斑马鱼

[align=center]斑马鱼的研究现状[/align][font=宋体][size=14px][color=black]斑马鱼（[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]Zebrafish[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]）作为新一代应用于药物活性检测的模式生物，目前其药理模型已基本成熟并广泛应用于医药药理研究。斑马鱼作为生物模型而被广泛应用于药物筛选，并成为研究心血管促生和抑制作用模型[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][1][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]。斑马鱼在医药药理研究过程中，可用来研究器官发育和疾病模型，是常见的模式生物之一，斑马鱼的胚胎在肉眼观察下呈透明状，而且斑马鱼在染色剂或荧光标记下都可通过显微镜观察其体内器官。当斑马鱼用作生物模型检测活性成分的药理作用时，斑马鱼的药物用量少。斑马鱼在药物活性筛选时，其生长周期短，耗时少，效率高。在活性检测实验中，斑马鱼的实验操作简便。在受精后[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]48[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]小时后，斑马鱼的背动脉与轴静脉之间形成简单的循环网。在受精后[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]72[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]小时后，斑马鱼体内形成管脉系统，肠下静脉血管[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black](SIVs)[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]初步形成[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][2][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]。李艳[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][3][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]等研究发现丹红注射液对斑马鱼节间血管具有明显的再生功能，对血管损伤具有明显的修复保护作用。该实验建立了研究血管新生干预作用的可靠实验方法。梁爱华[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][4][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]研究发现斑马鱼的有些突变具有与人类疾病相似的临床症状，可作为先天性铁粒幼红细胞性贫血、骨髓再生障碍等血液性疾病模型和心肌收缩不良、心律不齐等心血管疾病模型。魏易洪[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][5][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]等通过实验研究证明人参水煎液在较低浓度下可促进[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]VRI[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]模型斑马鱼节间血管（[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]ISVs[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]）增长，较高浓度的人参水煎液则会出现相反的毒副作用，建立节间血管（[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]ISVs[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]）抑制模型，并证明其方法的可行性。[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]斑马鱼作为生物模型而被广泛应用于药物筛选，并成为研究心血管促生和抑制作用的主要模型之一。其繁殖生长周期短，子代数量多，可同时大规模检测不同样品。运用斑马鱼大规模快速比较药物含量高低，体现其模式生物的筛选作用，同时也能为研究心脑血管药物活性评价提供一定的参考。运用斑马鱼作为大规模快速比较药物含量高低的模式生物筛选药物的药理作用，大大提高了检测效率。[/color][/size][/font]参考文献[font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][1] WesterfieLd M. The zebrafish book:aguide for the Laboratory use of zebrafish[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]（[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]Daniorerio[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]）[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][ M ]. Oregon: University of Oregon Press, 2007.[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][2] KimmeL CB. Genetics and earLy deveLopmentof zebrafish[J]. Trends in genetics, 1989, 5 ( 8 ):283-288.[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][3] [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]李艳[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]刘晓金[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]王平[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black],[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]等[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]丹红注射液对斑马鱼促血管作用的研究[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][J]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]中华中医药杂志[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], 2016, 31 ( 06 ): 2270-2273.[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][4] [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]梁爱华[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]斑马鱼一种可用于中药药效和毒性筛选的鱼类模型[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][J]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]中国中药杂志[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black],2009, 34 ( 22 ):2839-2840[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][5] [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]魏易洪[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]周忠焱[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]朱灵妍[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black],[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]等[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]人参水煎液对斑马鱼血管生长作用[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][J]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]辽宁中医药大学学报[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], 2017, 19 ( 04 ) : 8-10.[/color][/size][/font]

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[font=宋体]急性肝损伤（[/font]acute liver injury[font=宋体]，[/font]ALI[font=宋体]）是由无肝病或患有肝病但处于稳定状态的人员在受到长期熬夜、大量酗酒、肝脏缺血缺氧及药物中毒等因素所致[/font][sup][color=black][1-2][/color][/sup][font=宋体]。随着医学技术的发展，越来越多的研究者发现[/font]ALI[font=宋体]的发生发展与炎症反应、氧化与抵御氧化系统失衡及铁死亡等密切相关[/font][sup][color=black][3-5][/color][/sup][font=宋体]。肝脏损伤进一步恶化，会发展为更为严重的衰竭[/font][sup][color=black][6-7][/color][/sup][font=宋体]，诱发机体免疫能力下降、血糖含量异常、脂质代谢紊乱等异常现象累及其他器官损伤。目前，[/font]ALI[font=宋体]的临床防治主要采用保肝药物进行治疗，严重者会选择肝脏替代治疗[/font][sup][color=black][8-10][/color][/sup][font=宋体]。 现代研究发现很多中药及有效成分在防治肝病领域表现出较好的前景[/font][sup][color=black][11-14][/color][/sup][font=宋体]。灯盏花素可以降低[/font][font=宋体]丙氨酸氨基转移酶[i][/i][/font][font=宋体]（[/font]alanine aminotransferase[font=宋体]，[/font]ALT[font=宋体]）、[/font][font=宋体]天冬氨酸[/font][font=宋体]氨基转移酶[/font][font=宋体]（[/font]aspartate aminotransferase[font=宋体]，[/font]AST[font=宋体]）和丙二醛（[/font]malondialdehyde[font=宋体]，[/font]MDA[font=宋体]）水平，提高[color=var(--weui-LINK)]抗氧化剂[i][/i][/color]超氧化物歧化酶（[/font]superoxide dismutase[font=宋体]，[/font]SOD[font=宋体]）的活性，有效调节核因子[/font]E2[font=宋体]相关因子[/font]2[font=宋体]（[/font]nuclear factor-erythroid 2-related factor 2[font=宋体]，[/font]Nrf2[font=宋体]）信号通路，减轻酒精引起的肝损伤[/font][sup][color=black][15][/color][/sup][font=宋体]。[/font][font=宋体]秦皮甲素能够降低四氯化碳（[/font]carbon tetrachloride[font=宋体]，[/font]CCl[sub][color=black]4[/color][/sub][font=宋体][color=black]）[/color][/font][font=宋体]引起的小鼠肝脏中纤维沉积现象，减少[/font]AST[font=宋体]、[/font]ALT[font=宋体]及胆红素（[/font]total bilirubin[font=宋体]，[/font]TBil[font=宋体]）的含量，下调透明质酸酶（[/font]hyaluronidase[font=宋体]，[/font]HAase[font=宋体]）、[/font]III[font=宋体]型前胶原（[/font]procollagen type III[font=宋体]，[/font]PCIII[font=宋体]）和层黏连蛋白（[/font]laminin[font=宋体]，[/font]LN[font=宋体]）的水平，并改善肝组织炎症与脂质空泡[/font][sup][color=black][16][/color][/sup][font=宋体]。因此，从天然药用植物探索抗[/font]ALI[font=宋体]活性物质仍然是目前临床防治[/font]ALI[font=宋体]的有效途径。[/font] [font=宋体]北桑寄生[/font][i]Loranthus tanakae[/i] Franch. et Sav.[font=宋体]是桑寄生科桑寄生属落叶灌木[/font][sup][color=black][17][/color][/sup][font=宋体]，寄生对象为栎属、桦属、李属等树木，在中国、日本、韩国、朝鲜等均有分布[/font][sup][color=black][18][/color][/sup][font=宋体]。现代研究表明北桑寄生中含有糖类、甾体皂苷类、黄酮类等次生代谢物[/font][sup][color=black][19][/color][/sup][font=宋体]。其中黄酮类化合物在北桑寄生药材中含量丰富（约[/font]10.58%[sup][color=black][20][/color][/sup][font=宋体]）。目前，北桑寄生的药理活性研究较少，还尚未见北桑寄生在治疗[/font]ALI[font=宋体]方面的研究报道。课题组前期研究显示，北桑寄生总黄酮（[/font]total flavonoids of [i]L. tanakae[/i][font=宋体]，[/font]LTF[font=宋体]）具有良好的抗氧化作用，可以促进脂多糖诱导的[/font]RAW264.7[font=宋体]细胞中[/font]Nrf2[font=宋体]转录活性，抑制炎症反应的发生[/font][sup][color=black][21][/color][/sup][font=宋体]。因此，本研究利用硫代乙酰胺（[/font]thioacetamide[font=宋体]，[/font]TAA[font=宋体]）建立斑马鱼[/font]ALI[font=宋体]模型，对北桑寄生中黄酮类化合物的保肝活性进行研究，以期为北桑寄生的药理研究提供科学依据。[/font] [b][color=#ffffff][back=#7a4442]1 [font=黑体]材料[/font][/back][/color][/b]1.1 [font=黑体]动物[/font]AB[font=宋体]野生型斑马鱼品系、[/font]CZ320[font=宋体]肝脏荧光标记斑马鱼[/font]Tg[font=宋体]（[/font][i]-1.7apoa2:GFP[/i][font=宋体]）和[/font]CZ59[font=宋体]中性粒细胞荧光标记斑马鱼[/font]Tg[font=宋体]（[/font][i]lyz:DsRED2[/i][font=宋体]）由山东第一医科大学斑马鱼中心提供。斑马鱼养殖在昼夜交替周期为[/font]14 h/10 h[font=宋体]的循环系统中，水温控制在（[/font]28[font=宋体]±[/font]1[font=宋体]）℃，[/font]pH[font=宋体]值与盐浓度分别维持在[/font]7.4[font=宋体]、[/font]0.004%[font=宋体]左右，每日饲喂[/font]2[font=宋体]次丰年虾，[/font]1[font=宋体]次普通饲料。[/font][b][/b]1.2 [font=黑体]药品与试剂[/font]LTF[font=宋体]为本实验室自制[/font][sup][color=black][22][/color][/sup][font=宋体]；芦丁对照品（质量分数≥[/font]98%[font=宋体]，批号[/font]153-18-4[font=宋体]）购自西安瑞林生物科技有限公司；[/font][i]N[/i]-[font=宋体]乙酰半胱氨酸（[/font][i]N[/i]-acetylcysteine[font=宋体]，[/font]NAC[font=宋体]，质量分数≥[/font]98%[font=宋体]，批号[/font]616-91-1[font=宋体]）、油红[/font]O[font=宋体]粉末（批号[/font]1320-06-5[font=宋体]）购自上海源叶生物有限公司；[/font]TAA[font=宋体]（批号[/font]62-55-5[font=宋体]）购自美国[/font]Sigma-Aldrich[font=宋体]公司；[/font]ALT[font=宋体]试剂盒（批号[/font]C009-2-1[font=宋体]）、[/font]AST[font=宋体]试剂盒（批号[/font]C010-2-1[font=宋体]）、[/font]MDA[font=宋体]试剂盒（批号[/font]A003-1-1[font=宋体]）、[/font]SOD[font=宋体][color=var(--weui-LINK)]试剂盒[i][/i][/color]（批号[/font]A001-3-2[font=宋体]）、过氧化氢酶（[/font]catalase[font=宋体]，[/font]CAT[font=宋体]）试剂盒（批号[/font]A007-2-1[font=宋体]）购自南京建成生物工程研究所；还原型谷胱甘肽（[/font]reduced glutathione[font=宋体]，[/font]GSH[font=宋体]）试剂盒（批号[/font]BC1175[font=宋体]）、活性氧（[/font]reactive oxygen species[font=宋体]，[/font]ROS[font=宋体]）试剂盒（批号[/font]CA1410[font=宋体]）购自北京索莱宝科技有限公司；[/font]BCA[font=宋体]蛋白定量试剂盒（批号[/font]P0012[font=宋体]）购自碧云天生物技术有限公司；苏木素[/font]-[font=宋体]伊红（[/font]hematoxylin-eosin[font=宋体]，[/font]HE[font=宋体]）染液套装（批号[/font]G1003[font=宋体]）购自武汉赛维尔生物科技有限公司；其他试剂均为分析级别。[/font]1.3 [font=黑体]仪器[/font]BO-IR[font=宋体]型组织研磨破碎仪（山东百欧医疗科技有限公司）；[/font]HC-2518R[font=宋体]型高速冷冻离心机（中佳有限公司）；[/font]DK-98-II[font=宋体]型电热恒温水锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；[/font]SpectraMaxABS[font=宋体]型酶标仪（[/font]CMax Plus Molecular Devices[font=宋体]公司）；[/font]HPG-280BX[font=宋体]型恒温培养箱（东联电子技术开发有限公司）；[/font]IX83[font=宋体]型倒置荧光显微镜（日本[/font]Olympus[i][/i][font=宋体]公司）；[/font]GL224I-ISCN[font=宋体]型万分之一天平（德国[/font]Sartorius[font=宋体]公司）；斑马鱼养殖设备（上海海圣生物实验设备有限公司）；[/font]JB-P5[font=宋体]型包埋机（武汉俊杰电子有限公司）；[/font]CRYOSTAR NX50[font=宋体]型冰冻切片机（赛默飞世尔科技有限公司）。 [/font][b][color=#ffffff][back=#7a4442]2 [font=黑体]方法[/font][/back][/color][/b]2.1 [b]LTF[/b][font=黑体]含量检测[/font][font=宋体]配制芦丁对照品溶液，绘制回归方程。称取实验室自制的[/font]LTF[font=宋体]，配制成质量浓度为[/font]1 mg/mL[font=宋体]的溶液，使用三氯化铝[/font]-[font=宋体]醋酸钠溶液显色，利用回归方程计算[/font]LTF[font=宋体]的含量[/font][sup][color=black][22-23][/color][/sup][font=宋体]。[/font]2.2 [b]LTF[/b][font=黑体]耐受浓度筛选[/font][font=宋体]将成熟健康的[/font]6[font=宋体]月龄斑马鱼以[/font]1[font=宋体]∶[/font]2[font=宋体]或[/font]2[font=宋体]∶[/font]2[font=宋体]的雌雄比放入产卵缸中，待自然产卵后，收集透明胚胎，用循环系统中的养鱼水清洗[/font]2[font=宋体]次，洗去粪便与杂质，转移至干净的培养皿，添加含有少量亚甲基蓝溶液的养鱼水，放置于[/font]28 [font=宋体]℃恒温培养箱内孵育[/font]3 d[font=宋体]。将受精后[/font]3 d[font=宋体]（[/font]3 d post fertilization[font=宋体]，[/font]3 dpf[font=宋体]）健康[/font]AB[font=宋体]幼鱼转移到[/font]12[font=宋体]孔板中，每孔放入[/font]30[font=宋体]尾幼鱼，设置对照组和[/font]LTF[font=宋体]（[/font]25[font=宋体]、[/font]50[font=宋体]、[/font]100[font=宋体]、[/font]200[font=宋体]、[/font]400[font=宋体]、[/font]800 μg/mL[font=宋体]）组，各孔为[/font]4 mL[font=宋体]体系，对照组加入含[/font]0.1%[font=宋体]二甲基亚砜（[/font]dimethyl sulfoxide[font=宋体]，[/font]DMSO[font=宋体]）的养鱼水，给药组加入不同质量浓度的[/font]LTF[font=宋体]药液，记录各组幼鱼生存情况，绘制生存曲线。[/font]2.3[b]LTF[/b][font=黑体]对[/font][b]TAA[/b][font=黑体]诱导的斑马鱼肝损伤的影响[/font]2.3.1 [font=宋体]斑马鱼荧光肝脏分析[/font] [font=宋体]选取具有荧光标记的[/font]3 dpf Tg[font=宋体]（[/font][i]-1.7apoa2:GFP[/i][font=宋体]）转基因斑马鱼幼鱼于[/font]6[font=宋体]孔板内，设置对照组、模型组、阳性药[/font]NAC[font=宋体]（[/font]10 μmol/L[font=宋体]）组和[/font]LTF[font=宋体]（[/font]12.5[font=宋体]、[/font]25.0[font=宋体]、[/font]50.0 μg/mL[font=宋体]）组，每孔[/font]15[font=宋体]尾。对照组给予斑马鱼养殖水，模型组加入[/font]7 mmol/L TAA[font=宋体]溶液，各给药组给予[/font]7 mmol/L TAA[font=宋体]和相应药物，给药处理[/font]72 h[font=宋体]。给药结束后，斑马鱼用三卡因麻醉，置于载玻片上，使幼鱼两眼重叠，用荧光显微镜采集同一体位图像，使用[/font]Image J[font=宋体]软件统计幼鱼的荧光肝脏面积。[/font]2.3.2 [font=宋体]斑马鱼体长与卵黄囊吸收延迟的面积统计[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药，给药结束后，使用[/font]Image J[font=宋体]软件测量幼鱼的体长与卵黄囊吸收面积。[/font]2.3.3 HE[font=宋体]染色[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药，给药结束后，将幼鱼固定后用石蜡包埋，制作切片，进行[/font]HE[font=宋体]染色，最后用中性树胶封片。在光学显微镜下采集图像，分析各组斑马鱼幼鱼肝脏组织病理状况。[/font]2.3.4 [font=宋体]油红[/font]O[font=宋体]染色[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药，给药结束后，各组随机选取[/font]10[font=宋体]尾幼鱼，三卡因麻醉后，用[/font]4%[font=宋体]组织固定液于[/font]4 [font=宋体]℃[/font][font=宋体]固定[/font]12 h[font=宋体]。用[/font]PBS[font=宋体]洗净固定液，在摇床上分别以[/font]20%[font=宋体]、[/font]40%[font=宋体]、[/font]80%[font=宋体]、[/font]100%[font=宋体]的[/font]1,2-[font=宋体]丙二醇梯度脱水[/font]10 min[font=宋体]。然后，用[/font]0.5%[font=宋体]油红[/font]O[font=宋体]染液在水浴中避光染色[/font]1 h[font=宋体]，再用[/font]100%[font=宋体]、[/font]80%[font=宋体]、[/font]40%[font=宋体]、[/font]20%[font=宋体]的[/font]1,2-[font=宋体]丙二醇依次脱水[/font]15 min[font=宋体]，最后用[/font]PBS[font=宋体]清洗，在显微镜下采集肝脏区域图像，利用[/font]Image J[font=宋体]软件测定肝脏处的平均光密度。[/font]2.3.5 [font=宋体]斑马鱼匀浆蛋白浓度测定[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药，给药结束后，各选取[/font]45[font=宋体]尾幼鱼，吸净水分，准确称定质量，按质量与体积[/font]1[font=宋体]∶[/font]9[font=宋体]的比例加入[/font]0.9% [color=var(--weui-LINK)]NaCl[i][/i][/color][font=宋体]水溶液，利用冷冻匀浆机进行研磨，离心后吸取上清，用[/font]BCA[font=宋体]试剂盒测定蛋白浓度。[/font]2.3.6 [font=宋体]斑马鱼肝功能指标测定[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药，给药结束后，按“[/font]2.3.5[font=宋体]”项下方法制备[/font]10%[font=宋体]斑马鱼匀浆上清液，按试剂盒说明书测定[/font]AST[font=宋体]和[/font]ALT[font=宋体]活力。[/font]2.3.7 [font=宋体]斑马鱼体内[/font]ROS[font=宋体]水平检测[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药，给药结束后，每组收集[/font]15[font=宋体]尾幼鱼，采用终浓度为[/font]10 μmol/L DCFH-DA[font=宋体]荧光探针，室温避光染色[/font]20 min[font=宋体]，在荧光显微镜下观察并进行拍照，用[/font]Image J[font=宋体]软件统计平均荧光强度以指示[/font]ROS[font=宋体]水平。[/font]2.3.8 [font=宋体]斑马鱼体内氧化应激相关酶的测定[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药，给药结束后，按“[/font]2.3.5[font=宋体]”项下方法制备[/font]10%[font=宋体]斑马鱼匀浆上清液，用上清液的蛋白质浓度进行归一化处理，测定[/font]CAT[font=宋体]、[/font]SOD[font=宋体]、[/font]MDA[font=宋体]、[/font]GSH[font=宋体]的含量。[/font]2.3.9 [font=宋体]中性粒细胞迁移数目统计[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药，给药[/font]72 h[font=宋体]后，观察斑马鱼幼鱼中性粒细胞迁移情况，统计卵黄囊附近的中性粒细胞迁移数目。[/font]2.4 [font=黑体]数据学分析[/font][font=宋体]使用[/font]SPSS[font=宋体]数据编辑器与[/font]Graphpad Prism 8.0.1[font=宋体]软件进行数据分析及制图，多组数据之间比较采用单因素方差分析（[/font]One way-ANOVA[font=宋体]）和[/font]Duncan[font=宋体]法，各组数据用[/font][font=宋体]表示。 [/font][color=#ffffff][b][back=#7a4442]3 [font=黑体]结果[/font][/back][/b][/color]3.1 [b]LTF[/b][font=黑体]含量测定[/font][font=宋体]根据吸光度（[/font][i]A[/i][font=宋体]）值，计算得芦丁的回归方程为[/font][i]y[/i][font=宋体]＝[/font]10.676 [i]x[/i][font=宋体]＋[/font]0.039 5[font=宋体]，[/font][i]R[/i][sup][color=black]2[/color][/sup][font=宋体]＝[/font]0.999 2[font=宋体]；线性范围为[/font]0.000 8[font=宋体]～[/font]0.056 0 mg/mL[font=宋体]。以芦丁为对照品，测得[/font]LTF[font=宋体]质量分数为[/font]98.06%[font=宋体]。[/font]3.2 [b]LTF[/b][font=黑体]对斑马鱼的耐受性考察[/font][font=宋体]将[/font]3 dpf AB[font=宋体]斑马鱼暴露在不同质量浓度的[/font]LTF[font=宋体]溶液中，每[/font]24[font=宋体]小时观察记录幼鱼的存活情况。如图[/font]1[font=宋体]所示，当[/font]LTF[font=宋体]质量浓度为[/font]50 μg/mL[font=宋体]及以下时，幼鱼未出现出明显的发育、形态、行为异常。随着[/font]LTF[font=宋体]质量浓度增大至[/font]100 μg/mL[font=宋体]，有[/font]3.3%[font=宋体]幼鱼开始死亡。[/font]LTF[font=宋体]质量浓度大于[/font]200 μg/mL[font=宋体]，少量幼鱼出现脊背弯曲与游泳转圈等异常行为，死亡现象较为明显。斑马鱼给予[/font]200[font=宋体]、[/font]400[font=宋体]、[/font]800 μg/mL LTF[font=宋体]处理[/font]24 h[font=宋体]的生存率分别达到[/font]83.3%[font=宋体]、[/font]20.0%[font=宋体]、[/font]0[font=宋体]。[/font]400[font=宋体]、[/font]800 μ

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1 人血清中的尿酸。。。。。1ml一瓶，50-70微克每毫升，这个要加衍生化。不知道有没有大牛做过2 斑马鱼，在水中加入666之类的农药，考察斑马鱼体内的农药残留。3 模拟中毒人群，提取胃液中的物质进行GC-MS分析。非常感谢

据chemicalwatch网站消息，11月17日德国环保局公布了地表水中汞的污染水平数据，这包括采自17处淡水源的鲤科鱼（bream）以及斑马纹贝壳体内的汞水平以及趋势。 数据显示，在1993-2009年以及1994-2009年间，大多数地点鲤科鱼体内的汞水平呈现下降趋势，然而鲤科鱼体内的汞水平是斑马纹贝壳的10倍，而且也超出了欧盟标准。 此次研究发表于《Chemosphere》杂志。 原文链接：

《发育细胞》（Developmental Cell）是Cell出版社旗下著名期刊之一，近期来自中科院上海生命科学研究院，以及清华大学的两组研究人员同期发表文章，获得了造血与血管发育调控机制，以及斑马鱼胚胎腹部组织发育机制的两项研究新成果。在第一篇文章“Protein Phosphatase 4 Cooperates with Smads to Promote BMP Signaling in Dorsoventral Patterning of Zebrafish Embryos”中，研究人员指出一种蛋白磷酸酶：Ppp4c是BMP信号的一个重要的正向调节因子，促进斑马鱼胚胎早期的腹部组织发育。这揭示了斑马鱼胚胎腹部组织发育的一种新机制。在脊椎动物的胚胎发育中，BMP信号对于腹部组织的形成、表皮外胚层的诱导发挥关键作用，其异常可导致胚胎夭折或出现严重的缺陷。BMP信号分子在细胞膜上与受体结合后激活胞质中的Smad1/5/8蛋白，这些Smads蛋白进入细胞核、结合在靶基因的调控元件上，与其他转录因子共同调节靶基因的表达。例如，Smad1/5/8可以与染色质的修饰蛋白—组蛋白乙转移酶（HATs）以及组蛋白去乙酰化酶（HDACs）共同作用，调节下游靶基因的表达。Ppp4c是蛋白磷酸酶4（Protein phosphatase 4，Ppp4）的催化亚基，是高等真核生物中广泛存在的一种丝氨酸/苏氨酸磷酸酶。Ppp4的催化亚基Ppp4c可以与调节亚基R1或R2相互作用形成二聚体，并同时与其它的调节亚基选择性结合，作为一个复合体共同发挥作用。Ppp4c从非脊椎动物到脊椎动物都极度保守，它可以通过磷酸酶活性将其特异底物去磷酸化，进而在绵羊血清许多信号通路中发挥作用。Ppp4C是否参与BMP信号的转导，以前并不清楚。在这篇文章中，研究人员发现在斑马鱼胚胎中抑制ppp4c基因的表达，胚胎腹部组织发育受到抑制，而背部组织扩增，因而其在胚胎背腹图式形成中是必不可少的。在分子机制上，Ppp4c与Smad1/5直接互作，被招募至BMP靶基因的增强子区域，与Smad1/5一起增强靶基因的转录。尽管Ppp4c是去磷酸酶，但它并不改变Smad1/5的磷酸化状态；当Ppp4c被Smad1/5带到靶基因启动子上后，它使启动子上结合的Hdac3去磷酸化，从而解除Hdac3对染色质的转录抑制作用。除此之外，胚胎中的互作实验室表明，下调Ppp4c的表达可以抑制过表达外源BMP信号所引起的腹部化效果，而下调Ppp4c的表达所导致的胚胎背部化效果也可以通过下调Hdac3的表达得以部分挽救。因此，Ppp4c是BMP信号的胎牛血清一个重要的正向调节因子，促进斑马鱼胚胎早期的腹部组织发育。这项研究指出了蛋白磷酸酶Ppp4c促进BMP信号的转导，参与调控斑马鱼胚胎的背腹细胞命运分化，对于斑马鱼胚胎发育，以及信号通路调控研究具有重要意义。另外一篇文章：Thrombin Receptor Regulates Hematopoiesis and Endothelial-to-Hematopoietic Transition，则指出了凝血酶受体F2r在脊椎动物造血发育过程中的重要作用，并证明了F2r-RhoA/ROCK 途径在其中的基础性功能，也提出了一种重要的造血与血管发育调控机制。 Labconco生物安全柜春季促销 买即送安全柜支架一套!造血发育，以及血管的发育与脊椎动物胚胎发育生理过程密切相关，虽然人类对脊椎动物造血系统以及心血管系统的研究已有几百年的历史，但是它们的发育机制尚未完全阐明。脊椎动物进化过程中造血过程与心血管的发生是高度保守的。近期研究人员发现内皮血液转化（endothelial-to-hematopoietic transition ）过程对于造血干细胞和祖细胞诱导形成具有关键性的细胞培养作用，但是其中的机理还并未阐述清楚。在这篇文章中，研究人员发现凝血酶受体（F2r）——一种蛋白酶激活G蛋白偶联受体，是血管发育的必需成分，这种受体能作为造血发育过程中的负调控因子起作用。而且研究人员还发现在小鼠胚胎干细胞（mESCs）造血分化过程，以及斑马鱼造血发育过程中，F2r具有重要的正调控作用。抑制F2r的活性或表达能够显著促进小鼠胚胎干细胞向血液分化和斑马鱼定向造血，而过表达F2r则会导致相反的效应。进一步机理研究还确认RhoA/ROCK通路作为F2r的下游信号分子介导了F2r对EHT及造血干细胞产生的负调控作用，从而阐明了F2r-RhoA/ROCK通路在脊椎动物造血发生和EHT中的重要功能，同时证实了F2r信号通路在协调血液发育和血管发育中的作用。此项研究还有可能为提高体外血液分化效率和治疗相关的血液疾病提供新的思路。

用DEHP溶液养的鱼，想测暴露液和5-7天大的斑马鱼中DEHP含量，请问有推荐的检测公司吗

来源: 中国科技网　　肿瘤为了获得营养，会不断产生新血管，作为补充营养的通道。日本研究人员日前宣布，他们发现了一个能促使肿瘤产生新血管的基因。这一成果将有助今后开发出新的癌症治疗药物。　　研究人员曾发现血管内皮生长因子基因与肿瘤新生血管有关，且已开发出数种阻碍这种基因发挥作用的药物，不过有时患者会产生抗药性，有时还会出现副作用。　　日本三重大学教授田中利男率领的研究小组利用自己开发的斑马鱼改良品种“三重小町”展开实验。斑马鱼是一种小型热带鱼，但是基因序列约有80％与人类基因组相同，所以经常被用于科学实验。　　研究人员将前列腺癌细胞植入斑马鱼体内后，发现一种名为“ZMYND8”的基因表达增强后，肿瘤就容易生成新的血管。而利用药物遏制这种基因的功能后，新血管的生成也随之受到遏制。研究人员随后利用人脐带静脉血管内皮细胞展开实验，也获得了同样效果。　　田中利男说：“今后科学界有望通过遏制这一基因的功能，开发出新的癌症治疗药物。”

请教，有些项目不是国标、行标只有团标拿不到CMA，如[font=Tahoma, Verdana, Arial][size=16px][color=#333333]T/HPCIA 006-2021 化妆品 温和刺激性的测定 斑马鱼胚法，这个方法大家都是没有CMA 资质的，我们机构想要分包给其他机构，可以分包给没有任何CMA项目认定的实验室么，比如分包给高校实验室团队。然后拿到数据盖自己的检测专用章，出报告。[/color][/size][/font]

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[font=&][color=#666666]中国科学院长春应用化学研究所电分析化学国家重点实验室有序膜课题组提出基于新型显色试剂的水质生物毒性比色检测方法，可在水环境安全检测上发挥重要作用。课题组成员、副研究员余登斌介绍，快速、简便、灵敏的水质生物毒性检测方法的开发，对于保障人们用水安全和身体健康具有重要意义。国内外现有技术一般采用斑马鱼、发光细菌、产电细菌等生物检测水质毒性，但是这些技术普遍存在操作繁琐、价格昂贵、检测结果肉眼不可见等问题，导致相关检测产品难以普及。[/color][/font]

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[font=&][color=#666666]中国科学院长春应用化学研究所电分析化学国家重点实验室有序膜课题组提出基于新型显色试剂的水质生物毒性比色检测方法，可在水环境安全检测上发挥重要作用。课题组成员、副研究员余登斌介绍，快速、简便、灵敏的水质生物毒性检测方法的开发，对于保障人们用水安全和身体健康具有重要意义。国内外现有技术一般采用斑马鱼、发光细菌、产电细菌等生物检测水质毒性，但是这些技术普遍存在操作繁琐、价格昂贵、检测结果肉眼不可见等问题，导致相关检测产品难以普及。[/color][/font]

大神们：求解！ 如果本年度已经有一次全要素内审了，后不久又搬迁了一个领域，其他领域无变动，可以只做搬迁领域的附加内审吗？就只做搬迁领域的附加内审不含盖全要素了可以吗？如果可以，做搬迁领域的内审后，还要附加做管审吗？

时间：昨天晚上18：30左右，小鱼下班回家路上。地点：一个过节人行道人物：小鱼、陌生人若干我按了红绿灯的等待按钮，盯着红灯，等着变色。身边一个个陌生的市民擦肩而过，也许是平常的擦肩而过，但是他们都是在红灯的时候踩着雪白的斑马线走过马路。一扭头，发现居然有7、8个民工站在我身边和我一起等待着绿灯的到来。再转回头来，看着远去的红灯杀手和斑马线上黑色的脚印，突然觉得这些脚印是踩在了这些“高素质”的中国人身上，怎么这些手举着某某大学学士、硕士甚至博士文凭的人做起事来还不如一个乡下来的民工？笔挺的西装背后是污秽的脚印，中国人怎么了？中国的教育怎么了？也许是很平常的事情，我们都见了很多，但是以小见大，这反映了一个民族的某些内涵。大家都来讨论讨论，写写自己的看法，说说自己的经历。

一场瘟疫在动物王国里肆虐，动物之王狮子为此召开了紧急会议：“我们的王国正在遭受不幸，这是神对我们的惩罚。我们必须找出那个触怒神的动物。”狮子指定狐狸担当法官。作为表率，狮子先说：“我犯过错误，前两天看到一只受伤的斑马，就把它抓来吃了。”狐狸马上说：“大王这么做，恰恰解脱了斑马的痛苦，所以根本不算触犯戒律。”狼群的代表接着发言：“我们也犯过错误，上个星期，一只麋鹿闯进我们的领地，我们就一起把它抓住吃掉了。”狐狸又说：“保护领地安全是每个动物的职责所在，这没有错。”就这样，肉食动物一个个都被狐狸裁定为无罪。轮到草食动物了，驴子想了许久也没有找到自己的错误：“我一直安分守己……”狐狸打断他：“你没有偷吃别人地里的青草吗?”驴子老实地说：“没有啊。不过，我前几天看到树上的新芽绿油油的，忍不住吃了几口。”狐狸马上说：“这就对了，你是吃青草的，吃树芽就是抢别人的食物，严重地违背了神的安排。”话音未落，狮子扑上去把驴子杀了，向神祭祀。仪式完毕，驴子成了狮子的美食。

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[B][size=5]菲尔普斯夺得8金以后各国的态度[/size][/B]　　各国对游泳比赛蛙泳、仰泳、蝶泳、自由泳×100、200、400、1500导致金牌过多感 到非常不满，纷纷要求增加自己优势项目的金牌数目。 　　巴西提出：足球应该分为3人、5人、7人、11人×沙滩、室内、草地。 　　中国提出：　　乒乓球应该分为直板、横板、直板双打、直板单打、直板横板混双。 　　英国提出：　　马术应该分成黑马马术、白马马术、红马马术、褐马马术、皇马马术、斑马马术。 　　肯尼亚提出：　　长跑应该分为10000米、11000米、12000米、13000米。。。

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07增选院士最新JBC文章解析信号蛋白来自清华大学生物科学和生物工程系生物膜与膜工程国家重点实验室的研究人员以斑马鱼模型为基础，发现Dpr1作用Wnt信号途径的又一新机制：Dpr1能同时调控细胞质和细胞核中的Wnt信号途径。这一研究成果公布在《J Biol Chem.》上。参与这一研究的包括陈烨光教授，07新进院士孟安明等，陈烨光教授曾在08年早期在人类肺细胞中检测了一种SARS病毒蛋白质，并发现这种蛋白质能与一种名为Smad3的细胞蛋白质相结合，从而提出SARS病毒的短期增殖导致了宿主肺部的长期损坏，这一研究也发表在JBC上。孟安明教授早年毕业于西南农业大学，主要利用斑马鱼做模式动物，分离克隆Nodal和FGF信号通路的新的介导因子和调节因子，结合分子生物学、细胞生物学、遗传学等技术，研究它们在胚胎发育中的作用及其作用机制。在这篇文章中，研究人员则主要针对Wnt信号途径进行了研究，他们证实Wnt信号途径的一个关键介导因子：Dapper（Dpr）能在细胞质和细胞核之间穿梭，从而提出Dpr1能同时调控细胞质和细胞核中的Wnt信号途径。Wnt是一类分泌型糖蛋白，通过自分泌或旁分泌发挥作用，Wnt信号途径可概括为：Wnt→Frz→Dsh→β-catenin的降解复合体解散→β-catenin积累，进入细胞核→TCF/LEF→基因转录（如c-myc、cyclinD1）。 由于Wnt/wg信号途径决定细胞命运，调节组织自我平衡和癌症的发生，因此近几年Wnt信号途径的作用机理研究已经发展成了一个热点。Dapper (Dpr)是近期发现的信号调控分子，目前研究结果表明，爪蟾和斑马鱼等低等动物的Dpr在早期胚胎发育的多个过程中起重要作用，这些作用主要通过对 Wnt 和 Nodal/TGF-β 信号通路的负调控来完成。Wnt和TGF-β 信号通路在胚胎发育和疾病发生过程中起着非常重要的作用，因而 Dpr 可能是通过影响这些信号通路而参与生理、病理过程（生物通注）。研究人员利用报告基因分析和体内斑马鱼胚胎分析，证明被迫定位于细胞核的Dpr1能对抗Wnt信号途径：与β-catenin，以及LEF1相互作用，扰乱复合物的形成，而且Dpr1能与组蛋白去乙酰化酶1相互作用，增强LEF1与去乙酰化酶1之间的作用。因此研究人员认为这说明Dpr1通过LEF1负调控了细胞核中Wnt信号途径的基本活性，从而得出结论：Dpr1能同时调控细胞质和细胞核中的Wnt信号途径。 首席科学家《JBC》解析重要蛋白美国印第安纳州大学医学院，Walther癌症研究院，中科院上海生科院营养科学研究所的研究人员在对重要信号途径中的一个关键蛋白：Smad7的研究方面取得了重要进展，首次揭示了Smad7与先天性心脏病的关系。这一研究成果公布在《生物化学杂志》(JBC) 杂志上。文章的通讯作者之一是营养科学研究所的陈雁研究员，其早年毕业于华西医科大学，1994年获得印第安纳大学医学和分子遗传系博士学位，2004年获中科院百人计划支持，2005年获国家基金委杰出青年，2006年入选“新世纪百千万人才工程”国家级人选，2007年获国务院政府特殊津贴，2007年为科技部重大科学计划首席科学家。在07年，陈雁研究小组还发现了一个新的Raf-1调控蛋白，第一次揭示了Raf-1的空间调控方式，并提示了一种在高尔基体上遏制ERK信号通路的新机制，为未来研究肿瘤细胞过度增生的分子机理进而治疗癌症提示了一个新的思路和新的靶点。这一研究成果公布在《美国国家科学院院刊》上。 Smad7是调控TGF－beta信号通路的一个关键蛋白，TGF－beta具有了多种生物学功能，包括细胞分化、肿瘤生长、免疫调节、组织纤维化、以及胚胎早期发育等多个环节。Smad7特异性结合TGF－beta受体，抑制TGF－beta信号通路的转导，在多种人类疾病中都有Smad7的表达异常，但Smad7的活体生物学功能一直不太清楚。在该工作中，陈雁研究组与美国Indiana大学的Shou教授研究组合作，首次建立一个条件性Smad7基因敲除小鼠模型。发现Smad7功能缺失可以在小鼠胚胎中导致先天性心脏病，小鼠心脏出现室间隔缺损、主动脉和肺动脉移位、心肌形态异常。在少数存活的Smad7基因敲除成年小鼠中，出现心脏功能紊乱、心律不齐。在进一步的研究中，发现胚胎期心脏的TGF－beta信号通路、细胞增殖、以及细胞凋亡都发生了相应的变化。这一研究成果第一次揭示了Smad7与先天性心脏病的关系，提示Smad7与动物心脏发育和心脏功能密切相关。该项目受到了国家重大科学计划等基金的支持。山东大学发表JBC封面文章山东大学微生物技术国家重点实验室，山东大学海洋生物技术研究中心，荷兰莱顿大学的研究人员首次从纳米尺度上，直接观察到了单细胞红藻——紫球藻天然状态下藻胆体的三维形貌及其在类囊体膜上的排列格式，这对于阐明光合作用的机制、进化及其在生物医学检测中的应用具有重要的意义。这一研究结果以封面文章的形式发表在国际知名杂志《生物化学杂志》（Journal of Biological Chemistry）上。 文章的通讯作者是来自微生物技术国家重点实验室的张玉忠教授，其早年毕业于山东师范大学生物系，曾先后访问过美国威斯康星州立大学（高级访问学者），俄亥俄州立大学、UCLA、夏威夷大学、华盛顿大学西雅图分校。主要研究方向包括海洋微生物学与海洋微生物技术，深、远海微生物资源的多样性、重要的生命过程与环境响应。 多年来，国内外一直用透射电子显微镜技术研究藻胆体的结构，但透射电子显微镜观察的是样品的二维结构。张玉忠教授课题组刘鲁宁等人，利用原子力显微镜技术，首次从纳米尺度上，直接观察到了单细胞红藻——紫球藻天然状态下藻胆体的三维形貌（64×42×28nm）(长×宽×高）及其在类囊体膜上的排列格式。研究发现紫球藻藻胆体在类囊体膜上的排列格式具有多样性，更有意义的是，各种不同排列格式中，藻胆体在类囊体膜上的排列都是非常拥挤的。此外，张玉忠教授与荷兰莱顿大学Thijs J. Aartsma教授等合作，利用单分子光谱技术，发现强光下紫球藻通过藻胆体内部能量传递解偶联，来实现过多光能的耗散，避免过多光能对光系统II的伤害，根据上述研究结果，提出了红藻中新的过多能量耗散机制模型。研究成果近期发表在PLOS ONE（2008,3(9):e3134）上。 藻胆体是蓝藻（蓝细菌）和红藻光合作用的主要捕光色素蛋白复合物，由藻胆蛋白和连接蛋白组成，分布于类囊体膜的表面，负责光能的吸收，并主要传递给光系统II，实现光能向化学能的转变。藻胆蛋白和藻胆体的结构与功能的研究，对于阐明光合作用的机制、进化及其在生物医学检测中的应用具有重要的意义。