荧光蛋白

来自德国卡尔斯鲁厄理工学院等处的研究人员发现了一种新的，来自珊瑚虫的荧光蛋白，这种荧光蛋白可以用于高分辨率显微镜下观察活细胞。这一研究成果公布在《自然—方法学》（Nature Methods）杂志上。 领导这一研究的是著名的蛋白质相互作用分析专家：Gerd Ulrich Nienhaus，这位科学家著有《Methods in Molecular Biology: Protein-Ligand Interactions》，详细分析了蛋白与配基相互作用研究中的方法分析。 荧光蛋白是由很多能产生五彩斑斓的海洋动物产生的，包括绿色荧光蛋白，黄色荧光蛋白，红色荧光蛋白，橙色荧光蛋白等，这些荧光蛋白有些来自水母，有些来自珊瑚，近年来分子生物学家门从中提取出了很多种荧光蛋白及它们的基因，并用基因工程建立了一系列具有不同发光特性的荧光蛋白。

绿色荧光蛋白GFP的应用绿色荧光蛋白GFP的应用主要集中在利用其荧光性质的基础上作为一种标记物。1 绿色荧光蛋白GFP在分子生物学上的应用1.1 绿色荧光蛋白GFP作为报告基因 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的DNA，如传统的荧光素酶（LUX）基因和β-葡萄糖苷酶（GUS）基因。绿色荧光蛋白GFP作为基因报告可用来检测转基因效率，把绿色荧光蛋白GFP基因连接到目的基因的启动子之后，通过测定GFP的荧光强度就可以对该基因的表达水平进行检测。目前，此方法无论在农杆菌介导或基因枪介导的植物遗传转化中还是在活细胞、转基因胚胎和动物中都已得到非常广泛的应用，特别是在活细胞基因表达的时空成像方面。 1.2 绿色荧光蛋白GFP作为融合标签绿色荧光蛋白GFP最成功的一类应用就是把绿色荧光蛋白GFP作为标签融合到主体蛋白中来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器。在多数情况下，绿色荧光蛋白GFP基因在N-或C-末端与异源基因用常规的分子生物学手段就可以接合构成编码融合蛋白的嵌合基因，其表达产物既保持了外源蛋白的生物活性，又表现出与天然GFP相似的荧光特性。GFP的这种特性为蛋白质提供了一种荧光标记，不仅可以检测蛋白质分子的定位、迁移，还可以研究蛋白质分子的相互作用以及蛋白质构象变化，并依靠荧光共振能量转移即FRET来进行检测。

绿色荧光蛋白(GFP)是一种在紫外光照射下发出绿色荧光的蛋白质。此应用说明 用CPL-300和J-1500分别获得了gfp的cpl和cd光谱。

绿色荧光蛋白（GFP）是一种在暴露于紫外线时发出绿色荧光的蛋白质，并且已被证明具有手性性质。本申请说明说明了分别用CPL-300和J-1500获得的GFP的CPL和CD光谱。关键词：J-1500，圆二色性，CPL-300，圆偏振发光，蛋白质结构，荧光，生物化学

对于药物研发早期先导化合物寻找和确认，配有发光蛋白检测应用的FLIPRTETR是简便且可信赖的高通量筛选系统。发光蛋白检测部件包含了增强型CCD (ICCD) 相机和悬浮细胞系统。ICCD相机的增益可调节功能使得高通量FLIPRTETRA系统既可以适应基于染料的明亮的荧光实验，也可以记录信号强度较弱的化学发光蛋白实验。本篇应用文章描述了贴壁CHO Mito-Photina./H3发光蛋白细胞在高通量FLIPRTETRA系统中的实验结果和表现。

关于皮肤的发光，最被人们熟知的是由于使用某些含有荧光剂的化妆品而造成的荧光，其实我们的真皮层中的一些物质，本身就可以发出荧光。为什么正常皮肤会发出荧光呢？这是因为胶原蛋白的存在，胶原蛋白是皮肤组织中的结构性蛋白，其数量和健康关系到外表皱纹的生成与皮肤的老化现象，由于胶原蛋白具有自体荧光，根据胶原蛋白的种类或交联状态的不同，真皮层荧光光谱或强度会发生变化[1]，因此可以根据皮肤的荧光光谱来检验胶原蛋白含量及结构，此检测法更具实时性与非侵入性，目前，市面上一些胶原蛋白产品也用这种方法来判断产品对于改变皮肤状态的功效。

本应用说明描述了盐酸胍（GuHCl）对α-乳凝蛋白变性的荧光各向异性测量的变化关键词：J-1500、圆二色性、CDF-426、荧光、各向异性、α-乳白蛋白、GuHCl、二级结构、变性、生物化学

差示扫描荧光法（DSF），也被称为thermal shift assay（TSA），是表征蛋白热稳定性的常用方法之一，广泛应用于蛋白配体互作表征，突变体、缓冲液、去垢剂筛选等领域。DSF可以通过荧光染料或蛋白内源荧光信号监测升温过程中蛋白构象的变化计算其熔解温度Tm（折叠蛋白与去折叠蛋白相等时的温度）。

多金属氧酸盐(polyoxometallates,POMs)由于结构的多样性以及其在分子尺寸、表面电荷分布、氧化还原电位、极性、酸性、溶解性及热稳定性等方面高度可调的分子特性，在材料，磁学，催化，尤其是医药科学等领域都有着广泛而重要的应用。肿瘤一直是威胁人类健康的一大顽疾。研究表明，组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylaseinhibitors，HDACi)可以通过改变组蛋白或转录因子的乙酰化状态诱导肿瘤细胞生长、分化或凋亡，具有明显的抗肿瘤活性。本论文首次将多酸类药物用于HDACi的筛选，从近400种POMs化合物中筛选出了五类13种与已知HDACi具有相同作用效果的多金属氧酸盐化合物。这五类POMs化合物分别是：1.夹心型钨锗酸盐化合物PA-304 PA-312 PA-313 PA-315 PA-317；2.三有机锡取代的钨锗酸盐化合物PA-320；3.过渡金属连接二钛取代的Keggin型钨磷酸盐形成的化合物PA-324 PA-331 PA-332PA-330；4.临床有机药物与Anderson型多阴离子形成的超分子化合物PA-301 PA-303；5.含Ti的三聚杂多钨锗酸盐化合物PA-334。实验中以PA-320为代表化合物，对其抗肿瘤活性做了初步的验证。绿色荧光蛋白质粒报告基因的荧光照片显示PA-320可以诱导绿色荧光蛋白发光增强，且发光的强度要强于已知临床组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA的作用效果。直观的说明PA-320可以刺激p21基因表达增加。逆转录PCR(RT-PCR)和DNA电泳的结果证实，不同浓度的PA-320处理的细胞，其细胞中p21基因的表达量与用临床组蛋白去乙酰化酶抑制剂BUA处理细胞后的作用效果相同。说明PA-320有和临床HDACi相同的作用功效，可以刺激p21基因的表达增加。据文献报道HDAC1对p21WAF1/CIP1基因的抑制作用最为显著。PA-320对瞬时转染的HDAC1-7的实验结果证实，在转染了HDAC1的同时加入一定浓度PA-320刺激后，p21WAF1/CIP1基因启动子报告基因的活性明显增强，HDAC1的活性明显受到抑制。瞬时转染HDAC实验证明多金属氧酸盐化合物PA-320可以很好的抑制HDAC的活性。MTT实验结果证实PA-320对Hela细胞，LNCaP细胞，293T细胞，SW620细胞四种癌细胞均有抑制作用。实验测得对四种癌细胞的IC50值分别为38.8679μg/ml，45.1477μg/ml，44.4783μg/ml和9.2771μg/ml。说明PA-320可以在相对较低的浓度下(100μg/ml)，PA-320的抑制浓度也是比较低的。说明PA-320对肿瘤细胞有很好的抑制效果。

本文详细向您介绍如何使用日立荧光分光光度计F-7100分析检测皮肤中的胶原蛋白含量。通过测量不同生物样品（包括：三文鱼皮，男性皮肤和女性皮肤），利用三维立体的激发发射光谱，可以清晰辨别出各生物样品种类，并检测其中的胶原蛋白含量。F-7100拥有全球最快扫描、驱动速度和最高灵敏度，三维光谱分析更加方便、快捷，提供追踪监控化学反应过程。超高信噪比的优异功能，可以检测出低至1*10-12mol/L的荧光素，同时，更有利于痕量样品的测量。实验中，搭配主机使用的光纤附件使得样品种类与形状更具灵活性，将光源能量导出并无损伤直接检测肌肤变成可能。

EMT即上皮间质转化，在此过程中，上皮细胞的极性丧失，迁移和运动能力增强，同时上皮表型丢失而逐渐获得间质表型。伴随表型变化，许多基因的表达发生了改变，上皮表型相关蛋白，如角蛋白、E-钙粘蛋白、紧密连接蛋白-1、闭锁小带蛋白等含量下降，间质表型相关蛋白，如波形蛋白、N-钙粘蛋白、α -平滑肌肌动蛋白、纤维连接蛋白等含量上升，同时一系列转录因子的表达也发生了变化。蛋白表达量的变化多通过Western Blot和免疫荧光及免疫组化的方式来检测，其中Western Blot可以使用组织和细胞实现蛋白的定性和半定量，免疫荧光可以使用细胞爬片检测细胞中蛋白的定位以及定性分析，免疫组化可以使用组织切片检测细胞中蛋白的定位以及定性分析，针对不同的样品类型，可以采用不同方式来检测EMT导致的蛋白表达变化。

开发适用于临床样本测定的外泌体单颗粒分析新方法，是目前该外泌体单颗粒研究领域的热点之一。张教授团队开发出一种新的外泌体单颗粒多蛋白数字化分析方法（digital profiling of proteins on individual exosomes，DPPIE），成功实现了对癌症患者血浆样本中外泌体单颗粒表面蛋白CD63/EpCAM/MUC1的原位荧光信号放大检测。

所有光合生物都必须要应对过量光照来避免光合氧化胁迫。对于植物和绿藻来说，高光的最快响应机制就是非光化学淬灭（NPQ）。这一过程允许将过量能量以热量形式安全地耗散掉。PsbS蛋白是这一过程中的重要传感器。为了确定PsbS蛋白在莱茵衣藻Chlamydomonas reinhardtii的NPQ和光保护中的作用，艾克斯－马赛大学Tibiletti T等培养了可以表达藻类或拟南芥psbS基因的叶绿体转基因株。通过FluorCam开放式叶绿素荧光成像系统进行的NPQ成像分析最终表明，两种PsbS蛋白都可以增强莱茵衣藻野生型和npq4突变株的NPQ，但没有观察到明确的光保护活性。

摘　要: 采用自行设计、组装的毛细管电泳光导纤维发光二极管诱导荧光检测装置, 建立了一种直接测定免疫球蛋白G( IgG)的方法。以蓝色发光二极管(LED)为荧光检测器的激发光源, 荧光素异硫氰酸酯( F ITC)为柱前衍生试剂, 采用毛细管区带电泳, 以20mmol/L 硼砂缓冲溶液(pH 912)为背景电解液进行分离检测。通过对衍生反应条件和电泳分离条件进行优化, 确定了最佳实验条件, 在该条件下, IgG的线性范围为415 ×10 - 8～112 ×10 - 6 g/L, 检出限为210 ×10 - 8 g/L。该方法简单、高效、选择性好, 无需前处理, 可用于人血清中IgG含量的测定。关键词: 免疫球蛋白G 毛细管电泳 发光二极管 荧光检测

FluorCam多光谱荧光成像系统是目前唯一有能力实现了一台仪器上同时完成叶绿素荧光、多光谱荧光、NDVI归一化植被指数以及GFP、YFP、BFP、RFP、CFP、DAPI等荧光蛋白与荧光染料的成像分析功能，加装热成像模块后还可以进行热成像分析。这些功能使得FluorCam多光谱荧光成像系统就成为了一套功能非常全面的植物病害表型研究系统。

98%。QPix400 系列的荧光成像模块可以显著减少下游的工作量，因为通过对荧光蛋白表达的定量，实现了有目的性筛选，确保只挑感兴趣的克隆。QPix 已成为市场上微生物克隆筛选系统的领导者，它可以提供多组荧光滤光片，兼容大多数的荧光克隆载体。基于荧光的重组克隆筛选方法使重组基因表达的筛选更加容易，提供了一个更加准确的筛选方法。

内源差示扫描荧光技术（intrinsic fluorescence DSF），通过检测温度变化/变性剂浓度变化过程中蛋白内源紫外荧光（350 nm/330 nm比值）的改变，获得蛋白的热稳定性(Tm值)、化学稳定性（Cm值）等参数。相比传统的方法，无需添加染料，通量高，样品用量少，数据精度高。

本文描述了使用配备 Agilent 1260 Infinity 荧光检测器和 Agilent 6530 精确质量 Q-TOFLC/MS 的 Agilent 1290 Infinity 二元液相色谱系统，通过亲水相互作用色谱 (HILLC) 对N-连接糖链的分析。使用 PNGase F 对单克隆抗体 (mAb) 及两种其他糖蛋白（胎球蛋白和卵清蛋白）进行酶解后，再利用 2-氨基苯甲酰胺 (2-AB) 对释放所得的糖链进行衍生化反应。Agilent AdvanceBio 糖谱分析色谱柱具有的出色分离度使我们可以对 mAb 样品中所有主要的 N-糖链进行检测和鉴定。此外，从胎球蛋白和卵清蛋白中释放出的多种高度复杂的 N-糖链可以得到良好分离。

了解更多BLI技术在小分子结合动力学的应用优势，下载《优化蛋白-蛋白，蛋白-小分子结合动力学分析应用指南》

使用MST技术检测跨膜蛋白TRKB与脑胆固醇和抗抑郁药物的结合。其中跨膜蛋白TRKB并未纯化，直接将过表达GFP-TRKB的HEK293T细胞裂解后取上清。以GFP-TRKB融合蛋白作为荧光信号源，进行MST检测。

血清蛋白是临床及科研领域广泛研究及检测项目，本文将介绍使用超速离心机不同转头进行人血清中白蛋白与球蛋白分离方法。

蛋白质的稳定性取决于配体的相互作用、缓冲液条件或构象变化，传统上是通过麻烦费时的圆二色光谱（CD）来研究的。 其实有一种更为简单的检测方法，即基于温度诱导蛋白变性的热漂移分析，通过检测荧光染料SYPRO® Orange的信号强度变化来进行。

整合素是一种跨膜蛋白，在介导细胞黏附到细胞外基质（ECM）过程中发挥重要的作用。整合素在和配位体结合并发挥作用之前需要被激活。Kindlin和talin如何在非造血细胞中介入激活整合素这一过程的原理并不十分清晰。美国的科研人员发现缺少成纤维细胞，talin或kindlin都不能激活β1整合素，从而不能粘附到纤维粘联蛋白表面上；甚至不能由Mn2+介导的整合素粘连构象发生转变。使用Mn2+可以激活talin而不是kindlin缺陷细胞的部分整合素功能，使其活化和粘附在纤维粘连蛋白表面上。而具有方向性的粘附实际是由Kindlin直接诱导结合桩蛋白，可以反过来会粘附斑激酶（FAK）导致FAK活化并形成片状伪足。这一研究结果表明，talin和Kindlin协同激活整合素与纤维粘连蛋白的结合，并随后Kindlin会独自形成一个特别的信号位点，形成新的蛋白粘附位点。

每个蛋白质或多肽都具有特定的氨基酸序列，即氨基酸组成。因此氨基酸组成分析可作为蛋白质或多肽的鉴定方法。氨基酸分析用于从药物发现到生产的整个过程，以确保批次之间的相似性和一致性。它也经常被用于确定裂解蛋白质所用的蛋白酶的种类。氨基酸分析也是精确测定蛋白质含量的常用工具。氨基酸分析涉及四个基本步骤，首先是将蛋白质酸解为独立的氨基酸。接着对氨基酸进行标记以使它们适合紫外或荧光检测。然后对衍生化的氨基酸进行色谱分离。最后根据标记物的强度测定每个氨基酸的相对含量。一个理想的氨基酸定量分析应当具备快速、灵敏的衍生化手段和分析技术。安捷伦1260 Infinity 或者1290 Infinity 液相色谱系统和安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18 柱可以满足这些要求，采用邻苯二甲醛(OPA) 衍生化伯氨基酸，9- 芴甲酸(FMOC) 衍生化仲氨基酸；完成自动的在线衍生化后，进行可靠的液相色谱分析。该系统可以快速、准确、灵敏和高重现地完成氨基酸分析。

人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)抗原、生物素化的人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

本应用简报证实，使用配备新型 HILIC 色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱仪，可对人免疫球蛋白 G 的 N-连接糖链进行灵敏、重现的分析。对人 IgG N-连接糖链文库分析的保留时间和峰面积精度进行测定。此外，对于具有低检测限和低定量限的五种糖链标准品（M5、A2G2、A2G2S1、FA2G2S1 和 A2G2S2）混合物，在 0.016-1 pmol 的范围内具有良好的线性。配备 Agilent AdvanceBio 2.7 μ m 糖谱分析色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱仪是一款出色的系统，可实现灵敏且重现的 2-AB 衍生人免疫球蛋白 G 释放 N-连接糖链分析。

本应用简报证实，使用配备新型 HILIC 色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260Infinity 生物惰性四元液相色谱仪，可对人免疫球蛋白 G 的 N-连接糖链进行灵敏、重现的分析。对人 IgG N-连接糖链文库分析的保留时间和峰面积精度进行测定。此外，对于具有低检测限和低定量限的五种糖链标准品（M5、A2G2、A2G2S1、FA2G2S1 和 A2G2S2）混合物，在 0.016-1 pmol 的范围内具有良好的线性。配备 Agilent AdvanceBio 2.7 μm 糖谱分析色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260Infinity 生物惰性四元液相色谱仪是一款出色的系统，可实现灵敏且重现的2-AB 衍生人免疫球蛋白 G 释放 N-连接糖链分析。

静态光散射与尺寸排阻色谱的联用，在单克隆抗体（mAbs）的纯度检验或下游纯化的快速检测方面来说是一项重要手段。光散射也是在荧光检测之外蛋白多聚体的最敏感检测方法之一。

人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗原、生物素化的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)检测试剂盒人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)抗原、生物素化的人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。