单波长

请教：在高效液相的检测器中，有双波长、双通道与单波长、单通道等不同的类型，双波长与双通道是不是同一个概念？单波长与单通道是不是同一概念？双与单比较有什么优势？谢谢！

请教一下，为什么国标测总氮要用220,275双波长测试，正常单波长不就可以测了吗？

总氮测定是两个波长，在220和275两个波长测定时，是先把一个波长测完再测另一个波长呢？还是可以一个样品同时把两个波长测完？

在用酶联免疫法测定抗原或抗体时，不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择，对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解，并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此，本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会，供同道参考。一 材料和方法1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒；eppendorf 20-20ul的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。3.方法 底物液配制：底物液A、B各5ml混合，加入微量酶标记物，再加入5ml终止液，呈微黄色，混匀待用；利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板，用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液，另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm（无630nm）的双波长检测，在ST-360上分别进行450nm单波长和450nm及630nm的双波长检测吸光度各两次。二　结果　　1.分别对所得结果进行统计，发现单、双波长测定结果有较大的差异，双波长测定结果的CV值远小于单波长测定，结果见表1。2.对ST-360两次重复测定结果进行分析，结果基本一致，见表2。表1酶标板吸光度在两台酶标仪上的测定统计结果酶标仪 BIO-RAD550 ST-360 波长 450nm 450nm+655nm 450nm 450nm+630nm 最小值 0.125 0.126 0.130 0.131 最大值 0.154 0.139 0.153 0.141 均值 0.1356 0.1329 0.1399 0.1361 标准差 0.00671 0.00267 0.00467 0.00247 CV（%） 4.94 2.01 3.34 1.82 最大值/最小值 1.232 1.103 1.177 1.076 表2 ST-360酶标仪两次吸光度测定统计结果波长 450mnm 450nm+630nm 1 2 1 2 最小值 0.130 0.129 0.131 0.131 最大值 0.153 0.152 0.141 0.141 均值 0.1399 0.1391 0.1361 0.13711 标准差 0.00467 0.00495 0.00247 0.00229 CV（%） 3.34 3.56 1.82 1.67 三　讨论　　1.酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同，一般分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路，但测定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。2.酶标仪在用单波长测定吸光度时，除受到测定干扰（样本的浊度、干扰色等）和电路干扰（包括噪音、漂移、电压等）等因素外，受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中，由于液体表面张力的作用，液体的表面不是一个平面，而是形成一个凹面，从侧面看似凹透镜，这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响，光线在通过液体时，除正常被液体吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光线通过凹透镜那样），影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源，如果每次能在同一部位检测，吸光度的重复性将得到保证，但由于机械运动等造成的误差，不可能保证每孔都在相同部位被检测，因此造成了孔与孔之间有一定的差异。结果见表1，整块板单波长检测的CV在3%以上，吸光度最高值和最低值的相对误差达17%以上。3.在双波长测定中，减少了测定干扰和电路干扰，因此测定结果明显好转，结果见表1，整块板样本的CV在2%以下。ST-360在进行稳定性观察中，如表2所示，两次检测结果基本一致，这表明ST-360的稳定性较好。同时，从表1也可以看到，科华公司生产的ST-360与BIO-RAD 550的检测结果一致，两者的检测性能基本相同。4.由于液体表面张力的不同，导致单波长测定时的误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到最后加入底物和终止液后的液面情况，用加入表面活性剂的洗涤液清洗后，形成的液面更凹，对单波长检测的影响更大，并且与表面活性剂的浓度成正比。而且中性蒸馏水洗涤后，单、双波长检测的结果基本一致。5.在酶联免疫法测定抗原抗体中，由于所使用的底物不论是邻苯二胺（OPD）-H2O2，还是四甲基联苯胺（TMB）-H2O2，显色终止后，在630nm和655nm处的吸光度值都只有吸收峰处（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用双波长检测，不会影响检测灵敏度。建立在进行酶联免疫检测时，酶标仪比色应该首选双波长。这样可以提高临界值处标本的分析正确度，减少实验误差。

想问问各位大佬，在紫外分光测量中，有用单光束三波长的方法来测量吗？三种波长分别是测量波长，参考波长和混合介质的平均波长。请问这种测量方法有什么好处？能提供这种测量方法的基本原理吗？

[em07] 各位老师，您好！我用毛细管电泳测蛋白质的组成，紫外检测波长文献中有214nm，254nm等，这些波长如何确定，请指教。

那位指点一下，为何测总氮时要同时测两个波长？

[em61] [em61] 请问丹参水提液的澄清度和色度的波长是多少？？

在总氮的测定中，紫外分光光度计读数时，波长275nm处突然读出来的数是负值是怎么回事（测到一半才会的），这样测定结果可信度高不高？

[color=#444444]HPLC液相色谱，要同时定量测定四种成分，但是其中有三种成分（儿茶素，原儿茶酸，没食子酸）的检测波长相接近大概在280左右，另一种成分（熊果酸）的检测波长大概在220左右，流动相为乙腈和水，单波长不能实现，想用双波长，请问大神们可以用双波长吗？双波长得出的结果图是两个，分析数据的时候怎么分析呀？？[/color]

本人新手 测水样和做标准曲线的时候 在波长275处可以测得数据，可是在波长220处的测不到数据，显示达到极致。这是什么原因啊 怎么才能解决

仪器是Varian 的715，由于长时间未用，正在做波长校准现有以下问题，1、波长校准时无法通过，弹出‘无法检测到谱线’，是何原因2、用于波长校正的15种元素如果缺一种是否能通过3、用于波长校正的方法是否能自己修改，如可删除其中一种或多种元素4、用单标配15种元素校准液时大家是否遇到Mo的介质是H2SO4，从而会与Ba反应的问题，如何解决本人是刚刚接触ICP的菜鸟，一切都要从头学，老板还催的紧，总问我进度如何，感觉亚历山大，希望各位兄弟姐妹们不吝赐教。

请各位大虾们讨论讨论DAD检测器狭缝的作用，全波长190~900纳米通过流通池后进入狭缝，因为狭缝宽度远小于波长，会发生单狭缝衍射现象，衍射后波长的光是如何运行的？是发射到光栅上，由光栅上分光？还是发射的反光镜上，有衍射光谱反射到二极管上？为什么低宽度狭缝会提高分辨率？

采用紫外光度法测水质总氮，做曲线时发现，线性挺好，但每次做的都有较大差别。经分析，认为是做实验时。波长从220nm到275nm，每次都要调一遍，但由于紫外是短波，220nm和275nm总是不能和上次做实验的完全一样，我每次调的时候都很认真了，但是同事个高，总看着我的波长调的不到位，这还真不好解决呢，总不能一人做个曲线吧？

做总氮的空白220nm的波长在0.030以下，但是275nm的波长一直在0.010左右，220/275的比值大于20%了。实验用水用的是娃哈哈和屈成氏，过硫酸钾是默克的，氢氧化钠含氮量也是小于0.0005%的，全部都是新开的。实验玻璃器皿也用单独的1+9盐酸缸泡过了，石英皿也是新的，但是275的波长一直不行。消解完的空白也拿去其它公司测过，也是275nm波长过大。求助，求助。

为什么不同的厂家的波长不一样？一位版友说他们铝167.120单我查看我们瓦里安得是167.019两个波长为什么不同？谁帮忙解释一下！

请问大侠们，我用的普析TAS-990F型单火焰原子吸收，今天在做Cr时，仪器自动寻峰出来的波长除了那个359.4，以外显示的第二个峰是357.5，而不是我们需要的357.9这个可能是什么原因照成的呢？

以前用热电的ICP，工程师说用单标准溶液进行波长校正效果好。现在用瓦里安的ICP，我咨询怎么做波长校准，他们有两种，一种是用Hg灯进行波长校准。一种是用混标准样品校准。这三种波长校准，到底那种好呢？[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/yp][color=#3333ff]ICP-MS[/color][/url]到底用那种进行波长校准呢？

最近做多环芳烃测定，16种物质最大吸收波长都不太一样，检测器只有单波长，想要得到大部分最大吸收，但是担心频繁切换波长会不会对检测器有伤害

大家好! 我初学使用紫外可见分光光度计,有一些问题想请教一下大家.望大家不吝赐教! 我用紫外可见分光度计在波长为190~400nm扫描蛋氨酸,想确定其最大吸收波长.但是发现吸收峰并不明显,从190~230吸收逐渐下降,之后就像基线一样平缓,这样的图谱怎样来确定其最大吸收波长呢. 谢谢各位!

最近听说有COD仪器有双波长功能，不知道这个双波长跟单波长的仪器主要有什么区别？测值有什么不同么？

要做自动进样几百针，不关注谱图，但是如果不开氘灯安捷伦1200不让自动进样，所以想找个不是很费氘灯的波长来自动进样。请教大家低波长还是高波长对氘灯寿命更好

黄曲霉毒素检测用衍生方法，关于发射波长和激发波长有几种选择，激发波长360和365、激发波长440和450、460哪种检测结果能好点

我们在做液相检测的时候一般设置的波长应该都是惨比波长吧？我想请问下对于未知物这个惨比波长一般是怎么确定的 是不是用紫外可见分光光度计进行全扫描然后根据最大吸收峰位置设定。 还有这个位置的最大吸收峰的波长和这个惨比波长有什么关系吗？ 怎么才能确定最佳的惨比波长

我们用原子吸收测定样品中的重金属，有的用的主波长，有的是次级波长，不知道波长是根据什么来选择的，是根据国标的参考吗？还是根据样品浓度范围来决定？还是都可以啊？我们用火焰法测铅，好像主波长和次级波长都可以测。

酶标仪使用时为什么要用双波长？而检定时又要用单波长？

确定测定波长与参比波长的方法有哪些?多讨论啊..

国标法总氮用220nm波长加275nm波长测总氮，但用硝酸钾做吸光度测试，发现硝氮的最大吸光度非220nm, 在两台紫外分光光度计上测上结果，一台最大吸光度203nm，另一台最大吸光度209nm. 分光光度计可能存在波长分辨率偏差， 请问大家的测试结果是多少nm波长的。 并且我1CM比色皿，测下来的摩尔吸光系数还差异很大，220nm处一台结果3.731E3L/(mol.cm), 另一台220nm结果2.147E3L/(mol.cm).