药物分离

以甲醇中的乙酸铵为改性溶剂，采用2-乙基吡啶柱对各种碱性药物进行了分离。关键词：SFC，基础药物，手性，2-乙基吡啶柱，PDA检测器

鉴定新药候选药物代谢产物是药物开发过程中的一项基本工作。在早期药物发现与优化中发挥着重要作用，由此找到具有更好药代动力学和累积特性的候选药物。药物开发后期，鉴定实验动物和再后来鉴定人体的药物代谢产物，是法规要求的安全性实验。人体实际代谢的研究通常要在临床研究中定量服用放射性标记药物。志愿者服用候选新药后，收集人体代谢初步数据，是 I 期临床研究的内容。这时候需要将代谢产物从大体积的生物基质中分离出来，这个例子中的基质是人尿，然后用核磁共振（NMR）波谱学等技术进行结构鉴定。

麻黄碱类药物有较强的中枢兴奋作用 ,在体育比赛中作为兴奋剂使用. 国际奥委会在 1989 年将麻黄碱、伪麻黄碱、去甲麻黄碱、去甲伪麻黄碱、甲基麻黄碱列入禁用药物[1 ]. 鉴于麻黄碱类药物在临床上广泛应用 ,国际田联又对其作了限量规定. 因此 ,建立一个既能同时分离又能准确定量麻黄碱类药物的测定方法 ,对药物质量控制及兴奋剂检测都是十分必要的.

上海通微应用HALO 苯基色谱柱1.5分钟内快速分离青霉素类药物，苯唑西林、哌拉西林、青霉素G、氯唑西林等药物

目前用于麻黄碱类检测的方法较多 ,最常用的方法有 GCΠMC 法[2 ],即将其先进行选择性衍生化后 ,GCΠMS 分离测定 ,但由于同一药物会产生多于一种的衍生化产物 ,使方法的重现性欠佳. 崔凯荣等[3 ]、[4 ]进行了尿中四种麻黄碱类药物不经衍生化的直接 GCΠMSD 方法测定 ,但所需时间较长 ,线性范围较窄.Sagra 等[5 ]用高效离子对色谱法分离测定了麻黄碱类药物 ,但所使用的流动相过于复杂. 金晓[6 ] 等用高效液相色谱法以甲基苯丙醇胺为内标 ,在 C18 柱上测定了尿中的 6 种麻黄碱类药物的含量 ,但该方法需进行梯度洗脱 ,流动相及操作过于复杂 ,线性范围过小.

为协助研究人员探索复杂的中药（天然药物）活性成分体系，安捷伦创新团队基于液相色谱和液质联用平台，推出了多种解决方案。从液相色谱分离、未知物结构鉴定、产地溯源分析和中药代谢组学研究等方面，帮助研究者阐明中药（天然药物）的药理机制，为未来更广泛的实证医学与目标天然药物的发现提供科学依据。

鉴定新药候选药物代谢产物是药物开发过程的一项基本工作。在早期药物研究与优化中发挥着重要作用，由此找到具有更好药代动力学和预计特性的候选药物。药物开发后期，鉴定实验动物和再后来鉴定人体的药物代谢产物，是法规要求的安全性实验。在药物开发中，药物代谢研究通常是用放射性标记的候选药物完成的，所以很容易用放射化学检测鉴定相关代谢产物。代谢物通常是以低浓度存在于非常复杂的基质中，如尿、胆汁、血浆，要用核磁共振(NMR)波谱等技术对代谢物进行准确鉴定，就必须先对其进行分离纯化。

高效微流电动液相色谱法（eHPLC）是综合了毛细管高效液相色谱（cHPLC）和毛细管电泳（CE）的优势而发展起来的微分离色谱技术，具有柱效高，分析时间短，样品和溶剂消耗低等优点。高效微流电动液相色谱法可根据样品在电场中的分离系数和电泳迁移率的不同，对样品进行分离。 这种微分离技术作为传统HPLC技术的替代品迅速发展，将亚微米材料和eHPLC技术相结合，可通过低压实现线性流速。存在对映异构体的药物，在生物体中的药效、毒性和反应不同。目前，大多数工业液相色谱手性填料柱的直径为3、5和10μ m，也有人对1-2μ m直径的色谱填料的应用进行了大量的研究。但亚微米手性色谱的应用不常见。本公司基于亚微米填料，对手性药物进行分离与检测，为手性药物的拆分和分离提供一个新的思路和方法。

本应用简报介绍了使用 Agilent 1260 Infinity II SFC 对 4-EAPB、5-EAPB 和 6-EAPB 的所有六种可能异构体的分离以及仅对三种相应结构异构体的分离。摘要 本应用简报介绍了对安非他明相关药物的对映体及其位置异构体以及相同化合物 对映体的分离。使用手性柱和 Agilent 1260 Infinity II SFC 系统进行该分离。采用 Agilent 6495 三重四极杆质谱仪和 Agilent 6150 单四极杆质谱仪，实现对结构异构 体以及对映体的定性检测和定量测定。

本文建立了一种使用岛津质谱引导型高效液相制备色谱用于药物中多组分的制备分离的方法。以分离制备阿托伐他汀钙片中的有关物质为例，采用反向液相色谱，分别以紫外，质谱以及紫外和质谱同时触发馏分收集，详细说明了不同触发方式的参数设置以及LH-40的制备模拟功能，使用不同的触发方式都可以对目标组分进行准确的收集。多种触发收集模式，满足不同性质的化合物制备需求。

正相色谱和反相色谱是Flash制备色谱常用的两种分离模式，被广泛应用于各类有机合成产物的分离纯化中。在正相色谱中，采用极性固定相（如带有二醇基、氨基或氰基的固定相及硅胶、三氧化二铝等）并结合使用非极性流动相（如正己烷等），根据分子的极性大小将其分开。由于正相色谱以吸附效应作为分离的基础，因此也被称为吸附色谱。而在反相色谱中，采用非极性固定相（如带有C18基团的硅胶等）配合极性流动相对样品进行分离。这两种分离模式基于不同的分离机理，因此在将两种分离模式联用时可称之为正交色谱分离模式，从而获得对复杂样品更高的分辨力和更好的分离效果。本文中以某合成药物中间体为样品，利用SepaFlash系列正相硅胶柱及反相C18柱联合使用，实现了对样品的高效分离纯化，获得了满足纯度要求的目标产物，为此类复杂样品的快速制备纯化提供了新的思路。

上海通微应用核壳型色谱柱0.8分钟内快速分离药物中酰胺醇类抗生素（甲砜霉素和氯霉素）（Halo RP-Amide柱）

由于聚集体会对药物安全性产生显著影响并且可能引发抗原反应，因此蛋白质聚集是生物治疗药物蛋白质的关键质量属性 [1]。聚集体还可能会降低生物治疗药物的药效并大幅降低生产工艺的经济效益。蛋白质通常在暴露于压力条件下时发生聚集，例如 pH、温度或浓度的变化，因此不同生产阶段均有可能发生聚集。目前人们已经确定选择体积排阻色谱 (SEC) 方法进行聚集体的定量分析。在生物治疗药物开发过程中（例如在克隆选择过程中或在通过严格的“实验设计”法优化发酵条件时）监视聚集体的形成情况，这些过程可能产生大量需要进行体积排阻分析的样品。SEC 常用条件的分析时间往往需要 20 min 甚至更长，这极大限制了对大量样品的分析能力。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱具有高度优化的粒径和孔径设计，可实现更快速的分离，从而显著减少分析瓶颈问题。本应用简报介绍的技术可提高样品通量而不影响分析的准确性。

抗体药物偶联物（ADCs）的纯化工艺十分复杂，其主要挑战在于分离未结合的抗体和游离药物，以及确定与抗体结合的药物的平均数量分布，即药物/抗体比率（DAR）。DAR值的增加会使ADCs的疏水性变强，利用该特点可分离不同DAR值的ADCs。东曹的疏水层析填料TOYOPEARL PPG-600M采用了相对亲水的配体，具有高回收率、结合能力强、工作pH范围宽等优点。本应用是采用了该款填料对ADCs模拟物的纯化进行了研究。

液相色谱 (HPLC) 一直是中药（天然药物）活性物质分析的重要工具之一。由于样品组成极其复 杂，HPLC 分析一直存在分离难度大、分析时间长等问题。过去 10 多年来，不断发展的超高效液 相色谱 (UHPLC) 提高了对复杂样品的分离能力与速度。但是在使用单根色谱柱的条件下，分离效 率仍然不够理想，Agilent InfinityLab 二维液相色谱系统 (2D-LC) 能在更短时间内提供优异的分离 能力，为复杂的活性成分分析提供更有效的解决方案。同时在软件上进行简单设定后，即可在一 维液相色谱系统与不同模式的二维液相色谱系统之间轻松切换

由于聚集体会对药物安全性产生显著影响并且可能引发抗原反应，因此蛋白质聚集是生物治疗药物蛋白质的关键质量属性。聚集体还可能会降低生物治疗药物的药效并大幅降低生产工艺的经济效益。蛋白质通常在暴露于压力条件下时发生聚集，例如pH、温度或浓度的变化，因此不同生产阶段均有可能发生聚集。目前人们已经确定选择体积排阻色谱(SEC) 方法进行聚集体的定量分析。在生物治疗药物开发过程中（例如在克隆选择过程中或在通过严格的“实验设计”法优化发酵条件时）监视聚集体的形成情况，这些过程可能产生大量需要进行体积排阻分析的样品。SEC 常用条件的分析时间往往需要20 min 甚至更长，这极大限制了对大量样品的分析能力。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱具有高度优化的粒径和孔径设计，可实现更快速的分离，从而显著减少分析瓶颈问题。本应用简报介绍的技术可提高样品通量而不影响分析的准确性。

疏水作用色谱HIC是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质等生物大分子的常用方法，也是测定ADC中DAR的重要手段。在HIC模式下，高盐浓度将待分离的样品吸附在固定相上，然后线性或阶段降低流动相中盐浓度有选择性地将样品洗脱。分离过程中，随着流动相中盐浓度的降低，疏水性弱的蛋白先被洗脱下来，而疏水性强的蛋白随后才被洗脱下来，BioCore HIC-Butyl对模拟单抗偶联药物中不同效价的分离具有很好的选择性。

由于能够有效治疗各种疾病，生物治疗药物已经成为一个快速增长的市场，而生物制药分析需要经济有效并能高效提供稳定结果的分析仪器。要解决成本、效率和稳定性挑战，一种有效的方法是在整个产品生命周期中运用创新技术。作为生物药物开发和生产过程不可缺少的组成部分，液相色谱(LC)平台有望通过技术现代化成为制药质控体系的一部分，用于提高整个制药工艺流程的生产效率。为此，超高效液相色谱(UPLC)仪器已被应用于生物药物开发和生产的各个环节，大幅提高了分析性能、生产效率并降低了成本。随着制药公司为了加速产品上市而不断对LC系统提出更高要求，稳定性更高、停机时间更短的仪器将更具优势。ACQUITY UPLC PLUS系列专为改善UPLC技术的易操作性而设计，同时可保持与传统ACQUITY UPLC平台(如H-Class和I-Class系统)相当的分析性能。如图1所示，沃特世在现有ACQUITY UPLC系统系列产品的基础之上，对溶剂管理器和样品管理器进行了多项改进。脱气机硬件和固件的改进可以提高分离的重现性，同时最大程度延长系统正常运行时间，而采用全新设计的溶剂管理器则能够改善热敏样品的完整性。此外，进样针外表面经过专门处理，扩展了针的兼容性，使其不仅能与更多种样品瓶盖和孔板盖配合使用，还显著改善了残留性能。这些系统改进是专门设计的，目的是让ACQUITY UPLC PLUS系列保持与它们将要替代的ACQUITY UPLC系列相同的系统延迟体积和扩散特性，从而确保两个平台具有相同的分离性能。综上所述，ACQUITY UPLC PLUS系列产品极大改善了用户体验，能够最大限度延长系统正常运行时间，让分析人员安心无忧，同时确保运行已有方法时可获得与原系统相当的性能。

本文通过瑞士万通离子色谱建立用离子色谱法同时分离测定三种麻黄碱类药物的方法.该方法的线性相关系数分别为0. 9996 ,0. 9999 ,0. 9999. 去甲麻黄碱的检出限为0. 04μgPml. 麻黄碱及伪麻黄碱的检出限均为0. 08μgPml.

本文采用Poroshell 120 手性色谱柱分析胺类药物，Poroshell 120 手性色谱柱是首款采用表面多孔颗粒填料与创新性手性固定相结合的品，具有以下优势：（1）提供更高的性能与更快的速度，效果优于全多孔手性固定相；（2）具有出色的耐用性和可靠性，采用成熟的 Agilent InfinityLab Poroshell 120 颗粒填料技术；（3）多种尺寸可选，满足任何应用需求：2.1 和 4.6 mm 内径， 可与 50、100 和 150 mm 的长度搭配组合；（4）分析时间短、峰形优异且分离度更好；（5）采用高效的手性分离，显著提高分析通量和实验室效率。

本文采用Poroshell 120 手性色谱柱分析兴奋剂类药物，Poroshell 120 手性色谱柱是首款采用表面多孔颗粒填料与创新性手性固定相结合的品，具有以下优势：（1）提供更高的性能与更快的速度，效果优于全多孔手性固定相；（2）具有出色的耐用性和可靠性，采用成熟的 Agilent InfinityLab Poroshell 120 颗粒填料技术；（3）多种尺寸可选，满足任何应用需求：2.1 和 4.6 mm 内径， 可与 50、100 和 150 mm 的长度搭配组合；（4）分析时间短、峰形优异且分离度更好；（5）采用高效的手性分离，显著提高分析通量和实验室效率。

本文采用Poroshell 120 手性色谱柱分析恶唑烷酮类药物，Poroshell 120 手性色谱柱是首款采用表面多孔颗粒填料与创新性手性固定相结合的品，具有以下优势：（1）提供更高的性能与更快的速度，效果优于全多孔手性固定相；（2）具有出色的耐用性和可靠性，采用成熟的 Agilent InfinityLab Poroshell 120 颗粒填料技术；（3）多种尺寸可选，满足任何应用需求：2.1 和 4.6 mm 内径， 可与 50、100 和 150 mm 的长度搭配组合；（4）分析时间短、峰形优异且分离度更好；（5）采用高效的手性分离，显著提高分析通量和实验室效率。

疏水作用色谱（HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质等生物大分子的常用方法，也是测定ADC中DAR的重要手段。在HIC模式下，高盐浓度将待分离的样品吸附在固定相上，然后线性或阶段降低流动相中盐浓度有选择性地将样品洗脱。分离过程中，随着流动相中盐浓度的降低，疏水性弱的蛋白先被洗脱下来，而疏水性强的蛋白才随后被洗脱下来，BioCore HIC-Butyl对半胱氨酸偶联单抗药物中不同效价的分离具有很好的选择性。

本文采用Poroshell 120 手性色谱柱分析1-茚醇 、安息香 、氯苯达诺等药物，Poroshell 120 手性色谱柱是首款采用表面多孔颗粒填料与创新性手性固定相结合的品，具有以下优势：（1）提供更高的性能与更快的速度，效果优于全多孔手性固定相；（2）具有出色的耐用性和可靠性，采用成熟的 Agilent InfinityLab Poroshell 120 颗粒填料技术；（3）多种尺寸可选，满足任何应用需求：2.1 和 4.6 mm 内径， 可与 50、100 和 150 mm 的长度搭配组合；（4）分析时间短、峰形优异且分离度更好；（5）采用高效的手性分离，显著提高分析通量和实验室效率。

本文以半胱氨酸连接的抗体药物偶联物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 为研究对象，使用连接 PLRP-S 反相液相色谱柱的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统分离还原的轻链、重链和相对应连接药物的轻重链，并通过 Agilent 6530 高分辨率四极杆飞行时间 (Q-TOF) 液质联用系统对各个色谱峰进行鉴定。通过积分处理紫外吸收图谱中各轻重链的峰面积百分比，结合各个峰的偶联药物数目，计算ADC的加权平均药物/抗体比率 (Drug to Antibody Ratio, DAR)。同时使用了安捷伦DAR 计算器 (Agilent DARCalculator)对质谱解卷积结果进行 DAR 值计算，所得结果与紫外吸收图谱计算所得结果相同。

本研究应用毛细管电色谱（CEC）使用商业化的硅胶固定相和含水流动相分离一系列的碱性药物。流动相的组成、缓冲液的PH值、电压、缓冲液的负离子对这些碱性药物的保留时间的影响都进行了研究。在PH为7. 8时，得到了理想的图谱，但是发现重现性极差。然而，在PH为2. 3时，获得了这些碱性药物的良好的、可重现的图谱。　　我们先前证明了低的PH值下，使用反相填充材料，在流动相中加入添加剂诸如磷酸三乙醇胺可得到极好的CEC分析碱性药物的效果。在相同的条件下，使用硅胶固定相分离这些药物，是为了改善峰的形状，获得了极好的如苄胺、去甲替林和苯海拉明等碱性药物的图谱。　　实验显示了用CEC分离碱性药物能很容易地获得极好的峰形和高达3.2万理论塔板数/米。

采用离子色谱低压梯度淋洗及电导检测的方法对唑来膦酸药物进行了方法学研究，并对药物中的杂质成分磷酸和亚磷酸进行了分析。采用Metrohm A Supp 5-100色谱柱分离，唑来膦酸与其它相关离子的分离良好，磷酸和亚磷酸的定量限分别为36.6和25.8μg/L，回收率分别为99.2%～100.9%，99.5%～100.9%。该方法简单快速，灵敏度高，重复性好，可用于唑来膦酸药物的测定和质量评价。关键词：唑来膦酸；离子色谱；低压梯度

高效液相色谱法分离效率好，检测灵敏度高是检测食品中药物残留最常用的方法，可同时检测多种药物残留，实现定性定量分析。本报告参考食品安全国家标准，使用日立高效液相色谱系统，对动物源性食品中几种常见的药物残留进行分析和检测。

核酸药物因兼具基因修饰和传统药物的双重特点，近年来逐渐成为精准生物医学和疾病治疗的热点。作为主流核酸药物的合成寡核苷酸，在经过化学合成后会产生位置异构体及其他工艺相关杂质，这些杂质的分析和结构表征同等重要。液相色谱技术具有样品适用范围广、分离效率高、速度快等特点，已成为药物生产与质控分析必不可少的重要手段。东曹公司一直专注于生命科学领域相关液相色谱填料及色谱柱产品的研发与生产。本资料汇总了寡核苷酸/质粒分析时常用的色谱分离模式及适用的TSKgel色谱柱型号和应用实例。

本文以半胱氨酸连接的抗体药物偶联物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 为研究对象，使用连接 PLRP-S 反相液相色谱柱的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统分离还原的轻链、重链和相对应连接药物的轻重链，并通过 Agilent 6530 高分辨率四极杆飞行时间 (Q-TOF) 液质联用系统对各个色谱峰进行鉴定。通过积分处理紫外吸收图谱中各轻重链的峰面积百分比，结合各个峰的偶联药物数目，计算 ADC 的加权平均药物/抗体比率 (Drug to Antibody Ratio, DAR)。同时使用了安捷伦 DAR 计算器 (Agilent DARCalculator) 对质谱解卷积结果进行 DAR 值计算，所得结果与紫外吸收图谱计算所得结果相同。