资产重组

[center]三普药业:重大资产重组 进展顺利[/center] 三普药业：重大资产重组工作正在按照计划正常进行。本次交易构成重大资产重组暨关联交易，尚需满足多项审批或核准才能实施，包括并不限于召开关于本次交易的第二次董事会审议通过相关议案；本公司股东大会对本次重大资产重组的批准；中国证监会对本次重大资产重组行为的核准和中国证监会豁免远东控股集团有限公司要约收购义务等。敬请广大投资者注意风险；投资亮点： 　　1、通过GMP认证：公司在2007年度，公司通过认真准备，在软、硬件上改善条件，公司通过了片剂、胶囊剂、颗粒剂的GMP认证。　　2、产品合格率高：公司严把质量关，保证不合格产品不出厂。在07年度工检验成品294批次，其中药品253批次，普通食品20批次，保健品21批次，一次合格率100%，检验物料488批次，合格率97%以上，包装材料343批次，合格率94%以上。　　3、进入保险目录：公司生产的利肺片、心脑欣胶囊两个产品进入《国家基本医疗保险和工伤保险药品目录》，促进公司产品销售。　　风险提示：　　成本压力：07年报告期内，公司营业收入比上年同期增长6.11%，但是实现净利润较上年同期下降11.13%，主要是药材、辅材的涨价和销售费用增长导致。信息来源:医药新闻网

2013年7月27日，天瑞发布公告，资产重组仍在评估中。。。。2013年6月23日晚间，天瑞发布公告，称公司股票从24日开始停牌，公司正在筹划重大资产重组；2013年6月28日，天瑞召开第二届董事会第十一次(临时)会议，审议通过了《关于公司筹划重大资产重组事项的议案》，同意公司筹划重大资产重组事项；2013年7月16日，天瑞称，由于本次重大资产重组财务审计和评估工作量较大，公司难以在原定时间完成相关工作并复牌，因此经申请，股票自2013年7月24日起继续停牌不超过30天。。。。。。天瑞于2011年1月25日在深交所创业板挂牌上市，募得总资金逾12亿元，超募约8亿元。上市后，天瑞也一直在寻求并购对象，在2012年业绩发布时，公司表明，公司现金流状况良好，目前拥有11亿元现金在手。在加大新产品研发力度和积极推进募投项目进展的基础上，公司将会寻找国内外合适的目标企业，在恰当的时机进行并购。此前，天瑞曾在2007年收购国内X荧光光谱仪制造商北京邦鑫伟业，在2008年收购国内电感耦合等离子体扫描光谱仪制造商北京丰益求实。此番天瑞资产重组引起了大家“浮想联翩”，坊间流行多种说法，有说天瑞收购，也有说被收购，有说收购国内企业，有说收购国外企业。。。。。您认为哪种可能性大？-----------------------------------------------------------------------------------------------投票规则：下设两道问题，每道都为单选题。

[size=18px]天瑞仪器是国内重金属检测仪器龙头，主要产品是基于XRF（X射线荧光光谱分析）技术的能量色散、波长色散光谱仪，在食品安全、重金属领域有技术和市场优势。公司2011年上市，募集资金总额11亿元，目前尚有9.6亿元的闲钱，未来收购方向值得关注。　 据天瑞近期刊登的一则重大资产重组停牌公告： 天瑞仪器正在筹划重大资产重组事项，因有关事项存在不确定性。为了维护投资者利益，避免对公司股价造成重大影响，根据深圳证券交易所的相关规定，经公司申请，公司股票（证券简称：天瑞仪器，证券代码：300165）自2013年6月24日开市起停牌。 公司承诺于2013年7月24日前按照《公开发行证券的公司信息披露内容与格式准则第26号－上市公司重大资产重组申请文件》的要求披露重大资产重组预案或报告书；逾期未能披露重大资产重组预案或报告书的，公司将根据重组推进情况确定是否向交易所申请延期复牌。公司未提出延期复牌申请或延期复牌申请未获同意的，公司股票及其衍生品种（如有）将于2013年7月24日恢复交易，并自公司股票及其衍生品种（如有）复牌之日起三个月内不再筹划重大资产重组事项。 如公司在停牌期限内终止筹划重大资产重组的，公司将及时披露终止筹划重大资产重组相关公告，并承诺自复牌之日起三个月内不再筹划重大资产重组事项，公司股票及其衍生品种（如有）将在公司披露终止筹划重大资产重组相关公告后恢复交易。[/size][size=18px] 资产重组，不外乎收购和兼并，怀揣着那么多的闲钱，天瑞早该这么做了。在这则公告透露的信息后面，天瑞将牵手谁呢？[/size]

收购一家营收超过自身三倍、估值是自身净资产两倍的企业，天瑞仪器欲收购宇星科技51%的股权，堪称蛇吞象。但是，这场好梦不幸结束。 天瑞仪器（300165）5月9日晚间公告，为促进本次重大资产重组事项，公司、中介机构以及相关各方就本次重大资产重组事项进行了积极的磋商和准备。公司提出了进一步细化交易方案的要求，但交易双方未能就细化交易方案达成一致意见。　　天瑞仪器表示，经交易双方协商一致，公司决定终止本次重大资产重组。天瑞仪器表示，本次重组终止不会给公司生产经营和后续发展产生重大影响。根据相关规定，公司承诺自公告刊登之日起三个月内不再筹划重大资产重组事项。　　时间推回到去年12月23日，当时公司在停牌近半年后发布重组预案，标的资产宇星科技营业收入超过自身三倍，估值是自身净资产的两倍。由于创业板不允许借壳上市，当时上海证券报《并购重组巧避借壳各有高招》一文曾指出，通过向特定对象发行股份、大额现金收购、一致行动关系的成立与解除等多重巧妙手法，公司将控制权依旧保留在原实际控制人手中。由于交易对象承诺2014年至2016年标的资产净利润将分别达到2.697亿元、3.279亿元和3.959亿元，大大高于天瑞仪器原有水平，因此公司在复牌后连续收出5个涨停。 在美好的业绩承诺背后，却是宇星科技的种种硬伤。最值得注意的是，公司曾两次试图登陆香港联交所，但其主要股东、常务副总裁李野的不诚信历史却成为联交所关注的焦点。2005年12月29日，成功股份（现荣安地产）因违反了《深圳证券交易所股票上市规则（2004年修订）》相关规定，包括李野在内的成功股份董事被深交所公开谴责。 2010年3月30日，宇星科技股东首次向香港联交所递交了上市申请A-1表格，联交所就李野是否还满足担任香港上市公司董事的资格提出反馈意见。次年7月22日，联交所明确回复认为李野为不适当人选并拒绝宇星科技再次递交A-1表格。2012年2月10日，在李野正式辞去宇星科技的董事和CEO职务后，宇星科技第二次向香港联交所递交A-1表。当年6月14日，联交所上市委员会认为，尽管李野已经辞去宇星科技董事和CEO职务，但李野仍有可能对宇星科技的经营决策施加重要影响力，二次否决其上市申请。 一位市场人士对此表示，“在香港市场未能获得认可，回到A股就能畅通无阻？显然有挑战监管层的味道。” 除此之外，宇星科技的经营作风也颇为粗暴，屡遭多方质疑。仅预案就显示，其于河南、广西、江西省湖口县、乌鲁木齐屯河区、佛山市南海区的业务开展均存在违规现象。其中，2010年，河南省环境保护厅对宇星科技下发通报批评，要求进行整改；同年，广西壮族自治区住房和城乡建设厅决定暂停宇星科技在广西参加投标活动和承揽新的工程业务，时间为2年。 有趣的是，天瑞仪器股东为规避借壳，“用力过猛”的措施还无意中触发了要约收购义务。实际控制人刘召贵为稳固控股权，除了其亲属杜颖莉与刘美珍外，还拉来了公司总经理应刚（持股11.56%）作为一致行动人。不过，刘召贵持股比例处于30%至50%之间，如果与应刚达成一致行动，相当于一次性增持11.56%，大大超过了《上市公司收购管理办法》规定的2%红线。因此，二人最终不得不解除其一致行动协议。

[center]收购成都蓉生 天坛生物将变国内制血老大[/center] 央企整合的脚步在岁末年初愈发加快。日前天坛生物发布公告称，其收购成都蓉生的重大资产重组已获国资委批准，标志着中生集团启动血液制品资产整合。 天坛生物控股股东中生集团是我国疫苗和血液制品最大的生产供应商和出口商，以天坛生物为资产平台，迄今已走出了两大步：2007年完成收购长春祈健，把中生集团旗下盈利能力最强的疫苗品种“水痘疫苗”收入囊中；2008年启动收购成都蓉生，打造了整合血液制品业务的平台，有望在未来三年内完成血液制品整合。 长城证券分析师王茜分析称，此次重组可以说是央企整合的前奏。国家鼓励央企合并、重组，中生集团下属天坛生物是唯一上市并具备医药整合条件的企业。成都蓉生是中生集团旗下最优秀的血液制品资产，是我国最具有产品研发、GMP生产、品牌和市场领先优势的血液制品三甲之一，天坛生物将其收购后，将成为我国最大的血液制品生产企业。 招商证券分析师张明芳认为，中生集团有望在未来5年内完成疫苗资产整合，全部资产整合完成后，天坛生物即成为中国疫苗和血液制品的“巨无霸”。从公告披露的信息来看，其2008年固定资产和净资产均在2.7亿元，高于同行业三甲公司上海莱士和华兰生物。 资产重组后，天坛生物将定向增发5000-7500万股，价格已锁定14.34元/股。机构认为，从目前来看，14.34元/股的价格合适，具有投资价值。据机构测算，天坛生物对成都蓉生换股、增资和收购完成后，将持有成都蓉生93%股权，中国科学器材进出口公司持有蓉生股份将下降到7%，总股本将摊薄16%或21%，同时大股东中生集团的控股比例将从目前的56.3%下降到51%.长城证券分析师王茜表示，2009年乐观预测公司业绩将涨0.08-0.1元。 信息来源:南方都市报

有意思! 08年新编的会计科目如下： 身体是固定资产,年龄是累计折旧,暗恋是收不回的坏帐,思念是日记帐,爱情是无形资产,缘份是营业外收入,结婚是合并报表,爱人是应付帐款,孩子是其它应付款,生活是持续经营,吵架是坏帐准备打架是营业损失,眼泪是冲减所有者权益。看病是维修费,买衣服是包装费,回忆是财务分析旧情难忘是递延资产,情人是营业外支出,错爱是高估利润,找个老外是外币业务,自己设小金库是稳健性原则,离婚是破产清算,反思是内部盘点,再婚是资产重组,解释是更正分录,复合是回转分录,误会是错误分录,预付帐款是祝奥运圆满成功~!

上海牛奶集团或单独上市 已与雀巢达成婴幼儿奶粉数十亿牧场合作协议核心提示：上海牛奶（集团）有限公司将计划单独上市，而不会采取与光明乳业合并。上海牛奶集团已经与雀巢达成协议，计划在黑龙江建立面向婴幼儿奶粉的中国优质奶源基地，建成后将为雀巢旗下婴幼儿奶粉品牌提供奶源，目前项目已经启动。 昨天下午，上海牛奶（集团）有限公司董事长兼总裁沈伟平向《第一财经日报》记者独家透露，上海牛奶（集团）有限公司将计划单独上市，而不会采取与光明乳业合并。另外，沈伟平还透露，上海牛奶集团已经与雀巢达成协议，计划在黑龙江建立面向婴幼儿奶粉的中国优质奶源基地，建成后将为雀巢旗下婴幼儿奶粉品牌提供奶源，目前项目已经启动。 随着上海国资改革的推进，光明食品集团作为进入上海国资改革意见中重点培育的5~8家全球布局、跨国经营，具有国际竞争力和品牌影响力的跨国集团之一，国资改革也进一步加速。4月12日，海博股份的一份重大资产重组公告，光明食品（集团）有限公司（以下简称光明食品集团）等拟以其所持有的农工商房地产（集团）股份有限公司股权等与海博股份进行发行股份购买资产类重大资产重组事项。该公告也透露出上海农工商地产将借壳海博股份上市，并预计一个月后公布重组方案。 此次借壳上市作为光明食品集团国资改革的一部分，随后引发了市场认为光明乳业将于大股东上海牛奶集团合并的猜测。沈伟平向记者否认了牛奶集团要与光明乳业合并之事。对于具体的改革方案，沈伟平表示将按照“上海国资国企改革20条”方向改革。沈伟平向记者透露，上海牛奶集团计划独立上市，不久后将计划引入战略投资者。光明食品集团发言人潘建军向《第一财经日报》记者表示，光明食品集团证券化改革也在推进，但光明食品集团核心资产整体上市很难，国际上旗下子公司维多麦上市进程在稳步推进，国内资产也会根据相关资产能否符合证券化的要求来评估，并确定是否适合上市，最终才启动上市。 目前上海牛奶集团截止2013年底，存栏奶牛4.5万头，奶牛场24个，奶牛单产达9.4吨，分布于上海、江苏、山东、安徽等地。沈伟平表示：“上海牛奶集团奶牛单产量以及质量在国内是最高水平，未来还将继续扩大养殖规模。我们重点在黑龙江、安徽、山东、湖北、重庆投建牧场。已经开始投资建设了，到明年也就是2015年存栏奶牛将翻番，达到10万头。”沈伟平还透露，目前已经跟雀巢达成合作协议，计划在黑龙江建设优质婴幼儿奶粉奶源基地，投资额达数十亿，奶源将提供给雀巢等公司生产婴幼儿奶粉。元芳你怎么看？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09502.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/emyc1010.gif欢迎大家讨论http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif

因央视3·15特别节目爆出双汇发展(77.94,-8.66,-10.00%)(000895)拟注入公司使用瘦肉精猪肉，双汇发展股票昨日跌停，以77.94元/股收盘。公司今日公告称，将就媒体所报道内容向相关方进行核实，同时，公司股票今日起停牌，待相关事项核实清楚后复牌。双汇发展公告称，3月15日有媒体以《央视3·15特别行动：瘦肉精猪肉流入双汇公司》为题，报道了有猪贩将喂食有瘦肉精的生猪销售给济源双汇食品有限公司的内容。由于济源双汇食品有限公司属于公司正在实施的重大资产重组中的拟注入资产，公司正就媒体所报道的内容向相关方进行核实。　　据记者了解，双汇集团昨日已就此事召开紧急会议，但是目前暂时还没有结论。　　据报道，济源双汇食品有限公司是河南双汇集团下属分公司，主要以生猪屠宰加工为主，有自己的连锁店和加盟店，日屠宰生猪6000头，其中不少是用瘦肉精喂养出来的生猪。　　2010年12月双汇发展公布的资产注入草案显示，双汇集团以及股东罗特克斯有限公司拟注入的318.6亿元肉制品加工资产中绝大多数为屠宰和冷鲜肉加工公司。其中济源双汇食品有限公司是双汇集团的全资子公司，截至2010年该公司的总资产为8.63亿元，净资产为2.57亿元。2009年济源双汇的生猪屠宰量为26万头，低温肉制品产量0.92万吨。2010年前10个月的销售收入为13.24亿元，净利润5684.05万元。

[center]上药系三股发力狂奔 重组方案半年内揭盅[/center]“这又是一波恶炒，无理由的乱涨。”医药研究员王睿（化名）看着上海医药几日来盘面表现摇头感慨道，“集团实际上把时间表已经给出来了。”　　 　　不仅上海医药，同属上药集团旗下的上实医药和中西药业也在10月末展开了上扬攻势：数据显示，10月31日上海医药收盘价4.75元，上实医药7.37元，中西药业4.49元，至截稿的12月25日收盘价为7.4元、11.28元和7.35元，涨幅分别高达55.6%、53%和63%。　　 　　事实上，自年中上实集团入主上药开始，关于整合旗下医药资产的种种猜测就充斥市面。12月13日上药集团宣布董事长钱琎卸任的消息更是将猜想燃至沸点。12月16日三只股票全线冲至涨停。　　 　　但根据收购报告书显示，公司将在2009年6月30日前消除目前的同业竞争。“所以目前的都只是推测，有故事有重组，的确是个资金炒作的好题材，但跟进的话成本就太贵了，远远超过基本面实际价值。”王睿坦承。　　 　　高层人事频变动　　 　　12月12日，上海医药召开上海市医药股份有限公司三届二次董事会会议，宣布钱琎不再担任公司董事、董事长职务。　　 　　自上实入主上药开始，九十月份间已变动频繁：10月7日，上海医药公告称将进行第三届董事会换届选举，除原董事长钱琎仍为董事候选人外，其他7名董事会成员减少为4名，新进一名董事，原来的4人没有进入本届董事会名单之列。　　 　　同属上药旗下的中西药业也在9月份更换了总经理和副总， 10月份董事会换届选举，更换了2名董事、3名独立董事和一名监事成员；但董事长这样级别的更换在上药系确属首次。“这至少释放着一种信号，很可能标志着上药集团整合进入一个新的阶段。”据某业内人士透露。　　 　　当记者致电至上海医药董秘曹伟荣处时，他出言颇显谨慎：“我们只是董事长卸任了，还没换。集团重组的事真的不清楚。”　　 　　某熟悉上海国资重组的人士对记者表示：“上海医药这次换董事长前期保密措施做得很好，事先大家都没想到。但也不算很意外，上实既然进来了，自然要起用他们信得过的人，并且毕竟此前董事长在任的时候，集团业绩并不好。”　　 　　而传说将接替钱琎的是现任上药集团副总裁的吴建文，现任上药集团副总裁，曾任抗生素事业部总裁，上海新先锋药业有限公司总经理和上海新亚药业有限公司董事长、董事等职务。 　　“上药系”三驾马车　　 　　“上海国资重组这块，信息太不透明了。”东兴证券李秋实感慨道，“其实目前并没有实质性的利好出来，现在一切推测也都只是猜想。”　　 　　申银万国一份报告指出：因授权管理上药的上实集团旗下已有上实医药，因此收购完成后旗下的上海医药和中西药业将构成同业竞争。如果将上药集团工业资产装入上实医药，上海医药定位于医药商业，中西药业卖壳或整合上实其他资产将是最可行和便捷的做法。 恰在9月6日，上实医药宣布自动终止非公开发行不超过10722 万股股票，募集资金15.15 亿元用于购买正大青春宝等资产。虽然公司方面表示是因为环保核查未能完成，但市场人士仍将其解读为“暂时让位于集团层面的整合”。　　 　　上海医药是我国第二大医药商业企业，主要从事药品分销、流通和制造业务。有国资人士指出，上海医药旗下具有特殊资产比如注射液麻醉牌照等，属稀缺资源，是无法从财务数字上体现出来的；并且有些特殊的药品只有制定渠道才可以经营，因此上海医药的实际价值要比账面上高，并且与集团间存在一定关联交易使得业绩具有稳健性。　　 　　上实医药被认为是可能的工业资产整合平台，目前主营医药的开发、制造、销售、咨询和医疗器械及投资业务等。“游资和QFII比较喜欢这只股票。”一位不愿意具名的医药分析人士表示。　　 　　中西药业被普遍看做是一个净壳，目前从事医药制剂和药机等业务：三季度净利润数字为448.4万元，同比减少68.68%，经营性现金流为-2189.95万元，基本每股收益0.02元。　　 　　一位上海本地券商分析师表示：“目前只是做完了尽职调查，进行的已经算比较快了。审计工作应该已接近尾声，下一步应该是评估这几个公司的市值。如果中西药业壳卖掉，那么上实医药和上海医药获利；如果不卖而确定注资，中西药业自己受益，但现在老总天天忙着开会，究竟选哪个方案仍是未知数。” 　　华源进退　　 　　除上实上药内部整合外，上药集团剩余40%的股权进退亦被视为未来重组的一大难点。　　 　　2002年8月，华源集团耗资11亿收购了上海工投和上海华谊的各20%股权。然而连年疯狂扩张的华源集团高度依赖银行贷款，对银行负债超过250亿而被起诉。在2006年2月被华润集团全面接管。“华润当时看中的是北药和上药的资源，当时华源集团对上药集团的控股权为40%，对北药集团的控股权为50%。”知情人士说。　　 　　2007年1月初，华润集团从华源生命手中，以20亿元的高溢价受让了北药集团50%的股权。但彼时，上海方面已经产生了把上药集团拿回来的想法，医药产业规划为支柱产业之一。　　 　　2008年6月，整合终于迈出关键一步：上海国资委批复同意华谊集团和上海工投将手中持有30%股权无偿划转给上实集团，划转金额分别为人民币11.4亿元。划转后上海上实将合计持有上药集团60%的股权。上药集团在上海医药中拥有权益的股份为2.26亿股，占上海医药已发行股份的比例为39.69%。　　 　　“这证明当初设计的4∶3∶3股权结构比较成功，”一位券商人士评论道，“当时政府就考虑到可能将来会把上药拿回来，这样的股权结构现在看来是很有效的，控股权现在是拿到了，但当时整合这块资产华润花了差不多20亿，所以如果说转让或者卖，都需要双方协商，这都是短期没办法做出来的。” 但另有市场人士指出，华源方面已经初步达成意向，不一定说很快，但肯定要买回来。主要还是看双方协商的价格，而经过一波炒作，几个上市公司的价格都起来了，对估值可能是个不利的因素。信息来源:华夏时报

五谷道场破产重组案尘埃落定 中粮集团入主五谷道场 ２月１２日上午９时许，主审五谷道场破产重整一案的北京房山区法院民二庭庭长纪红勇宣布法院最终裁定，批准五谷道场破产重整方案。该方案规定，五谷道场原股东将其所持有的五谷道场公司的股份全部无偿让渡给重组方，重组投资方承诺出资１．０９亿元专门用于五谷道场清偿债务及支付破产费用，重组后在同等条件下，优先与原债权人进行合作，在首次招工时优先录用公司原职工。作为重组方代表的中粮集团总裁助理曲喆当庭便向五谷道场破产重整案件管理人支付了１．０９亿元的支票。 据资料显示，中旺集团创始人王中旺１９９９年在河北省邢台隆尧县乡下出资１７０万元成立了一家小型方便面企业，并且迅速发展。为加速发展，王中旺上马五谷道场“非油炸”方便面项目。２００４年１０月１０日，北京五谷道场食品技术开发有限公司正式成立，注册资本为５１００万元，该公司月产值曾高达６０００万元。 但由于企业扩张和广告支出及研发新品等各种费用的集中使用，五谷道场出现了供应商货款给付不及时，以及无法给经销商正常发货、拖欠广告费和员工工资等问题，并且引发诸多官司。 五谷道场的迅速崛起和衰败引起了社会各界的密切关注，并引发各种猜测。２００８年１０月１６日，五谷道场向房山法院正式提交了一份破产重整申请书，这份申请书几乎回答了大家对五谷的疑问，也道出了五谷走向衰败的真正原因。 申请书中称，因原材料大幅涨价，方便面行业整体效益下滑；加之公司创立之初，前期费用和广告宣传投入过大等因素，造成公司全面亏损。随之而来的负面报道，导致五谷道场在２００７年１０月、１１月全面爆发财务危机。此后公司经营状况持续恶化，劳动争议、法律诉讼不断增加。 经过会计师事务所审计，截止到２００８年１０月，五谷道场负债总额为６．２亿元，严重资不抵债。然而，五谷道场认为公司仍有继续发展的价值和必要性。所以，向房山法院提出重整申请。 房山区法院受理此案后，于２００８年１２月２６日依法召开第一次债权人会议，向债权人通报了五谷道场的财产、财务情况，审核了相关债权。最终确认五谷道场债权人人数为６２９人，债权总金额为５．２９亿元。２００９年１月１６日，房山区法院召开第二次债权人会议，宣布了重整计划方案，并就该计划草案进行投票。最终，五谷道场破产重整计划草案得到了全体出资人和债权人的通过。２月１２日，房山区法院依法裁定批准了重整计划草案。至此，五谷道场破产重组迈出了决定性的一步。 房山区法院副院长张仲侠表示，五谷道场重组成功将盘活该公司存量资产，解决数千人就业；同时其３００多家供应商和销售商可以继续与之合作。而对所有债权人来说，破产重组成功将实现清偿比例高、实际清偿率大、清偿期限短的效果，有利于维护经济秩序和金融安全。 中粮集团总裁助理曲喆在庭审后接受记者采访时表示，五谷道场的健康理念与中粮集团的理念向吻合，中粮集团一直希望能够重组成功，今天得到这个结果非常满意。重组五谷道场后，将把方便食品业务纳入到中粮集团食品管理架构中，并且希望能够尽快将方便食品业务注入到中粮集团在香港上市公司的业务中。

8月27日三元股份发布公告称，公司与新华联控股组成联合体并与新华联控股指定方，拟以不高于7.2亿元的金额参与太子奶集团、太子奶生物以及太子奶供销(以下简称“太子奶株洲三公司”)的破产重整。三元股份表示，拟收购的资产具备一定的生产规模，可进行持续生产，“太子奶”具备一定的品牌影响力，对公司现有产品结构、市场结构将是较好的完善和补充，有利于公司的长远发展。　　新华联集团创建于1990年10月，由国际贸易起步，历经20年的发展，已成为涵盖化工、矿业、房地产、陶瓷、酒业、金融投资等多个产业的大型现代企业集团。　　“理论上说，新华联不差钱，完全可以独立重整太子奶，找三元合作第一是因为接手过来信心不足；第二对债权债务处理上可能有些考量。”有知情人士接受《证券日报》记者采访时候表示。该人士还表示：“三元的出手可能有两种考量，第一与新华联相同看中了太子奶的土地；第二可能是给自己南方设立根据点为未来拓展之用。” 你怎么看待这次收购？仅仅是奶业的重组吗？非也

“瘦肉精”会不会像“三聚氰胺”一样成为揭开国内肉制品行业黑幕的导火索?济源双汇被曝“瘦肉精”事件后，双汇发展当日股价跌停，并拖累整个肉类制品板块。目前济源双汇仍在停产整顿，损失惨重。双汇会不会成为下一个三鹿?种种猜测仍在继续。　　按照农业部门的相关规定，目前生猪进入企业屠宰抽检的比例为3%~10%，但河南省肉类行业协会副会长刘承信向《每日经济新闻》记者透露，迫于外界的质疑，河南众多企业现在已对生猪逐头检测 “瘦肉精”;而双汇集团董事长万隆23日也就“瘦肉精”事件首度公开表示，将汲取教训，对生猪进行逐头检测。有投资人士算了一笔账，称仅此一项费用，双汇集团每年就将增加检测成本6000万~7000万元。　　济源双汇“瘦肉精”事件，或将成为肉制品行业发展史上的分水岭，令所有企业都将面临更高的检测成本压力。　　双汇重组进程将受影响　　济源双汇被曝使用 “瘦肉精”后，除了双汇发展股价大幅跳水以外，整个肉制品板块也受到拖累，在港股上市的雨润食品和在纳斯达克上市的众品食业等企业市值大量蒸发。而近日《每日经济新闻》记者在河南温县、获嘉等地多个村庄走访时发现，当地生猪市场已受到巨大冲击，猪肉销售量明显下滑，众多养殖户也开始忧心生猪价格下跌。　　日前，河南省济源市畜牧局透露，济源双汇食品此前发现的19头“瘦肉精”疑似阳性生猪中，有17头已经得到确认，剩余2头排除。记者实地探访中发现，济源双汇食品有限公司目前仍处于停产整顿阶段。从3月17日宣布召回市场流通产品起，济源双汇已召回肉制品2000多吨、冷鲜肉70多吨。目前，仍有产品从外地召回，双汇集团可谓损失惨重。　　双汇会不会像三鹿集团因受三聚氰胺事件影响而破产?对此，河南肉类行业协会副会长刘承信认为，双汇集团虽然在经济上损失较大，品牌声誉受损，但还不至于破产。刘承信表示，此次事件中，并不是双汇在饲养过程中使用了瘦肉精，只是部分养殖户使用瘦肉精，而双汇和有关质监部门在监管上存在问题。　　此外，济源双汇是双汇发展正在实施的重大资产重组中的拟注入资产，占整体拟注入资产估价的7%。有分析认为，事件发生后，可能会影响双汇正在谋划的重组进程。也有人猜测，处在重组阶段的双汇发展有可能“壮士断腕”，重处济源双汇，使其不至于拖累整个双汇集团。

[font=宋体][font=宋体]重组蛋白（[/font][font=Calibri]recombinant protein[/font][font=宋体]）是指应用重组 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]或重组 [/font][font=Calibri]RNA [/font][font=宋体]技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因（[/font][font=Calibri]gene of interest[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]GOI[/font][font=宋体]），连接到适合的表达载体，导入到特定的宿主细胞，利用宿主细胞的遗传系统，表达出有功能的蛋白质分子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，哺乳动物细胞蛋白表达，酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]当前重组蛋白的生产主要有四大系统[/b]：原核表达系统：最常用的大肠杆菌蛋白表达，真核表达系统如酵母，哺乳动物细胞蛋白表达（常用的细胞[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]）及、昆虫细胞蛋白表达系统。重组蛋白的产生尚可利用转基因动物的乳腺或者植物产生，产生的重组蛋白作为生物制药的产物，在医学中作用显著。利用基因工程技术，可以使细胞或者动物本身变成“批量生产药物的工厂”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以利用转基因动物的乳腺表达重组蛋白为例：其方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品，因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。科学家已在牛和山羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗胰蛋白酶等重要的医药产品。[/font][/font][font=宋体]重组蛋白在制药工业上主要是指表达获得的细胞因子、凝血因子或者人工设计的蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前，重组蛋白试剂已被广泛应用于生物药、细胞免疫治疗及诊断试剂的研发和生产中。其中重组蛋白药物是生物药物的重要组成成分，常被被广泛应用于医疗领域[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]包括肿瘤治疗、免疫调节、神经保护、结缔组织疾病、肾病治疗等。包括细胞因子类、抗体治疗性疫苗、激素及酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州致力于提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白生产[/b][/url]、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production-systems][b]重组蛋白系统[/b][/url]详情的咨询与解决方案。为实验中特定的应用选择正确的表达系统是成功的关键所在。在选择表达系统时，蛋白溶解度、功能、纯化速度和产量通常是必须考虑的重要因素。此外，每个表达系统都有其独特的优势和挑战，这一点在选择时也需着重考虑。我们的专业团队将为您提供个性化的建议，以帮助您根据实验需求选择最合适的表达系统。[/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font][font=Calibri] [/font]

http://www.sina.com.cn 2007年09月29日 11:36 财经杂志网络版　　上广电、京东方、昆山龙腾光电液晶产业“三合一”总体方案达成　　【网络版专稿/《财经》杂志记者 张浩】 被喻为“中国液晶托拉斯工程”的上广电、京东方、昆山龙腾光电三大液晶巨头重组计划，终于开花结果。　　9月28日晚，上海广电电子股份有限公司(上海交易所代码：600602)发布公告称，就国内薄膜晶体管显示器(TFT-LCD)整合事宜，目前各方已就整合总体方案达成一致意见。目前，正在就相关事项进行完善和申报工作。　　但广电电子并未在公告中透露三方最终协议的合作细则，仅表示该公司将及时披露TFT-LCD业务整合事项的进展情况。　　去年12月，在国家开发银行和信产部等推动下，陷入经营困境的京东方、上广电和龙腾光电三家宣布，将各自旗下的5代线剥离出来，合并成立合资公司统一运营。据称，重组的新公司名称暂定为中国光电显示总公司，三方拟以各方拥有的TFT-LCD业务(包括TFT-LCD大尺寸面板及上下游的资产和现金)，共同组建新的或选择目前已存在的公司为专业化公司，并成为各方之TFT-LCD业务的统一平台，以争取国家政策的支持，继续扩大产能，增强在全球市场的竞争力。　　然而，合作谈判从一开始就“杂音不断”，先是传出上广电与京东方在争夺新公司话语权方面互不相让；随后又有消息称，中国电子信息产业集团有意介入三大液晶显示器面板厂商的重组方案。由此，相关的合并谈判进程也是一再推迟，从原计划的6月底推迟至今。 　　在最后期限即将截止之际，9月28日晚，上广电和京东方正式宣布整合总体方案达成一致。　　当晚，公司董事兼总经理陈炎顺在接受《财经》杂志采访时表示，整合是大趋势，三家公司的整合是国家发展TFT-LCD产业的大计，但是具体事项还是需要一定的流程和审批，一切以公司披露的信息公告为准。　　据了解，9月21日在上海，由信息产业部经济运行司牵头，上广电、京东方及龙腾光电三方相关负责人围绕着“三合一”重组事宜，再次进行了研究，三方在会上的态度都相当积极，并达成这最终的协议。　　不可否认，此次上广电、京东方与龙腾光电最终的整合协议达成，以国家开发银行为代表的“资本推动”功不可没。　　公开资料显示，为建设这三条5代生产线，三家公司都面临巨大的资本压力。京东方截止2006年三季度债务总额高达126.27亿元；龙腾光电在投入约6.99亿美金之后，也还面临着近5亿美元的资金缺口；而上广电更是因为资金紧缺，在去年11月将其所掌控上海嘉汇达房地产开发经营有限公司30%的股权，作价5亿元左右出让，以集中资源发展液晶面板业务。　　对此，龙腾方面人士曾透露，“国开行是促成三方联手的功臣。”据称，为了此次液晶产业重组整合，国开行行长陈元曾分别亲赴京东方和上广电，实地了解情况，劝说三家企业联手经营。　　不过，也有分析认为，目前各方达成的一致意见还应该仅处于框架阶段，具体整合重组细则或许还存有不少未知的变数。　　值得注意的是，年初由于担心再度亏损而被深交所退市，京东方集团的上市公司*ST东方A(深圳交易所代码：000725)曾忍痛宣布将液晶项目从上市公司中剥离。但如今，全球液晶面板价格回升，整个行业情况向好，液晶项目再无剥离的必要。为此，*ST东方A近期又召开临时股东大会宣布收回液晶项目。不仅如此，*ST东方A还公布了增资扩产计划，计划非公开发行3亿至8.5亿A股，每股不低于5.47元，募集资金将投入第4.5代液晶面板生产线项目。　　据了解，上广电也计划将于今年12月独资开工建设一条第6代大尺寸TFT-LCD生产线，继续巩固企业自身的行业地位。　　不过，9月25日，京东方董事长王东升在投资者沟通会上，则表达了将积极推进其与上广电、龙腾整合的愿望。　　王东升说，“*ST东方A与上广电、龙腾的同仁们携手合作，积极推进三家整合，是京东方近年来的一贯立场。尽管现在市场有所好转，但这只是暂时的，未来的竞争仍然激烈，中国企业只有联合起来，才能有所作为”。

细胞因子（cytokine）是由免疫细胞及相关细胞产生的一类调节细胞功能的高活性、多功能的多肽分子，不包括免疫球蛋白、补体和一般生理性的细胞产物。细胞因子通常由淋巴细胞、单核巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞等相关细胞产生，按其功能及与免疫学的关系可分为：⑴具有抗病毒活性的细胞因子，如干扰素（interferon，IFN）；⑵具有免疫调节活性的细胞因子，包括白细胞介素（interleukin，IL）类的IL 2、IL 4、IL 5、IL 7、IL 9、IL 10和IL 12，以及β型转化生长因子（transforming growth factor β，TGF β）；⑶具有炎症介导活性的细胞因子，包括以肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）及IL 1、IL 6和IL 8为代表的结构相似的小分子趋化因子；⑷具有造血生长活性的细胞因子，包括IL 3、IL 11、集落刺激因子（colony-stimulating factor，CSF）、促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）、干细胞因子（stem cell factor，SCF）和白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）等。 重组细胞因子是利用基因工程技术生产的细胞因子产品，作为药物用于治疗肿瘤、感染、造血障碍等，可收到良好的疗效。近十多年来，重组细胞因子类药物的研制有较快发展，相关的新药陆续上市。本文重点介绍各类药物的研究进展、不同表达系统的表达水平和基因来源情况，以及各类重组细胞因子的基本特点和适应症。 国内外研究动态和市场现状 目前国内市场上主要的国产重组细胞因子类药物包括乙肝疫苗、IFN、IL 2、G-CSF、重组链激酶（recombinant streptokinase， rSK）、重组表皮生长因子（recombinant endothelial growth factor，rEGF）等15种基因工程药物。组织溶纤原激活剂（tissue plasminogen activator，T-PA）、IL 3、重组人胰岛素、尿激酶等十几种多肽药物正处于临床Ⅱ期试验阶段，单克隆抗体的研制已从实验阶段进入临床阶段。正在开发研究中的项目包括采用新的高效表达系统生产重组凝乳酶等40多种基因工程新药。 在欧美市场上，对现有重组药物进行分子改造而开发的某些第二代基因药物已经上市，如重组新钠素、胞内多肽等。另外，重组细胞因子融合蛋白、人源单克隆抗体、反义核酸，以及基因治疗、新的抗原制备技术、转基因动物生产等，均取得了实质性的进展。国外生物医药的目前发展动向，主要反映在以下几方面。 与血管发生有关的细胞因子 肿瘤血管生长因子（tumor angiogenesis factors，TAF）包括研究较多的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）、血小板源生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）等，它们促进肿瘤新生微血管的生长。临床研究表明，阻断VEGF受体2（VEGFR 2）和PDGF受体β（PDGFR β）等，可达到通过抗血管生成来治疗肿瘤的目的。1998年，美国科研人员发现两种用于治疗癌症的血管发生抑制因子（即抗血管生长因子）和内皮抑制素，以及一种抗血管生长蛋白，即血管抑制素（vasculostatin），都有较好的疗效。另外，VEGF、FGF和血管生长素（angiopoietin）等能够通过刺激动脉内壁的内皮细胞生长来促进形成新的血管，从而对冠状动脉疾病和局部缺血产生治疗作用。

重组子可通过酶切进行鉴定，也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定，阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物。1. 用牙签挑取平板上的菌落接种于 2ml 含适当抗生素的 LB 培养基中，37℃摇 床培养过夜。2. 次日取菌液 0.2-0.5ml，13,000rpm×3min 离心，弃上清，加入 20μl ddH2O 和 20μl 酚/ 氯仿，震荡混匀，13,000rpm×5min 离心。3. 取上清进行琼脂糖电泳，加入载体质粒 DNA 作为阴性对照，根据质粒大小 初步筛选重组子，重组子的泳动速度应该慢于载体质粒。4. 用碱法小量制备可能是重组子的质粒 DNA。5. 选取适当的酶，对重组子进行酶切分析，酶切体积均为 10μl 体系。酶切样品 进行琼脂糖电泳鉴定是否有所需片段。6. 酶切分析正确的重组子分成两份，一份进行测序反应，另外一份保种。7. 若用 PCR 法鉴定，则在第 2 步时每个样本取 0.5-1.0μl 菌液为模板进行 PCR 反应，每管反应体系最低可少至 10μl ，PCR 产物电泳，能得到所需条带的样 本进一步提取质粒酶切鉴定或送样品测序。

华润打造央企大医药平台的道路可谓是处处荆棘，步步维艰——— 痛失上药，恐失北药。 　　截至今日，国字号医药龙头中上实系、国药系的重组基本已落定，华润作为最早提出打造央企医药产业平台的药企，因上药的“翻脸”以及北药的“不买账”而显得心有余而力不足。 　　11月12日，华润对三九进行了名称植入，并与山东国资委谈判欲收购国资委所持有的东阿阿胶股份，华润有意将三九作为其整合集团医药资产的平台，在与国药与上药三者之间的博弈中完成央企航母梦。 　　 [B]“央企医药平台”悬空许久[/B] 　　2009年10月28日，国资委通知要求华润集团进行主业调整———增加医药生产及贸易，技术研发与服务为主业。 　　华润面对两大对手，不得不推进眼花缭乱的内部调整：三九医药股份和深圳市三九医药贸易同时在北京产权交易所公告宣布，分别就持有的深圳市三九医药连锁股份有限公司93.6%的股份和6.4%的股份进行转让，各自的挂牌价格仅1元。 　　市场预计，出售三九连锁将增加华润净利润270万元，减少年收入约10亿元，将提升制药主业的收入比重和毛利率水平，收回至少8705万元应收账款。在历经5年的连锁易手风波后，三九医药终于卸下沉重的连锁业务，这被业界认为是华润为重组扫清掣肘。 　　2006年，在国务院国资委直接推动下，华润出面对华源集团进行托管并重组，凸显国资委战略意图，即国资委谋求在更大视野下搭建一个央企医药平台，但华润系的“央企医药平台”悬空许久，迟迟未能成型，迟滞于其他巨头步伐。 　　盘点华润旗下的医药资产，除了华源集团，还有东阿阿胶以及三九集团，其中，华源的医药资产便是目前陷入纠葛中的北京医药集团和上海医药集团。迹象表明，华润失去上药和北药两大重要医药资产的可能性增大。 　　 “如果成真，华润的医药平台将只剩下三九医药集团和东阿阿胶等少数资产。”分析师估计。 　　[B]华润痛失上药控股权[/B] 　　华润医药集团目前总资产大约260亿，年营业额逾270亿元，直接或间接控股三九医药、东阿阿胶、双鹤药业、万东医疗等多家医药上市公司。 　　纵观华润数年来在医药板块的耕耘，其过度依赖资本运作而轻资产资本注入和产品等附加值板块的整合，让它在当下吃尽了北药和上药的苦头。 　　华润陷入“南北战争”困局的渊薮源远流长，2008年4月，华润与上药矛盾公开化，上海医药集团旗下上海医药当时公告的2007年其净利润却比前年下降了3.54%，上药指责说，这一切源于华润控股的华源长富药业（集团）有限公司的违规计提。不堪长富药业“小动作”的上海医药，怒将华润抽逃资金之事公布于众，同为华润旗下的两家公司终于撕破了脸，当时报章分析说，其实这是华润与上海国资委暗自为控制上药展开的较量。 　　据了解，华源长富药业大股东为华源集团，主营业务为大输液，其中上海医药参股华源长富药业24.13%。上海医药在当年年报中指责说，长富药业的连续恶意计提是受其控股股东的要求进行的。而上海医药大股东为上药，华润通过重组华源集团从而持有上药40%的股权，但另外60%实际为上海市国资委所控制。这种争端的背后，被分析者认为是正在重组的新上药企图赶走华润、确立自己华东老大地位的深层目的。 　　上药最新的重组方案三驾马车中，上海医药、上实医药、中西药业分别以上海医药以换股方式吸收合并上实医药和中西药业；上海医药向上海医药（集团）有限公司发行股份购买资产；上海医药向上海上实（集团）有限公司发行股份募集资金、并以该等资金向上海实业控股有限公司购买医药资产。这三项交易资产重组完成后，新上药集团面前仍有一块绊脚石，这就是华润集团持有的40%股权。 　　如何解决华润集团退出问题提上了议事日程：有消息说，华润已与上海市国资委达成协议，华润支持上药集团的重组，其持有的40%股权将通过司法拍卖解决。华润名义上所持有的上药40%股权依然被上海银行、浦发银行等上海市本地银行所冻结。 　　上药此次控股权变化，无疑上实成为最大受益者，华润则成为最大输家。失去上药控股权，让华润的医药整合缺少了一粒有力地布于华东区的棋子，这粒棋子代表了200多亿元的资产规模和布局在华东地区的医药分销网络。 　　[B]整合北药难以突破[/B] 　　华润在控股上药迟迟不能打开局面的情况下，华润在整合北药上也是迟迟难以突破。 　　尽管持有北药50%的股权，但北药的控制权仍在北京市国资委手里。华润与北京市国资委争夺北药也处于僵持中。分析人士称，对于华润整合上药，北京市方面绝对不会不闻不问。此次华润在与上海市国资委争夺上药上失利，或许会引发北京市方面的效仿。 　　据信息披露，当时华源重组北药，北京市政府表示，先给华源集团50%的股权，如果华源进来后达到北京市政府的经营目标，北京市政府将会再给华源集团20% 的股权，从而让其拥有70%的股权，达到绝对控股。但是华源集团入主北药1年多之后，其本身陷入经营危机，发展北药的计划也随之变成泡影，而另外20%股权也就无从获得。 　　[B]华润医药央企平台亟需根基[/B] 　　失江东，丢长城，华润因其数年来的财务路线，埋下了坎坷前行的障碍。某证券公司认为，华润医药“央企平台”将使华润彻底丧失中国一南一北两个重要地区设堡布器的机会。 　　分析者认为，但这并不说明华润无路可走，目前其旗下医药产业格局来看，三九医药和东阿阿胶，是其切入国投、新上药腹地的铿锵将军。据业内人士推测：完全退出上药后，华润能够控制的只有三九集团及其旗下的三九医药和东阿阿胶，另外就是处于整合期的北药及其一级子公司双鹤药业和万东医疗。 　　从华润的并购历史来看，从零售、地产到啤酒，借资本力量做大规模进而做强是华润常用的操作手法。而被称为华润医药资产“三驾马车”的北药、上药和三九分别位于华北、华东和华南，北药、上药年营业收入都超过200亿元。 　　分析者说，作为华源集团旗下优质医药资产上药集团和北药集团纷纷与华润分道扬镳，让华润借机整个其他央企的雄心成为一个未知数。 　　北京市国资委倾向于将北药集团留下；在上海，博弈方则要求华润如果拿出50个亿，就将解冻股权，让华润成为真正意义的大股东。华润显然不会接受这个提议。 “即使在北药集团，华润如果不掌控股权，断然也不会投入一个子儿的真金白银。”熟悉华润操盘习惯的业内分析人士说。 　　华润不堪一蹶不振，从华润持续对东阿阿胶、三九集团的整合来看，逐步将全部医药资产转到新三九名下。在央企、红筹背景之下，无疑使外界对华润未来之路充满期许。 　　2004年下半年，华润通过与山东国资部门成立合资公司间接控股了东阿阿胶。截至2009年6月30日，华润通过华润东阿阿胶持有东阿阿胶23.12%股权，为实际控制人。 　　截至目前，东阿阿胶和华润逐步走入了良好合作期，加上国资委10月份公告通知的支持，其扩张产业链的步子正稳步向前。 　　东阿阿胶公司董事总经理秦玉峰对本报表示，不排除改名为华润东阿阿胶，将代表整个华润集团重组的中药板块，东阿阿胶将上至扩大驴养殖业基地，下至发展驴肉市场和美容养生行业，据东阿阿胶三季报显示，2009年前三季度公司实现收入14.47亿元，同比增长20%；实现净利润2 .42亿元，同比增长32%。 　　[B]挑战国药与上实，华润的突围战[/B] 　　如今，国药系重组中生集团，天坛生物进行整体上市；上海医药拟通过吸收合并、发行股份购买资产的方式打造“新上药”，基本实现上实集团和上药集团医药产业的整体上市。 　　华润则必须首先清洗历史问题的缺陷，之后才能确立聚焦医药主业战略，重新回到医药市场的这块“大蛋糕”中，与国药系、上实系形成了三强鼎立的格局。 　　华润之舰，依然有两条缆索紧紧系在两大巨头身上———华润将立足何处？南北合围之战如何突围？保存自身资产，实现利润升级，华润的战争才刚刚真正开始，华润在医药整合过程中，会在“潜在的”央企中寻找新的医药资产进行兼并，继续做大做强吗？ [I]来源：南方都市报[/I]

[font=宋体][b]什么是重组蛋白？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白[/b][/url]的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，哺乳动物细胞蛋白表达，酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白和重组蛋白的区别[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组蛋白[/font][/font][font=宋体]重组蛋白是指应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。[/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白是指通过重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术将你要表达的目的蛋白基因同表达载体上融合蛋白基因相连，这样表达出的蛋白质就会是同时具有目的基因蛋白和融合基因蛋白两个部分的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白与重组蛋白不是一个层次上对立的概念，融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。融合蛋白又称标签（[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]），常用的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总结：在生物制药领域，重组蛋白具有较高的活性和纯度，更易吸收，安全性也更高的特点。重组蛋白的利用率也更高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白，基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素：[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易，应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说，重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务，例如义翘神州[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]参考重组蛋白生产的详细服务清单）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]等相关信息，详情可以关注[/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白生产：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]

实验原理DNA重组是将外源DNA与载体分子连接，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。DNA重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法。 重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。常用的DNA连接酶是T4噬菌体DNA连接酶，它不但能使粘性末端的DNA分子连在一起，而且能使平末端的双链DNA分子连接起来，但这种连接的效率比粘性末端的连接效率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。如果是单酶切，为了防止载体本身的自身连接，可以用牛小肠碱性磷酸酶（CIP）处理，去掉酶切后5'端的磷酸。这样做能有效防止质粒的自身环化，降低转化的背景，大大提高重组子的筛出效率。连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性，但是在这样的温度下，粘性末端的氢键结合是不稳定的。一般的连接条件是在12-16℃，反应12-16小时(过夜)，这样既可最大限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到粘性末端短暂配对结构的稳定。连接产物转化宿主细胞后，还须对转化菌落进行筛选鉴定，挑选出所需的重组质粒。仪器、材料与试剂一、仪器1．恒温摇床2．恒温水浴3．恒温培养箱4．小型高速离心机二、材料1． 氨苄青霉素2． BamHI3． HindIII4． T4 DNA连接酶5． pQE-31 和pUC18-CAT 质粒6． 培养皿7． 接种针8． 金属涂棒9． 1.5mL 离心管10．酒精灯11．镊子、灭菌牙签等三、试剂DNA琼脂糖胶纯化试剂盒实验步骤一、质粒DNA提取的pQE-31和pUC18-CAT 质粒。二、制备重组DNA1. 在灭菌的1.5mL 离心管中，加入pQE-31质粒10mL(2mg／mL)，2mL酶切缓冲液，1mL BamHI 和HindIII酶 的混合液（各含10个单位），无菌双蒸水7mL，至反应混合物总体积为20mL，离心混匀，37℃反应过夜。2. 在另一无菌1.5mL 离心管中，加pUC18-CAT 质粒20mL，加入3mL酶切反应液，lmL BamHI和HindIII酶的混合液，无菌双蒸水补到30mL，37℃反应过夜。3. 反应完毕后取5mL pQE-31质粒的酶切液做电泳分析，检验酶切是否完全。酶切完全，进行下一步。4. 将酶切处理的后pQE-31和pUC18-CAT 质粒，分别上样跑琼脂糖凝胶电泳（注意加DNA分子量标准）。电泳结束后用DNA琼脂糖胶纯化试剂盒按照试剂盒说明书的方法回收DNA片段。前者回收的片段为3.5kb，后者为650bp。5. 将回收的pQE-31载体质粒均分为两份，其中一份与酶切后回收的CAT片段混合，做连接；另一份不加CAT片段，做对照。操作如下：在10mL DNA样品中，加T4 DNA连接酶缓冲液1mL，T4 DNA连接酶1mL，14℃（室温）过夜，然后做大肠杆菌的转化。三、转化感受态细胞1. 制备的感受态细胞(-20℃保存的)。2. 在100mL的融化后处于冰浴的感受态细胞中，加入10mL连接产物，混匀，冰上放置30分钟，以后的操作参照实验一进行。同时做未加CAT片段的空白pQE-31载体质粒连接处理后的感受态细胞转化的对照。实验结果过夜培养后，实验组和对照组的两个培养皿上都可能会出现一些菌落。如果实验组的菌落数明显多于对照组的菌落，则是好征兆，但实验组中出现的菌落是否含有所需的DNA重组子还须进一步鉴定。

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]重组蛋白[/b][/url]（[/font][font=Calibri]recombinant protein[/font][font=宋体]）技术原理是现代生物技术的核心之一，它通过将目的基因插入到表达载体中，在宿主细胞中进行表达，从而获得所需的重组蛋白。这一技术的关键是选择合适的表达载体和宿主细胞，以确保目的基因的正确表达和蛋白质的正确折叠。重组蛋白技术的应用范围非常广泛，包括药物研发、疫苗生产、诊断试剂、生物治疗等领域。通过重组蛋白技术，我们可以快速、高效地获得具有特定结构和功能的蛋白质，为科学研究、医学和工业应用提供重要的工具和资源。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]构建重组蛋白的技术路线主要包括以下几个步骤：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①目的基因的获取：根据所需蛋白质的氨基酸序列，设计并合成相应的基因片段，或者从基因文库中筛选出相应的基因。[/font][font=宋体]②表达载体的构建：将目的基因插入到表达载体中，常用的表达载体包括质粒、病毒等，它们可以在宿主细胞中进行复制和表达。[/font][font=宋体]③宿主细胞的选择：选择适合的宿主细胞，如细菌、酵母、昆虫、哺乳动物等，以确保目的基因的正确表达和蛋白质的正确折叠。[/font][font=宋体]④重组蛋白的表达：将构建好的表达载体转入宿主细胞，进行培养或诱导，使目的基因在细胞内表达，产生重组蛋白。[/font][font=宋体]⑤重组蛋白的纯化：通过各种分离纯化技术，如离心、过滤、沉淀、色谱等，将重组蛋白从细胞中提取出来，并进行纯化和精制。[/font][font=宋体]⑥重组蛋白的鉴定：通过各种检测技术，如质谱、免疫学检测等，对重组蛋白进行鉴定和质量控制。[/font][font=宋体]通过以上技术路线，可以构建出具有特定结构和功能的重组蛋白，为科学研究、医学和工业应用提供重要的工具和资源。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]重组蛋白技术应用：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]一、药物研发与生产：[/font][font=宋体]靶点验证：在药物研发初期，可以使用重组蛋白来验证药物作用的靶点。[/font][font=宋体]抗体药物：利用重组蛋白技术可以生产人源化抗体，用于癌症治疗、自身免疫性疾病治疗等。[/font][font=宋体]直接药物：某些重组蛋白本身就是药物，如胰岛素、生长激素等。[/font][font=宋体]二、疫苗开发：[/font][font=宋体]基因工程疫苗：使用重组蛋白技术生产疫苗，例如针对乙肝、流感等疾病的疫苗。[/font][font=宋体]三、诊断试剂：[/font][font=宋体][font=宋体]免疫检测：重组蛋白可以用作抗原或抗体，用于各种免疫检测技术，如[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、免疫荧光等。[/font][/font][font=宋体]四、生物治疗：[/font][font=宋体]细胞因子：重组蛋白技术可以生产各种细胞因子，用于促进细胞生长、分化、凋亡等。[/font][font=宋体]五、基础研究：[/font][font=宋体]结构生物学：利用重组蛋白研究蛋白质的结构与功能关系。[/font][font=宋体]信号转导研究：通过重组蛋白研究细胞内信号转导过程。[/font][font=宋体]六、其他应用：[/font][font=宋体]酶工程：生产具有特定性质的酶。[/font][font=宋体]七、农业应用：如生产抗虫作物或具有特定性状的动物。[/font][font=宋体]通过以上几个方面，重组蛋白技术在生物医药领域中发挥着越来越重要的作用，为疾病治疗、疫苗开发、基础研究等提供了有力的技术支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白纯化服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][/font][font=宋体][font=宋体]更多重组蛋白详情可以以关注义翘神州：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

大家有没有人用GCFID做正构烷烃的标准品，例如C10-C50，做下来C40的响应只有前面低碳组分的20-30%，C50更低。不分流比分流歧视现象严重，想咨询大家，这种重组分的响应怎么做才能提高？

[font=宋体]在现代生命科学研究中，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白表达技术[/b][/url]扮演着至关重要的角色。通过将外源基因导入宿主细胞，并使其表达特定蛋白，我们能够获取大量高纯度的重组蛋白，为疾病治疗、药物研发和生物工程等领域提供了强有力的支持。本文将介绍重组蛋白表达的原理、表达系统、生产步骤以及应用前景。[/font][font=宋体][b]一、重组蛋白表达的原理[/b][/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白表达是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术，将目标基因（外源基因）导入宿主细胞中，并通过宿主细胞的生物机制使其表达出特定蛋白。其主要步骤包括：[/font][/font][font=宋体][font=宋体]基因克隆：将目标基因经过[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增后，与表达载体连接，形成重组质粒。[/font][/font][font=宋体]转染或转化：将重组质粒导入宿主细胞中，可以使用化学方法、电穿孔或者嗜热菌等方式进行转染或转化。[/font][font=宋体]表达蛋白：重组质粒进入宿主细胞后，融合到宿主细胞的染色体中，随后遵循细胞的转录和翻译机制，表达出目标蛋白。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、常见的重组蛋白表达系统[/font][/b][font=宋体]大肠杆菌表达系统：大肠杆菌是常用的重组蛋白表达宿主细胞之一。其优点在于生长快速、易于培养，并且能够产生大量的蛋白。此外，大肠杆菌的遗传工具和代谢途径也被广泛研究，提供了便利。[/font][font=宋体]酵母表达系统：酵母表达系统包括酿酒酵母和毕赤酵母。这些酵母细胞具有真核细胞的特点，能够进行正确的蛋白折叠和修饰。同时，酵母细胞也可以进行大规模培养和高表达，适用于一些复杂蛋白的表达。[/font][font=宋体]昆虫细胞表达系统：昆虫细胞表达系统常用于大规模蛋白表达。昆虫细胞具有真核细胞的优势，能够对蛋白进行正确的折叠和修饰，适合于表达大量需求复杂结构的重组蛋白。[/font][font=宋体]哺乳动物细胞表达系统：哺乳动物细胞的表达系统可用于高效表达复杂蛋白和进行蛋白质研究。哺乳动物细胞具有真核细胞特点，能够进行正确的蛋白质修饰和折叠，并且在一些特殊情况下需要考虑到人类蛋白的免疫原性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、重组蛋白生产步骤[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞中有两个蛋白生产阶段：转录和翻译，被称为分子生物学的中心法则。换言之，转录和翻译步骤属于重组蛋白表达步骤。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白，基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素：[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易，应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说，重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][font=宋体]，例如义翘神州[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]四、重组蛋白表达技术的应用前景[/b][/font][font=宋体]药物研发：重组蛋白表达技术被广泛应用于药物研发领域，用于生产重组蛋白药物。这些药物包括多肽类、蛋白类和抗体类药物，如生长因子、抗体药物和血液制剂等。通过重组蛋白表达技术，我们可以获得高效纯度的药物，满足临床上的需求。[/font][font=宋体]生物工程：重组蛋白表达技术被广泛应用于生物工程领域，用于生产特定的蛋白产品。这些产品可以应用于食品、化妆品、工业发酵等领域，如酶制剂、生物染料和生物材料等。[/font][font=宋体]疾病治疗：通过重组蛋白表达技术，我们能够合成特定的蛋白，用于疾病的治疗和诊断。例如，利用重组抗体技术，可以开发出用于癌症治疗和免疫治疗的抗体药物。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]

据悉，珀金埃尔默公司本周宣布，作为重组计划的一部分，公司裁员72人。裁员计划已在今年第二季度完成。　　珀金埃尔默公司表示，在第二季度，公司管理层批准了一项计划，决定将资源转移到高增长地区和终端市场。作为该计划的一部分，公司裁掉了72名劳动力。　　重组计划导致削减人类健康和环境健康业务的人员，但公司没有提供进一步的细节。　　公司表示，在人类健康业务方面，珀金埃尔默裁员和关闭多余的设施需花费税前重组费用220万美元;在环境健康业务方面，人员减少和设施的关闭造成了340万美元的税前重组费用。　　公司还表示，所有被裁员工已经接到通知，珀金埃尔默预计裁员造成的其他遣散费480万美元将在2012年底前完成支付。

GB/T 30364-2013 重组竹地板

大家都知道AGLIENT的ICP是通过冷锥来减少尾焰，主要是这能使自吸收和重组干扰降到最低，提供宽动态线性范围和低背景以获得最佳检出限。那么您是如何理解光谱分析中的自吸收与重组干扰的？

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（一）外源ＤＮＡ片段未的性质带有各种未的外源ＤＮＡ的克隆方法见下表：────────────────────────────────────────────外源ＤＮＡ片段所带未端 　　克隆的要求 　说明───────────────────────────────────────────平端 　　　要求高浓度的ＤＮＡ和连接酶1)非重组体克隆的背景可能较高　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2)质粒和外源DNA拼命处的限制酶切位点消失　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　3)重组质粒会带人外源DNA的串联拷贝用两种限制酶消化后　 需纯化 　1)质粒与外源DNA拼命处的限制酶切位点常可保留不同的突出端2)非重组体克隆的背景较低质粒体以尽量提高连接效率3)外源DNA只以一个方向插入到重组质粒中相同的突出端 线状质粒DNA常用磷酸酶处理1)质粒与外源DNA接合处的限制酶切位点常可保留2)外源DNA会以两个方向插入3)重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝──────────────────────────────────────────── １．带有非互补突出端的片段　　用两种不同的限制酶进行消化可以产生带有非互补突出端的片段，刀就是最容蜴 克隆的片段。常用的大多数质粒载体均带有由几个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点。由于现有的多克隆位点如此多样，因而几乎总是能找到一种带有与外ＤＮＡ片段未匹配的限制切位点的载体。于是，采用所谓的定向克隆即可将外源ＤＮＡ片段插入到载体当中。例如：载体pUC19用BamHl和Hind－Ⅲ进行消化，然后，通过凝胶电泳或大小排阻凝胶层析纯化载体大片段，以使同芤下来的多克隆位点 缺小片段分开。于是，这一载体就可以同有与BamHl和ＨindⅢ所切出未端相匹配的粘端的外源ＤＮＡ区段相连接。用得到的环状重级体化大肠杆菌，检查氨苄青霉素抗性。由于HindⅢ和BomHI的突出端不互补，载体片段不能有效地环化，所以转化大肠杆菌的效率也极低。因此，大多数具有氨苄表霉素抗性的细菌都含有带外源ＤＮＡ区段的质业，外源ＤＮＡ区段成为连接HindⅢ和BamHI位点的桥梁。当然，可以根据特定的外源ＤＮＡ区段来改变限制酶的组合方式。　　如要制备定向克隆载体，它尽量避免使用大多克隆位点上彼此直接相邻的限制酶切位点。这些位点中的一个被切开以后，第二个位点应位于线状ＤＮＡ分子一端的几个碱基对之内，这样过于靠近末端，不利于多种限制酶的有效切割。正因为如此，所以务必检查两种限制酶对载体的消化是否完全。可采用以下两种检查方法： １）用两种限制酶中的一种对载体进行消化，当所用限制酶的最挞缓冲液对离子强度的要求有不同时，应使用所要求的盐浓度较低的酶。消化完后，应通过凝胶电泳对一小份ＤＮＡ进行检查。如所有质粒ＤＮＡ均从环状转变为线状分子时，适当调整盐浓度，并加入第二种酶。同时，另行设立一个预实验，其中含有环状质粒ＤＮＡ，并只加两种限制酶中的第二种。当预实验中的所有ＤＮＡ都转变为线状（由凝胶电泳确定）时，通过凝胶电泳或尺坟排阻凝胶层析纯化质粒ＤＮＡ大片段。\par ２）图1.7所示的是检查消化反应完全程度的一种更为严格的方法。对用第一个限制酶切割的一小份ＤＮＡ进行末端标记，经离尽柱层析法纯化后，与未标记的线状ＤＮＡ混合。然后用第二个酶消化，完全消化可使ＤＮＡ小片段释放，它应带有50％的放射性活度，这可通过层析或通过凝胶电泳和放射自显影加以检测。２。带有相同末端（平端或粘端）的片段 　　带有相同末端（平端或粘端）的外源ＤＮＡ片段必须克隆到具有匹配末端的线状质粒载体中。在连接反应中，外源ＤＮＡ和质粒都可能发生环化，也有可能形成串联寡聚物。因此，必须仔细调整连接反应中两个ＤＮＡ的浓度，以便使“正确”连接产物的数量达到最佳水平（见本节三）．此外，常常使用碱性磷酸酶去除5’磷酸基团以抑制质粒ＤＮＡ的自身连接和环化。在体外连接反应中，仅当一个核苷酸含5’磷酸基团而另一个含3’羟基时，Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶可催化相邻核苷间形成磷酸二酯健。用细菌碱性磷酸酶(BAP)或牛小肠碱性磷酸酶(CIP)去除线状ＤＮＡ两端的5’磷酸可以最大限度的地减少质粒ＤＮＡ区段可有效地与去磷酸化质粒ＤＮＡ相连接，产生一个含有两个切口的开环分子（图1.8）。因为环状ＤＮＡ（即使是带切口的环状ＤＮＡ）的转化效率比线状ＤＮＡ高得多，所以大多数转化体都含有重组质粒。３．带有平端的片段　　外源ＤＮＡ片段带平端时，还有一桩切外生枝的麻烦事，这就是蛱端的连接效率比起带有突出互袜末端的ＤＮＡ要低得多。因此，涉及平端分子的连接反应所要求的Ｔ４噬菌体ＤＮＡ连接酶的浓度和外源及质粒ＤＮＡ的浓度都要高得多。还要说明的是，加入低浓度的如聚乙二醇一类的物质，常可提高这类反应的效率。 （二） 质粒载体和外源ＤＮＡ中限制酶切位点的性质　　如今，质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多，因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源ＤＮＡ片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可比拟的优点，也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源ＤＮＡ。另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如，识别不同的六核苷酸的限制酶BamHl和BglⅡ产生具有相同突出末端的限制酶切片段，这样用BglⅡ消化而制备的外源ＤＮＡ片段可以克隆到用BanHl消化的质粒中。这通常会使接合序列不能被曾用于外源ＤＮＡ或制备载体的任何一种酶所切开。然而很多清况下，用切点位于多克隆序列侧翼的限制酶进行消化，可将片段从重组质粒中摘出。偶尔在质粒的以及外源ＤＮＡ两端的限制酶切位点之间，不可能找到“门当户对”的搭配关系。这时可用下面两种方案加以解决：１）在线状质粒末端和（或）外源ＤＮＡ片段的末端接上合成在接头或衔接头。２）在得到控制的反应条件下，用大肠杆菌ＤＮＡ聚合酶I Ｋlenow片段部分补平带3’凹端的ＤＮＡ片段。如第九章所讨论，这样常可以使那些不相匹配的限制酶切位点转变为互补末端，从而促进载体和外源ＤＮＡ的连接。因为部分补平反应消除了同一分子两端彼此配对的能力，故连接反应过程中环化和自身寡聚化的机会也会有所降低（Hung和Wensink''1984;Zabarovsky和Allikmets''1986）。