让我们能够研究生物系统对温度变化的反应。”参与该研究的哈佛大学物理学家彼得·毛瑞尔说。 他指出,基础生物学涉及到的很多生物过程,从基因表达到细胞新陈代谢,都会受到温度的强烈影响,纳米钻石“温度计”将是一个有用的工具。例如,通过控制线虫的局部温度,生物学家可以了解简单有机体的发育。“你可以加热单个细胞,研究其周围的细胞是否会减慢或者加快它们的繁殖率。”毛瑞尔说。 目前也有一些其他测量细胞温度的方法,比如利用荧光蛋白或碳纳米管,但这些测量手段在敏感性和准确度方面都有欠缺,因为其中的一些成分会和细胞内的物质发生反应。毛瑞尔说,他们的纳米钻石“温度计”的敏感度至少提高了10倍,能够检测出细微到0.05开的温度波动。而且其还有改进的余地,因为在活细胞外部,该“温度计”的敏感度已经达到0.0018开的温度波动。 总编辑圈点 这样的“温度计”应该造价不菲,好在钻石是纳米级的。而其能够检测出细微到0.05开的温度波动,让其他测量细胞温度的方法难以望其项背,我们有理由相信,这项技术不仅仅只应用于医学领域。目前晶体管已经达到极小量度,在20或30纳米级别,离原子级别已经不远。然后,最重要的事情就是要理解热量散播和设备电子结构之间的关系,只有掌握这方面的知识,才能真正操控原子级设备,而纳米钻石“温度计”或许能派上大用场。 《科技日报》(2013-08-02 一版)

  • 【原创】宿主细胞DNA残留问题

    现在国家药典对宿主细胞DNA残留要求 要小于100P克,儿童用疫苗更是要求严格限制在几十P克。现在国内对宿主细胞DNA残留去除技术似乎成为一个企业存亡的关键点啦。很多企业用凝胶4FF或者6FF柱子 ,单是都不能达到药典要求。个人认为:先通过离子交换柱,然后再通过凝胶柱可以去除大部分宿主细胞DNA。请从事这方面的同行讨论一下。

  • 【转帖】RNA可改变细胞转导通路的线路

    RNA可改变细胞转导通路的线路 人们常说,激发改变的最好的方法是从系统内着手。 现在,研究人员基于RNA创建了控制装置,该装置可被用来以合成的方式重新为细胞行为排布线路,使得这些细胞对药物更为敏感而造成其死亡。 这一工作着重显示了RNA作为设计合成系统平台以控制基因表达及用这类技术来治疗疾病的前途,特别是用基因疗法来为癌性或有病细胞设计使其走向死亡的程式的可能性。 Stephanie Culler及其同事应用短片段的RNA来制造可编程式的控制装置,当这些装置在存在某些蛋白的时候可被激发,使得基因表达通路被重新安排并改变了人类细胞的行为。 在该实验中,研究人员将某关键性信号转导通路的刺激与某个基因表达发生关联,而该基因的表达可使细胞对药物甲基鸟嘌呤变得敏感,并诱导程序化细胞死亡。 他们的RNA控制装置可重新安排有关的通路并促使细胞探测到一种与癌症有关联的标志并激活产生一种蛋白质。该蛋白质可令细胞对某种抗癌药物变得敏感。 这些结果显示,这种RNA装置可用来改变细胞转导通路的线路并指引细胞走向某种特定的命运。 一则相关的观点栏目对这一创建一个单一框架结构以建立合成基因调控系统的工作的可能的影响进行了讨论

  • 【调查】关于全民发帖得字拿奖品风暴

    今天是新年,09年也是仪器信息网开通的10周年的时间,在此期间论坛举行了一系列的庆祝活动,其中有一项就是“全民发帖得字拿奖品风暴”,和以往一样,这无疑是一个鼓励大家多发帖的活动。从活动的字面上理解“注册用户在技术版面发帖可以有机会获得礼包”,这种礼包的获得应该是随机的。可本人一大早就开始努力发帖,可发了将近20个帖子也没能得到一个礼包,原来要想得到一个字是那么的困难,看来要想集齐所有的字不知要在技术版面灌多少水,所以想了解一下目前大家的情况。希望这里的人都能来谈一下自己发多少个帖子能获得一个礼包,已经得到了多少个礼包,这样也好让我们知道获得礼包的几率是多少。如果最后没有人可能集全所有的字,那无疑就相当于少出一个字,这样大家不是就被愚弄了吗?  [em09512]

  • 细胞总RNA提取

    细胞总RNA提取[font='times new roman'][size=18px]药物及主要试剂[/size][/font][align=center]表1 药物及主要试剂[/align][table][tr][td] [/td][td][align=center]药物/试剂[/align][/td][td][align=center]生产公司[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]西达本胺[/align][/td][td][align=center]深圳微芯科技公司[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]胎牛血清[/align][/td][td][align=center]Gibco[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]RPMI Medium 1640培养基[/align][/td][td][align=center]Gibco[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]Waymouth’s培养基[/align][/td][td][align=center]Gibco[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]PBS[/align][/td][td][align=center]Solarbio[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]HEPES[/align][/td][td][align=center]Solarbio[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]TRIzol[/align][/td][td][align=center]Ambion[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]氯仿[/align][/td][td][align=center]天津市北辰方正试剂厂[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]异丙醇[/align][/td][td][align=center]天津市北辰方正试剂厂[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]无水乙醇[/align][/td][td][align=center]天津市华东试剂厂[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]MonScriptTM RTLLL ALL-in-One Mix with dsDNase KitMonScriptTM ChemoHS q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] MixKit[/align][/td][td][align=center][/align][align=center]Monad[/align][align=center][/align][/td][/tr][/table][align=center]表2 [/align][table][tr][td][align=center]药物/试剂[/align][/td][td][align=center]生产公司 [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]DNase/RNase-Free Water [/align][/td][td][align=center]Solarbio[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]双抗[/align][/td][td][align=center]Solarbio[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]CCK-8[/align][/td][td][align=center]MedChemExpress[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4%多聚甲醛[/align][/td][td][align=center]Solarbio[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]结晶紫[/align][/td][td][align=center]Solarbio[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]流式凋亡试剂盒[/align][/td][td][align=center]BD[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]DMSO[/align][/td][td][align=center]Solarbio[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]REGμLAR AGAROSE G-10[/align][/td][td][align=center]上海贝晶生物有限公司[/align][/td][/tr][/table](1)细胞处理:H446、DMS114:吸弃培养基,PBS清洗2次,吸弃PBS,培养皿斜立于冰上,将剩余PBS吸干。培养皿中加入1 mL trizol,迅速吹打混匀,充分裂解细胞,移入1.5 mL无酶EP管中。H69、H526:细胞悬液放入15mL离心管中,900 rpm 离心8 min,离心后弃上清,PBS清洗2次,弃掉PBS,加入1mL trizol,迅速吹打混匀,充分裂解细胞,移入1.5 mL无酶EP管中。(2)加入200 μL氯仿(每1 mL trizol),剧烈震荡混匀30 s,室温静置10 min。(3)离心,4℃,12000 g,15 min。将水相转移至新的1.5 mL无RNA酶EP管中。(4)在水相转移液中加入异丙醇,异丙醇:转移液=1:1,上下颠倒混匀30 s(或用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]上下抽吸混匀),室温静置10 min。(5)4℃,12000 g,离心15 min,吸弃上清液。(6)清洗RNA:在装有RNA沉淀块的EP管中加入1 mL预冷的75%乙醇(DEPC水:无水乙醇=1:3),轻微震荡,使沉淀漂浮起来,不要将RNA沉淀块弄碎。4℃ , 7500 rpm, 离心5 min,吸弃上清,再重复以上步骤2次。(7)吸弃乙醇,将EP管再离心一次(4℃ , 7500 rpm, 离心2 min),用10 μL枪头尽量吸净剩余乙醇,将EP管水平静置于超净台内,干燥RNA至RNA团块变半透明状,吸取适量DEPC水溶解RNA沉淀,轻轻吹打,充分混匀,瞬时离心收集RNA于EP管底部(RNA溶解后立即置于冰上)。若不马上做逆转录,可将RNA保存于75%乙醇中。(8)RNA浓度及纯度用NanoDrop One检测RNA的浓度及纯度。具体操作如下:a.清洗基座:开机后滴加1-2 μL去离子水于基座,浸泡10s,吸干水滴,重复三次。b.空白校正:滴加1-2 μL DEPC水于基座上,放下检测臂,进行空白校正。c.样本混匀:可用漩涡振荡器或手指轻弹方式混匀待检测的RNA样本(切记勿用枪头吹打或离心样品的方式混匀样本)。d.检测样本:滴加1 μL混匀的RNA样本于基座,放下检测臂,检测样本。连续检测样本过程无需清洗基座,只需用无尘纸朝一个方向擦干基座即可。e.清洗基座:RNA检测完成后清洗基座,步骤同第一步。(9)反转录合成cDNA具体合成步骤参照MonScriptTM RTLLL ALL-in-One Mix with dsDNase KitMonScriptTM ChemoHS q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] MixKit试剂盒。a.反转录试剂盒中各试剂解冻,并置于冰上。b.轻弹各试剂并轻度离心。c.按照下表于EP管中添加反转录试剂。d.瞬时离心,上机温育,程序设定为37℃ ,2 min(去除基因组DNA污染)→ 55 ℃ ,15 min → 85℃ ,5 min(终止反应)→ 4℃,∞,得到cDNA。反转录生成的cDNA放入- 20℃冰箱保存,若想更长时间保存可放入- 80℃冰箱。

  • 包覆纳米金属颗粒的中空碳纳米管

    包覆纳米金属颗粒的中空碳纳米管

    两个问题,大家讨论:仪器:Zeiss场发射扫描电镜Merlin(1)如图所示为包覆纳米Fe的中空碳纳米管,5kV加速电压下SE检测器下能看到包覆的纳米Fe,In-lens检测器为什么含有Fe的部位呈现暗黑色?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408032120_508940_1872735_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408032120_508941_1872735_3.jpg(2)提高加速电压后,In-lens检测器下能很好的分辨出Fe在纳米管中的包覆情况。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408032122_508943_1872735_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408032122_508942_1872735_3.jpg(3)SE检测器和ESB检测器的效果比较http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408032129_508944_1872735_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408032129_508945_1872735_3.jpg

  • 荧光标记DNA探针在细胞核混悬液杂交中的应用

    (1)细胞核的分离: 将培养的细胞制成细胞混悬液,或以胰蛋白酶消化法于培养盖上收集培养细胞。应用MgSO4染色分离方法分离细胞核(Van den Engh et al 1986, 在Traok和Van Den Engh 34章 )。细胞混悬液浓度为5×106/ml。利用RNA酶消化后,使核从细胞分离,细胞核混悬液浓度为4~5×106细胞核/ml。(2)细胞固定和酸的处理:在5 ml试管内加冷的100%酒精不断旋转以达到满意的固定。在冰上停留10 min。在4 ℃离心(×150 g)10 min。重复加三次冷的100%酒精入试管内,离心,倾去。置于冰上10 min,再离心。然后加入相当核悬液1/2量的0.1 n HCl , 0.5% Triton X-100。室温停留10 min。加入IBM-0.25%Triton X-100(IBM配方:50 mmol/l KCl, 10 mmol/L MgSO4, 5 mmol/L HEPES pH8.0)。再离心,重复IBM漂洗(这时细胞核可在不染色情况下,以荧光显微镜观察)后,以2×SSC-0.1%Tween漂洗1×3min,继之加入等量2%的多聚甲醛在1×PBS-5 mmol/l MgSO4。在室温静置站立10min。倾去上清液,加IBm -Triton X-100漂洗,离心,使细胞核混悬液最终浓度为108/ml,(可用IBM-Triton X-100稀释约50倍,在血球计数器计数),混悬液镜检应含单个,完整的细胞核。(3)细胞核混悬液杂交①配制杂交混合液:甲酰胺5份,20×SSC1份,50%硫酸葡聚糖2份,pH调至7.0。此原液(stock solution)可贮存在4 ℃冰箱内。应用时加1份10 mg/ml鲱鱼精子DNA(herring sperm DNA)。②混合1 μl的细胞核混悬液(108/ml)与18μl的杂交混合液,充分混匀。将此19 μl混合液移入1.5 ml容积的Eppendorf 管中(核含量约为105)。③加入100 ng/每管的AAF标记DNA探针(如为生物素标记DNA探针浓度为20~40 ng/每管)。④置70 ℃10min使DNA探针和核DNA变性。⑤和组织切片与DNA探针杂交方法相较,不同的是在加热变性后切勿置冰上迅速冷却以终止反应,而应迅速转入37 ℃孵育过夜。(4)杂交后漂洗在每管中加入1.25 ml 50%甲酰胺-2×SSC(pH7.0),在42 ℃静置10~15min。偶尔旋转以助混匀。冷却至室温。加100 μl经dimethylsuberimidate(DEMS)处理的血细胞(107/ml)混匀,离心,室温,10min,轻弹试管使沉淀的小块散开,加入1.25 ml 2×SSC(pH7.0),42 ℃,继之,静置于室温10~15min,如前离心,再加1.25 ml IBM-Triton X-100,室温静置5min,离心。注:DEMS处理红细胞方法:经漂洗并离心去除白细胞和血清的红细胞在盐液如PBS中,细胞含量为108/ml,以K2CO3和DEMS溶液处理3次,第1次:K2CO3为20 mmol/L,DEMS为3 mmol/L,以后2次:K2CO3依然为20 mmol/L,而DEMS为10 mmol/L。在应用前将K2CO3和DEMS液混合加入红细胞混悬液中。在最后2次漂洗液中,应用100 mmol/l K2CO3将pH调至9~10。在25 ℃,15min后,加入50 μl,100 mmol/l 的柠檬酸(citric acid)/每ml细胞混悬液的浓度以达固定红细胞的目的。固定的红细胞离心倾去上清液后,用2×SSC稀释到108/ml,加0.1%叠氮钠可在4 ℃保存至少1年。(5)AFF标记的荧光显示:加200 μl的PBS含0.05%Tween和2%正常血清(NGS),轻轻振荡混匀,室温静置10min,加20 μl 1:100的单克隆抗AFF抗体,37 ℃孵育45min,加1.25 ml的PBS-Tween,室温静置10min,加20间歇性振荡,离心,倾去上清液,加200 μlPBS含0.05%Tween –2%NGS,振荡,室温静置10min,加20 μl的羊抗小鼠–FITC荧光标记抗血清,稀释度1:100~1:300。孵育于37 ℃ 45min,加1.25 ml PBS –Tween,室温静置10min,离心,倾去上清液。(6)生物素标记探针的荧光显示:加200 μl 4×SSC含0.1%Trion X-100 和5%BSA。室温静置10 min后,加20 μl抗生物素标记FITC抗血清15 μg/ml,孵育在37 ℃ 30min,以1.5 ml 4×SSc –0.1% Trion X-100洗1次,加入1.25 ml IBm –Triton X-100,室温静置10~15min,间歇振荡、离心。(7)荧光显微镜观察:将细胞核混悬液稀释于250 μl的IBM-Trion X-100中,轻加振荡混匀。为抗荧光褪色可加等量的抗褪色溶液至载片上的细胞核涂片上,选择适当的激发波长观察。(8)流式细胞计:将750 μl的细胞核混悬液通过流式细胞仪(Flow cytometry, FCM),DEMS处理过的红细胞作为对照(Df 530/30nm, Omega ·Optical Inc, Brattleboro, VT)。

  • 碳纳米管“鱼叉”能捕获单个脑细胞信号

    科技日报讯(记者常丽君)据美国物理学家组织网6月20日(北京时间)报道,美国杜克大学科学家开发出一种碳纳米管制成的“鱼叉”,可用于捕获单个脑细胞发出的信号。相关论文发表在6月19日的《公共科学图书馆·综合》上。 目前用于记录脑细胞信号的电极主要有两种:金属和玻璃。金属电极可用在活动物中,记录脑细胞群体活动峰值及其工作情况;玻璃电极既可用于检测峰值,也能检测单个细胞活动,但却脆弱易碎。以往实验中曾用过碳纳米管探针,但那种电极要么太厚会造成组织损伤;要么太短而限制了电极穿透深度,无法探测到内部的神经元。 最新研制出的碳纳米管“鱼叉”只有一毫米长、几纳米宽,可利用碳纳米管卓越的机电性能来捕获单个脑细胞的电信号。杜克大学神经生物学家理查德·穆尼和该校计算机科学与生物化学教授布鲁斯·唐纳德5年前开始合作,研究用纳米材料来缩小机械并改良探针。他们先以电化技术处理过的钨丝为基础,用自缠多壁碳纳米管延长它,制成了一毫米长的小棒,然后用聚焦离子束将纳米管磨锋利,使其一端逐渐变细到只有一根碳纳米管粗细,就像微小的“鱼叉”。杜克大学神经生物学家迈克尔·普拉特说:“这种碳纳米管‘鱼叉’结合了金属和玻璃电极的优点,无论是在脑细胞内外,它们都能记录良好,非常灵活而且不会碎,可以用来记录活动物的单个脑细胞信号。” 在穆尼的实验室,他们把“鱼叉”分别刺入小鼠脑组织切片和麻醉小鼠大脑中来实验,结果显示探针能传输脑信号,而且有时比传统的玻璃电极效果更好,信号中断的可能性更小。 新探针还能刺穿单个神经元,记录单个细胞的信号,而不是附近的一群神经元。唐纳德强调,这被称为细胞内记录,应是人们首次用碳纳米管在脑切片或完整脊椎动物大脑中记录单个神经元信号。 总编辑圈点 碳纳米管可用于研究单个神经细胞发出的信号,如今的成果就是极好的理论证明。这种对单个神经元信号及神经元之间相互作用的进一步挖掘,将会帮助我们更好地理解大脑的计算功能,从而弥补人类对自身“司令部”认知上的缺陷。从另一个角度看,杜克大学此次所采用的探针技术也十分有前途,可在多领域——包括从基础科学到人脑计算接口、脑组织假体等等方面都有着广泛应用,亦因此其进一步开发备受业界期待。 《科技日报》(2013-06-21 三版)

  • Cell:发现细胞中mRNA自我摧毁机制

    美国叶史瓦大学艾伯特-爱因斯坦医学院研究人员发现细胞利用第一个已知的机制控制mRNA的存活。这些关于mRNA的发现可能对逆转癌症不受调控的细胞分裂提供启示。2011年12月22日,该研究发表在《细胞》期刊上。该研究通信作者Robert Singer博士说,“我们研究的mRNA分子命运类似希腊悲剧。它们的命运在诞生那一刻就被决定了。”该研究是利用Singer博士之前开发出的高级显微镜技术在酵母细胞中开展的,该技术也是第一次允许科学家在单个细胞中实时观察单个分子。制造蛋白的指令编码在基因的DNA序列上,而基因则是位于每个细胞核染色体中。但是要制造蛋白,基因的DNA编码必须拷贝或者说转录到mRNA分子上,然后mRNA从细胞核迁移到细胞蛋白制造工厂所在的细胞质。因为一旦mRNA存在,它就能够作为模板制造蛋白。因此科学家长期以来就怀疑当一种蛋白水平积累到危害的程度时细胞必须存在降解mRNA的方法。Singer博士说,“细胞在这个时候会以某种方式摧毁的mRNA,但是没有人知道这是如何发生的。”在他们寻求这种机制时,Singer博士和他的同事们集中注意在两种基因SWI5和CLB2,它们编码的蛋白调节细胞周期---细胞分裂期间复杂的一系列步骤,首先复制它的遗传物质,然后将遗传物质均匀地分配到两个子细胞中。为了合适地规划细胞周期,SWI5和CLB2基因编码的蛋白水平必须得到精致控制,这就意味着这两种基因制造的mRNA将是有目的降解的首要候选物。引人注目的是,研究人员发现这些mRNA事实上携带着最终将自己摧毁的分子“自我摧毁定时器(self-destruct timer)”。当基因被转录时,称作启动子区域的基因部分起着打开基因的作用,这样DNA将被拷贝到mRNA上。这些艾伯特-爱因斯坦医学院研究人员发现SWI5和CLB2启动子区域也有其他作用:它们招募一种蛋白 Dbf2p,这样当mRNA分子被合成时,Dbf2p就与它们结合。这些mRNA--由 SWI5和CLB2基因转录而来而且携带Dbf2p蛋白---就使得它们从细胞核运输到细胞质。在细胞质中,蛋白Dbf20p通过与Dbf2p连接在一起以便搭上mRNA分子,而且这两种蛋白一起就导致这些mRNA分子快速降解。Singer说,“我们的发现表明蛋白水平必须得到仔细控制,制造蛋白的基因含有启动子区域,正是该启动子区域在mRNA分子刚产生的时候就决定着它们死亡的命运,而且启动子区域是通过招募蛋白Dbf2p---mRNA合成和它的最终降解之间常见因子---来标记新制造的mRNA来行使的。 Dbf2p在mRNA诞生开始就与mRNA附着在一起,然后在接收到指示不应当制造更多蛋白的信号后作出应答,从而下达摧毁mRNA的命令。”Singer说,尽管这些观察都是与酵母细胞相关,但是他相信这种控制人mRNA降解的过程“将也是非常类似的”,可能用于对抗癌症。他注意到,“人们一旦获得对控制细胞周期和细胞分裂的机制新认识,就可以提出针对性的治疗方法来调节癌症中不受控制的细胞分裂。”

  • Nature:酒精分解产物破坏造血干细胞(所以,少喝酒啊)

    2012年8月28日 英国医学研究理事会(MRC)分子生物学实验室的科学家们已经发现,人体内骨髓中的造血干细胞对酒精的主要分解产物是极为敏感的,这可能导致造血干细胞不可逆的DNA损害。相关研究在老鼠身上开展的,其结果发表于国际权威杂志Nature上,新的研究表明这种造血干细胞的DNA损害通常存在两个重要的控制机制:一种可以清除有毒分解产物(乙醛)的酶,一组能够识别和修复受损DNA的蛋白。缺乏这两种保护机制的小鼠由于血液干细胞闭塞导致骨髓造血功能衰竭。调查结果提供了一个解释,为什么有的人患有一种称为范可尼贫血(FA)的罕见遗传性疾病。患有这种疾病的人继承一个或多个FA基因突变,从而导致乙醛引起的DNA损伤得不到修复。因此,FA患者患发育缺陷、骨髓造血功能衰竭、血液和其他癌症的风险极高。这些人缺乏酶ALDH2来消除有毒的乙醛,因此可能对DNA的损伤异常敏感。作者认为,酒精消费量可能会导致造血干细胞永久性损坏,骨髓造血功能衰竭和加速老化,血癌风险增加。MRC分子生物学实验室KJ Patel博士说:造血干细胞是给我们的整个生命周期提供了源源不断的健康的血液细胞,随着年龄的增长,这些重要的干细胞变得不那么有效,因为其DNA受到损伤。我们的研究确定这种DNA损伤的一个重要来源,定义了干细胞用于对付这种威胁的两种保护机制。

  • CNAS申报问题,测试项目问题

    实验室质量手册附件列了实验室的测试能力,我们选取了部分项目准备申报CNAS,那么那些不申报的测试项目,在出具测试报告的时候,是否能和申报的出在一起?另外那些不申报的项目,是否需要列在质量手册里呢?相关的仪器设备是否需要一样的管理?谢谢!

  • 【分享】细胞中“宅男宅女”miRNA充当系统内信息传递“信号”大使

    一直被科学家当做“宅男宅女”的miRNA,最近却在研究中发现它们被赋予了比传统激素、细胞因子等信号蛋白更加高效、强劲的信息传递功能,即miRNA能够被一种细胞分泌出来后,经血液循环被运输到另外一种受体细胞内,通过降低其相应靶基因的翻译,从而调节受体细胞的功能。在7月9日出版的著名学术期刊《分子细胞》上,南京大学发表的一篇研究论文,将帮助人类更好地理解生物系统内信息传递的本质规律,揭示疾病发生发展的新机制,并发展出新的治疗策略与方法。 miRNA是一类动植物细胞内自然产生的非编码小RNA。以前,科学家一直认为miRNA是一类喜欢“宅”的分子,从“出生”起,一辈子就在一个细胞中活动。可是,南京大学生命科学院教授张辰宇、曾科和同事们,却在研究一种编号为miRNA150的微小RNA时,发现免疫系统中的单核/巨噬细胞在受到某种刺激后,会增加制造出miRNA150,并释放到循环的血液里,顺血流钻入内皮细胞中,刺激内皮细胞迁移。 以激素/细胞因子—受体及抗原—抗体等为代表的已知传统的细胞间信号传递方式,通常发生在特定种类的细胞,并且一般只有一个或数个分子直接作用。因而,这种通信方式是“单通道”的。而所有类型的细胞都具有分泌与接受miRNA的能力,并且在特定的生理与病理生理条件下,细胞可一次性分泌多种miRNA,在靶细胞中更能调节多个基因的翻译,所以,miRNA的信号传递方式是“双通道”或“多通道”的。 张辰宇说,糖尿病、红斑狼疮等在目前看来发生机理尚不明确的病症,在将来却有可能通过切断细胞间信号传递通道等方式进行防治。

  • 【分享】研究发现DNA中某物质可形成“堤坝”助细胞长寿

    意大利科学家最近拍摄到了DNA(脱氧核糖核酸)中的一种碱基——鸟嘌呤进行队列调整、形成防护“堤坝”的情形。这一“堤坝”可保护端粒,使之不缩短,从而延长细胞寿命。这一发现为肿瘤治疗和延长人类寿命的研究开辟了新道路。端粒是染色体末端的DNA重复序列,在正常细胞中,端粒会随着细胞分裂而逐渐缩短。细胞分裂次数越多,其端粒磨损越多,寿命越短。意大利博洛尼亚大学日前发表公告说,该校科学家詹皮耶罗斯帕达和在法国斯特拉斯堡大学工作的意大利人保罗萨莫里用高分辨率显微镜,拍摄到了鸟嘌呤的“战斗舞蹈”:这些鸟嘌呤由直线排列转变成四个一组,然后聚集在一起,构成类似古罗马军队龟甲阵的“堤坝”。当鸟嘌呤形成“堤坝”后,即可起到保护端粒的作用。两位科学家还发现,只要给予简单的化学刺激,比如在细胞中加入盐或者抽出盐,就可以对鸟嘌呤的排列进行控制。斯帕达在公告中指出,这一发现表明,鸟嘌呤既在细胞老化过程中也在肿瘤细胞繁殖中起关键作用。正常情况下,鸟嘌呤可维持端粒长度,延长细胞寿命,而在肿瘤细胞中鸟嘌呤也能维持其端粒的长度,这样肿瘤细胞就可以继续繁殖。因此,更清楚地了解鸟嘌呤排列形态和组合机制,就可以为研制治疗肿瘤或延年益寿的药物开辟新道路。(来源:新华网)

  • CNAS申报材料大家是如何装订的?

    早上好!我们就要递交申请了, 申报材料如何装订的呢? 除了申请书和附表外的其它资料大家是如何提供的?有没有提供电子档? 谢谢啊!

  • 【转帖】伊内兹特纳鲍姆:中美聚焦六类产品安全

    10月23日,美国消费品安全委员会主席伊内兹特纳鲍姆在上海接受本报专访时透露,从今年1月开始在美国出现的中国产石膏板安全事件,将从下周开始陆续公布调查报告。“下周我们将发布2个技术调查报告,11月中旬发布第三次技术调查报告。此后我们会继续与中国质检总局对话,来讨论我们应该如何来处理这些向美国出口石膏板的厂家,看他们能够如何来帮助受害的美国消费者。”  10月21日,特纳鲍姆在无锡出席第三届中美消费品安全峰会,并于23日随该峰会一起移师上海,此后她还将访问北京。  从今年1月开始,美国多个州的数百业主发现住宅内中国产石膏板散发异味,部分房主将他们出现的鼻子流血、鼻窦问题和头痛等问题归咎于中国产石膏板。今年3月,美国佛罗里达州民主党参议员尼尔森(Bill Nelson)和路易斯安那州民主党参议员兰德里欧(Mary Landrieu)联手提交一项议案,要求对某些中国产石膏板实施临时禁令。  特纳鲍姆向本报表示,该事件已经在美国形成一起大规模集体诉讼,目前已上诉至联盟法庭,一些石膏板进口商已经被要求接受调查。“仅2006年就有700万块石膏板在美国销售,所以非常难确定责任人,非常难追踪最初的制造商,但我们至少知道进口商是谁。当然我们也会回溯整个供应链上的制造商、进口商、建筑商等各个环节。”  特纳鲍姆表示:在石膏板问题调查方面,美国消费品安全委员会已经和中国质检总局合作了几个月。“在技术层面,我们要设法找出石膏板中到底是哪一种物质对住户的健康造成威胁。质检总局已经派了2名科学家到美国,到佛罗里达和路易斯安娜州的住户家进行调查。我们也派了5名技术人员来到中国,他们进入了一些制造商的工厂,并进行了采样,带回美国进行检测。”  特纳鲍姆对本报表示,这起事件暴露的最核心问题是美国对于石膏板至今没有一个安全标准,美国将着手制定石膏板安全标准。“这需要几年的时间,因为首先需要获得一些技术上的标准,然后再进行公开听证等立法程序。”  特纳鲍姆透露,美国也可能会参照儿童玩具、儿童营养品方面的安全认证制度,今后在石膏板进入美国市场之前,中国制造商或者美国进口商必须提交安全证书。  佛罗里达州参议员尼尔森甚至建议奥巴马总统将石膏板问题列入他11月的访华议题之中。特纳鲍姆告诉本报,这也是因为76%的石膏板问题事件发生在佛罗里达州。特纳鲍姆并不确信这一话题会出现在奥巴马总统与胡锦涛主席11月的直接对话中,她强调美国将通过与中国质检总局的对话机制来解决这个问题。“我们将继续与质检总局合作,我们之前几个月的合作非常顺利,我们会看他们将继续为我们提供哪些新的支持。”  特纳鲍姆在接受本报专访时,也对其此次访华目的进行了澄清:“最主要的目的是与中方讨论如何建立对所有产品的安全保障体系,讨论制造商应该如何采取最佳实践以确保产品安全。”  而在她启程之前,美国媒体将其访华主旨定义为:“要求中国分担美国家庭因为中国产石膏板造成的数十亿美元损失”。  特纳鲍姆向本报指出,在她此次与中国国家质量监督检验检疫总局的对话中,石膏板并不是唯一议题。“我们主要围绕儿童用品、烟花、电子产品、打火机、石膏板、全地形车(ATV)六大产品领域的安全问题进行讨论。”

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