单抗药

p 　　阿法拉伐近日宣布，截至7月，阿法拉伐的高速碟片离心机已广泛用于90%以上的国内单抗药物生产企业中。 /p p style=" text-align: center " img width=" 600" height=" 332" title=" Q.jpg" style=" width: 441px height: 254px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/b7373ddf-c48a-47a8-b57c-9ad59e28df79.jpg" / /p p 　　《我不是药神》全国热映，让人们再次关注到了社会上的特殊群体 -- 白血病患者的生存现状，治疗慢性粒细胞白血病的药物价格昂贵，让仿制药的贩卖商和白血病患者们都铤而走险，徘徊于触犯法律的边缘。影片中的抗癌药物“格列卫”是一种化学制剂的抗肿瘤药物，虽然具有靶向性，只消灭有害的癌细胞，但毕竟是化学合成的药物，有一定的副作用。现实中，我们和电影中的程勇一样，相信会越来越好。现实也的确如此，梦想已经照进现实。 /p p 　　中国的生物制药产业发展迅猛，技术创新不断涌现。生物工程制备的药物是一种大分子蛋白药物，通过生物细胞表达的药物，产品更单一，副作用更微小。国内的生物制药企业正大天晴、石药欧意均已研发生产了治疗多种癌症的单克隆抗体药物。 /p p style=" text-align: center " img width=" 600" height=" 199" title=" W.jpg" style=" width: 441px height: 160px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/831bb7a8-04a7-4b17-aba9-6a88809041a4.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　 span style=" font-size: 14px " 阿法拉伐高速碟片离心机在单克隆抗体药物分离应用中“柔和有度” /span /p p 　　 strong 在生产单克隆抗体药物的过程中，哺乳动物细胞会经过分离和培养液澄清纯化工艺-细胞培养-& gt 离心分离-& gt 深层过滤-& gt 进一步纯化，工艺中会用到一款阿法拉伐核心产品 -- 高速碟片离心机 CF 系列， /strong 离心分离工序后，进入后续深层过滤的膜包数量会大幅减少，从而降低了生产成本。在离心分离工艺中， strong 客户时常担心的问题在于：1)由于哺乳动物的细胞无细胞壁，对剪切力非常敏感 2)培养液蛋白含量丰富易产生气泡。因此对离心机的分离性能要求非常高。 /strong 在分离时，细胞一旦破碎，核酸及杂蛋白就会释放，以及气泡的产生都会严重影响下游深层过滤和层析，最终影响抗癌药物的质量和疗效。 /p p style=" text-align: center " img width=" 600" height=" 533" title=" R.jpg" style=" width: 426px height: 308px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/64a31659-5acb-4345-903a-f97f963344c5.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" font-size: 14px " 阿法拉伐高速碟片离心机 /span /p p 　　保障生命的安全，尤其是用药的安全，本身是一件严肃的事。 strong 阿法拉伐 CF 系列高速离心机具有独一无二的下进料专利设计，这让加速剪切力变得缓慢而柔和，最大可能地保证了细胞的完整性。 /strong 同时又以较高的分离因素运行，更好地去除培养过程中因细胞自溶产生的少量碎片。 strong 其独特的全密封设计，杜绝了气泡产生的可能性，同时又隔绝了空气，这让离心过程温升小，保持蛋白的活性。并且，配备了CIP 在位清洗及 SIP 在线蒸汽灭菌，实现了360度无死角清洗。 /strong 可以说，这款离心机全方位守护了高品质的单抗药物的生产，通过“柔和有度”的低剪切分离技术，最大程度降低了下游的纯化难度，确保目标蛋白的活性。 /p p & nbsp /p

与传统小分子药不同，单抗类蛋白药是非均一性的结构复杂的大分子，因此使这类原研药或仿制药的研发与质控工作难度增大。通过液相色谱-质谱联用技术（LC/MS），结合蛋白分子量的测定、异构体、氨基酸修饰、糖基化修饰以及聚集情况分析等多种检测手段，可对单抗类药物进行全面的结构表征。 在文献《Physicochemical and Functional Comparability Between the Proposed Biosimilar Rituximab GP2013 and Originator Rituximab》中提到了将利妥昔单抗与其生物类似药（GP2013）之间，针对各项物化性质和功能性指标进行了对比分析试验。 利用尺寸排阻色谱法（SEC）的分子空间结构不同的原理可对抗体的多聚体、抗体片段以及PEG蛋白等进行有效分析。在该文献中，对原研和仿制药样品的非均一性分析（抗体聚集情况分析）时使用了TSKgel G3000SWXL色谱柱（请参照该文献2.12 SEC,CE-SDS,AF4部分）。 硼酸盐亲和色谱法多用于对糖或糖蛋白等生物分子进行分离。该文献中，使用了亲和色谱柱TSKgel Boronate-5PW对GP2013样品中糖基化和未糖基化的抗体异构体进行了分离。（请参照该文献2.13 Boronate Affinity Chromatography部分） 在该文献2.14 Glycan Analysis部分中，通过N-糖苷酶F来释放单克隆抗体Fc部分上的糖链，并对游离的N-末端糖链进行2-AB荧光标记后进行糖基化分析。其中使用到了TSKgel Amide-80（2.0 mm ID X 15 cm，3 um）色谱柱用来分离2-AB标记的糖链。 TSKgel Amide-80亲水相互作用（HILIC）色谱柱适用于亲水性低分子、核酸以及糖类等化合物的分离分析。在单抗药物分析应用上，TSKgel Amide-80常用来分析结合在抗体上的糖链的结构差异性。 为了满足广大色谱工作者对抗体药高效分析的需求，东曹公司作为分离纯化产品的生产商，不断致力于开发出在色谱分离度、灵敏度以及分析速度上具有革命性提升的色谱柱产品。特别是在对抗体药物质量控制中的HPLC检测方法上可以提供完备的解决方案。

p 　　 strong 中国首个肺癌免疫治疗PD-1单抗药物Opdivo(欧狄沃，纳武利尤单抗注射液)的价格公布了。中国O药上市建议零售价：40mg/10ml 4591元(RMB)，100mg/10ml 9260元(RMB)。 /strong /p p style=" text-align: center " strong img width=" 598" height=" 401" title=" 1.jpg" style=" width: 428px height: 250px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/5a14dbdc-444e-40d6-9295-869b7501666c.jpg" / /strong /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 176, 240) font-size: 18px " strong 亲民价格 /strong /span /p p 　　很多患者可能还是会疑惑，那么这个价格较之之前国外用药，或者是港澳台用药便宜了多少呢?我们一起来算算吧。 /p p 　　PD-1/PD-L1单抗注射剂是按照患者体重来计算用药量的，所以价格也是和患者体重有关。那么按照这样，大家可以参照下面的表格，来看看对比。 /p p 　　先来看看所有PD-1/PD-L1抗体在国外的价格吧 /p p style=" text-align: center " img width=" 599" height=" 444" title=" 2.jpg" style=" width: 436px height: 278px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/97a861fc-efb5-483f-8bbf-703c0d74aac5.jpg" / /p p 　　下面是常用的两种药物澳门购药和国内的价格对比 /p p style=" text-align: center " img width=" 599" height=" 202" title=" 3.jpg" style=" width: 442px height: 137px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/f91d37cc-e144-457e-a8db-0342b51e8d2d.jpg" / /p p 　　也就是说，中国的O药较之前港澳的价格足足降低了一半。但是这个价格确实对于很多家庭来说是很困难的。 /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 176, 240) font-size: 18px " strong 赠药与医保 /strong /span /p p 　　那么这次的也提到了关于赠药和医保的政策，仍然在谈判，相信不久的将来会有好消息。另外，关于是否进入医保，也在商讨。如果不能进入医保的话，就会有相关的赠药政策，而且所有符合条件的患者均可以从用药第一天开始计算!大家一定要记得留好购药的发票哦! /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 176, 240) " 温馨提醒： /span /p p 　　要特别注意的是，未来赠药的人群，必需是O药说明书上面的适应症的患者： strong EGFR阴性和ALK阴性、既往接受过含铂方案化疗后疾病进展或不可耐受的局部晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)成人患者。 /strong /p p style=" text-align: center " 　 span style=" font-size: 18px " strong span style=" color: rgb(0, 176, 240) " 　如何购买? /span /strong /span /p p 　　O药将在2018年8月28号开始售卖，因为医院采购药品的周期和流程比较长，新药上市时不能很快的进到医院，新药上市后会先在DTP药房进行销售。 /p p 　　据我们了解，O药上市后将同时覆盖大约五十个城市，每个城市有1-2家药店销售，具体城市包括北京、石家庄、唐山、大庆、哈尔滨、长春、大连、沈阳、济南、青岛、烟台、威海、太原、西安、天津、乌鲁木齐、东莞、佛山、湛江、广州、深圳、珠海、成都、泸州、重庆、合肥、安阳、洛阳、南阳、郑州、武汉、长沙、常州、淮安、南京、南通、苏州、泰州、无锡、徐州、盐城、连云港、扬州、上海、福州、厦门、杭州、宁波、绍兴、台州、温州等。 /p p 　　去外地购药的患者应该注意，O药需要保证 strong 2-8℃贮存和运输 /strong ，否则会影响药品质量。 /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(0, 176, 240) " strong span style=" font-size: 18px " 　　专家说 /span /strong /span /p p 　　 strong 国内肺癌专家吴一龙教授 /strong 也曾表示：“与传统治疗方式不同，免疫肿瘤治疗并不直接作用于肿瘤本身，而是通过激活患者自身的免疫系统来抗击肿瘤，具有毒副作用小、疗效持久等特点。作为国内首个获批上市的免疫肿瘤(I-O)治疗药物，欧狄沃& #8482 为医生及患者提供了全新的治疗选择，在中国有望成为非小细胞肺癌二线治疗的新标准。” /p p 　　“在全球大多数国家和地区，纳武利尤单抗注射液已成为二线非小细胞肺癌的标准治疗。作为中国目前唯一获批用于肺癌治疗的PD-1抑制剂，纳武利尤单抗注射液的上市毋庸置疑将成为中国癌症治疗领域的里程碑，有望填补国内免疫肿瘤治疗的空白，为更多中国晚期非小细胞肺癌患者带来长期生存的希望。” /p p 　　“要实现‘健康中国2030’的目标，做好肺癌这一中国第一癌症的防治工作显得尤为重要。我们既要促进创新药物的可及，同时也需要切实提升创新服务的可及，通过探索创新性的医疗模式，真正做到以患者为中心。” /p p /p

治疗性单克隆抗体结构相对小分子更加复杂。不仅仅是序列影响蛋白活性，同时蛋白的翻译化修饰也会影响。常见的修饰包括脱酰胺、二硫键、末端赖氨酸丢失和糖基化修饰，糖基化修饰是相对复杂的特殊翻译后修饰，包括N糖修饰和O糖修饰，N糖基化修饰主要发生在蛋白质一级结构中的特征性序列NXT(其中X是除脯氨酸外的任意氨基酸)，修饰存在一定规律，O糖修饰可以与任何含有羟基基团的氨基酸连接，丝氨酸(S)和苏氨酸(T)是最常见的修饰位点，因此更加复杂。糖型结构会显著影响治疗效果，是单抗药物质量监测的重要关键质量属性。 抗体生物类似药在面临生产和临床过程中，需要保证质量的一致性，糖基化分析是重要的关键分析流程。糖修饰异质性会间接影响药效，因此需要在多批次生产过程中，保证工艺和质量的稳定性。N糖根据不同的连接方式使得N-糖基化的五糖核心结构分为高甘露糖型、杂合型和复杂型3 种类型，FDA，EMA 等生物类似药指导原则都鼓励研发单位采用最新的分析技术手段，对生物类似药和原研药的糖基化修饰位点、程度以及寡糖的组成进行深入比较分析，例如可以利用岛津液相以及质谱等设备可进行由浅入深的糖型修饰分析，进而对产品生产过程中严格监测。岛津在糖基化分析方面有三大护法守护。下面一一道来。 岛津抗体糖型分析质控解决方案 第一护法-高分辨质谱LCMS-9030 LCMS-9030四极杆飞行时间质谱仪使高速度、高灵敏度的四极杆质谱与TOF技术的紧密结合。融合岛津先进工程技艺的DNA，打造出速度与出色性能兼备的全新一代高分辨质谱仪，以优异表现轻松胜任定性和定量分析挑战。对完整蛋白以及亚基水平的糖型进行初步分析。 第二护法-MALDI-MSMALDImini-1 MALDImini-1数字离子阱（DIT）体积极小，功能强大，可实现质谱多级的检测。针对糖肽分析、抗体化学修饰位点、未知生物分子结构分析，蛋白质、多肽、翻译后修饰肽等都有专向解决方法。 第三护法-高效液相色谱系统Nexera Bio 从完整蛋白或者亚基水平分析，利用质谱可快速的分析带有糖基化修饰蛋白分子量。可以分析简单的糖型结构，速度比较快，重现性较好，但是精细的糖型结构也不能很好的监测清楚，所以可以搭配糖肽水平和游离寡糖水平一同研究。 首先，第一步从完整蛋白水平，利用岛津LCMS-9030四极杆飞行时间质谱仪从完整分子量水平分析抗体的糖修饰情况如下表所示，鉴定并分析相关糖型的分布。 不同糖型抗体形式分子量测定结果与理论对比 第二步可以从糖肽水平分析，通常抗体通过使用蛋白酶酶切后，产生分子量大约为0. 5 ～ 5 kDa 的小肽，采用色谱或电泳分离后再进行MALDI-MS 或ESI-MS 分析。利用质谱分析糖肽序列、寡糖组成，岛津MALDI-TOF和MALDI-数字离子阱质谱可以分析相关糖肽组成分析。 例如针对血清糖蛋白，使用MALDI-离子阱质谱分析得到的衍生N-聚糖谱图，如下图所示：血清糖蛋白N-聚糖质谱解析谱图 第三步可以从游离寡糖层面分析，药典相关要求，针对游离寡糖的分析通常有三种方法: （第一法）亲水相互作用色谱法、（第二法）毛细管电泳法、（第三法）高效阴离子色谱法，通过N-糖苷酶F对单抗N糖进行酶切后，使用2-氨基苯甲酰胺( 2-AB) 或2-氨基苯甲酸( 2-AA) 对寡糖进行标记即可进行糖型分析。针对唾液酸分析，岛津超高效液相色谱结合荧光检测器建立了抗体中唾液酸Neu5Ac 和Neu5Gc 含量测定，结果如下图所示： 唾液酸液相分析定量标准曲线 单抗糖基化是作为重要的翻译化修饰，宿主细胞培养工艺过程会影响不同的修饰构成，岛津不仅可以提供糖基化质量分析质控方案，同时针对培养工艺优化以及工艺残留物监测，提供特色的培养监测在线和离线分析解决方案，为了更好地把握产品质量，力图让产品质量更加稳定和安全。虽然生物类似药与原研药批次糖基化修饰结构差异依然存在，但在生物类似药相似性评价和适应症外推的征途上还有许多路要走，岛津依旧陪伴左右。

大家好，本周为大家分享一篇发表在Journal of the Ameican Society for Mass Spectrometry上的文章，Top-Down Characterization and Intact Mass Quantitation of a Monoclonal Antibody Drug from Serum by Use of a Quadrupole TOF MS System Equipped with Electron-Activated Dissociation1，通讯作者是来自美国宾州葛兰素史克的John F. Kellie博士。　　最近，SCIEX开发了一种新的Q-TOF质谱系统，该系统具有允许调节的电子能量，能够将快速ECD作为电子激活解离(EAD)技术的一种操作模式，并能实现灵敏的大蛋白检测和定量。此外，通过采用一种新的trap-and-release特性，促进TOF加速器(Zeno阱)中心离子的空间质量聚焦，提高了碎片离子检测的占空比和信噪比(S/N)。本研究使用这个新型质谱仪器，对从血清中提取的一种生物治疗性单克隆抗体(mAb)进行了LC-MS分析，并进行了完整质量的检测、定量和亚单位表征实验。　　样品处理和数据分析的流程如图1所示。简单来说，将研究的治疗性单抗药物注射到恒河猴中，使用自动免疫亲和试剂盒从猴血清中免疫捕获抗体。完整的单抗和还原的轻、重链进行LC-MS分析，并选择重链和轻链进行MS/MS分析和片段离子测定。在SCIEX OS软件中使用完整单抗和还原轻链的MS1数据进行定量。通过ProteoWizard文件转换处理亚基的片段离子数据，然后使用MASH软件套件中的THRASH脱同位素算法进行处理。最后将去卷积质量列表导入ProSight PC进行表征。　　图1. 从血清中免疫捕获GSKmAb的LC-MS样品分析及数据处理流程。治疗性单抗轻链的Top-down MS示例数据如图2所示。抗体亚基达到电荷态分辨率 ，通过去卷积计算平均质量为23197 Da。对于碎片离子，实现了同位素分辨率，从中可以确定碎片离子质量(图2C)。在图2B中，使用SCIEX的内部研究软件，MS/MS谱显示了可能匹配的片段的叠加。图2C展示了去卷积后的片段离子的代表性数据。为了确定匹配的片段离子，使用THRASH脱同位素算法生成了高达30000 Da的精确质量。　　　　图2. 从血清中免疫捕获和TCEP还原后GSKmAb轻链的表征分析示例。该Q-TOF仪器同时配备了EAD和CID功能，虽然两种解离方式可以在一次注射中进行，但作者进行了两次单独的注射。一次注射用于ECD MS/MS，第二次注射用于CID MS/MS。亚基的MS/MS覆盖率如图3A所示。ECD和CID结合时，轻链有49%的氨基酸残基被裂解。对于重链(图3B)，获得了21%的残基覆盖率。　　　　图3. 使用CID和EAD的组合对(A)轻链和(B)重链的表征结果。在这里，b-和y离子用蓝色钝角表示，c-和z离子用红色直角表示。接着，作者介绍了使用提取离子色谱图累积面积和去卷积质谱图累积面积两种方式的完整抗体定量研究。这里，将不同水平的mAb作为标准物质添加到血清中，建立2 ~ 50 μg/mL范围内的浓度与测定面积的线性关系。选取了两个电荷态的离子提取色谱和去卷积质量峰进行面积的累积(图4A, B)。MS数据显示，定量下限时(LLOQ=2 μg/mL)，观察到完整的单抗电荷态分布的S/N约为4。对于定量上限(HLOQ=50μg/mL)，观察到的S/N约为50(图4C, D)。在这里，校准曲线显示出良好的线性响应(所有数据的r2≥ 0.97)，完整单抗定量的准确度和精密度值在15%以内。　　　　图4. 完整单抗定量示例数据，使用基于XICs和去卷积数据的两种不同的定量方法。　　本文介绍了自上而下的数据处理工作流程，这对于从MS/MS数据中获取信息至关重要。在XIC或去卷积质量水平上的生物分子定量也得到了证明，并表明这两种方法都足以从血清中测定单抗浓度。最后，作者预期这类能够实现完整蛋白质表征的多功能质谱系统将被更广泛地用于生物样本分析。　　撰稿：夏淑君　　编辑：李惠琳　　文章引用：Top-Down Characterization and Intact Mass Quantitation of a Monoclonal Antibody Drug from Serum by Use of a Quadrupole TOF MS System Equipped with Electron-Activated Dissociation

p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai font-size: 14px " 近年来，流式细胞仪市场“动作”频繁。2018年9月，安捷伦以2.5亿美元收购国产流式制造商ACEA，被业内称“靠谱国产品牌又少一个”。2018年10月，Luminex同意以7500万美元收购默克的流式细胞仪部门(于2019年1月完成此项收购)，将Amnis和Guava品牌收入囊中，从而扩大了Luminex在生命科学研究中的领域。2019年1月，中生苏州自主研制的流式细胞仪已在吉大一院投入临床使用。2019年2月，达科为与必达科共同推出Exflow品牌流式细胞仪。2019年2月，国产厂商赛雷纳也推出流式细胞仪新品。2019年，唯公科技研发的Easycell系列流式细胞仪也将获证上市。此外，博奥生物、竞天生物等国产厂商也于近年纷纷发布流式细胞仪产品。 /span br/ /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai font-size: 14px " 　　目前国内流式细胞仪厂商已达20余家，流式细胞仪技术不断发展，仪器不断小型化, 融合微流控、显微成像技术，未来应用前景十分广阔。流式细胞仪的发展已有数十年，为何各厂商近年纷纷选择布局流式细胞仪市场?流式细胞仪市场有什么样的特点?为了对我国流式细胞仪市场发展情况作必要解读和评价，仪器信息网邀请 strong Namocell中国地区负责人陈科立 /strong 谈一谈对流式细胞仪的看法。 /span /p p a href=" https://www.instrument.com.cn/zt/liushixibaoyi" target=" _blank" span style=" font-family: 宋体,SimSun text-decoration: underline " strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) font-size: 14px text-decoration: underline " 点击进入 span style=" color: rgb(255, 0, 0) font-size: 14px text-decoration: underline " “进击的”流式细胞仪 /span 专题，解锁更多流式行业信息！ /span /strong /span /a /p p style=" text-align: center " img width=" 474" height=" 355" title=" 24138c9caa723496bb2962246374e2e.jpg" style=" width: 474px height: 355px " alt=" 24138c9caa723496bb2962246374e2e.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/c67d8283-ac6d-479b-aeb7-ff3d2f7ccb9b.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong Namocell中国地区负责人陈科立 /strong /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 仪器信息网：您认为流式细胞仪的中国市场与全球市场有哪些不同?请您谈谈流式细胞仪在中国的市场前景以及未来机遇。 /strong /span /p p 　　 strong 陈科立: /strong 流式细胞仪在中国的市场潜力是非常大的，从一个侧面也可以反应出来，那就是多个国产的品牌都开始进入这个市场，与国外品牌竞争市场份额。未来在中国的流式市场还是有比较大的增长空间。在科研领域，国家每年投入的科研经费依旧维持在一个比较大的体量，并且稳步增长，尤其已生物医药作为发展重点 在临床方面，随着相应试剂盒的不断丰富，临床检测项目不断向二级医院扩展，市场对流式仪器的需求量大大增加 在工业领域，生物医药行业的不断发展，新公司不断增多，对很多具备研发能力的公司来说，流式也成为“标配”项目。 /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 仪器信息网：贵公司的流式细胞仪技术特点是什么?看好的细分市场领域哪些? /strong /span /p p 　　 strong 陈科立: /strong Namocell的仪器结合了流式细胞术的经典原理以及微流控芯片的技术优势，使得仪器的操作更加简便，分离的细胞具有更好的活性。相比于传统的流式分选仪，Namocell采用更小的鞘液压力(不到2 psi)，这样在分选的过程中对细胞的损伤极小，分选出来的细胞具有非常好的活性，可进行单细胞培养 Namocell采用了一次性分离芯片，从加样、检测、分离都在这个芯片上完成，可以完全避免样品间交叉污染 操作简便，只要半小时培训即可上机熟练操作，相比传统流式分选仪，无需专人维护。 /p p 　　目前Namocell主要关注的细分市场集中在单细胞测序领域以及单抗药物的开发领域。在单细胞测序领域，Namocell可以很好的作为例如10X等高通量单细胞测序的一个技术补充，在样品数量极少或者长片段DNA测序的情况下，能够发挥出极大的作用 在单抗开发领域，Namocell可以在前期抗体筛选，中期细胞株构建等环节给用户带来非常大的帮助。目前在这两个领域已经有了一些重量级用户，例如：哈佛、斯坦福、麻省理工、Genentech、FivePrime、上海交大、中科院上海生科院等。 /p p style=" text-align: center " img width=" 495" height=" 233" title=" 30019f47a85ce53560d19a1201fec99.png" style=" width: 495px height: 233px " alt=" 30019f47a85ce53560d19a1201fec99.png" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/1fdb6ebb-b71a-49f2-b1e0-e0172d33e4ee.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong Namocell流式细胞仪 /strong /p p strong 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 仪器信息网：请介绍贵公司流式细胞仪技术的发展历史。 /span /strong /p p strong 　　陈科立: /strong Namocell是一个非常年轻的公司，2010年成立于美国的硅谷，借助与斯坦福的密切合作发展至今。公司自主研发的微流体单细胞分选平台，使复杂的单细胞分选变得极其简单快速，极大地推动了单细胞分析在基础研究和临床的上应用。我们的产品已在细胞株的选育，单克隆抗体的筛选，细胞基因编辑，癌症液体活检，癌症免疫治疗，产前基因筛查，噬菌体展示，单细胞基因组等多方面得到广泛的应用。目前Namocell已经与美国哈佛大学、斯坦福大学、马萨诸塞州总医院癌症研究中心等科研院所以及Genentech、Five Prime Therapeutics、Juno等生物公司有着广泛合作。 /p p style=" text-align: center " span style=" text-decoration: underline " & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp /span & nbsp & nbsp & nbsp strong 欢迎广大流式圈内人士加入 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " “流式细胞仪用户交流群” /span 。在群里你可以和各路大神零距离沟通，不定期会有福利! /strong span style=" color: rgb(192, 0, 0) " (若二维码过期，请添加小编微信拉你进群) /span /p p style=" text-align: center " img width=" 189" height=" 252" title=" 微信图片_20190402101139.jpg" style=" width: 189px height: 252px " alt=" 微信图片_20190402101139.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/ac3190fd-d59c-45af-80b6-00ad93785913.jpg" / /p p 以下是小编微信二维码，添加小编微信好友，备注上单位及姓名，小编会拉你进交流群的哦~心动不如行动，快快加入吧! /p p br/ /p p style=" text-align: center " strong /strong /p p style=" text-align: center " img width=" 162" height=" 162" title=" 群主二维码.jpg" style=" width: 162px height: 162px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/13c13f39-6e9a-44fc-aef0-4e4747a0f0a8.jpg" / br/ /p p style=" text-align: center " strong 仪器信息网生命科学官微 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " “3i生仪社” /span 上线啦!关注了解更多生命科学干货资讯！ /strong /p p style=" text-align: center " img width=" 160" height=" 160" title=" 新 公号icon.jpg" style=" width: 160px height: 160px " alt=" 新 公号icon.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/d0de24d5-b7a9-442b-8c79-a168d5938257.jpg" / /p

背景介绍 抗体药物是全球生物药领域中增长最快的细分领域之一，FDA批准上市的抗体药物已超100种。单克隆抗体药物在临床治疗、体外诊断等医学领域应用更加广泛，适应症不断扩大，特异性、均一性、靶向性不断完善。抗体类药物凭借有效、精准、个性化的优势，已经迅速成为全球制药开发的热点。同样，抗体筛选技术也在不断突破发展，先后出现了杂交瘤单克隆抗体技术、抗体库展示技术、单B细胞克隆技术等。 然而三种抗体筛选技术路线在筛选出特异性强和亲和力高的抗体之前都面临着工作量大、周期长的困境，在竞争激烈的抗体药物开发赛道下，对于药企来说时间成本是最为看重的，上海汉赞迪是国内为数不多的自动化设备制造商之一，可提供多种类型设备和自动化解决方案助力抗体药物开发。抗体筛选技术路线 目前抗体筛选技术大致可分为三类，杂交瘤技术，包括小鼠、大鼠、仓鼠和家兔等杂交瘤技术；抗体库技术，包括噬菌体展示抗体库、无细胞分子展示抗体库（核糖体展示、mRNA展示和DNA展示抗体库）和细胞表面展示抗体库（细菌表面展示、真菌表面展示、酵母表面展示和哺乳动物细胞表面展示）、单B细胞克隆三大类，如图1所示。图1 抗体筛选方式及流程示意图杂交瘤技术以小鼠杂交瘤最为常用，体外抗体库展示技术以噬菌体为代表，以下介绍三种技术路线的详细流程：01小鼠杂交瘤制备图2 小鼠杂交瘤制备单克隆抗体流程详细流程：1. 小鼠经免疫全部完成后，在无菌条件下去除脾脏，并完成脾淋巴细胞的制备2. 选择与免疫动物相同品系的骨髓瘤细胞进行体外培养 3. 将两种细胞按一定比例混合后加入PEG进行融合4. 放入HAT培养基中进行培养，去除未融合的细胞、融合的B淋巴细胞、融合的瘤细胞，仅保留杂交瘤细胞5. 利用特定的方法如ELISA等，筛选能产生抗体的杂交瘤细胞6. 进行杂交瘤细胞单克隆化已确保得到分泌抗体稳定且完全同质的单克隆，如有限稀释法、软琼脂法、单细胞显微操作法、单克隆细胞集团显微操作法和荧光激活细胞分类仪（FACS）分离法。最常用的为有限稀释法，如按0.5个细胞/孔进行铺板，尽可能保证每个孔能生长的为单个细胞，通常需要经过2-3轮单克隆化7. 利用特定的方法如ELISA、流式细胞法、功能实验等，筛选能产生与所需抗原结合的抗体的杂交瘤单克隆细胞8. 杂交瘤单克隆细胞冻存可用于后续生产鼠源抗体，包括腹水法或体内培养法9. 另一方面，需对目标杂交瘤细胞所表达的抗体经常测序鉴定，以便于进一步研究优化，即图2右侧展示的流程:a. 抽提杂交瘤单克隆细胞中的总mDNA；b. 反转录获得cDNA；c. 以cDNA为模板，进行PCR扩增得到重链和轻链片段；d. PCR产物进行TA克隆构建到表达载体里；e. 将载体进行测序，得到DNA序列，并翻译成氨基酸序列，得到抗体的全长序列；f. 同时载体可进一步转染至相应细胞内用于生产相应抗体。 在整个杂交瘤抗体制备过程中，小鼠免疫后进行血清抗体效价检测（ELISA），融合后进行亲和力初筛（ELISA），单个杂交瘤细胞筛选（有限稀释法或FCM），单克隆抗体功能实验（ADCC/CDC等）以及后续需要进行的提取和质粒构建实验都有着重复性操作、工作量大和人为操作误差等问题，汉赞迪的实验室自动化工作站，可以整合离心机、酶标仪、洗板机、细胞成像仪等各类设备完成自动化、高通量各实验模块的工作，大大提高实验效率和结果一致性。02噬菌体展示技术图3 噬菌体展示技术制备抗体流程详细流程1. 进行动物免疫：若使用天然库或合成文库则此步骤不需要进行2. 血清效价测定：若使用天然库或合成文库则此步骤不需要进行3. 淋巴细胞的分离纯化4. 总mRNA的提取 5. 第一链cDNA反转录合成及轻链、重链可变区（scFV DNA）扩增6. scFV DNA和噬菌体载体酶切、连接（重组质粒构建）7. 转染大肠杆菌，重组噬菌体制备8. 库容量的滴定9. 噬菌体抗体库淘选10. 获取特异性和亲和力较高的抗体序列11. 建表达载体和筛选稳定高表达细胞株 噬菌体文库构建过程中，血清抗体效价检测（ELISA），RNA提取，PCR体系构建、质粒构建后纯化（磁珠法）、库容量的滴定（梯度稀释），噬菌体淘选（ELISA或磁珠）、特异性和亲和力测定中板复制、液体转移等，后续工程菌株构建中表达载体构建、表达产物检测、单细胞分离都有着工作量大、人为易失误等问题，汉赞迪的实验室自动化设备，既可以单机使用解决实验中繁琐和耗时的步骤也可以整合各种模块自动化、高通量完成实验流程，可极大提升实验效率。03单B细胞克隆技术图4 单B细胞制备抗体流程详细流程1. 从免疫的动物或人体获取外周血单个核细胞2. 进行抗原特异性结合B细胞分选3. 单细胞PCR技术扩增lgG抗体重链和轻链可变区基因4. 质粒构建和转染5. 表达、筛选抗原特异性抗体 单个B细胞克隆技术，用流式细胞仪进行单个B细胞分选需进行实验体系制备，抗体序列克隆构建重组质粒，工程菌株生产的抗体进行筛选（ELISA）使用以移液工作站为核心的自动化设备完成高重复性的实验步骤，可加快实验进程并获得可重复性的结果。 此外，汉赞迪也在单克隆抗体药质控阶段提供相应自动化方案，在抗体生产中，经各种纯化工艺得到的抗体原料药必须符合特定的要求和期望的规格，抗体原料药的规范也有助于设计净化过程，确认最终生产工艺，因此对不同纯化阶段，不同批次的抗体药的质控包括效能、宿主蛋白残留检测、蛋白A残留检测、宿主核酸残留检测、内毒素检测、微生物限度检测势在必行，而移液工作站通过整合不同功能模块的自动化检测系统能够高效的、标准化的完成对抗体药的质控。汉赞迪抗体筛选实验自动化解决方案 众所周知，生命科学实验室普遍面临着实验耗时长、通量低、效率低、稳定性差、安全隐患、数据追踪性差等问题，而流程自动化可大大降低或避免上述问题，汉赞迪在单模块形式自动化、工作站形式自动化、管线形式自动化以及机器人形式智能化等不同自动化程度均有相应的解决方案。▼ NEMO E9 移液工作站图5 PCR体系构建NEMO E9移液工作站及台面布局 NEMO E9是一款灵活、高性能、高通量的自动化移液工作站，共有9个板位，体积小巧，节省空间，可放于通风橱、生物安全柜、超净工作台内；96通道移液头，可有效应用于孔板间的复制、样本或试剂的分装、转移、稀释等实验操作，非常适用于展示库和单B细胞抗体筛选过程中抗体DNA可变区序列大批量扩增体系构建，可将实验人员从大批量、重复移液的实验中解放出来。▼ 全自动化酶联免疫吸附检测平台图6 全自动化酶联免疫吸附检测平台 全自动化酶联免疫吸附平台以高通量移液工作站为核心在其周边整合酶标仪、洗板机和孵育室可实现无人值守、全自动完成ELISA实验流程，可大大提高检测的通量和结果的一致性，也可通过协作机器人再整合上储板栈进一步提升通量，加快阳性抗体的筛选速度。▼ 高通量蛋白质药物发现和筛选平台图7 高通量蛋白质药物发现和筛选平台 高通量蛋白质药物发现和筛选平台是以大肠杆菌和酵母作为宿主细胞表达蛋白药物的筛选和鉴定的全流程自动化解决方案，其实现了菌种的单克隆化，培养，离心及后续的高通量分子、蛋白表达及亲和力的鉴定，具有样本跟踪和数据追溯的功能，实现无人化值守，是蛋白药物研究和发现的加速器。小结 目前治疗性单克隆抗体药物已经成为生物制药中增长最快的领域，单抗药物是制药企业全球药物研发布局的重要一环，国内外多个药企已介入其中，而药物研发的速度决定企业是否能占得先机，以移液工作站为核心的自动化设备可加速药物研发的进程，助力药企抗体药开发。

双特异性抗体（Bispecific Antibody，bsAb）是拥有两种特异性抗原结合位点的新型第二代抗体，可以同时与靶细胞与功能细胞（一般为T细胞）相互作用，进而增强对靶细胞的杀伤，是当前医药研发最热门的领域之一。关于双抗概念的提出已经60年，距首款双抗药物Removab获批上市，已跨越十二年，在这期间全球仅有四款双抗药物获批上市，其研发难度不言而喻。双特异性抗体结构（抗体密码，奥开证券研究院）双抗药研发现状作为创新药研发的黄金赛道，全球双抗药有近百款处于临床阶段，有部分已进入临床Ⅲ期，国内涉足双特异性抗体研究的企业也越来越多，目前处于临床阶段的双抗药物接近60个，随着药物研发的逐步推进，未来3-5年将有望迎来双抗药物上市井喷。目前，获批上市的四款双抗药分别是Removab、Blincyto、Hemlibra、Rybrevant。Removab，2009年由Trion Pharma公司研发上市，其一条抗原结合臂特异性结合肿瘤细胞上高表达的跨膜糖蛋白EpCAM，另一条抗原结合臂特异性结合T细胞上的CD3，Fc区可与巨噬细胞、NK细胞等免疫细胞上的Fc受体结合并激活其免疫功能，适应症为恶性腹水。但由于价格高昂，且有更简单的治疗方案替代，Removab销售每况愈下，最终于2017年宣告退市。Removab结构Blincyto，2014年由Amgen公司研发上市，一端可以与B细胞表面表达的CD19结合，另一端可以与T细胞表面表达的CD3结合。通过连接CD19恶性B淋巴细胞与CD3+T淋巴细胞，Blincyto可介导T细胞对肿瘤细胞的溶解，适应症为淋巴细胞白血病。上市后，Blincyto全球销售额持续走高，2020年销售额达3.79亿美元，同比增长21.47%。Blincyto同样价格高昂，目前是市场上价格最高的药物之一，美国市场每两轮疗程的定价为17.8 万美元。Blincyto作用机理Hemlibra，2017年由Roche公司研发上市，通过桥接FIXa和FX，促进凝血酶的生成，恢复A型血友病患者的凝血过程，使FⅧ功能障碍或完全缺乏FⅧ的A型血友病患者的出血部位达到止血。Hemlibra 在2019年的销售额达15.09亿美元，同比增长超过500%，2020年前三季度销售已达到17.78亿美元，同比增长78%。Hemlibra作用机理Rybrevant，由强生公司研发的治疗非小细胞肺癌双抗药，2021年被批准上市。Rybrevant的活性药物成分为Amivantamab，是一款全人源的IgG1双抗，具有免疫细胞导向活性， FAB 端分别靶向EGFR和cMet。Amivantamab作用机理引领生物药研发新时代精准靶向，降本增效与单抗药物结构相比，双抗药物增加了一个抗原结合位点，靶向精度提高，充分发挥了协同调控多条下游信号通路的作用，突破了靶向或免疫药物作用靶向单一的局面，对一些复杂的肿瘤治疗研究起到重大推动作用。双抗药物可以通过灵活设计，与两个甚至三个不同抗原结合，实现多靶点协同治疗，增强治疗效果。在剂量使用方面，由于双抗药物的治疗效果可以达到普通抗体的 100-1000 倍，使用剂量最低可降为原来的 1/2000，显著降低药物治疗成本，增加了市场竞争力。双抗药物在提升疗效的同时，降低了脱靶等引起的副作用，使得用药更加安全。这是由于作用机制的不同，双抗的新分子形态在一定程度上可改善单抗药物联用部分肿瘤仍不应答现象。结构多变，机制灵活单抗药物一般使用IgG型抗体，包括2个Fab区和1个Fc区，而双抗药物从结构上分为全长双抗（结构和IgG单抗类似，有Fc区）和片段双抗（由IgG单抗的Fab区组成，无Fc区）两种类型。根据抗体的抗原结合区域组件的类型，双抗可以分为基于scFv、Fv、Fab、scFab、scFv-CH等。抗原结合区域可以融合在双抗的N端或C端末端，也可以插入C端的CH2和CH3结合域之间。多变的结构使得双抗具有相对灵活的靶向策略。国内进入临床阶段的典型的分子作用机制主要有五大类，包括桥连T细胞和靶细胞、双免疫检查点靶向类双抗（双抑制、抑制+激活）、双信号通路靶向类双抗、同抗原双表位双抗、靶向免疫检查点及肿瘤抗原双抗。

p 　　 span style=" color: rgb(146, 208, 80) " 药物与机体生物大分子结合的部位即药物靶点。当前国际上药物研发领域竞争的焦点之一就是药物靶点的研究和发现。新的药物靶点的发现往往会成为一系列新药发现的突破口，靶点研究对药物研发企业的意义不言而喻。本文对单抗领域TOP10的热门靶点及代表性药品进行盘点与简要分析，如VEGF/VEGFR、TNF-α、CD20、HER2以及白介素家族靶点成员。 /span /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 192, 0) " 药物靶点定义： /span 协和医学院药物筛选中心主任杜冠华对药物靶点这样定义：药物靶点是能够与特定药物特异性结合并产生治疗疾病作用或调节生理功能作用的生物大分子或生物分子结构 对物质的结构产生生物效应，在复杂调节过程或作为通路中具有主导作用 病理条件下对物质的表达、活性、结构或特性可以发生改变。 /p p span style=" font-size: 18px " strong 　　单抗热门靶点TOP10 /strong /span /p p 　　我们从国内外上市及国内临床三个维度统计了近7年与靶点相关联的药物数/临床试验数总和，得出了关联总数前10的靶点。 /p p style=" text-align: center " img width=" 599" height=" 300" title=" A.jpg" style=" width: 443px height: 237px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/24aa8bee-9dc0-4490-b61b-db727c57c173.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　 span style=" font-size: 14px " 　图：关联国内上市单抗药物数TOP10靶点 /span /p p style=" text-align: center " span style=" font-size: 14px " img width=" 599" height=" 305" title=" D.jpg" style=" width: 425px height: 262px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/5479a955-b9de-4c7f-8526-154f8c74b67d.jpg" / /span /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" font-size: 14px " 图：关联国外上市单抗药物数TOP10靶点 /span /p p style=" text-align: center " span style=" font-size: 14px " img width=" 599" height=" 298" title=" E.jpg" style=" width: 397px height: 263px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/a31ee332-fbe0-4aeb-9c92-e8ae4654cc00.jpg" / /span /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" font-size: 14px " 图：关联国内临床试验数TOP10靶点 /span /p p 　　 span style=" font-size: 18px " strong 国内上市单抗药品作用靶点榜首：VEGF/VEGFR /strong /span /p p 　　国内上市单抗药品作用的靶点，排名第一的是VEGF/VEGFR，对应上市药品数量达到8个，其中国产药品1个，进口药品7个 strong 。 /strong /p p strong 　 /strong strong span style=" color: rgb(255, 192, 0) " 　 /span span style=" color: rgb(255, 192, 0) " (一)VEGF/VEGFR靶点主要作用机制：血管生成信号通路 /span /strong /p p 　　血管内皮生长因子(Vascular Endothelial GrowthFactor，VEGF)，是细胞内刺激血管生成的信号蛋白，具备促进血管新生和再生的功能。VEGF通过与细胞膜表面的血管内皮生长因子受体(VEGFR，又称酪氨酸激酶受体)结合，通过一系列信号通路传导产生生物学效应最终导致血管生成。VEGF家族主要包括5种：VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD、VEGFE。 /p p 　　1971年Folkman首次提出了肿瘤性血管生成理论，肿瘤的生长依赖于肿瘤的血管生成。VEGF(VEGFR)靶点抗体通过特异性结合VEGF(VEGFR)，从而抑制下游信号通路，实现抑制血管生成的目的。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(255, 192, 0) " (二)VEGF/VEGFR靶点代表药品 /span /strong /p p 　　贝伐珠单抗(Bevacizumab)是第一个针对VEGF靶点的人源化的单克隆抗体，具备高亲和力且特异性地结合 VEGF，达到抑制肿瘤血管增生的作用。2004年基因泰克公司的贝伐珠单抗(商品名安维汀Avastin)获得FDA批准上市，用于转移性结肠癌治疗。 /p p 　　除了实体瘤、湿性黄斑变性(AMD)发病机制中有异常血管生成，针对VEGF血管生成信号通路的靶向药物对该病有明确的治疗效果。上市公司康弘药业(002773.sz)当家品种，康柏西普(商品名朗沐)是我国自主研发的新一代抗VEGF融合蛋白，也是中国首个获得世界卫生组织国际通用名的生物1类新药。 /p p 　　FDA已经批准的针对VEGF/VEGFR单抗或融合蛋白有贝伐珠单抗、雷珠单抗、阿柏西普、雷莫芦单抗。雷珠单抗是一种抗VEGF单克隆抗体片段，是由基因泰克公司开发于2006年首次通过FDA批准上市，商品名诺适得(Lucentis)，用于是视网膜黄斑变性治疗。诺适得是基因泰克旗下首个VEGF单抗安维汀的Fab片段，与安维汀的作用机理一致。 /p p 　　除了单抗药物，作用于VEGFR的小分子药物对其他酪氨酸激酶也有抑制作用，已经上市的有索拉非尼，舒尼替尼等多个品种。上市公司恒瑞医药(600276.sh)明星产品阿帕替尼，作为民族制药企业自主研发的第一个国家1.1类抗癌新药，也是恒瑞第一个拥有自主知识产权的小分子靶向药物，其作用的靶点就是VEGFR。阿帕替尼也是全球第一个治疗胃癌的小分子靶向药物。阿帕替尼能够高度选择性的与血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)结合，阻断信号传导，强效抗肿瘤血管生成，从而抑制肿瘤的生长、转移和散播。 /p p 　　 span style=" font-size: 18px " strong 国产单抗药品作用靶点榜首：TNF-α /strong /span /p p 　　TNF-α是国产单抗药物最成熟的靶点，在已上市的10个国产单抗药物中，有3个单抗药靶点是TNF-α。 同时，TNF-α也是全球目前销售额排行首位的药品阿达木单抗作用的靶点。在2017年全球药品销售额前十榜单中，有四款药物靶点是TNF-α，其中三款是单抗药物。 /p p 　 span style=" color: rgb(255, 192, 0) " strong 　(一) TNF-α靶点主要作用机制：免疫细胞调节 /strong /span /p p 　　肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)是一种主要由单核/巨噬细胞分泌的细胞因子(细胞信号蛋白)，在系统性炎症的发生发展中有重要作用。 /p p 　　TNF有两种类型—TNF-α和TNF-fl，两者有相似的生物学特性，其中TNF-fl主要由T细胞产生，目前对其功能研究不多。 TNF-α由157个氨基酸残基组成，其许多生物学活性都是通过细胞膜上受体介导的。 /p p 　　TNF-α主要功能是调节免疫细胞，作为一种内源性致热源，可以导致发热、引起细胞凋亡，阻止肿瘤发生和抑制病毒复制等。TNF-α功能失调与多种疾病相关联：比如阿尔茨海默症、银屑病、癌症、重度抑郁、肠炎等。 /p p 　 span style=" color: rgb(255, 192, 0) " strong 　(二) TNF-α靶点代表药品 /strong /span /p p 　　以TNF-α为靶点的3个国产单抗药物中，最早上市的是中信国健(现改名三生国健)的益赛普，获批时间是2005年，主要用于类风湿性关节炎治疗。最近获批的以TNF-α为靶点国产药物是上市公司海正药业的安佰诺，是一种TNF-融合蛋白单抗产品，同样用于类风湿性关节炎治疗。 /p p style=" text-align: center " img width=" 599" height=" 107" title=" F.png" style=" width: 548px height: 93px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/a332158e-09a2-414d-b1a7-c5a3c4b8c18e.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　 span style=" font-size: 14px " 　表：以TNF-α为靶点的国产单抗药物 /span /p p 　　在TNF-α靶点药物中就有连续6年霸占全球药品销售额排行榜榜首的阿达木单抗(商品名修美乐Humira)。修美乐是由总部位于美国芝加哥的艾伯维公司(AbbVie)于2002年获得FDA的批准上市。生产厂商艾伯维公司财报显示修美乐 2017年全球销售额达到惊人的184亿美元，较上年增长26.9亿美元，增速仍高达17%。修美乐是全人源化单抗药品，也是全球第一个上市的全人源化单抗药物。 /p p 　　2017年全球药品销售额前十榜单中，除了排名首位的阿达木单抗靶点是TNF-α，排名第二的来那度胺、排名第四的依那西普单抗以及排名第五的英夫利昔单抗的靶点也是TNF-α。其中来那度胺是小分子靶向药。 /p p 　　英夫利昔单抗(商品名类克)是由强生、默克和三菱田边公司联合开发的全球第一个TNF-α抑制剂，1998年获批FDA批准上市。类克是一种人鼠嵌合单抗，用于类风湿性关节炎、强制性脊柱炎、银屑病等自身免疫性疾病的治疗。2017年类克全球销售额达到77.6亿美元。依那西普是辉瑞和安进公司联合开发，适应症是类风湿性关节炎、强制性脊柱炎，2017年全球销售额78.9亿美元。 /p p 　　 span style=" font-size: 18px " strong CD20：B细胞主要生命周期表达的膜蛋白，淋巴瘤治疗重要靶点 /strong /span /p p 　　CD20为大家所熟悉很多都是通过罗氏的明星产品美罗华。美罗华自从问世以来，其与小分子化疗药物的联用已经成为某些特定类型的非霍奇金淋巴瘤的标准治疗方案。美罗华在商业上的巨大成功也让CD20成为药企最热门的药物开发靶点之一。CD20靶点单抗全球销售规模超过70亿美元，是商业价值较大的药物开发靶点之一。 /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 192, 0) " strong (一) CD20：主要参与B细胞的增值与分化 /strong /span /p p 　　CD20(Cluster of Differentiation 20)是位于B淋巴细胞表面的一种跨膜磷蛋白。B淋巴细胞是由骨髓内多能干细胞分化而成，是负责体液免疫的功能细胞，其发育经过祖B细胞(Pro-B)，前B细胞(Pre-B)，不成熟B细胞(Immature B)以及成熟B细胞(Mature B) 几个阶段。CD20在造血干细胞、祖B细胞以及成熟的浆细胞上并不表达，主要出现在前B细胞到成熟B细胞阶段。 /p p 　　非霍奇金淋巴瘤B细胞来源的比例占比达到70%，抗CD20的抗体可直接抑制B细胞 生长并诱导其凋亡。CD20在人体细胞中的表达方式、生物学作用和存在形式决定了其成为治疗B淋巴细胞瘤的主要靶点。虽然CD20的功能尚不完全清楚，但有证据表明抗CD20单抗杀伤B细胞来源肿瘤的作用机制主要有三种：抗体依赖的细胞毒作用，补体依赖的细胞毒作用，以及抗体与CD20分子结合引起的抑制细胞生长， 改变细胞周期以及凋亡等直接效应。 /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 192, 0) " strong (二)CD20靶点代表药品 /strong /span /p p 　　以CD20为靶点的单抗药物可以分为三代，第一代利妥昔单抗(商品名美罗华)、替伊莫单抗(商品名泽娃灵)，第二代奥法木单抗(商品名Arzerra)以及第三代阿妥珠单抗。利妥昔开创了靶向治疗B细胞淋巴瘤的先河，属于人鼠嵌合单抗 第二代的奥法木单抗是人源化单抗，第三代单抗Fc段被修饰。 /p p 　　在研数据显示，目前有十几个厂商正在开展针对CD20靶点的单抗研发，单抗研发领域实力较强的几家悉数参与：包括复星集团旗下的复宏汉霖、沃森生物参股的嘉和生物以及向港交所递交上市申请的信达生物、上市公司海正药业、华兰生物等。 /p p 　　美罗华1997年获得FDA的批准在美国上市，是全球第一个被批准用于非霍奇金淋巴瘤的单抗药物，2000年在国内获批上市。美罗华2017年全球销售额59.7亿美元，位居全球药品销售榜单第8位。在利妥昔单抗类似物的研发竞争中，三生国建的进度最快，已经完成临床研究，正在申报上市。 /p p style=" text-align: center " img width=" 594" height=" 336" title=" A.png" style=" width: 431px height: 247px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/15f3397f-7610-4177-abf9-1410313e0fd1.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　 span style=" font-size: 14px " 　图 美罗华全球销售额(单位：亿美元) /span /p p 　　奥法木单抗(商品名Arzerra)是第一个全人源化单抗，2009年通过FDA的批准上市。Arzerra 2016年全球销售额5700万美元。受依鲁替尼的竞争，Arzerra 2016年的销售额相比2015年下滑19%。除了奥法木，第二代CD20单抗药物还包括罗氏开发的人源化单抗奥瑞珠。奥瑞珠是首个在多发性硬化领域获得突破性疗法的产品。第三代抗CD20单抗的Fc段经过了糖基化修饰，通过修饰可以提高抗体的特异性以及与抗原结合的亲和力。第三代抗CD20单抗阿妥珠单抗由罗氏研发成功并于2013年获得FDA批准上市。 /p p 　　 span style=" font-size: 18px " strong HER2：乳腺癌药物经典靶点，预后重要指标 /strong /span /p p 　　HER2是迄今为止乳腺癌研究较为透彻的基因之一，HER2基因的过度表达不仅与肿瘤的发生发展关系密切，也是临床预后的重要指标。 /p p 　 span style=" color: rgb(255, 192, 0) " strong 　(一)HER2:生物学作用通过启动信号通路导致细胞增殖 /strong /span /p p 　　HER2(人表皮生长因子受体 2)是具有酪氨酸激酶活性的表皮生长因子受体家族的一个成员。受体的聚合作用会导致受体酪氨酸残基的磷酸化，并启动多种信号通路导致细胞增殖和肿瘤发生。大约15%~30%乳腺癌和10%~30%的胃癌会发生HER2基因扩增或过度表达。 /p p 　 strong span style=" color: rgb(255, 192, 0) " 　(二)HER2靶点代表药品 /span /strong /p p 　　目前国内上市的以HER2为靶点的单抗药物只有1个，就是知名度极高的罗氏生产的赫赛汀，化学名曲妥珠单抗。以HER2为靶点的国内上市药品中还有一个小分子药物，是葛兰素史克公司生产的泰立沙，化学名拉帕替尼，2013年通过CFDA审批上市。泰立沙2007年获得FDA的批准在美国上市。 /p p style=" text-align: center " img width=" 599" height=" 145" title=" B.png" style=" width: 528px height: 115px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/ece5967d-c7a6-470a-851c-f75a104bd7cb.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" font-size: 14px " 表：在FDA获批的HER2靶点药物 /span /p p 　　赫赛汀是最早上市的HER2靶向药物，主要适应症是HER2阳性乳腺癌。赫赛汀1998年获FDA批准在美国上市，2000年在欧洲上市，2001年在日本上市，2002年中国上市。2017年赫赛汀全球销售额71.44亿美元，位居全球药品销售排行榜第5位。 /p p 　　 span style=" font-size: 18px " strong 白介素/白介素受体家族靶点成员 /strong /span /p p 　　白介素是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子，白介素是目前发现种类最多，调控作用最广泛的一类细胞因子。第一个白介素分子(IL-1)1977年被发现，此后陆续发现了40多种白介素分子。以白介素家族成员为靶点的药物包括融合蛋白、抗体等多种形式。国内上市单抗白介素靶点主要是IL2R和IL-6R。 /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 192, 0) " strong (一)IL2R与IL6R生物学作用：免疫调节重要功能因子 /strong /span /p p 　　IL2R(interleukin-2 receptor)是一种三聚体蛋白，在淋巴细胞等免疫细胞膜表面表达，通过与IL2结合发挥生物学作用。IL2R通过三种形式与IL2结合：通过α链、β链或γ链。这三种IL2R链都是跨膜并延伸到细胞膜内，具有向胞内传递生化信号的作用(α链不参与信号传导)。IL2和IL2R对于免疫系统有重要的调节功能，通过直接作用于T细胞在免疫耐受和维持正常免疫功能方面发挥功能。IL6是一种多功能细胞因子，可以调节细胞生长、分化，并参与免疫应答的生化过程。IL6及其受体的失调与多种疾病的发生有关，比如多发性骨髓瘤、自身免疫性疾病、前列腺癌等。 /p p 　 span style=" color: rgb(255, 192, 0) " strong 　(二)IL2R与IL6R靶点代表药品 /strong /span /p p 　　IL2R靶点国内上市的药品只有1个，诺华公司生产的巴利昔单抗，商品名舒莱，用于预防肾移植术后器官排斥反应。巴利昔单抗通过与IL2R的α链特异性结合阻断了IL2与IL2R的结合。IL2R在激活的T淋巴细胞表面表达。IL2通过与IL2R结合，介导了T淋巴细胞的活化并引发一系列的病理过程，这一过程恰恰是移植手术后细胞免疫导致的排异反应的关键机制。巴利昔单抗1998年获得FDA批准上市。 /p p 　　IL6R靶点国内上市的药品也只有1个，罗氏公司生产的托珠单抗，商品名雅美罗，用于类风湿性关节炎的治疗。雅美罗最早于2005年在日本上市，2010年通过FDA审批在美上市，2013年获得进口注册引入国内。 /p p /p

2018 年，关于肿瘤免疫的那些事儿6 月：国内首款 PD-1 单克隆抗体药物获批，中国跨入肿瘤免疫时代10 月：诺贝尔生理学或医学奖授予美国科学家詹姆斯艾利森 (James Allison) 与日本科学家本庶佑 (Tasuku Honjo) ，以表彰他们在癌症免疫治疗方面所做出的贡献12 月：国内首款国产 PD-1 单克隆抗体药物获批，开启肿瘤免疫治疗“亲民”时代肿瘤免疫治疗的火爆让单克隆抗体药物（下文简称单抗）的研究越来越受到关注，今天我们就来聊聊单抗的一大特性——电荷异质性。抗体是指能与相应抗原特异结合的具有免疫活性的球蛋白，而单抗是由单一 B 细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。同其它蛋白一样，单抗常常存在广泛的翻译后修饰和降解，如糖基化、碳端赖氨酸丢失、脱酰胺化、二硫键错配、糖化和氧化等。几乎这些所有的翻译后修饰都会直接或间接的引起单抗表面电荷的变化，这就是单抗的电荷异质性。电荷异质性影响单抗的体外及体内的活性、安全性、可行性和质量，在新药研发和生物类似药的开发中都非常重要。电荷异质性的检测通常采用基于电荷分离的技术手段，如离子交换色谱、毛细管等电聚焦（CIEF），以及成像毛细管等电聚焦（iCIEF）等。与主峰 (Main peak) 相比，这些变异体峰通常被称为酸性峰 (Acidic variants) 和碱性峰 (Basic variants) 。大部分的人源 IgGs 具有碱性的等电点，因此，阳离子交换色谱通常被用于分离。在主峰前面的峰通常称为酸性峰，因为其带有的正电荷较少，洗脱较快；在主峰后面的峰称为碱性峰。酸碱峰的鉴定采用离线收集鉴定或多维液相-质谱联机在线鉴定。图 1. 阳离子交换色谱分离酸碱峰示例图毛细管等电聚焦（CIEF）是电荷异质性表征的主要手段，但采用 CIEF 分离时收集馏分用于鉴定非常困难，所以 CIEF 通常用于监控电荷异质性而不能用于表征。质谱检测虽然广泛应用于单抗的表征，但是将 CIEF 和 MS 联机一直是非常大的挑战。质谱在线检测的缺失也限制了 CIEF 在蛋白电荷异质性的表征上的应用。将 CIEF 分离的高分辨特性和质谱的表征能力结合起来是电荷异质性表征迫切需要的技术。Agilent 7100 CE-QTOF 联机的特点无与伦比的毛细管分离的分辨率：甘油改性剂降低非 CIEF 电泳迁移和区带展宽两性电解质：兼顾电泳分辨率和质谱灵敏度质谱友好的阳极液和阴极液优化的鞘流液组成：有效的聚焦、迁移和电喷雾离子化纳流级别的鞘流液流速：基于电渗流技术的纳流鞘流液最大限度提高检测灵敏度优化的 CIEF 运行参数：进样量、电场强度、压力灵敏度高、抗污染的质谱：Agilent 6200 系列 TOF，6500 系列 Q-TOF图 2. Agilent 7100 CE-QTOF 联机图CIEF-MS 的方法可行性及卓越表现采用等电点标记物（pI markers）进行验证，等电点和迁移时间之间具有良好的线性相关性 (R^2=0.99)。此外，CIEF-MS 方法采集的四种单抗的电荷变异体分离的轮廓图也通过成像毛细管等电聚焦紫外方法比对验证一致。pI markers 的绝对迁移时间的相对标准偏差小于 5%（n=4）。贝伐单抗三次进样的相对迁移时间 RSD 小于 1%，绝对迁移时间小于 2.3%，峰面积的 RSD 小于 7%。并且，单抗的电荷变异体可通过质谱直接测得其分子量。CIEF-MS 采集的电荷变异体轮廓分布和 iCIEF-UV 检测具有高度的一致性。iCIEF-UV 通过全柱成像检测去除了等电聚焦后分析物迁移到检测器端的步骤，CIEF-MS 和 iCIEF-UV 检测结果的高度一致性证明了在线 CIEF-MS 分析单抗电荷变异体史无前例的高分辨率。除了高分辨率之外，该方法具有非常好的重现性。CIEF-MS 电荷异质性分析的应用实例大集结贝伐珠单抗的分析CIEF-MS 和 iCIEF-UV 分析得到的酸碱峰比例接近，分别为酸性峰: 主峰: 碱性峰= 23% : 72% : 5% 和 27% : 68% : 5%。除了 CE 的高分离度之外，质谱数据优异的原始谱图是实验分析制胜的关键，尤其是在鉴定跟主峰质量差别很小的变异体时，如在分析一个脱酰胺 (+1Da) 质量差时，一款性能优异的质谱是 CIEF-MS 分析的必备之选。贝伐珠单抗的主峰分子量为 149 202 Da，碱性峰 B1 和主峰之间的质量差为 +128 Da，和碳端赖氨酸 (+128 Da, +1K) 异质性匹配；碱性峰 B2 (?=-17Da) 和氮端焦谷氨酸环化修饰 (-17Da) 匹配；酸性峰 A1 (?= 1Da) 和脱酰胺修饰匹配。酸性峰 A1 和主峰只有 1 Da 的质量差别，虽然我们会担心质谱准确度因素带来的不确定性，但酸性峰的位置和正好 1 Da 的质量差让我们有理由相信酸性峰 A1 是脱酰胺的修饰峰。A2 峰的信号非常弱，可能是高糖基化修饰的峰。图 3. 贝伐珠单抗 CIEF-MS 分析结果图曲妥珠单抗的分析曲妥珠单抗和贝伐珠单抗的电荷异质性分布的差异较大。iCIEF-UV 测得的低含量碱峰在CIEF-MS上未检出，同时其对酸峰的分离效果也优于 CIEF-MS 分离。质谱检测结果清晰的展示了酸性峰中四种主要的糖型变异体。曲妥珠单抗的主峰分子量为148 224 Da，酸性峰 A1 (?m = +1Da) 和酸性峰 A2 (?m = +2Da) 和脱酰胺修饰匹配，并且和 2D CZE-MS 的结果一致。图 4. 曲妥珠单抗 CIEF-MS 分析结果图英夫利昔单抗的分析英夫利昔单抗的三个电荷变异体峰在 CIEF-MS 上有良好的分离。解卷积结果显示两个碱峰为碳端赖氨酸变异体，碱性峰 B1 (?m = +258 Da) 和两个赖氨酸匹配；碱性峰 B2 (?m = +129 Da) 和一个赖氨酸匹配；酸性峰 A (?m = +5Da) 小的质量偏差显示其可能为脱酰胺的修饰。图 5. 英夫利昔单抗 CIEF-MS 分析结果图西妥昔单抗的分析西妥昔单抗是人鼠嵌合的 IgG-1 单抗，具有高度的微观不均一性，该特性主要源于高度复杂的糖基化修饰。西妥昔单抗重链的 Fab 和 Fc 上各有一个糖基化位点，同时有碳端赖氨酸的不完全剪切，这些高度的异质性会造成分离上的困难。采用 CIEF-MS 实现了八个电荷变异体的良好分离，不仅和 iCIEF-UV 的结果一致，同时也和文献报道一致。但是由于西妥昔单抗复杂的糖基化修饰，通过质谱获得的分子量信息不足以反应修饰的情况。图 6. 西妥昔单抗 CIEF-MS 分析结果图西妥昔单抗亚基水平的分析针对西妥昔单抗这类具有复杂异质性的抗体，通过 IdeS 酶切和 DTT 还原降低其复杂程度，更利于质谱检测。通过高分辨质谱检测，IdeS 酶切后的八个变异体峰及 IdeS 酶切同时 DTT 还原后得到的 11 个变异体都得以检测。研究发现，西妥昔单抗的电荷异质性主要源于 Fc 区末端赖氨酸的异质性、Fd’ 区 N-羟乙酰神经氨酸和可能存在的脱酰胺修饰。轻链上未发现有电荷异质性。图 7. 亚基水平 CIEF-MS 分析流程图安捷伦 CE-QTOF 解决方案不仅兼顾了毛细管电泳的高效分离，离子源接口的高灵敏度和高分离度，也实现了质谱的高灵敏高分辨检测。在完整蛋白分析的层次上增加亚基水平的解决方案，即使是具有高度复杂异质性的抗体分析也能轻松应对。访问安捷伦药典系列文章，了解更多信息。参考文献：1. 安捷伦应用文献 5994-0672EN2. Jun Dai,*,? Jared Lamp,? QiangweiXia,? and Yingru Zhang?, Capillary Isoelectric Focusing-Mass SpectrometryMethod for the Separation and Online characterization of Intact Monoclonal AntibodyCharge Variants. Anal Chem. 2018 Feb 6 90(3):2246-22543. Jun Dai, and Yingru Zhang, AMiddle-Up Approach with Online Capillary Isoelectric Focusing-Mass Spectrometryfor In-depth Characterization of Cetuximab Charge Heterogeneity. Anal. Chem.,2018, 90 (24), pp 14527–14534扫描下方二维码，关注“安捷伦视界”公众号，获取更多资讯。

p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/e109bf33-d65f-4f78-833b-8cb20f1aa172.jpg" title=" 白帆生物新单抗生产基地开工仪式正式启动.jpg" alt=" 白帆生物新单抗生产基地开工仪式正式启动.jpg" width=" 546" height=" 364" style=" width: 546px height: 364px " / /p p style=" text-align: center " strong 白帆生物新单抗生产基地开工仪式正式启动 /strong /p p 　　2019年3月22日，白帆生物科技(上海)有限公司新单抗生产基地开工仪式在上海临港举行，此生产基地由赛多利斯与白帆生物合作打造，是集研发、临床、生产和销售为一体的上海最大的单抗产业化基地之一，强强联合将加速中国单抗药物的产业化和商业化进程，实现中国单抗制药产业的飞跃发展。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/5b5a722e-6f55-4b46-9f29-453a9a43d7cd.jpg" title=" 白帆生物执行董事总经理邹洵开幕致词.jpg" alt=" 白帆生物执行董事总经理邹洵开幕致词.jpg" width=" 549" height=" 366" style=" width: 549px height: 366px " / /p p style=" text-align: center " strong 白帆生物执行董事总经理 邹洵 开幕致词 /strong /p p 　　“白帆生物作为专业从事单抗药物生产和销售的高科技企业，此次在临港奉贤智造园投资建设单抗产业化基地，是宝船张江研发中心的进一步延伸。此举将完善公司在单抗产业内的布局，打造一个从研发、小试/中试、临床到商业化生产的全产业链平台，建成后的生产总规模可达12000L。”白帆生物执行董事总经理邹洵表示，“ 通过与赛多利斯的深入合作，白帆生物倾力打造的‘无交叉抗体工厂— NONCROS& #8482 平台’，既可满足多产品共线生产的合规要求，又可使生产效率和性价比达到最高水平。从而助力中国生物制药事业的发展，早日生产出疗效好、价格低的单抗药物，造福于民。” /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/629ee7cf-d42d-4202-a3af-c8c6e98a05be.jpg" title=" 赛多利斯执行董事René Fá ber在开幕仪式发表演讲.jpg" alt=" 赛多利斯执行董事René Fá ber在开幕仪式发表演讲.jpg" width=" 543" height=" 354" style=" width: 543px height: 354px " / /p p style=" text-align: center " strong 赛多利斯执行董事René Fá ber在开幕仪式发表演讲 /strong /p p 　　“赛多利斯作为行业先进理念和创新技术的引领者，始终致力于为生物制药企业提供安全、创新、经济的一体化解决方案，同时将质量源于设计理念运用于早期工艺开发至商业化生产的各个阶段，帮助客户加速研发进入临床的步伐、保障稳健生产工艺，大力支持中国抗体药物的快速发展。”赛多利斯执行董事René Fá ber表示，“白帆生物与赛多利斯已有多年的合作经验，此次的深度携手整合了赛多利斯在生物制药领域的先进技术和创新理念以及白帆生物丰富的制药工艺研发经验，进一步开创了国内单抗药物发展的新局面。同时，赛多利斯未来将有更多技术产品实现本地化生产，立足于中国市场需求，更好地服务中国客户，从而助力中国单抗制药产业更快发展。” /p p 　　白帆生物此次开工建设的“无交叉抗体工厂NONCROS& #8482 ”单抗生产平台中，赛多利斯设计搭建了一条200L单抗生产中试线以及两条2000L商业生产线。其中产品涉及高通量平台，玻璃罐和不同规模的一次性细胞培养平台，一次性技术平台以及下游分离纯化平台，同时搭配赛多利斯独有的冻融技术解决方案，完整涵盖了工艺开发、中试放大和商业化生产的各个阶段。完美的产品组合和先进的平台技术，确保可重复使用生物反应器和一次性使用生物反应器之间完美工艺转移，加速工艺开发过程，缩短产品生产周期，实现安全、投资、效益三者的最佳平衡，助力NONCROS& #8482 无交叉抗体生产平台高效数字化运行，提高药物产量和服务效率。 /p p 　　近年来中国生物制药行业迅速发展，赛多利斯作为生物工艺完整解决方案的提供者，关注生物制药的每个环节，同时致力于化科学为解决方案“turning science into solutions”的理念，满足生物制药工业科技快速变化的要求，从而加速中国生物制药行业的研发与产业化，促进中国制药行业的创新与发展。 /p p 　　 strong 关于赛多利斯斯泰帝 /strong /p p 　　赛多利斯斯泰帝 (Sartorius Stedim Biotech) 是国际领先的生物制药行业设备和服务的供应商，为全球生物制药的开发与生产提供安全、及时、经济的一体化解决方案。作为完整解决方案的供应商， 赛多利斯斯泰帝提供几乎涵盖生物制药工艺所有步骤的产品组合。公司致力于推广一次性使用技术和增值服务，满足生物制药行业快速发展的技术需求。公司总部位于法国欧巴涅，在巴黎的欧洲交易所上市 因其位于欧洲、北美和亚洲的生产与研发中心以及遍布全球的销售网络而享誉世界。 /p p span style=" text-decoration: underline " & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp /span br/ /p p style=" text-align: center " strong 仪器信息网生命科学官微“ span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 3i生仪社 /span ”上线啦!关注了解更多生命科学干货资讯！ /strong /p p style=" text-align: center " img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/a75cb2a1-2473-4c33-823f-8cfd8dfc0b66.jpg" title=" qrcode_for_gh_91d290758d40_258.jpg" alt=" qrcode_for_gh_91d290758d40_258.jpg" / /p

在美丽的金鸡湖畔“2017全球视野下中国抗体产业发展之路”大会盛大召开，集结近400位药物抗体领域的大咖巨头齐聚一堂以全球视野来探讨我国抗体药物产业，对从发现、开发、临床研究、产业化到专利和生命周期管理等一系列过程进行系统的疏理探索出真正适合中国国情的抗体药物发展之路。在“中国单抗药物产业发展如何惠及百姓健康”专题讨论中，赛默飞中国区战略客户总监许兴国先生与信达生物制药（苏州）有限公司董事长俞德超、 前FDA大分子CMC资深审评员Audrey Jia、药明生物技术有限公司副总裁李锦才、丽珠医药集团副总裁傅道田及同写意新药英才俱乐部理事长朱迅共同参与讨论。赛默飞中国区战略客户总监许兴国先生参与“中国单抗药物产业发展如何惠及百姓健康”专题讨论赛默飞中国区战略客户总监许兴国先生表示：“科学领域服务的世界领导者，赛默飞旨在帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。赛默飞提供的制药和生物制药解决方案专注制药生产的每一个环节，可以满足GMP/cGMP生产质量管理标准要求，这有助于药企加速新药研发、临床试验进程、降低运营成本，并实现高效生产。创新是赛默飞的DNA，引导技术发展的重要根基,目前每年投入8亿美金于研发。心系中国生物制药企业客户, 助力国内产业发展, 于2016年底揭幕的赛默飞中国生物制品开发实验室，为中国客户量身定做创新的产品和解决方案。在展台区域，参会嘉宾不仅能与赛默飞技术人员充分交流, 并能索取丰富的资料, 包括: 从前期研发、工艺开发、生产到贯穿单抗药物整个生命周期的工艺质量监测方案。现场赛默飞展台 赛默飞生物制药各个环节全流程解决方案：研发阶段: 提供从药物靶点筛选、构建表达、体外筛选等方案及实验室研发设备与耗材工艺开发放大: 提供细胞株筛选、培养工艺、一次性技术、纯化工艺、制剂罐装工艺质量监测: Orbitrap高分辨质谱、CE/HPLC/IC-MS联用、生物制药数据处理软件提供贯穿单抗药物整个生命周期的解决方案，包括抗体药表征、杂质辅料检测和分析等，此外赛默飞也提供病毒和微生物检测、工艺在线检测等方案智能解决方案: Watson LIMS实验室数据管理系统、变色龙色谱数据系统确保实验室数据管理有效、合规。超强工艺设备兼容性的控制硬件和软件系统SmartFactory实现批生产自动化控制售后服务: 从传统的服务例如:专家在线技术支持、现场/返库维修、零配件供应、保修服务计等,转变提升对药厂企业提供多元化、定制化服务，为实验室人员节省宝贵时间，并提高仪器利用率等。1、为保证内容正常显示，图片请使用本地上传。2、新闻内容不得添加电话、邮箱、QQ、网址、二维码等任何联系方式，新闻底部会自动添加联系我们的功能。

8月19日，记者从中科院微生物研究所获悉，来自该所等单位的研究人员合作研发出一种能够靶向多种冠状病毒入侵受体ACE2的阻断型单克隆抗体h11B11。该抗体能够有效预防和治疗新型冠状病毒及其突变株感染宿主细胞及模式动物，并在非人灵长类动物中展现出良好安全性。同时，作为新冠肺炎病毒入侵宿主的受体的拮抗剂，该抗体表现出优越的广谱性和中和活性，可应对目前流行的各种变异株。相关成果在线发表于《自然通讯》杂志。新型冠状病毒变异株不断出现，且传播速度越来越快。这给新冠病毒的预防控制带来了巨大挑战，亟需研发出可以应对病毒各种变异株的有效疗法。中和抗体疗法已被证明有效，但变异株的出现，则单一位点的单抗必然失效，广谱中和抗体的研发必须提上日程。幸运的是，近日我国科学家已经成果分离出一株人源化的基因工程单克隆抗体（h11B11），该抗体针对人血管紧张素转化酶 2 (ACE2) 受体。所谓单克隆抗体，是一种免疫球蛋白分子，属于生物药物。新冠肺炎疫情暴发后，靶向病毒表面蛋白的单克隆中和抗体成为潜在的有效治疗新冠肺炎的手段，它通过与新冠病毒结合，抑制病毒的活性，保护细胞免受侵害。相比小分子药物，单抗药物机理清晰，对靶点的选择性高、特异性强。好的单抗药物可以高效率击中靶点，减少副作用。该研究成果对新冠肺炎病毒的抗体治疗，尤其针对目前多种变异株具有重大临床应用价值。经过多种冠状病毒的假病毒和真病毒中和评价，该抗体被证实对新冠病毒及其突变株病毒均具很好的抑制活性。同时，该抗体与微生物研究所早期开发的新冠治疗性抗体CB6联合使用能协同提高中和活性。CB6治疗性抗体是一款靶向新冠肺炎病毒S蛋白RBD的抗体，由微生物研究所高福院士团队和严景华研究员团队联合研发，目前已在美国、欧盟、印度等国家获得紧急使用授权。华中科技大学生命学院杜艳芸博士、中国科学院微生物研究所博士后史瑞、北京大学张莹博士为论文的共同第一作者；中国疾病预防控制中心谭文杰研究员、中国食品药品检定研究院王佑春研究员、华中科技大学生命学院王晨辉教授和中国科学院微生物研究所严景华为本文共同通讯作者。

正常机体之所以能保持健康状态，具有抵御和自我战胜疾病的能力，是由于生物体内部不断产生各种与生物体代谢紧密相关的调控物质，如蛋白质、酶、核酸、激素、抗体、细胞因子等，通过它们的调节作用使生物体维持正常的机能。根据这一特点，我们可以从生物体内提取这些物质作为药。 生物药物提取方法： 1）蛋白质类药物分离提取方法： 沉淀法（盐析、有机溶剂、等电点）；按分子大小分离（超滤、透析、层析、离心）；电荷（离子交换、层析、电泳、等电聚焦）；亲和层析法（酶与底物、抗原与抗体、激素与受体）。 2）核酸类药物的分离提取方法： 核酸类药物生产方法提取法和发酵法。 3）糖类药物的分离提取方法 非降解法适用于从含一种粘多糖的动物组织中提取粘多糖，用水或盐。 降解法适用于从组织中提取结合比较牢固的粘多糖，酶解。 分离用沉淀和离子交换。 4）脂类药物的分离提取方法 提取，用有机溶剂将所需成分从原料中溶解出来醇、氯仿、甲醇、水。纯化，沉淀法、层析法、离子交换法。 5）氨基酸类药物的分离纯化方法 分离方法：沉淀法（溶解度差异），吸附法（吸附能力差异），离子交换法（所带电荷不同）。 生物药物的检测： 生物药物具有原料中的有效物质含量低、稳定性差、易腐败等特点，故生物药物的研发和生产过程中，理化检验指标和生物活性检验指标的检测至关重要。 2015年7月2日，仪器信息网将邀请瀚盟生物技术副总监付淑军老师、海正药业分析实验室主任李镭老师携手安捷伦、赛默飞、SCIEX、布鲁克等知名检测仪器厂商工程师与网友一起在线探讨&ldquo 生物制药检测及评价技术&rdquo 。本次会议用户可免费在线报名参加。 报名日程安排如下： 9:30 生物样品分析的一般原则及常见问题 &mdash &mdash 付淑军（瀚盟生物技术副总监） 10:20 安捷伦科技最新Glycan Mapping色谱柱在生物制药分析中的应用 &mdash &mdash 米健秋（安捷伦） 11:10 赛默飞在单抗分析方面的最新技术和方法 &mdash &mdash 胡学桥(赛默飞) 14:00 CE及CESI-MS技术在生物药分析中的应用 &mdash &mdash 陈鸿序（SCIEX） 14:40 布鲁克ESI/MALDI质谱助力生物制药发展 &mdash &mdash 刘先明（布鲁克） 15:20 单克隆抗体药物检测技术进展 &mdash &mdash 李镭（海正药业分析实验室主任） 请 扫描 或 长按并识别下方二维码 即可在线报名，会场容量有限，报名从速！报名及参会免费！

2014年12月19日，上海——科学服务领域的世界领导者赛默飞世尔科技（以下简称：赛默飞）近日推出在线二维液相色谱法分析单抗样品的解决方案。 生物制药被誉为21世纪的金苹果，其利用现代生物技术（组织提取、发酵和细胞培养等等）为人类健康带来诸多良药。通过淋巴细胞杂交瘤技术或基因工程技术制备单克隆抗体药物，已经成为生物制药领域的一个重要方面。单克隆抗体药物专一性强，疗效显著，尤其是在癌症的治疗过程中发挥重要的作用，成为今年来研究的热点药物之一。但在单克隆抗体药物的每个生产过程中，必须采用合适的方法进行产品的纯化和质量控制，测定其效价、聚集体和电荷亚型变体等。其中，聚集体和电荷亚型变体会在药品的生产、存储和运输过程中产生，这些副产物会产生与主产品不同的药效，有时会引起严重的副作用。因此必须对这些副产物进行严格的质量控制，从而更好地保证患者的用药安全。赛默飞推出的方案基于Ultimate 3000 DGLC 双三元液相色谱系统，一维使用MabPac Protain A亲和色谱柱对单抗溶液进行分离，通过阀切换将收集到loop环（或者富集柱）中的单抗样品转移到二维，利用SEC色谱柱将样品中的聚体和单抗进行分离，从而实现全自动在线二维液相分离单抗药物的目的。该方案可以实现单抗药物的全自动滴度分析和聚体分离，节约时间，提高工作效率，同样该方法也适用于全自动滴度分析和电荷异构单抗分离。更为重要的是该方法可以整合不同分离原理的液相色谱方法，为生物制药和蛋白分析建立一个方法开发平台，从而让 Ultimate 3000 DGLC 双三元液相色谱更好地为生物制药行业服务。下载应用文章请登陆：www.thermo.com.cn/Resources/201410/2095520813.pdf ---------------------------------------------------------------------关于赛默飞世尔科技赛默飞世尔科技（纽约证交所代码：TMO）是科学服务领域的世界领导者。公司年销售额170亿美元，在50个国家拥有员工约50,000人。我们的使命是帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。我们的产品和服务帮助客户加速生命科学领域的研究、解决在分析领域所遇到的复杂问题与挑战，促进医疗诊断发展、提高实验室生产力。借助于Thermo Scientific、Life Technologies、Fisher Scientific和Unity? Lab Services四个首要品牌，我们将创新技术、便捷采购方案和实验室运营管理的整体解决方案相结合，为客户、股东和员工创造价值。欲了解更多信息，请浏览公司网站：www.thermofisher.com 赛默飞世尔科技中国赛默飞世尔科技进入中国发展已有30多年，在中国的总部设于上海，并在北京、广州、香港、台湾、成都、沈阳、西安、南京、武汉等地设立了分公司，员工人数超过3800名。我们的产品主要包括分析仪器、实验室设备、试剂、耗材和软件等，提供实验室综合解决方案，为各行各业的客户服务。为了满足中国市场的需求，现有8家工厂分别在上海、北京和苏州运营。我们在全国共设立了6个应用开发中心，将世界级的前沿技术和产品带给国内客户，并提供应用开发与培训等多项服务；位于上海的中国创新中心结合国内市场的需求和国外先进技术，研发适合中国的技术和产品；我们拥有遍布全国的维修服务网点和特别成立的中国技术培训团队，在全国有超过2000名专业人员直接为客户提供服务。我们致力于帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。欲了解更多信息，请登录网站www.thermofisher.cn

FDA授予阿斯利康单抗MEDI8852治疗A型流感感染的快车道地位英国制药巨头阿斯利康（AstraZeneca）及旗下全球生物制剂研发部门MedImmune近日宣布，FDA已授予单克隆抗体MEDI8852用于治疗A型流感病毒住院患者的快车道地位（Fast Track designation）。FDA的快车道项目，旨在加速开发及审查用于治疗严重疾病并填补未满足医疗需求的新药。目前，MEDI8852正处于Ib/IIa期临床开发，调查单剂量静脉注射MEDI8852作为单药疗法或联合奥司他韦（oseltamivir），用于由A型流感病毒导致的急性、无并发症流感成人患者的疗效和安全性。最近，在健康成人受试者中成功完成的一项I期研究表明，MEDI8852具有可接受的安全性和药代动力学属性，支持了该药用于流感患者治疗的进一步临床开发。此次快车道地位，也是自2014年以来，阿斯利康在感染性疾病治疗领域收获的第4个快车道地位，突显了该公司在该领域的研发实力。目前，旗下MedImmune在感染性疾病领域正在推进的大多数临床开发项目均获得了此荣誉。2015年4月，FDA授予MEDI8897快车道地位，这是一种单抗药物，用于预防婴儿中由呼吸道合胞病毒（RSV）引发的严重呼吸道疾病。2014年9月，FDA授予MEDI3902快车道地位，该药用于预防由铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）引起的医院获得性肺炎，这是一种高度耐药菌，可在住院患者中导致严重的疾病。2014年底，FDA授予MEDI4893快车道地位，该药用于ICU患者预防由金黄色葡萄球菌（S.aureus）引发的肺炎，该病菌也往往是多药耐药菌。MEDI8852是一种实验性人IgG1κ单克隆抗体（mAb），通过输液给药。MEDI8852的前驱分子由Humabs BioMed公司从人的记忆B细胞中分离获得，MedImmune进行了进一步的优化，增强了其中和能力。MEDI8852能够结合至血凝素蛋白（hemagglutinin）茎部的一个区域，这在A型流感病毒所有亚型中均高度保守。目前，MEDI8552正开发用于因A型流感住院的患者。尽管该药正在开发作为一种季节性流感的治疗药物，但可以预期的是，它也有望用于预防流感大流行。当前，流感病毒感染仍然是全球健康和世界经济的一个严重威胁。每年的流行病学调查结果显示，在全球范围内，大约300-500万严重病例，25-50万死亡病例，而在流感大流行期间，死亡率可能更高。鉴于耐药性的出现，抗病毒药物较短的治疗窗口，以及广泛的交叉保护性疫苗的缺乏，对能够有效治疗流感方面的新药方面，仍存在着重要的远未满足的医疗需求。

p 　　生物医药产业是高新科技产业，随着生物医药产业的快速发展，我国生物制药产业也进入了快速上升期，而单克隆抗体药物和细胞免疫治疗技术在整个产业中无疑是最为重要的组成部分。目前生物制药产业发展面临人才短缺的挑战，而我国高等专业教育尚不能满足生物制药产业发展的需求，大部分生物医药相关专业毕业生缺乏该产业急需知识和技能而面临就业难。在职职工专业教育是生物医药产业正常运营的基础保障，更是各国药政机构监管的重点。中国蛋白药物质量联盟将针对我国生物医药产业发展现状和国际产业技术的发展进步，特别是各国药政监管要求，推出生物制药产业技术系列职业培训。本期设为单抗及重组蛋白研发生产技术和工艺。 /p p 　 strong 　单抗及重组蛋白研发生产技术和工艺 /strong /p p 　　根据数据统计，2015年全球药品市场规模近 10700 亿美元，2016 年全球药品市场规模11080 亿美元，2017年全球药品市场规模约为 11290 亿美元。在未来五年内，全球药品支出将会上升30%，2018年将达到11700亿美元，2022 年可达约14400亿美元。2016年全球最畅销药物榜单中生物专利药占据主要地位，仅销量前10种药物年销售额超800亿美元。单抗及重组蛋白药物等生物药的市场需求巨大，形成鲜明对比的是，我国单抗及重组蛋白药物研发能力的薄弱，研发技术壁垒高，我国单克隆药物技术和国外先进水平有很大差距。单抗及重组蛋白的巨大市场需求和国内现阶段的技术发展水平，促使我们必须降低新药的研发风险，增强单抗及重组蛋白药物的研发生产技术能力。 /p p 　　 strong 一、主办单位 /strong /p p 　　中国蛋白药物质量联盟 /p p 　　 strong 二、培训时间 /strong /p p 　　时 间：2018年09月11日 PM 1:30-5:30 /p p 　　地 点：北京兴基铂尔曼酒店，北京亦庄荣华南路12号(三楼巴黎厅) /p p 　　(晚餐：下午5:30-8:00 北京兴基铂尔曼酒店 一楼餐厅) /p p 　 strong 　三、培训目标人群 /strong /p p 　　本次培训旨为生物医药产业的技术研发负责人、蛋白药物研发及生产业务骨干温故知新 为职场新人、在校大学生以及对单抗及重组蛋白研发生产技术和工艺感兴趣的相关人员夯实基础。 /p p 　　 strong 四、培训主讲人及题目 /strong /p p 　　1、 strong 李荣皓博士 /strong ，珠海恺瑞生物科技有限公司董事长兼创始人。李荣皓博士从1984年开始使用无血清细胞培养技术，曾涉足CHO细胞培养及重组蛋白生产工艺优化、多种原代细胞及干细胞等无血清细胞培养，在无血清细胞培养技术应用方面具有很深的造诣。此次培训班李博士将重点介绍其在美国Genentech等公司工作期间所积累的CHO细胞培养液开发以及其它细胞无血清培养技术的应用经验，并与听众互动，共同探讨听众有关重组蛋白表达细胞、干细胞、T细胞、疫苗生产细胞以及原代细胞等多种类型细胞的无血清培养技术问题。和大家一起分析和讨论技术细节。 /p p 　　 strong 主讲题目：重组蛋白药研发及生产中的无血清细胞培养技术 /strong /p p 　　2、 strong 史艳轻 /strong ，美国贝克曼库尔特有限公司，应用工程师。从事颗粒特性产品应用近六年，有丰富的样品颗粒分析和检测经验。 /p p 　　 strong 主讲题目：颗粒分析技术在单抗药物研发和质控领域相关方案 /strong /p p 　　3、 strong 滕希 /strong ，伯乐生命科学产品(上海)有限公司技术支持经理，毕业于中国农业科学院，专业是生物技术，曾在华大基因从事分子生物学方向应用相关研究现就职于美国Bio-Rad公司，在定量PCR、数字PCR等技术应用领域有着丰富的经验。 /p p 　　 strong 主讲题目：质量控制检测PCR技术介绍 /strong /p p 　　4、 strong 刘彬 /strong ，Bio-rad资深应用解决方案专家。毕业于大连理工大学，先后从事与北京韩美、北京诺和诺德，目前就职与Bio-Rad公司，有着十多年蛋白质纯化经验。 /p p 　　 strong 主讲题目：NGC下一代层析系统介绍及蛋白残留的验证 /strong /p p 　　5、 strong 孙乐 /strong ，博士，北京千人计划专家、北京师范大学兼职教授以及北京AbMax生物科技公司创始人。孙博士具有超过30年的抗体研究及抗体药研发经验，早在1989年即赴美以博士后身份与曾经同Jennifer Mather博士共同开创近代无血清细胞培养技术的David Barnes博士开展合作科学研究，积累了丰富的无血清细胞培养、胚胎干细胞以及表皮生长因子信息传递等领域的研究经验。孙博士后成为美国Upstate Biotech公司的研发总监，负责开发生物科技热门研究领域包括癌症研究的研发试剂，以每年推出200多款产品的高速帮助公司迅速成长为行业知名生物试剂公司。2000年孙博士离开Upstate Biotech，并先后于2000年在美国巴尔的摩市创办A& amp G Pharmactuticals公司、2004年在北京创办Welson Pharmaceuticals 以及2006年创办AbMax公共并担任公司董事长及CEO至今。AbMax利用独有的抗体产生技术开发低免疫原性及高稳定型抗体，为客户提供新一代抗体药研发服务，成为抗体新药研发技术领域提供了一个重要的发展方向。 /p p 　　 strong 五、会议议程 /strong /p p style=" text-align: center " strong img title=" 微信图片_20180830095700.png" alt=" 微信图片_20180830095700.png" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201808/uepic/6395b3b0-bb4b-464d-ac62-23323ef93d4d.jpg" / /strong /p p strong 　　六、注册事宜 /strong /p p 　　培训说明：本次培训免费，中国蛋白药物质量联盟证书(自愿)500元/人。获取更多资讯，敬请联系中国蛋白药物质量联盟秘书处： /p p 　　联系人： /p p style=" text-align: left " & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp 蒋老师 /p p style=" text-align: left " 　　手 机：+86-15900209767 邮 箱：jiangxiaowan@126.com /p p style=" text-align: left " 　　李老师 /p p style=" text-align: left " 　　手 机：+86-18322696168 邮 箱： a href=" mailto:781494221@qq.com" 781494221@qq.com /a /p p style=" text-align: center " img title=" 微信图片_20180830095820.png" alt=" 微信图片_20180830095820.png" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201808/uepic/5fd3b98f-92d8-418e-ae25-a74ef4bcb54f.jpg" / /p p 　　 /p p & nbsp /p

曲妥珠单抗是一种抗 Her2 的重组 DNA 衍生的人源化单克隆抗体，它通过将自己附着在 Her2 上来阻止人体表皮生长因子在 Her2 上的附着，从而阻断癌细胞的生长，曲妥珠单抗还可以刺激身体自身的免疫细胞去摧毁癌细胞。随着曲妥珠单抗在临床的广泛应用，对该药物在人体血浆中定量检测的精密度和准确度要求也日益提高。 随着液相色谱和质谱技术以及生物样品分离技术的发展，LC-MS/MS 定量技术在蛋白质定量研究中的应用日益广泛。相对于传统的免疫分析方法（例如 ELISA），LC-MS/MS定量技术提高了蛋白分析的精密度和准确度。基于质谱法的蛋白定量在抗体药物临床前及临床研究中受到越来越多的关注，为了使蛋白质定量技术与药物研究和临床检验更加紧密结合，岛津公司将其超快速液相色谱-质谱联用平台和强大的定量蛋白质组学软件 Skyline集成一体。根据蛋白质序列和用户自定义，Skyline 软件可以用来设计、改善以及优化选择反应监测(SRM)/多反应监测(MRM)、全扫描质谱和串联质谱定量法。Skyline 软件不仅将结果和方法优化结合起来，也为蛋白质定量的研究工作提供了标准化的工作流程。同时岛津研发工程师们为简化复杂生物基质中抗体药物的定量分析工作，对抗体药物前处理过程进行了独特的设计，发明了 nSMOL 前处理试剂包，该方法能够有效富集血浆/血清中的抗体药物，实现 Fab 区域的选择性酶解，提高酶解效率，极大降低了酶解产物的复杂性，对于复杂生物基质中抗体药物的准确定量提供了非常有利的工具。 本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8060与Skyline软件联用建立血浆中曲妥珠单抗定量分析的工作流程。结合nSMOL前处理技术，实现抗体药物 Fab 区域选择性酶解，从而显著降低了方法开发的复杂程度。在本实验筛选阶段，共有 10 个肽段具有明显的色谱峰，其中 8 条肽段与曲妥珠单抗的 Fab 区域相关，而曲妥珠单抗具有代表性的特异性肽段集中于 Fab 区域，充分体现了 nSMOL 技术的高选择性，从而极大地降低了酶解产物的复杂性，提高方法开发的速度。实验通过 Skyline 软件完成MRM 通道的设计和方法的输出，LabSolutions 基于 Skyline 导出的 MRM 分析方法，进行肽段筛选、碰撞能量优化，最终确认曲妥珠单抗的特征肽段及其对应的 MRM 离子对。基于以上所建立的方法，本文完成血浆中曲妥珠单抗药物的定量分析方法开发，定量特征肽段为IYPTNGYTR（542.80404.70），线性范围为 0.122 μg/mL~125 μg/mL。 了解详情，敬请点击《基于nSMOL 技术和Skyline 软件的曲妥珠单抗LC-MS/MS定量分析方法开发》 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。更多信息请关注岛津公司网站www.shimadzu.com.cn/an/。岛津官方微博地址http://weibo.com/chinashimadzu。岛津微信平台

ADCC简介IgG抗体要发挥功能，除了需要Fab区域（Fragment of antigen binding）识别并特异性结合抗原， 还需要其可结晶区域（Fragment crystallizable,Fc）来发挥IgG的效应功能（二级功能），如靶向细胞的杀伤等。Fc区域主要介导以下三类活动：通过结合表达在Natural killer (NK)等免疫细胞表面上的FcγR（Fcγ receptors）激活抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC）通过结合血清补体C1q激活补体依赖的细胞毒性作用（Complement-dependent?cytotoxicity，CDC）通过结合新生儿Fc受体（Neonatal Fc receptor ，FcRn）延长抗体半衰期。今天我们主要关注ADCC，其不仅是机体通过抗体清除被病毒或其他病原物感染细胞的主要途径，也是目前治疗性抗体发挥临床效果的（Mechanism of Action ，MOA）核心机制之一[1]。因此，对于抗体新药研发和改造，仿制药开发和研发过程中抗体质量及功能的分析，都离不开ADCC的检测。同时，在生物药和免疫调节药物的临床试验中，ADCC活力也是必须的ex vivo指标之一。在此，我们以ADCC检测为切入点，向大家展示珀金埃尔默的DELFIA技术平台是如何助力抗体制药的。图片引用自参考资料[1]基于DELFIA技术的ADCC检测从细胞水平来说，ADCC本质上属于免疫细胞介导的杀伤。因此，常见的针对细胞杀伤（注意不是细胞活力）的检测方式，如经典的51Cr释放法，LDH检测，和Calcein 释放法等都可以用于ADCC检测。从原理上，这些方法可分为直接的检测靶细胞在效应免疫细胞作用下的裂解程度，如51Cr释放法；和间接的检测效应细胞的活化，如NFAT-RE-luc报告基因法和监测剩余的细胞活力来评估细胞杀伤，如化学发光法等。间接法的缺点是不能直接模拟体内ADCC过程。利用DELFIA技术的DELFIA® EuTDA（货号AD0116）细胞毒法属于直接检测法，更能反映ADCC的MOA。与51Cr释放法形式类似，DELFIA® EuTDA细胞毒法利用荧光放大配体BATDA特异的标记靶细胞。BATDA能迅速进入细胞，并在水解作用下形成亲水的TDA留在细胞内，并在靶细胞裂解下释放，和DELIFA Eu试剂相结合形成强荧光、稳定的螯合物EuTDA用于检测。更详细的原理介绍可参考我们的微信端公众号[2]和应用材料[3]。图片引用自参考资料[3]作为放射性检测的替代方法，更为安全的DELFIA® EuTDA细胞毒法在ADCC活力检测中具有众多优势。相较于无法区分非特异死亡的LDH检测，EuTDA法不受效应细胞死亡和裂解的影响，降低背景的同时提升了检测的窗口和稳定性。相较于Calcein，BATDA能有效标记脆弱细胞，迅速被细胞摄取和在细胞裂解下完成高效的释放，为ADCC检测提供了稳定的检测窗口和易于标准化等优势。同时，EuTDA细胞毒法不受效应细胞限制，灵活支持利用多种原代免疫细胞（如PBMC和NK细胞）和更为稳定的改造细胞系的ADCC检测。从检测模式上EuTDA方法为时间分辨荧光（Time-Resolved Fluorescence，TRF），因此拥有TRF本身的众多优势，包括不受来源于培养基和血清等的背景荧光干扰，高稳定性和重复性等。此外，靶向红外区的检测能有效避免检测样本来带的干扰，并为多重检测打下基础。最后，对自动化和小型化的支持已让EuTDA法逐渐成为大分子药物研发中ADCC检测的标准方法[4]。在此，我们通过几个经典案例向大家介绍基于DELFIA技术的ADCC检测是如何助力大分子药物研发的。单抗研发领域之Fc区域改造在谈到Fc区域改造之前我们先得进一步了解ADCC通路的关键成员。单克隆抗体通过其Fc区域募集表达IgG受体FcγR的NK细胞等的多种免疫细胞。人的FcγR包括FcγRI(CD64，高亲和力)，FcγRII(CD32，低亲和力)和FcγRIII(CD16，低亲和力)。Fc和FcγR的相互作用会引发一系列的免疫活动和多种免疫细胞的活化，达到靶细胞杀伤的效果。同时，也不是所有的FcγR都会激活免疫反应，例如FcγRIIb就是一个抑制性IgG受体。早期基于小鼠的研究证明FcγR参与了Rituximab and Trastuzumab的药效。反过来，FcγRIIIa的多态性（高亲和力(V158)活低亲和力(F158)）和单抗药物的临床效果之间存在相关性。因此，Fc/FcγR之间的相互作用是抗体药效的关键调控者。而通过改造Fc区域调节其和FcγR之间的亲和力也成为抗体研发的一个有力切入点。在此，我们向大家介绍抗体改造的先河研究[5]。在结构解析的基础上，该研究引入AlphaScreen高通量筛选平台，通过竞争法鉴定出FcγRIIIa高亲和力的Fc区域变体。AlphaScreen的亲和力结果进一步由Biacore SPR 确认。除了检测变体和FcγRIIIa之间的亲和力，AlphaScreen还用于确认变体和抑制性IgG受体FcγRIIb之间的亲和力，从而获得变体和RIIIa/RIIb的相对亲和力比值。结果显示A330L 突变和S239D/I332E相结合能提高对激活性FcγRIIIa的亲和力的同时降低和抑制性受体FcγRIIb之间的亲和力，显著提升RIIIa/RIIb的相对亲和力比值（4-9, 针对Trastuzumab）。在亲和力筛选的基础上，研究利用DELFIA EuTDA-based cytotoxicity assay（货号AD0116）在细胞水水平探究变体对ADCC的提升。以不同FcγRIIIa基因型的PBMCs为效应细胞，Her2+ SkBr3为靶细胞，研究证明改造的变体能有效提升ADCC（2-3个数量级），与亲和力数据趋势一致（下图左）。进一步的研究证明变体能有效引发针对HER-2不同表达水平的细胞株的ADCC。针对几乎没有抗原表达的MCF7细胞系，变体依然具有客观的ADCC活力（下图右）。除了基因水平多态性外，Fc区域的糖基化也影响其和FcγR的亲和力。尤其是岩藻糖的缺失会提升IgG1和FcγRIIIa之间的亲和力。因此，除了突变外，改造Fc区域的糖基化修饰也是提升治疗性抗体ADCC活力的一个途径。以由罗氏研发的Lumretuzumab单抗（RG7116）为例[6]。RG7116一方面阻断HER3的激活并下调HER3的表达。进一步通过罗氏去岩藻糖修饰的GlycoMab技术改造，RG7116和FcγRIIIa之间的结合亲和力提高50倍。基于DELFIA技术的ADCC检测证明，糖基化改造显著提升RG7116的ADCC活力（下图左）。同时，对比不同HER3表达量的细胞系，研究清晰地表明HER3受体表达丰度和RG7116介导的ADCC活力之间的正相关联系（下图右）。在动物模型上，基于多种低免疫细胞浸润的小鼠皮下瘤模型，研究发现RG7116仅通过靶向HER3就能发挥抗癌作用。进一步利用高免疫细胞浸润的异种原位移植A549肺癌小鼠模型，研究证明糖基化改造有效提升小鼠的生存周期。临床一期试验进一步证明RG7116的临床疗效。一方面，RG7116有效抑制了肿瘤细胞膜HER3的表达。同时，相较于未糖基化改造的抗体，RG7116升高外周NK免疫细胞的活化程度[7]。免疫治疗领域之首个PD-1抗体： Nivolumab著名的O药Nivolumab（英文商品名: Opdivo），于2014年底获得FDA批准用于治疗晚期黑色素瘤，成为第一个获批的PD-1抑制剂，标志着免疫治疗时代的开启。四年后，Nivolumab也成为中国首个获批的PD-1单抗针对晚期非小细胞肺癌，商品名“欧狄沃”。虽然同是单抗药物，PD-1抑制剂与常见的靶向药物作用机制不同。PD-1抗体主要用于阻断PD-1和其配体PD-L1的相互作用，而不是杀伤PD-1阳性细胞，也就是抗肿瘤效应细胞。在Nivolumab的体外表征分析研究中，DELFIA Cell Cytotoxicity Kit（货号AD0116）被用于确认Nivolumab是否会诱导ADCC产生。以活化的PBMCs为效应细胞，高表达PD-1的CD4阳性细胞为靶细胞，研究人员确认IgG4亚型的nivolumab不会诱发ADCC效应[8]。后续的实验进一步证明nivolumab不能介导CDC，因此nivolumab的引入不会清除PD-1阳性细胞群体。除了nivolumab外，其他的PD-1单抗，包括默沙东的Keytruda、百济神州的BGB-A317及恒瑞的SHR-1210,都为弱ADCC活性设计。然而，同样是免疫检查点抑制剂，CTLA-4单抗Ipilimumab则需要其ADCC活性来杀伤Treg细胞发挥作用，强调了不同作用机制对抗体ADCC活性的要求也有区别[9]。结语ADCC活力的检测不仅能协助解析单抗药物的MOA，也推动对于NK细胞功能的研究及开辟新的抗肿瘤策略。作为成熟的细胞杀伤检测工具，DELFIA® EuTDA（货号AD0116）细胞毒法不仅可用于评估抗体的ADCC和CDC活力，还能用于检测ACT，CAR-T和CAR-NK等疗法中免疫细胞的杀伤能力。为了助力免疫治疗的开发，我们近期推出“珀金埃尔默生命科学试剂耗材平台”，加速您的研究和药物开发进程。针对ADCC和CDC等细胞杀伤检测，珀金埃尔默提供涵盖试剂-耗材-仪器-应用的完善解决方案。除了DELIFIA平台，我们提供金标准放射性检测方案及强大的多模式检测平台，胜任常见LDH检测、Calcien 释放和化学发光法等多种方法。试剂耗材查询与购买欢迎登录珀金埃尔默生命科学试剂耗材平台，搜索货号AD0116，在线下单。登入路径：参考资料参考资料[1] Deyev SM, Lebedenko EN. Modern Technologies for Creating Synthetic Antibodies for Clinical Application.Acta Naturae. 2009 Apr 1(1):32-50.[2] 科研干货|免疫细胞如何杀伤肿瘤细胞. https://mp.weixin.qq.com/s/-jW77oFnXusb9h6e-AKQBg[3] A Simplified, Gentle Cell-Labelling Method for Non-Radioactive Cytotoxicity Assays. PerkinElmer application note[4] An Automated DELFIA ADCC Assay Method using a CD16.NK-92 Cell Line. Biotek application note[5] Lazar GA, et al.Engineered antibody Fc variants with enhanced effector function. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006 Mar 14 103(11):4005-10.[6] Mirschberger C, et al. RG7116, a TherapeuticAntibody That Binds the Inactive HER3 Receptor and Is Optimized for Immune Effector Activation. Cancer Res. 2013 Aug 15 73(16):5183-94.[7] Meulendijks D, et al. First-in-Human Phase I Study of Lumretuzumab, a Glycoengineered Humanized Anti-HER3 Monoclonal Antibody, in Patients with Metastatic or Advanced HER3-Positive Solid Tumors.Clin Cancer Res. 2016 Feb 15 22(4):877-85.[8] Wang C, et al. In Vitro Characterization of the Anti-PD-1 Antibody Nivolumab, BMS-936558, and In Vivo Toxicology in Non-Human Primates. Cancer Immunol Res. 2014 Sep 2(9):846-56.[9] Romano E, et al. Ipilimumab-dependent cell-mediated cytotoxicity of regulatory T cells ex vivo by nonclassical monocytes in melanoma patients. Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 May 12 112(19):6140-5.关于珀金埃尔默：珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案，助力科学家、研究人员和临床医生解决最棘手的科学和医疗难题。凭借深厚的市场了解和技术专长，我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在全球，我们拥有12500名专业技术人员，服务于150多个国家，时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭，改善人类生活质量。2018年，珀金埃尔默年营收达到约28亿美元，为标准普尔500指数中的一员，纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。了解更多有关珀金埃尔默的信息，请访问www.perkinelmer.com.cn

超级病菌是一种耐药性细菌。这种超级病菌能在人身上造成浓疮和毒疱，甚至逐渐让人的肌肉坏死。更可怕的是，抗生素药物对它不起作用，病人会因为感染而引起可怕的炎症，高烧、痉挛、昏迷直到最后死亡。这种病菌的可怕之处并不在于它对人的杀伤力，而是它对普通杀菌药物——抗生素的抵抗能力，对这种病菌，人们几乎无药可用。2010年，英国媒体爆出：南亚发现新型超级病菌NDM-1，抗药性极强，可全球蔓延。 　　超级病菌的历史 　　1920年，医院感染的主要病原菌是链球菌。 　　1960年，产生了耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)，MRSA取代链球菌成为医院感染的主要菌种。耐青霉素的肺炎链球菌同时出现。 　　1990年，耐万古霉素的肠球菌、耐链霉素的“食肉链球菌”被发现。 　　2000年，出现绿脓杆菌，对氨苄西林、阿莫西林、西力欣等8种抗生素的耐药性达100% 肺炎克雷伯氏菌，对西力欣、复达欣等16种高档抗生素的耐药性高达52%-100%。 　　2010年,研究者发现携有一个特殊基因的数种细菌具有超级抗药性，可使细菌获得超级抗药性的基因名为NDM-1。同年10月巴西大规模爆发KPC超级病菌导致多名感染者丧生。 　　抗生素的发展历史 　　1877年，Pasteur和Joubert首先认识到微生物产品有可能成为治疗药物，他们发表了实验观察，即普通的微生物能抑制尿中炭疽杆菌的生长。 　　1928弗莱明爵士发现了能杀死致命的细菌的青霉菌。青霉素治愈了梅毒和淋病，而且在当时没有任何明显的副作用。 　　1936年，磺胺的临床应用开创了现代抗微生物化疗的新纪元。 　　1944年在新泽西大学分离出来第二种抗生素链霉素，它有效治愈了另一种可怕的传染病：结核。 　　1947年出现氯霉素，它主要针对痢疾、炭疽病菌，治疗轻度感染。 　　1948年四环素出现，这是最早的“广谱”抗生素。在当时看来，它能够在还未确诊的情况下有效地使用。今天四环素基本上只被用于家畜饲养。 　　1956年礼来公司发明了万古霉素，被称为抗生素的最后武器。因为它对G+细菌细胞壁、细胞膜和RNA有三重杀菌机制，不易诱导细菌对其产生耐药。 　　1980年代喹诺酮类药物出现。和其他抗菌药不同，它们破坏细菌染色体，不受基因交换耐药性的影响。 　　1992年，这类药物中的一个变体因为造成肝肾功能紊乱被美国取缔，但在发展中国家仍有使用。 　　超级病菌产生的原因 　　基因突变是产生此类细菌的根本原因。但在自然状况下，变异菌在不同微生物的生存斗争中未必处于优势地位，较易被淘汰。 　　抗生素的滥用则是这类细菌今日如此盛行的导火线!由于人类滥用抗生素，使得原平衡中的优势种被淘汰，而这种“抗抗生素”的细菌则树立成长的成为了优势种，取得了生存斗争的优势地位，从而得以大量繁衍、传播。 　　综上，基因突变是产生此类细菌的根本原因，抗生素的滥用对微生物进行了定向选择，导致了超级细菌的盛行。所以，一方面，我们在寻找解决途径的同时，必须注意对抗生素等物质的使用。否则，超级细菌的生存状况将迅速从“优势”走向“盛世”。另一方面，我们应该积极探索，继续寻找解决方案，而不能过分悲观，因为优势与盛世的距离从不小于劣势与失败。 　　超级病菌怎样传播？ 　　(1)经血传播：如输入全血、血浆、血清或其它血制品，通过血源性注射传播 　　(2)胎源性传播：如孕妇带毒者通过产道对新生儿垂直传播 　　(3)医源性传播：如医疗器械被乙肝病毒污染后消毒不彻底或处理不当，可引起传播 用1个注射器对几个人预防注射时亦是医源性传播的途径之一 血液透析患者常是乙型肝炎传播的对象 　　(4)性接触传播：近年国外报道对性滥交、同性恋和异性恋的观察肯定证实 　　(5)昆虫叮咬传播：在热带、亚热带的蚊虫以及各种吸血昆虫，可能对病毒传播起一定作用 　　(6)生活密切接触传播：与病毒携带者长期密切接触，唾液、尿液、血液、胆汁及乳汁，均可污染器具、物品，经破损皮肤、粘膜而传播。

p 　　随着原研生物药专利到期及生物技术的不断发展，以原研生物药为基础开发的生物类似药进入发展快车道。A股上市公司复星医药最新公告称，控股子公司复宏汉霖一款用于非霍奇金淋巴瘤治疗的生物类似药，近期获国家食药监总局药品注册审评受理。在业内看来，该药有望冲刺2015年《生物类似药研发与评价技术指导原则(试行)》发布后国内第一个上市的生物类似药。在国家鼓励生物类似药研发的政策红利下，中外药企纷纷加速在中国的市场布局。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 国内空白有望被打破 /span /strong /p p 　　据上述指导原则介绍，生物类似药是指在质量、安全性和有效性方面与已获准注册的参照药(通常为原研产品)具有相似性的治疗用生物制品。由于生物类似药可以更好地满足公众对生物治疗产品的需求，有助于提高生物药的可及性和降低价格，许多国家都十分重视生物类似药的研发和管理工作，全球已有20余个国家或组织制定了生物类似药相关指南。 /p p 　　不过，由于生物结构和技术生产远比化学仿制药复杂，生物类似药在全球范围内属于起步阶段，尤其是抗体类生物类似药，欧美国家批准的不超过10个，在中国还是空白。 /p p 　　近期，复星医药控股子公司复宏汉霖生物宣布，公司研制的利妥昔单抗注射液(一款生物类似药，即重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体注射液)获国家食药监总局药品注册审评受理。该药为复宏汉霖自主研发的大分子生物类似药，主要适用于非霍奇金淋巴瘤、类风湿性关节炎的治疗。 /p p 　　公开资料显示，2003至2013年间，恶性淋巴瘤的发病率约为6.68/10万，位列所有恶性肿瘤发病率第八位。从疾病分类上看，淋巴瘤通常分为两大类：霍奇金氏淋巴瘤(占所有淋巴瘤的10%)和非霍奇金氏淋巴瘤(占所有淋巴瘤的90%)。 /p p 　　截至2017年10月30日，在中国境内(不包括港澳台地区)上市的利妥昔单抗注射液仅有上海罗氏制药有限公司的美罗华。据咨询机构IMS统计，2016年利妥昔单抗注射液在中国境内销售额约为15亿元。不过，利妥昔单抗的高昂费用(平安证券研报显示其中标价在3400元/0.1mg、16000元/0.5mg以上)让很多患者无法承担，也有不少患者家庭因为治疗背上非常沉重的经济负担。 /p p 　　值得注意的是，一旦国产利妥昔单抗上市，质优价廉的生物类似药将迅速覆盖有实际用药需求但是不能负担药价的患者。中国临床肿瘤学会基金会理事长秦叔逵表示，随着生物类似药在国内不断上市，既为临床医生提供更好的选择，也让更多的患者能够接受治疗。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 中外药企抢占生物类似药市场 /span /strong /p p 　　统计显示，2016年全球销售排名前十大药品中有7个生物药，其中6个是单抗，单抗之王修美乐(阿达木单抗)的销售额达160亿美元，这样的市场空间吸引了中外药企的关注。 /p p 　　相比2013-2015年是非单抗生物药专利的集中到期时间， 2016-2020年将迎来单抗生物药的专利到期高峰，全球范围内生物类似药的大市场即将来临。值得注意的是，除了国内的复宏汉霖、中信国健、信达生物等药企，安进、诺华(山德士)、辉瑞等跨国医药巨头也是生物类似药市场的重要参与者。 /p p 　　从各大公司的在研管线看，生物类似药研发集中在阿达木单抗、英夫利昔单抗、利妥昔单抗、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗等专利已经或即将过期的大品种单抗上。市场预计，2020年全球生物类似药市场空间可达350亿美元。 /p p 　　与化学仿制药相比，生物类似药的技术门槛和投资门槛都要高出很多。复星医药公告显示，截至2017年9月，针对利妥昔单抗已投入研发费用约2.9亿元。自2010年成立以来，复宏汉霖累计投入约8.64亿元用于单抗产品的开发，除了利妥昔单抗(HLX01项目)，公司的HLX02项目(罗氏赫赛汀的生物类似药)已经在欧盟波兰以及乌克兰展开乳腺癌三期临床研究。 /p p 　　除了自己干，也有国内药企选择与国外巨头联手。近日，先声药业和美国安进宣布启动生物类似药战略联盟，一次性将多个单抗品种的生物类似药引进中国，进行共同研发和商业化，这是中美药企在生物类似药领域第一次展开较大规模的合作。 /p p 　　双方的合作药物，包括治疗类风湿疾病的阿达木单抗和治疗肿瘤的贝伐珠单抗。这两款生物类似药是美国FDA批准的各自品类的第一款生物类似药。安进中国区总经理张文杰表示，这项合作融合了安进公司长期以来在生物药研发和生产方面的专长和优势，以及先声药业在风湿免疫、肿瘤疾病领域的本土开发注册经验和强劲的市场推广能力。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 药审改革不断激发市场创新活力 /span /strong /p p 　　生物类似药在国内的蓬勃发展，得益于国内不断推进的药审改革。 /p p 　　近年来，国家食药监总局相继实施药品上市许可持有人制度试点、化学药注册分类改革、仿制药质量和疗效一致性评价、优先审评审批、临床试验数据自查核查等一系列重大举措，在医药行业掀起了一股改革浪潮。 /p p 　　生物类似药是改革的重点。2015年《生物类似药研发与评价技术指导原则(试行)》发布，对生物类似药的申报程序、注册类别和申报资料等相关注册要求进行了规范。2016年的《药品注册管理办法(修订稿)》提出，“药品上市申请的审批，应当重点关注：生物类似药与原研药质量和疗效的类似”。 /p p 　　国内医保也为生物类似药打开了大门。2017年4月人社部发布通告，确定了2017年国家基本医疗保险、工伤保险和生育保险药品目录谈判范围。在44个药品中，涉及单抗的有7个，显示出医保部门对单抗类药物临床价值的充分认可。 /p p 　　复星医药表示，目前已在美国硅谷成立了三个医药研发实验室，与国内的上海、重庆连接成无缝合作的全球研发网络。基于这个研发网络，目前复星在肿瘤、自身免疫性疾病方面，有8个产品获11个全球临床批件。肿瘤药龙头恒瑞医药也在持续加码研发投入，财报显示2017年上半年公司累计投入研发资金7.8亿元，同比增长60%，基本形成了每年都有创新药申请临床的良性发展态势。 /p p 　　中国医药创新促进会执行会长宋瑞霖指出，监管部门的新政激发了整个医药行业的活力，同时推动了本土企业国际合作和国际企业加快进入中国市场的步伐。通过在合作中推动监管水平与国际水平接轨，将提升我国生物医药行业的整体水平。 /p p br/ /p

p style=" text-indent: 2em " 屠呦呦团队放“大招”了！针对近年来青蒿素在全球部分地区出现的“抗药性”难题，屠呦呦及其团队经过多年攻坚，在“抗疟机理研究”“抗药性成因”“调整治疗手段”等方面取得新突破，于近期提出应对“青蒿素抗药性”难题的切实可行治疗方案，并在“青蒿素治疗红斑狼疮等适应症”“传统中医药科研论著走出去”等方面取得新进展，获得世界卫生组织和国内外权威专家的高度认可。 br/ /p p style=" text-indent: 2em " 自屠呦呦发现青蒿素以来，青蒿素衍生物一直作为最有效、无并发症的疟疾联合用药。然而，世卫组织最新发布的《2018年世界疟疾报告》显示，全球疟疾防治进展陷入停滞，疟疾仍是世界上最主要的致死病因之一，“在2020年前疟疾感染率和死亡率下降40%”的阶段性目标将难以实现。究其原因，除对疟疾防治经费支持力度和核心干预措施覆盖不足等因素外，疟原虫对青蒿素类抗疟药物产生抗药性是当前全球抗疟面临的最大技术挑战。 /p p 　　世卫组织和东南亚国家的多项研究表明，在柬埔寨、泰国、缅甸、越南等大湄公河次区域国家，对疟疾感染者采用青蒿素联合疗法（“青蒿素药物”联合“其他抗疟配方药”疗法）的三天周期治疗过程中，疟原虫清除速度出现缓慢迹象，并产生对青蒿素的抗药性。 /p p 　　“青蒿素联合疗法是目前世卫组织大力推广的一线抗疟疗法，是当前全球抗疟的最重要武器。一旦疟原虫普遍对其产生抗药性，后果将十分严重，全世界科学家都非常担心‘青蒿素抗药性’进一步恶化。” /p p 　　屠呦呦认为，要想破解“青蒿素抗药性”难题，就必须搞清楚青蒿素的作用机理。屠呦呦团队成员、中国中医科学院青蒿素研究中心研究员王继刚说，青蒿素在人体内半衰期（药物在生物体内浓度下降一半所需时间）很短，仅1至2小时，而临床推荐采用的青蒿素联合疗法疗程为三天，青蒿素真正高效的杀虫窗口只有有限的4至 8小时。而现有的耐药虫株充分利用青蒿素半衰期短的特性，改变生活周期或暂时进入休眠状态，以规避敏感杀虫期。同时，疟原虫对青蒿素联合疗法中的辅助药物“抗疟配方药”也可产生明显的抗药性，使青蒿素联合疗法出现“失效”。 /p p 　　经过三年多科研攻坚，屠呦呦团队在“抗疟机理研究”“抗药性成因”“调整治疗手段”等方面终获新突破，提出新的治疗应对方案：一是适当延长用药时间，由三天疗法增至五天或七天疗法；二是更换青蒿素联合疗法中已产生抗药性的辅助药物，疗效立竿见影。 /p p 　　国际顶级医学权威期刊《新英格兰医学杂志（NEJM）》近期刊载了屠呦呦团队该项重大研究成果和“青蒿素抗药性”治疗应对方案，引发业内关注。 /p p 　　屠呦呦认为，解决“青蒿素抗药性”难题意义重大：一是坚定了全球青蒿素研发方向，即在未来很长一段时间内，青蒿素依然是人类抗疟首选高效药物；二是因青蒿素抗疟药价格低廉，每个疗程仅需几美元，适用于疫区集中的非洲广大贫困地区人群，更有助于实现全球消灭疟疾的目标。 /p p 　　“全球疟疾防控与中国政府提出的构建人类命运共同体的行动倡议主旨高度一致。”世卫组织全球疟疾项目主任佩德罗· 阿隆索说，“截至目前，青蒿素联合疗法治愈的疟疾病患已达数十亿例。屠呦呦团队开展的抗疟科研工作具有卓越性，贡献不可估量。” /p p style=" text-align: center " 　　 strong 青蒿素治疗红斑狼疮：一期临床试验结果谨慎乐观 /strong /p p style=" text-indent: 2em " 记者了解到，在“青蒿素抗药性”研究获新突破的同时，屠呦呦团队还发现，双氢青蒿素对治疗具有高变异性的红斑狼疮效果独特。 /p p 　　中国工程院院士、中国中医科学院原院长张伯礼称，传统治疗红斑狼疮只能使用免疫制剂保守治疗，难以根治且存在继发感染等风险。 /p p 　　根据屠呦呦团队前期临床观察，青蒿素对盘状红斑狼疮、系统性红斑狼疮的治疗有效率分别超90%、80%。佩德罗· 阿隆索肯定了这种可能，同时他也认为，必须进一步根据国际标准，经周密设计和严格实施的临床试验才能得出最终结论。 /p p 　　国家药品监督管理局《药物临床试验批件》显示，由屠呦呦团队所在的中国中医科学院中药研究所提交的“双氢青蒿素片剂治疗系统性红斑狼疮、盘状系统性红斑狼疮的适应症临床试验”申请已获批准。昆药集团股份有限公司作为负责单位开展临床试验。 /p p 　　昆药集团医学经理薛乔介绍，在屠呦呦团队的指导下，该临床试验一期于2018年5月正式启动，设计样本共120例，由北京协和医院、北京大学第一医院、内蒙古医科大学附属医院、新疆维吾尔自治区人民医院、安徽医科大学第一附属医院、山东大学齐鲁医院等全国15家牵头单位共同参与开展。 /p p 　　“报名参加该临床试验的中外患者约500人，经过‘疾病活动性评分’等多流程严格筛选，首批志愿患者已入组开展试验。”薛乔透露，“从目前情况看，志愿患者没有发生非预期不良事件。” /p p 　　屠呦呦说：“青蒿素对治疗红斑狼疮存在有效性趋势，我们对试验成功持谨慎的乐观。” /p p 　　记者了解到，临床试验一般共三期，二、三期试验样本量更大，至少还需7到8年。若试验顺利，预计新双氢青蒿素片剂或最快于2026年前后获批上市。 /p p 　　青蒿素等传统中医药科研论著有望首次纳入《牛津医学教科书》 /p p 　　记者从中国中医科学院获悉，由屠呦呦团队成员、中国中医科学院研究员廖福龙等专家撰写的青蒿素等传统中医药科研论著，有望首次纳入即将再版的国际权威医学教科书《牛津医学教科书（第六版）》。业界认为，这将成为中医文化“走出去”的重要实践成果。 /p p 　　据廖福龙介绍，题为“传统医药的典范——中医药”的章节已完成定稿，分为“什么是传统医药”“青蒿素等中药发现史、作用机理和临床应用”“中医药整体观与辨证论治”和“传统医药便廉可及”四大部分。今年4月，该书出版方牛津大学出版社已启动校对工作，将于今年下半年再版。 /p p 　　《牛津医学教科书》主编考克斯教授说，对传统中医药论著即将纳入该教科书感到高兴。他说：“中医药章节既重要又具深度。这一切都是中国科学家杰出努力的结果。” /p p 　　佩德罗· 阿隆索等权威专家认为，屠呦呦团队在传统医学和现代医学之间架起一座桥梁，让中医疗法不仅在中国广泛应用，而且因有效治疗而被越来越多的国家认可。希望中国科学家在青蒿素研究的国际舞台上继续发出更多声音。& nbsp /p

近日，中国农业科学院植物保护研究所智慧植保创新团队的“检测炭疽病菌对甲氧基丙烯酸（QOI）类杀菌剂抗药性的组合物及其应用”获得国家发明专利授权。 该团队克服了传统植物病原菌抗药性检测方法中存在的检测周期长、操作繁琐、效率低等诸多缺点，建立了一种炭疽病菌对QOI类杀菌剂抗药性的田间快速检测方法，可用于田间抗性菌株快速检测、早期预警和快速选药，为构建药剂智能筛选和药效智能评价提供了技术手段。 据介绍，该技术成果操作简单，结果准确、判断直观，通过荧光染色或胶体金检测技术，实现了结果可视化，可指导用户田间地头科学智能选药，实现了精准选药和精准用药。

p style=" text-align: justify " 　　近年来，肿瘤免疫治疗(Immunology Oncology Therapy， I-O)已成为晚期恶性肿瘤治疗的重要手段之一。肿瘤免疫治疗并不直接攻击癌细胞，而是通过激活人体自身免疫系统来抗击肿瘤，具有良好的安全性及耐受性。PD-1/L1 抗体药物作为肿瘤免疫治疗的代表药物，在晚期恶性肿瘤治疗中取得了巨大的成功。虽然患者用药后初始应答相对较慢，但是一旦从 PD-1/L1 抗体的治疗中产生应答，可以明显提升一部分患者的长期生存率。 br/ /p p style=" text-align: justify " 　　正常情况下，人体内的T细胞可以监测并清除肿瘤细胞。然而，肿瘤细胞非常狡猾，其表面的PD-L1/PD-L2可以与T细胞表面的PD-1结合，影响T细胞功能，使癌细胞躲避免疫系统的攻击。PD-L1配体除了与PD-1结合外，还能以受体形式与CD80配体结合，抑制T细胞活性。 /p p style=" text-align: justify " 　　从2014年，全球首款PD-1抑制剂Opdivo问世开始，到2018年年底，FDA批准了6款 PD-1/L1 单抗药物，三款PD-1抑制剂：默沙东的 Keytruda 、 BMS 的 Opdivo、赛诺菲(Sanofi)和再生元(Regeneron)联合开发的Libtayo 三款PD-L1抑制剂：罗氏的 Tecentriq、辉瑞和默克联合推出的Bavencio 以及阿斯利康的 Imfinzi。在中国，国家药品监督管理局CDE批准君实生物的特瑞普利单抗和信达生物/礼来制药联手开发的信迪利单抗注射液(商品名：达伯舒& reg )。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/0d9d46cd-aeb3-4e96-8f77-c556d0d06ab7.jpg" title=" 1.jpg" alt=" 1.jpg" / /p p span style=" text-align: justify " 　　2014年7月4日，BMS的Opdivo在日本获批，成为全球首个获得监管机构批准的PD-1抑制剂。截止到2018年12月25日，Opdivo在FDA和中国的获批历史如下。 /span /p p style=" text-align: justify " 　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 　FDA获批历史 /strong /span /p p style=" text-align: justify " 　　2014年12月22日 /p p style=" text-align: justify " 　　经治转移性黑色素瘤 /p p style=" text-align: justify " 　　2015年3月4日 /p p style=" text-align: justify " 　　经治转移性鳞状非小细胞肺癌 /p p style=" text-align: justify " 　　2015年10月1日 /p p style=" text-align: justify " 　　与Yervoy& reg 联合用于BRAF野生型转移性黑色素瘤的治疗。 /p p style=" text-align: justify " 　　2015年10月9日 /p p style=" text-align: justify " 　　经治转移性非鳞状非小细胞肺癌 /p p style=" text-align: justify " 　　2015年11月23日 /p p style=" text-align: justify " 　　抗血管生成治疗进展的晚期肾细胞癌 /p p style=" text-align: justify " 　　2015年11月23日 /p p style=" text-align: justify " 　　BRAF野生型转移性黑色素瘤一线治疗 /p p style=" text-align: justify " 　　2016年1月23日 /p p style=" text-align: justify " 　　转移性黑色素瘤(不限BRAF突变状态) /p p style=" text-align: justify " 　　2016年1月23日 /p p style=" text-align: justify " 　　与Yervoy& reg 联合用于转移性黑色素瘤的治疗(不限BRAF突变状态)。 /p p style=" text-align: justify " 　　2016年5月17日 /p p style=" text-align: justify " 　　晚期经典霍奇金淋巴瘤 /p p style=" text-align: justify " 　　2016年11月10日 /p p style=" text-align: justify " 　　头颈部鳞状细胞癌(二线) /p p style=" text-align: justify " 　　2017年2月2日 /p p style=" text-align: justify " 　　经治转移性尿路上皮癌(一种膀胱癌) /p p style=" text-align: justify " 　　2017年8月1日 /p p style=" text-align: justify " 　　单药用于既往接受化疗(氟尿嘧啶、奥沙利铂、伊立替康)后疾病进展的高微卫星不稳定性(MSI-H)或 错配修复缺陷(dMMR)的转移性结直肠癌儿童(12岁及以上)和成人患者 /p p style=" text-align: justify " 　　2017年9月22日 /p p style=" text-align: justify " 　　索拉菲尼治疗进展的肝细胞癌 /p p style=" text-align: justify " 　　2017年12月20日 /p p style=" text-align: justify " 　　累及淋巴结或转移性黑色素瘤完全切除后的辅助治疗 /p p style=" text-align: justify " 　　2018年4月16日 /p p style=" text-align: justify " 　　与Yervoy& reg 联合用于中高危晚期肾细胞癌的治疗(一线) /p p style=" text-align: justify " 　　2018年7月10日 /p p style=" text-align: justify " 　　与Yervoy& reg 联合用于既往接受化疗(氟尿嘧啶、奥沙利铂、伊立替康)后疾病进展的高微卫星不稳定性(MSI-H)或 错配修复缺陷(dMMR)的转移性结直肠癌儿童(12岁及以上)和成人患者。 /p p style=" text-align: justify " 　　2018年8月16日 /p p style=" text-align: justify " 　　既往接受过铂类化疗和至少一种其它疗法后疾病进展的转移性小细胞肺癌(SCLC)患者 /p p style=" text-align: center " strong 中国获批详情 /strong /p p 　　6月15日，国家药品监督管理局批准Opdivo在中国上市，用于治疗表皮生长因子受体(EGFR)基因突变阴性和间变性淋巴瘤激酶(ALK)阴性、既往接受过含铂方案化疗后疾病进展或不可耐受的局部晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)成人患者。这是中国首个也是目前唯一在中国获批用于肺癌治疗的PD-1抑制剂。目前国内售价：100mg 约9260 40mg 约4591. /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/c9e3d865-78b0-4c44-8cfd-e35c0ad9de43.jpg" title=" 2.png" alt=" 2.png" / /p p style=" text-align: justify " 　　2014年9月4日，美国FDA批准默沙东的Keytruda用于黑色素瘤的治疗，成为FDA首个批准上市的PD-1抑制剂。截止到2018年12月25日，Opdivo在FDA和中国的获批历史如下。 /p p style=" text-align: justify " 　　2014.09.04 /p p style=" text-align: justify " 　　用于已经接受过Ipilimumab(伊匹单抗)治疗但仍有进展，或对Ipilimumab和BRAF抑制剂双重耐药的BRAF V600基因变异的晚期黑色素瘤患者。Keytruda成为FDA首个批准上市的PD-1抑制剂。 /p p style=" text-align: justify " 　　2015.10.02 /p p style=" text-align: justify " 　　肿瘤表达PD-L1(TPS≥1%)、含铂化疗期间或之后疾病进展的转移性非小细胞肺癌(NSCLC)。 /p p style=" text-align: justify " 　　2015.12.18 /p p style=" text-align: justify " 　　一线治疗晚期(不可切除或转移性)黑色素瘤。 /p p style=" text-align: justify " 　　2016.08.05 /p p style=" text-align: justify " 　　用于含铂化疗后疾病进展的复发性/转移性头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)患者。 /p p style=" text-align: justify " 　　2016.10.24 /p p style=" text-align: justify " 　　一线治疗PD-L1表达强阳性(≥50%肿瘤细胞表达PD-L1)，EGFR和ALK突变均为阴性的转移性非小细胞肺癌。 /p p style=" text-align: justify " 　　2017.03.15 /p p style=" text-align: justify " 　　难治性经典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin lymphoma ,cHL)，或者三次以上主要疗法治疗后疾病复发的成人与儿童患者。 /p p style=" text-align: justify " 　　2017.05.10 /p p style=" text-align: justify " 　　联合培美曲塞+卡铂一线治疗转移性非鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)，不受PD-L1表达的限制。 /p p style=" text-align: justify " 　　2017.05.18 /p p style=" text-align: justify " 　　(1)一线治疗：不适合含顺铂(cisplatin)化疗方案的局部晚期或转移性尿路上皮癌患者，该适应症是基于肿瘤缓解率和缓解持续时间加速批准 /p p style=" text-align: justify " 　　(2)二线治疗： 接受含铂化疗期间或化疗后病情进展、或接受含铂化疗新辅助治疗或辅助治疗12 个月内病情进展的局部晚期或转移性尿路上皮癌患者。 /p p style=" text-align: justify " 　　2017.05.23 /p p style=" text-align: justify " 　　里程碑式的批准：治疗成人及儿童的不可切除或转移性、微卫星高度不稳定(microsatelliteinstability-high，MSI-H)或错配修复缺陷(mismatch repair deficient，dMMR)的实体瘤患者。 /p p style=" text-align: justify " 　　2017.09.22 /p p style=" text-align: justify " 　　复发性局部晚期或转移性胃癌/胃食管结合部腺癌，且肿瘤表达PD-L1的患者(经FDA批准的检测试剂检测)。 /p p style=" text-align: justify " 　　2018.06.12 /p p style=" text-align: justify " 　　复发或转移性宫颈癌宫颈癌患者，病情在化疗中或化疗后出现进展，肿瘤表达PD-L1(CPS≥1)。 /p p style=" text-align: justify " 　　2018.06.13 /p p style=" text-align: justify " 　　用于治疗难治性原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)的成人和儿科患者，至少使用两线治疗后仍旧复发。 /p p style=" text-align: justify " 　　2018.08.20 /p p style=" text-align: justify " 　　联合培美曲塞和卡铂一线治疗转移性非鳞状非小细胞肺癌(NSqNSCLC)，EGFR和ALK突变均阴性。 /p p style=" text-align: justify " 　　2018.10.30 /p p style=" text-align: justify " 　　与卡铂和紫杉醇或白蛋白结合型紫杉醇(Abraxane)联合应用成为转移性鳞状NSCLC患者的一线治疗方案。 /p p style=" text-align: justify " 　　2018.11.09 /p p style=" text-align: justify " 　　用于治疗先前接受过索拉非尼(Nexavar)治疗的肝细胞癌(HCC)患者。 /p p style=" text-align: justify " 　　2018.12.19 /p p style=" text-align: justify " 　　FDA加速批准K药用于治疗复发的局部晚期或转移性Merkel细胞癌(MCC)。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/b3a5ebf5-979b-4b88-8c24-43f750fae53a.jpg" title=" 3.png" alt=" 3.png" / /p p span style=" text-align: justify " 　　2018年12月17日，国家药品监督管理局有条件批准首个国产PD-1单抗——特瑞普利单抗注射液(商品名：拓益)上市。这是我国企业独立研发、具有完全自主知识产权的生物制品创新药品，也是国内批准的首款国产PD1单抗。用于治疗既往标准治疗失败后的局部进展或转移性黑色素瘤。特瑞普利单抗注射液可以通过双重作用机制抑制肿瘤。目前价格尚未公布，传言价格会明显下调，值得期待。 /span /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/6593596d-5f75-4f6a-9767-66c5c1d561c2.jpg" title=" 4.png" alt=" 4.png" / /p p style=" text-align: justify " 　　2018年12月27日，国家药品监督管理局正式批准信达生物和礼来制药联手开发的PD-1抑制剂——信迪利单抗注射液(商品名：达伯舒& reg )上市，针对的适应症是至少经过二线系统化疗的复发或难治性经典型霍奇金淋巴瘤的治疗。这是国内批准的第二款国产PD1单抗。价格依然让人期待。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/3d2c1da8-4049-46d7-93bb-240d3000ad4b.jpg" title=" 5.png" alt=" 5.png" / /p p span style=" text-align: justify " 　　阿特珠单抗是罗氏制药PD-L1药物，2016年5月18日成为FDA批准的首个PD-L1抑制剂。 /span /p p style=" text-align: justify " 　　2016年5月18日 /p p style=" text-align: justify " 　　Tecentriq(atezolizumab)获得FDA批准用于治疗局部晚期或转移性尿路上皮癌，成为FDA批准的首个PD-L1抑制剂。 /p p style=" text-align: justify " 　　2016年10月18日 /p p style=" text-align: justify " 　　FDA批准Tecentriq用于治疗铂类化疗后疾病进展转移性非小细胞肺癌患者。 /p p style=" text-align: justify " 　　2017年4月17日 /p p style=" text-align: justify " 　　FDA批准Tecentriq用于无法化疗的局部晚期或转移性尿路上皮癌。2018年8月16号，FDA对其中的细节进行了修改。 /p p style=" text-align: justify " 　　2018年12月6日 /p p style=" text-align: justify " 　　FDA批准 Tecentriq与bevacizumab (Avastin)、卡铂和紫杉醇(ABCP)联合使用，作为转移性非鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)患者的一线治疗药物，排除EGFR/ALK突变的患者。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/24844936-34ff-4b30-af23-ab32c3b4e605.jpg" title=" 6.png" alt=" 6.png" / /p p span style=" text-align: justify " 　　Bavencio(avelumab)为全人源化的PD-L1单抗，由辉瑞和默克联合推出。2017年3月23日成为FDA批准的第二个PD-L1抑制剂。 /span /p p style=" text-align: justify " 　　2017年3月23日 /p p style=" text-align: justify " 　　FDA批准Bavencio用于12岁及以上患有转移性Merkel细胞癌(MCC)的成人和儿科患者，这是第一个用于MCC的PD-1药物。 /p p style=" text-align: justify " 　　2017年5月9日 /p p style=" text-align: justify " 　　FDA批准Bavencio用于治疗晚期或转移性尿路上皮癌(UC)患者，患者之前接受过铂类化疗，或者接受铂类化疗作为新辅助治疗或辅助治疗后12个月内疾病进展。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/961ada6c-9e38-4a5e-ae6a-5cb80983f57a.jpg" title=" 7.png" alt=" 7.png" / /p p style=" text-align: justify " 　　Imfinzi(通用名durvalumab)是阿斯利康的PD-L1抗体，2017年5月1日成为FDA批准的第三个PD-L1抑制剂。 /p p style=" text-align: justify " 　　2017年5月1日 /p p style=" text-align: justify " 　　FDA批准Imfinzi用于以含铂类药物化疗或化疗后疾病进展的患者，或术前术后以含铂类药物化疗的12个月内疾病进展的患者。 /p p style=" text-align: justify " 　　2018年2月16日 /p p style=" text-align: justify " 　　FDA批准Imfinzi用于治疗无法手术切除的局部晚期(III期)非小细胞肺癌，在接受标准含铂的同步放化疗(CRT)后，未发生疾病进展的患者， /p p style=" text-align: justify " 　　PD-1与PD-L1药物各有优劣，PD-1抑制剂无法阻断PD-L1与CD80的结合，而PD-L1抑制剂无法阻断PD-1与PD-L2的结合。随着科学家和医务工作者们对于肿瘤机理和药物治疗的不断改进和创新，新的PD-1/PD-L1也将会陆续诞生。为了使患者获得更高的生存获益，研究人员也在积极探索PD-1/L1单抗与化疗、放疗、抗血管靶向治疗和其他免疫治疗的联合治疗方案。 /p

p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 目录 /strong br/ /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " 　　 strong 1 抗体概述 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　1.1 抗体 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　1.2 抗体的制备过程 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　2 抗体药概述及市场分析 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　2.1 抗体药概述及发展历程 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　2.2 抗体药的分类 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　2 抗体药概述及市场分析 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　2.3 抗体药作用机制 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　2.4 抗体药物的核心技术 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　2.5 抗体药物的技术发展趋势 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　2.6 抗体药物的应用进展 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　2.7 抗体药与化学药相比的优势 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　3 国际抗体药分析 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　3.1 国际抗体药市场发展 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　3.2 国际抗体药技术发展 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　4 国内抗体药分析 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　4.1 国内抗体药市场布局 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　4 国内抗体药分析 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　4.2 政策有利我国抗体药发展 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　4.3 国内抗体药研究情况 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　4.4 国内抗体药研发企业概况 /strong /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(89, 89, 89) " strong 　　4.5 国内抗体药产业投资分布 br/ br/ /strong /span strong style=" text-align: center " 一、抗体概述　 br/ /strong strong style=" text-align: center " 1.抗体 /strong /p p 　　抗体(antibody)指的是由抗原刺激后由免疫细胞产生的能与抗原发生特异性反应的免疫球蛋白，典型的抗体结构由两条重链(H 链)和两条轻链(L 链)构成，每条链又分为稳定区(C 区)和可变区(V 区)， 其中可变区的多样性决定了抗体的多样性与特异性，使得抗体具有结合特定抗原的能力。比较不同特异性抗体的VL和VH的氨基酸顺序显示，变异仅集中在其中少数区域的氨基酸上(15%～20%)，称为超变区。(hypervariable)超变区是抗体的抗原结合位，与抗原决定簇的结构互补，故又称为互补决定区(complementarity-determining regions，CDRs) 。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/25de6df2-9266-4c9c-a549-9d2f67756128.jpg" title=" 1.jpg" alt=" 1.jpg" width=" 426" height=" 199" style=" width: 426px height: 199px " / /p p 　　抗原以异源蛋白居多，通常情况下免疫系统能够识别抗原上面的多个位点，针对不同的位点会特异性的产生针对该位点的抗体来结合抗原，由此产生的抗体集合我们称之为多克隆抗体。多克隆抗体由多种针对不同抗原的抗体组成，因而特异性差,使用时容易出现交叉免疫反应，故治疗范围较小，仅限于免疫学检测、被动免疫治疗和紧急预防。鉴于多抗的种种不足，医疗工作者便开始试想能够筛选制备出由单细胞增殖产生的，针对某一特定抗原决定簇的抗体，这样可以大幅提高抗体的特异性，减少交叉免疫副作用，拓展治疗范围， 这类具有高度均一性抗体就被称为单克隆抗体(monoclonal antibody，简称单抗或 mab)。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/a02af7bf-79f2-4a29-ac42-bfc1678adab5.jpg" title=" 2.jpg" alt=" 2.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图1. 单抗和多抗 /p p style=" text-align: center " 资料来源： 渤海证券研究所 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/7c4cda66-5941-49c6-8a3e-de4b33dc5fca.jpg" title=" 3.jpg" alt=" 3.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图2. 抗体产生过程 /p p style=" text-align: center " 资料来源： 长江证券研究所 /p p 　　 strong 单克隆抗体具有以下三个特点： /strong /p p 　　特异性： 单抗只针对含有特定抗原的病灶细胞(如肿瘤细胞)，因而专一性强、副作用较小 /p p 　　特效性： 单抗主要被用于肿瘤和自体免疫疾病(如类风湿)等发病率较高、对人类健康影响较大的复杂疾病，现存疗法(如放化疗、激素疗法)副作用强，效果有限。单抗的问世使其自然而然的成为了此类疾病的特效药 /p p 　　改造潜力大： 单抗药物具有很强的改造潜力，在单抗或单抗片段上?“加挂”放化疗药物可以使药物?精确“制导”到达病灶，大幅减少了用药量和副作用。 /p p 　　 strong 目前，单克隆抗体在医学上的应用主要有以下三类： /strong /p p 　　诊断试剂：主要用于检测淋巴细胞表面分子，鉴别淋巴细胞 鉴定病原体，准确诊断传染病 肿瘤诊断和分型 测定体内激素含量等 /p p 　　医学科研：主要用于纯化抗原 分析抗原结构和抗原决定簇分子功能等 /p p 　　单抗药物： 包括多个小类，细胞表面分子单抗用于移植排斥反应的防治 细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗 抗肿瘤单抗用于肿瘤治疗。 /p p 　　在上述用途中， 单抗药物无疑是最为重要、市场最大的应用领域。 相对于多抗和传统化学药物，单抗药物具有多方面的优势，这些特点使得单抗被广泛的应用于抗肿瘤、自体免疫疾病治疗、抗器官移植排异、抗感染等临床治疗领域。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/0e2ac6b1-1771-402d-b854-0e4b278cf34c.jpg" title=" 4.jpg" alt=" 4.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表1. 单抗与多抗、传统化学药物对比 /p p style=" text-align: center " 资料来源：兴业证券研究所 /p p strong 2.抗体的制备过程 /strong /p p 　　由于单一的 B 淋巴细胞克隆是比较活跃的细胞，它们往往因为自身活跃的基因表达状 态，而比较容易凋亡，因此单独获得 B 淋巴细胞以后也很难大批量的获取单抗。但 Georeges Kohler 和 Cesar Milstein 发明的“单克隆杂交瘤技术”解决了这个难题：他们将B细胞克隆和骨髓瘤细胞进行细胞融合，如此形成的杂交细胞具有肿瘤细胞不死的性质而大大延长了B细胞表达单克隆抗体的能力，使得单克隆抗体的运用成为可能。 /p p 　　在细胞体外培养技术尚未成熟前，科研人员将融合细胞注入小鼠体内，生产肿瘤，进而 产生大量腹水，单抗主要集中在腹水中，人们收集小鼠的腹水，然后提纯得到单抗。但是该方法的缺点非常明显，就是无法大规模的生产。随着细胞体外培养技术的成熟，目前我们可 以将融合细胞在培养基中大规模的培养获取单抗，这也为单抗药物的诞生创造了有利条件。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/72e15082-e36e-4802-b95d-8ed00b5e7049.jpg" title=" 5.jpg" alt=" 5.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图2.人工制备单克隆抗体的过程 br/ strong 二 /strong strong 抗体药概述及市场分析 /strong /p p strong 1.抗体药概述及发展历程 /strong /p p 　　抗体药物是以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程技术制备的药物，具有特异性高、性质均一、可针对特定靶点定向制备等优点，在各种疾病治疗，特别是肿瘤治疗领域的应用前景备受关注。 /p p 　　第一代抗体药物源于动物多价抗血清，主要用于一些细菌感染性疾病的早期被动免疫治疗。虽然具有一定的疗效，但异源性蛋白引起的较强的人体免疫反应限制了这类药物的应用，因而逐渐被抗生素类药物所代替。 /p p 　　第二代抗体药物是利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物。单克隆抗体由于具有良好的均一性和高度的特异性，因而在实验研究和疾病诊断中得到了广泛应用。1986年，美国FDA批准了世界上第一个单抗治疗性药物——抗CD3单抗OKT3进入市场，用于器官移植时的抗排斥反应。此时抗体药物的研制和应用达到了顶点。随着使用单抗进行治疗的病例数的增加，鼠单抗用于人体的毒副作用也越来越明显。由于大多数单抗均为鼠源性，在人体内反复应用会引起人抗鼠抗体(HAMA)反应，从而降低疗效，甚至可引起过敏反应。 /p p 　　近年来，抗体药物的研发进入了第三代，即基因工程抗体时代。与第二代单抗相比，基因工程抗体具有如下优点：①通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应 ②基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，进入病灶的核心部位 ③根据治疗的需要，制备新型抗体 ④可以采用原核细胞、真核细胞和植物等多种表达形式，大量表达抗体分子，大大降低了生产成本。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/a8d6d77e-a080-418e-9b3e-4d8496afd2d2.jpg" title=" 6.jpg" alt=" 6.jpg" / /p p style=" text-align: center " 资料来源： 中商情报网、 FDA、 长城证券研究所 /p p strong 2.抗体药的分类 /strong /p p 　　随着基因工程技术的发展，人们开始改变鼠源单抗的结构，使其更接近人源蛋白的构造，从而减轻其在人体内的免疫反应。目前的单抗产品主要可以分为以下四类：鼠源化抗体、嵌合型抗体、人源化抗体以及完全人源化抗体。 /p p 　　鼠源化抗体顾名思义就是完全分泌自小鼠细胞的抗体，其与人体的兼容性最差，容易引 起较强的免疫反应，目前已经较少使用。 /p p 　　嵌合型抗体就是把鼠源抗体的活性区域嵌合到人源抗体的稳定区域中，这样鼠源活性区 域仍能够发挥活性，识别目标蛋白。而新抗体 70%以上的区域均为人源抗体的稳定区域， 这样可以大大降低抗体的异源性，使得嵌合抗体的效价更高。此外，嵌合抗体结合目标抗原 以后，其人源保守区域能够被免疫系统识别，达到通过人体免疫来清除抗原的效果。 /p p 　　人源化抗体是将鼠源抗体基因中的活性片段转接到人源抗体的基因表达框中，这样表达 出来的抗体人源化区域的比例更高，能够达到 90%左右，这样能够进一步提高单抗在人体 内的活性。 /p p 　　完全人源化抗体是将小鼠体内的目标抗体基因敲出，然后用对应的人源抗体基因代替， 这样产生的抗体与人体内产生的抗体几乎完全一样，效价能能够达到最高。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/77a936c3-daa0-4ca7-9228-5b9c1be1db3a.jpg" title=" 7.jpg" alt=" 7.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图4.各种类型单抗的比较 /p p style=" text-align: center " 资料来源：兴业证券研究所 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/844567fb-f131-4eae-9884-d0ca67814338.jpg" title=" 8.jpg" alt=" 8.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表2. 四代单抗技术对比 /p p style=" text-align: center " 资料来源： Current Pharmaceutical Biotechnology、Methods、兴业证券研究所 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/47a0ea49-7099-452a-bfef-7dcf560f8249.jpg" title=" 9.jpg" alt=" 9.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图5. 1980-2004 年每年进入临床试验的各类型单抗产品数量 /p p style=" text-align: center " 资料来源：长江证券 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/ac26a08d-774d-4731-aab9-0ac57d3b940a.jpg" style=" " title=" 10.jpg" / /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/7b11b88b-0496-453a-a714-b8c3dfc5ff19.jpg" style=" " title=" 11.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表1. 美国FDA批准的抗体药物 /p p style=" text-align: center " (Therapeutic monoclonal antibodies approved by the US FDA) /p p style=" text-align: center " strong 二 抗体药概述及市场分析 /strong /p p strong 3.抗体药作用机制 /strong /p p 　　抗体药物作用机制比较复杂，但一般可归结为以下5类：细胞毒性药物、抑制细胞增殖、调节细胞的激活和相互作用、调节人自身免疫系统、中和抗原。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/758a6ec4-3cea-4369-a2d4-c84bc8b6d16e.jpg" title=" 12.jpg" alt=" 12.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图6. 单抗作用原理 /p p style=" text-align: center " 资料来源：生物制药小编 /p p 　　3.1 抑制细胞的生长和增殖 /p p 　　某些抗体药物可以通过结合肿瘤细胞增殖的生长因子，阻断生长和增殖过程，可以用来治疗癌症。如西妥昔单抗、Necitumumab、帕尼单抗靶向EGFR，用来治疗头颈癌和非小细胞癌等。帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和ado-trastuzumab靶向HER2(EGFR family)，用于治疗乳腺癌。VEGF靶点与血管增生有关，癌细胞的增殖需要大量能量，通常伴随血管增生。如阿柏西普、雷莫芦单抗、雷珠单抗、贝伐珠单抗、康柏西普等，可用来治疗癌症和wet-AMD等。 /p p 　　3.2 细胞毒性 /p p 　　癌症、自身免疫疾病的一个首要目标就是杀死异常细胞，抗体可以通过各种机制诱导细胞的死亡。ADC药物通过细胞毒素杀死细胞，抗体药物均可以通过ADCC、ADCP、CDC作用杀死细胞。 /p p 　　3.3 调节人自身免疫系统 /p p 　　自身免疫疾病从抗体药物的发展中获益巨大，如TNF-α抗体是迄今最为成功的药物靶点。依那西普、英夫利昔单抗、阿达木单抗，都是年销售额80亿美元以上的重磅炸弹药物，阿达木单抗更是继立普妥之后坐稳药王宝座，2015年销售额143亿美元，2016年上半年即销售77亿美元。除了TNF-α，还有多个涉及调节炎症性反应的细胞因子靶点，如IL-1、IL-5、IL-6/L-6R、IL-12、IL-17A、IL-23、BCMA等。 /p p 　　3.4 调节细胞激活和相互间作用 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/43a45803-bda2-4141-a92f-1c520b452351.jpg" title=" 13.jpg" alt=" 13.jpg" / /p p 　　如上图A中，T细胞的激活需要2种信号通路的协同作用：抗原呈递细胞(APC)上的MHC与T细胞上的TCR(其中一个亚基为CD3)结合、APC上的CD80/86与T细胞上的CD28结合。FDA历史上第一个抗体药物Muromomab就是靶向CD3的，近年来双特异性抗体的一个核心发展方向也是结合其他靶标与CD3，达到募集T细胞与靶细胞的作用，2014年，FDA批准了双特异性抗体Blincyto(靶向CD19/CD3)。阿巴西普、贝拉西普则靶向CD80/CD86。这些抗体药物的目的都是阻止T细胞的激活，从而治疗自身免疫病或者器官移植后的排斥反应。还可以通过靶向T细胞上其他蛋白(如阿法赛特靶向CD2)、相关炎症调节因子的受体(如巴利昔单抗、达利珠单抗靶向CD25)来阻止T细胞的激活。 /p p 　　在针对癌症适应症的时候，则需要激活内源免疫系统来杀灭癌细胞。如伊匹单抗靶向CTLA4、纳武单抗和派姆单抗靶向PD-1、阿替珠单抗(Atezolizumab)靶向PD-L1，即所谓的免疫检点抑制剂，通过解除癌细胞对免疫细胞的抑制作用，杀伤癌细胞。 /p p 　　3.5 中和外源分子 /p p 　　FDA批准的第一个此类抗体药物是怕利珠单抗，靶向RSV病毒F蛋白。瑞西巴库单抗、obiltoxaximab是FDA批准的另外两个抗毒素抗体，均用于避免炭疽杆菌的感染。2015年，FDA批准了Idarucizumab，用于中和达比加群酯，主要用于逆转达比加群酯的抗凝作用，使得后者的使用更有保险。 /p p strong 4.抗体药物的核心技术 /strong /p p 　　单抗的研发生产是一个技术密集型流程，大体可分为抗体筛选、抗体表达和抗体纯化三个环节，每个环节都拥有其核心技术，这些核心技术环环相扣，形成了单抗生产企业的核心竞争力。 /p p 　　4.1 抗体筛选：噬菌体展示技术已成全人源单抗筛选主流 /p p 　　随着单抗人源化进程的不断深入，以噬菌体展示技术(详见附录)为核心的大规模单抗筛选平台日益受到重视。该技术不仅可以获得全人单抗， 而且不需要细胞融合， 不经过免疫动物， 实验周期短，过程简单，这是人源抗体制备技术的重大突破，目前国际上主流单抗生产企业均使用噬菌体展示技术筛选单抗药物。 /p p 　　4.2 表达培养技术： 方法、规模、体系和表达量是?四要素 /p p 　　作为单抗研发生产链条中承上启下的一环，表达培养技术是单抗产量形成和质量控制的关键，而判断企业这方面技术水平高低的指标主要有表达方法、反应器规模、表达体系和表达量这“四要素”。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/54f98542-b88e-41a4-adc7-744586fc68c7.jpg" title=" 14.jpg" alt=" 14.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表3. 表达培养技术四要素 /p p style=" text-align: center " 资料来源：兴业证券研究所 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/4e4464a3-7926-4800-abae-e3214e1d5084.jpg" title=" 15.jpg" alt=" 15.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图4. 工业化单抗生产流程 /p p style=" text-align: center " 资料来源：兴业证券研究所 /p p 　　4.3 分离纯化技术 /p p 　　在得到单抗之后如何有效的从培养液中分离纯化产物是单抗生产最后一道关键环节，工业上一般采用硫酸铵沉淀、离子交换层析、蛋白-Sepharose 亲和层析等方式纯化单抗，由于平均每增加一个纯化步骤产品得率会降低约 13%，因而在保证纯度的同时尽可能提高得率也考验着生产商的技术水平。 /p p 　　总的来说，一个单抗生产商如果在上游能够通过出色的研发平台筛选出理想的单抗药物 在中游能够高效大规模的进行发酵培养，表达单抗 在下游能够高效、高纯度的分离纯化单抗，那么该公司就拥有了单抗研发生产的核心竞争力。 /p p strong 5. 抗体药物的技术发展趋势 /strong /p p 　　根据单抗本身的技术特性和近年来的发展情况，我们认为未来单抗技术发展将呈现以下几方面趋势： /p p 　　单抗全人化： 由于高人源化比例抗体在药效和副作用方面的优势，在过去 20 年中人源和全人单抗比例持续上升(08 年底销售占比分别为 31%和 11%)，而鼠源和嵌合单抗比例则不断下降(08 年底占比分别为 10%和 49%)，随着全人化单抗筛选技术的成熟，在研的新型单抗药物越发倾向于使用全人抗体技术，我们预计未来 5 年内新问世的单抗药物中全人单抗将占一半以上。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/89c525c7-c5eb-4bf8-b25a-c82ed46b36ba.jpg" title=" 16.jpg" alt=" 16.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图5. 人源化比例提高是大势所趋 /p p style=" text-align: center " 资料来源：兴业证券研究所 /p p 　　抗体多样化： 除了人源化比例的不断提高，单抗研发也在多样性上不断推进。一方面， 单抗的药物靶位逐渐多样化，除了传统的细胞表面抗原(CD 表面抗原，负责多种细胞信号转导，截止 2009 年发现 390 种分子)，还包括了常见的细胞因子(如肿瘤坏死因子 TNF，血管内皮生长因子 VEGF，白介素 IL 等)，部分研制中的单抗药物甚至可以识别多个抗原表位，具有更好的抗突变功能 另一方面，单抗药物的结构也不再限于完整的单抗分子，而是包括了如 Fab、 scFV 等抗体 V区片断或其复合物，这些片断可以通过原核表达体系快速低成本表达，从而降低了药物成本。 /p p 　　治疗联合化： 虽然在单抗治疗肿瘤方面单抗具有副作用小、特异性高的特点，但由于中晚期肿瘤病灶巨大，一般单靠单抗并不能完全消除，这就需要使用单抗配合手术的治疗方案，通过手术切除肿瘤主体，再使用单抗治疗剩余病灶或防止病灶转移。除手术外，化学药物和单抗联合治疗方案也日益受到医疗工作者的重视，如实验证实 FOL+FOX4 方案(Avastin+奥沙利铂+亚叶酸钙+氟尿嘧啶)可以延长肿瘤患者生存期 2.5 个月。 /p p strong 6.抗体药物的应用进展 /strong /p p 　　目前正在进行开发和已经投入市场的抗体药物主要有以下几种用途：1.器官移植排斥反应的逆转 2.肿瘤免疫诊断 3.肿瘤免疫显像 4.肿瘤导向治疗 5.哮喘、牛皮癣、类风湿性关节炎、红斑狼疮、急性心梗、脓毒症、多发性硬化症及其他自身免疫性疾病 6.抗独特型抗体作为分子瘤苗治疗肿瘤 7.多功能抗体(双特异抗体、三特异抗体、抗体细胞因子融合蛋白、抗体酶等)的特殊用途。 /p p 　　在进行器官移植时，可以采用某些抗体类药物来逆转器官移植引起的排斥反应。如最早批准(1986年)进入美国市场的治疗性抗体类药物——抗CD3单抗即被用于肾、心脏、肝脏移植排斥的逆转。抗体药用于器官移植免疫排斥反应已发展比较完善。 /p p 　　近年来人们将更多的目光集中在治疗肿瘤的抗体药物开发上。“生物导弹”，即将各种毒素、放射性同位素、化疗药物与识别肿瘤特异抗原或肿瘤相关抗原的抗体偶联后，能够特异杀伤肿瘤细胞的一类药物。这种药物经由静脉注入人体内，药效分子集中作用于肿瘤细胞，既增强疗效又减少对机体的毒副作用。 /p p 　　抗体药物目前市场占有度较多的领域为抗癌和自身免疫性疾病，其次用于抗感染、心血管疾病、器官移植免疫排斥反应等。从近年来进入临床试验的单克隆抗体的适应症来看，未来一段时期内，肿瘤治疗仍是抗体药应用的主要占比。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/dd78be75-1b98-4c90-a646-cd180e697ff7.jpg" title=" 17.png" alt=" 17.png" / /p p style=" text-align: center " 表2. 截止2016年全球上市抗体药物数量 /p p style=" text-align: center " 数据来源：药渡 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/9744ba94-12e2-447a-bb2a-7064942b2343.jpg" title=" 18.jpg" alt=" 18.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表3. 截止2016年全球上市药物销售额 /p p style=" text-align: center " 数据来源：药渡 /p p 　　对于后期开发阶段(Ⅲ期临床和BLA)的抗体药物，《MAbs》杂志主编Reichert, J.M自2009年底起连续9年每年推出“Antibodies to watch in ?.year”系列综述，2010年初到2017年初的8年间后期开发阶段抗体数目依序分别为26个、32个、25个、29个、38个、45个、60个和61个(备注：此处61个产品均为首次进入Ⅲ期临床阶段的未上市新产品，而上述IMGT数据库查询结果124个包括了已经上市产品正在进行的Ⅲ期临床适应症扩展)。其中处于Ⅲ期临床阶段的抗体药物数目及其适应症构成如图2，从中可以看出针对非肿瘤适应症类的抗体药物占比有增多趋势，在研抗体药物种类更加多样化。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/d1991550-3f49-4acd-aaa4-22776bd9a226.jpg" title=" 19.jpg" alt=" 19.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表2. 2010-2017年初III期临床阶段产品适应症分布 /p p style=" text-align: center " 数据来源：Reichert系列综述 /p p strong 7.抗体药与化学药相比的优势 /strong /p p 　　相对于小分子药物，单抗产品最大的优点就是“精确”，能够针对特异性的靶点进行治疗，降低副反应的同时增强了功效。以单抗产品使用最为广泛的肿瘤治疗为例。在传统的治疗中，肿瘤患者一般会接受化疗和放疗两种治疗，但是不论哪种方式都会对患者的身体造成极大的伤害。在化疗过程中，患者一般会出现肠胃功能混乱，免疫力降低，造血功能受抑制等副作用 而放疗使患者本身就要受到辐射伤害。究其原因，是因为这两种传统治疗方法都是“广谱”治疗，也就是不论对肿瘤细胞还是正常细胞都会杀伤，这样造成效价较低。而单抗产品能够精确到细胞级别，针对病灶进行治疗，效价较高。 /p p 　　单抗药物开发更具资金和时间优势。与开发创新化学药物(包括小分子靶向药物)相比，开发单抗药物具有明显的资金和时间优势。开发一种创新型化学药物需要在临床前阶段进行大量的分子筛选和动物试验，有机化学家需要花费大量时间筛选出新的化学分子以发现“引导”化合物或对既有“引导”化合物进行新的修饰，并再次通过动物试验来初步评价药品的安全性以及收集吸收、代谢、排泄等相关生物效应数据，以保证该化合物可以进入人体临床测试阶段即成为“研究用新药”。整个过程一般需要 5-7 年，花费上亿美金。 /p p style=" text-align: center " strong 三 国际抗体药分析 /strong /p p 　　 strong 1.国际抗体药市场发展 /strong /p p 　　单克隆抗体由于可精确的攻击靶分子，且具有较少的毒副作用而成为人们期望中的理想药物。经过一段曲折的发展历程之后，于二十世纪九十年代进入了一个新的快速成长期。 /p p 　　随着技术的不断发展，1997 年，全球迎来了首个治疗肿瘤的嵌合单抗药物——Rituxan(美罗华)。Rituxan 是 Genetech 生产的一种用于治疗 B 细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的单抗药物，通过联合化疗能显著延长患者的生存期，同时作为嵌合单抗，Rituxan 的副作用相对较小，因而其在 B 细胞 NHL 的治疗中得到了广泛应用，加上次年 Remicade(类克)、Herceptin(赫赛汀)等重磅单抗药物的上市，全球单抗产业开始了突飞猛进地发展。 /p p 　　1997-2015 年全球单抗产业发展迅猛,CAGR高达37.2%。1997年，全球单抗产业市场规模仅约 3.1 亿美元，到 2015年，市场规模已达到916.3亿美元，年均复合增长率高达37.2%。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/5d1703a1-d791-4f29-a0a8-7e81a2636685.jpg" title=" 20.jpg" alt=" 20.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图7.单抗药物2005-2015年全球总销售额(单位亿美元) /p p style=" text-align: center " 资料来源：长城证券 /p p 　　1997-2007年是全球单抗产业增长的爆发期，2008年后增速放缓明显，但仍要显著高于全球医药行业的整体增速水平。1997-2007 年是全球单抗产业增长的爆发期，十年CAGR高达 58.6%。2008年以后，全球单抗产业增速放缓明显， 年均复合增长率降至 14.8%，但仍要显著高于全球医药行业约5%的增速水平。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/4d3d63ce-3654-4f8a-90f8-2927c60c00e3.jpg" title=" 21.jpg" alt=" 21.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图8. 1997-2015 年全球单抗产业市场增速与全球医药行业增速对比 /p p 　　单抗产业现已成为全球生物制品行业中占比最大的子行业。经过多年的高速发展，单抗在全球生物制品行业中的市场占比已由 1997 年 2.5%上升到 2015年的 34.7%，成为全球生物制品行业中市场占比最大的子行业。与此同时，在单抗制品的带动下，生物制品在全球药品市场中的占比也逐年攀升。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/d58ff098-d216-4bdc-9437-a09ca2705332.jpg" title=" 22.jpg" alt=" 22.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图9. 1997-2015 年单抗在全球生物制品行业中的市场占比 /p p strong 2.国际抗体药技术发展 /strong /p p 　　2.1大型药企优势明显 /p p 　　单克隆抗体研发的技术壁垒较高，研发周期较长，需要强大的资金和技术支持，因此在 单抗技术方面大型企业具有明显的优势，因此目前国外重磅的单抗产品主要集中在罗氏(基 因泰克)，安进、GSK 和强生等公司，这些公司构建了成熟的单抗研发平台，在靶位基因的 筛选，基因的测序，抗体结构的构建，以及工业化生产等一系列流程上有着技术优势。从目 前已经上市销售的品种来看，我们可以发现单抗产品已经由初期的鼠源性和嵌合性产品逐步 转向了人源化和完全人源化产品，大型企业在蛋白结构重组方面也有自己的优势。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/bd44cdeb-6d56-4eae-8dd0-39745c9bcf80.jpg" style=" " title=" 23.jpg" / /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/485f10af-9064-4086-a32e-7d17c68f73fa.jpg" style=" " title=" 24.jpg" / /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/fefdc633-d80d-486c-a013-98cba0bffb3e.jpg" style=" " title=" 25.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表2 国外单抗产品列表 /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " CTLA4：细胞毒T淋巴细胞蛋白, PD-1：程序性细胞死亡蛋白1 /span /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　PD-L1：程序性细胞死亡配体1, PD-L2：程序性细胞死亡配体2 /span /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　4-IBB：肿瘤坏死因子受体-9, IDO1：吲哚胺2，3-双加氧酶1 /span /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　LAG3：淋巴细胞活化基因蛋白3, KIR：杀伤细胞免疫球蛋白样受体 /span /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　OX40：肿瘤坏死因子受体4 /span /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　TCR(T Cell Receptor，T细胞受体)、CAR(Chimeric Antigen Receptor，嵌合抗原受体) /span /p p style=" text-align: center " 数据来源：中国医学科学院陈晓光教授 /p p 　　2.2靶点和适应症 /p p 　　各大公司在研产品很多，其大的研发趋势是新靶点的发现和新增适应症，近年来看，在研产品还是以肿瘤治疗为主，在原本治疗淋巴癌、乳腺癌的产品基础上，新增了对实体瘤、黑色素瘤、血液肿瘤、霍奇金淋巴瘤等有效的产品。 /p p 　　适应症的新增，与新靶点的发现紧密相关。过去，是以传统的 CD 系列、IL 系列和 EGFR 靶点为主，近年随着PD-1、PD-L1、PD-L2、OX40等新靶点的发现，研发种类也日趋多样。当然我们也不能忽视同一靶点可以开发不同适应症，一般来说，同一个靶点在人的不同细胞中都存在，并且可能发挥不同的作用，因此充分发掘一个靶点在不同细胞通路中的作用，对于扩大一个单抗产品的适应症有重要的意义。 /p p 　　IMGT数据库显示目前(2017年2月17日)有针对298个靶标的抗体药物正在进行开发或已经上市，较2016年同期的269个增加了29个靶标。除去前述的已有产品上市的40个靶点，在研的新靶标有258个。仍然是靶向肿瘤和免疫类的两大类疾病占绝大多数。据Reichert“Antibodies to watch in 2017”，2017年或近几年有可能上市的新靶标有32个，可能获批的新适应症约有18种。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/bb4b4356-d39d-46d7-9df9-bcb852abbc84.jpg" title=" 26.jpg" alt=" 26.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表2. 近几年可能上市的新靶标和新适应症 /p p style=" text-align: center " 资料来源：IMGT 网站 /p p style=" text-align: center " strong 四 国内抗体药分析 /strong /p p strong 1.国内抗体药市场布局 /strong /p p 　　目前全球化学制药的创新已经进入瓶颈期，而生物制药的创新则层出不穷，随着新靶点 的发现和现有产品适应症的不断扩大，治疗性单抗产品的应用范围不断拓展。 /p p 　　我国单抗行业处于高速发展期，2010-2015年 CAGR近50%。我国单抗行业起步较晚，直到 1999 年才上市了第一个国产单抗药物——注射用抗人 T 细胞 CD3 鼠单抗，主要用于器官移植排斥反应。经过十多年的发展，至2015年，我国单抗产业市场规模已达到75亿元，近5年 CAGR 近 50%(2010年国内单抗产业市场规模约10.3亿元)，发展迅猛。 /p p 　　2016-2020 年国内单抗行业 CAGR 达 30%。据中投顾问预测：到 2020 年，我国单抗产业市场规模将达到280亿元，2016-2020 年年均复合增长率达30%，仍远超 Research and Markets预测的未来5年全球单抗产业9.84%的增速水平。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/8e08f4da-a481-45b0-90df-c0dfbad39ea6.jpg" title=" 27.jpg" alt=" 27.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图10. 2010-2020 年我国单抗产业市场规模及预测 /p p style=" text-align: center " 数据来源：长江证券 /p p 　　肿瘤治疗的巨大需求推动我国抗体药市场发展。国内单抗药物主要应用于抗肿瘤领域。不同于国际市场，目前国内上市单抗药物主要应用于抗肿瘤领域，相应市场占比超过70%。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/f803e304-6545-4b7c-aad1-f877c3c88540.jpg" title=" 28.png" alt=" 28.png" / /p p style=" text-align: center " 图11. 当前我国单抗药物主要应用疾病领域 /p p style=" text-align: center " 资料来源：长江证券 /p p 　　我国恶性肿瘤患病人数不断增加，市场规模持续扩大。受人口老龄化、环境污染等因素影响，我国恶性肿瘤发病率逐年上升，患病人数持续增长。2015 年，我国抗肿瘤药物市场规模已接近1000亿元， 2020年则有望突破2000亿元，市场空间巨大。 /p p style=" text-align: center " strong 四 国内抗体药分析 /strong /p p strong 2. 政策有利我国抗体行业发展 /strong /p p 　　2.1 产业政策 /p p 　　作为生物产业的重点发展方向之一，政府近年来出台了一系列政策来鼓励和支持我国单抗产业的发展。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/aefd999e-106b-435a-8046-b3955a76c20d.jpg" style=" " title=" 29.jpg" / /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/16b2311a-e78f-41c9-9a75-48a15b5e1a8b.jpg" style=" " title=" 30.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表3.近年我国政府出台的鼓励抗体行业发展的相关政策 /p p style=" text-align: center " 数据来源：政府网站，渤海证券研究所 /p p 　　2.2医保政策 /p p 　　越来越多的单抗药物进入到地方医保目录。单抗药物价格通常较高，因而暂时未能进入到国家医保目录，但随着其治疗效果不断被认可，越来越多的单抗药物被增补到地方医保目录。随着人社部在时隔七年之后再次对基本医保药品目录展开调整，不排除有重磅级单抗药物进入到国家医保目录的可能。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/9cd91990-a4c7-46cd-89d9-a5f5c0baf50f.jpg" style=" " title=" 31.jpg" / /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/726ee7a1-e1d4-48d3-8f73-2077b4674d2a.jpg" style=" " title=" 32.png" / /p p style=" text-align: center" br/ /p p style=" text-align: center " 表4. 部分进入我国地方医保的单抗药物 /p p style=" text-align: center " 数据来源：药智网、药源网 /p p 　　药品审评审批政策：新药审评时间长阻碍了我国创新药的发展。长时间以来，我国新药审评耗时冗长，2014 年我国1.1和3.1类新药从申请临床到上市获批平均耗时63个月，远远 长于同期美国新药的平均审评时间(约 10 个月)。新药审评时间长不仅降低了我国药企对创新药研发的热情，也使得我国在全球创新药的竞争中逐渐处于劣势。药品审评审批制度改革将加快我国单抗行业发展。2015年8月，国务院发布《改革药品医疗器械审评审批制度的意见》，明确将加快创新药的审评审批，对创新药实行特殊审评审批制度，单抗药物作为创新药的一员，必将受益于此次药审改革，得到快速发展。 /p p strong 3. 国内抗体药研发概况 /strong /p p 　　至2017年2月17日，目前我国共有82家研制单位正在CDE进行171个抗体药物的注册研究，较去年同期增加企业11家，新增抗体32个。年度新增企业数屡创新高，2016年高达17家 加之以前进行过临床注册或已有产品获批但现无注册申报的6家企业，国内涉及抗体药物研制的单位共计88家。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/cdbc4590-5e6c-4fa9-b390-28a61845ce46.jpg" title=" 33.jpg" alt=" 33.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表2. 各企业申报抗体数 /p p style=" text-align: center " 资料来源：生物制品圈 /p p 　　在这171个抗体药中，生产注册的仅有4个【上海百迈博的抗TNFα嵌和(CXSS1200005)，中信国健的抗CD20嵌和(CXSS1100021)、抗HER2人源化(CXSS0700053，CXSS1100005)，山东新时代的TNFαR-Fc融合蛋白(CXSS1000005) 不计数武汉生物制品研究所已终止的抗出血热鼠单抗(CXSS0800002)】。近5年无新申报生产注册的产品，且随着我国生物类似药原则的出台、标准的提高及与国际接轨，之前BLA申报的抗体的审评结局尚不得知。统计CDE“药物临床试验登记与信息公示平台”中登记的抗体药物信息，至今有30家国内本土企业的共计43个抗体药物处于各临床研究阶段。 /p p 　　在前述申报的171个产品中，以“1类新药”申报的有48个，占比28%。然而许多产品虽然以1类新药申报但国外已经有了相同或相似产品上市，非真正意义上的“国内外尚无产品上市”的1类新药。因可获得的产品确切信息有限，粗略估判国内申报的产品中的85%可归类为抗体类似药或抗体仿创药。其中仅抢仿7大热门“重磅炸弹”抗体的申报数就高达91个，Bevacizumab、Adalimumab、Rituximab、Trastuzumab、Cetuximab、Etanercept、Infliximab的抢仿厂家数分别为23家、21家、15家、10家、9家、8家和5家，合计起来的总占比虽然有降低趋势，但仍达到了注册抗体的一半以上(91/171=53%)，如果这些抗体类似药都能够顺利进入市场，可以预见未来市场竞争态势将会异常惨烈。 /p p 　　就开发热点而言，国内企业已有了抗PD-1单抗、ADC药物、去岩澡糖化抗CD20抗体、抗PD-L1抗体、抗PCSK-9抗体、双特异性抗体的申报。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/cd122f45-5c13-421c-9b56-7ade8b17f5f3.jpg" title=" 34.jpg" alt=" 34.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表5. 国内企业关于热点抗体的申报情况 /p p style=" text-align: center " 数据来源：生物制品圈 /p p 　　综上可见，全球抗体药物产业强劲发展，中国抗体药物上市及原始创新产品开发严重不足。无论是已上市销售的还是正在注册研究的抗体药物，国内企业在抗体靶标和新抗体基因发现、新抗体药物创制、产品种类等诸多方面，都与欧美日等发达国家有较大的差距。如火如荼的抗体类似药开发，对于解决国内抗体药物临床需求迫切、药物可及性差等问题意义重大。但国内在研抗体同质化较为严重，需提升我国创新抗体药物的开发及产业转化能力。 /p p strong 4.国内抗体药研发企业概况 /strong /p p 　　目前我国已形成以北京、上海、西安、武汉等为中心的产业基地，但我国企业研发能力相对薄弱，国产单抗药物主要为仿制药，在国内单抗市场，进口药仍占主导，国内企业市场份额仅占15%。但随着国家政策大力支持国产药品、进口药品专利到期增加等利好因素的叠加，国内抗体药物行业迎来发展机遇。 /p p 　　目前，在中国上市的抗体药物共有 23 个，其中，13 个是进口药，中国人开发生产的抗体只有10个，并且4个鼠源的抗体已无销售。2016年，中国抗体市场规模为 13.8 亿美元，其中，83% 的市场份额被进口抗体药物垄断。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/703fffda-96a9-458c-b9f7-a03aeda42bbe.jpg" style=" " title=" 36.jpg" / /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/9e50230c-0e8f-4249-84c2-7eab670dc623.jpg" style=" " title=" 37.png" / /p p style=" text-align: center" br/ /p p style=" text-align: center " 表4. 国内已上市抗体药 /p p style=" text-align: center " 资料来源：长江证券 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/ed00826f-82ab-485f-80c1-619b30179f3d.jpg" title=" 38.jpg" style=" text-align: center white-space: normal " / /p p style=" text-align: center " 表2. 国内抗体药研发现状 /p p style=" text-align: center " 数据来源：医药时间 /p p 　　近几年，中国创新生物药的发展取得了一些令人瞩目的成绩，我国第一个具有全球知识产权的单克隆抗体类药物康柏西普直通(专利持有人为成都康弘生物科技有限公司)美国 FDA 临床 III 期。我国在PD-1、PD-L1方面的研究不断取得突破，已成功报批的药企就有7家：君实生物(我国首个PD-1单抗获批)、恒瑞(2016年2月PD-1单抗获批临床)、百济神州、嘉和(2016年4月PD-1单抗临床申请获受理)、信达生物、思路迪(我国首个PD-L1单抗新药)、誉衡。同时，国内药企与国外企业抗体药物合作不断增加，如药明康德和阿斯利康、恒瑞和Incyte、信达和礼来、广东的中山康方等等。 /p p 　　目前国内抗体药研发实力较强的公司包括，传统优势药企，如复星、恒瑞、齐鲁、海正等，以及创业型企业，如信达、康宁杰瑞、百济神州等。还有一些科研院所。目前申报抗体品种数大于5家以上的企业有齐鲁制药、海正药业、复宏汉霖、上海恒瑞、深圳龙瑞等9家企业。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/bdac5972-2b9e-4c8f-a40e-66704f3fa056.jpg" title=" 39.jpg" alt=" 39.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表2. 国内治疗性抗体申报情况 /p p style=" text-align: center " 数据来源：火石创造 /p p strong 抗体研发企业大概可以分为以下几类： /strong /p p 　　1、以中信国健、百泰为代表，国内最早拥有上市抗体药物产品的生物药物企业，有研发、生产、营销的完整产业链。但在产业剧烈变革的时代，也面临诸多挑战。 /p p 　　2、 以海正药业、康弘药业为代表，本身已经具有一定规模的中药、化药企业，最早一批重金布局抗体药物领域的企业。海正在研产品线丰富，但上市产品安百诺营销压力大，后续面临新一批抗体药物研发企业的激烈竞争。康弘的郎沐虽上市较晚，但头顶首个获得 WHO INN 的光环，占据了地利人和，获得了初步成功，后续仍有 KH903、KH906 等pipeline 储备。但俞德超走后，生物药长远如何布局，还要再看。 /p p 　　3、以齐鲁制药、嘉和生物、复宏汉霖为代表，资本充足，起步较晚，以符合国际标准的高质量生物类似药为突破点来破局。但这类企业也最多，竞争也最为激烈。包括正大天晴、华海药业等一大批企业。 /p p 　　4、以恒瑞医药、百济神州等为代表，研发水平着眼国际水准，靠自主创新达到核心竞争力。这里面又分为两类，一类是已经拥有雄厚资本的恒瑞药业，立志于成为国际一流的创新推动型药企，一类是百济神州这种研发型企业，通过资本市场以及合作开发方式，来获得前期研发需要的资本。这也是欧美通行的研发模式。 /p p 　　5、不得不提的还有国内的生物药物 CRO/CMO 产业，这类企业在整个抗体药物发展过程中将发挥巨大作用，甚至影响产业格局。 /p p strong 5.国内抗体药产业投资分布 /strong /p p 　　投资简介 /p p 　　抗体产业的热度也吸引了众多的资本介入，从2012年到2017年上半年抗体药物企业共披露融资次数47次，涉及融资金额达130亿元。从披露投融资情况看，从2015年开始，抗体产业不管是从融资次数还是融资金额上都有大幅提升，产业热度居高不下，融资次数和融资金均以A轮和B轮居多，提示我国抗体产业仍处于上升阶段。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/f2b8cdb0-1393-448f-a7ca-628f75a59255.jpg" title=" 40.jpg" alt=" 40.jpg" / /p p style=" text-align: center " 表2. 近5年国内抗体药物企业披露投融资金额及笔数 /p p 　　以高领资本、元禾原点、毓承资本、礼来亚洲基金、启明创投为代表的投资机构为抗体领域的繁荣提供了资本支持。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/42f7de45-55d4-4b8a-9ebd-ba7cd0417afe.jpg" title=" 41.png" alt=" 41.png" / /p p & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp 表2. 资本主要投资项目 br/ strong 投资风险 /strong /p p 　　对于生物创新药来说，由于其开发的复杂性，众多国内企业选择合作开发模式以共担风险。由于生物医药专利的复杂性、抗体领域靶点和技术的易重叠性，抗体药物专利问题愈发突出与明显， BMS和默沙东的PD1专利大战、安进/赛诺菲关于PCSK9表位的专利之争更是为国内企业在抗体领域专利布局敲响警钟。 /p

Bevacizumab是重组人源化人血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体，作为美国第一个获得批准上市的抑制肿瘤血管生成的药，可用于转移性结直肠癌以及非鳞状非小细胞肺癌治疗等。在中国，超过10家贝伐珠单抗生物类似药在研发上市过程中，面对生物类似药分析，充满技术挑战，贝伐单抗生物类似药表征是质量控制关键点之一，分析过程中，抗体肽图分析方法尤为关键，今天我们就聊一聊贝伐单抗生物类似药肽图分析技术方法。 肽图分析（peptide mapping）是研究抗体药物结构组成的重要技术之一，抗体通过酶切处理后，利用色谱结合岛津高分辨Q-TOF质谱LCMS-9030分析，不仅可以对蛋白质氨基酸序列进行分析，同时可以对于相应肽段的翻译化修饰（PTM）进行分析。通过岛津反相HPLC方法分离不同性质的肽段，后续肽段通过高分辨质谱进行一级和二级扫描，通过监测的母离子和子离子匹配相应的肽段氨基酸序列以及存在的修饰。肽图分析是抗体蛋白药物质量控制的重要手段，岛津高分辨质谱可以完成相关所有的分析检测项目。 分析仪器及色谱柱方案 01分析仪器 LCMS-9030四极杆飞行时间质谱仪使高速度、高灵敏度的四极杆质谱与TOF技术的紧密结合。融合岛津先进工程技艺的DNA，打造出速度与出色性能兼备的全新一代高分辨质谱仪，以优异表现轻松胜任定性和定量分析挑战。 LCMS-9030 02液相色谱柱 ● 反相肽段分析专用色谱柱● 寿命长，耐压高，出峰稳定Shim-pack GISS-HP,3um，150*3.0 mm 应用实例 以bevacizumab 生物类似药为例，进行peptide mapping分析，将抗体蛋白通过胰酶酶切后，通过反相色谱质谱分离后进入高分辨Q-TOF质谱进行一级全扫描和二级扫描，高分辨数据提取分析匹配相应的肽段序列，完整流程如下图所示。 图. 利用岛津LCMS-9030抗体测序基本流程以及举例 岛津分析bevacizumab 生物类似药序列分析，通过Shim-pack GISS-HP色谱柱（3um，150*3.0 mm），可以高效分离酶切后的轻重链肽段，最后用LC-MS 9030 进行一级和二级扫描，最佳参数色谱质谱参数如下表所示。 图. 利用岛津LCMS-9030抗体测序详细参数 通过软件分析高分辨数据，进而匹配生物类似药的重链和轻链序列，完成整个抗体的肽图分析。因篇幅有限，以重链肽段序列部分数据进行展示，匹配覆盖率100%，可以说明岛津LCMS-9030 Q-TOF质谱在抗体肽段分析方面具有强大的实力。部分序列分析结果见下图所示。 图.bevacizumab 生物类似药重链测序结果展示（部分展示） 结合前述案例，岛津建立高分辨质谱LCMS-9030针对抗体药物进行肽图分析完整策略，此外对于分子量分析、翻译化修饰、二硫键分析、糖基化分析，LCMS-9030可以完成所有相关抗体药物关键质量属性检测，为用户节能增效，创造最大价值。

SHIMSEN Ankylo Protein A在单克隆抗体（单抗）药物的生产过程中，需要测定细胞培养上清液中的单抗滴度或者浓度，以筛选出高产品的单抗药物。岛津最新推出SHIMSEN Ankylo Protein A色谱柱，采用高交联度PS/DVB基质，键合重组Protein A蛋白，适用于单克隆抗体（mAb）和Fc融合蛋白的高速效价分析。极强耐碱性高载样量吸附低、优异的重现性峰形对称优异的重现性良好的重现性吸附低、优异的线性高载样量产品信息SHIMSEN Ankylo Protein A(15μm,2.1x30 mm)货号: 380-01215-74立即询价点击立即查看最新药斯卡排行榜

单克隆抗体(mAb)是制药行业增长最快的治疗方法之一，mAb的高阶结构(HOS)影响药物与靶标的结合特异性，从而影响治疗效果和副作用。若储存而导致HOS发生变化，例如蛋白质错误折叠和聚集，会导致稳定性降低、功效丧失或可能的免疫原性。因此，监测HOS对保证mAb疗法的有效性和安全性至关重要。X射线晶体学和核磁共振(NMR)光谱可以提供原子级分辨率，但存在费时费样品的缺点；生物物理技术，如差示扫描量热法(DSC)、动态光散射(DLS)、荧光光谱、红外(IR)光谱和圆二色(CD)光谱只能提供低分辨率的整体构象。焦碳酸二乙酯(DEPC)作为亲电子试剂能够修饰溶剂可接近的亲核侧链（Cys、His、Lys、Thr、Tyr、Ser）和蛋白质的N末端，这些残基产生的羧基化产物具有+72.021Da的质量转移，经过蛋白水解消化、液相色谱分离和串联质谱分析后，可以识别和半定量特定的蛋白质修饰位点。将一种条件（例如天然）与另一种条件（例如加热）进行比较时，特定残基处共价标记程度的变化可用于探测蛋白质的HOS变化（图1）。在这篇文章中，作者使用DEPC共价标记联用质谱，以利妥昔单抗作为单抗药物的模型，以期在远低于mAb治疗药物熔点的温度下能够特异性检测细微HOS变化，并通过活性测定进行验证。图1. DEPC 标记与质谱联用分析单抗药物结构的流程在通过共价标记研究热应力（heat stressed）利妥昔单抗之前，作者使用CD光谱、荧光光谱和动态光散射(DLS)来识别加热对蛋白质结构的干扰。发现当在低于其熔点的温度下加热利妥昔单抗4小时时，这三种技术在45°C或55°C时无法检测到显著的结构变化，而在65°C时仅显示出轻微的变化。随后作者团队使用DEPC CL-MS探测利妥昔单抗的细微结构变化。在45°C压力下的利妥昔单抗样品中发现DEPC标记水平的变化较少，大多数变化是由于蛋白质受热去折叠导致的标记增加（图2），且可变区的变化远少于恒定区。超过70%的标记变化发生在Tyr、Ser和Thr残基处，而发生在His和Lys残基处的标记变化始终小于20%。标记变化表明，45°C时的结构变化主要是局部微环境的变化，而非溶剂可及性差异显著的大结构变化，也就是说修饰位点分散在整个蛋白质结构中，而不是集中在蛋白质的某些区域。图2. 45°C 热应力 4 h 后 DEPC修饰程度的变化。饼图表示在利妥昔单抗的每个结构域内标记变化显著的修饰残基比例。红色代表标记增加，而蓝色代表减少。条形图表示共价标记变化程度低 (L)、中 (M) 和高 (H)的残基数量。活性测定能反映一定程度的结构变化对利妥昔单抗活性的影响，从而验证DEPC标记结果。桥接ELISA的结果表明，在预热至45°C后，利妥昔单抗的Fc结合活性没有显著变化（图3a），Fc区域的CDC活性估计在45°C热应激后保持不变（图3b），利妥昔单抗的Fab结合活性估计与对照样品没有差异（图3c）。活性测定结果表明蛋白质在45°C时没有发生显著的结构变化。在Fab和Fc区域中标记变化的残基数量相对较少，主要标记对局部微环境变化更敏感的Tyr、Ser和Thr残基。修饰位点分散在整个蛋白质中，对Fab和Fc区域的构象几乎没有影响，与共价标记质谱联用的测定结果相吻合。图3.使用单抗活性测定验证CL-MS实验揭示的结构变化。Fc区的结构完整性通过(a)测量Fc与捕获抗体结合的利妥昔单抗桥接ELISA和(b)测量补体依赖性细胞毒性的Alamarblue测定来评估。Fab区域的结构完整性通过(c)Raji细胞下拉试验评估，测量Fab与B细胞CD20抗原的结合。55°C加热4h后利妥昔单抗所有结构域的残基修饰程度都发生了显著的变化，尤其是Fab区域的VH和VL结构域。（图4）加热至55°C时，His和Lys残基处发生的标记变化几乎是45°C的两倍，表明蛋白质在这些区域展开；Fab区域标记水平发生显著变化，特别是在VH、VL和CL域。这表明利妥昔单抗的Fab区域存在局部结构变化，据报道这也是IgG1分子中对热应激最敏感的区域。Fc区域中没有观察到类似的发生标记变化的残基聚集，Tyr、Ser和Thr处的大多数标记变化为中度或高度变化，这些结果表明蛋白质拓扑结构可能发生变化。图4. 55°C 热应力 4 h 后 DEPC修饰程度的变化。饼图表示在利妥昔单抗的每个结构域内标记变化显著的修饰残基比例。红色代表标记增加，而蓝色代表减少。条形图表示共价标记变化程度低 (L)、中 (M) 和高 (H)的残基数量。尺寸排阻色谱(SEC)测量表明在65°C加热条件下存在高分子量物质。将DEPC CL-MS方法应用于65°C热应力的利妥昔单抗后，发现所有利妥昔单抗结构域的标记发生显著变化（图5），主要体现为标记的减少，这可能是因为蛋白质聚集。利妥昔单抗的Fab和Fc区均发现标记减少的残基簇，活性测定结果显示Fc结合和CDC活性的降低（图3），说明了Fc区特别是CH3结构域的标记变化，与DEPC标记结果一致。图5. 65°C 热应力 4 h 后 DEPC修饰程度的变化。饼图表示在利妥昔单抗的每个结构域内标记变化显著的修饰残基比例。红色代表标记增加，而蓝色代表减少。条形图表示共价标记变化程度低 (L)、中 (M) 和高 (H)的残基数量。总结DEPC标记技术的结构分辨率和灵敏度足以探测细微的蛋白质构象变化，该技术与质谱联用可在低于Tm的温度下揭示利妥昔单抗中的细微HOS变化，与经典的生物物理技术互补。总体而言，鉴于CL-MS简便、灵敏的特点，该方法将适用其他抗体药物的结构研究。

博茨瓦纳、南非等多国近日报告了一种新型变异新冠病毒，该毒株不同寻常的变异已引发众多科研人员关注。　　博茨瓦纳卫生官员当地时间11月24日晚证实，该国发现一种新型变异新冠病毒，并正在对其进行研究。　　英国帝国理工学院的病毒学专家托马斯皮科克日前表示，博茨瓦纳发现的这种新毒株名为B.1.1.529，有32处变异，其中多处变异或将导致对现有疫苗更强的抗药性。皮科克称“其令人难以置信的刺突细胞突变表明，这可能是值得关注的（变异毒株）”。　　英国伦敦大学学院生物学教授弗朗索瓦巴卢说，B.1.1.529携带着一系列不寻常的突变，可能是在免疫力低下人员慢性感染期间发生的变异，也可能来自某个未经治疗的艾滋病患者。他表示，应密切监测这一变异，但“没有理由过度担心，除非它在不久的将来导致感染率上升”。　　为预防该毒株在英国传播，英国卫生大臣贾维德25日晚在社交媒体上说，南非、博茨瓦纳等6个非洲国家将从26日起被列入“红色”警戒名单，英国将从26日中午12时起暂停运行来自这些国家的航班。　　博茨瓦纳卫生部25日通报说，该国已报告4例该变异毒株感染病例。该国总统新冠疫情防控特别工作组协调员凯伦马苏普介绍说，这4例病例在22日进行了航空旅行前新冠检测，结果呈阳性。这4例病例都已完全接种过新冠疫苗。初步研究结果表明，和德尔塔毒株相比，该变异毒株具有更多基因突变。　　南非国家传染病研究所25日也宣布，该国迄今共发现了22例B.1.1.529病毒感染者。　　南非卫生部当天紧急召开针对新型变异病毒的新闻发布会。该国夸祖鲁-纳塔尔省研究创新与测序平台负责人图利奥德奥利韦拉表示，这一新毒株令人担忧，它携带的变异可能会导致传染性增强并帮助其规避免疫系统，这也许是造成最近几天南非豪登省确诊病例急速增加的原因。　　一些卫生专家认为，随着多国解禁并重开国际旅行，该变异毒株的传播范围已经扩大到更多国家和地区。　　世界卫生组织24日已将该毒株列入“正在监控”的变异毒株范围，世卫专家将对该毒株进行分析。

仪器信息网讯 罗氏制药近期宣布，旗下佳罗华（英文名：Gazyva，通用名：奥妥珠单抗）已获得中国国家药品监督管理局（NMPA）正式批准，1类创新药利司扑兰口服溶液用散获批上市。据悉这两款药物分别用于淋巴瘤、脊髓性肌萎缩症治疗！罗氏新一代单抗新药获批，助力淋巴瘤一线治疗罗氏制药中国6月3日宣布，旗下佳罗华（英文名：Gazyva，通用名：奥妥珠单抗）已获得中国国家药品监督管理局（NMPA）正式批准，与化疗联合，用于初治的II期伴有巨大肿块、III期或IV期滤泡性淋巴瘤成人患者，达到至少部分缓解的患者随后的单药维持治疗。据悉，佳罗华一线治疗方案的获批为我国滤泡性淋巴瘤（FL）患者带来了治疗新选择，作为全球首个经糖基化改造的Ⅱ型人源化抗CD20 单克隆抗体，奥妥珠单抗的创新结构和机制可加强肿瘤细胞杀伤力，以实现患者无进展生存率的提升。该项研究结果表明，经过34.5个月中位随访观察，与对照组标准治疗方案相比，奥妥珠单抗联合化疗方案可使进展/复发或死亡风险显著降低34%。近年来滤泡性淋巴瘤在中国的发病率不断升高，而这类肿瘤通常很难被治愈。大多数患者会经历反复复发，且每经复发，治疗难度即升级，越发加重身心压力影响治疗。2020年《中国滤泡性淋巴瘤患者生存状况白皮书》调查所显示，滤泡性淋巴瘤患者深受反复治疗的困扰，怀有对复发的恐惧，较难回归正常社会生活。北京大学肿瘤医院党委书记、淋巴瘤科主任朱军教授表示，“近年来，滤泡性淋巴瘤一线治疗的探索虽然在一路推进，成果却始终不如人意。基于此，奥妥珠单抗的到来不仅有望实现患者对于降低复发和死亡风险、获得更好生活的心愿；其更能为后续治疗带来积极的影响。因而对于该疾病治疗领域而言，这次批准具有里程碑式意义。”罗氏新药利司扑兰在华获批 用于治疗脊髓性肌萎缩症6月17日，国家药监局官网显示，罗氏旗下神经创新药物艾满欣（通用名：利司扑兰）口服溶液用散获批，用于治疗2月龄及以上患者的脊髓性肌萎缩症（SMA）。截至目前，利司扑兰已在包括中国在内的超过40个国家及地区获批，且在全球范围内，已有超过3000位SMA患者接受利司扑兰治疗。SMA的主要发病原因是患者SMN1基因的缺失或突变，导致全身功能性SMN蛋白表达不足，进而影响患者的运动、呼吸、吞咽以及脾脏、心脏、胰腺等多器官，甚至威胁生命。SMA是导致婴儿死亡的最常见遗传疾病之一，重症SMA患儿如不进行有效治疗，80%患儿会在一岁内死亡，很少能存活超过两岁。2018年5月，SMA被列入第一批纳入目录的121种罕见病之一。中华医学会儿科分会内分泌遗传代谢学组副组长、北京大学第一医院主任医师熊晖教授指出，SMA患者越早诊断，越早开始有效治疗，预后越好，甚至在症状前开始治疗，有希望达到同龄非患病儿童的状态。“利司扑兰的获批，意味着SMA的治疗进入了口服治疗的新阶段。”中华医学会儿科分会罕见病学组组长、复旦大学附属儿科医院主任医师王艺教授表示，通过提高全身功能性SMN蛋白水平，利司扑兰可逆转疾病的自然进程，为患者带来多重获益，包括改善运动功能、无事件生存、呼吸和吞咽等。诊断淋巴瘤的通常方法第一，要有明确的病理诊断，目前为止主要的是靠切除活检，而且尽量切除完整的淋巴结或者淋巴组织，现在的病理检查手段已经不局限于显微镜下看细胞了，还包括了流式以及分子病理等等，病理诊断的手段越来越多。第二，分期的诊断，以影像学的为主，最常用的是CT、增强CT的检查，但是对于某些特殊的类型比如弥漫大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤，它本身是可以治愈的，对PET高度敏感，所以对于这两种类型推荐在主要的治疗节点选用PET-CT的检查。第三，骨髓的检查，包括骨髓细胞学、骨髓活检等等，因为淋巴瘤的诊断还包括预后分型，所以对于乳酸脱氢酶，对于是否有结外部位受侵，需要特别注意，最常见的结外受侵的部位是胃肠道，所以对于有些特殊的病人可能还涉及到胃镜甚至肠镜的检查。脊髓性肌萎缩症检查方法1.对称性进行性近端肢体和躯干肌无力肌萎缩，不累及面肌及眼外肌，无反射，亢进感觉缺失及智力障碍。2.家族史符合常染色体隐性遗传方式。3.血清肌酸激酶（CK）：患者血清CK水平正常或少数轻中度升高。4.肌电图显示广泛神经源性损害。5.肌活检显示神经源性病理改变。6.基因检测：多重连接探针扩增法（MLPA）、实时荧光定量 PCR（qPCR）、PCR限制性酶切分析法（DHPLC）和变性高效液相色谱等检测SMNl基因第7或第7、8外显子纯合缺失突变。MLPA、qPCR和DHPLC可用于SMNl和SMN2基因拷贝数检测，酶切法可以用于sMNl基因外显子7、8的纯合缺失检测；SMNl基因测序用于检测SMNl基因内是否存在微小突变。