荧光反应

做荧光反应时，使用的瓶子是否不应该接触洗洁精？一般物质反应荧光性物质后可以保存多久？在荧光反应过程中需要有哪些注意事项？

[font=&][size=18px]石油的荧光反应 石油在紫外光照射下受激发发光，并在照射后所发光立即消失的这种荧光反应特性，普遍被用于野外工作时作为判断岩石中是否含有石油显示的重要标志。按发光颜色的不同以及分布的情况，大体可推测所显示的石油组分及其百分含量。一般油质呈天蓝色，胶质呈黄绿色，沥青质呈棕褐色[/size][/font]

急!急!今天进行PCR扩增,为什么没有荧光反应?是染料过期还是什么问题?

[size=5]发光有两种，一种是由于温度达到条件而发光，一种是冷光，也就是是荧光。高于绝对零度的物体都会向周围空间发射电磁波，温度越高发射的电磁波的波长越短。当波长范围落在可见光范围内时就会发光。另外，高速运动的物体也会发射波长较短的电磁波。一般化学发光要么是温度的关系（大部分情况是燃烧），要么就是荧光反应---发光基团吸收能量使电子跃迁到高能级，在一定条件下释放电磁波的现象 [/size]

化学发光反应类型1. 直接化学发光和间接化学发光 直接发光是被测物作为反应物直接参加化学发光反应，生成电子激发态产物分子，此初始激发态能辐射光子。 A + B® C* + D C* ® C + hn式中A或B是被测物，通过反应生成电子激发态产物C* ，当C* 跃迁回基态时，辐射光子。 间接发光是被测物A或B，通过化学反应生成初始激发态产物C* ， C* 不直接发光，而是将其能量转移给F，使F跃迁回基态，产生发光。 A + B® C* + D C*+F® F* + E F* ® F + hn 式中C*为能量给予体，而F为能量接受体

之前我们人员维护不当，导致原子荧光的反应块那里导致了硼氢化钠溶液的结块，堵住了，请问大神怎么样才能消除里面的结块？我之前用硝酸浸泡超声了一天都没办法除掉。

我想做点有机物紫外降解研究，国产的紫外光反应器大概多少钱？

做荧光反应产物这一块不知道是什么，反应机理也没法写，希望高人给点指点，谢谢！

最近用原子荧光做肥料中的汞和砷，做样时反应器中全是泡沫，有知道如何解决的吗

我今天测ＳＢ时。。开始能测。。测着测着ＳＢ就没有含量了。。我调高灯电流在测又可以了。。可是没测几个样又没有含量了。请问这是怎么回事。。急！！！我打开烟囱看看。。结果发现在反应时火焰很高呀。。灯只能照到火焰的中间。请问空心阴极火应照到火焰的什么地方。。火焰太高了怎么办！！

今天销售部门反应，一家香水厂，用我们的香精做出香水后，喷在织物上，用荧光灯检测后发现有荧光反应。把这个问题反馈到我公司，销售部门想出个说明，说我们的香精中不含有荧光增白剂，大家知道这个荧光增白剂怎么检测吗，？用个紫外灯随便照照就能看出结果，完全没有道理和依据。但是，客户又认死理，油盐不进。我在网上没有找到关于日用香精的相关荧光规定

1．透射式荧光显微镜: 激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上．这是比较旧式的荧光显微镜。其优点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱．所以对观察较大的标本材料较好。 2．落射式荧光显微镜这是近代发展起来的新式荧光显微镜，与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。

平时测的样品都是未检出，现在刚开始走标准空白和曲线荧光值都挺正常的，就是到了测样的时候测上几个样品就发现荧光值越来越大，而且图谱基线也越来越往上飘，尝试过增加仪器清洗次数也一点用没有，就是看到反应块那里反应越来越剧烈，不知道是什么原因，求解！！！

操作原子荧光，测食品中的无机砷啊，原子荧光酸碱在瓶里怎么没有反应啊，PF6的原子荧光

问题描述：在进行荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应时，同一样品，其中某一个反应的荧光信号特别强，是什么原因？解答：[align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]1[/color][/font][font=宋体][color=black]）试剂配制时反应液没有完全溶化或试剂配制时没有充分混匀致各管中各成分的量不同。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]2[/color][/font][font=宋体][color=black]）不同检测信号的荧光强度有差异。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]3[/color][/font][font=宋体][color=black]）马克笔标记可能影响荧光信号采集。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]4[/color][/font][font=宋体][color=black]）仪器污染。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

电化学发光免疫测定（Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI）是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般的化学发光（CL）不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNA／RNA探针检测。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290841_24973_1636364_3.gif[/img]

[font=楷体_GB2312][size=2]地球上的生命离不开光的存在，从古代发现萤火虫发光以来，人们对自然界中发光现象的研究已有几个世纪，发光是指一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射。通常人们将其分为光照发光、生物发光与化学发光。光照发光是发光剂经短波长入射光照射后进入激发态，当恢复至基态时发出较长波长的可见光；生物发光是反应底物在荧光素酶的催化下利用ATP产能，生成激发态的氧化荧光素，后者在恢复到基态时多余的能量以光子形式放出；化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射，这是一个多步骤的过程。分析化学典型生物发光：萤火虫荧光素-萤光素酶-磷酸三腺苷体系，该体系是在有氧及镁离子参与的条件下，萤火虫荧光素与荧光素酶健合，快速形成激发态三元配合物，该激发态三元配合物恢复到基态时便产生光的发射。该反应的发光量资产率最高可达98%，已广泛用于ATP的测定，灵敏度达到10-19mol，在生物医学科学、生命科学、宇宙科学、药物学和农业生物学方面都有很成功的应用。 由此我们可以看出，生物发光其实就是在生物体内的化学发光现象，到十九世纪末人们开始将其与简单的有机反应相联系。1877年，Radzisewski等发现咯粉碱在碱性介质中与过氧化氢等进行氧化还原时，有光子产生(发绿光)；1905年，咯粉碱类似物的发光现象被报道；Albrecht于1928年证明了鲁米诺在碱性介质中具有发光作用；Glue和Petsh在1 935年第一个报告了光泽精在碱性条件下与过氧化氢反应产生化学发光；到19世纪60年代，随着PMT的出现和应用，人们发现越来越多的有机反应伴随有化学发光现象。 从机制上讲化学发光的是某些化合物可以利用化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激发态。当此产物分子或中间态分子衰退至基态时，以发射光子的形式释放能量（即发光）。 化学发光可以分为直接发光和间接发光。 直接发光是最简单的化学发光反应，有两个关键步骤组成：即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质，反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*，处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体，此过程中由于C直接参与反应，故称直接化学发。 间接发光又称能量转移化学发光，它主要由三个步骤组成：首先反应物A和B反应生成激发态中间体C*(能量给予体)；当C*分解时释放出能量转移给F(能量接受体)，使F被激发而跃迁至激发态F*；最后，当F*跃迁回基态时，产生发光。 一个化学反应要产生化学发光现象, 必须满足以下条件: 第一是该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光 第二是要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态 第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。 前面已经提到了有机化合物的化学发光，其实很多无机化合物也能产生化学发光，在此列举了几个例子，其中含硫化物、含氮化合物的化学发光已被用作于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的检测；有机物中以下几类均有化学发光现象，其中烃类也是多用于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的检测。 较为典型的化学发光反应主要有以下几个： 1、鲁米诺的化学发光反应 2、光泽精的化学发光反应 3、过氧化草酸酯的化学发光反应 4、邻菲罗林的化学发光反应 5、萤火虫发光 6、细菌发光[/size] [/font]

各位老师好，我最近做奶中的黄曲霉M1的项目，液相荧光的方法 检测，用走标液时仪器一直达不到GB 541337-2010的检出限，用的是光反应衍生系统

1．鲁米诺（luminol）,异鲁米(isoluminol)和他们的衍生物 鲁米诺（3—氨基—邻苯甲酰肼,1）,异鲁米诺（2）及其衍生物（如氨基丁基乙基邻苯甲酰肼，ABENH,3） 在发光分析中被使用。 在二甲基亚砜中，鲁米诺的量子产率不超过5%，在水溶液中是1%~1.5%。鲁米诺在碱性条件下能被许多氧化剂（例如H2O2,O2,ClO-等）氧化而发出蓝色的光，发光反应的量子产率介于0.01~0.05之间，是一个研究最早，最多，应用最广泛的发光试剂.2．过氧草酸类过氧草酸盐（peroxalate）（酯）包括一大类物质，他们自身并不发光，其化学发光均为敏化化学发光，化学发光反应是芳香草酸值得过氧化氢氧化作用，芳香草酸盐和H2O2芳香草酸盐和H2O2反应形成高能量的中间物。 与鲁米诺相比，过氧草酸盐化学反应的发光效率更高，可达到27%，且在较宽的酸度范围内(PH4~10)都能发光。 过草酸发光体系可用于测定的物质有：（1）待测物质本身是荧光剂，可作为能量接受体和发光体 (2)待测物质遭遇某一反应可产生H2O2等氧化剂而间接被测定；（3）待测物质可被衍生成荧光物质。可见，过氧草酸盐类化学发光法的分析应用还有赖于新荧光衍生剂的开发。

求助写出两种用于免疫分析的荧光标记物和化学发光标记物，写出它们的标记反应。

我刚开始做苯甲醛和乙酰乙酸乙酯的Knoevenagel反应，用氢氧化钠做催化剂，无溶剂反应，我想问这个反应在紫外灯下薄层色谱的走板情况是怎样的，会有荧光点出现吗？另外它的反应条件是怎样的，我做了好久都没做出来

关于化学中发光分析法的讨论徐吉龙(沈阳师范大学，辽宁，沈阳，110034)【摘要】化学发光分析法是分子发光光谱分析法中的一类，是指物质在进行化学反应时，由于吸收了反应时产生的化学能，而使反应产物分子激发至激发态，受激分子由激发态回到基态时，便发出一定波长的光．根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或发光总量来确定组分含量的分析方法叫化学发光分析法。化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光（光辐射）所吸收的能量来源不同。【关键词】化学发光；体系；应用 1 鲁米诺化学发光反应体系 鲁米诺（5-氨基一邻苯二甲酰肼）属于酰肼类有机化合物，性质稳定，结构简单，易于合成，无毒，不污染环境，且水溶性较好，是使用最早应用最广泛的化学试剂之一，它在强碱性溶液中可以被氧化剂氧化而处于激发态，激发态发射蓝光同时回到基态。鲁米诺可与各种氧化剂如过氧化氢、氧气、次氯酸盐、碘、铁氰化钾、高锰酸钾等反应产生化学发光。鲁米诺作为一种有效的化学发光试剂被广泛用于各种氧化剂、催化剂和抑制剂的测定。利用化学发光分析已经测定了抗坏血酸、酚磺乙胺、富马酸酮替芬、脱氧肾上腺素、甲基多巴、氯丙嗪、双嘧达莫、胰腺脂肪酶、氨苄西林、左旋多巴以及阿莫西林等。这些有机物质都是各类药物中有效成分，因此，对于此类有机物含量的测定对药物的研究和开发以及质量标准研究、安全性评价、药物临床研究等，都有非常重要的作用和意义。 2 光泽精化学发光反应体系 光泽精(N，N-二甲基二吖啶硝酸盐)，也是最常见的化学发光试剂之一。它在碱性条件下，可以被过氧化氢氧化成四元环过氧化物中间体，而后裂解生成激发态的吡啶酮而发射蓝绿色的光同时回到基态．光泽精具有较高的发光效率，量子产率一般在0. 010. 02之间。光泽精可在一些还原性物质存在的情况下产生化学发光，因此该化学发光试剂主要被用于无机还原剂和有机还原剂的测定，大多数化学发光反应在无催化剂作用下是一个非常缓慢的氧化反应，光泽精发光体系亦是如此。当分别选择Sn4+、Fe2+、U3+等金属离子作为催化剂时，光泽精发光体系的发光速率急剧加快，发光强度也随之增强。被增强的发光强度与金属离子的浓度有良好的线性关系，从而建立了测定痕量金属离子的化学发光方法。3 高锰酸钾化学发光反应体系 高锰酸钾是化学发光反应中常用的强氧化剂，高锰酸钾化学发光反应可用来测定两类物质，一类是能直接与高锰酸钾产生化学发光反应的有机物，该有机物的分子结构大多数都含有多个羟基或氨基。另一类是基于能量转移机理测定荧光物质。高锰酸钾可以氧化很多种有机物从而产生化学发光，某些不易与鲁米诺、光泽精发光进行测定的物质，可以利用高锰酸钾的高氧化性与之反应，得到满意的测定结果，从而不断开发了新的化学发光体系，扩展了化学发光的应用范围。由于高锰酸钾和多种物质均有化学发光，因此高锰酸钾体系用于实际物质的化学发光测定干扰较严重，为提高分析方法的选择性，对高锰酸钾同时作用于维生素C( vc)和罗丹明B的化学发光行为进行了研究。有关高锰酸钾氧化有机物的化学发光反应已有不少报道，但高锰酸钾与无机物化学发光反应的研究较少，利用甲醛可以对高锰酸钾有很好的增敏作用，从而提高体系的灵敏度和选择性，并测定了一系列的金属以及无机离子。同时还发现连二亚硫酸钠也有很好的增敏效果。高锰酸钾作为化学发光的新体系，曾被应用于吗啡、可卡因、尿酸、肾上腺素、维生素等药物分析和的测定。4 过氧草酸酯类化学发光反应体系 过氧草酸酯类化学发光体系最早发现于20世纪60年代，最初主要用于军事目的，后来逐渐转入民用。过氧草酸酯类化学发光体系有4种要素化合物，即荧光剂、草酸酯、过氧化氢、催化剂。其化学发光的基本原理是：在合适的荧光化合物的存在下，过氧化氢诱导氧化芳香基草酸酯放出能量，而由化学发光染料分子吸收后转化为光能，以荧光形式放出。这种发光体系除了能用于制造各种冷光源外，还广泛应用于各类化学发光分析。与鲁米诺及其类似物化学发光体系相比，主要优点是量子产量高，因而具有较高的灵敏度，金属离子和氧分子干扰少。5 钌(II) -联吡啶配合物化学发光反应体系 钌(II) -联吡啶(2+溶液中加入芳香胺，观测桔红色的发光．2+是常用的电致化学发光试剂，具有独特的化学稳定性、氧化还原性和发光性，在硫酸介质中，它能与氧化剂产生化学发光，加入某些有机物可以增强其发光强度，且发光强度与有机化合物浓度呈线性关系，基于此，可以测定这些有机化合物。自从发现钉(II) -联吡啶配合物具有光解水的功能以来，钌(II) -联吡啶配合物及其衍生物一直是化学家研究的热点之一，活跃在许多研究领域，建立了多种测定有机物以及无机物方法，包括测定丙酮酸、氨基酸、草酸及其它有机酸等，同时还发现了测定抗坏血酸的新方法。6 铈(IV)化学发光反应体系 在酸性介质中，Ce (IV)可以和许多物质发生氧化还原反应从而产生荧光特性或化学发光，利用该反应已经建立了一些化合物的测定方法．何治柯等人发现铈(IV)可以氧化钌(II) -联吡啶从而产生比较微弱的化学发光现象，并且发现a-羟基羧酸、巴比妥酸、丙酮酸、抗坏血酸、盐酸小檗碱等作为增敏剂，对该反应有显著的增强作用，其增强的强度跟被测物质的浓度成正比，据此建立起一系列测定有机酸的新方法．并在此基础上提出了偶合化学发光机理，指出增强化学发光与有机酸结构的关系。

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光技术[/b][/url]（[/font][font=Calibri]Immunofluorescence technique [/font][font=宋体]）是在免疫学、生物化学和荧光成像系统基础上建立起来的检测技术。技术原理是根据抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异结合，以荧光标记抗体示踪组织或细胞内相应抗原。免疫荧光技术因特异性强、灵敏度高和操作简便的优势广泛应用于免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等生物学和医学。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化，是应用免疫学基本原理[/font][font=宋体]——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术[/font][font=Calibri](immunohistochemistry)[/font][font=宋体]或免疫细胞化学技术[/font][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化和免疫荧光都经过免疫原，原理相似，只是显色剂不同，免疫荧光是免疫组化技术之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫组化是应用免疫学的基本原理，即抗原和抗体特异性结合的原理，通过化学反应确定组织细胞中的抗原，使标记有抗体的显色试剂显色，并对其进行定位、定性和相对定量研究。在免疫组化过程中，常用的显示剂包括荧光素、酶、金属离子或同位素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫荧光是一种不会影响抗原和抗体活性的荧光色素，被标记在抗体或抗原上，然后与其对应的抗原或抗体结合，在荧光显微镜下呈现特异性的荧光反应。免疫荧光是免疫组化技术之一，具有特异性强、灵敏度高、速度快的特点。但相对结果判断的客观性不足，技术程序复杂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化与免疫荧光的真正目的均为明确病理诊断，以便患者获得精准治疗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有专业的技术人员和共聚焦显微镜等仪器平台，为客户提供高质量的免疫荧光检测服务，包括对细胞爬片、石蜡切片、冷冻切片和组织芯片等进行免疫荧光单染、双染、及多重染色等。可以为客户提供免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）检测服务和石蜡切片免疫组化（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）检测服务，有需求的朋友可以来义翘官网进行查询，详情参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font]

第三部分　化学发光的应用• 无机化合物化学发光分析 1.1 金属离子分析 痕量金属离子对化学发光反应具有很好的催化作用，因而化学发光测定金属离子得到广泛的应用 ( 见表 1) 。但是，由于不同金属离子催化氧化发光试剂时，发光光谱相同，致使金属离子催化化学发光反应的选择性较差。为提高分析的选择性，可采用以下方法 : (1) 利用待测金属离子与干扰离子配合物稳定性不同进行选择性分析，如加入掩蔽剂 EDTA 或水杨酸掩蔽干扰离子 (2) 优化实验条件以减少其它离子的干扰 (3) 稀释样品溶液 (4) 加入敏化剂。但是，当样品中待测物相对于干扰物浓度很小时，上述方法也无济于事，只得进行前处理，常用的分离方法有色谱、溶剂萃取等。 色谱分离的高选择性与化学发光检测的高灵敏度相结合，是一种很有前途的联用技术。关键是流动相的选择，流动相选择得好，不仅可以提高选择性，还可以进行多个离子的同时测定。如用离子交换分离法同时测定 Cr (à ) 和 Cr (? ) 。溶剂萃取也是提高化学发光测定金属离子选择性的一个有效方法。这种方法的主要问题是费时，因为进行化学发光检测前必须将无机物从有机溶剂中反萃取出来，或是将有机溶剂蒸发除去。较好的方法是自动在线溶剂萃取选择性检测待测物。 1.2 其它无机化合物的分析　 化学发光反应中，过氧化氢是最常用的一种氧化剂，因此有关 H 2 O 2 化学发光分析的报道较多 ( 见表 2) ，涉及到鲁米诺、过氧草酸酯及光泽精等化学发光反应。根据鲁米诺化学发光反应制成的 H2O 2 光纤传感器与流动注射法联用，可检测 10nmo l ／ L ～ 1 mmo ／ L 的 H 2 O 2 ，用模拟酶代替辣根过氧化物酶催化鲁米诺发光，检测限可达 5 . 5×10 － 9 mo l ／ L 。根据 ClO - 对鲁米诺的氧化作用，可用于测定 ClO - ，其它物质如 Cl 2 的干扰，可用流动注射法消除。利用停流技术测定水中 ClO - 不必进行前处理。含氮的无机化合物如 NH3 ／ NH +4 ，可将其衍生后用 TCPO 化学发光法检测，线性范围为 2 。 9ug ／ L ～ 6 m g ／ L 。 CN － 能抑制鲁米诺 H 2 O 2 － Cu (II ) 的化学发光，据此可分析测定 CN — 。在低温条件下化学发光分析测定 CN － ，当进样量为 100uL 时，线性范围为 10 － 9 － 10 -7 g ／ mL ，当进样量 20 uL 时，线性范围为 10 － 8 ～ 5×10 -7 g ／ mL 。 • 有机化合物的化学发光分析 2.1 有机酸 有机化合物的同系物结构和性质相似，使单一组分的测定遇到困难，因此有机化合物同系物的分析常与 HPLC 相结合。有机酸的化学发光分析 ( 见表 3) ，一般是先将其衍生成荧光物质经色谱分离后进行化学发光检测。但衍生法有如下的缺点 : (1) 衍生反应不完全 (2) 衍生物稳定性差，要求及时检测 (3) 限制了分离方法和条件的选择。由于衍生产物的性质与待测物不同，导致分离效率和分辨率下降，同时增加分析的时间和劳动强度。在临床医学上，草酸是一个重要的检测项目，可以直接用氧化化学发光反应测定尿液和草酸二乙酯中的草酸盐及游离的草酸。另外还可以测定苯酮尿症病人的尿液的苯丙酮酸的含量，方法是先在碱性条件下将苯丙酮酸氧化成 1 ， 22 二氧杂环丁烷类化合物，然后裂解产生化学发光。另外可以将 Fe （ III ）草酸配合物光解得到 Fe (II ) ，催化鲁米诺－过氧化氢化学发光反应，此法线性范围为 0 . 1 ～ 100uM 。此外酶联偶合反应也可以用于某些有机酸的化学发光分析。 2.2 有机碱　 胺类化合物第一离子化电势呈如下规律 : 伯胺 仲胺 叔胺，并随碳链增长，离子化电势逐渐下降，因此叔胺化合物的检测限较低，达 0 . 28 pM 。胺类化合物的分析 ( 见表 4) ，较多的是经柱前衍生生成荧光衍生物，分离后用过氧草酸盐化学发光体系检测，也可将其生成希夫碱或其它产物氧化而发光。有些碱如肾上腺素等可直接氧化而发光。通常有一个经验规则，假如一物质具有荧光或其反应产物有荧光，该物质一般可发生化学发光反应，但也有例外。嘌呤碱是核酸的基础物质，因此对嘌呤碱的分析测定将推动 DNA 分析方法的发展。在酸性醇液中腺嘌呤与苯甲醛反应，然后用过氧化氢氧化反应产生化学发光，此法具有很好的选择性，线性范围为 1 . 5×10 － 7 ～ 5 . 0×10 － 7 M ，用此法测定鸟嘌呤灵敏度比荧光法高 20 倍。 2.3 　氨基酸　 氨基酸分析方法的改进有利于推动生物技术、基因工程、 DNA 重组和基因克隆等的发展。由于绝大多数氨基酸没有内源荧光特性，因此用过氧草酸盐体系测定氨基酸需将其衍生成荧光物质，但此法避免不了衍生法所固有的缺点。此外亦可通过测定氨基酸与氨基酸氧化酶反应产生的过氧化氢来测定氨基酸的含量，如 L 2 氨基酸经反相色谱柱分离后流经 L 2 氨基酸氧化酶反应器产生过氧化氢，然后用过氧草酸盐体系检测。氨基酸与 Ru (b ipy) 3+3 反应，用流动注射化学发光法检测，相对于脯氨酸和天冬酰胺检测限可分别达到 20 pmo l 和 50 pmo l 。一般来说，仲胺反应产生的的发光强度比伯胺大。对氨基酸上取代基性质研究表明，给电子基有利于增强化学发光强度。 2.4 糖类　 光泽精体系可用于测定一些还原性物质，如乳糖、葡萄糖，用于抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的分析测定有很高的灵敏度。但此法用于复杂样品分析却因干扰多而受到限制。用草酰胺化学发光照相法测定了葡萄糖。在微量滴定板上将草酰胺发光剂、荧光增感剂及 50 uL 试样混合，于 5 m in 内用照相荧光剂测定液斑的发光强度，可检出 100 pmo l 的萄萄糖。 糖类物质测定的另一个重要方法是测定酶反应产生的 H 2 O 2 ，由此对酶底物 —— 葡萄糖、乳糖等进行测定。而酶的固定化技术为此法的发展注入了新的活力。采用物理包埋法将葡萄糖氧化酶固定在聚丙烯酰胺凝胶中并制成酶柱，再将酶柱接入流动注射系统中，用流动注射化学发光法测定由酶促反应产生的 H 2 O 2 ，从而测定人体血液中的葡萄糖，检出限可达 0.1 m g ／ L 。 2.5 类固醇与类酯　 一些特异性酶如类固醇脱氢酶和其它荧光素酶与合适底物反应产生 H 2 O 2 ，通过测定 H 2 O 2 达到分析测定底物的目的。 2.6 药物　 根据药物的不同类型选择不同的化学发光分析方法。目前较常用的方法是直接氧化化学发光。在碱性溶液中用 N －溴代丁二酰亚铵氧化含有酰胺基的药物产生化学发光，如利福霉素等检测限在 1 . 23 m g ／ L ～ 0 . 5 g ／ L 之间。氧化四环素类药物检出限在 0 . 02 － 0 . 04 m g ／ L 之间。

[size=4]化学发光法的灵敏度很高，超过一般的检测方法。其不足支出在于选择性较差，因此常与分离工具结合（HPLC, CE），能发挥很好的作用，但是联用技术的兼容性问题有很多需要考虑的地方，限制了该方法在实际中的应用。以下内容是拷自我以前的论文，主要讨论HPLC-CL联用技术需要注意的地方，供参考。要获得好的分离和灵敏的检测，往往需要综合考虑各方面的因素:(1)流动相的选择应与化学发光检侧系统相兼容，选择的溶剂既不应增加背景，也不应熄灭化学发光信号；此外，还要考虑发光试剂在其中的溶解度，以避免生成沉淀。(2)缓冲溶液及其pH值的选择。由于pH值对化学发光反应的发光强度ICL和寿命影响很大，选择合适的pH值十分重要，加缓冲溶液使流动相和反应试液均得到缓冲的方法，可控制一定的pH值；为适应不同的pH值范围，应选用合适的化学发光试剂。(3)选择适宜的流速，以保证分离完全并能检测到强的发光信号。(4)发光试剂浓度的选择应有利于提高信噪比(S/N)。一般，浓度大时可获得较大的发光强度，但浓度大，有时会形成沉淀，且增加干扰(背景噪声)。(5)所用试剂应纯化，以减小化学发光的背景。(6)输液泵的脉动会引起试液浓度的局部变化，提高背景噪声，故要保证尽可能均匀、恒定、无脉动流速输液。使用注射泵，但其容量有限，实际上多用往复泵，后接阻尼器以减小脉动。(7)化学发光检测器的设计应能检测到最大的ICL，死体积要小，且价格便宜、仪器简单、易于操作，分析速度快。为此，应使用短的混合反应管和高效光收集装置(如高质量光电倍增管及光子计数器的使用)，并使流动池F尽量靠近光电倍增管。目前，微孔柱HPLC的应用日益广泛。在微孔柱的HPLC-CL分析中，流动相的流速相对于化学发光试剂的加入速度低很多，使流动相对反应池中最终的化学发光反应的影响很小，从而可使化学发光检测和HPLC分离有可能在各自的最佳条件下进行。这一点对梯度洗脱过程中的化学发光检测尤为重要。在使用化学发光检测时，可以选用反应速度快的发光体系，使柱后流出的分析物在没有明显扩散之前就完成了化学发光反应，避免了大体积池对色谱峰的展宽。微孔柱HPLC与快速灵敏的化学发光反应结合，为分离检测提供了一个完美的统一。为简化反应系统，可将反应试剂固定在固相担体上，装入短柱内，样品液流过短柱时发生反应。如将TCPO固体和固定化荧光试剂填装在短柱中，并与化学发光流动检测池相联，当流动相带着样品流过固相化学发光反应器及流动池时，即可测得化学发光信号。这种液固反应体系的优点是简单、稳定、不需附加输液泵等装置；缺点是柱寿命有限。将这种固相化学发光反应器与高效、高选择性的固定化酶反应器或光化学反应器相结合，特别适合于生化物质的测定。[/size]

化学发光 (ChemiLuminescence ，简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。体系产生化学发光，必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。依据供能反应的特点，可将化学发光分析法分为： 1 ）普通化学发光分析法 ( 供能反应为一般化学反应 ) ； 2 ）生物化学发光分析法 ( 供能反应为生物化学反应；简称 BCL) ； 3 ）电致化学发光分析法 ( 供能反应为电化学反应，简称 ECL) 等。根据测定方法该法又可分为： 1 ）直接测定 CL 分析法； 2 ）偶合反应 CL 分析法 ( 通过反应的偶合，测定体系中某一组份； 3) 时间分辨 CL 分析法 ( 即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定 ) ； 4 ）固相、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]、掖相 CL 。分析法； 5 ）酵联免疫 CL 分析法等。 在整个的检测系统中其关键的部分为 PMT ，其直接影响到仪器的检测性能，其最高检测极限为 10 － 22 mol/L 。不同型号的仪器其检测技术不一样，但基本原理都是利用待测组份与体系的化学发光强度呈线性定量关系，而化学发光强度随体系反应进行的速度增强或衰弱。记录仪记录峰形，以峰高定量，也可以峰面积定量。因化学发光多为闪烁式发光 (1—2s 左右 ) ，故进样与记录时差短，分析速度快。第二部分、化学发光常用的化学试剂及其原理 化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。任何一个化学发光反应都包括两个关键步骤，即化学激发和发光。因此，一个化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件：第一：反应必须提供足够的能量（ 170 ～ 300KJ ／ mol ） ，第二，这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的荧光量子产率。到目前为止，所研究的化学发光反应大多为氧化还原反应，且多为液相化学发光反应。 化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。对于一般化学发光反应，值约为 10 － 6 ，较典型的发光剂，如鲁米诺，发光效率可达 0 . 01 ，发光效率大于 0 。 01 的发光反应极少见。现将几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。 1. 鲁米诺及其衍生物 鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、 4— 氨基已基 —N 一乙基异鲁诺及 AHEI 和 ABEI 等。鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。 在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。最常用催化剂是金属离子，在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏度。其次是利用有机化合物对鲁米诺化学发光反应的抑制作用，测定对化学发光反应具有猝灭作用的有机化合物。其三是通过偶合反应间接测定无机或有机化合物。其四是将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺 (ABEI) 标记到羧酸和氨类化合物上，经过高效液相色谱 (HPLC) 或液相色谱 (LC) 分离后，再在碱性条件下与过氧化氢－铁氰化钾反应进行化学发光检测。也可以采用其它分离方法，如将新合成的化学发光试剂异硫氰酸异鲁米诺标记到酵母 RNA 后，通过离心和透析分离，然后进行化学发光检测。此外应用的还有 N 2(B2 羧基丙酰基 ) 异鲁米诺，并对其性能进行了研究。 2 ．光泽精 光泽精以硝酸盐的形式存在，在碱性介质中，过氧化氢将其氧化成四元环过氧化物中间体，而后裂解生成激发态的吡啶酮而发光。利用光泽精与还原剂作用，可用于测定临床医学上一些重要的还原性物质，如抗坏血酸、肌酸酐、谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、乳糖、葡萄糖。 3 ．洛粉碱 洛粉是文献上记载最早的化学发光试剂，但却迟迟未得到应用，直到 1979 年 Marino 等人将它应用于 Co 的测定后才得到重视。此试剂已被用于多种元素的分析测定。 4 ．过氧化草酸酯类 草酸盐类化学发光反应大都生成过氧草酰 (Peroxalate) 中间体，因此这类反应亦称过氧草酰类化学发光反应。过氧草酸盐类化学发光分析应用的推广还有赖于新的荧光衍生试剂的开发。 5 ． 吖啶酯类 McCap r 等合成了一系列吖啶酯类化合物，对该类试剂的化学发光机理研究表明，发光效率与试剂中的可解离酸性基团的 pKa 有密切关系， pKa 一般应小于 11 。吖啶酯类化合物是一类很有前途的非放射性核酸探针标记物，用作 DNA 的发光探针，发光量子产率高，稳定性好，标记物对杂交反应的动力学和杂交体的稳定性无影响，可以直接在碱性介质中进行化学发光反应。 以上五种化学发光剂化学发光量子产率高，水溶液稳定，能被多种氧化剂直接氧化而发光，也可被众多的金属高于催化发光反应而发光，许多无机、有机和生化组分也能增强或抑制其发光，因此应用十分广泛。目前报道的有邻菲咯啉，碱基水杨酸、罗明丹 —B 、没食子酸、香豆素、皮素，茜素紫、苏木色精，培花青，三苯甲烷类染料，丙酮、乙醇、羟胺等。这些试剂商品化程度高，价廉，使用方便，但化学发光量子产率较低，因此，研究增敏试剂来提高它们的化学发光量子产率是非常关键的。

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